一种栀子总苷提取物及其制备方法.pdf

本发明公开了一种栀子总苷提取物，其特征在于：含有栀子苷和京尼平－1－β－D－龙胆双糖苷，其中栀子苷含量为45％－90％，京尼平－1－β－D－龙胆双糖苷含量为5％－30％，其中栀子总苷以栀子苷、京尼平－1－β－D－龙胆双糖苷含量计大于等于50％且小于100％；优选为栀子苷含量为50％－80％，京尼平－1－β－D－龙胆双糖苷含量为5％－25％，其中栀子总苷以栀子苷、京尼平－1－β－D－龙胆双糖苷含量计大于等于55％且小于100％。药理实验表明，本申请栀子总苷提取物具有更好的药理作用。

权利要求书
1、  一种栀子总苷提取物，其特征在于：含有栀子苷和京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷，其中栀子苷含量为45％-90％，京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷含量为5％-30％，其中栀子总苷以栀子苷、京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷含量计大于等于50％且小于100％。

2、  根据权利要求1所述的栀子总苷提取物，其中栀子苷含量为50％-80％，京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷含量为5％-25％，其中栀子总苷以栀子苷、京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷含量计大于等于55％且小于100％。

3、  根据权利要求1或2所述的一种栀子总苷提取物制备治疗和/或预防脑血管疾病、抑菌、抗病毒、抗炎药物中的应用。

4、  根据权利要求1或2所述的一种栀子总苷提取物，其特征在于制备方法：
取栀子用乙醇溶液提取得到乙醇提取液，浓缩至无醇味；浓缩液调节PH值至5.0-10；将溶液经非极性或弱极性大孔树脂柱层析分离，非极性或弱极性大孔树脂柱为HPD-100、100A、300、400、400A、450或D101、1300-I、1400、AB-8中的一种；先用水除去杂质，再用6％-30％浓度的乙醇洗脱，收集含有栀子苷和京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷部分的洗脱液；或先用水、1％-5％稀乙醇洗脱除去杂质，再用6％-30％浓度的乙醇洗脱，收集含有栀子苷和京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷部分的洗脱液；或先用水、3％-5％稀乙醇洗脱，除去杂质，再用10％-20％浓度的乙醇洗脱，收集含有栀子苷和京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷苷部分的洗脱液；洗脱液浓缩干燥即得。

5、  根据权利要求1或2所述的一种栀子总苷提取物，其特征在于分析方法：
高效液相色谱条件为：色谱条件与系统适应性实验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流速1.0ml/min；柱温35℃；检测波长238nm；以乙腈-水体积比＝10∶90为流动相；
栀子苷对照品溶液的配制：精密称取栀子苷对照品到容量瓶中，加甲醇溶解摇匀，并定容至刻度；
京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷对照品溶液的配制：精密称取京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷对照品到容量瓶中，加甲醇溶解摇匀，并定容至刻度；
供试品溶液的配制：精密称取样品，预处理后加到容量瓶中加甲醇溶解摇匀，并定容至刻度；
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液，注入液相色谱仪，记录60分钟的色谱图，按外标法以峰面积计算，即得。

6、  根据权利要求4所述的一种栀子总苷的提取物，其中制备方法中大孔树脂洗脱液可以加入有机溶剂乙醇或丙酮提取，提取液浓缩至干。

说明书一种栀子总苷提取物及其制备方法
技术领域
本发明涉及中药技术领域，具体涉及一种栀子总苷提取物物及其制备方法。
背景技术
栀子又名山栀子，是茜草科植物山栀Gardenia jasminoides Ellis.的果实，性苦寒，无毒。栀子始载于《神农本草经》，具有利胆、促胰腺分泌、降压、镇静、降温、抗菌抗炎作用。栀子中主要含有环烯醚萜苷类、有机酸类、栀子黄色素类等。栀子环烯醚萜苷类化合物包括栀子苷、京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷、栀子酸、羟异栀子苷等，其中栀子苷、京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷是很好的活性成分：中国专利CN1660198A公开了栀子环烯醚萜苷用于治疗胆囊炎、胆结石症；中国专利CN1460483A公开了栀子环烯醚萜苷用于治疗脑血管疾病；中国专利CN1546507A公开了栀子苷类用于心脑血管疾病；中国专利CN1689581A公开了栀子苷用于病毒性疾病；文献资料【郑占虎等编著，中药现代研究与应用，第四卷，学苑出版社，1998，3174】报道了栀子苷类具有保肝、促胆汁胰腺分泌、镇痛、抗炎等作用；因此，栀子提取物应以栀子苷和京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷为指标，确定其质量。
现在栀子提取物主要有两种：一种为高纯度的栀子苷，为单一个化合物。多采用硅胶柱层析、氧化铝、活性炭、重结晶等方法制备【唐传劲等，栀子苷简易分离纯化方法，中国民族民间医药杂志，2005，77，360；张丽茹等，栀子中京尼平苷的分离及其含量测定，中草药，2004，35(11)，1253；CN1706858A】。另一种为栀子环烯醚萜苷提取物，对栀子苷或栀子环烯醚萜苷类总量进行测定，而对栀子的另一主要活性成分京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷未没有进行含量确定，从而造成栀子提取物质量不均一，其实质还是混合物，物质基础不明确，其组成成分与相互比例因方法而异，不具有普遍性及广泛的适用性。
