具有降低喜树碱类药物胃肠毒性的新型纳米微粒制剂.pdf

本发明属于医药技术领域，涉及具有降低喜树碱类药物胃肠毒性的新型纳米微粒制剂。其主要由治疗有效量的喜树碱类药物、载体基质、具有BCRP抑制作用的辅料和乳化剂组成。本发明提供的喜树碱类药物新型纳米微粒制剂，能够减少药物经由胆汁的代谢量，降低药物对胃肠道的刺激性，减小药物胃肠毒性。

权利要求书
1.  具有降低喜树碱类药物胃肠毒性的纳米微粒制剂，其组分包括：治疗有效量的喜树碱类药物、载体基质、具有BCRP抑制作用的辅料和乳化剂。

2.  根据权利要求1所述的具有降低喜树碱类药物胃肠毒性的纳米微粒制剂，其特征在于，各组分的重量百分比含量如下：
喜树碱类药物            0.01～10.0wt％
载体基质                3.0～75.0wt％
乳化剂                  0.5～70.0wt％
具有BCRP抑制作用的辅料  0.1～30.0wt％。

3.  根据权利要求2所述的具有降低喜树碱类药物胃肠毒性的纳米微粒制剂，其特征在于，各组分的重量百分比含量如下：
喜树碱类药物              0.01～10.0wt％
载体基质                  5.0～70.0wt％
乳化剂                    0.5～50.0wt％
具有BCRP抑制作用的辅料    0.5～27.5wt％。

4.  根据权利要求3所述的具有降低喜树碱类药物胃肠毒性的纳米微粒制剂，其特征在于，各组分的重量百分比含量如下：
喜树碱类药物              0.05～10.0wt％
载体基质                  5.0～70.0wt％
乳化剂                    0.5～30.0wt％
具有BCRP抑制作用的辅料    1.0～20.0wt％。

5.  根据权利要求1～4之一所述的具有降低喜树碱类药物胃肠毒性的纳米微粒制剂，其特征在于，所述的具有BCRP抑制作用的辅料选自D-alpha-生育酚及其包括维生素E琥珀酸聚乙二醇酯的衍生物、薄荷油、莪术油、鸭胆子油、柠檬烯、橄香烯和白术油中的一种或多种。

6.  根据权利要求1～4之一所述的具有降低喜树碱类药物胃肠毒性的纳米微粒制剂，其特征在于，所述的喜树碱类药物选自喜树碱、羟基喜树碱、脱氧喜树碱、拓扑替康、依立替康、伊立替康、贝洛替康、勒托替康、鲁比替康、7-乙基喜树碱、9-硝基喜树碱、7-乙基-10-羟基喜树碱、9-氨基喜树碱、10-羟基喜树碱、10-甲氧基喜树碱、18-羟基喜树碱和20-乙酰基喜树碱中的一种或多种。

7.  根据权利要求1～4之一所述的具有降低喜树碱类药物胃肠毒性的纳米微粒制剂，其特征在于，所述的载体基质选自固态脂类、注射用油、磷脂和聚合物材料中的一种或多种；
所述的固态脂类选自三酰甘油类、脂肪酸类、蜡质类和固醇类中的一种或多种；其中：三酰甘油类选自三棕榈酸甘油酯、三硬脂酸甘油酯、单硬脂酸甘油酯、山嵛酸甘油酯和二十二酸单/双/三甘油酯混合物中的一种或多种；脂肪酸类选自硬脂酸和棕榈酸中的一种或多种；蜡质类选自鲸蜡醇十六酸酯和鲸蜡醇棕榈酸酯中的一种或多种；固醇类选自胆固醇；
所述的注射用油选自天然植物油、包括中链三酸甘油酯的链长在C8～C10之间的脂肪酸甘油酯、油酸、亚油酸、肉豆蔻酸异丙酯、维生素E、维生素A和维生素酯类中的一种或多种；其中天然植物油选自大豆油、蓖麻油、花生油、红花油和橄榄油中的一种或多种；
所述的磷脂选自卵磷脂、大豆卵磷脂、氢化大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂、氢化卵磷脂、双肉豆蔻磷脂酸胆碱、双肉豆蔻磷脂酰甘油、二油酰磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酸、二棕榈酸磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、PEG衍生化磷脂酰乙醇胺和PEG衍生化磷脂酰丝氨酸中的一种或多种；
所述的聚合物材料选自葡聚糖、壳聚糖、聚乳酸、聚乳酸衍生物、聚氰基丙烯酸酯、聚氰基丙烯酸酯衍生物和聚乙二醇-聚(丙交酯-己内酯)中的一种或多种。

8.  根据权利要求7所述的具有降低喜树碱类药物胃肠毒性的纳米微粒制剂，其特征在于，所述的固态脂类选自三棕榈酸甘油酯、山嵛酸甘油酯、单硬脂酸甘油酯、硬脂酸和胆固醇中的一种或多种；
所述的注射用油选自中链三酸甘油酯、油酸、维生素E、大豆油和蓖麻油中的一种或多种；
所述的磷脂选自大豆卵磷脂、氢化大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂、氢化卵磷脂、磷脂酰乙醇胺和PEG衍生化磷脂酰乙醇胺中的一种或多种；
所述的聚合物材料选自葡聚糖、壳聚糖、聚乳酸、聚乳酸衍生物和聚乙二醇-聚(丙交酯-己内酯)中的一种或多种。

