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1、(10)申请公布号 CN 102864184 A (43)申请公布日 2013.01.09 CN 102864184 A *CN102864184A* (21)申请号 201210311914.0 (22)申请日 2012.08.29 C12P 7/48(2006.01) C12R 1/685(2006.01) (71)申请人 太仓市茂通化建有限公司 地址 215400 江苏省苏州市太仓市城厢镇伟 阳村 (72)发明人 金雅新 (74)专利代理机构 江苏致邦律师事务所 32230 代理人 徐蓓 (54) 发明名称 一种利用固定化黑曲霉生产柠檬酸的方法 (57) 摘要 本发明提供了一种利用固定化。
2、黑曲霉生产柠 檬酸的方法， 本发明以海藻酸钙为载体包埋固定 化黑曲霉细胞， 用于生产柠檬酸， 利用固定化细胞 生产柠檬酸时， 最适蔗糖浓度为 120g/L， 最适温 度为30， 最适接种量10%， 最适转速为200r/min 固定化细胞生产柠槔酸的影响较利用游离细胞更 为明显。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 2 页 附图 4 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书 1 页 说明书 2 页 附图 4 页 1/1 页 2 1. 一种使用固定化黑曲霉生产柠檬酸的方法， 以海藻酸钙为载体包埋固定化黑曲霉细 胞， 用于生产柠檬酸 ； 其特征在于培。
3、养基为 NH4Cl 4 g/L MgSO4 7H2O 0.25 g/L， FeSO4 0.25 mg/L CuSO4 0.1 mg/L， ZnSO4 0.1 mg/L， MnSO4 0.2 mg/L。 2. 根据权利要求 1 所述的方法， 其特征在于， 蔗糖浓度为 120 g/L。 3. 根据权利要求 1 所述的方法， 其特征在于， 温度为 30。 4. 根据权利要求 1 所述的方法， 其特征在于， 接种量 10%。 5. 根据权利要求 1 所述的方法， 其特征在于， 转速为 200 r/min。 权 利 要 求 书 CN 102864184 A 2 1/2 页 3 一种利用固定化黑曲霉生产柠。
4、檬酸的方法 技术领域 0001 本发明属于发酵技术领域， 具体涉及一种利用固定化黑曲霉生产柠檬酸的方法。 背景技术 0002 柠檬酸是一种重要的有机酸， 又名枸橼酸， 无色晶体， 常含一分子结晶水， 无臭， 有 很强的酸味， 易溶于水。其钙盐在冷水中比热水中易溶解， 此性质常用来鉴定和分离柠檬 酸。结晶时控制适宜的温度可获得无水柠檬酸。在工业， 食品业， 化妆业等具有极多的用 途。 在室温下， 柠檬酸为无色半透明晶体或白色颗粒或白色结晶性粉末， 无臭、 味极酸， 在潮 湿的空气中微有潮解性。它可以以无水合物或者一水合物的形式存在 ： 柠檬酸从热水中结 晶时， 生成无水合物 ； 在冷水中结晶则生。
5、成一水合物。加热到 78时一水合物会分解得到 无水合物。在 15 摄氏度时， 柠檬酸也可在无水乙醇中溶解。 0003 固定化细胞技术是生物工程领域中的一项新兴技术， 已应用于食品与发酵工业、 医药工业、 化学分析、 环境净化、 能源开发以及理论研究等各个方面。 在发酵领域中， 固定化 技术已用于有机酸、 氨基酸、 抗生素、 酶制剂、 乙醇以及其他有机物的生产。 国内也有学者指 出， 柠檬酸发酵的趋向是利用固定化细胞进行连续化生产。 发明内容 0004 本发明提供了一种利用固定化黑曲霉生产柠檬酸的方法。 0005 1. 一种利用固定化黑曲霉生产柠檬酸的方法， 本发明以海藻酸钙为载体包埋固 定化黑。