现有技术中栀子总苷提取物的提取纯化方法多采用大孔树脂方法：(1)水洗脱后直接以高浓度乙醇洗脱，这种方法不仅无法去除极性稍强于栀子苷的环烯醚萜苷类成分，而且弱极性杂质残留很多【吕茂平等，大孔树脂对栀子苷分离效果的研究，中草药，2002，33(9)，794；姚平等，大孔吸附树脂纯化栀子中总环烯醚萜苷和栀子苷的研究，中草药，2006，37(1)，57；陈钢等，大孔吸附树脂纯化注射用栀子提取物的研究，中国中药杂志，2005，30(3)，188；金日显等，大孔吸附树脂法富集栀子中栀子苷的工艺研究，中国实验方剂学杂志，2005，11(3)，1】；(2)经水洗或低浓度乙醇洗脱除杂后再用高浓度乙醇洗脱，一般所谓低浓度乙醇为30％，大部分栀子苷已经被当作杂质除掉，因此实际上无法获得高质量的栀子总苷提取物【中国专利CN1546507A】；(3)水洗后，采用10％乙醇洗脱除杂，再用低浓度乙醇20-30％洗脱获得【中国专利CN1706859A】，这种方法得到的栀子提取物中除了环烯醚萜苷类，还含有有机酸类化合物，如绿原酸、异绿原酸等，水和10％乙醇只能洗脱下部分有机酸类，另外10％乙醇把京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷、部分栀子苷都洗脱下来，因此无法得到高含量、高产率既含有栀子苷又含有京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷的栀子提取物；因此现有技术没有一种获得含有高含量栀子苷、京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷提取物的方法，一定程度上局限了活性物质栀子总苷在医药领域的应用。
发明内容
本发明是将栀子总苷提取物的标准提高；
本申请栀子总苷提取物为组分有效部位；
组分有效部位：我们认为首先应将方法来源的有效部位研究清楚，通过对各成分的药效筛选、量效关系与药物代谢研究，优选出强效活性成分，保留中等活性成分，筛除低效或无效成分，将强效活性与中等活性组成优选的有效部位即组分有效部位；对组分有效部位进行比例优选研究，从而确定组分有效部位的组成和比例，也即标准有效部位，该有效部位不但物质基础清楚，而且具有显著的生物活性，这种标准有效部位既是组分有效部位。
栀子总苷提取物，含有栀子苷和京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷，其中栀子苷含量为45％-90％，京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷含量为5％-30％，栀子总苷以栀子苷、京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷含量计大于等于50％且小于100％。
栀子总苷提取物，其中栀子苷含量为50％-80％，京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷含量为5％-25％，栀子总苷以栀子苷、京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷含量计大于等于55％且小于100％。
本申请栀子总苷提取物可以按照本申请工艺方法制备得到；
或栀子苷按照现有技术得到、京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷按照现有技术得到，再按照上述本申请标准提取物的质量标准混合得到本申请栀子总苷标准提取物；
栀子总苷提取物制备治疗和/或预防脑血管疾病、抑菌、抗病毒、抗炎药物中的应用。
一、制备方法
取栀子用乙醇溶液提取得到乙醇提取液，浓缩至无醇味；浓缩液调节PH值至5.0-10；将溶液经非极性或弱极性大孔树脂柱层析分离，非极性或弱极性大孔树脂柱为HPD-100、100A、300、400、400A、450或D101、1300-I、1400、AB-8中的一种；先用水除去杂质，再用6％-30％浓度的乙醇洗脱，收集含有栀子苷和京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷部分的洗脱液；或先用水、1％-5％稀乙醇洗脱除去杂质，再用6％-30％浓度的乙醇洗脱，收集含有栀子苷和京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷部分的洗脱液；或先用水、3％-5％稀乙醇洗脱，除去杂质，再用10％-20％浓度的乙醇洗脱，收集含有栀子苷和京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷苷部分的洗脱液；洗脱液浓缩干燥即得。
或者将上述洗脱液加入有机溶剂乙醇或丙酮提取，提取液浓缩至干。
本申请制备栀子总苷的方法区别现有技术的方法在于：
1、栀子中除了环烯醚萜苷类，还含有有机酸类，包括绿原酸、异绿原酸等。提取液中有分子状态的有机酸、也有离子状态的有机酸。未经调节PH值，提取液直接进行大孔树脂柱层析，水能洗脱下离子状态的有机酸类，10％～30％的乙醇能洗脱下分子状态的有机酸类，但是和栀子苷等混在一起，被洗脱下来，降低了提取物中栀子苷等的含量。提取液调节PH值后有机酸转化成离子状态，进行大孔树脂柱层析，水或低浓度乙醇就可以把其洗脱下来，保障了成品中栀子苷、京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷的含量，减少了杂质的存在。
