G蛋白偶联受体激动剂.pdf

式(I)的化合物，或其药学可接受的盐是GPCR激动剂，并用于治疗肥胖和糖尿病。

权利要求书
1、  式(I)的化合物或其药学可接受的盐：

其中：
Z代表芳基、杂芳基、-C1-4烷基芳基或-C1-4烷基杂芳基，它们中任何一个可任选地被一个或多个选自卤素、C1-4烷基、C1-4氟烷基、C1-4羟基烷基、C2-4烯基、C2-4炔基、C1-4烷氧基、OR9、NR3R4、S(O)nR9、S(O)2NR9R99、C(O)NR9R99、NR10C(O)R9、NR10C(O)NR9R99、NR10SO2R9、C(O)R9、C(O)OR9、-P(O)(CH3)2、NO2、氰基或-(CH2)j-C3-7环烷基、-(CH2)j-芳基、-(CH2)j-杂环基、-(CH2)j-杂芳基的基团取代，所述环烷基、芳基、杂环基或杂芳基中任何一个可被C1-4烷基取代；
A1和A2中的一个为N或N+-O-，且另一个为CH、C(OH)或N；
d为0、1、2或3；
e为1或2；
条件是d+e为2、3、4或5，且如果A1和A2都为N，则d为2或3且e为2；
j为0、1或2；
k为0、1或2；
n为0、1或2；
B代表支链或直链C1-4亚烷基链或C1-4亚烯基链，两者中任何一个可任选地被一个或多个选自卤素、羟基或氧代的基团取代，且其中一个CH2基团可被O或NR8代替，条件是基团＞A2-B-不包含任何直接的N-O、N-C-O、N-N、N-C-N或N-C-卤素键；
G代表CHR2或NR1；
R1为C(O)OR5、C(O)R5、S(O)2R5、C(O)NR5R8、C1-4亚烷基-C(O)OR5、C(O)C(O)OR5或P(O)(O-Ph)2；或者杂环基或杂芳基，两者中任何一个可任选地被一个或两个选自C1-4烷基、C1-4烷氧基或卤素的基团取代；
R2为C3-6烷基；
R3和R4独立地为氢、甲氧基、C1-4烷基，其可任选地被卤素、羟基、C1-4烷氧基、芳氧基、芳基C1-4烷氧基、C1-4烷基S(O)n-、C3-7杂环基、-C(O)OR14或N(R10)2取代；或者可为C3-7环烷基、芳基、杂环基或杂芳基，其中这些环状基团可被一个或多个选自卤素、C1-4烷基、C1-4氟烷基、OR13、CN、SO2CH3、N(R10)2和NO2的取代基取代；或者R3和R4可共同形成任选地被羟基、C1-4烷基或C1-4羟基烷基取代且任选地含有选自O和NR10的另外的杂原子的5-或6-元杂环；
R5和R55独立地为C1-8烷基、C2-8烯基或C2-8炔基，它们中任何一个可任选地被一个或多个卤原子、NR6R66、OR6、C(O)OR6、OC(O)R6或氰基取代且其所含的CH2基团可被O或S代替；或者为C3-7环烷基、芳基、杂环基、杂芳基、C1-4亚烷基C3-7环烷基、C1-4亚烷基芳基、C1-4亚烷基杂环基或C1-4亚烷基杂芳基，它们中任何一个可被一个或多个选自卤素、C1-4烷基、C1-4氟烷基、OR7、CN、NR7R77、SO2Me、NO2或C(O)OR7的取代基取代；
R6、R66、R7和R77各自独立地为氢或C1-4烷基；或者R6和R66或R7和R77可共同独立地形成5-或6-元杂环；
R8为氢或C1-4烷基；
R9和R99独立地为氢、甲氧基、C1-4烷基，其可任选地被卤素、羟基、C1-4烷氧基、C1-4烷氧基C1-4烷氧基、-芳氧基-、芳基C1-4烷氧基、C1-4烷基S(O)n-、C3-7杂环基、-C(O)OR14或N(R10)2取代；或者可为C3-7环烷基、芳基、杂环基或杂芳基，其中这些环状基团可被一个或多个选自卤素、C1-4烷基、C1-4氟烷基、OR13、CN、SO2CH3、N(R10)2和NO2的取代基取代；或者R9和R99可共同形成任选地被羟基、C1-4烷基或C1-4羟基烷基取代且任选地含有选自O和NR10的另外的杂原子的5-或6-元杂环；
R10为氢、C1-4烷基；或者基团N(R10)2可形成任选地含有选自O和NR10的另外的杂原子的4-至7-元杂环；
R11为氢或羟基，或者当B代表C1-4亚烯基且与CR11相邻有不饱和点时，则R11不存在；
R12各自独立地为羟基、氧代、甲基；或者两个R12基团可形成桥连亚甲基；
R13为氢、C1-2烷基或C1-2氟烷基；
R14为氢或C1-4烷基；
x为0、1、2或3；且
y为1、2、3、4或5；
条件是x+y为2、3、4或5。

2、  根据权利要求1的化合物或其药学可接受的盐，其中Z为任选取代的苯基。

3、  根据权利要求1的化合物或其药学可接受的盐，其中Z为任选取代的6-元杂芳基。

4、  根据权利要求1-3中任一项的化合物或其药学可接受的盐，其中G为NR1。

5、  根据权利要求1-4中任一项的化合物或其药学可接受的盐，其中R1为C(O)OR5、C(O)NR5R8或杂芳基。

6、  根据权利要求5的化合物或其药学可接受的盐，其中R1为C(O)OR5。

7、  根据权利要求1-6中任一项的化合物或其药学可接受的盐，其中R5为任选地被一个或多个卤原子或氰基取代的C3-5烷基，且其所含的CH2基团可被O或S代替，或者为任选地被C1-4烷基取代的C3-5环烷基。

8、  式(Ib)的根据权利要求1的化合物或其药学可接受的盐：

其中E1和E2为CH，或者E1和E2中的一个为N且另一个为CH；
A2为N或CH；
当A2为N时，Y为CH2；
当A2为CH时，Y为O或NR8；
W为支链或直链C1-3亚烷基链或C1-3亚烯基链，两者中任何一个可任选地被一个或多个选自卤素、羟基或氧代的基团取代；
Ra、Rb和Rc中的一个选自S(O)nR9、S(O)2NR9R99、C(O)NR9R99、NR10C(O)NR9R99和5-或6-元杂芳基，且Ra、Rb和Rc中的另外两个选自氢、卤素、C1-4烷基和氰基；且
R1为C(O)OR5、C(O)NR5R8或5-或6-元杂芳基。

9、  如实施例1-89中任何一个所定义的式(I)的化合物或其药学可接受的盐。

10、  药物组合物，其包含根据权利要求1至9中任一项的化合物或其药学可接受的盐，以及药学可接受的载体。

11、  治疗其中GPR119起作用的疾病或病症的方法，其包括向有此需要的个体给药有效量的根据权利要求1至9中任一项的化合物或其药学可接受的盐的步骤。

12、  调节过饱的方法，其包括向有此需要的个体给药有效量的根据权利要求1至9中任一项的化合物或其药学可接受的盐的步骤。

13、  治疗肥胖的方法，其包括向有此需要的个体给药有效量的根据权利要求1至9中任一项的化合物或其药学可接受的盐的步骤。

14、  治疗糖尿病的方法，其包括向有此需要的个体给药有效量的根据权利要求1至9中任一项的化合物或其药学可接受的盐的步骤。

15、  治疗代谢综合征(X综合征)、葡萄糖耐量降低、高脂血症、高甘油三酯血症、高胆固醇血症、低HDL水平或高血压的方法，其包括向有此需要的患者给药有效量的根据权利要求1至9中任一项的化合物或其药学可接受的盐的步骤。

16、  根据权利要求1至9中任一项的化合物或其药学可接受的盐，其用作药物。

17、  根据权利要求1至9中任一项的化合物或其药学可接受的盐，其用于制备治疗或预防如权利要求11至15中任一项所定义的疾病或病症的药物。

18、  根据权利要求1至9中任一项的化合物，其用于治疗或预防如权利要求11至15中任一项所定义的疾病或病症。

19、  式(12)的化合物：

或其盐或其保护的衍生物，其中基团Z、A1、A2、B、R11、R12、d、e、k、x和y如权利要求1中所定义。

说明书G蛋白偶联受体激动剂
本发明涉及G-蛋白偶联受体(GPCR)激动剂。特别地，本发明涉及用于治疗肥胖例如作为过饱调节剂，以及用于治疗糖尿病的GPCR激动剂。
肥胖以脂肪组织质量相对于身体大小过量为特征。临床上，体脂质量通过身体质量指数(BMI；体重(kg)/身高(m)2)或腰围来评估。当BMI大于30时，个体被认为是肥胖的并且具有确定的源自超重的医学后果。体重增加尤其是腹部体脂导致的体重增加与患糖尿病、高血压、心脏病以及多种其他健康并发症例如关节炎、中风、胆囊疾病、肌肉和呼吸问题、背痛以及甚至某些癌症的风险增加有关，这在一段时期以来已成为公认的医学观点。
治疗肥胖的药理学方法主要涉及通过改变能量摄取和消耗之间的平衡来减少脂肪质量。大量研究已经明确确定了肥胖与能量动态平衡的调节所涉及的脑回路之间具有联系。直接和间接证据表明血清素途径、多巴胺能途径、肾上腺素能途径、胆碱能途径、内源性大麻素途径、类阿片途径和组胺能途径以及众多神经肽途径(如神经肽Y和黑皮质素(melanocortin))与能量摄取和消耗的中枢控制有关。下丘脑中枢还可以感知与维持体重以及肥胖度有关的外围激素如胰岛素和瘦素，以及源自脂肪组织的肽。
针对与胰岛素依赖性I型糖尿病以及非胰岛素依赖性II型糖尿病有关的病理生理学的药物存在许多潜在的副作用并且在大多数患者中并不能充分解决血脂异常以及高血糖症的问题。治疗方法使用饮食、锻炼、降血糖药物以及胰岛素，通常集中于个体患者的需要，但对新型抗糖尿病药物，尤其是能够较好地耐受且具有更少的副作用的新型抗糖尿病药物的需要一直存在。
类似地，以高血压及其相关的病理包括动脉硬化、脂血症、高血脂以及高胆固醇血症为特征的代谢综合征(综合征X)被认为与受激发时可导致血糖水平异常的胰岛素敏感性降低有关。心肌缺血以及微脉管疾病被确认为是与未被治疗或控制不佳的代谢综合征有关的病态。
人们对新型抗肥胖和抗糖尿病药物，尤其是对具有良好耐受性且具有很少副作用的新型抗肥胖和抗糖尿病药物的需要一直存在。
GPR119(过去称为GPR116)是在同时公开了人和大鼠受体的WO00/50562中被鉴定为SNORF25的GPCR，US 6,468,756也公开了小鼠受体(编号：AAN95194(人)、AAN95195(大鼠)、AAN95196(小鼠))。
在人中，GPR119在胰腺、小肠、结肠以及脂肪组织中表达。人GPR119受体的表达谱表明它具有作为治疗肥胖和糖尿病的靶标应用的潜力。
国际专利申请WO2005/061489(在本申请的优先权日后公布)公开了作为GPR119受体激动剂的杂环衍生物。
本发明涉及用于治疗肥胖例如作为过饱的外周调节剂，以及用于治疗糖尿病的GPR119激动剂。
发明概述
式(I)的化合物：

或其药学可接受的盐是GPR119激动剂，并用作肥胖和糖尿病的预防性治疗或治疗性治疗。
发明详述
本发明涉及式(I)的化合物或其药学可接受的盐：

其中：
Z代表芳基、杂芳基、-C1-4烷基芳基或-C1-4烷基杂芳基，它们中任何一个可任选地被一个或多个选自卤素、C1-4烷基、C1-4氟烷基、C1-4羟基烷基、C2-4烯基、C2-4炔基、C1-4烷氧基、OR9、NR3R4、S(O)nR9、S(O)2NR9R99、C(O)NR9R99、NR10C(O)R9、NR10C(O)NR9R99、NR10SO2R9、C(O)R9、C(O)OR9、-P(O)(CH3)2、NO2、氰基或-(CH2)j-C3-7环烷基、-(CH2)j-芳基、-(CH2)j-杂环基、-(CH2)j-杂芳基的基团取代，所述环烷基、芳基、杂环基或杂芳基中任何一个可被C1-4烷基取代；
A1和A2中的一个为N或N+-O-，且另一个为CH、C(OH)或N；
d为0、1、2或3；
e为1或2；
条件是d+e为2、3、4或5，且如果A1和A2都为N，则d为2或3且e为2；
j为0、1或2；
k为0、1或2；
n为0、1或2；
B代表支链或直链C1-4亚烷基链或C1-4亚烯基链，两者中任何一个可任选地被一个或多个选自卤素、羟基或氧代的基团取代，且其中一个CH2基团可被O或NR8代替，条件是基团＞A2-B-不包含任何直接的N-O、N-C-O、N-N、N-C-N或N-C-卤素键；
G代表CHR2或NR1；
R1为C(O)OR5、C(O)R5、S(O)2R5、C(O)NR5R8、C1-4亚烷基-C(O)OR5、C(O)C(O)OR5或P(O)(O-Ph)2；或者杂环基或杂芳基，两者中任何一个可任选地被一个或两个选自C1-4烷基、C1-4烷氧基或卤素的基团取代；
R2为C3-6烷基；
R3和R4独立地为氢、甲氧基、C1-4烷基，其可任选地被卤素(如：氟)、羟基、C1-4烷氧基、芳氧基、芳基C1-4烷氧基、C1-4烷基S(O)n-、C3-7杂环基、-C(O)OR14或N(R10)2取代；或者可为C3-7环烷基、芳基、杂环基或杂芳基，其中这些环状基团可被一个或多个选自卤素、C1-4烷基、C1-4氟烷基、OR13、CN、SO2CH3、N(R10)2和NO2的取代基取代；或者R3和R4可共同形成任选地被羟基、C1-4烷基或C1-4羟基烷基取代且任选地含有选自O和NR10的另外的杂原子的5-或6-元杂环；
R5和R55独立地为C1-8烷基、C2-8烯基或C2-8炔基，它们中任何一个可任选地被一个或多个卤原子、NR6R66、OR6、C(O)OR6、OC(O)R6或氰基取代且其所含的CH2基团可被O或S代替；或者为C3-7环烷基、芳基、杂环基、杂芳基、C1-4亚烷基C3-7环烷基、C1-4亚烷基芳基、C1-4亚烷基杂环基或C1-4亚烷基杂芳基，它们中任何一个可被一个或多个选自卤素、C1-4烷基、C1-4氟烷基、OR7、CN、NR7R77、SO2Me、NO2或C(O)OR7的取代基取代；
R6、R66、R7和R77各自独立地为氢或C1-4烷基；或者R6和R66或R7和R77可共同独立地形成5-或6-元杂环；
R8为氢或C1-4烷基；
R9和R99独立地为氢、甲氧基、C1-4烷基，其可任选地被卤素(如：氟)、羟基、C1-4烷氧基、C1-4烷氧基C1-4烷氧基、-芳氧基-、芳基C1-4烷氧基、C1-4烷基S(O)n-、C3-7杂环基、-C(O)OR14或N(R10)2取代；或者可为C3-7环烷基、芳基、杂环基或杂芳基，其中这些环状基团可被一个或多个选自卤素、C1-4烷基、C1-4氟烷基、OR13、CN、SO2CH3、N(R10)2和NO2的取代基取代；或者R9和R99可共同形成任选地被羟基、C1-4烷基或C1-4羟基烷基取代且任选地含有选自O和NR10的另外的杂原子的5-或6-元杂环；
R10为氢、C1-4烷基；或者基团N(R10)2可形成任选地含有选自O和NR10的另外的杂原子的4-至7-元杂环；
R11为氢或羟基，或者当B代表C1-4亚烯基且与CR11相邻有不饱和点时，则R11不存在；
R12各自独立地为羟基、氧代、甲基；或者两个R12基团可形成桥连亚甲基；
R13为氢、C1-2烷基或C1-2氟烷基；
R14为氢或C1-4烷基；
x为0、1、2或3；且
y为1、2、3、4或5；
条件是x+y为2、3、4或5。
式(I)的化合物的分子量优选低于800，更优选低于600，特别是低于500。
一组重要的化合物是式(Ia)的那些或其药学可接受的盐：

