降血脂药物及其制备方法和应用.pdf

本发明公开了一种降血脂药物。它是枸骨叶的乙醇或含水乙醇提取物中不溶解于水的部分制成的药剂，可与药学上适用载体混合，制成各种制剂。本发明还公开了该降血脂药物的制备方法和医药用途。

权利要求书
1、  一种降血脂药物，其特征在于，它是枸骨叶的乙醇或含水乙醇提取物中不溶解于水的部分制成的药剂。

2、  、如权利要求1所述的降血脂药物，其特征在于，含水乙醇的浓度为60％以上。

3、  如权利要求1或2所述的降血脂药物，其特征在于，所述药剂是任何一种药剂学上所说的剂型。

4、  如权利要求3所述的降血脂药物，其特征在于，所述药剂为片剂或胶囊剂。

5、  权利要求4所述的降血脂药物的制备方法，其特征在于，枸骨叶以乙醇或含水乙醇进行提取，所述含水乙醇的浓度为60％以上，减压浓缩至无醇味后用水溶解，将不溶解于水的部分加入适量辅料，制得片剂或胶囊剂。

6、  权利要求4所述的降血脂药物的制备方法，其特征在于，枸骨叶以乙醇或含水乙醇进行提取，所述含水乙醇的浓度为60％以上，减压浓缩至无醇味后用水溶解，分别用醋酸乙酯和正丁醇萃取，合并醋酸乙脂和正丁醇萃取液，加入适量辅料，制得片剂或胶囊剂。

