一种羟基红花黄色素A的制备方法.pdf

一种羟基红花黄色素A的制备方法，采用干燥红花为原料，用去离子水作为提取溶剂，依次通过初步分离柱和精制柱，用去离子水和醇水溶液作为洗脱剂，冷冻干燥得羟基红花黄色素A，含量可达85％～99.9％。本发明所用材料便宜，溶剂安全无毒，工艺简单；对红花的利用率高，按羟基红花黄色素A不同用途对纯度的要求，提取率为0.8％～1.5％；成本低，适合工业化生产。

权利要求书
1.  一种羟基红花黄色素A的制备方法，其特征在于包括如下步骤：
(1)提取：取干燥红花，用红花重量20～40倍的去离子水提取两次，每次提取30～90min，提取温度40℃～90℃，将两次所得提取液合并，过滤，除去药渣，60℃减压浓缩至比重为1.05～1.15的水提液；
(2)分离：上述水提液用大孔吸附树脂或氢键键合型柱层析材料柱层析，上样量为1∶1～3，先用水淋洗2～4个柱体积，再用浓度为10％～60％乙醇水溶液淋洗1～5个柱体积，收集醇水淋洗液，60℃减压浓缩至比重为1.05～1.15得初步分离浓缩液；
(3)精制：将上述初步分离浓缩液用非极性反相层析材料柱层析，上样量为0.5～2∶1，先用浓度为0％～10％乙醇水溶液淋洗2～4个柱体积，再用浓度为10％～70％乙醇水溶液淋洗2～5个柱体积，收集醇水淋洗液，60℃减压浓缩至比重为1.05～1.2得精制浓缩液；
(4)冷冻干燥：上述精制浓缩液经冷冻干燥得橘黄色羟基红花黄色素A产品。