其中：
Z代表芳基或杂芳基，两者中任何一个可任选地被一个或多个选自卤素、C1-4烷氧基、NR3R4、S(O)mR9、S(O)2NR9R99、C(O)NR9R99、C(O)R9、C(O)OR9、芳基、杂环基、杂芳基或氰基的基团取代；或者代表C1-4烷基、C2-4烯基或C2-4炔基，这三者中任何一个可任选地被一个或多个卤素、羟基、NR3R4、氧代或C1-4烷氧基取代；
A1和A2中的一个为N，且另一个为CH或N；
d为0、1、2或3；
e为1或2；
条件是d+e为2、3、4或5，如果A1和A2都为N，则d为2或3且e为2；
m为1、2或3；
G代表CHR2或NR1；
R1为C(O)OR5、C(O)R5、S(O)2R5、C(O)NR5R8、C1-4亚烷基-C(O)OR5、C(O)C(O)OR5、S(O)2R5、C(O)R5或P(O)(O-Ph)2；或者为杂环基或杂芳基，两中任何一个可任选地被一个或两个选自C1-4烷基、C1-4烷氧基或卤素的基团取代；
R2为C3-6烷基；
R3和R4独立地为氢、C1-4烷基，C3-7环烷基或芳基，其可被任选地被1或2个选自卤素、C1-4烷基、CF3、C1-4烷氧基、氰基和S(O)2Me的取代基取代；或者R4和R44可共同形成5-或6-元杂环；
R5和R55独立地为C1-8烷基、C2-8烯基或C2-8炔基，它们中任何一个可任选地被一个或多个卤原子、NR6R66、OR6、C(O)OR6、OC(O)R6或氰基取代且其所含的CH2基团可被O或S代替；或者为C3-7环烷基、芳基、杂环基、杂芳基、C1-4亚烷基C3-7环烷基、C1-4亚烷基芳基、C1-4亚烷基杂环基或C1-4亚烷基杂芳基，它们中任何一个可被一个或多个选自卤素、C1-4烷基、C1-4氟烷基、OR7、CN、NR7R77、SO2Me、NO2或C(O)OR7的取代基取代；
R6、R66、R7和R77各自独立地为氢或C1-4烷基；或者R6和R66或R7和R77可共同独立地形成5-或6-元杂环；
R8为氢或C1-4烷基；
R9和R99独立地为氢、C1-4烷基，其可任选地被卤素(如：氟)、羟基、C1-4烷氧基、C1-4烷硫基、C3-7杂环基或N(R10)2取代；或者可为C3-7环烷基、芳基、杂环基或杂芳基，其中这些环状基团可以被一个或多个选自卤素、C1-4烷基、C1-4氟烷基、OR9、CN、SO2CH3、N(R10)2和NO2的取代基取代；
x为0、1、2或3；且
y为1、2、3、4或5；
条件是x+y为2、3、4或5。
Z可代表的典型芳基包括苯基和萘基(两者中任何一个可如上所述被任选地取代)，尤其是苯基。Z可代表的典型杂芳基包括5元单环、6元单环、8元双环、9元双环和10元双环(它们中任何一个可如上所述被任选地取代)，尤其是6元单环(例如含有1或2个氮原子的那些基团)。当Z为杂芳基或-C1-4烷基杂芳基时，它一般含有多达4个选自O、N和S的杂原子。当Z代表-C1-4烷基芳基或-C1-4烷基杂芳基时，其适当地为-C1-2烷基芳基或-C1-2烷基杂芳基。
Z优选为苯基或优选含有1个氮原子的6元杂芳基。
当Z为取代的苯基或含有1个氮原子的6元杂芳基时，其优选被多至3个取代基优选在间位和对位取代。
可取代Z的优选基团包括S(O)nR9，例如SOMe或SO2Me、C(O)NR9R99、NR10C(O)NR9R99、5-或6-元杂芳基、卤素例如氟或氯、C1-4烷基例如甲基和氰基。
G优选为NR1。
R1优选为C(O)OR5、C(O)NR5R8、C1-4亚烷基-C(O)OR5、C(O)C(O)OR5、杂环基、杂芳基、S(O)2R5、C(O)R5或P(O)(O-Ph)2；特别为C(O)OR5、C(O)NR5R8、杂芳基、S(O)2R5或C(O)R5；具体而言是C(O)OR5、C(O)NR5R8、杂芳基、S(O)2R5或C(O)R5。更优选地，R1为C(O)OR5、C(O)NR5R8或杂芳基。R1最优选为COOR5。当R1为杂芳基时，所述杂芳基环优选为5-或6-元杂芳基环，例如嘧啶基、特别是嘧啶-2-基。
R5优选代表C1-8烷基、C2-8烯基或C2-8炔基，其任选地被一个或多个卤原子或氰基取代且其所含的CH2基团可被O或S代替；或者代表C3-7环烷基、芳基或C1-4烷基C3-7环烷基，它们中任何一个可被一个或多个选自卤素、C1-4烷基、C1-4氟烷基、OR7、CN、NR7R77、NO2和C(O)OC1-4烷基的取代基取代。更优选地，R5代表C1-8烷基、C2-8烯基或C2-8炔基，其任选地被一个或多个卤原子或氰基取代且其所含的CH2基团可被O或S代替；或者代表C3-7环烷基或芳基，两者中任何一个可被一个或多个选自卤素、C1-4烷基、C1-4氟烷基、OR7、CN、NR7R77、NO2和C(O)OC1-4烷基的取代基取代。最优选的R5基团为C3-5烷基，其任选地被一个或多个卤原子或氰基取代且其所含的CH2基团可被O或S代替；或者为被C1-4烷基任选取代的C3-5环烷基。在本发明的一个实施方案中，R5代表的基团是未取代的。
在本发明的一个实施方案中，x+y为2、3或4。在本发明的优选的实施方案中，x和y各自代表1。在本发明的更优选的实施方案中，x和y各自代表2。
适当地，B适合代表可任选地被一个或多个选自卤素、羟基或氧代的基团取代的支链或直链C1-4亚烷基。可选地，B代表可任选地被一个或多个选自卤素、羟基或氧代的基团取代的支链或直链C1-4亚烷基。当基团B被取代时，适当地，其被1、2或3个取代基取代(例如：1或2)。
在本发明的一个实施方案中A1和A2代表N。在本发明的第二个实施方案中，A1代表N且A2代表CH。在本发明的第三个实施方案中，A1代表CH且A2代表N。
式(I)的化合物的亚组为式(Ib)的那些：

其中E1和E2为CH，或者E1和E2中的一个为N且另一个为CH；
A2为N或CH；
当A2为N时，Y为CH2；
当A2为CH时，Y为O或NR8；
W为支链或直链C1-3亚烷基链或C1-3亚烯基链，两者中任何一个可任选地被一个或多个选自卤素、羟基或氧代的基团取代；
Ra、Rb和Rc中的一个选自S(O)nR9、S(O)2NR9R99、C(O)NR9R99、NR10C(O)NR9R99和5-或6-元杂芳基，且Ra、Rb和Rc中的另外两个选自氢、卤素、C1-4烷基和氰基；且
R1为C(O)OR5、C(O)NR5R8或5-或6-元杂芳基。
为避免E1或E2代表的CH基团，H可被上文列出的对于Ra、Rb和Rc的取代基之一取代。
在式(Ib)的化合物中，E1或E2之一优选为N。
尽管各个变量的优选基团已概括地对各个变量单独列在上文，但本发明优选的化合物包括其中式(I)、(Ia)和(Ib)的若干或各个变量均选自各个变量中优选的、更优选的或特别列出的基团的化合物。因此，本发明旨在包括优选的、更优选的以及特别列出的基团的所有组合。
可被提及的本发明的特定化合物是包括在实施例中的化合物及其药学可接受的盐。
可任选地使用下列条件(单独地或以任何组合)以从本发明的范围内排除某些化合物：
i)当G代表N-C(O)O-叔丁基；B代表乙烯基；A1和A2各自代表N；d、e、x和y各自代表2；R11代表H；k代表0；则适当地，Z不代表：

ii)当Z代表苯基；B代表亚甲基；A1代表CH；A2代表N；d、e、x和y各自代表2；R11代表H；k代表0；则适当地，G不代表：

iii)当G代表N-(萘-1-基磺酰基-)；B代表乙烯基；A1和A2各自代表N，或者A1代表CH且A2代表N；d和e各自代表2；x代表0；y代表4；R11代表H；k代表0；则适当地，Z不代表苯基、吡啶-2-基、2-甲基苯基、4-三氟甲基苯基或3-三氟甲基苯基。
iv)当G代表N-(4-三氟甲基苯基磺酰基)；B代表亚甲基；A1代表CH且A2代表N；d、e、x和y各自代表2；R11代表H；k代表0；则适当地，Z不代表吡啶-5-基。
v)当Z代表2-甲氧基苯基；B代表亚甲基；A1和A2代表N；d和e各自代表2；x代表1且y代表3，或者x代表2且y代表2；R11代表H；k代表0；则适当地，G不代表N-C(O)-苯基或N-C(O)-环己基。
vi)当B代表亚甲基；A1和A2代表N；d和e各自代表2；x代表1且y代表3，或者x代表2且y代表2；R11代表H；k代表0；Z代表3-(二甲氨基)苯基、3-(乙酰氨基)苯基、2-甲氧基苯基、吡啶-2-基，则适当地，G不代表N-(4-甲基苯基磺酰基)、N-(4-氟苯基磺酰基)或N-(环己基甲磺酰基)。
除非另有说明，当用于本文时，“烷基”以及具有前缀“烷(alk)”的其他基团，比如例如烯基、炔基等，意指可为直链或支链或其组合的碳链。烷基的实例包括甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、仲丁基以及叔丁基、戊基、己基、庚基等。“烯基”、“炔基”以及其他类似术语包括具有至少一个不饱和碳碳键的碳链。
术语“氟烷基”包括被一个或多个氟原子取代的烷基，如：CH2F、CHF2和CF3。
术语“环烷基”意指不含杂原子的碳环，并包括单环和双环饱和及部分饱和的碳环。环烷基的实例包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基和环庚基。部分饱和的环烷基的实例包括环己烯和2，3-二氢化茚。环烷基典型地总共含有3至10个环碳原子(例如：3至6个或8至10个)。
术语“卤素”包括氟、氯、溴和碘原子(特别是氟或氯)。
术语“芳基”包括苯基和萘基，特别是苯基。
除非另有说明，术语“杂环基”和“杂环”包括4-至10-元单环和双环饱和环(如：4-至7-元单环饱和环)，并含有最多三个选自N、O和S的杂原子。杂环的实例包括氧杂环丁烷、四氢呋喃、四氢吡喃、氧杂环庚烷、氧杂环辛烷、硫杂环丁烷(thietane)、四氢噻吩、四氢噻喃、硫杂环庚烷(thiepane)、硫杂环辛烷(thiocane)、氮杂环丁烷、吡咯烷、哌啶、氮杂环庚烷(azepane)、氮杂环辛烷(azocane)、[1，3]二噁烷、噁唑烷、哌嗪等。杂环的其他实例包括含硫环的氧化形式。因此，四氢噻吩1-氧化物、四氢噻吩1，1-二氧化物、四氢噻喃1-氧化物和四氢噻喃1，1-二氧化物也被认为是杂环。
除非另有说明，术语“杂芳基”包括含有最多4个选自N、O和S的杂原子的单环和双环5-至10-元(如：单环5-或6-元)杂芳基环。这样的杂芳基环的实例为呋喃基、噻吩基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、噁唑基、异噁唑基、噻唑基、异噻唑基、三唑基、噁二唑基、噻二唑基、四唑基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基和三嗪基。双环杂芳基包括其中5-或6-元杂芳基环稠合到苯基或另一杂芳基的双环杂芳基。这样的双环杂芳环的实例为苯并呋喃、苯并噻吩、吲哚、苯并噁唑、苯并噻唑、吲唑、苯并咪唑、苯并三唑、喹啉、异喹啉、喹唑啉、喹喔啉和嘌呤。优选的杂芳基是含有最多4个选自N、O和S的杂原子的单环5-或6-元杂芳基环。
本文描述的化合物可含有一个或多个不对称中心并可因此产生非对映异构体和光学异构体。本发明包括所有这样可能的非对映异构体以及它们的外消旋混合物、它们的基本纯的拆分的对映异构体、所有可能的几何异构体及其药学可接受的盐。上述式(I)并未在某些位置显示确定的立体化学。本发明包括式(I)的所有立体异构体及其药学可接受的盐。此外，还包括立体异构体的混合物以及分离的特定立体异构体。在用于制备这样的化合物的合成操作过程中，或者在使用本领域技术人员已知的外消旋化或差向异构化方法中，这样的方法的产物可为立体异构体的混合物。
当式(I)的化合物的互变异构体存在时，除非特别标明或另有说明，本发明包括任何可能的互变异构体及其药学可接受的盐、和其混合物。例如本发明包括可由B的定义所包括的所有酮和烯醇形式。
当式(I)的化合物及其药学可接受的盐以溶剂合物或多晶型形式存在时，本发明包括任何可能的溶剂合物和多晶型形式。形成溶剂合物的溶剂类型没有特别限制，只要该溶剂是药理学可接受的。例如：可以使用水、乙醇、丙醇、丙酮等。
术语“药学可接受的盐”是指由药学可接受的无毒碱或酸制备的盐。当本发明的化合物为酸性时，其相应的盐可方便地由药学可接受的无毒碱，包括无机碱和有机碱来制备。由这样的无机碱得到的盐包括铝盐、铵盐、钙盐、铜(一价和二价)盐、铁盐、亚铁盐、锂盐、镁盐、钾盐、钠盐和锌盐等。特别优选的是铵盐、钙盐、镁盐、钾盐和钠盐。由药学可接受的有机无毒碱得到的盐包括伯胺、仲胺和叔胺，以及环胺和取代的胺如天然存在的和合成的取代的胺。可由之形成盐的其他药学可接受的有机无毒碱包括精氨酸、甜菜碱、咖啡因、胆碱、N’，N’-二苄基乙二胺、二乙胺、2-二乙氨基乙醇、2-二甲氨基乙醇、乙醇胺、乙二胺、N-乙基吗啉、N-乙基哌啶、葡糖胺、氨基葡糖、组氨酸、哈胺(hydrabamine)、异丙胺、赖氨酸、甲基葡糖胺、吗啉、哌嗪、哌啶、多胺树脂、普鲁卡因、嘌呤、可可碱、三乙胺、三甲胺、三丙胺、氨丁三醇等。
当本发明的化合物为碱性时，其相应的盐可以方便地由药学可接受的无毒酸包括无机酸和有机酸来制备。这样的酸包括例如乙酸、苯磺酸、苯甲酸、樟脑磺酸、柠檬酸、乙磺酸、反丁烯二酸、葡萄糖酸、谷氨酸、氢溴酸、盐酸、羟乙磺酸、乳酸、马来酸、苹果酸、扁桃酸、甲磺酸、粘酸、硝酸、双羟萘酸、泛酸、磷酸、琥珀酸、硫酸、酒石酸、对甲苯磺酸等。
由于式(I)的化合物旨在用于药学用途，它们优选以基本纯的形式提供，例如至少60％的纯度，更适当地为至少75％的纯度，尤其是至少98％的纯度(％为重量比重量)。
式(I)的化合物可如下制备，其中基团Z、A1、A2、R11、R12、d、e、m、x、y和G如上文所定义。
其中A2为N的式(I)的化合物可如路线1所述适当的溶剂如二氯甲烷中，在约20℃下采用合适的还原剂如三乙酰氧基硼氢化钠通过胺2与醛3还原性烷基化制备，其中Bx代表B减去CH2(Abdel-Magid，A.F.等人，J.Org.Chem.1996，61，3849-3862)。醛3以及胺2或可商购或利用已知技术容易地制得。
其中B含有NR8基团的式(I)的化合物还可使用合适的中间体通过此类型的还原性烷基化制备，例如相应于式2的化合物，其中A2代表＞CH-NH2，而不是NH。
                         路线1

