从景天科燕子掌等植物中提取降血糖与营养物质的新工艺 燕子掌、玉树同属于景天科,为观赏植物,在中国广西巴马山区有较多的野生燕子掌、玉树分布,但生产原料的主要来源靠人工栽培。
本发明涉及医药工业上的中药提取方法。
原来生产燕子掌原粉的工艺,是根据日本特许公报平5-19554的方法进行提取的,为从天然植物中发现新的高蛋白与高效降血糖物质奠定了基础,但该方法在生产过程中遇到了工艺流程长、操作复杂、大量使用易燃易爆的乙醇与石油醚,生产成本高、产品水溶性差与收率低等问题,为了解决这些问题,在日本国与国内进行了一系列的深入研究并在生产实践中进行反复试验,提出了按化学与物理方法破细胞壁分成两类新的生产工艺。
新工艺的特点:①砍掉了易燃、易爆的石油醚;②降低酒精浓度从49%-5%使之在生产过程中不易燃烧,同时保持酒精破碎植物细胞壁的作用;③提取过程是在室温5-35℃下进行,以保证其有效成分的生理活性;④精简了用70%酒精沉淀蛋白质的操作,保留了植物中的高蛋白与微量元素及其生物活性物质;⑤比旧工艺提高了产品质量与收率。用新工艺生产地燕子掌原粉精品进行药效试验参见表3,效果良好。
1、化学方法破细胞壁实施例见表1中列举的1-10例。
实施例1举例,按图1.49%-5%酒精破细胞壁的新工艺流程图进行操作:将100kg鲜燕子掌或玉树的茎、叶洗净,置于搅碎机中,再加入50升49%的药用酒精,浸泡4小时,高速搅拌呈匀浆,过滤。滤渣分别用50升水按上述重复操作3次,合并4次滤液,回收酒精后减压浓缩至呈粘稠状,放入蒸发盘中将其置于远红外烤箱中,在40-50℃烤干,用粉碎机破碎过60目筛,得精品燕子掌原粉(以下简称DSP原粉)2.4kg,以燕子掌鲜重为基准计算,收率为2.4%(原来生产工艺收率:1.1-2.33%;平均收率为1.59%)。
实施例2-10举例:按图1的工艺,操作同前(略),其酒精浓度收率如表1所示。
表1. 项目实施例编号 燕子掌 鲜重(kg) 酒精 浓度 产量 (kg) 收率 (%) 回收率 (wt%) 总收率 (wt%) 1 100 49% 2.4 2.4 0.05 2.45 2 100 45% 2.35 2.35 0.035 2.39 3 100 40% 2.41 2.41 0.07 2.48 4 100 35% 2.5 2.5 0.12 2.62 5 100 30% 2.45 2.45 0.09 2.54 6 100 25% 2.38 2.38 0.19 2.57 7 100 20% 2.29 2.29 0.22 2.51 8 100 15% 2.30 2.30 0.18 2.48 9 100 10% 2.39 2.39 0.085 2.48 10 100 5% 2.27 2.27 0.04 2.31实施例11.滤渣回收举例按图2燕子掌泸渣的回收工艺图进行操作:将4.1kg/滤渣浸泡入50升水,24小时后加热至50℃,冷却至室温,压滤,滤渣按上述重复操作4次,合并5次滤液。50-70℃减压浓缩,浓缩至略带粘稠状,放入蒸发盘中,再将其置于远红外烤箱中,在40-50℃烘烤干,粉碎、过筛60目,得精品0.05kg,回收率0.05%。
实施例12-20的滤渣回收举例中回收率见表1.实施例所示。实施例2. 2-10的滤渣回收举例同上(略)
2、物理方法破细胞壁实施例:
①速冻速解冻法:操作方法按图3速冻速解工艺流程操作速冻速解冻温度范围,收率详见表2
表2 项目 实施例编号 燕子掌 鲜重(kg) 速冻解冻 温度 产量 (kg) 收率 (%) 回收率 (wt%) 总收率 (wt%) 1 100 -5→50℃* 2.4 2.4 0.05 2.45 2 100 -10→50℃ 2.35 2.35 0.035 2.39 3 100 -15→50℃ 2.41 2.41 0.07 2.48 4 100 -20→50℃ 2.5 2.5 0.12 2.62
*-5℃指速冻温度,速冻时间约24小时,解冻需迅速加温至50℃。
②超声波破碎细胞壁实施例
