一种知母降血糖提取物的制备方法.pdf

一种知母降血糖提取物的制备方法，其特征在于：将知母饮片加盐水拌均匀，每100g知母饮片加入2-4g的盐，闷润至盐水被吸尽，在140℃～170℃下炒制7-9分钟，取盐知母粉碎成粗粉，加60-80％乙醇回流提取2-3次，每次1.5-2.5h，滤过，合并滤液，减压回收乙醇至无醇味，得醇浸膏；醇浸膏以适量水分散，用石油醚萃取后，再用氯仿萃取，得萃取物，蒸干，即得。本发明能够明显降低Ⅱ型糖尿病的空腹血糖值、糖化血红蛋白、血清胰岛素、胰岛素抵抗指数，升高胰岛敏感指数，改善糖耐量。

权利要求书
1.  一种知母降血糖提取物的制备方法，其特征在于：将知母饮 片加盐水拌均匀，每100g知母饮片加入2-4g的盐，闷润至盐水被吸 尽，在140℃～170℃下炒制7-9分钟，取盐知母粉碎成粗粉，加60-80％ 乙醇回流提取2-3次，每次1.5-2.5h，滤过，合并滤液，减压回收 乙醇至无醇味，得醇浸膏；醇浸膏以适量水分散，用石油醚萃取后， 再用氯仿萃取，得萃取物，蒸干，即得。

2.  根据权利要求1所述的一种知母降血糖提取物的制备方法， 其特征在于：制得的知母降血糖提取物，能够明显降低Ⅱ型糖尿病的 空腹血糖值、糖化血红蛋白、血清胰岛素、胰岛素抵抗指数，升高胰 岛敏感指数，改善糖耐量。

说明书一种知母降血糖提取物的制备方法
技术领域
本发明涉及一种中药制备方法，特别是涉及一种知母降血糖提取物的制备 方法。
背景技术
知母为百合科植物知母Anemarrhena asphodeloides Bge.的干燥根茎，始 载于《神农本草经》，具有清热泻火、滋阴润燥的功效。用于外感热病，高热烦 渴，肺热燥咳，骨蒸潮热，内热消渴，肠燥便秘等症。知母历代的主流炮制品 种为盐知母，即将知母饮片加盐水用文火共同炒制至干，盐知母最早见于宋代， 记有“盐水炒研末”。历版《中国药典》收载的知母的炮制品种均为盐知母， 传统理论认为“入盐走肾脏仍仗软坚”，知母经盐炙后能够“引药入肾经，增强 滋阴降火的作用”。早在《神农本草经》中就有记载：知母“主消渴，热中…”， 表明知母具有降血糖作用。现代研究亦有报道知母中芒果苷、皂苷、多糖等有 降血糖的作用。
我们课题组在进行知母盐制前后药效学对比研究时，首次发现了知母盐炙 后降血糖作用显著增强，特别是盐知母高剂量组，降血糖作用高效且持久，明 显优于知母组，且优于格列本脲阳性对照组。于是，在前期研究基础上，我们 对盐知母的降血糖作用进行了深入研究，对盐知母不同极性部位进行降血糖作 用比较研究。本技术的发明，可以使提高知母的降血糖作用，寻找到了盐知母 降血糖的有效部位，可进一步开发为降血糖药物。
发明内容：
本发明的目的，是提供一种知母降血糖提取物的制备方法，本制备方法明 确了盐知母降血糖作用的最佳部位，为研发新药提供基础。本方法获得的盐知 母提取物，对Ⅱ型糖尿病，具有良好的降糖作用。
采用的技术方案是：
一种知母降血糖提取物的制备方法，包括下述步骤：
1.盐知母的制备
知母饮片加盐水拌匀，闷润至盐水被吸尽，在140℃～170℃下炒制7-9分 钟。每100g知母饮片加入2-4g的盐。
2.取步骤1制备的盐知母粉碎成粗粉，加60-80％乙醇回流提取2-3次，每 次1.5-2.5h，滤过，合并滤液，减压回收乙醇至无醇味，得醇浸膏。浸膏以适 量水分散，依次用的石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取，回收溶剂得到石 油醚萃取物(Ⅰ)，氯仿萃取物(Ⅱ)，乙酸乙酯萃取物(Ⅲ)，正丁醇萃取物(Ⅳ) 以及剩余部分(Ⅴ)。
3脂肪乳的制备
每100mL脂肪乳含15-25g猪油，3-8g胆固醇，8-12g果糖，8-12g蔗糖， 8-12mL吐温80，8-12mL甘油。
4.造模与给药
SD大鼠适应性喂养一周左右后，随机取8只作空白对照组，正常饮食，余 下组大鼠除正常饮食外每天ig脂肪乳，4周后，禁食12h,腹腔注射STZ (35mg/kg)。72h后测定空腹血糖值，选择空腹血糖大于等于12.1mmol/L的大 鼠作为Ⅱ型糖尿病模型。将造模成功的糖尿病大鼠，随机分为模型对照组、阿 卡波糖组(0.2g/kg)、及Ⅰ～Ⅴ提取物组(折合生药1.4g/kg)。给药组每天ig 相应药液10mL/kg,对照组和模型组ig等体积蒸馏水，连续14d。
5检测指标
5.1一般生理指标观察
观察大鼠一般生理状况，包括摄食量，饮水量及活动状态等。
5.2空腹血糖值(FBG)及葡萄糖耐量(OGTT)的测定
于给药7d、14d后，采用剪尾取血法，检测各组大鼠空腹血糖水平。末次 给药后，禁食4h，灌胃给予20％葡萄糖溶液(2g/kg),分别测定0、0.5h、1h、 2h血糖水平，梯形法计算曲线下面积。
5.3糖化血红蛋白(HbAlc)和血清胰岛素(FINS)测定
末次给药后，禁食12h,眼眶取血，取EDTA抗凝全血按试剂盒操作说明， 测定糖化血红蛋白(HbAlc)；放射免疫法测定血清胰岛素(FINS)，按公式计算 胰岛敏感指数ISI及Homa胰岛素抵抗指数(Homa-IR)。
6实验结果
6.1一般生理指标观察
造模后大鼠摄食量、饮水量和尿量明显增加，体重明显下降，出现“三多 一少”的症状。对照组摄食量和饮水量均衡，体重增长，反应灵敏，皮毛有光 泽；模型组大鼠反应迟钝、皮毛枯萎，体重增长缓慢；给药组大鼠的状态有不 同程度的好转，活动量增加。
6.2对糖尿病大鼠FBG的影响
与模型组相比，给药7d后，各给药组大鼠的FBG均显著降低(p<0.01或 p<0.05)，14d后，阿卡波糖、Ⅱ及Ⅴ提取物组大鼠的FBG显著降低(p<0.01)。 表明盐知母Ⅱ及Ⅴ提取物具有明显降低糖尿病大鼠空腹血糖的作用，且较其它 提取物作用持久。结果见表1。