式(I)的化合物可由胺4和其中L为离去基团例如甲磺酸酯/甲苯磺酸酯/卤化物的化合物5与三乙胺、DIPEA或碳酸钾制备。其中R12为氧代并与A2相邻，氢化钠被用作碱。
其中B含有O基的式(I)的化合物还可通过类似的方法，使用合适的中间体例如相应于式2的化合物制备，其中A2代表＞CH-OH，而不是NH。
                        路线2

如路线3所示，式(I)的化合物还可由卤化锂与Z的溴化物交换，接着在环酮6上亲核进攻。可使用作为选择的有机金属，例如：ZMgX。
                        路线3

如路线4所示的，式(I)的化合物还可通过偶联胺7和羧酸8以得到酰胺实例。
路线4中的化学还可用于制备其中A2为CH或N，且B为含有酰胺部分的连接基的实例。
                       路线4

如路线5所示，其中B为亚烯基的式(I)的化合物还可采用维蒂希反应由酮9和鏻盐10反应来制备。通过采用合适的催化剂如钯炭可进行进一步修饰以获得式(I)的饱和的类似物。
                       路线5

可通过路线2所示的路线制备其中R1为C(O)OR5、C(O)R5、S(O)2R5、C(O)NR5R55或杂芳基的式(I)的化合物。可如上文概述的合成其中PG代表合适的保护基，例如叔丁氧羰基(Boc)的式4的化合物。首先在合适的条件下除去保护基以获得式12的化合物。在Boc基的情况下，这可通过用合适的酸例如三氟乙酸在合适的溶剂如CH2Cl2中处理式11的化合物实现(Fyfe，M.C.T.等人。国际专利公布WO 04/72031)。用通常或可商购或能容易地合成的氯甲酸酯Cl-R1在合适的溶剂如CH2Cl2中在合适碱如三乙胺存在下处理式12的化合物(Picard，F.，等人，J.Med.Chem.2002，45，3406-3417)，获得其中R1为C(O)OR5的式(I)的化合物。类似地，式17的化合物与通常或可商购或能容易地合成的磺酰氯、羧酸酰氯和氨基甲酰氯Cl-R1在合适的溶剂如CH2Cl2中在合适的碱如三乙胺存在下反应，获得其中R1分别为S(O)2R5、C(O)R5和C(O)NR5R8的式(I)的化合物。此外，可通过胺12与合适的杂芳基氯或杂芳基溴在Pd(0)催化下在合适的配体和碱存在下反应制备其中R1是杂芳基的式(I)的化合物(Urgaonkar，S.；Hu，J.-H.；Verkade，J.G.J.Org.Chem.2003，68，8416-8423)。可选地，可通过胺17与杂芳基氯在碱存在下缩合制备其中R1为杂芳基的式(I)的化合物(Barillari，C.等人，Eur.J.Org.Chem.2001，4737-4741；Birch，A.M.等人。J.Med.Chem.1999，42，3342-3355)。可通过式5的化合物与式O＝C＝N-R5的异氰酸酯反应制备其中R8为氢的式(I)的化合物。
                         路线6

要理解，可对式(I)的化合物进行各种官能团修饰制得式(I)的更多化合物，例如：在Z上具有不同取代基。因此，例如，其中Z为烷基羧基芳基，可进行通过水解和标准酰胺偶联的进一步修饰获得酰胺实例。其中Z为硝基芳基，可通过在钯炭上催化氢化进行进一步修饰得到苯胺，通过酸/酰基氯、磺酰氯和异氰酸酯/氨基甲酰氯进一步官能化得到酰胺、磺酰胺和脲实例。其中Z为氰基芳基，可通过用羟胺处理进行进一步修饰得到氨基肟(amidoxime)，其可与酸缩合得到噁二唑实例。当Z为甲硫基芳基时，可通过将该硫化物氧化为亚砜和砜来进行进一步修饰，作为砜氧化的副产物，可分离得到N-氧化物。
式(I)的其它化合物可通过类似于上述方法或实施例中所述方法或本领域已知的方法制备。
式(I)的化合物的制备的进一步细节见实施例。
式(I)的化合物可以单独制备或者作为包含至少2种，例如5-1000种式(I)的化合物，并且更优选10-100种式(I)的化合物的化合物库来制备。化合物库可使用本领域技术人员已知的方法使用溶液或者固相化学，通过组合的“分裂和混合”方法或者通过多重平行合成(multiple parallel synthesis)来制备。
在式(I)的化合物的合成期间，中间体化合物中的不稳定官能团如羟基、羧基和氨基可被保护。保护基可以在合成式(I)的化合物的任何阶段除去，或者可以存在于最终的式(I)的化合物上。关于可保护各种不稳定官能团的方法以及裂解所得被保护的衍生物的方法的全面论述在例如Protective Groups in Organic Chemistry，T.W.Greene及P.G.M.Wuts，(1991)，Wiley-Interscience，New York，第2版中给出。
如上文定义的任何新的中间体可被用于合成式(I)的化合物，也因此包括在本发明的范围内。例如，式12的化合物：

或其盐或保护的衍生物，其中基团Z、A1、A2、B、R11、R12、d、e、k、x和y如上对于式(I)的化合物所定义的。
对于式12的化合物：
i)当B代表乙烯基；A1和A2各自代表N；d、e、x和y各自代表2；R11代表H；k代表0；则适当地，Z不代表：

ii)当B代表亚甲基；A1和A2代表N；d和e各自代表2；x代表1且y代表3，或者x代表2且y代表2；R11代表H；k代表0；则适当地，Z不代表2-甲氧基苯基。
iii)当B代表亚甲基；A1和A2代表N；d和e各自代表2；x代表1且y代表3，或者x代表2且y代表2；R11代表H；k代表0；则适当地，Z不代表1H-吲哚-4-基。
如上文所示，式(I)的化合物用作GPR119激动剂，例如用于治疗和/或预防肥胖和糖尿病。对于这样的应用，式(I)的化合物会通常以药物组合物的形式给药。
本发明还提供了式(I)的化合物或其药学可接受的盐，其用作药物。
本发明还提供了包含式(I)的化合物与药学可接受的载体的药物组合物。
优选地，所述组合物由药学可接受的载体和无毒的治疗有效量的式(I)的化合物或其药学可接受的盐组成。
此外，本发明还提供了药物组合物，其通过调节GPR119治疗疾病，例如通过调节过饱导致预防性地或治疗性地治疗肥胖，或用于治疗糖尿病，所述药物组合物包含药学可接受的载体和无毒的治疗有效量的式(I)的化合物或其药学可接受的盐。
所述药物组合物可以任选地包含其他治疗性成分或辅剂。所述组合物包括适于口服、直肠、局部以及肠胃外(包括皮下、肌内以及静脉内)给药的组合物，但在任何给定的情况下，最合适的途径将取决于特定的主体以及正被给药的活性成分所用于治疗的病症的性质和严重性。所述药物组合物可方便地采用单位剂量的形式并通过药学领域熟知的任一方法制备。
实际上，可以依照常规药物混合技术将式(I)的化合物或其药学可接受的盐作为活性成分与药物载体充分混合。根据给药(如口服或肠胃外(包括静脉内))所需的制剂形式不同，该载体可以采取多种不同的形式。
因此，所述药物组合物可以作为适于口服给药的离散单位呈现，例如各自含有预定量的活性成分的胶囊剂、扁囊剂或片剂。此外，所述组合物可作为散剂、颗粒剂、溶液剂、含水液体中的混悬剂、非水液体、水包油型乳剂或者油包水型液体乳剂呈现。除了上面列出的常见剂型以外，式(I)的化合物或其药学可接受的盐还可通过控释方式和/或递送装置给药。所述组合物可通过任何药学方法制备。通常，这样的方法包括将活性成分与作为一种或多种必需成分的载体相接触的步骤。通常，所述组合物通过将活性成分与液体载体或分散良好的固体载体或其两者均匀、充分地混合来制备。之后可以将该产品便利地制成期望呈现的形式。
式(I)的化合物或其药学可接受的盐还可与一种或多种其他治疗活性化合物一同被包含在药物组合物中。
所采用的药物载体可以是例如固体、液体或气体。固体载体的实例包括乳糖、石膏粉、蔗糖、滑石、明胶、琼脂、果胶、阿拉伯胶、硬脂酸镁以及硬脂酸。液体载体的实例为糖浆、花生油、橄榄油和水。气体载体的实例包括二氧化碳和氮气。
在制备用于口服剂型的组合物中，可以使用任何便利的药物介质。例如水、二醇、油、醇、调味剂、防腐剂、着色剂等可用于形成口服液体制剂例如混悬剂、酏剂以及溶液剂；而载体如淀粉、糖、微晶纤维素、稀释剂、粒化剂、润滑剂、粘合剂、崩解剂等可用于形成口服固体制剂例如散剂、胶囊剂和片剂。当使用固体药物载体时，由于它们便于给药，因此片剂和胶囊剂为优选的口服剂量单位。任选地，片剂可通过标准的含水或无水技术进行包衣。
含有本发明的组合物的片剂可以任选地与一种或多种助剂或辅剂通过压制或模塑来制备。压制片剂可以在适当的机器中通过压制任选地与粘合剂、润滑剂、惰性稀释剂、表面活性剂或分散剂混合的自由流动形式如粉末或颗粒形式的活性成分来制备。模塑片剂可以通过在适当的机器中，将经惰性液体稀释剂湿润的粉末状化合物的混合物进行模塑制得。各种片剂优选地含有约0.05mg至约5g的活性成分，且各种扁囊剂或胶囊剂优选含有约0.05mg至约5g的活性成分。
例如，旨在向人口服给药的制剂可以含有约0.5mg至约5g的活性剂，所述活性剂与占组合物总量的约5％至约95％不等的适当且方便量的载体材料混合。单位剂量形式通常会含有约1mg至约2g的活性成分，典型地为25mg、50mg，、100mg、200mg、300mg、400mg、500mg、600mg、800mg或1000mg。
适于肠胃外给药的本发明的药物组合物可以制备为活性化合物在水中的溶液剂或混悬剂的形式。可包含适当的表面活性剂，例如：羟丙基纤维素。也可以在甘油、液体聚乙二醇及其在油中的混合物中制备分散体。此外，可以包含防腐剂以防止微生物的有害生长。
适于注射应用的本发明的药物组合物包括无菌水溶液或分散体。此外，所述组合物可以为用于临时制备这样的无菌可注射溶液或分散体的无菌粉末的形式。在所有情况下，最终的可注射形式必需是无菌的并且必需是有效的便于注射的流体。所述药物组合物在生产和储存条件下必须是稳定的；因此，优选地应该在抗微生物如细菌和真菌的污染作用下保存。所述载体可为含有例如水、乙醇、多元醇(如：甘油、丙二醇和液体聚乙二醇)、植物油及其适当的混合物的溶剂或者分散介质。
本发明的药物组合物可以为适于局部使用的形式，例如：气雾剂、乳膏剂、软膏剂、洗剂、撒粉等。此外，所述组合物可为适用于经皮装置的形式。这些制剂可使用式(I)的化合物或其药学可接受的盐通过常规加工方法制备。例如：乳膏剂或软膏剂通过混合亲水材料和水以及约5重量％至约10重量％的化合物以产生具有所需稠度的乳膏剂或软膏剂来制备。
本发明的药物组合物可以采用其中载体为固体的适于直肠给药的形式。优选所述混合物形成单位剂量的栓剂。适当的载体包括可可脂以及通常用于本领域的其他材料。可方便地通过首先将该组合物与软化或融化的载体混合，之后冷却并在模子中成型来形成栓剂。
除了上述载体成分外，如果合适，上述药物制剂可包含一种或多种其他载体成分，例如：稀释剂、缓冲剂、调味剂、粘合剂、表面活性剂、增稠剂、润滑剂、防腐剂(包括抗氧化剂)等。此外，还可以包含其他辅剂以使该制剂与目标接受者的血液等渗。含有式(I)的化合物或其药学可接受的盐的组合物也可以制备成散剂或液体浓缩剂的形式。
通常，近似每天0.01mg/kg至约150mg/kg体重的剂量水平可用于治疗上述病症，或可选地每名患者每天约0.5mg至约7g。例如：通过以每天每公斤体重约0.01至50mg，或者可选地每名患者每天约0.5mg至约3.5g的化合物给药可以有效治疗肥胖。
然而，应理解，对于任何特定患者的具体剂量水平将取决于许多因素，包括：年龄、体重、一般健康、性别、饮食、给药时间、给药途径、排泄率、药物组合以及经历治疗的特定疾病的严重性。
式(I)的化合物可用于治疗其中GPR119起作用的疾病或病症。
因此，本发明还提供治疗其中GPR119起作用的疾病或病症的方法，其包括向有此需要的受试者给药有效量的式(I)的化合物或其药学可接受的盐的步骤。GPR119在其中起作用的疾病或病症包括肥胖和糖尿病。在本申请的上下文中，肥胖的治疗意在涵盖例如通过降低食欲和体重、维持体重的减轻及防止反弹来治疗诸如肥胖以及与食物摄取过多相关的其他饮食失调的疾病或病症以及糖尿病(包括1型和2型糖尿病、葡萄糖耐量降低、胰岛素抵抗以及糖尿病并发症例如神经病、肾病、视网膜病、白内障、心血管并发症以及脂血异常(dyslipidaemia))。以及治疗对摄取的脂肪的敏感性异常从而导致功能性消化不良的患者。本发明的化合物也可用于治疗代谢疾病，例如：代谢综合征(X综合征)、葡萄糖耐量降低、高脂血症、高甘油三酯血症、高胆固醇血症、低HDL水平和高血压。
本发明的化合物可提供与用于治疗上述病症的经由不同机理起作用的化合物相比的优点，因为它们可提供β细胞保护、增加的cAMP和胰岛素分泌以及缓慢的胃排空。
本发明还提供调节过饱的方法，其包括向有此需要的个体给药有效量的式(I)的化合物或其药学可接受的盐的步骤。
本发明还提供治疗肥胖的方法，其包括向有此需要的个体给药有效量的式(I)的化合物或其药学可接受的盐的步骤。
本发明还提供治疗糖尿病(包括1型和2型糖尿病，特别是2型糖尿病)的方法，其包括向有此需要的患者给药有效量的式(I)的化合物或其药学可接受的盐的步骤。
本发明还提供治疗代谢综合征(X综合征)、葡萄糖耐量降低、高脂血症、高甘油三酯血症、高胆固醇血症、低HDL水平或高血压的方法，其包括向有此需要的患者给药有效量的式(I)的化合物或其药学可接受的盐的步骤。
本发明还提供用于治疗上述定义的病症的式(I)的化合物或其药学可接受的盐。
本发明还提供式(I)的化合物或其药学可接受的盐在制备用于治疗上述定义的病症的药物中的应用。
在本发明的方法中，术语“治疗”包括治疗性和预防性治疗两者。
式(I)的化合物或其药学可接受的盐可以单独给药或者与一种或多种其他治疗活性化合物联合给药。所述其他治疗活性化合物可以用于治疗与式(I)的化合物所治疗的相同或不同的疾病或病症。所述治疗活性化合物可以同时给药、连续给药或者单独给药。
式(I)的化合物可与用于治疗肥胖和/或糖尿病的其他活性化合物一起给药，例如：胰岛素和胰岛素类似物、胃脂肪酶抑制剂、胰脂肪酶抑制剂、磺酰脲及类似物、双胍类、α2激动剂、格列酮类、PPAR-γ激动剂、混合的PPAR-α/γ激动剂、RXR激动剂、脂肪酸氧化抑制剂、α-葡糖苷酶抑制剂、二肽基肽酶IV抑制剂、GLP-1激动剂如GLP-1类似物和模拟物、β-激动剂、磷酸二酯酶抑制剂、降脂药、糖原磷酸化酶抑制剂、减肥药如胰脂肪酶抑制剂、MCH-1拮抗剂和CB-1拮抗剂(或反相激动剂)、淀粉状蛋白毒素(amylin)拮抗剂、脂氧合酶抑制剂、生长抑素(somostatin)类似物、葡糖激酶活化剂、胰高血糖素拮抗剂、胰岛素信号传导激动剂、PTP1B抑制剂、糖异生抑制剂、antilypolitic剂、GSK抑制剂、甘丙肽(galanin)受体激动剂、厌食药、CCK受体激动剂、瘦素、血清素能/多巴胺能减肥药、重摄取抑制剂如西布曲明、CRF拮抗剂、CRF结合蛋白、拟甲状腺素化合物、醛糖还原酶抑制剂、糖皮质激素受体拮抗剂、NHE-1抑制剂或山梨醇脱氢酶抑制剂。
包括式(I)的化合物或其药学可接受的盐以及至少一种其他减肥药的给药的联合治疗代表本发明的另一方面。
本发明还提供治疗哺乳动物如人中的肥胖的方法，该方法包括向有此需要的哺乳动物给药有效量的式(I)的化合物或其药学可接受的盐以及另一种减肥药。
本发明还提供式(I)的化合物或其药学可接受的盐以及另一种减肥药用于治疗肥胖的用途。
本发明还提供式(I)的化合物或其药学可接受的盐在制备用于与另一种减肥药联合使用以治疗肥胖的药物中的用途。
式(I)的化合物或其药学可接受的盐以及其他减肥药可以共同给药(co-administration)、连续给药或者单独给药。
共同给药包括给药包含式(I)的化合物或其药学可接受的盐和其他减肥药的制剂，或者同时或单独给药各药物的不同制剂。当式(I)的化合物或其药学可接受的盐以及其他减肥药的药理学特性允许时，两种药物共同给药可能是优选的。
本发明还提供式(I)的化合物或其药学可接受的盐与另一种减肥药在制备用于治疗肥胖的药物中的用途。
本发明还提供包含式(I)的化合物或其药学可接受的盐与另一种减肥药以及药学可接受的载体的药物组合物。本发明还涵盖这样的组合物在上述方法中的应用。
GPR119激动剂与中枢作用的减肥药组合具有特别用途。
根据本发明的该方面用于组合治疗的其他减肥药优选为CB-1调节剂，如：CB-1拮抗剂或反向激动剂。CB-1调节剂的实例包括SR141716(利莫那班)和SLV-319((4S)-(-)-3-(4-氯苯基)-N-甲基-N-[(4-氯苯基)磺酰基]-4-苯基-4，5-二氢-1H-吡唑-1-甲酰胺)，以及在EP576357、EP656354、WO03/018060、WO 03/020217、WO 03/020314、WO 03/026647、WO 03/026648、WO 03/027076、WO 03/040105、WO 03/051850、WO 03/051851、WO03/053431、WO 03/063781、WO 03/075660、WO 03/077847、WO 03/078413、WO 03/082190、WO 03/082191、WO 03/082833、WO 03/084930、WO03/084943、WO 03/086288、WO 03/087037、WO 03/088968、WO 04/012671、WO 04/013120、WO 04/026301、WO 04/029204、WO 04/034968、WO04/035566、WO 04/037823、WO 04/052864、WO 04/058145、WO04/058255、WO 04/060870、WO 04/060888、WO 04/069837、WO04/069837、WO 04/072076、WO 04/072077、WO 04/078261和WO04/108728以及其中所公开的文献中公开的那些化合物。
显示GPR119在其中起作用的其他疾病或病症包括WO 00/50562和US 6,468,756中描述的那些，例如：心血管疾病、高血压、呼吸疾病、妊娠异常、胃肠道病症、免疫病症、肌骨骼病症、抑郁、恐惧症、焦虑症、情绪障碍和阿尔茨海默病。
包括但不限于本说明中所引用的专利和专利申请的所有出版物都引入本文作为参考，正如分别具体地说明各单独的出版物都全文引入本文作为参考一样。
本发明现在将参考下列的实施例来描述，这些实施例是为说明性的目的而不该解释为对本发明范围的限制。
实施例
材料与方法
除非另有说明，在SiO2(40-63目)上进行柱色谱法。LCMS数据如下获得：Atlantis 3μ C18柱(3.0×20.0mm，流速＝0.85mL/min)，用以含有0.1％HCO2H的H2O-CH3CN溶液洗脱6分钟，在220nm进行UV检测。梯度信息：0.0-0.3分钟保持在100％H2O；0.3-4.25分钟：梯度升至10％H2O-90％CH3CN；4.25-4.4分钟：梯度升至100％CH3CN；4.4-4.9分钟：保持在100％CH3CN；4.9-6.0分钟：回复至100％H2O。使用电喷雾离子源以正(ESI+)或负(ESI-)离子模式获得质谱。制备HPLC纯化采用Lunar 10μODS2(250×21.2mm；流速＝20mL/min)进行，用溶剂A(0.05％TFA，10％MeCN，90％水)和溶剂B(0.05％TFA，90％MeCN，10％水)洗脱，在215nm进行UV检测。梯度信息：0.0-0.2min：90％A，10％B；0.2-10.0min：梯度升至10％A，90％B；10.0-15.0min：10％A，90％B；15.0-16.0min：回复至90％A，10％B。
缩写与简称：Ac：乙酰基；tBDMS：叔丁基二甲基甲硅烷基；Bn：苄基；t-Bu：叔丁基；Bz：苄氧基；18C6：[18]冠-6；(Boc)2O：二羧酸二叔丁酯；DABCO：双环(2，2，2)-1，4-二氮杂辛烷；DAST：二乙基铵硫三氟化物(diethylammoniumsulfur trifloride)；DBU：1，8-二氮杂二环[5.4.0]十一-7-烯；DIPEA：N，N-二异丙基乙胺；DMAP：4-二甲氨基吡啶；DMF：N，N-二甲基甲酰胺；DMSO：二甲亚砜；EDCI：1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐；Et：乙基；i-Bu.异丁基；IH：异己烷；i-Pr：异丙基；LiHMDS：二(三甲基甲硅烷基)氨基锂；mCPBA：3-氯过氧基苯甲酸；Me：甲基；Ms：甲磺酰基；Ph：苯基；n-Pr：正丙基；RP-HPLC：反相高效液相色谱法；rt：室温；RT：保留时间；TFA：三氟乙酸；THF：四氢呋喃；TMS：三甲基硅烷基。4-羟基-4-(3-羟基丙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯：Cooper L.C.等人，Bioorg.Med.Chem.Lett.，2002，12，1759-1763；4-(2-溴乙酰基)哌啶-1-羧酸叔丁酯：WO2004/041777；4-乙氧基羰基亚甲基哌啶-1-羧酸叔丁酯：Hetrocycles，2001，54，2，747-755；1-(2-溴乙基)-4-甲磺酰基苯：WO199843956。
实施例1：4-[4-(4-甲磺酰基苯基)哌嗪-1-基甲基]哌啶-1-羧酸叔丁酯