9.  根据权利要求1～4之一所述的具有降低喜树碱类药物胃肠毒性的纳米微粒制剂，其特征在于，所述的乳化剂选自磷脂类、脂肪酸山梨坦类、聚山梨酯类、聚氧乙烯聚氧丙烯共聚物类、聚氧乙烯脂肪酸酯类、聚氧乙烯脂肪醇醚类和聚乙二醇酯类中的一种或多种；其中磷脂类选自大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂和氢化卵磷脂中的一种或多种；脂肪酸山梨坦类选自Span60和Span80中的一种或多种；聚山梨酯类选自Tween60和Tween80中的一种或多种；聚氧乙烯聚氧丙烯共聚物类选自包括Poloxamer188、Poloxamer105、PluronicP85的Poloxamer系列中的一种或多种；聚氧乙烯脂肪酸酯类选自Myrj52和Myrj59中的一种或多种；聚氧乙烯脂肪醇醚类选自Brij30和Brij50中的一种或多种；聚乙二醇酯类选自Solutol HS15。

10.  根据权利要求9所述的具有降低喜树碱类药物胃肠毒性的纳米微粒制剂，其特征在于，所述的乳化剂选自大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂、Span60、Tween80、Poloxamer188、Pluronic P85和SolutolHS 15中的一种或多种。

11.  根据权利要求1～4之一所述的具有降低喜树碱类药物胃肠毒性的纳米微粒制剂，其特征在于，还可以包含0～30wt％的药学上可接受的辅料；其中所述的药学上可接受的辅料选自界面膜稳定剂、抗氧化剂、渗透压调节剂、pH调节剂、金属离子络合剂和防腐剂中的一种或多种。

12.  根据权利要求11所述的具有降低喜树碱类药物胃肠毒性的纳米微粒制剂，其特征在于，包含的药学上可接受的辅料的重量百分比含量为0～15wt％。

13.  根据权利要求11或12所述的具有降低喜树碱类药物胃肠毒性的纳米微粒制剂，其特征在于，其中所述的界面膜稳定剂选自丙三醇、丙二醇、甘露醇、油酸、油酸钠和胆固醇中的一种或多种；
所述的抗氧化剂选自亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、维生素C和维生素E中的一种或多种；
所述的渗透压调节剂选自氯化钠、葡萄糖、甘露醇、丙二醇和丙三醇中的一种或多种；
所述的pH调节剂包括：柠檬酸-柠檬酸钠、醋酸-醋酸钠、磷酸盐缓冲盐体系、NaOH溶液和HCl溶液；
所述的金属离子络合剂选自EDTA和乙二铵四乙酸二钠盐中的一种或多种；
所述的防腐剂选自苯扎溴铵、苯扎氯铵、对羟基苯甲酸酯类和山梨酸中的一种或多种。