7、  权利要求1-4中任何一项所述药物在制备治疗高脂血引起的心血管病的药物中应用。

说明书降血脂药物及其制备方法和应用
技术领域
本发明涉及一种降血脂药物，具体涉及从中药枸骨叶中提取分离降血脂的有效部位；本发明还涉及该降血脂药物的制备方法；另外，本发明也涉及该降血脂药物的医药用途。
背景技术
中药枸骨叶是冬青科(Aquifoliaceae)冬青属(Ilex L.)植物枸骨Ilexcornuta Lindl.ex Paxt.的干燥叶子。主要分布于我国南方江苏，湖南，安徽，浙江等地，是苦丁茶的主要来源植物之一。始载于《本草拾遗》，传统中医药理论认为，枸骨叶具有清热养阴，平肝益肾，散风通络等功效；近代药理研究表明，枸骨叶具有抗生育，扩张冠状动脉，抗菌等作用。现代植物化学研究表明三萜及其苷类是枸骨叶中的主要成分。现代医学认为动脉粥样硬化(Atherosclerosis，AS)是心脑血管疾病的主要病理基础，随着对动脉粥样硬化的病因、病理变化、流行病学及危害情况认识的日益完善，AS的发病机制比较公认的是高脂血症导致内皮细胞损伤是AS的始动环节。降血脂药物引起了人们的广泛关注。
现有技术中，枸骨叶常用于制作保健茶或保健饮料(中国专利CN1718056A、CN1709109A、CN1194864A、CN1112812A)，还用于制备避孕中成药品(中国专利1079389A、CN1090498A、CN1491676A)。尚未见枸骨叶具有降血脂，并用于制备治疗高脂血引起的心血管病的药物的报道。
发明内容
本发明需要解决的技术问题是：为患有血脂异常的老年病人，研究更有针对性的治疗药物，以便更加准确地对症治疗，从而提高对血脂异常的治疗效果；也为即将步入老年期的中年人预防或减少血脂异常的发病率提供一种具有良好预防作用的药物。因为无论预防血脂异常的发病或治疗已患有血脂异常的病人，都需要长期服药，所以在保证疗效的基础上，应尽量减少用药剂量，改进药物剂型，降低药物成本及价格。
本发明需要解决的另一技术问题是提供该降血脂药物的制备方法。
本发明人利用现代药理实验手段，发现中药枸骨叶对治疗心血管疾病有一定疗效，并对其有效部位进行筛选，并对有效部位的提取方法进行研究，得到一种全新的降血脂药物。
为了进一步保证疗效的稳定、减少用药剂量、改进药物剂型，就需要对枸骨叶进行分析，提取分离具有疗效的有效部位，对有效部位的化学成分进行研究，并设计合理的提取分离工艺，得到如下技术解决方案：
一种降血脂药物，它是枸骨叶的乙醇或含水乙醇提取物中不溶解于水的部分制成的药剂，含水乙醇的浓度最好为60％以上，该药剂是任何一种药剂学上所说的剂型，但最好为片剂或胶囊剂。
常用口服制剂的辅料可选用：崩解剂，如：羟丙基淀粉、羟丙纤维素、羧甲基淀粉钠、羧甲基纤维素钙、交联聚维酮、交联羧甲基纤维素钠等；填充剂，如：乳糖、蔗糖、甘露醇、微晶纤维素、糊精、淀粉、磷酸钙、磷酸氢钙、硫酸钙、碳酸钙、环糊精、微粉纤维素等；润湿剂和粘合剂，如：乙醇、预胶化淀粉、聚维酮、羧甲基纤维素钠、羟丙甲纤维素；润滑剂，如：滑石粉、硬脂酸、硬脂酸镁、硬脂酸钙、微粉硅胶、氢化植物油、聚乙二醇4000和聚乙二醇6000；润湿剂，如：十二烷基硫酸钠、吐温80。
将枸骨叶制成本发明降血脂药物的方法是：枸骨叶以乙醇或含水乙醇进行提取，所述含水乙醇的浓度为60％以上，减压浓缩至无醇味后用水溶解，将不溶解于水的部分加入适量常用辅料，制得任何一种药剂学上所说的剂型。
将枸骨叶制成本发明降血脂药物还可以采用如下方法：枸骨叶以乙醇或含水乙醇进行提取，所述含水乙醇的浓度为60％以上，减压浓缩至无醇味后用水溶解，分别用醋酸乙酯和正丁醇萃取，合并醋酸乙脂和正丁醇萃取液，加入适量辅料，制得片剂或胶囊剂。
对本发明药物有效部位的化学成分进行分析后发现：
有效部位中含有羽扇豆醇，11-酮基-α-香树脂醇棕榈酸酯，α-香树脂醇棕榈酸酯，3，28-乌索酸二醇，熊果酸，30-醛基羽扇豆醇，30-酮基降羽扇豆醇，darutoside，tanacetene，β-谷甾醇，大黄素，pomolic acid3-O-[β-D-glucuronic acid methyl ester(1→2)]-α-L-arabino-pyranoside，pomolic acid 3-O-α-L-arabinopyranosyl-28-O-β-D-glucopy-ranoside，pomolic acid 3-O-α-L-arabinopyranoside，pomolic acid 3-O-β-D-glucopyranosyl(1→2)-α-L-arabinopyranoside，quercetin3-O-β-D-glucopyranosyl-(1→2)-α-L-arabinopyranoside，quercetin3-O-β-D-glucopyranoside，rhamnetin 3-O-β-D-glucopyranosid，siaresinolic acid 3-O-β-D-glucopy-ranosyl(1→2)-α-L-arabinopyranoside，正二十二烷酸，正二十六烷。
其化学结构分别为：