向在DCM(3mL)中的1-(4-甲磺酰基苯基)哌嗪(0.41mmol)和4-甲酰基哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.2mmol)的溶液中加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.53mmol)。将得到的悬浮液室温搅拌17小时。加入聚合物支载的异氰酸酯清除树脂(MP-NCO)(0.29g，1.44mmol/g)，继续振摇直至LCMS分析显示原料胺完全消耗。该混合物用更多的DCM稀释，与水振摇，采用疏水性玻璃漏斗(frit)分离有机层。使用SCX柱经由离子交换纯化该粗制混合物，以获得标题化合物。δH(400MHz，CHCl3)1.14(2H，m)，1.50(9H，s)，1.70(1H，m)，1.79(2H，m)，2.26(2H，d)，2.58(4H，t)，2.74(2H，m)，3.04(3H，s)，3.38(4H，t)，4.14(2H，m)，6.96(2H，d)，7.80(2H，d)。
通过类似的方法由合适的醛和哌嗪合成下文表1中所示化合物：
表1


实施例12：4-{2-[4-(5-氟-2-甲磺酰基苯基)哌嗪-1-基]乙基}哌啶-1-羧酸叔丁酯

将2，4-二氟苯基甲基砜(0.10g，0.52mmol)和哌嗪(45mg，0.52mmol)在叔丁醇(2mL)中的溶液室温搅拌72小时。将反应混合物用甲醇稀释并通过离子交换色谱法(SCX)纯化获得1-(5-氟-2-甲磺酰基苯基)哌嗪。向在DCM(2mL)中的1-(5-氟-2-甲磺酰基苯基)哌嗪(75mg，0.25mmol)和4-(2-氧代乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(157mg，0.75mmol)的溶液中加入三乙酰氧基硼氢化钠(52mg，0.38mmol)并将混合物室温搅拌7天。用DCM稀释该反应混合物，用水洗涤，通过闪式色谱法纯化，用乙酸乙酯洗脱以获得标题化合物：RT＝2.64min；m/z(ES+)＝470.14[M+H]+。
实施例13：4-{2-[4-(4-羧基苯基)哌嗪-1-基]乙基}哌啶-1-羧酸叔丁酯

向在MeOH(40mL)中的4-{2-[4-(4-乙氧基羰基苯基)哌嗪-1-基]乙基}哌啶-1-羧酸叔丁酯(3.73g，8.36mmol)溶液中加入在水中的1M NaOH(16.73mL，16.73mmol)。将反应在60℃下加热3小时，将混合物冷却至室温并用Et2O萃取。用1M HCl溶液中和水相并用EtOAc萃取，干燥(MgSO4)萃取物，在真空下除去溶剂以获得标题化合物：RT＝2.49min；m/z(ES+)＝418.18[M+H]+。
实施例14：4-{2-[4-(4-氨基甲酰基苯基)哌嗪-1-基]乙基}哌啶-1-羧酸叔丁酯

向4-{2-[4-(4-羧基苯基)哌嗪-1-基]乙基}哌啶-1-羧酸叔丁酯(30mg，70μmol)、在二噁烷(0.29mL，140μmol)中的0.5M氨和在二甲基乙酰胺(0.3mL)中的Et3N(15μL，110μmol)的溶液中加入在二甲基乙酰胺(0.3mL)中的HBTU(41mg，110μmol)，将反应搅拌20h。将该混合物用EtOAc稀释、用饱和Na2CO3溶液洗涤、干燥(MgSO4)，并在真空下除去溶剂。在OPTIX10上通过色谱法纯化混合物，溶剂梯度由1∶98∶2至1∶89∶10 Et3N∶DCM∶MeOH。用DCM吸收得到的混合物，用1M NaOH溶液洗涤、干燥(MgSO4)，并在真空下除去溶剂获得标题化合物：RT＝2.49min；m/z(ES+)＝417.32[M+H]+。
通过类似方法由4-{2-[4-(4-羧基苯基)哌嗪-1-基]乙基}哌啶-1-羧酸叔丁酯与合适的胺合成下文表2中所示的化合物：
表2



中间体1：2-[4-(4-氨基苯基)哌嗪-1-基]乙基}哌啶-1-羧酸叔丁酯

将无水MeOH(5mL)中的4-(2-氧代乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(0.50g，2.20mmol)和1-(4-硝基苯基)哌嗪(0.35g，1.70mmol)的溶液室温搅拌71小时，接着加入NaBH4(0.13g，3.39mmol)并将反应再搅拌3小时。在真空下除去溶剂，将得到的残余物在EtOAc和饱和NaHCO3溶液中分配。水相用EtOAc萃取两次，合并有机萃取物、干燥(MgSO4)并吸附至SiO2上。吸附的样品通过闪式色谱法纯化，用EtOAc洗脱获得4-{2-[4-(4-硝基苯基)哌嗪-1-基]乙基}环己烷羧酸叔丁酯(0.54g，1.30mmol)，用EtOH(25mL)吸收该化合物，加入10％钯炭，该混合物在室温下氢气中搅拌20小时。反应混合物通过硅藻土过滤，在真空下除去溶剂获得标题化合物：δH(400MHz，CHCl3)1.17(2H，m)，1.48(9H，s)，1.50(1H，m)，1.69(2H，d)，2.45(2H，m)，2.62(4H，br s)，2.71(2H，m)，3.09(4H，m)，3.44(2H，br s)，4.09(2H，br s)，6.68(2H，d)，6.84(2H，d)。
实施例26：4-{2-[4-(4-丙酰基氨基苯基)哌嗪-1-基]乙基}环己烷羧酸叔丁酯

向在DCM(3mL)中的4-{2-[4-(4-氨基苯基)哌嗪-1-基]乙基}环己烷羧酸叔丁酯(40mg，0.10mmol)和Et3N(32μL，0.23mmol)的溶液中加入丙酰氯(9.9μL，0.11mmol)，将反应室温搅拌72小时。用饱和NaHCO3溶液洗涤反应混合物，吸附在SiO2上并在OPTIX 10上通过色谱法纯化，用5∶95MeOH∶DCM洗脱获得标题化合物：RT＝2.44min；m/z(ES+)＝445.39[M+H]+。
通过类似的方法由4-{2-[4-(4-氨基苯基)哌嗪-1-基]乙基}环己烷羧酸叔丁酯与合适的酰基氯合成下文表3中所示的化合物：
表3

实施例32：4-[2-(4-{4-[2-(2-甲氧基氧基乙基)乙酰氨基]苯基}哌嗪-1-基)乙基]哌啶-1-羧酸叔丁酯

在DMF(3mL)中的4-{2-[4-(4-氨基苯基)哌嗪-1-基]乙基}环己烷羧酸叔丁酯(40mg，0.10mmol)、(2-甲氧基氧基乙基)乙酸(14mg，0.10mmol)、DIPEA(44mg，0.34mmol)和HOBT.H2O(17.4mg，0.11mmol)的溶液搅拌10分钟，加入EDCI(24mg，0.12mmol)，接着将混合物搅拌24h。真空除去溶剂，将得到的残余物在饱和NaHCO3溶液和DCM间分配。收集有机相并吸附至SiO2上，接着在OPTIX 10上通过色谱法纯化，用5∶95 MeOH∶DCM洗脱得到标题化合物：RT＝2.59min；m/z(ES+)＝505.41[M+H]+。
通过类似的方法由4-{2-[4-(4-氨基苯基)哌嗪-1-基]乙基}环己烷羧酸叔丁酯与合适的羧酸合成下文表4中所示的化合物：
表4

中间体2：4-(2-{4-[4-(N-羟基甲脒基)苯基]哌嗪-1-基}乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯

向EtOH(20mL)中的4-{2-[4-(4-氰基苯基)哌嗪-1-基]乙基}哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.23g，3.08mmol)溶液中加入K2CO3(0.85g，6.16mmol)，接着加入在水中的盐酸羟胺(0.43g，6.20mmol)溶液。将反应在85℃下加热24h，该混合物接着在水和EtOAc间分配。水相用EtOAc再萃取，合并有机萃取物，用盐水洗涤、干燥(MgSO4)并吸附至SiO2上。吸附的样品通过闪式色谱法纯化，用10∶90 MeOH∶DCM洗脱获得标题化合物：δH(400MHz，CHCl3)1.16(2H，m)，1.48(9H，s)，1.50(1H，m)，1.70(2H，d)，2.46(2H，m)，2.61(4H，br s)，2.71(2H，m)，3.28(4H，m)，4.82(1H，s)，5.32(2H，s)，6.92(2H，d)，7.54(2H，d)。
实施例37：4-(2-{4-[4-(5-甲基[1，2，4]噁二唑-3-基)苯基]哌嗪-1-基}乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯

向在DMF(2mL)中的4-(2-{4-[4-(N-羟基甲脒基)苯基]哌嗪-1-基}乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(26mg，60μmol)、AcOH(3μL，55μmol)和HOBT.H2O(9.2mg，60μmol)的溶液中加入EDCI(12.6mg，66μmol)，将该混合物室温搅拌10分钟。在真空下除去溶剂，将得到的残余物在饱和NaHCO3溶液和EtOAc间分配。水相用EtOAc再萃取，合并有机萃取物，用盐水洗涤、干燥(MgSO4)，在真空下除去溶剂。残余物用甲苯吸收并回流6小时。将反应混合物吸附至SiO2上并通过闪式色谱法纯化，用3∶97 MeOH∶DCM洗脱以获得标题化合物：RT＝2.65min；m/z(ES+)＝456.33[M+H]+。
通过类似的方法由4-(2-{4-[4-(N-羟基甲脒基)苯基]哌嗪-1-基}乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯与合适的羧酸合成下文表5中所示的化合物：
表5

实施例40：4-(2-{4-[4-(3-异丙基[1，2，4]噁二唑-5-基)苯基]哌嗪-1-基}乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯

采用用于合成4-(2-{4-[4-(5-甲基[1，2，4]噁二唑-3-基)苯基]哌嗪-1-基}乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯的相同方法由4-{2-[4-(4-羧基苯基)哌嗪-1-基]乙基}哌啶-1-羧酸叔丁酯与N-羟基异丁酰脒制备标题化合物：RT＝3.01min；m/z(ES+)＝484.40[M+H]+。
实施例41：4-(2-{4-[4-(3-异丙基[1，2，4]噁二唑-5-基)苯基]哌嗪-1-基}乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯

在EtOH(10mL)中的4-{2-[4-(4-乙氧基羰基苯基)哌嗪-1-基]乙基}哌啶-1-羧酸叔丁酯(316mg，0.71mmol)和水合肼(0.44mL，7.10mmol)的溶液回流88小时。蒸发除去溶剂并用EtOAc研磨得到的固体，获得4-{2-[4-(4-肼基羰基苯基)哌嗪-1-基]乙基}哌啶-1-羧酸叔丁酯：RT＝2.31min；m/z(ES+)＝432.34[M+H]+。向THF(2mL)中的4-{2-[4-(4-肼基羰基苯基)哌嗪-1-基]乙基}哌啶-1-羧酸叔丁酯(16mg，37μmol)和DIPEA(14.2μL，82μmol)的溶液中加入丙酰氯(4μL，41μmol)并将反应室温搅拌20小时。加入另一批丙酰氯(4μL，41μmol)，将混合物继续搅拌24小时。将反应混合物在饱和的NaHCO3溶液和EtOAc间分配。水相用EtOAc再萃取，合并有机萃取物，用盐水洗涤、干燥(MgSO4)并吸附至SiO2上。吸附的样品通过闪式色谱法纯化，用5∶95 MeOH∶DCM洗脱获得4-(2-{4-[4-(N′-乙酰基肼基羰基)苯基]哌嗪-1-基}乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯。向在DCM(3mL)中的4-(2-{4-[4-(N′-乙酰基肼基羰基)苯基]哌嗪-1-基}乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(17mg，35μmol)和DIPEA(18μL，105μmol)的溶液中加入POCl3(4μL，38μmol)，并将该混合物搅拌5小时。反应混合物用饱和NaHCO3溶液终止反应。用DCM稀释该混合物并收集有机相。水相用DCM再萃取，合并有机萃取物，干燥(MgSO4)并吸附至SiO2上。吸附的样品通过闪式色谱法纯化，用5∶95MeOH∶DCM洗脱获得标题化合物：RT＝2.72min；m/z(ES+)＝470.25[M+H]+。
实施例42：4-[1-(4-甲磺酰基苯基)哌啶-4-基氧基甲基]哌啶-1-羧酸叔丁酯

在0℃，氩气下，向无水THF(3mL)中的1-(4-甲磺酰基苯基)哌啶-4-醇(0.10g，0.39mmol)和15-冠-5(87mg，0.39mmol)的溶液中加入分散在矿物油(16mg，0.39mmol)中的60％NaH，将该混合物搅拌30分钟。向反应中加入4-甲磺酰氧基甲基哌啶-1-羧酸叔丁酯(0.23g，0.78mmol)，该混合物通过微波辐射加热至100℃保持30分钟。用饱和NH4Cl终止反应并用EtOAc萃取。干燥(MgSO4)有机萃取物，在真空下除去溶剂，由此获得残余物通过闪式色谱法纯化，用1∶1 EtOAc∶己烷洗脱以获得标题化合物：RT＝3.81min；m/z(ES+)＝453.31[M+H]+。
实施例43：4-{[1-(4-甲磺酰基苯基)哌啶-4-基氨基]甲基}哌啶-1-羧酸叔丁酯

在10℃向DCM(25mL)中的1-(4-甲磺酰基苯基)哌啶-4-醇(0.89g，3.50mmol)溶液中加入戴斯-马丁氧化剂(Dess-Martin periodinane)(1.60g，3.77mmol)并将反应搅拌2小时。将反应混合物用DCM稀释，用1M NaOH溶液、盐水依次洗涤、干燥(MgSO4)，真空除去溶剂获得4-氧基哌啶-1-羧酸叔丁酯。在DCM(30mL)中的4-氧基哌啶-1-羧酸叔丁酯(0.51g，2.40mmol)和4-氨基甲基哌啶-1-羧酸叔丁酯(0.43g，2.01mmol)的混合物搅拌30分钟，接着加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.51g，2.41mmol)，混合物搅拌48小时。反应物用DCM稀释，接着用饱和NaHCO3水溶液和盐水依次洗涤、干燥(MgSO4)，在真空下除去溶剂，获得的残余物通过闪式色谱法纯化，用10∶90 MeOH∶DCM洗脱获得标题化合物：RT＝2.49min；m/z(ES+)＝452.25[M+H]+。
实施例44：4-{2-[4-(4-氨磺酰基苯基)哌嗪-1-基]乙基}哌啶-1-羧酸叔丁酯盐酸盐

在水(12mL)中的4-氟苯磺酰胺(1.00g，5.71mmol)和哌嗪(2.46g，28.54mmol)的混合物在100℃下加热20小时。收集得到的沉淀并用水和甲苯洗涤获得4-哌嗪-1-基苯磺酰胺：RT＝0.49min；m/z(ES+)＝242.13[M+H]+。在DCM(50mL)和THF(7mL)中的4-哌嗪-1-基苯磺酰胺(0.46g，1.89mmol)和4-(2-氧代乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(0.43g，1.89mmol)溶液与分子筛(0.90g)在氩气下搅拌1小时。加入乙酰氧基硼氢化钠(0.52g，2.46mmol)，将反应混合物继续搅拌2.5小时。该反应混合物用饱和NaHCO3溶液终止反应并用EtOAc萃取。将有机萃取物用盐水洗涤、干燥(MgSO4)并在真空下除去溶剂。得到的固体通过重结晶(EtOAc)纯化，接着溶于THF和二氧杂环乙烷中的1M HCl(0.95当量)中，在真空下除去溶剂，得到的固体用Et2O洗涤获得标题化合物：RT＝2.51min；m/z(ES+)＝453.33[M+H]+。
实施例45：4-{2-[4-(3-氟-4-氨磺酰基苯基)哌嗪-1-基]乙基}哌啶-1-羧酸叔丁酯

采用与用于合成4-{2-[4-(4-氨磺酰基苯基)哌嗪-1-基]乙基}哌啶-1-羧酸叔丁酯相同的方法。通过制备HPLC进行纯化获得标题化合物：RT＝2.59min；m/z(ES+)＝471.34[M+H]+。
实施例46：4-{2-[4-(4-(吡咯烷-1-磺酰基)苯基)哌嗪-1-基]乙基}哌啶-1-羧酸叔丁酯

向在DCM(2.5mL)中的吡咯烷(95μL，1.13mmol)和Et3N(158μL，1.13mmol)溶液中加入4-氟苯磺酰氯(200mg，1.03mmol)并将反应室温搅拌2小时。将反应混合物用DCM稀释，接着用水和盐水洗涤，干燥(MgSO4)，在真空下除去溶剂获得1-(4-氟苯磺酰基)吡咯烷：RT＝3.06min；m/z(ES+)＝230.13[M+H]+。在水(3mL)中的哌嗪(47mg，0.55mmol)和1-(4-氟苯磺酰基)吡咯烷(25mg，0.11mg)的混合物在微波中于150℃加热30min。通过过滤收集得到的固体，用水和甲苯洗涤获得1-[4-(吡咯烷-1-磺酰基)苯基]哌嗪：RT＝2.01min；m/z(ES+)＝296.15[M+H]+。在DCM(5mL)中的1-[4-(吡咯烷-1-磺酰基)苯基]哌嗪(24mg，80μmol)和4-(2-氧代乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(18mg，80μmol)的溶液与分子筛(50mg)在室温下氩气中搅拌1小时。加入乙酰氧基硼氢化钠(22mg，104μmol)，将反应混合物继续搅拌2.5小时。该反应混合物被用饱和NaHCO3溶液终止反应，并用EtOAc萃取。有机萃取物用盐水洗涤、干燥(MgSO4)，在真空下除去溶剂。得到的固体通过闪式色谱法纯化，用5∶95 MeOH∶DCM洗脱获得标题化合物：RT＝2.69min；m/z(ES+)＝507.33[M+H]+。
通过类似的方法由4-氟苯磺酰氯与合适的胺合成下文表6中所示的化合物：
表6

中间体3：1-(4-甲基亚磺酰基苯基)哌嗪

向在DCM(10mL)中的4-氟硫代苯甲醚(2.0g，14.1mmol)溶液中加入60％mCPBA(4.06g，14.08mmol)，该混合物室温搅拌过夜。反应混合物用2M NaOH溶液洗涤、干燥(MgSO4)并通过闪式色谱法纯化，用40∶60EtOAc∶己烷洗脱得到的1-氟-4-甲基亚磺酰基苯。在水(5mL)中的1-氟-4-甲烷亚磺酰基苯(0.75g，4.75mmol)和哌嗪(2.04g，23.7mmol)的混合物在100℃下加热20小时。将反应混合物吸附至SiO2上并通过闪式色谱法纯化，用1∶3∶96 NH3∶MeOH∶DCM洗脱获得的标题化合物：RT＝1.30min；m/z(ES+)＝225.10[M+H]+。
实施例51：4-{2-[4-(3-氟-4-甲磺酰基苯基)哌嗪-1-基]乙基}哌啶-1-羧酸叔丁酯

在无水MeOH(2mL)中的1-(4-甲基亚磺酰基苯基)哌嗪(46mg，0.22mmol)和4-(2-氧代乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(50mg，0.22mmol)的溶液与冰醋酸(1滴)在室温氩气下搅拌20小时。向混合物中加入NaBH4(17mg，0.44mmol)，反应继续搅拌3小时。该反应用水终止并用DCM萃取。收集有机相并通过闪式色谱法纯化，用1∶4∶95 NH3∶MeOH∶DCM洗脱获得标题化合物：RT＝2.54min；m/z(ES+)＝436.33[M+H]+。
中间体4：1-(3-氟-4-甲硫基苯基)哌嗪

在氯苯(3mL)中的二(2-氯乙基)胺(0.57g，3.18mmol)和3-氟-4-甲硫基苯胺(0.50g，3.18mmol)的混合物在130℃下加热48小时。反应混合物在DCM和饱的Na2HCO3溶液间分配，接着用DCM再萃取水相。合并有机萃取物，干燥(MgSO4)，在真空下除去溶剂相。该混合物通过闪式色谱法纯化，用10∶90 MeOH∶DCM洗脱获得标题化合物：RT＝2.12min；m/z(ES+)＝227.07[M+H]+。
实施例52：4-{2-[4-(3-氟-4-甲磺酰基苯基)哌嗪-1-基]乙基}哌啶-1-羧酸叔丁酯

在无水MeOH(5mL)中的1-(3-氟-4-甲硫基苯基)哌嗪(183mg，0.81mmol)和4-(2-氧代乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(368mg，1.62mmol)的溶液与冰醋酸(1滴)在室温氩气下搅拌20小时。向混合物中加入NaBH4(92mg，2.43mmol)，反应继续搅拌3小时。该反应用饱和Na2HCO3水溶液终止并用DCM萃取。收集有机相，用盐水洗涤、干燥(MgSO4)，在真空下除去溶剂，得到的固体通过闪式色谱法纯化，用50∶50 EtOAc∶己烷洗脱以获得4-{2-[4-(3-氟-4-甲硫基苯基)哌嗪-1-基]乙基}哌啶-1-羧酸叔丁酯：RT＝2.84min；m/z(ES+)＝438.30[M+H]+。向甲苯(1mL)中的4-{2-[4-(3-氟-4-甲硫基苯基)哌嗪-1-基]乙基}哌啶-1-羧酸叔丁酯(64mg，0.15mmol)、NaMoO4(3.5mg，15μmol)和三丁胺(3.5μL，15μmol)溶液中加入27％H2O2溶液(10μL，79mmol)，接着加入冰醋酸(47.5μL，0.80mmol)，最后加入27％H2O2溶液(27μL，211μmol)。该反应升温至60℃保持30分钟，接着用10％Na2SO3溶液终止反应，水相用1M NaOH溶液碱化至pH8。该混合物用EtOAc萃取，干燥(MgSO4)有机相，在真空下除去溶剂，得到的残余物通过闪式色谱法纯化，用EtOAc与10∶90 MeOH∶DCM依次洗脱，获得标题化合物：RT＝2.57min；m/z(ES+)＝470.35[M+H]+。
实施例53：4-{2-[4-(3-氟-4-甲磺酰基苯基)-1-氧基哌嗪-1-基]乙基}哌啶-1-羧酸叔丁酯

上文反应中制备4-{2-[4-(3-氟-4-甲磺酰基苯基)-1-氧基哌嗪-1-基]乙基}哌啶-1-羧酸叔丁酯，通过闪式色谱法纯化，用10∶90 MeOH∶DCM洗脱，获得标题化合物：RT＝2.70min；m/z(ES+)＝486.27[M+H]+。
中间体5：1-(4-乙硫基苯基)哌嗪

将氩气鼓入于EtOH(10mL)中的4-氨基苯硫酚(1.0g，8.00mmol)溶液中，持续5分钟。向反应中加入乙基碘(1.37g，8.80mmol)，接着加入NaOMe(0.43g，8.00mmol)，混合物在70℃氩气下加热18小时。在真空下除去溶剂，得到的残余物通过制备HPLC纯化获得4-乙硫基苯胺：RT＝1.71min；m/z(ES+)＝154.08[M+H]+。在氯苯(2mL)中的二(2-氯乙基)胺(0.21g，1.20mmol)和4-乙硫基苯胺(0.19g，1.14mmol)的混合物在130℃加热48小时。该反应混合物在EtOAc和2M NaOH溶液间分配，接着在真空下从有机相中除去溶剂。通过闪式色谱法纯化该混合物，用1∶3∶96 NH3∶MeOH∶DCM洗脱，获得标题化合物：RT＝2.27min；m/z(ES+)＝223.12[M+H]+。
实施例54：4-{2-[4-(4-乙磺酰基苯基)哌嗪-1-基]乙基}哌啶-1-羧酸叔丁酯