说明书具有降低喜树碱类药物胃肠毒性的新型纳米微粒制剂
技术领域
本发明属于医药技术领域，涉及具有降低喜树碱类药物胃肠毒性的新型纳米微粒制剂。
背景技术
目前用于肿瘤治疗的喜树碱类药物(属细胞毒类药物)，具有明显的抗肿瘤活性，能够延长患者的生存时间，降低了死亡率，对消化道肿瘤、白血病、膀胱癌等活性更强。但由这些治疗引起的恶心、呕吐、腹泻等胃肠道毒性反应仍是患者获得治愈的限速步骤。其中如伊立替康(CPT-11)，为晚期大肠癌治疗的一线药物，CPT-11及其活性代谢物SN-38、SN-38G在体内消除途径主要经由胆汁排泄。当对不同的病人给予不同剂量的CPT-11时，其胆汁中CPT-11、SN-38及SN-38G的累积排泄量变化范围为25％～50％[1]。药物在胆汁的排泄量越多，对胃肠道的刺激性越强。其胃肠道反应主要表现为腹泻，临床应用中腹泻超过24小时者为40％，腹泻超过48小时者20％，急性腹泻者20％[2]。盐酸拓扑替康治疗小细胞肺癌的临床观察中胃肠道反应亦较为常见，表现为恶心(38％)、呕吐(28％)、腹泻(21％)[3]。羟基喜树碱治疗小细胞肺癌脑转移的临床观察中，恶心、呕吐发生率为30％，迟发性腹泻发生率为39％[4]。这些细胞毒类药物对胃肠粘膜中正常细胞的损伤常常会限制患者的治疗剂量、治疗持续时间，使患者的治疗变得复杂，并且在杀死癌细胞的同时，亦损伤了胃肠粘膜中的正常细胞，导致粘膜的吸收和屏障作用不能正常发挥。
目前肿瘤治疗药物常采用联合给药方式，以实现药物的协同或相加作用，达到更好的疗效，但其胃肠道毒副反应也随之加剧。据文献报道，羟基喜树碱联合甲酰四氢叶酸钙、氟尿嘧啶治疗晚期消化系统肿瘤临床观察中，治疗组胃肠道副作用更为明显，其中恶心、呕吐达55.56％，腹泻发生率为5.56％[5]；伊立替康联合5-氟尿嘧啶/亚叶酸钙治疗转移性结直肠癌患者，迟发性腹泻发生率为85％(1～4级)，其中3级为15％，4级为8％[6]。这些胃肠道毒副反应如恶心、呕吐、腹泻、腹痛等影响了肠道吸收营养物质，使肠缺少营养物质，胃肠道效应加重和延长，导致患者耐受性降低，且严重腹泻使病人因脱水或相关感染易出现生命危险。这大大限制了喜树碱类药物的用药剂量和治疗持续时间，使药物疗效下降。
目前常用的减小喜树碱类药物胃肠道毒性的方法有：1)协同给药。如化疗前半小时给胃复安，抑制延髓催吐化学感受区；或枢复灵4～8mg静脉注入，防止由化疗药引起的小肠5-羟色胺的释放；或化疗前给止吐、镇静剂；2)加强饮食护理，饮用大量含电解质的饮料，给予易消化、少油腻的清淡饮食，少食多餐，必要时允许进食辛辣调味品，以刺激食欲[3]。这些方法从一定程度上降低了胃肠道的毒性反应，但是这些辅助治疗在减少胃肠症状的同时会大大影响患者治疗期间的生活质量，同时影响患者的长期治疗。
近年研究表明，喜树碱类药物的代谢及排泄过程与乳腺癌耐药蛋白(BCRP)直接相关。BCRP是一种ATP结合盒高性能转运蛋白(基因标记ABCG2)，在胎盘合胞体滋养层顶膜、小肠内皮顶膜及肝-胆小管膜等部位都有高表达。喜树碱类药物是BCRP的底物，BCRP在肝-胆小管的表达与喜树碱类药物的高胆汁排泄量及其胃肠毒性密切相关。文献报道，协同给予BCRP的小分子抑制剂GF120918，可增加拓扑替康的血药浓度并提高口服生物利用度。这提示我们尝试抑制BCRP的活性对于减少喜树碱类药物经胆汁排泄量，降低药物胃肠毒性具有重要价值。目前发现的一些BCRP小分子抑制剂包括甲磺酰伊马替尼、雌酮、环孢菌素A、GF120918等。但这些抑制剂往往会产生目标活性以外的药理药效，或全身性的抑制BCRP活性，引起不可预测的系统性代谢改变，毒副作用大，因此在临床上难以推广使用。
传统的观点认为，药用辅料应该是惰性的，不应具有任何生理活性。但随着材料科学和药学的交叉发展，近些年，许多具有特殊功能的新辅料不断涌现。利用具有特殊功能的新辅料对于BCRP抑制作用的研究近几年也有见报道。如Pluronic P85及Tween 20[7]等可对BCRP产生抑制作用，这些辅料在抑制BCRP的同时具有毒副作用较小的优势。但此法需要使用的辅料量往往较大，易引起全身性的BCRP抑制作用，长期应用同样易引起安全性问题，基本不具备大规模临床应用的可能性。
综上可见，仅凭联用BCRP小分子抑制剂或功能性辅料抑制BCRP作用来降低喜树碱类药物的胃肠毒性，难以获得理想的效果。
参考文献：
[1]Lokiec F，Canal P，Gay C，et el.Pharmacokinetics of irinotecan and itsmetabolites in human blood，bile，and urine[J].Cancer ChemotherPharmacol，1995，36：79～82.