2.  如权利要求1所述的羟基红花黄色素A的制备方法，其特征在于步骤(2)中所述大孔吸附树脂是AB-8或H103。

3.  如权利要求1所述的羟基红花黄色素A的制备方法，其特征在于步骤(2)中所述氢键键合型柱层析材料是聚酰胺。

4.  如权利要求1所述的羟基红花黄色素A的制备方法，其特征在于步骤(3)中所述的反相层析材料是MDS。

说明书一种羟基红花黄色素A的制备方法
技术领域：
本发明涉及从药用植物中提取有效成分的方法，具体是一种羟基红花黄色素A的制备方法。
背景技术：
红花(Catthamus tinctotins L.)为菊科一年生草本植物，在我国已有2100多年的栽培与用药历史。其干燥管状花是一味常用中药，具有活血通络、祛瘀止痛的功效。临床上常用来治疗子宫充血，心血管、血栓形成等疾病，也作止痛、消炎剂。羟基黄色素A是目前得到认可的红花有效成分之一，药理实验证明羟基红花黄色素A能明显提高缺氧耐受力，使冠脉扩张，增加冠脉流量，并有明显抑制ADP诱导的家兔血小板聚集作用。
羟基红花黄色素A主要用作冻干粉针剂。羟基红花黄色素A的提取纯化，目前需解决的主要问题是有效去除杂质，提高羟基红花黄色素A的含量，降低生产成本。当前，国内外对羟基红花黄色素A(HSYA)的精制工艺研究的工作主要有：①1993年Meselhy〔Chem Phar-m.Bull..1993，41(10)：1796-1802〕报道了通过丙酮提取，醋酸乙脂沉淀，然后通过纤维柱SephadexLH-20凝胶色谱柱反复精制制备羟基红花黄色素A的方法。在凝胶色谱柱分离时，另一红花查耳酮成分与HSYA混在一起，且需用制备型聚酰胺薄层板进行精制制备HSYA，该方法不适合工业化生产。②2004年李盛学(申请号：CN02132781.5)将红花提取液进行柱层析，醇沉，之后再进行3-5次反复柱层析进行精制，冷冻干燥得到90％-99％的羟基红花黄色素A干粉。该工艺需进行反复层析，且在精制过程中选用的是价格比较昂贵的葡聚糖凝胶作为填料。③2004金鸣等报道〔中草药，2004，35(1)25-28〕用D-4020型非极性大孔树脂柱水洗脱糖类等杂质，以30％和10％乙醇洗脱分别得SY和HSYA；两洗脱液中所含SY和HSYA纯度分别为92.4％和83.0％。
发明内容
本发明的目的是提供一种生产成本低、工艺简单、无污染、收率高、纯度高、适合适合工业化生产的羟基红花黄色A的制备方法。
本发明提供的一种羟基红花黄色A的制备方法，包括如下步骤：
(1)提取：取干燥红花，用红花重量20～40倍的去离子水提取两次，每次提取30～90min，提取温度40℃～90℃，将两次所得提取液合并，过滤，除去药渣，60℃减压浓缩至比重为1.05～1.15的水提液；
(2)分离：上述水提液用大孔吸附树脂或氢键键合型柱层析材料柱层析，上样量为1∶1～3(w/w)，先用水淋洗2～4个柱体积，再用浓度为10％～60％乙醇水溶液淋洗1～5个柱体积，收集醇水淋洗液，60℃减压浓缩至比重为1.05～1.15得初步分离浓缩液；
(3)精制：将上述初步分离浓缩液用非极性反相层析材料柱层析，上样量为0.5～2∶1(w/w)，先用浓度为0％～10％乙醇水溶液淋洗2～4个柱体积，再用浓度为10％～70％乙醇水溶液淋洗2～5个柱体积，收集醇水淋洗液，60℃减压浓缩至比重为1.05～1.2得精制浓缩液；
(4)冷冻干燥：上述精制浓缩液经冷冻干燥得橘黄色羟基红花黄色素A产品。
用HPLC测定上述所得产品的羟基红花黄色素A的含量，可达85％～99.9％。
所述步骤(2)中的大孔吸附树脂可以是AB-8或H103；氢键键合型柱层析材料可以是聚酰胺。初步分离可有效去除大量杂质，为下一步柱层析得到高纯度产品奠定基础。
所述步骤(3)中的非极性反相层析材料可选用MDS；MDS可再生重复利用，如用95％乙醇淋洗柱体即可使材料再生。
本发明羟基红花黄色素A含量测定方法用HPLC测定(按外标法测定)。HPLC色谱条件为：流动相：甲醇∶乙睛∶0.25％磷酸＝33.5∶0.7∶65.8；色谱柱：Hypersil C18(4.0×250mm)；柱温：25℃；流速：1.0mL/min；测定波长：402nm，10u1进样。
与现有技术相比本发明具有如下优点：
(1)本发明精制工艺简单，提取效率高。按羟基红花黄色素A不同用途对纯度的要求，纯度可达85％～99.9％，提取率可达0.8％～1.5％。
(2)本发明使用溶剂安全无毒，价格低廉可回收再用，对环境无污染；
(3)本发明使用分离精制材料便宜，且易于洗脱再生，可多次利用；
总之，本发明羟基红花黄色素A的制备方法，不仅生产成本低、工艺简单、无污染，而且所得羟基红花黄色素A的收率高、纯度高，适合工业化生产。
具体实施方式：
实施例1
取0.4Kg干燥红花，用12Kg去离子水提取两次，提取温度60℃，提取时间45min，合并提取液，过滤，滤液60℃减压浓缩至约比重为1.10的水提液；水提液上聚酰胺柱分离(径高比为1∶20)，上样量为1∶3。先用去离子水淋洗3个柱体积，再用50％乙醇淋洗4个柱体积，收集淋洗液，60℃减压浓缩至比重为1.05得初步分离浓缩液；初步分离浓缩液上柱MDS-5(径高比为1∶10)，上样量为0.5∶1，先用10％乙醇淋洗2个柱体积，再用20％乙醇淋洗4个柱体积，收集20％醇淋洗液。薄层层析检测(展开剂为乙酸乙酯∶甲醇∶3.6％盐酸＝1∶3∶6)，合并含有羟基红花黄色素A单一斑点的淋洗液，60℃减压浓缩至比重为1.16，冷冻干燥即得橘黄色羟基红花黄色素A产物。以羟基红花黄色素A为对照品，用HPLC测得羟基红花黄色素A的含量为99.9％，收率为0.8％。
实施例2
取0.4Kg干燥红花，用15Kg去离子水提取两次，提取温度80℃，提取时间60min，合并提取液，过滤，滤液60℃减压浓缩至约比重为1.05的水提液；水提液上AB-8柱分离(径高比为1∶20)，上样量为1∶2。先用去离子水淋洗2个柱体积，再用30％乙醇淋洗4个柱体积，收集淋洗液，60℃减压浓缩至比重为1.10得初步分离浓缩液；初步分离浓缩液上柱MDS-5(径高比为1∶10)，上样量为1∶1，先用去离子水淋洗3个柱体积，再用30％乙醇淋洗4个柱体积，收集30％醇淋洗液，薄层层析检测，合并含有羟基红花黄色素A斑点的淋洗液，60℃减压浓缩至比重为1.10，冷冻干燥即得橘黄色羟基红花黄色素A产物。以羟基红花黄色素A为对照品，用HPLC测得羟基红花黄色素A的含量为92.％，收率为1.2％。
实施例3
取1Kg干燥红花，用30Kg去离子水提取两次，提取温度70℃，提取时间80min，合并提取液，过滤，滤液60℃减压浓缩至约比重为1.12的水提液；水提液上H103柱分离(径高比为1∶20)，上样量为1∶3。先用去离子水淋洗4个柱体积，再用40％乙醇淋洗4个柱体积，收集淋洗液，60℃减压浓缩至比重为1.10得初步分离浓缩液；初步分离浓缩液上柱MDS-5(径高比为1∶10)，上样量为2∶1，先用去离子水淋洗3个柱体积，再用40％乙醇淋洗3个柱体积，收集40％醇淋洗液，薄层层析检测，合并含有羟基红花黄色素A斑点的淋洗液，60℃减压浓缩至比重为1.12，冷冻干燥即得橘黄色羟基红花黄色素A产物。以羟基红花黄色素A为对照品，用HPLC测得羟基红花黄色素A的含量为86.％，收率为1.5％。