2、栀子的环烯醚萜苷类除了含有栀子苷、京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷，还含有其他环烯醚萜苷化合物，如栀子酸、羟基栀子苷等。大孔树脂纯化时，已有方法基本采用约30％乙醇洗脱，使所有的栀子环烯醚萜苷类化合物都洗脱下来，无法得到高含量的含有栀子苷、京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷的提取物。我们经过研究，惊奇地发现，栀子环烯醚萜苷类化合物之间极性也有很大的差别，大孔树脂柱层析时，采用1％～5％的乙醇可以把除栀子苷、京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷外大部分栀子环烯醚萜苷类化合物洗脱下来，5％～30％的乙醇可以把栀子苷、京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷一起洗脱下来。经过低浓度1％～5％乙醇的洗脱后，再得到的栀子提取物中，栀子苷、京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷含量较高。
3、经过上述柱层析后栀子提取物中，仍含有部分糖类、大极性的化合物。这些化合物难溶于有机溶剂。为了进一步提高提取物含量，又保证提取物的的得量，我们采用乙醇或丙酮溶解处理柱层析后的样品，浓缩干燥后得到的栀子提取物含量得到进一步提高。当然乙酸乙酯、乙醇或丙酮的混合溶剂都可以选择使用。
二、检测分析方法
高效液相色谱条件为：色谱条件与系统适应性实验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流速1.0ml/min；柱温35℃；检测波长238nm；以乙腈-水体积比＝10∶90为流动相；
栀子苷对照品溶液的配制：精密称取栀子苷对照品到容量瓶中，加甲醇溶解摇匀，并定容至刻度；
京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷对照品溶液的配制：精密称取京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷对照品到容量瓶中，加甲醇溶解摇匀，并定容至刻度；
供试品溶液的配制：精密称取样品，预处理后加到容量瓶中加甲醇溶解摇匀，并定容至刻度；
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液，注入液相色谱仪，记录60分钟的色谱图，按外标法以峰面积计算，即得。
实验结果见表1：
表1不同栀子提取物含量测定  组别  栀子苷含量  京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷含量  现有技术栀子提取物  本申请栀子总苷提取物1  32.7-41.9  45-90  没有或3-5.6  5-30  本申请栀子总苷提取物2  50-80  5-25
实验结论：通过上述实验表明，本申请栀子总苷提取物质量稳定，有效成分均一，是质量可控的标准化提取物。
三、药理实验
1、抗菌实验研究
实验药物：本申请栀子总苷标准提取物，北京本草天源药物研究院实验室提供；现有技术栀子提取物，北京本草天源药物研究院实验室按照文献方法制备【吕茂平等，大孔树脂对栀子苷分离效果的研究，中草药，2002，33(9)，794】。
实验动物：Wistar大鼠，体重190-230g；
菌种：金黄色葡萄球菌、肺炎球菌、流感嗜血杆菌、大肠杆菌；
实验方法：大鼠分组，雌雄各半，上述不同方案组药物灌胃给药2次/日，每次给药量为100mg/kg，共5次，末次给药后2小时，ip戊巴比妥钠35mg/kg麻醉，腹主动脉无菌采血，注入无菌负压采血管，凝固后离心分离血清，新华1号滤纸片制备无菌的小圆片，分装于无菌小瓶内，取上述血清加入小瓶中，浸泡1小时，置零下20℃冰箱保存。
菌种复活后，分别在MHA平板及MHA血平板上纯培养15小时，用无菌生理盐水洗取菌落，用无菌棉签取菌液均匀涂布于平板表面，待平板略干后，在标记位置上贴上上述不同方案的滤纸片，放入37℃温箱24小时取出，摄像机摄像，图象分析仪测量抑菌圈直径，实验结果见表2：
表2不同方案组血清纸片抗菌实验结果  组别  金黄色葡萄球菌抑  菌直径  mm  肺炎球菌抑菌直径  mm  流感嗜血杆菌抑菌  直径  mm  大肠杆菌抑菌直径  mm  空白纸片  空白血清  现有技术栀子提取  物  0  0  1.97±0.19  0  0  2.09±0.32  0  8.65±0.31  11.04±0.26*  0  6.25±0.57  8.03±0.30*  本申请栀子总苷标  准提取物  2.51±0.27  2.85±0.29  12.57±0.40*  9.03±0.50*
注：与空白血清组比较**P＜0.01，*P＜0.05；
2、抗病毒实验研究
实验药物：本申请栀子总苷标准提取物，北京本草天源药物研究院实验室提供；现有技术栀子提取物，北京本草天源药物研究院实验室按照文献方法制备【姚平等，大孔吸附树脂纯化栀子中总环烯醚萜苷和栀子苷的研究，中草药，2006，37(1)，57；】。
采用半体内法作抗病毒作用试验
(1)对甲型流感病毒的影响：实验采用半体内法，不同方案组、正常对照组及空白对照组，将不同药物相同浓度分别与病毒直接作用，立即接种于鸡胚尿囊腔中，用石蜡封接种孔，置37℃孵箱培养48h，收取每胚之尿液，用0.5％鸡红血球凝集试验，判断药物的抗病毒活性，结果见表3：
(2)对乙型流感病毒的影响：接种方法、药物剂量同甲型流感病毒实验。结果见下表3。
表3对流感病毒的作用比较  组别  甲型流感病毒  乙型流感病毒  空白对照  正常对照  现有技术栀子提取物  -  +++  ++  -  +++  ++  本申请栀子总苷标准提取物  +-  +-
注：-代表无病毒生长，+-代表少量病毒生长，++代表较多病毒生长，+++代表大量病毒生长
3、抗炎试验
实验药物：本申请栀子总苷标准提取物，北京本草天源药物研究院实验室提供；现有技术栀子提取物，北京本草天源药物研究院实验室按照文献方法制备【金日显等，大孔吸附树脂法富集栀子中栀子苷的工艺研究，中国实验方剂学杂志，2005，11(3)，1】。
实验方法：取昆明种小鼠，体重20-22g，雌雄不分，分为生理盐水组、上述不同方案组，尾静脉给药，给药量150mg/kg，每天给药一次，连续给药7天，于末次给药30分钟后，用二甲苯棉球接触小鼠左耳约5s，15分钟后脱颈椎处死，以打孔器将小鼠双耳相同部位等面积切下，用电子天平精确称重，以左耳重减右耳重为小鼠的耳肿胀度，并求出抑制率。实验结果见表4：