[2]秦凤平，马娟等.伊立替康(CPT-11)治疗晚期大肠癌引起腹泻的观察与护理[J].山东医药，2002，42(28)：58.
[3]张莉，战秀华等.盐酸拓扑替康治疗34例小细胞肺癌的临床疗效观察[J].中华肿瘤防治杂志，2006，13(4)：310～311.
[4]沙建华.羟基喜树碱治疗小细胞肺癌脑转移的临床观察[J].牡丹江医学院院报，2006，27(3)：27～28.
[5]刘国柱，王萍等.羟基喜树碱联合化疗治疗晚期胃癌近期疗效观察[J].滨州医学院学报，2006，29(2)：108～109.
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[7]Tetsuo Y，Hiroyuki K，Mariko M，et al.Improvement of the oral drugabsorption of topotecan through the inhibition of intestinal xenobioticefflux transporter，brest cancer resistance protein，by excipients[J].Drug metabolism and disposition，2007，35：1142-1148.
发明内容
本发明的一个目的是提供一种具有能够降低喜树碱类药物胃肠毒性的新型纳米微粒制剂。该制剂可减少药物经由胆汁的代谢量，降低药物对胃肠道的刺激性，提高临床疗效。
本发明的另一个目的是提供一种具有降低喜树碱类药物胃肠毒性的新型纳米微粒制剂的制备方法。
为实现上述目的，本发明技术方案提供了一种具有降低喜树碱类药物胃肠毒性的新型纳米微粒制剂，其组分包括：治疗有效量的喜树碱类药物、载体基质、具有BCRP抑制作用的辅料和乳化剂。
上述新型纳米微粒制剂的各组分的重量百分比含量如下：
喜树碱类药物              0.01～10.0wt％
载体基质                  3.0～75.0wt％
乳化剂                    0.5～70.0wt％
具有BCRP抑制作用的辅料    0.1～30.0wt％。
优选地，上述新型纳米微粒制剂的各组分的重量百分比含量如下：
喜树碱类药物              0.01～10.0wt％
载体基质                  5.0～70.0wt％
乳化剂                    0.5～50.0wt％
具有BCRP抑制作用的辅料    0.5～27.5wt％。
更优选地，上述新型纳米微粒制剂的各组分的重量百分比含量如下：
喜树碱类药物              0.05～10.0wt％
载体基质                  5.0～70.0wt％
乳化剂                    0.5～30.0wt％
具有BCRP抑制作用的辅料    1.0～20.0wt％。
所述的具有BCRP抑制作用的辅料为BCRP的底物或转录抑制剂，选自D-alpha-生育酚及其衍生物(包括维生素E琥珀酸聚乙二醇酯)、薄荷油、莪术油、鸭胆子油、柠檬烯、橄香烯和白术油中的一种或多种。
所述喜树碱类药物选自喜树碱、羟基喜树碱、脱氧喜树碱、拓扑替康、依立替康、伊立替康、贝洛替康、勒托替康、鲁比替康、7-乙基喜树碱、9-硝基喜树碱、7-乙基-10-羟基喜树碱、9-氨基喜树碱、10-羟基喜树碱、10-甲氧基喜树碱、18-羟基喜树碱和20-乙酰基喜树碱等喜树碱衍生物中的一种或多种。
所述的载体基质选自固态脂类、注射用油、磷脂和聚合物材料中的一种或多种。
其中，固态脂类选自下述各类的一种或多种：三酰甘油类，如三棕榈酸甘油酯、三硬脂酸甘油酯、单硬脂酸甘油酯、山嵛酸甘油酯、二十二酸单/双/三甘油酯混合物中的一种或多种；脂肪酸类，如硬脂酸、棕榈酸中的一种或多种；蜡质类，如鲸蜡醇十六酸酯、鲸蜡醇棕榈酸酯中的一种或多种；固醇类，如胆固醇。优选为：三棕榈酸甘油酯、山嵛酸甘油酯、单硬脂酸甘油酯、硬脂酸、胆固醇。
其中，注射用油选自下述中的一种或多种：天然植物油，如大豆油、蓖麻油、花生油、红花油、橄榄油中的一种或多种；链长在C8～C10之间的脂肪酸甘油酯(包括中链三酸甘油酯)；油酸；亚油酸；肉豆蔻酸异丙酯；维生素E；维生素A；维生素酯类。优选为：中链三酸甘油酯、油酸、维生素E、大豆油、蓖麻油。
