食品用杀菌剂.pdf

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1、(10)申请公布号 CN 102802448 A (43)申请公布日 2012.11.28 CN 102802448 A *CN102802448A* (21)申请号 201080027583.7 (22)申请日 2010.06.24 2009-152437 2009.06.26 JP A23L 3/358(2006.01) (71)申请人 株式会社川上 地址 日本大阪 申请人 国立大学法人京都大学 (72)发明人 川上大雄 西渕光昭 小谷博秀 山下泰治 (74)专利代理机构 中国国际贸易促进委员会专 利商标事务所 11038 代理人 罗菊华 (54) 发明名称 食品用杀菌剂 (57) 摘要 。

2、本发明提供相比含有煅烧钙或氢氧化钙的以 往的杀菌剂有更高的杀菌力的食品用杀菌剂。所 述食品用杀菌剂包括由煅烧钙或氢氧化钙、 乙醇 及乳酸钠配合而成的水溶液或水分散体。 (30)优先权数据 (85)PCT申请进入国家阶段日 2011.12.21 (86)PCT申请的申请数据 PCT/JP2010/060766 2010.06.24 (87)PCT申请的公布数据 WO2010/150850 JA 2010.12.29 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 17 页 附图 1 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书 1 页 说明书 17 页 附图 1。

3、 页 1/1 页 2 1. 食品用杀菌剂， 其特征在于， 其为由煅烧钙、 乙醇及乳酸钠配合而成的水溶液或水分 散体。 2. 权利要求 1 所述的食品用杀菌剂， 其中煅烧钙是选自牡蛎壳、 扇贝壳、 北极贝壳、 卵 壳或珊瑚壳的煅烧物中的 1 种或 2 种以上的混合物。 3. 权利要求 1 所述的食品用杀菌剂， 其为代替煅烧钙配合氢氧化钙而成。 4. 权利要求 1 3 之任一项所述的食品用杀菌剂， 其中， 煅烧钙或氢氧化钙的配合比例是 0.01 15 重量、 乙醇的配合比例是 5 20 重量、 乳酸钠的配合比例是 0.02 20 重量。 5. 权利要求 1 4 之任一项所述的食品用杀菌剂， 其中煅。

4、烧钙和氢氧化钙的平均粒径 均为 0.1 10m。 6. 保存性改善的食品， 其由权利要求 1 5 之任一项所述的食品用杀菌剂杀菌处理而 得到。 权 利 要 求 书 CN 102802448 A 2 1/17 页 3 食品用杀菌剂 【技术领域】 0001 本发明涉及配合食品或食品制备设备等的杀菌中使用的煅烧钙或氢氧化钙而成 的杀菌剂。 【背景技术】 0002 一直以来， 在食品或调理器具的杀菌中主要使用次氯酸钠， 其有作业时的气味， 食 品中的气味的残留、 分解物的致癌性 ( 三卤甲烷的生成 )、 在有机物的存在下的效果降低等 的问题， 因此需求新的杀菌方法的开发。 0003 近年， 公开了贝壳。

5、煅烧钙及作为其水和物的氢氧化钙中有抗菌性 ( 专利文献 1)、 公开了此贝壳煅烧钙中配合有机酸盐的食品的制菌剂 ( 专利文献 2)、 煅烧钙中配合多元醇 脂肪酸酯及乙醇的食品用除菌剂 ( 专利文献 3) 等。 0004 【现有技术文献】 0005 【专利文献】 0006 专利文献 1 ： 特开平 11-222796 号公报 0007 专利文献 2 ： 特开平 11-290044 特号公报 0008 专利文献 3 ： 特开 2002-272434 号公报 【发明内容】 0009 【发明要解决的技术课题】 0010 但是， 上述的制菌剂或除菌剂 ( 以下， 综合称之为 “杀菌剂” ) 得不到充分的。

6、杀菌效 果。 0011 本发明是鉴于上述事实的发明， 其主要的目的是以提供相比含有煅烧钙或氢氧化 钙的以往的杀菌剂有更高的杀菌力的食品用杀菌剂作为课题。 0012 【解决课题的技术方案】 0013 本发明人为了解决上述课题而重复了锐意研究的结果， 通过将煅烧钙或氢氧化钙 与乙醇和乳酸钠联用， 发现得到高的杀菌效果， 从而完成本发明。 0014 即， 本发明的要旨如下。 0015 1 食品用杀菌剂， 其特征在于， 其为由煅烧钙、 乙醇及乳酸钠配合而成的水溶液 或水分散体。 0016 2 上述 1 所述的食品用杀菌剂， 其中所述煅烧钙是选自牡蛎壳、 扇贝壳、 北极贝 壳、 卵壳或珊瑚壳的煅烧物中的。