6.3对糖尿病大鼠OGTT的影响
与模型组相比，阿卡波糖及Ⅱ提取物组糖负荷后0.5，1，2h后血 糖及糖耐量AUC明显下降(p<0.01)；Ⅲ提取物组糖负荷后1，2h血糖 和AUC显著下降(p<0.01或p<0.05)。表明盐知母Ⅱ和Ⅲ提取物具有明 显改善糖尿病大鼠糖耐量的作用。结果见表2。

6.4对HbAlc和FINS的影响
与模型组相比，阿卡波糖及Ⅱ提取物组对HbAlc、FINS、Homa-IR及ISI 均有明显改善作用(p<0.05或p<0.01)；Ⅳ和Ⅴ提取物组可显著改善FINS、 Homa-IR及ISI(p<0.05或p<0.01)；Ⅴ提取物组可降低HbAlc(p<0.01)和 Homa-IR(p<0.05)。表明盐知母Ⅱ、Ⅳ及Ⅴ提取物具有降低胰岛素抵抗，增加组 织对胰岛素敏感性的作用；盐知母Ⅱ和Ⅴ提取物可减轻长期高血糖对胰岛组织 的破坏。结果见表3。

结论：盐知母不同提取部位能明显降低FBG、HbA1c、FINS、HOMA-IR 指数，升高ISI，改善糖耐量，其中氯仿萃取物的作用最强，可开发为降 血糖药物。
具体实施方式：
实施例一
知母饮片100g，加30ml盐水拌匀，闷润至盐水被吸尽，在150℃～ 160℃下炒制8分钟(每100g知母饮片加入3g的盐)，得盐知母。取盐 知母粉碎成粗粉，加70％乙醇回流提取3次，每次2h，滤过，合并滤液， 减压回收乙醇至无醇味，得醇浸膏。浸膏以适量水分散，用石油醚萃取， 剩余水层再用氯仿萃取，回收溶剂，得到氯仿萃取物，即得。
实施例二
知母饮片200g，加50ml盐水拌匀，闷润至盐水被吸尽，在160℃～ 170℃下炒制7分钟(每100g知母饮片加入3g的盐)，得盐知母。取盐 知母粉碎成粗粉，加60％乙醇回流提取3次，每次2.5h，滤过，合并滤 液，减压回收乙醇至无醇味，得醇浸膏。浸膏以适量水分散，用石油醚 萃取，剩余水层再用氯仿萃取，回收溶剂，得到氯仿萃取物，即得。
实施例三
知母饮片300g，加100ml盐水拌匀，闷润至盐水被吸尽，在140℃～ 150℃下炒制9分钟(每100g知母饮片加入2g的盐)，得盐知母。取盐 知母粉碎成粗粉，加80％乙醇回流提取2次，每次1.5h，滤过，合并滤 液，减压回收乙醇至无醇味，得醇浸膏。浸膏以适量水分散，用石油醚 萃取，剩余水层再用氯仿萃取，回收溶剂，得到氯仿萃取物，即得。