其中，磷脂选自卵磷脂、大豆卵磷脂、氢化大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂、氢化卵磷脂、双肉豆蔻磷脂酸胆碱、双肉豆蔻磷脂酰甘油、二油酰磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酸、二棕榈酸磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、PEG衍生化磷脂酰乙醇胺和PEG衍生化磷脂酰丝氨酸等PEG衍生化磷脂中的一种或多种。优选为：大豆卵磷脂、氢化大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂、氢化卵磷脂、磷脂酰乙醇胺、PEG衍生化磷脂酰乙醇胺。
其中，聚合物材料选自葡聚糖、壳聚糖、聚乳酸、聚乳酸衍生物、聚氰基丙烯酸酯、聚氰基丙烯酸酯衍生物和聚乙二醇-聚(丙交酯-己内酯)中的一种或多种。优选为：葡聚糖、壳聚糖、聚乳酸、聚乳酸衍生物、聚乙二醇-聚(丙交酯-己内酯)。
所述的乳化剂选自下述各类中的一种或多种：磷脂类，如大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂、氢化卵磷脂中的一种或多种；脂肪酸山梨坦类，如Span60、Span80中的一种或多种；聚山梨酯类，如Tween60、Tween80中的一种或多种；聚氧乙烯聚氧丙烯共聚物类，如Poloxamer系列/Pluronic系列(包括Poloxamer188、Poloxamer105、Pluronic P85)中的一种或多种；聚氧乙烯脂肪酸酯类，如Myrj52、Myrj59；聚氧乙烯脂肪醇醚类，如Brij30、Brij50；聚乙二醇酯类，如Solutol HS15。优选为：大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂、Span60、Tween80、Poloxamer188(PluronicF68)、Pluronic P85、Solutol HS15。
本发明提供的具有降低喜树碱类药物胃肠毒性的新型纳米微粒制剂，进一步还可以包括0～30wt％，优选为0～15wt％的药学上可接受的辅料。
所述药学上可接受的辅料选自界面膜稳定剂、抗氧化剂、渗透压调节剂、pH调节剂、金属离子络合剂和防腐剂中的一种或多种。
其中，界面膜稳定剂的作用是形成稳定的界面膜包裹药物和形成纳米微粒，其选自丙三醇、丙二醇、甘露醇、油酸、油酸钠和胆固醇中的一种或多种。
由于磷脂、注射用油均易被氧化，根据需要，本发明所述的纳米微粒制剂中还含有抗氧化剂，其选自亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、维生素C和维生素E中的一种或多种。
根据需要，本发明的纳米微粒制剂可以加入渗透压调节剂，其选自氯化钠、葡萄糖、甘露醇、丙二醇和丙三醇中的一种或多种。
根据需要，本发明的纳米微粒制剂可加入pH调节剂，包括各类缓冲盐体系如柠檬酸-柠檬酸钠、醋酸-醋酸钠、磷酸盐剂等，以及NaOH溶液，HCl等碱和酸。
根据需要，本发明的纳米微粒制剂可加入金属离子络合剂，如EDTA或乙二铵四乙酸二钠盐等中的一种或多种。
根据需要，本发明的纳米微粒制剂可加入防腐剂，如苯扎溴铵、苯扎氯铵、对羟基苯甲酸酯类或山梨酸等中的一种或多种。
本发明的具有降低喜树碱类药物胃肠毒性的纳米微粒制剂制备方法可分为三种技术方案。
方案一：若载体基质含有固态脂类，本发明产品的制备方法为：将喜树碱类药物、固态脂类材料、注射用油、乳化剂(脂溶性)、具有BCRP抑制作用的辅料溶于有机溶剂中，然后通过减压旋转蒸发或真空干燥等方法除去有机溶剂，并加热至熔融，以构成有机相；将乳化剂(水溶性)、药学上可接受的辅料溶于注射用水中，水浴加热，以构成水相；在水浴中，搅拌或高剪切条件下将所述有机相和水相混合，以制备初乳；对初乳进行超声或高压均质处理，冷却后制得喜树碱类药物纳米微粒1。制得的喜树碱类药物纳米微粒可进行冻干或喷干处理或密封保存。
上述有机溶剂选自二氯甲烷、氯仿、丙酮、乙醇和异丙醇。
方案二：若载体基质为磷脂和/或胆固醇，本发明产品的制备方法为：将喜树碱类药物、磷脂、胆固醇、具有BCRP抑制作用的辅料溶于有机溶剂中，减压旋转蒸发除去溶剂，使溶质在瓶壁形成一层均匀的脂质薄膜，加入含乳化剂及药学上可接受辅料的水溶液水化，高速搅拌、高剪切或高压均质作用下即可形成喜树碱类药物纳米微粒2，上述纳米微粒可进行冻干或喷干处理或密封保存。
所述有机溶剂同技术方案一中所述。
方案三：若载体基质为聚合物材料，本发明产品的制备方法可分为二类：
(1)取水不溶性聚合物、喜树碱类药物及具有BCRP抑制作用的辅料加有机溶剂溶解，在搅拌或剪切作用下，加入含乳化剂及药学上可接受辅料的水溶液，使成初乳，对初乳进行超声或高压均质处理，于水浴中搅拌或减压蒸发除去有机溶剂，即得喜树碱类药物纳米微粒3-1。