6、曲霉细胞， 用于生产柠檬酸。 0006 2. 步骤1的培养基为NH4Cl 4 g/L MgSO4 7H2O 0.25 g/L， FeSO4 0.25 mg/L CuSO4 0.1 mg/L， ZnSO4 0.1 mg/L， MnSO4 0.2 mg/L。 0007 3. 步骤 1 的最适蔗糖浓度为 120 g/L。 0008 4. 步骤 1 的最适温度为 30。 0009 5. 步骤 1 的最适接种量 10%。 0010 6. 步骤 1 的最适转速为 200 r/min。 0011 本发明的有益效果在于 ： 本发明利用海藻酸钙凝胶包埋固定化黑曲霉生产柠檬 酸， 进一步提高了柠檬酸的生产能力， 。
7、本发明以海藻酸钙为载体包埋固定化黑曲霉细胞， 用 于生产柠檬酸， 利用固定化细胞生产柠檬酸时， 最适蔗糖浓度为120 g/L， 最适温度为30， 最适接种量 10%， 最适转速为 200 r/min 固定化细胞生产柠槔酸的影响较利用游离细胞更 为明显。 附图说明 0012 图 1 不同蔗糖添加量对柠檬酸产量的影响。 0013 图 2 不同发酵温度对柠檬酸产量的影响。 0014 图 3 不同接种量对柠檬酸产量的影响。 说 明 书 CN 102864184 A 3 2/2 页 4 0015 图 4 不同转速对柠檬酸产量的影响。 具体实施方式 0016 下面的实施例对本发明作详细说明， 但对本发明没。
8、有限制。 0017 本发明所用的菌株为黑曲霉 CICC 40332， 保藏于中国工业微生物菌种保藏管理中 心。 0018 实施例 1 本实施案例说明不同蔗糖添加量对柠檬酸产量的影响， 为探讨不同蔗糖添加量对柠檬 酸产量的影响， 使用不同蔗糖添加量进行柠檬酸发酵， 结果如图 1 所示。 0019 由图1可知， 当培养基中添加蔗糖为80-120 g/L之间时， 柠檬酸的产量有所增加， 当培养基中添加蔗糖的质量浓度为 120 g/L 时柠檬酸产量为最高， 而当培养基中添加蔗糖 的质量浓度超过 120 g/L 时， 柠檬酸的产量开始下降， 因此选择蔗糖的添加量为 120 g/L。 0020 实施例 2。
9、 本实施案例说明不同发酵温度对柠檬酸产量的影响， 为探讨不同发酵温度对柠檬酸产 量的影响， 使用不同发酵温度进行柠檬酸发酵， 结果如图 2 所示。 0021 由图2可知， 当发酵温度为400-600 mg/L之间时， 柠檬酸的产量有所增加， 当发酵 温度为 600 mg/L 时柠檬酸产量比对照组提高约 10% 为最高， 而当发酵温度超过 600 mg/L 时， 柠檬酸的产量开始下降， 因此选择发酵温度为 600 mg/L。 0022 实施例 3 本实施案例说明不同接种量对柠檬酸产量的影响， 为探讨不同接种量对柠檬酸产量的 影响， 使用不同接种量进行柠檬酸发酵， 结果如图 3 所示。 0023 。
10、由图 3 可知， 当接种量为 5%-10% 之间时， 柠檬酸的产量有所增加， 当接种量为 10% 之时， 柠檬酸产量为最高， 而当接种量超过 10% 时， 柠檬酸的产量并未增高， 因此选择接种 量为 10%。 0024 实施例 4 本实施案例说明不同转速对柠檬酸产量的影响， 为探讨不同转速对柠檬酸产量的影 响， 使用不同转速进行柠檬酸发酵， 结果如图 4 所示。 0025 由图 4 可知， 当转速为 100-200 r/min 之间时， 柠檬酸的产量有所增加， 当转速为 200 r/min 之时， 柠檬酸产量为最高， 而当转速超过 200 r/min 时， 柠檬酸的产量并未增高， 因此选择转速为 200 r/min。 说 明 书 CN 102864184 A 4 1/4 页 5 图 1 说 明 书 附 图 CN 102864184 A 5 2/4 页 6 图 2 说 明 书 附 图 CN 102864184 A 6 3/4 页 7 图 3 说 明 书 附 图 CN 102864184 A 7 4/4 页 8 图 4 说 明 书 附 图 CN 102864184 A 8 。