羽扇豆醇           11-酮基-α-香树脂醇棕榈酸酯          α-香树脂醇棕榈酸酯

3，28-乌索酸二醇               熊果酸(V)                     30-醛基羽扇豆醇   

30-酮基降羽扇豆醇                β-谷甾醇                     darutoside

大黄素                           正二十二烷酸


pomolic acid 3-O-methyl-β-D-glucopyranosyluronate(1→3)-α-L-arabinopyranoside(I)，pomolicacid 3-O-α-L-arabinopyranosyl-28-O-β-D-glucopyranoside(II)，pomolic  acid 3-O-α-L-arabinopyranoside(III)，pomolic acid 3-O-β-D-glucopyranosyl(1→2)-α-L-arabinopyranoside(IV)，quercetin 3-O-β-D-glucopyranosyl-(1→2)-α-L-arabinopyranoside(V)，quercetin 3-O-β-D-glucopyranoside(VI)，rhamnetin 3-O-β-D-glucopyranoside(VII)，siaresinolic acid3-O-β-D-glucopyranosyl(1→2)-α-L-arabinopyranoside(VIII)。
为叙述方便，将本发明枸骨叶的乙醇或含水乙醇提取物简称为IL-1，非水溶部位简称为IL-9，水溶性部位简称为IL-10。
采用食饵性高脂血症模型大鼠，以肝指数(肝脏重量/大鼠体重)；血清中胆固醇、甘油三酯、HDL-C、LDL-C，并计算HDL-C/TC比值以及肝脏中的胆固醇、甘油三酯为指标，进行了活性研究。实验结果证明IL-1、IL-9、IL-10均能明显降低升高的血清和肝组织TC，降低升高的血清和肝组织TG；IL-1、IL-9明显降低升高的血清LDL-C，并明显使低下的HDL-C/TC比值回升；IL-9使升高的肝指数明显降低。
一、方法
1.实验材料
动物：普通级雄性SD大鼠(150-190g)，均由江宁青龙山动物繁殖场提供，合格证号：SCXK(苏)2002-0018。
1.1药物及试剂
辛伐他汀片(Simvastatin)，杭州默沙东制药有限公司，批号：20030708；脂必妥片，成都地奥九泓制药厂，批号：20030715；丙基硫氧嘧啶片，南通精华制药有限公司提供，批号：20030502；猪胆盐，中国医药集团上海化学试剂公司，批号：F20031029；胆固醇，上海惠心生化试剂公司，批号：20040210；总胆固醇(TC)测定试剂盒，上海荣盛生物技术有限公司提供；甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)和高密度脂蛋白(HDL-C)测定试剂盒：浙江东欧生物工程有限公司提供；其它试剂均为市售分析纯。
1.2仪器
FA1004电子天平，上海天平仪器厂；80-2B台式离心机，上海安亭科学仪器厂；Sigma 1-15K型高速冷冻离心机；721型分光光度计，上海第三分析仪器厂。
2.实验方法
雄性SD大鼠100只，体重150～180g，普通饲料喂养1周，大鼠禁食不禁水12h后，眼眶后静脉丛取血(乙醚麻醉)，分离血清，按试剂盒方法测定血清总胆固醇，根据总胆固醇高低分为10组，每组10只。正常组用普通饲料喂养，其余9组用高脂饲料(2％胆固醇、0.5％猪胆盐、10％猪油、0.2％丙基硫氧嘧啶，基础饲料87.3％)喂养，连续喂养4周，高脂喂养的同时分别按10mL/kg体重经口给予IL-1300、600mg/kg，IL-9 150、300mg/kg，IL-10 300、600mg/kg，脂必妥1000mg/kg，辛伐他汀8mg/kg，模型组和正常组给予等量的蒸馏水，连续28日，每日一次，于给药后第14、21d即大鼠禁食不禁水12h后，眼眶后静脉丛取血，分离血清，按试剂盒方法测定血清胆固醇。第28日，即大鼠禁食不禁水12h后，股动脉取血，再颈椎脱臼处死大鼠，解剖大鼠，肝脏称重，计算肝指数(肝脏重量/大鼠体重)；分离血清测定胆固醇、甘油三酯、HDL-C、LDL-C，并计算HDL-C/TC比值；取新鲜肝脏适量，以异丙醇制成10％肝组织匀浆，48h后，4000rpm离心，取上清夜按试剂盒方法测定胆固醇、甘油三酯，以μmol/mg肝组织来表示含量。