(2)取水溶性聚合物、药学上可接受的辅料加注射用水溶解(可加入少量有机溶剂，采用搅拌等方式)，将喜树碱类药物、具有BCRP抑制作用的辅料及乳化剂用有机溶剂溶解，并旋转蒸发或水浴除去有机溶剂，在搅拌或剪切作用下，加入聚合物水溶液，使成初乳，对初乳进行超声或高压均质处理，于水浴中搅拌或减压蒸发除去有机溶剂，即得喜树碱类药物纳米微粒3-2。
纳米微粒3-1、3-2可进行冻干或喷干处理或密封保存。
上述三种技术方案中得到的纳米微粒可以直接作为制剂使用，也可进一步制成其他制剂。将其冻干制成冻干制剂时，冻干支撑剂选自右旋糖酐、甘露醇、乳糖、蔗糖和海藻糖中的一种或多种；将其喷雾干燥成粉末时，喷干支撑剂选自甘露醇、乳糖、淀粉、蔗糖、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)和羟丙基甲基纤维素(HPMC)中的一种或多种。
本发明提供的具有降低喜树碱类药物胃肠毒性的纳米微粒制剂有益效果表现为：①本发明加入特异性具有抑制BCRP作用的辅料。喜树碱类药物包裹于纳米微粒中，以制剂形式运载至肝-胆小管，其特异性的辅料可在肝-胆小管局部发挥抑制BCRP的作用，减少药物经胆汁的排泄量。由于纳米微粒制剂中采用具有BCRP抑制作用的辅料用量较少，且高浓度作用于局部，因此不会对正常脏器产生副作用。可避免因胃肠副作用中断治疗。②纳米微粒制剂中特异性辅料具有抑制BCRP的作用，在降低药物经胆汁排泄量的同时可提高喜树碱类药物的生物利用度，增加药物的抗肿瘤作用。③纳米微粒制剂的EPR效应(肿瘤组织血管生长迅速，外膜细胞缺乏，基底膜变形，淋巴管道回流系统缺损)，使微粒可以穿透肿瘤血管内皮细胞进入肿瘤组织，提高化疗药物在肿瘤细胞内的浓度，最大限度的发挥抗肿瘤药物的药效。
总之，本发明提供的纳米微粒制剂含有特异性BCRP抑制作用的辅料，该新型纳米微粒制剂具有如下优点：
(1)本发明的纳米微粒制剂中含有对BCRP起到特异性抑制作用的辅料，可在局部高浓度抑制BCRP的作用，减少药物经胆汁的排泄量，降低喜树碱类药物的胃肠毒性。
(2)本发明的纳米微粒制剂采用具有BCRP抑制作用的辅料用量较少，且纳米微粒可以整体形式运载至肿瘤或肝-胆小管，在发挥抑制作用的同时可避免引起全身性的BCRP抑制作用及对其它组织器官的毒性，提高了安全性。
(3)本发明的纳米微粒制剂可以解决大多数喜树碱类药物存在的水溶性差，理化性质不稳定等缺陷。并且通过EPR(Enhance Permeabilityand Retention)效应对肿瘤组织产生被动靶向性，提高肿瘤治疗的药效。
(4)相对于未加入抑制BCRP辅料的普通纳米粒，本发明的纳米微粒制剂在具有普通纳米粒缓释药物、缓慢代谢、提高生物利用度的同时，利用特异性辅料对于BCRP的抑制作用，有目的的减少药物经胆汁的排泄量，降低喜树碱类药物的胃肠毒性。
附图说明
图1为羟基喜树碱注射液及本发明实施例1纳米微粒制剂经胆汁代谢图。
图2为伊立替康注射液(CPT-11)及本发明实施例3纳米微粒制剂经胆汁代谢图。
图3为伊立替康注射液(CPT-11)及本发明实施例5纳米微粒制剂经胆汁代谢图。
图4为BCRP小分子抑制剂环孢菌素A及本发明实施例2纳米微粒制剂对羟基喜树碱经胆汁代谢的影响。
图5为未加入BCRP抑制剂的纳米粒制剂及本发明实施例6纳米微粒制剂中羟基喜树碱经胆汁的累积代谢量。
具体实施方式
制备实施例
实施例1
  组成  成分  含量  喜树碱类药物   载体基质   乳化剂  具有BCRP抑制作用的辅料  药学上可接受的辅料  羟基喜树碱  单硬脂酸甘油酯   中链三酸甘油酯  大豆磷脂  橄香烯  油酸钠  7.6wt％  42.0wt％   8.6wt％  10.3wt％  27.5wt％  4.0wt％
制备方法：取处方量的羟基喜树碱、单硬脂酸甘油酯、中链三酸甘油酯(MCT)、大豆磷脂、橄香烯加入适量乙醇溶解，旋转蒸干有机溶剂，真空干燥，80℃加热溶解作为油相。将油酸钠溶于注射用水中，加热至80℃作为水相。在80℃搅拌下将水相趁热滴入油相，通N2条件下于高剪切均质机制备初乳，80℃通N2条件下高压均质处理，冷却后制得羟基喜树碱纳米微粒，分装后冻干，即得羟基喜树碱纳米微粒冻干制剂。
平均粒径(Particle size)＝112.4±31.1nm；多分散系数(PI)＝0.114
实施例2
  组成  成分  含量  喜树碱类药物  载体基质   乳化剂   羟基喜树碱  硬脂酸  大豆磷脂   Poloxamer-188  0.7wt％  64.2wt％  22.4wt％   5.0wt％
  具有BCRP抑制作用的辅料  药学上可接受的辅料  柠檬烯  丙三醇  2.0wt％  5.7wt％