7、 1 种或 2 种以上的混合物。 0017 3 上述 1 所述的食品用杀菌剂， 其为代替煅烧钙配合氢氧化钙而成。 0018 4 上述 1 3 之任一项所述的食品用杀菌剂， 其中所述煅烧钙或氢氧化钙 的配合比例是 0.01 15 重量、 乙醇的配合比例是 5 20 重量、 乳酸钠的配合比例是 0.02 20 重量。 0019 5 上述 1 4 之任一项所述的食品用杀菌剂， 其中所述煅烧钙和氢氧化钙的 说 明 书 CN 102802448 A 3 2/17 页 4 平均粒径均为 0.1 10m。 0020 6 保存性改善的食品， 其由上述 1 5 之任一项所述的食品用杀菌剂杀菌处 理而得到。 00。

8、21 【发明效果】 0022 本发明的杀菌剂由煅烧钙或氢氧化钙、 乙醇及乳酸钠配合的水溶液或水分散体构 成， 所以可对大肠杆菌、 金黄色葡萄球菌、 其他食中毒菌得到高的杀菌力。 【附图说明】 0023 【图 1】 是示在牛肉 ( 肉脍 ) 中使用本发明品的杀菌测试的结果的图。 0024 【实施方式】 0025 本发明的杀菌剂， 如上所述， 作为有效成分配合着煅烧钙或氢氧化钙、 乙醇及乳酸 钠， 所以可用于食品用途。 食品用途是指， 除了食品本身之外、 也可适用于调理器具、 调理设 备等的食品制备设备。 0026 本发明中使用的煅烧钙是成为本发明中涉及的杀菌剂的杀菌力的主体的成分， 将 牡蛎壳、。

9、 扇贝壳、 北极贝壳、 卵壳或珊瑚壳等煅烧前的成分是碳酸钙的动性质来源的钙在 600以上、 优选在 900 1200的温度煅烧或通电加热 15 60 分钟左右而得到， 使主成 分成为氧化钙。优选得到的煅烧钙的饱和水溶液的 pH 在 11 13 的范围内。煅烧钙的平 均粒径通常是 0.1 10m。上述的煅烧钙通常使用适合于食品添加物规格的。杀菌剂中 的煅烧钙的配合比例不特别限定， 但在杀菌力及经济性的方面， 优选是 0.01 15 重量， 再优选是 0.1 5 重量。 0027 本发明的杀菌剂由以上述的煅烧钙作为必须成分含有的水溶液或水分散体组成， 作为煅烧钙的主成分的氧化钙与水反应而生成氢氧化。

10、钙。然后， 一般认为此氢氧化钙发挥 杀菌效果。从而， 本发明中代替煅烧钙而配合氢氧化钙也可。本发明中使用的氢氧化钙的 平均粒径是通常 0.1 10m。上述的氢氧化钙通常使用适合于食品添加物规格的。杀菌 剂中的氢氧化钙的配合比例不特别限定， 但在杀菌力及经济性的方面， 优选是0.0115重 量， 再优选是 0.1 5 重量。另外， 由于煅烧钙吸湿性高， 为了提高处理容易度， 也可将 煅烧钙和氢氧化钙联用。 0028 本发明中使用的乙醇优选通常适合于食品添加物规格。 杀菌剂中的乙醇的配合比 例不特别限定， 通常以 5 20 重量的范围配合。 0029 本发明中使用的乳酸钠是对于提高煅烧钙与水反应而。

11、生成的氢氧化钙的水中溶 解性必要的物质， 通常使用适合于食品添加物规格的 50 重量或 60 重量的水溶液。杀 菌剂中的乳酸钠的配合比例不特别限定， 但在杀菌力及经济性的方面， 优选是0.0220重 量， 再优选是 0.1 15 重量， 特别优选是 1 15 重量。 0030 在本发明的杀菌剂中， 除了上述的必须成分之外、 根据需要而添加例如， 香料、 染 料等也可。 包括上述构成的本发明的杀菌剂可对于大肠杆菌、 金黄色葡萄球菌、 其他食中毒 菌发挥高的杀菌力。 另外， 本发明的杀菌剂通过使用动物的急性经口毒性试验、 眼刺激性试 验、 皮肤一次刺激性试验确认了安全性。本发明的杀菌剂包括水溶液或。