实施例:按图4超声波破细胞壁的新工艺流程图进行操作,取100kg新鲜燕子掌洗净,加50升水,用捣碎机捣碎呈匀浆,用超声波搅拌2小时,过滤,重复上述操作3次,合并4次滤液,滤渣回收率为0.08%,DSP原粉产量2.56kg。收率:2.56%。总收率:2.64%。
药效试验:
①DSP原粉降血糖作用效果观察试验:实验材料为雌性Wistar大白鼠,体重230-260g,试验方法详见特许公报平成5-19554,这里不再赘述,试验结果如表3所示。DSP原粉从表1的例10从表中取样。
表3各组血糖平均值变化情况(mg/dl M±SD)组别动物数 血 糖 值给药前 给 药 后 2天 4天 6天 8天 14天DSP原粉20mg/kg11347.0(110.54)256.3△(108.10)282.7△(77.38)228.6*△(83.40)250.7*△(63.08)154.1**△△(30.48)优降糖1.6mg/kg10339.4(119.65)280.4△(112.61)300.1(75.86)234.1△(92.52)283.5(133.21)243.2(95.70)阳性对照11323.6(144.21)431.6(182.93)410.0(165.09)370.9(137.26)416.8(182.72)383.8(199.98)
*与给药前相比P<0.05 **P<0.01
△与阳性对照相比P<0.05 △△P<0.01
经t值检验,阳性对照组与优降糖组给药后的各天与给药前相比未发现有统计学意义和差别(P>0.05),而5g/kg组于第6天开始有显著性差别(P<0.05),停药后6天仍有非常显著的差别(P<0.01)与阳性组相比:5g/kg组均自第2天开始血糖即有显著降低(P<0.05);优降糖组在2天与5天也有显著性差异(P<0.05)。
由此可见,DSP原粉(鲜重燕子掌提取液干燥成粉)作用持续时间较长,停药6天后仍能维持降糖作用。因而其降糖作用优于优降糖。
DSP原粉的动物试验:方法与材料同前,试验结果如表4所示
表4DSP原粉动物试验 组别动物数性别 血糖含量mg% 血糖下降 率(-△X) (%) P值给药前给药后-ΔX±SD DSP原粉20mg/kg*11♀198.41146.5251.89±40.99 51.89 <0.01 DSP原粉20mg/kg**11♀192.35149.4542.9±39.3 42.9 <0.01 对照组11♀180.67179.983.69±5.94 3.69 ——
*为速冻速解冻实施例2中取样;
**为超声波破碎细胞壁实施例中取样
3、新、旧生产工艺的有效成分及功能比较,见表5.
表5 项目生产工艺 药效(P值) 总蛋白含量 % 总糖含量 % 水溶性 平均收率旧工艺 <0.01 3-4.5 <1 部分溶解 1.59新工艺 <0.01 30-60 4-6 全 溶 2.48
4、DSP原粉中的蛋白、糖、微量元素等的测定:
按中国药典方法测定结果如表6所示
①表6蛋白、糖、含水量测试结果测定项目 含量范围 最高值 最低值 基准物 测试仪器总糖量 4-6.0% 6% 4% D-甘露糖 小牛血红蛋白紫外-可见分光光度计-340型,差热热重分析仪蛋白质含量 30-60% 60% 30%含水量 5-8% 8% 5%
②微量元素测定:用ICP(电子能谱)测定,英国,测试结果如表7所示。
表7元素名称Mg Al Fe P Cu Zn Ca Pb Cd Cr K+ Cl-含量(mg/kg)20.3 0.2 0.48 10.3 0.03 0.17 62.2 <1 <1 <1 55.0 68.0百分含量(%)2.03 0.02 0.048 1.03 0.003 0.017 6.22 <0.1 <0.1 <0.1 5.5 6.8
5、DSP原粉与螺旋藻营养成分的比较:如表8所示
表8项目含量(%)名称 蛋白质含量% 总糖量% 微量元素%DSP原粉 30-60 4-6 >9螺旋藻(干重) 40-70 12-18 5-8
从表3至表8可见,DSP原粉的药效具有广阔的开发前景,从营养保健的角度看,蛋白、糖均接近螺旋藻,而微量元素超出螺旋藻,作为天然营养保健食品、保健品、降糖药开发潜力很大。