表4不同方案抗炎实验结果  组别  耳肿胀度  10-4g  抑制率  ％  生理盐水组  现有技术栀子提取物  125.79±30.05  109.31±20.71  -  15.08  本申请栀子总苷标准提取物  98.03±19.59*  22.07
注：与空白血清组比较**P＜0.01，*P＜0.05；
4、对狗心肌缺血保护作用
实验药物：本申请栀子总苷标准提取物，北京本草天源药物研究院实验室提供；现有技术栀子提取物，北京本草天源药物研究院实验室按照文献方法制备【中国专利CN1546507A】。
实验方法：取实验狗，分为生理盐水组、现有技术栀子提取物组、本申请栀子总苷标准提取组，给药组分别在狗前肢皮下头静脉给药，给药量每次20mg/kg，生理盐水组等容不等量，每天给药1次，连续给药3天，给药第3天后用戊巴比妥钠25mg/kg静脉麻醉，气管插管，接人工呼吸机加以正压呼吸，从左侧第五肋开胸，剪开心包，暴露心脏，将心包切开缘缝于胸壁，在左冠状动脉前降支分二期结扎，并缓慢iv利多卡因8mg/kg以防结扎前可能引起的心室颤动，随后缝合心包及胸壁。心梗后24h，狗经戊巴比妥钠麻醉后处死，迅速取出心脏，切除大血管和脂肪组织，核对前降支结扎点的位置，称全心重，然后切除右心室和左右心房，留下室中隔及左心房，称得左心室重，从心尖和开始与前降支垂直方向将左心室切成2-3mm厚的肌片，浸于硝基四唑蓝溶液(NBT)中染色30min，剪下缺血区心肌组织称重，计算心肌梗塞范围，即：心梗范围＝缺血区重/左心室重×100％，结果见表5：
表5不同方案组对狗心肌缺血的保护作用  组别  全心重  (g)  左室重  (g)  缺血区重(g)  心梗范围(％)  生理盐水组  现有技术栀子提取  物  67.11±8.59  66.94±8.33  42.97±5.63  42.05±4.88  13.07±1.59  10.04±1.03  30.42  23.88  本申请栀子总苷标  准提取物  67.92±9.53  43.03±5.34  9.85±0.97*  22.89
注：与对照组比较**P＜0.01，*P＜0.05；
5、对大鼠脑梗塞的影响
实实验药物：本申请栀子总苷标准提取物，北京本草天源药物研究院实验室提供；现有技术栀子提取物，北京本草天源药物研究院实验室按照文献方法制备【中国专利CN1706859A】。
实验方法：取健康SD大鼠，体重240-260g，随机分组：模型对照组、现有技术栀子提取物组、本申请栀子总苷标准提取组，各实验组给药量100mg/kg，灌胃给药。给药3天后，于末次给药1小时，取大鼠，水合氯醛300mg/kg ip麻醉，颈部切口，分离并结扎右侧颈总动脉，缝合肌肉皮肤后，右侧位固定，在右耳和右眼外眦连线中点切开皮肤，分离颞肌，暴露颧突及颞骨，在颧突的头端1～2mm处开一约3×3mm的骨窗，暴露大脑中动脉(MCA)，将MCA灼断，缝合切口。参考Bederson法，处死动物，取右大脑半球，切成5片，置于2g/LNPT中37℃温育15min染色，仔细挖取并称重未被染成兰色的白色梗塞脑组织，实验结果见表6：
表6对大鼠脑梗塞保护情况  组别  动物数  只  脑梗塞组织重量  mg  模型对照组  现有技术栀子提取物  10  10  125.67±80.09  97.31±26.9  本申请栀子总苷标准提取物  10  81.26±20.1*
注：与对照组比较**P＜0.01，*P＜0.05；
6、对四氯化碳致大鼠慢性肝损伤的影响
实验药物：：本申请栀子总苷标准提取物，北京本草天源药物研究院实验室提供；现有技术栀子提取物，北京本草天源药物研究院实验室按照文献方法制备【中国专利CN1706859A】。
实验方法：取Wistar大鼠，按体重随机分组，正常对照组、肝损伤模型组、现有技术栀子提取物组、本申请栀子总苷标准提取组，给药组灌胃给药，给药量为100mg/kg。除正常对照组外，各组动物腹腔注射10％CCl4植物油0.5ml/100g体重，每周两次，共12周，正常对照组ip生理盐水。造模同时每日ig给药一次。实验结束前，动物禁食12小时，取股动脉血，以3000转/分离心10分钟，分离血清，测定GPT、GOT，实验结果见表7：
表7不同方案组对肝损伤的影响结果  组别  GPT  (U-L-1)  GOT  (U-L-1)  对照组  模型组  现有技术栀子提取物  19.52±2.31**  123.79±20.09  99.17±18.51  33.92±4.11**  181.57±53.91  134.59±39.57  本申请栀子总苷标准提取物  84.36±17.50*  129.01±30.93*
注：与模型组比较**P＜0.01，*P＜0.05；
7、在鸭体内对鸭肝炎病毒的影响
实验药物：本申请栀子总苷标准提取物，北京本草天源药物研究院实验室提供；现有技术栀子提取物，北京本草天源药物研究院实验室按照文献方法制备【吕茂平等，大孔树脂对栀子苷分离效果的研究，中草药，2002，33(9)，794】。
实验方法：取北京鸭，经腿胫静脉注射上海麻鸭DHBV-DNA阳性鸭血清，每只0.3ml，感染后7天取血，分离血清，检测血清中DHBV-DNA含量。雏鸭血清经检测DHBV呈阳性后，将鸭随机分为组：病毒对照组、现有技术栀子提取物组、本申请栀子总苷标准提取组，灌胃给药，给药量为80mg/kg，每天2次。对照组给予同体积生理盐水，连续给药10天。分别与药物治疗后5天(T5)、10天(T10)和停药后3天(P3)自鸭胫静脉取血，分离血清，按缺口翻译试剂盒说明书方法，用32P标记DHBV-DNA探针，并作鸭血清斑点杂交，放射自显影膜片斑点，酶标仪测定OD值(滤光片为490nm)，计算血清DHBV-DNA光密度，以杂交斑点OD值作为标本DHBV-DNA水平值，实验结果见表7。