制备方法：按处方量称取羟基喜树碱、柠檬烯、大豆磷脂和硬脂酸，在通氮气条件下加热至(80±5)℃，然后在搅拌条件下加入相同温度含丙三醇和Poloxamer-188的水溶液，制成粗乳；在(80±5)℃通氮气条件下在高压乳匀机上4114MPa压力下乳匀5次，充氮气分装后，迅速冷却形成羟基喜树碱纳米微粒，分装后冻干，即得羟基喜树碱纳米微粒冻干制剂。
Particle size＝201.0±15.9nm；PI＝0.102
实施例3
  组成  成分  含量  喜树碱类药物  载体基质   乳化剂   具有BCRP抑制作用的辅料  药学上可接受的辅料  CPT-11  单硬脂酸甘油酯  蛋黄卵磷脂   Tween 80  莪术油  油酸钠  0.4wt％  40.0wt％  10.0wt％   29.5wt％  12.0wt％  8.1wt％
制备方法：称取处方量的CPT-11、单硬脂酸甘油酯、莪术油、Tween80、蛋黄卵磷脂加入适量乙醇溶解，旋转蒸干除去有机溶剂，真空干燥，80℃加热溶解作为油相。将油酸钠溶于注射用水中，加热至80℃作为水相。在80℃搅拌下将水相滴入油相，通N2条件下于高剪切均质机制备初乳，80℃通N2条件下高压均质处理，冷却后制得伊立替康纳米微粒，分装后冻干，4℃贮存，即得伊立替康纳米微粒冻干制剂。Particle size＝123.6±21.0nm；PI＝0.124
实施例4
  组成 成分  含量  喜树碱类药物  载体基质  载体基质/乳化剂  具有BCRP抑制作用的辅料 9-硝基喜树碱 胆固醇 大豆磷脂 维生素E琥珀酸聚乙二醇酯  1.0wt％  15.0wt％  65.0wt％  19.0wt％
制备方法：准确称取处方量的9-硝基喜树碱、大豆磷脂、胆固醇，加入氯仿-甲醇混合溶剂(2∶1，V/V)适量，使其完全溶解并转移至茄形瓶中。25℃恒温水浴减压蒸发除去有机溶剂，使药物和脂质在瓶壁上形成均匀薄膜。茄形瓶置真空干燥箱内真空干燥过夜，加入一定量含有维生素E琥珀酸聚乙二醇酯的0.05mol/L磷酸盐缓冲液(pH＝5.5)，55℃水浴使脂质膜脱落，得浅黄色混悬液；冰浴下探头超声5s，间歇3s，重复60次，功率160W；过孔径为0.45μm微孔滤膜，得9-硝基喜树碱纳米微粒，分装后冻干，即得9-硝基喜树碱纳米微粒冻干制剂。
Particle size＝91.7±21.3nm；PI＝0.176
实施例5：
  组成  成分  含量  喜树碱类药物  载体基质  载体基质/乳化剂  具有BCRP抑制作用的辅料  药学上可接受的辅料  CPT-11  胆固醇  卵磷脂  鸭胆子油  甘露醇  0.9wt％  10.0wt％  45.0wt％  5.0wt％  39.1wt％
制备方法：取处方量的CPT-11、卵磷脂、胆固醇、鸭胆子油置圆底烧瓶中，加入乙醇，使上述混合物完全溶解成澄明溶液，置恒温水浴减压干燥成膜，加入含甘露醇的水溶液溶解膜，用超声仪超声粉碎，得CPT-11纳米微粒。分装后冻干，即得CPT-11纳米微粒冻干制剂。
Particle size＝86.7±15.6nm；PI＝0.211
实施例6
  组成  成分  含量  喜树碱类药物  载体基质  乳化剂  具有BCRP抑制作用的辅料  10-羟基喜树碱  葡聚糖  Poloxamer-188  白术油  3.0wt％  75.0wt％  17.0wt％  5.0wt％
制备方法：称取葡聚糖、Poloxamer-188溶于水中，用1M NaOH溶液调节pH值为9.32，将此水溶液缓缓注入含白术油的丙酮中，磁力搅拌，70℃水浴加热。称取10-羟基喜树碱于水中，滴加NaOH溶液调节pH值为9.5。将此液加入上述水溶液中，用浓度为HCl调pH值为6.84，溶液颜色变浅，可见大量细小混浊产生，将混合液超声振荡5min，静置于室温下24h，高速2000rpm离心15min，弃去上清液，加新鲜蒸馏水洗涤2次，得10-羟基喜树碱葡聚糖纳米微粒。分装后密封保存，即得10-羟基喜树碱纳米微粒混悬制剂。
Particle size＝223.5±32.1nm；PI＝0.225
实施例7
  组成  成分  含量
  喜树碱类药物  载体基质  乳化剂  具有BCRP抑制作用的辅料  7-乙基-10-羟基喜树碱  聚乳酸  聚乙二醇硬脂酸酯(Solutol HS15)  薄荷油  9.0wt％  63.0wt％  7.0wt％  21.0wt％
制备方法：将7-乙基-10-羟基喜树碱、聚乳酸、薄荷油溶于三氯甲烷-无水乙醇溶液中，50℃旋转蒸发，在瓶壁上得到干燥的聚合物薄膜，将此聚合物薄膜置于60℃水浴中预热至透明胶状，加入60℃含有Solutol HS15的注射用水和玻璃珠若干枚，60℃搅拌分散混悬30min，超声10min，形成载药亚微粒分散液，过0.45μm的微孔滤膜，去除未包裹的药物结晶及聚合物聚集体。即得7-乙基-10-羟基喜树碱纳米微粒制剂。以甘露醇为支撑剂经喷雾干燥后分装保存，可进一步制得7-乙基-10-羟基喜树碱纳米微粒喷干制剂。