在无水MeOH(2mL)中的1-(4-乙硫基苯基)哌嗪(80mg，0.36mmol)和4-(2-氧代乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(82mg，0.36mmol)的溶液和冰醋酸(1滴)在室温氩气下搅拌20小时。向该混合物中加入NaBH4(27mg，0.72mmol)并将反应再搅拌3小时。用水终止该反应并用DCM萃取。收集有机相、干燥(MgSO4)，在真空下除去溶剂，得到的固体通过闪式色谱法纯化，用1∶2∶97 NH3∶MeOH∶DCM洗脱，获得4-{2-[4-(4-乙硫基苯基)哌嗪-1-基]乙基}哌啶-1-羧酸叔丁酯：RT＝3.14min；m/z(ES+)＝448.36[M+H]+。向甲苯(1mL)中的4-{2-[4-(4-乙硫基苯基)哌嗪-1-基]乙基}哌啶-1-羧酸叔丁酯(90mg，208μmol)、NaMoO4(5mg，20.8μmol)和三丁胺(5μL，20.8μmol)溶液中加入27％H2O2溶液(20μL，160μmol)，接着加入冰醋酸(13μL，229μmol)，最后加入27％H2O2溶液(32μL，256μmol)。10分钟后该反应用10％Na2SO3溶液终止反应，并用DCM萃取。将有机相干燥(MgSO4)并通过闪式色谱法纯化，用1∶2∶97 NH3∶MeOH∶DCM洗脱，获得标题化合物：RT＝2.61min；m/z(ES+)＝466.25[M+H]+。
中间体6：4-(4-甲硫基苯基)哌啶-1-羧酸叔丁酯

在室温下向二噁烷(10mL)中的4-(4-甲硫基苯基)哌啶盐酸盐(0.5g，2.05mmol)的溶液中加入(Boc)2O(0.47g，2.15mmol)，接着加入水(2.5mL)。将得到的混合物搅拌1小时。在真空下除去溶剂，粗制物质用EtOAc(75mL)和水(25mL)稀释。分离两相，水相再用EtOAc萃取。合并的有机相用盐水洗涤、干燥(MgSO4)，在真空下除去溶剂。通过闪式色谱法纯化粗制混合物，用10％EtOAc/己烷作为洗脱剂洗脱，获得标题化合物(0.526g，84％)：RT＝4.09min；m/z(ES+)＝293.17[(M-15)+H]+。
中间体7：4-(4-甲磺酰基苯基)哌啶-1-羧酸叔丁酯

在室温下向在DCM(10mL)中的4-(4-甲硫基苯基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(0.25g，0.813mmol)的溶液中加入mCPBA(0.383g，1.71mmol)。搅拌该溶液2.5小时。反应混合物用DCM(20mL)稀释，用饱和Na2CO3溶液洗涤、干燥(MgSO4)，在真空下除去溶剂，获得标题化合物(0.284g，100％)：RT＝3.39min；m/z(ES+)＝339.5[M+H]+。
实施例55：4-{2-[4-(4-甲磺酰基苯基)哌啶-1-基]乙基}哌啶-1-羧酸叔丁酯

用TFA(1.5mL)处理在DCM(15mL)中的4-(4-甲磺酰基苯基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(0.276g，0.813mmol)溶液，将混合物室温搅拌0.5h。加入DCM(30mL)，有机相用饱和Na2CO3溶液、盐水洗涤、干燥(MgSO4)，在真空下除去溶剂获得4-(4-甲磺酰基苯基)哌啶(0.19g，97％)。向在MeOH(5mL)中的固体(0.189g，0.79mmol)溶液中加入N-boc-哌啶基-4-乙醛(0.215g，0.95mmol)，将混合物室温搅拌20小时。将反应物冷却至0℃并用硼氢化钠(0.045g，1.18mmol)处理。反应搅拌1小时，在真空下除去溶剂。加入DCM(25mL)和水(10mL)，并分离两相。水相进一步用DCM萃取，合并的有机相用盐水洗涤、干燥(MgSO4)，在真空下除去溶剂。通过闪式色谱法纯化粗制混合物，用1％NEt3，2％MeOH/EtOAc作为洗脱剂洗脱，获得标题化合物(0.252g，79％)：RT＝2.80min；m/z(ES+)＝451.4[M+H]+。
实施例56：4-{2-[4-(4-甲硫基苯基)哌啶-1-基]乙基}哌啶-1-羧酸叔丁酯

向在MeOH(10mL)中的4-(4-甲硫基苯基)哌啶盐酸盐(0.244g，1.00mmol)溶液中加入NEt3(0.14mL，1mmol)，接着加N-boc-哌啶基-4-乙醛(0.273g，1.2mmol)。该混合物室温搅拌20小时。将反应物冷却到0℃并用硼氢化钠(0.057g，1.5mmol)处理。反应搅拌1小时，在真空下除去溶剂。加入DCM(30mL)和水(20mL)，并分离两相。水相进一步用DCM萃取，合并的有机相用盐水洗涤、干燥(MgSO4)，在真空下除去溶剂。通过闪式色谱法纯化粗制混合物，用EtOAc作为洗脱剂洗脱，获得标题化合物(0.132g，32％)：RT＝2.86min；m/z(ES+)＝418.6[M+H]+。
中间体8：(1S，4S)-2-(4-甲磺酰基苯基)-2，5-二氮杂二环[2.2.1]庚烷

在DMF(30mL)中的1-氟-4-甲磺酰基苯(0.697g，4.0mmol)、(1S，4S)-2，5-二氮杂二环[2.2.1]庚烷(2.0g，20.0mmol)和K2CO3(5.33g，40.0mmol)的混合物在150℃下加热4小时。在真空下除去溶剂，将得到的固体溶解在DCM(30mL)中。有机相用水、盐水洗涤、干燥(MgSO4)，并在真空下除去溶剂。通过闪式色谱法纯化粗制混合物，用50％MeOH/EtOAc作为洗脱剂洗脱，获得标题化合物(0.374g，37％)：RT＝1.81min；m/z(ES+)＝253.1[M+H]+。
中间体9：(S)-1-(4-甲磺酰基苯基)-3-甲基哌嗪

将1-氟-4-甲磺酰基苯(0.74g，4.25mmol)和(S)-2-甲基哌嗪(2.13g，21.3mmol)的混合物在150℃下加热2h。将反应物冷却，加入DCM和水。分离两相，有机相用水、盐水洗涤、干燥(MgSO4)，在真空下除去溶剂获得标题化合物(0.916g，85％)：RT＝1.64min；m/z(ES+)＝255.1[M+H]+。
通过类似的方法由合适的胺合成下文表7中所示的化合物：
表7

实施例57：4-{2-[(S)-4-(4-甲磺酰基苯基)-2-甲基哌嗪-1-基]乙基}哌啶-1-羧酸叔丁酯

将在MeOH(10mL)中的(S)-1-(4-甲磺酰基苯基)-3-甲基哌嗪(0.387g，1.52mmol)和N-Boc-哌啶基-4-乙醛(0.692g.3.05mmol)溶液室温搅拌20小时。将该混合物冷至0℃，并用硼氢化钠(0.191g，5.03mmol)处理。将该反应再搅拌1小时并在真空下除去溶剂，加入EtOAc(25mL)和水(10mL)，分离两相。水相进一步用DCM萃取，合并的有机相用盐水洗涤、干燥(MgSO4)并在真空下除去溶剂。通过闪式色谱法纯化粗制混合物，用5％NEt3/EtOAc作为洗脱剂洗脱，获得标题化合物(0.047g，7％)：RT＝2.59min；m/z(ES+)＝466.4[M+H]+。
通过相似的方法由合适的醛和胺合成下文表8中所示的化合物：
表8


实施例62：4-{2-[4-(4-甲磺酰基苯基)-2，6-二甲基哌嗪-1-基]乙基}哌啶-1-羧酸叔丁酯

向MeCN(2mL)中的1-(4-甲磺酰基苯基)-3，5-二甲基哌嗪(0.067g，0.25mmol)的溶液中加入4-(2-甲磺酰基氧乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(0.079g，0.25mmol)和K2CO3(0.038g，0.275mmol)。将混合物加热回流并搅拌20小时。加入EtOAc(10mL)并将有机相用水、盐水洗涤、干燥(MgSO4)，在真空下除去溶剂。通过闪式色谱法纯化粗制混合物，用10％MeOH/EtOAc作为洗脱剂洗脱，获得标题化合物(0.006g，5％)：RT＝2.76min；m/z(ES+)＝480.4[M+H]+。
实施例63：2-[4-(4-甲磺酰基苯基)-2-氧代哌嗪-1-基]乙基}哌啶-1-羧酸叔丁酯

室温下，向在无水DMF(1mL)中的4-(4-甲磺酰基苯基)哌嗪-2-酮(0.037g，0.144mmol)的溶液中加入氢化钠(0.0065g的60％的NaH分散在矿物油中，0.164mmol)。将该溶液搅拌30分钟，接着用4-(2-甲磺酰氧基乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(0.044g，0.144mmol)处理并再搅拌20小时。在真空下除去溶剂，将残余物溶解在EtOAc(10mL)中，并用水、盐水洗涤、干燥(MgSO4)及在真空下除去溶剂。通过闪式色谱法纯化粗制混合物，用50％EtOAc/己烷作为洗脱剂洗脱剂，获得标题化合物(0.007g，10％)：RT＝3.34min；m/z(ES+)＝466.2[M+H]+。
中间体14：2-(2-羟基乙基氨基)-N-(4-甲硫基苯基)乙酰胺

向乙酸异丙酯(37mL)中的4-甲硫基苯基胺(2.5g，17.96mmol)的溶液中加入在水(15mL)中的KHCO3(3.147g，31.4mmol)溶液。将反应物冷却至0℃并滴加2-氯乙酰氯(1.76mL，22.1mmol)处理。反应物经1小时升温至室温并分离两相。有机相用水、盐水洗涤、干燥(MgSO4)，得到的溶液用乙醇胺(4.34mL，71.9mmol)处理。将反应物加热至60℃，之后除去溶剂，通过闪式色谱法纯化残余物，用5％NEt3/10％MeOH/EtOAc洗脱，接着从EtOAc中重结晶以获得标题化合物(1.234g，29％)：RT＝1.99min；m/z(ES+)＝241.0[M+H]+。
中间体15：1-(4-甲硫基苯基)哌嗪-2-酮

在0℃，向EtOAc(4mL)中的2-(2-羟基乙基氨基)-N-(4-甲硫基苯基)乙酰胺(0.6g，2.5mmol)溶液中加入P(n-Bu)3(0.812mL，3.25mmol)。5分钟后，滴加在EtOAc(20mL)中的DBAD(0.748g，3.25mmol)溶液。将该溶液升温至室温，接着在40℃搅拌3天。在真空下除去溶剂并通过闪式色谱法纯化粗制混合物，用EtOAc作为洗脱剂洗脱，获得标题化合物(0.235g，42％)：RT＝0.93min；m/z(ES+)＝223.04[M+H]+。
实施例64：4-{2-[4-(4-甲硫基苯基)-3-氧代哌嗪-1-基]乙基}哌啶-1-羧酸叔丁酯

向MeCN(200mL)中的1-(4-甲硫基苯基)哌嗪-2-酮(12.0g，39.0mmol)的溶液中加入K2CO3(0.157g，1.14mmol)、四丁基碘化铵(0.926g，2.51mmol)和4-(2-甲磺酰氧基乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(15.46g，50.2mmol)，将该混合物加热回流3天。在真空下除去溶剂并将残余物溶解在EtOAc(100mL)中，用水、盐水洗涤、干燥(MgSO4)，在真空下除去溶剂。通过闪式色谱法纯化粗制混合物，用EtOAc作为洗脱剂洗脱，获得标题化合物(4.578g，42％)：RT＝2.70min；m/z(ES+)＝434.19[M+H]+。
实施例65：4-{2-[4-(4-甲磺酰基苯基)-3-氧代哌嗪-1-基]乙基}哌啶-1-羧酸叔丁酯

向甲苯(100mL)中的4-{2-[4-(4-甲硫基苯基)-3-氧代哌嗪-1-基]乙基}-哌啶-1-羧酸叔丁酯(4.578g，10.5mmol)的溶液中加入NaMoO4(0.508g，2.1mmol)，接着加入N(n-Bu)3(0.251mL，1.05mmol)。加入乙酸(0.67mL)，接着加入30％H2O2/H2O(0.52mL)。以5分钟间隔加入另外量的乙酸和H2O2直到观察不到红色沉淀。该反应用饱和Na2SO3溶液处理，且水相用EtOAc萃取。将合并的有机相干燥(MgSO4)，在真空下除去溶剂。通过闪式色谱法纯化粗制混合物，用5％MeOH/EtOAc作为洗脱剂洗脱，获得标题化合物(0.837g，17％)：RT＝2.51min；m/z(ES+)＝466.15[M+H]+。
实施例66：4-{2-[4-(4-甲基亚磺酰基苯基)-3-氧代哌嗪-1-基]乙基}哌啶-1-羧酸叔丁酯

由前述反应分离标题化合物(1.351g，29％)：RT＝2.56min；m/z(ES+)＝450.15[M+H]+。
实施例67：4-{2-[4-(4-甲磺酰基苯基)哌嗪-1-基]乙酰基}哌啶-1-羧酸叔丁酯

向MeCN(2mL)中的1-(4-甲磺酰基苯基)哌嗪(0.055g，0.23mmol)的溶液中加入4-(2-硼乙酰基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(0.07g，0.23mmol)和K2CO3(0.035g，0.25mmol)。将该混合物加热回流4小时，接着将其冷却。加入EtOAc(20mL)，用水、盐水洗涤有机相、干燥(MgSO4)并在真空下除去溶剂。通过闪式色谱法纯化粗制混合物，用EtOAc作为洗脱剂洗脱，获得标题化合物(0.07g，65％)：RT＝2.45min；m/z(ES+)＝466.4[M+H]+。
实施例68：4-{2-[4-(3-氟-4-甲硫基苯基)哌嗪-1-基]乙酰基}哌啶-1-羧酸叔丁酯

使用上述方法制备：RT＝2.83min；m/z(ES+)＝452.3[M+H]+。
实施例69：4-{2-[4-(3-氟-4-甲磺酰基苯基)哌嗪-1-基]乙酰基}哌啶-1-羧酸叔丁酯

向在甲苯(2mL)中的4-{2-[4-(3-氟-4-甲硫基苯基)哌嗪-1-基]乙酰基}哌啶-1-羧酸叔丁酯(0.13g，0.29mmol)溶液中加入NaMoO4(0.007g，0.03mmol)，接着加入N(n-Bu)3(0.007mL，0.03mmol)。加入乙酸(3×0.018mL)，接着加入27％H2O2/H2O(0.015mL)。向红色油状残余物中加入乙酸(7×0.018mL)，接着加入27％H2O2/H2O(4×0.015mL)。将混合物室温搅拌30分钟，接着用饱和Na2SO3溶液终止反应。水相用1M NaOH调节pH8和用EtOAc萃取。将合并的有机相干燥(MgSO4)，并在真空下除去溶剂。通过闪式色谱法纯化粗制混合物，用10％MeOH/EtOAc作为洗脱剂洗脱，获得标题化合物(0.08g，60％)：RT＝2.54min；m/z(ES+)＝484.2[M+H]+。
实施例70：4-{2-[4-(3-氟-4-甲基亚磺酰基苯基)哌嗪-1-基]乙酰基}哌啶-1-羧酸叔丁酯

由前述反应分离：RT＝2.42min；m/z(ES+)＝468.2[M+H]+。
实施例71：4-{1，1-二氟-2-[4-(4-甲磺酰基苯基)哌嗪-1-基]乙基}哌啶-1-羧酸叔丁酯

向在DCM(0.6mL)中的4-{2-[4-(4-甲磺酰基苯基)哌嗪-1-基]乙酰基}哌啶-1-羧酸叔丁酯(0.04g，0.09mmol)溶液中加入DAST(0.4mL，3.1mmol)，室温搅拌该反应2小时。将反应物冷至0℃并用水终止反应。分离两相，将有机相用盐水洗涤、干燥(MgSO4)，在真空下除去溶剂。通过闪式色谱法纯化粗制混合物，用50％EtOAc/己烷作为洗脱剂洗脱，获得标题化合物(0.017g，40％)：RT＝3.10min；m/z(ES+)＝488.3[M+H]+。
实施例72：4-{1，1-二氟-2-[4-(3-氟-4-甲磺酰基苯基)哌嗪-1-基]乙基}哌啶-1-羧酸叔丁酯