表7在鸭体内对鸭肝炎病毒DHBV-DNA的影响  组别  DHBV-DNA水平  T0  DHBV-DNA水平  T5  DHBV-DNA水平  T10  DHBV-DNA水平  P3   对照组  现有技术栀子提  取物  本申请栀子总苷  标准提取物   0.891±0.06  0.928±0.11   0.937±0.15    0.982±0.27  0.879±0.19   0.853±0.17*   0.930±0.10  0.831±0.12   0.794±0.11*   0.985±0.14  0.890±0.13*   0.791±0.11*
注：与模型组比较**P＜0.01，*P＜0.05；
实验结论：药理实验结果表明，本申请栀子总苷提取物比现有技术栀子提取物具有更好的药理作用(现有技术栀子提取物与对照组统计学上没有差异，而本申请栀子总苷提取物与对照组比较具有显著性差异)。
七.制备实施例
实施例1
提取工艺：
取栀子用10％乙醇溶液提取得到乙醇提取液，浓缩至无醇味；浓缩液调节PH值至5.0；将溶液HPD-100层析分离；
先用水除去杂质，再用6％浓度的乙醇洗脱，收集含有栀子苷和京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷部分的洗脱液，洗脱液浓缩干燥即得；栀子总苷以栀子苷、京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷含量计53.3％，其中栀子苷含量为46.2％，京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷含量为7.1％；
或先用水、1％稀乙醇洗脱除去杂质，再用30％浓度的乙醇洗脱，收集含有栀子苷和京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷部分的洗脱液，洗脱液浓缩干燥即得；栀子总苷以栀子苷、京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷含量计51.9％，其中栀子苷含量为45.7％，京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷含量为6.2％；
或先用水、1％稀乙醇洗脱，除去杂质，再用10％浓度的乙醇洗脱，收集含有栀子苷和京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷部分的洗脱液；洗脱液浓缩干燥即得；栀子总苷以栀子苷、京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷含量计50.1％，其中栀子苷含量为45％，京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷含量为5％；
或栀子苷按照现有技术得到、京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷按照现有技术得到，再按照本申请标准提取物的质量标准混合得到本申请栀子总苷标准提取物；
栀子总苷提取物在制备抗炎、抗菌、抗病毒、治疗心脑血管疾病或肝病的药物方面中的应用。
实施例2
取栀子用95％乙醇溶液提取得到乙醇提取液，浓缩至无醇味；浓缩液调节PH值至10；将溶液经100A大孔树脂柱层析分离；
先用水除去杂质，再用30％浓度的乙醇洗脱，收集含有栀子苷和京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷部分的洗脱液，洗脱液浓缩干燥即得；栀子总苷以栀子苷、京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷含量计大于等于98.7％，其中栀子苷含量为89.1％，京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷含量为9.6％；
或先用水、5％稀乙醇洗脱除去杂质，再用30％浓度的乙醇洗脱，收集含有栀子苷和京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷部分的洗脱液，洗脱液浓缩干燥即得；栀子总苷以栀子苷、京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷含量计大于等于99.5％，其中栀子苷含量为90.2％，京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷含量为9.3％；
或先用水、5％稀乙醇洗脱，除去杂质，再用20％浓度的乙醇洗脱，收集含有栀子苷和京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷部分的洗脱液；洗脱液浓缩干燥即得；栀子总苷以栀子苷、京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷含量计大于等于99.3％，其中栀子苷含量为90％，京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷含量为9.3％；
或栀子苷按照现有技术得到、京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷按照现有技术得到，再按照本申请标准提取物的质量标准混合得到本申请栀子总苷标准提取物；
本申请栀子总苷标准提取物制备在制备抗炎、抗菌、抗病毒、治疗心脑血管疾病或肝病的药物方面中的应用。
实施例3
提取工艺：
取栀子用50％乙醇溶液提取得到乙醇提取液，浓缩至无醇味；浓缩液调节PH值至8.5；将溶液经300大孔树脂层析分离；
先用水除去杂质，再用15％浓度的乙醇洗脱，收集含有栀子苷和京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷部分的洗脱液，洗脱液浓缩干燥即得；栀子总苷以栀子苷、京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷含量计74.2％，其中栀子苷含量为44.2％，京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷含量为30％；