二、结果
如表1和图1所示，与正常组相比，模型组的肝指数明显升高，与模型组相比，IL-9 150、300mg/kg，脂必妥1000mg/kg和辛伐他汀8mg/kg均使升高的肝指数明显降低。
表1.枸骨叶对食饵性高脂血症大鼠肝指数的影响
  组别   剂量(mg/kg)    动物数(只)    肝指数(×10-2)  正常组    10    3.48±0.22  模型组    10    4.00±0.63#  IL-1    300    10    3.91 ±0.86    600    10    4.06±0.70  IL-9    150    9    3.19±0.77*    300    9    3.47±0.38*  IL-10    300    600    8    9    3.47±0.74    3.86±0.71  脂必妥    1000    7    2.88±0.48**  辛伐他汀    8    8    3.28±0.51*
#：P＜0.05vs正常组  *：P＜0.05，**：P＜0.01vs模型组
如表2和图2所示，与正常组相比，模型组的血清总胆固醇(TC)明显升高，与模型组相比，第28天时，IL-1 300、600mg/kg均明显降低升高的血清TC；IL-9 300mg/kg、IL-10 600mg/kg、脂必妥1000mg/kg和辛伐他汀8mg/kg在第21和第28天均明显降低升高的血清TC。
表2.枸骨叶对食饵性高脂血症大鼠血清TC的影响(mmol/L)
  组别    剂量    (mg/kg) 动物数 (只) 试验前 试验后 第14天 第21天  第28天  正常组    10 2.05±0.58 1.91±0.31 1.78±0.17  1.82±0.21  模型组    10 1.87±0.68 5.52±1.48### 5.68±1.07###  6.52±1.92###  IL-1    300    10 1.92±0.53 5.69±1.52 5.11±1.09  3.51±0.56***    600    10 1.92±0.53 4.96±1.13 4.64±0.81  3.83±1.34**  IL-9    150    9 1.92±0.53 4.68±1.14 4.73±1.19  6.00±1.51    300    9 1.94±0.48 4.72±2.15 4.61±1.28*  4.71±0.79*  IL-10    300    8 1.92±0.45 4.88±1.35 4.79±1.04  5.40±1.65    600    9 1.87±0.68 4.47±1.01 4.68±0.88*  4.39±1.29*  脂必妥    1000    7 2.05±0.44 4.23±1.59 4.08±1.21*  3.78±1.40**  辛伐他汀    8    8 2.07±0.58 5.08±2.37 4.20±1.09*  4.73±1.11*
###：P＜0.001vs  正常组  *：P＜0.05，**：P＜0.01，***：P＜0.001vs模型组
如表3和图3所示，与正常组相比，模型组的血清和肝组织甘油三酯(TG)以及肝组织TC均极明显升高，与模型组相比，IL-1 300、600mg/kg均极明显降低升高的血清和肝组织TG以及肝组织TC；IL-9 150、300mg/kg与IL-10 300、600mg/kg均极明显降低升高的血清和肝组织TG；IL-9 300mg/kg与IL-10 600mg/kg均明显降低升高的肝组织TC；脂必妥1000mg/kg和辛伐他汀8mg/kg均明显降低升高的血清和肝组织甘油三酯以及肝组织TC。
表3.枸骨叶对食饵性高脂血症大鼠血清和肝组织TG的影响(mmol/L)
  组别    剂量    (mg/kg)    动物数    (只)  血清TG  肝组织TG  肝组织TC  (mmol/L)  (μmol/mg)  (μmol/mg)  正常组    10  0.35±0.13  2.99±1.07  2.87±0.72  模型组    10  1.36±0.31###  5.68±0.76###  7.11±1.21###  IL-1    300    10  0.80±0.28***  4.42±0.59***  4.71±1.14***    600    10  0.58±0.21***  3.68±0.78***  5.04±1.06***