采用以上方法制备：RT＝3.36min；m/z(ES+)＝506.2[M+H]+。
实施例73：4-{1-羟基-2-[4-(4-甲磺酰基苯基)哌嗪-1-基]乙基}哌啶-1-羧酸叔丁酯

向在THF(5mL)中的4-{2-[4-(4-甲磺酰基苯基)哌嗪-1-基]乙酰基}哌啶-1-羧酸叔丁酯(0.1g，0.215mmol)的溶液中加入硼氢化钠(0.016g，0.42mmol)并将混合物室温搅拌20小时。在真空下除去溶剂，通过闪式色谱法纯化粗制混合物，用EtOAc作为洗脱剂洗脱，获得标题化合物(0.07g，70％)：RT＝2.32min；m/z(ES+)＝468.2[M+H]+。
实施例74：4-{1-氯-2-[4-(4-甲磺酰基苯基)哌嗪-1-基]乙基}哌啶-1-羧酸叔丁酯

在-55℃，向在DCM(0.5mL)中的DAST(0.06mL，0.43mmol)的溶液中加入在DCM(0.5mL)中的4-{1-羟基-2-[4-(4-甲磺酰基苯基)哌嗪-1-基]乙基}哌啶-1-羧酸叔丁酯(0.1g，0.21mmol)溶液。反应物经3小时升温至5℃。该反应用水终止。分离两相并将有机相用盐水洗涤、干燥(MgSO4)和在真空下除去溶剂。通过闪式色谱法纯化粗制混合物，用50％EtOAc/己烷作为洗脱剂洗脱，获得标题化合物(0.025g，24％)：RT＝2.60min；m/z(ES+)＝486.2[M+H]+。
实施例75：4-{1-氟-2-[4-(4-甲磺酰基苯基)哌嗪-1-基]乙基}哌啶-1-羧酸叔丁酯

向在DCM(1mL)中的4-{1-羟基-2-[4-(4-甲磺酰基苯基)哌嗪-1-基]乙基}哌啶-1-羧酸叔丁酯(0.04g，0.08mmol)的溶液中加入DAST(0.393mL，2.98mmol)，室温下将反应搅拌0.5小时。将该反应物冷却到0℃，并用水终止反应。分离两层，并用盐水洗涤有机层、干燥(MgSO4)，在真空下除去溶剂。通过闪式色谱法纯化粗制混合物，用50％EtOAc/DCM作为洗脱剂洗脱，获得标题化合物(0.003g，7％)：RT＝2.39min；m/z(ES+)＝470.2[M+H]+。
实施例76：4-{2-氟-1-[4-(4-甲磺酰基苯基)哌嗪-1-基]乙基}哌啶-1-羧酸叔丁酯

向在DCM(5mL)中的4-{1-羟基-2-[4-(4-甲磺酰基苯基)哌嗪-1-基]乙基}哌啶-1-羧酸叔丁酯(0.05g，1.1mmol)的溶液中加入DAST(0.393mL，2.98mmol)，反应在室温搅拌0.7小时。将反应物冷却至0℃并用水终止反应。分离两层，有机层用盐水洗涤、干燥(MgSO4)并在真空下除去溶剂。通过闪式色谱法纯化粗制混合物，用50％EtOAc/DCM作为洗脱剂洗脱，获得标题化合物(0.003g，6％)：RT＝2.70min；m/z(ES+)＝470.2[M+H]+。
中间体16：4-(2-羟基亚乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯

在-78℃，向甲苯(30mL)中4-乙氧基羰基亚甲基哌啶-1-羧酸叔丁酯(3.5g，13.01mmol)的溶液中滴加DIBAL(在甲苯中，33mL的1M溶液，33.0mmol)。该混合物在-78℃下搅拌1小时，接着用MeOH(0.5mL)处理并使其升温至室温。加入水并通过过滤除去沉淀。在真空下浓缩滤液，通过闪式色谱法纯化粗制混合物，用33％EtOAc/己烷作为洗脱剂洗脱，获得自以为黄色油的标题化合物(2.2g，75％)：δH(CDCl3)1.30(9H，s)，2.02(2H，m)，2.10(2H，m)，3.22(4H，m)，4.01(2H，m)，5.35(1H，t)。
实施例77：4-{2-[4-(4-甲磺酰基苯基)哌嗪-1-基]亚乙基}哌啶-1-羧酸叔丁酯

向在DCM(25mL)中的4-(2-羟基亚乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(2.2g，9.7mmol)的溶液中加入Et3N(2.02mL，14.5mmol)，将反应物冷却至0℃。向该冷却的混合物中滴加甲磺酰氯(0.98mL，12.6mmol)。将反应物在0℃搅拌20分钟，接着用饱和NaHCO3溶液处理。分离两层，有机层用水、盐水洗涤、干燥(MgSO4)，在真空下除去溶剂。通过闪式色谱法纯化粗制混合物，用10％EtOAc/己烷作为洗脱剂获得比例为1∶1的4-(2-氯亚乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯和4-乙烯基-3，6-二氢-2H-吡啶-1-羧酸叔丁酯(0.950g)。将该混合物溶解在DMF(5mL)中并用TBAI(0.068g，0.18mmol)处理。室温下，将该悬浮液加入至预制的在DMF(5mL)中的1-(4-甲磺酰基苯基)哌嗪(0.487g，2.03mmol)和氢化钠(0.11g的60％的NaH分散在矿物油中，2.77mmol)的混合物中。将该混合物搅拌2小时，接着用水处理。水相用EtOAc萃取，合并的有机相用水、盐水洗涤、干燥(MgSO4)，在真空下除去溶剂。粗制混合物通过HPLC纯化，获得标题化合物(0.27g，6％)：RT＝2.41min；m/z(ES+)＝450.2[M+H]+。
中间体17：4-[2-(4-氧代哌啶-1-基)乙基]哌啶-1-羧酸叔丁酯

向MeCN(3.5mL)中的哌啶-4-酮(0.091g，0.59mmol)溶液中加入K2CO3(0.179g，1.3mmol)和4-(2-甲磺酰基乙氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(G.A.Cain等人，美国专利5,252,586)(0.2g，1.3mmol)。该溶液室温搅拌20小时，接着再回流6小时。加入水，而后加入EtOAc。分离两层，水层再用EtOAc萃取。将合并的有机相干燥(MgSO4)，在真空下除去溶剂。通过闪式色谱法纯化粗制混合物，用50％EtOAc/己烷作为洗脱剂洗脱，获得标题化合物(0.077g，42％)：RT＝2.07min；m/z(ES+)＝311.3[M+H]+。
实施例78：4-{2-[4-羟基-4-(4-甲基磺酰基苯基)哌啶-1-基]乙基}哌啶-1-羧酸叔丁酯

在0℃下，向在无水THF(1.2mL)中的4-[2-(4-氧代哌啶-1-基)乙基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(0.077g，0.248mmol)的溶液中加入硫代甲基苯溴化镁(0.5mL，在THF中的0.5摩尔溶液，0.25mmol)。在0℃下搅拌该溶液30分钟，接着用饱和NH4Cl溶液处理，而后用EtOAc处理。分离两层后，水层再用EtOAc萃取。将合并的有机层相干燥(MgSO4)，在真空下除去溶剂。通过闪式色谱法纯化粗制混合物，用50％EtOAc/己烷作为洗脱剂洗脱获得标题化合物(0.074g，69％)：RT＝2.76min；m/z(ES+)＝435.35[M+H]+。
实施例79：4-{2-[4-羟基-4-(4-甲磺酰基苯基)哌啶-1-基]乙基}哌啶-1-羧酸叔丁酯

向在甲苯(1mL)中的4-{2-[4-羟基-4-(4-甲硫基苯基)哌啶-1-基]乙基}哌啶-1-羧酸叔丁酯(0.071g，0.164mmol)的溶液中加入NaMoO4(0.0039g，0.016mmol)，而后加入N(n-Bu)3(0.004mL，0.016mmol)。加入乙酸(0.010mL)，而后加入H2O2(0.010mL)。以5分钟间隔内加入另外部份的乙酸和H2O2(4×0.010mL)，将该混合物在60℃加热15分钟。该反应用饱和Na2SO3溶液处理，水相用EtOAc萃取。将合并的有机相干燥(MgSO4)，在真空下除去溶剂。通过闪式色谱法纯化粗制混合物，用2％NH3，5％MeOH/DCM作为洗脱剂洗脱，获得标题化合物(0.035g，46％)：RT＝2.39min；m/z(ES+)＝467.35[M+H]+。
实施例80：4-{2-[4-(4-甲磺酰基苯基)哌嗪-1-基]-2-氧代乙基}哌啶-1-羧酸叔丁酯

向在DMF(5mL)中的1-(4-甲磺酰基苯基)哌嗪(0.22g，0.91mmol)、4-羧基甲基哌啶-1-羧酸叔丁酯(0.20g，0.80mmol)、HOBT.H2O(0.14g，0.91mmol)和DIPEA(0.47mL，2.72mmol)的溶液中加入EDCI(0.19g，0.99mmol)，将该混合物搅拌18小时。在真空下除去溶剂并将得到的残余物在EtOAc和饱和NaHCO3溶液间分配。水相用EtOAc再萃取，合并有机萃取物，用盐水洗涤、干燥(MgSO4)并吸附至SiO2上。通过闪式色谱法纯化吸附的样品，用50∶50 EtOAc∶己烷洗脱获得标题化合物：RT＝3.26min；m/z(ES+)＝466.33[M+H]+。
实施例81：4-{2-[4-(4-甲磺酰基苯基)哌嗪-1-基]-2-乙氧基}哌啶-1-羧酸叔丁酯

在DCM(60mL)中的4-羟基-4-(3-羟基丙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.00g，3.86mmol)的溶液中加入戴斯-马丁氧化剂(1.80g，4.24mmol)，该混合物室温搅拌1小时，再加入一批戴斯-马丁氧化剂(0.20g，0.47mmol)。该反应混合物用2M NaOH终止反应，并用Et2O萃取，水相用Et2O再萃取，将有机萃取物合并，接着用水、2M NaOH溶液和盐水洗涤，干燥(MgSO4)并在真空下除去溶剂以获得2-羟基-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯。将在无水MeOH(2mL)中的1-(4-甲磺酰基苯基)哌嗪(0.12g，0.50mmol)和2-羟基-1-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯(0.14g，0.56mmol)的溶液在75℃加热1小时，再加入NaBH4(25mg，0.65mmol)，将该反应搅拌2小时。在真空下除去溶剂，得到的残余物在水和DCM间分配。水相用DCM再萃取，合并有机萃取物并通过闪式色谱法纯化，用3∶97 MeOH∶DCM洗脱获得标题化合物：RT＝2.37min；m/z(ES+)＝482.45[M+H]+。
中间体18：4-(6-氯吡啶-3-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯

室温下，用Pd2(dba)3(0.095g，0.1mmol)处理在甲苯(30mL)中的2-氯-5-溴吡啶(1.0g，5.2mmol)、1-叔丁氧羰基-哌嗪(0.967g，5.2mmol)、叔丁醇钠(0.749g，7.8mmol)和9，9-二甲基-4，5-二(二苯基膦)呫吨(0.179g，0.31mmol)的混合物。该混合物回流4小时。将该反应冷却并通过硅藻土过滤。有机层用EtOAc(100mL)稀释，接着用饱和的Na2CO3溶液、盐水洗涤，干燥(MgSO4)，在真空下除去溶剂。通过闪式色谱法纯化粗制混合物，用20％EtOAc/己烷作为洗脱剂洗脱，获得标题化合物(0.82g，53％)：RT＝3.40min；m/z(ES+)＝298.2[M+H]+。
实施例82：4-{2-[4-(6-氯吡啶-3-基)哌嗪-1-基]乙基}哌啶-1-羧酸叔丁酯

用TFA(1mL)处理在DCM(5mL)中的4-(6-氯吡啶-3-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(0.15g，0.5mmol)溶液，将该混合物室温搅拌4小时。加入DCM(20mL)，有机层用2M NaOH溶液、盐水洗涤，干燥(MgSO4)，在真空下除去溶剂获得1-(6-氯吡啶-3-基)哌嗪黄色固体(0.067g，68％)。将该固体溶解在DCM(8mL)中并在室温下用N-boc-哌啶基-4-乙醛(0.077g，0.34mmol)和4分子筛(0.1g)处理。将该溶液搅拌1小时，接着用NaHB(OAc)3(0.094g，0.44mmol)处理。将得到的溶液室温搅拌24小时。加入DCM，有机相用饱和Na2CO3溶液、盐水洗涤，干燥(MgSO4)，在真空下除去溶剂。通过闪式色谱法纯化粗制混合物，用EtOAc作为洗脱剂洗脱，获得标题化合物(0.098g，70％)：RT＝2.56min；m/z(ES+)＝409.3[M+H]+。
中间体19：4-(6-甲基磺酰基吡啶-3-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯

在甲苯(30mL)中的5-溴-2-甲硫基吡啶(1.06g，5.2mmol)、1-boc-哌嗪(0.967g，5.2mmol)、叔丁醇钠(0.749g，7.8mmol)、9，9-二甲基-4，5-二(二苯基膦)呫吨(0.179g，0.31mmol)的混合物在室温用Pd2(dba)3(0.095g，0.1mmol)处理。将该混合物回流3小时。冷却反应物并通过硅藻土过滤。有机相用EtOAc(100mL)稀释，接着用饱和Na2CO3溶液、盐水洗涤，干燥(MgSO4)，在真空下除去溶剂。通过闪式色谱法纯化粗制混合物，用20％EtOAc/己烷作为洗脱剂洗脱，获得标题化合物(1.0g，61％)：RT＝3.22min；m/z(ES+)＝310.2[M+H]+。
中间体20：4-(6-甲磺酰基吡啶-3-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯

在0℃，向在DCM(20mL)中的4-(6-甲硫基吡啶-3-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(0.5g，1.62mmol)的溶液中分批加入mCPBA(0.56g，3.24mmol)。将该混合物升温至室温并搅拌3小时。加入DCM(30mL)，有机物用饱和Na2CO3溶液洗涤，干燥(MgSO4)，在真空下除去溶剂。通过闪式色谱法纯化粗制混合物，用80％EtOAc/己烷作为洗脱剂洗脱，获得标题化合物(0.14g，25％)：RT＝3.07min；m/z(ES+)＝342.2[M+H]+。
实施例83：4-{2-[4-(6-甲磺酰基吡啶-3-基)哌嗪-1-基]乙基}哌啶-1-羧酸叔丁酯

用TFA(1mL)处理在DCM(10mL)中的4-(6-甲磺酰基吡啶-3-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(0.14g，0.4mmol)的溶液，室温搅拌该混合物3小时。加入DCM(30mL)，有机相用1M NaOH溶液、盐水洗涤，干燥(MgSO4)，在真空下除去溶剂以得到作为黄色固体的1-(6-甲磺酰基吡啶-3-基)哌嗪(0.095g，100％)。将该固体溶解在DCM(8mL)中并在室温下用N-boc-哌啶基-4-乙醛(0.088g，0.39mmol)和4分子筛(0.1g)处理。将该溶液搅拌3小时，接着用NaHB(OAc)3(0.106g，0.5mmol)处理。将得到的溶液室温搅拌20小时。加入DCM(20mL)，有机相用饱和Na2CO3溶液、盐水洗涤，干燥(MgSO4)，在真空下除去溶剂。通过闪式色谱法纯化粗制产物，用EtOAc作为洗脱剂洗脱，获得标题化合物(0.101g，58％)：RT＝2.61min；m/z(ES+)＝453.4[M+H]+。
中间体21：2-溴-5-甲磺酰基吡啶

在0℃，向在DCM(20mL)中的2-溴-5-甲硫基吡啶(1.53g，7.6mmol)的溶液中分批加入mCPBA(3.95g，15.95mmol)。将混合物升温至室温并搅拌2小时。加入DCM(30ml)并将有机物用饱和Na2SO3溶液、饱和Na2CO3溶液洗涤，干燥(MgSO4)，在真空下除去溶剂。粗制产物用Et2O研磨，过滤并在真空下干燥，获得标题化合物(1.25g，71％)：δH(CDCl3)3.15(3H，s)，7.75(1H，d)，8.08(1H，dd)，8.95(1H，d)。
中间体22：4-(5-甲磺酰基吡啶-2-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯

将在三氟乙醇(25mL)中的2-溴-5-甲磺酰基吡啶(2.1g，8.9mmol)和1-boc-哌嗪(3.31g，17.8mmol)溶液加热回流24小时。在真空下除去溶剂并加入EtOAc(100mL)。用水、盐水洗涤该溶液，干燥(MgSO4)，在真空下除去溶剂。通过闪式色谱法纯化粗制混合物，用40％EtOAc/己烷作为洗脱剂洗脱，获得标题化合物(1.86g，62％)：RT＝3.11min；m/z(ES+)＝342.2[M+H]+。
实施例84：4-{2-[4-(5-甲磺酰基吡啶-2-基)哌嗪-1-基]乙基}哌啶-1-羧酸叔丁酯

用TFA(0.5mL)处理在DCM(5mL)中的4-(5-甲磺酰基吡啶-2-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(0.075g，0.23mmol)的溶液，将该混合物室温搅拌4小时。加入DCM(30mL)，将有机相用1M NaOH溶液、盐水洗涤，干燥(MgSO4)并在真空下除去溶剂以得到作为白色固体的1-(5-甲磺酰基吡啶-2-基)哌嗪(0.07g，100％)。将该固体(0.064g，0.27mmol)溶解于1∶1 DCM/THF(12mL)中并在室温用N-boc-哌啶基-4-乙醛(0.061g，0.27mmol)和4分子筛(0.1g)处理。将该溶液搅拌1小时，接着用NaHB(OAc)3(0.074g，0.35mmol)处理。将得到的溶液室温搅拌24小时。加入DCM(30mL)，有机相用饱和的Na2CO3溶液、盐水洗涤，干燥(MgSO4)并在真空下除去溶剂。粗制产物用Et2O研磨，过滤并在真空下干燥获得标题化合物(0.043g，35％)：RT＝2.49min；m/z(ES+)＝453.4[M+H]+。
中间体23：1-(4-甲磺酰基苯基)-4-(2-哌啶-4-基乙基)哌嗪

在30分钟内向在DCM(10mL)中的4-{2-[4-(4-甲磺酰基苯基)哌嗪-1-基]乙基}哌啶-1-羧酸叔丁酯(5g，11.1mmol)的溶液中滴加1∶3 DCM/TFA。将该反应再搅拌30分钟并在真空下除去溶剂。将该残余物溶于EtOAc并用1M NaOH洗涤。合并的碱溶液用NaCl饱和并用EtOAc反萃取。合并的有机相用盐水洗涤，干燥(MgSO4)并在真空下除去溶剂，获得标题化合物(2.98g，77％)：RT＝0.26min；m/z(ES+)＝352.1[M+H]+。
实施例85：4-{2-[4-(4-甲磺酰基苯基)哌嗪-1-基]乙基}哌啶-1-羧酸丙酯

向在DCM(1mL)中的1-(4-甲磺酰基苯基)-4-(2-哌啶-4-基乙基)哌嗪(0.05g，0.14mmol)和NEt3(0.06mL，0.42mmol)的溶液中加入氯甲酸丙酯(0.019mL，0.17mmol)，将该混合物室温搅拌2小时。加入水并通过相分离短柱分离两相和在真空下除去溶剂，获得标题化合物(0.04g，65％)：RT＝2.45min；m/z(ES+)＝438.3[M+H]+。
实施例86：4-{2-[4-(4-甲磺酰基苯基)哌嗪-1-基]乙基}哌啶-1-羧酸异丙酯

在0℃，向在THF(2mL)中的异丙醇(0.054mL，0.71mmol)和三光气(0.07g，0.24mmol)的溶液中加入NEt3(0.2mL，1.42mmol)。经1小时，将该悬浮液升温至室温，并接着加入在THF(1mL)中的1-(4-甲磺酰基苯基)-4-(2-哌啶-4-基乙基)哌嗪(0.05g，0.14mmol)的溶液。将该混合物搅拌2小时并在真空下除去溶剂。将粗制固体溶解在DCM中并用水洗涤，经相分离器干燥，在真空下除去溶剂以得到得粗产物固体，通过HPLC纯化以获得标题化合物(0.01g，16％)：RT＝2.45min；m/z(ES+)＝438.3[M+H]+。
实施例87：4-{2-[4-(4-甲磺酰基苯基)哌嗪-1-基]乙基}哌啶-1-羧酸1-甲基环丁酯

使用上述方法制备：RT＝2.54min；m/z(ES+)＝464.4[M+H]+。
实施例88：2-(4-{2-[4-(4-甲磺酰基苯基)哌嗪-1-基]乙基}哌啶-1-基)-5-甲基嘧啶

向二噁烷(1mL)中的1-(4-甲磺酰基苯基)-4-(2-哌啶-4-基乙基)哌嗪(0.05g，0.14mmol)和DBU(0.026mL，0.17mmol)的溶液中加入2-氯-5-甲基嘧啶(0.021g，0.16mmol)。将该混合物搅拌3.5天并在真空下除去溶剂。通过HPLC纯化粗制混合物以得到标题化合物(0.018g，29％)：RT＝2.24min；m/z(ES+)＝444.3[M+H]+。
实施例89：5-氟-2-(4-{2-[4-(4-甲磺酰基苯基)哌嗪-1-基]乙基}哌啶-1-基)嘧啶

向在甲苯中的实施例85(0.2g，0.57mmol)、2-氯-5-氟嘧啶(0.076g，0.57mmol)、叔丁醇钠(0.082g，0.86mmol)、9，9-二甲基-4，5-二(二苯基膦)呫吨(0.02g，0.032mmol)的脱气溶液中加入Pd2(dba)3(0.011g，0.01mmol)。将该混合物加热回流2小时，冷却并在真空下除去溶剂。通过闪式色谱法纯化粗制混合物，用1％NH3、1％MeOH/DCM作为洗脱剂洗脱，获得标题化合物(0.017g，7％)：RT＝2.51min；m/z(ES+)＝448.2[M+H]+。
本发明的化合物的生物活性可以在以下测定系统中进行测试：酵母报告基因测定法
基于酵母细胞的报告基因测定法之前已记载于文献(例如，参见Miret J.J.等人，2002，J.Biol.Chem.，277：6881-6887；Campbell R.M.等人，1999，Bioorg.Med.Chem.Lett.，9：2413-2418；King K.等人，1990，Science，250：121-123；WO 99/14344；WO 00/12704；以及US 6,100,042)中。简而言之，已对酵母细胞工程化以使内源性酵母G-α(GPA1)缺失并用由多种技术构建的G-蛋白嵌合体代替之。此外，使内源性酵母GPCR，Ste3缺失从而允许选择的哺乳动物GPCR异源表达。在酵母中，在真核细胞中保守的信息素信号转导途径的元件(例如，促分裂原激活的蛋白激酶途径)驱动Fus1的表达。通过将β-半乳糖苷酶(LacZ)置于Fus1启动子(Fus1p)的控制下，已建立了其中受体激活导致酶读出(enzymatic read-out)的系统。
通过适应性改变的Agatep等所述的醋酸锂方法(Agatep，R.等人，1998，Transformation of Saccharomyces cerevisiae by the lithiumacetate/single-stranded carrier DNA/polyethylene glycol(LiAc/ss-DNA/PEG)protocol.Technical Tips Online，Trends Journals，Elsevier)转化酵母细胞。简而言之，酵母细胞在酵母胰蛋白胨板(YT)上生长过夜。将载体单链DNA(10μg)、两种Fuslp-LacZ报告基因质粒(一种具有URA选择标记而另一种具有TRP选择标记)各2μg、2μg酵母表达载体(2μg复制源)中的GPR116(人类或小鼠受体)以及醋酸锂/聚乙二醇/TE缓冲液移液至微量离心管中。含有受体/无受体对照的酵母表达质粒具有LEU标记。将酵母细胞接种到该混合物中并在30℃下将反应进行60分钟。之后将酵母细胞在42℃下热激15分钟。之后细胞经洗涤并铺在选择平板上。该选择平板是不含LEU、URA和TRP的合成的确定成分的酵母培养基(SD-LUT)。在30℃下温育2-3天后，将选择平板上生长的菌落在LacZ测定法中进行测试。
为了进行β-半乳糖苷酶的荧光酶测定法，将携带人或小鼠GPR116受体的酵母细胞在液体SD-LUT培养基中生长过夜达到未饱和浓度(即细胞仍在分裂并且还没有达到稳定期)。用新鲜的培养基将它们稀释至最佳测定浓度并将90μl的酵母细胞加入到96孔黑色聚苯乙烯板(Costar)上。将溶于DMSO并在10％DMSO溶液中稀释至10X浓度的化合物加入至板中，并将板置于30℃下4h。4h之后，将β-半乳糖苷酶的底物加入至各个孔中。在这些实验中，使用了释放荧光黄的酶的底物荧光黄二(β-D-吡喃半乳糖苷)(FDG)，从而可进行荧光读出(fluorimetric read-out)。每孔加入20μl 500μM FDG/2.5％Triton X100(该洗涤剂是为了使细胞可渗透而必需的)。在将细胞与底物温育60分钟后，每孔加入20μl的1M碳酸钠以终止反应并增强荧光信号。之后将板置于荧光计中于485/535nm处读数。
本发明的化合物给出的荧光信号比背景信号(即在不含化合物的1％DMSO存在下获得的信号)增加了至少约1.5倍。给出至少5倍增加的本发明的化合物可能是优选的。
cAMP测定法
建立了表达重组人类GPR116的稳定的细胞系并将该细胞系用于研究本发明的化合物对环AMP(cAMP)的细胞内水平的影响。该细胞单层经磷酸盐缓冲盐水洗涤并在37℃下用补充有1％DMSO的刺激缓冲液中的各种不同浓度的化合物刺激30分钟。之后将细胞溶解并利用Perkin ElmerAlphaScreenTM(放大发光邻近测定(Amplified Luminescent ProximityHomogeneous Assay))cAMP试剂盒测定cAMP含量。缓冲液和测定条件记载于生产商的方案中。本发明的化合物显示细胞内cAMP水平的浓度依赖性增加。
本发明的化合物产生细胞内cAMP水平的浓度依赖性增加并且EC50通常＜10μM。在cAMP测定法中显示低于1μM的EC50的化合物可能是优选的。
体内饲养研究
本发明的化合物对体重以及食物和水摄取的影响可在维持在反向(reverse-phase)光照下的自由进食的雄性Sprague-Dawley大鼠上进行测试。通过适当的给药途径(例如，腹膜内或口服)给药测试化合物和参比化合物并在接下来的24h内进行测定。将大鼠单独饲养在温度为21±4℃，湿度为55±2％的具有金属栅格地板的聚丙烯笼中。将具有笼垫的聚丙烯托盘置于各笼之下以检测任何食物溢出。将动物维持在反相明暗周期下(从09.30-17.30h熄灯8h)，期间用红色光照射房间。在两周的适应期期间，动物可以自由获取普通粉末状鼠料和自来水。鼠料置于具有铝盖的玻璃饲养罐中。在每个盖子上有3-4cm的小孔从而可以通过它获取食物。在黑暗期开始时对动物、饲养罐以及水瓶称重(精确到最接近的0.1g)。向动物给药本发明的化合物后的1、2、4、6和24h陆续测量饲养罐和水瓶并测量与用载体治疗的对照组相比各治疗组间在基线的任何显著性差异。
本发明的化合物在胰β细胞(HIT-T15)的体外模型中的抗糖尿病作用
细胞培养物
从ATCC获得HIT-T15细胞(传代60)并在添加10％胎牛血清和30nM亚硒酸钠的RPMI1640培养基中培养。根据文献，全部试验均用低于传代70的细胞完成，所述文献描述了传代数超过81的该细胞系的改变的性质(Zhang HJ，Walseth TF，Robertson RP.Insulin secretion and cAMPmetabolism in HIT cells.Reciprocal and serial passage-dependent relationships.Diabetes.1989 Jan；38(1)：44-8)。
cAMP测定法
在96孔板中以100000细胞/0.1ml/孔在标准培养基中铺板HIT-T15细胞并培养24h，接着弃去该培养基。将细胞与100μl刺激缓冲液(Hanks缓冲盐溶液，5mM HEPES，0.5mM IBMX，0.1％BSA，pH7.4)在室温下温育15分钟。将其弃去，并用在存在0.5％DMSO的刺激缓冲液中的0.001、0.003、0.01、0.03、0.1、0.3、1、3、10、30μM范围的化合物稀释液替代。将细胞在室温下温育30分钟。接着，每孔加入75ul溶胞缓冲液(5mM HEPES，0.3％Tween-20，0.1％BSA，pH7.4)并将该板以900rpm振摇20分钟。通过在3000rpm下离心5分钟来除去颗粒物，接着将样品平行两份转移进384孔板，并根据Perkin Elmer AlphaScreen cAMP测定试剂盒指示进行加工。简而言之，设置25μl含有8μl样品、5μl受体珠混合料和12μl检测混合料的反应物，以使最终反应成分的浓度与试剂盒指示中说明的相同。将反应物在室温下温育150分钟，接着使用Packard Fusion装置对该板读数。将cAMP的测量值与已知cAMP量(0.01、0.03、0.1、0.3、1、3、10、30、100、300、1000nM)的标准曲线比较以将读数转换为绝对cAMP量。使用XLfit 3软件分析数据。
发现代表性的本发明的化合物以低于10μM的EC50增加cAMP。在cAMP测定法中显示低于1μM的EC50的化合物可能是优选的。
胰岛素分泌测定法
在12孔板中以106细胞/1ml/孔在标准培养基中铺板HIT-T15细胞并培养3天，接着弃去该培养基。用含有119mM NaCl、4.74mM KCl、2.54mM CaCl2、1.19mM MgSO4、1.19mM KH2PO4、5mM NaHCO3、pH7.4的10mM HEPES以及1％牛血清蛋白的补充的Krebs-Ringer缓冲液(KRB)将细胞洗两次。在37℃下用1ml KRB培养细胞30分钟，然后将其弃去。接着用KRB第二次培养30分钟，将其收集并用于测量各孔的基础胰岛素分泌水平。接着向平行两份的孔中加入在补充有5.6mM葡萄糖的1mlKRB中的化合物稀释液(0、0.1、0.3、1、3、10uM)。在37℃下温育30分钟后，移出样品以测定胰岛素水平。使用Mercodia大鼠胰岛素ELISA试剂盒，按照生产商的指示，用已知胰岛素浓度的标准曲线完成胰岛素的测量。通过从不存在葡萄糖的预温育物减去基础分泌水平来校正各孔的胰岛素水平。使用XLfit 3软件分析数据。
口服葡萄糖耐量测试
在雄性C57B1/6或雄性ob/ob小鼠中评价本发明的化合物对口服葡萄糖(Glc)耐量的影响。在Glc给药前5h收回食物并在整个研究中保持收回。在研究期间，小鼠可自由饮水。在动物尾部做出切口，接着取血(20μL)以测量基础Glc水平，45分钟后给药Glc负荷。然后，称重小鼠并口服给药测试化合物或载体(20％的羟丙基-β-环糊精水溶液或25％的Gelucire 44/14水溶液)，30分钟后再次取血样(20μL)并用Glc负荷(2-5g kg-1口服)治疗。接着在Glc给药后25、50、80、120和180分钟采血样(20μL)。为测量Glc水平，从尾部的切口端采20μL血样至一次性微吸管(Dade DiagnosticsInc.，Puerto Rico)中，并将该样品加入480μL溶血试剂中。接着向在96孔测定板中的180μL Trinders葡萄糖试剂(Sigma酶(Trinder)比色法)中加入平行两份20μL稀释溶血等分试样。混合后，将样品在室温下放置30分钟，然后凭Glc标准品(Sigma葡萄糖/尿素氮结合的标准品组)读数。