或先用水、3％稀乙醇洗脱除去杂质，再用20％浓度的乙醇洗脱，收集含有栀子苷和京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷部分的洗脱液，洗脱液浓缩干燥即得；栀子总苷以栀子苷、京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷含量计75.7％，其中栀子苷含量为45.7％，京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷含量为30％；
或先用水、4％稀乙醇洗脱，除去杂质，再用15％浓度的乙醇洗脱，收集含有栀子苷和京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷部分的洗脱液；洗脱液浓缩干燥即得；栀子总苷以栀子苷、京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷含量计75％，其中栀子苷含量为45％，京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷含量为30％；
或栀子苷按照现有技术得到、京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷按照现有技术得到，再按照本申请标准提取物的质量标准混合得到本申请栀子总苷标准提取物；
本申请栀子总苷标准提取物制备在制备抗炎、抗菌、抗病毒、治疗心脑血管疾病或肝病的药物方面中的应用。
实施例4
取栀子用55％乙醇溶液提取得到乙醇提取液，浓缩至无醇味；浓缩液调节PH值至9.5；将溶液经400大孔树脂柱层析分离；
先用水除去杂质，再用8％浓度的乙醇洗脱，收集含有栀子苷和京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷部分的洗脱液，洗脱液浓缩干燥即得；栀子总苷以栀子苷、京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷含量计55％，其中栀子苷含量为50％，京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷含量为5％；
或先用水、2％稀乙醇洗脱除去杂质，再用10％浓度的乙醇洗脱，收集含有栀子苷和京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷部分的洗脱液，洗脱液浓缩干燥即得；栀子总苷以栀子苷、京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷含量计56.1％，其中栀子苷含量为50％，京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷含量为6.1％；
或先用水、5％稀乙醇洗脱，除去杂质，再用20％浓度的乙醇洗脱，收集含有栀子苷和京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷部分的洗脱液；洗脱液浓缩干燥即得；栀子总苷以栀子苷、京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷含量计57.4％，其中栀子苷含量为51.2％，京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷含量为6.2％；
或栀子苷按照现有技术得到、京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷按照现有技术得到，再按照本申请标准提取物的质量标准混合得到本申请栀子总苷标准提取物；
本申请栀子总苷标准提取物制备在制备抗炎、抗菌、抗病毒、治疗心脑血管疾病或肝病的药物方面中的应用。
实施例5
取栀子用90％乙醇溶液提取得到乙醇提取液，浓缩至无醇味；浓缩液调节PH值至7.5；将溶液经400A大孔树脂柱层析分离；
先用水除去杂质，再用25％浓度的乙醇洗脱，收集含有栀子苷和京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷部分的洗脱液，洗脱液加入丙酮提取，浓缩干燥即得；栀子总苷以栀子苷、京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷含量计89.2％，其中栀子苷含量为60％，京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷含量为29.2％；
或先用水、4％稀乙醇洗脱除去杂质，再用25％浓度的乙醇洗脱，收集含有栀子苷和京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷部分的洗脱液，洗脱液浓缩干燥即得；栀子总苷以栀子苷、京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷含量计91.9％，其中栀子苷含量为61.9％，京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷含量为30％；
或先用水、5％稀乙醇洗脱，除去杂质，再用20％浓度的乙醇洗脱，收集含有栀子苷和京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷部分的洗脱液；洗脱液浓缩干燥即得；栀子总苷以栀子苷、京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷含量计90％，其中栀子苷含量为60％，京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷含量为30％；
或栀子苷按照现有技术得到、京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷按照现有技术得到，再按照本申请标准提取物的质量标准混合得到本申请栀子总苷标准提取物；