  IL-9    150    300    9    9  0.93±0.24**  0.75±0.22***  4.56±0.61**  4.25±0.88***    6.38±1.13    5.66±1.15*  IL-10    300    8  0.86±0.30**  3.64±0.93***    6.60±1.29    600    9  0.91±0.17**  3.81±1.24***    5.33±0.97**  脂必妥    1000    7  0.83±0.25**  4.62±0.69*    5.80±0.90*  辛伐他汀    8    8  0.71±0.29***  4.16±1.02**    5.69±0.86*
###：P＜0.001vs正常组  *：P＜0.05，  **：P＜0.01，  ***：P＜0.001vs模型组
如表4和图4所示，与正常组相比，模型组的血清低密度脂蛋白-胆固醇(LDL-C)明显升高，而HDL-C/TC比值明显低下。与模型组相比，IL-1 300、600mg/kg，IL-9 300mg/kg均明显降低升高的血清LDL-C，并明显使低下的HDL-C/TC比值回升。脂必妥1000mg/kg和辛伐他汀8mg/kg均明显降低升高的LDL-C，并使低下的HDL-C/TC比值明显回升。
表4.枸骨叶对食饵性高脂血症大鼠血清血脂蛋白的影响
  组别    剂量    (mg/kg) 动物数 (只)  LDL-C  HDL-C  HDL-C/TC  (mmol/L)  (mmol/L)  正常组    10  0.69±0.17  1.19±0.32  0.66±0.17  模型组    10  4.43±0.79###  1.29±0.36  0.22±0.09###  IL-1    300    10  2.46±0.27  ***  1.31±0.38  0.38±0.13**    600  2.71±0.42  ***  1.52±0.34  0.43±0.13***  IL-9    150    9  3.95±1.16  1.28±0.41  0.22±0.07    300  2.80±0.68***  1.51±0.58  0.32±0.12*  IL-10    150    8  3.86±0.51  1.47±0.52  0.29±0.13    300  3.66±1.05  1.23±0.32  0.29±0.08  脂必妥    1000    7  1.05±0.27**  1.38±0.39  0.42±0.22*  辛伐他汀    8    8  0.89±0.17***  1.46±0.49  0.31±0.07*
###：P＜0.001vs正常组  *：P＜0.05，**：P＜0.01，***：P＜0.001vs模型组
附图说明
图1为本发明药物对食饵性高脂血症大鼠肝指数的影响示意图；
图2为本发明药物对食饵性高脂血症大鼠血清TC的影响示意图；
图3为本发明药物对食饵性高脂血症大鼠血清和肝组织TG的影响(mmol/L)示意图；
图4为本发明药物对食饵性高脂血症大鼠血清血脂蛋白的影响示意图。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步详细描述。
实施例1
取枸骨叶20公斤，粉碎，加85％乙醇20L加热回流，提取4h，过滤；重复提取2次，合并提取液，减压浓缩至无醇味，用适量蒸馏水溶解，得水不溶部位，将水不溶部位加入适量辅料后，压成片剂。
实施例2
取枸骨叶20公斤，粉碎，加85％乙醇20L加热回流，提取4h，过滤；重复提取2次，合并提取液，减压浓缩至无醇味，用适量蒸馏水溶解，得水不溶部位，将水不溶部位加入适量辅料后，制粒，灌制胶囊。
实施例3
取枸骨叶20公斤，粉碎，加85％乙醇20L加热回流，提取4h，过滤；重复提取2次，合并提取液，减压浓缩至无醇味，用适量蒸馏水溶解，分别用醋酸乙酯和正丁醇萃取，合并醋酸乙脂和正丁醇萃取液，加入适量辅料后，压成片剂。
实施例4
取枸骨叶20公斤，粉碎，加85％乙醇20L加热回流，提取4h，过滤；重复提取2次，合并提取液，减压浓缩至无醇味，用适量蒸馏水溶解，分别用醋酸乙酯和正丁醇萃取，合并醋酸乙脂和正丁醇萃取液，加入适量辅料后，制粒，灌制胶囊。