Particle size＝201.2±21.4nm；PI＝0.204
实施例8
  组成  成分  含量  喜树碱类药物  载体基质  乳化剂  具有BCRP抑制作用的辅料  喜树碱  聚乙二醇-聚(丙交酯-己内酯)  Tween 60  莪术油  0.60wt％  20.0wt％  70.0wt％  9.40wt％
制备方法：取喜树碱和聚乙二醇(5000)-聚(丙交酯-己内酯)聚合物、莪术油溶解在四氢呋喃和二甲亚砜的体积比例为4/1的混合溶剂中，充分溶解之后倒入滴液漏斗中，缓慢滴入Tween60的水中(滴加速度为6～10秒/滴)，滴完之后，继续搅拌2h(600～800转/分钟)，倒入透析袋中，透析24h，每隔1h，2h，2h，3h，4h，6h，12h换水，透析之后的样品过滤，滤液离心分离，除去游离的喜树碱，得到的产品重新用水分散，即得喜树碱聚乙二醇-聚(丙交酯-己内酯)纳米微粒制剂。以蔗糖为支撑剂经喷雾干燥后分装保存，可进一步制得喜树碱纳米微粒喷干制剂。
药理实施例
药物胆汁代谢研究：
(1)取SD大鼠随机分组，每组3只，腹腔注射20％乌拉坦麻醉，沿腹中线于剑突下划开腹部肌层约1cm做胆管插管，分别尾静脉注射实施例1，3，5纳米微粒制剂，羟基喜树碱注射液，CPT-11注射液。并于给药后预设时间段收集胆汁，胆汁样品经处理后HPLC测定。
羟基喜树碱(HCPT)测定色谱条件为：色谱柱：十八烷基键合硅胶柱(150×4.6mm，5μm)；流动相：甲醇-0.05M醋酸胺(冰醋酸调节pH 6.0)(45∶55)；检测波长：382nm；流速：1.0ml/min。
CPT-11测定色谱条件为：十八烷基键合硅胶柱(150×4.6mm，5μm)；流动相：乙腈-0.05M磷酸二氢钾含0.01M辛烷磺酸钠溶液(磷酸调节pH3.0)(22∶78)；检测波长：370nm；流速：1.0ml/min。
结果见图1-3。结果表明，实施例1，3，5纳米微粒制剂显著降低了喜树碱类药物经胆汁的代谢量，为制剂减小喜树碱类药物胃肠毒性提供了基础。
(2)考察BCRP小分子抑制剂环孢菌素A(CsA)及未加入具有BCRP抑制作用辅料的纳米微粒对药物胆汁代谢的影响。
取SD大鼠随机分组，每组3只，胆管插管后分别经尾静脉注射HCPT注射液、含CsA的HCPT注射液、实施例2纳米微粒；实施例6纳米微粒及实施例6中未加入具有BCRP抑制作用辅料(白术油)的纳米微粒。并于给药后预设时间段收集胆汁，胆汁样品经处理后按上述HPLC色谱条件下测定。
结果见图4-5。结果表明，CsA由于抑制了BCRP的活性，可降低HCPT经胆汁的排泄量；未加入具有BCRP抑制作用辅料的纳米微粒由于可在一定程度上改变药物的组织分布，具有减缓HCPT经胆汁代谢量的作用。而本发明纳米微粒制剂(如实施例2，6纳米微粒)可在二者基础上显著降低药物经胆汁的代谢量，大大提高了制剂降低喜树碱类药物胃肠毒性的作用。
药物对小鼠胃肠蠕动功能的影响：以胃肠蠕动功能实验考察本发明纳米微粒制剂对小鼠腹泻作用的影响。取KM小鼠随机分组，每组6只，每隔一天尾静脉注射实施例1，3，5纳米微粒制剂，羟基喜树碱(HPCT)注射液，CPT-11注射液及生理盐水，连续给药五次，并于最后一次尾静脉注射10分钟后，经口灌入亚甲蓝溶液0.2ml，经30分钟后处死小鼠，打开腹腔，将肠管轻拉成直线，自幽门起测量肠管全长及亚甲蓝移动长度，计算移动比(移动比＝亚甲蓝移动长度/肠管全长)。结果见表1-2。
表1HCPT注射液及本发明纳米微粒制剂对小鼠胃肠蠕动的影响
  实验组  绝对长度(cm)  移动比(％)  生理盐水组  HPCT注射液组  实施例1组  52.0±2.1  53.1±1.7  50.6±2.4  47.8±3.4  62.5±3.2*  52.0±4.4
*P＜0.05
表2CPT-11注射液及本发明纳米微粒制剂对小鼠胃肠蠕动的影响
  实验组  绝对长度(cm)  移动比(％)
  生理盐水组  CPT-11注射液组  实施例3组  实施例5组  52.0±2.1  51.1±2.0  48.9±4.7  50.6±3.1  47.8±3.4  59.8±2.7*  51.0±5.3  52.2±5.0
*P＜0.05。
结果表明，羟基喜树碱注射液及CPT-11注射液显著增加了小鼠的胃肠蠕动速率，致小鼠腹泻率提高，胃肠副作用明显。实施例1，3，5的纳米微粒制剂经尾静脉注射给药后小鼠的胃肠蠕动速率与阴性对照组(生理盐水)无显著性差异，可明显降低喜树碱类药物的胃肠副作用。