本申请栀子总苷标准提取物制备抗炎、抗菌、抗病毒、治疗心脑血管疾病或肝病的药物方面中的应用。
实施例6
取栀子用100％乙醇溶液提取得到乙醇提取液，浓缩至无醇味；浓缩液调节PH值至8.5；将溶液经450大孔树脂柱层析分离；
先用水除去杂质，再用12％浓度的乙醇洗脱，收集含有栀子苷和京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷部分的洗脱液，洗脱液加入乙醇提取，浓缩干燥即得；栀子总苷以栀子苷、京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷含量计94.7％，其中栀子苷含量为80％，京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷含量为14.7％；
或先用水、2％稀乙醇洗脱除去杂质，再用15％浓度的乙醇洗脱，收集含有栀子苷和京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷部分的洗脱液洗，脱液浓缩干燥即得；栀子总苷以栀子苷、京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷含量计95.2％，其中栀子苷含量为80.2％，京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷含量为15％；
或先用水、3％稀乙醇洗脱，除去杂质，再用14％浓度的乙醇洗脱，收集含有栀子苷和京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷部分的洗脱液，洗脱液浓缩干燥即得；栀子总苷以栀子苷、京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷含量计95.9％，其中栀子苷含量为81.3％，京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷含量为14.6％；
或栀子苷按照现有技术得到、京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷按照现有技术得到，再按照本申请标准提取物的质量标准混合得到本申请栀子总苷标准提取物；
本申请栀子总苷标准提取物制备在制备抗炎、抗菌、抗病毒、治疗心脑血管疾病或肝病的药物方面中的应用。
实施例7
取栀子用25％乙醇溶液提取得到乙醇提取液，浓缩至无醇味；浓缩液调节PH值至5.0；将溶液经D101大孔树脂柱层析分离；
先用水除去杂质，再用25％浓度的乙醇洗脱，收集含有栀子苷和京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷部分的洗脱液，洗脱液浓缩干燥即得；栀子总苷以栀子苷、京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷含量计77.7％，其中栀子苷含量为52.7％，京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷含量为25％；
或先用水、4％稀乙醇洗脱除去杂质，再用28％浓度的乙醇洗脱，收集含有栀子苷和京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷部分的洗脱液洗脱液浓缩干燥即得；栀子总苷以栀子苷、京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷含量计78.9％，其中栀子苷含量为54.0％，京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷含量为24.9％；
或先用水、4％稀乙醇洗脱，除去杂质，再用19％浓度的乙醇洗脱，收集含有栀子苷和京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷部分的洗脱液；洗脱液浓缩干燥即得；栀子总苷以栀子苷、京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷含量79.4％，其中栀子苷含量为54.2％，京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷含量为25.2％；
或栀子苷按照现有技术得到、京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷按照现有技术得到，再按照本申请标准提取物的质量标准混合得到本申请栀子总苷标准提取物；
本申请栀子总苷标准提取物制备在制备抗炎、抗菌、抗病毒、治疗心脑血管疾病或肝病的药物方面中的应用。
实施例8
取栀子用乙醇溶液提取得到乙醇提取液，浓缩至无醇味；浓缩液调节PH值至5.0-10；将溶液经1300-I大孔树脂柱层析分离；
先用水除去杂质，再用28％浓度的乙醇洗脱，收集含有栀子苷和京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷部分的洗脱液，洗脱液加入乙醇，浓缩干燥即得；栀子总苷以栀子苷、京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷含量计91.7％，其中栀子苷含量为80.8％，京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷含量为10.9％；
或先用水、1％稀乙醇洗脱除去杂质，再用30％浓度的乙醇洗脱，收集含有栀子苷和京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷部分的洗脱液，洗脱液浓缩干燥即得；栀子总苷以栀子苷、京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷含量计90.5％，其中栀子苷含量为80.2％，京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷含量为10.3％；
或先用水、3％稀乙醇洗脱，除去杂质，再用20％浓度的乙醇洗脱，收集含有栀子苷和京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷部分的洗脱液；洗脱液浓缩干燥即得；栀子总苷以栀子苷、京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷含量计90.2％，其中栀子苷含量为80.1％，京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷含量为10.1％；
或栀子苷按照现有技术得到、京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷按照现有技术得到，再按照本申请标准提取物的质量标准混合得到本申请栀子总苷标准提取物；
本申请栀子总苷标准提取物制备在制备抗炎、抗菌、抗病毒、治疗心脑血管疾病或肝病的药物方面中的应用。
实施例9
取栀子用乙醇溶液提取得到乙醇提取液，浓缩至无醇味；浓缩液调节PH值至5.0-10；将溶液经1400大孔树脂柱层析分离；
先用水除去杂质，再用6％浓度的乙醇洗脱，收集含有栀子苷和京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷部分的洗脱液，洗脱液浓缩干燥即得；栀子总苷以栀子苷、京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷含量计65.3％，其中栀子苷含量为53.3％，京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷含量为12.0％；
或先用水、1％稀乙醇洗脱除去杂质，再用8％浓度的乙醇洗脱，收集含有栀子苷和京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷部分的洗脱液，洗脱液浓缩干燥即得；栀子总苷以栀子苷、京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷含量计63.7％，其中栀子苷含量为53.0％，京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷含量为10.7％；
或先用水、3％稀乙醇洗脱，除去杂质，再用12％浓度的乙醇洗脱，收集含有栀子苷和京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷部分的洗脱液；洗脱液浓缩干燥即得；栀子总苷以栀子苷、京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷含量计64.9％，其中栀子苷含量为53.1％，京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷含量为11.8％；
或栀子总苷为现有技术制备，包括市售；栀子总苷以栀子苷、京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷含量计66.3％，其中栀子苷含量为52.9％，京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷含量为13.4％。
或栀子苷按照现有技术得到、京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷按照现有技术得到，再按照本申请标准提取物的质量标准混合得到本申请栀子总苷标准提取物；
本申请栀子总苷标准提取物制备在制备抗炎、抗菌、抗病毒、治疗心脑血管疾病或肝病的药物方面中的应用。
实施例10
取栀子用85％乙醇溶液提取得到乙醇提取液，浓缩至无醇味；浓缩液调节PH值至8.5；将溶液经AB-8大孔树脂柱层析分离；
先用水除去杂质，再用25％浓度的乙醇洗脱，收集含有栀子苷和京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷部分的洗脱液，洗脱液加入丙酮，浓缩干燥即得；栀子总苷以栀子苷、京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷含量计93.2％，其中栀子苷含量为62.0％，京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷含量为31.2％；
或先用水、4％稀乙醇洗脱除去杂质，再用25％浓度的乙醇洗脱，收集含有栀子苷和京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷部分的洗脱液，洗脱液浓缩干燥即得；栀子总苷以栀子苷、京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷含量计95.0％，其中栀子苷含量为63.1％，京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷含量为31.9％；
或先用水、5％稀乙醇洗脱，除去杂质，再用20％浓度的乙醇洗脱，收集含有栀子苷和京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷部分的洗脱液；洗脱液浓缩干燥即得；栀子总苷以栀子苷、京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷含量计94.7％，其中栀子苷含量为62.2％，京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷含量为32.5％；
或栀子苷按照现有技术得到、京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷按照现有技术得到，再按照本申请标准提取物的质量标准混合得到本申请栀子总苷标准提取物；
本申请栀子总苷标准提取物在制备抗炎、抗菌、抗病毒、治疗心脑血管疾病或肝病的药物方面中的应用。
注：本发明所要求保护的具体技术方案，不限于上述实施例所表达的技术方案的具体组合。