12、水分散体， 可以液 体、 喷雾剂、 泡状、 喷射剂等的形态使用。 说 明 书 CN 102802448 A 4 3/17 页 5 【实施例】 0031 以下， 通过试验例等更详细地说明本发明， 但本发明不受这些的限制。 0032 【1. 包括煅烧钙和乙醇的组合物的杀菌效果 ( 参考例 )】 0033 以表 1 及表 2 所示的配合处方制备配合贝壳煅烧钙 (NC 公司 ) 和乙醇， 余部为水 的组合物， 检查对大肠杆菌 (Esherichia coli NIHJ) 及金黄色葡萄球菌 (Staphylococcus aureus 209P)( 以下， 有时称之为 “供试菌” ) 的杀菌效果。 00。

13、34 ( 杀菌有效判断试验 ) 0035 上述组合物的杀菌效果通过作为消毒剂的杀菌效果判断法已知的 Kelsey-Sykes 法 (The pharmaceutical journal、 1974 年 11 月 30 日发行、 第 528 530 页 ) 的藤本变法 (“防菌防霉” 、 技报堂出版、 第 683 684 页 ) 判断。操作顺序的概略如下。 0036 (1) 向设定在 20的反应容器分注上述制备的混合液水分散体 3ml， 注加浓度 调节到 104 105cfu/ml 的供试菌 1ml( 将此时间点作为供试菌的最初的注加开始时 )、 其 8 分钟后， 采集反应液， 向放入后培养培养。

14、基 (Bacto(TM)Tryptic Soy Broth) 的 5 个试管各 注加接种 0.02ml(1 滴 )。 0037 (2)2 分钟后 ( 从步骤 (1) 的注加开始时经过 10 分钟后 )、 向反应液注入上述供试 菌1ml， 8分钟后(从步骤(1)的注加开始时经过18分钟后)、 采集反应液， 向放入后培养培 养基 (Bacto(TM)Tryptic Soy Broth) 的 5 个试管各注加接种 0.02ml(1 滴 )。 0038 (3)2 分钟后 ( 从步骤 (1) 的注加开始时经过 20 分钟后 )、 向反应液注入上述供试 菌1ml， 8分钟后(从步骤(1)的注加开始时经过2。

15、8分钟后)、 采集反应液， 向放入后培养培 养基 (Bacto(TM)Tryptic Soy Broth) 的 5 个试管各注加接种 0.02ml(1 滴 )。 0039 ( 评价 ) 0040 将步骤 (1) (3) 中得到的各 5 个试管于 37培养 24 小时， 在各步骤中， 在 5 个 中 3 个以上的试管未确认供试菌的增殖时， 判断有杀菌效果。 0041 具体性的评价如下。结果示于表 1 和表 2。 0042 ： 无杀菌效果 0043 ： 在步骤 (1) 有杀菌效果， 但在步骤 (2) 无杀菌效果 0044 ： 至步骤 (2) 有杀菌效果， 但在步骤 (3) 无杀菌效果 0045 ：。

16、 至步骤 (3) 有杀菌效果 0046 【表 1】 0047 0048 ： 无杀菌效果 0049 ： 在步骤 (1) 有杀菌效果， 但在步骤 (2) 无杀菌效果 0050 ： 至步骤 (2) 有杀菌效果， 但在步骤 (3) 无杀菌效果 说 明 书 CN 102802448 A 5 4/17 页 6 0051 ： 至步骤 (3) 有杀菌效果 0052 - ： 未实施 ( 由于效果明显 ) 0053 【表 2】 0054 0055 ： 无杀菌效果 0056 ： 在步骤 (1) 有杀菌效果， 但在步骤 (2) 无杀菌效果 0057 ： 至步骤 (2) 有杀菌效果， 但在步骤 (3) 无杀菌效果 00。

17、58 ： 至步骤 (3) 有杀菌效果 0059 - ： 未实施 ( 由于效果明显 ) 0060 从表 1 的结果得知， 对大肠杆菌而言， 将煅烧钙配合 0.05 重量以上时， 配合 10 重量以上的乙醇， 则可确认充分的杀菌效果 ( 评价 ： )。另外， 从表 2 的结果得知， 对金 黄色葡萄球菌而入亚， 将煅烧钙配合 0.05 重量以上时， 配合 20 重量以上的乙醇， 则可 确认充分的杀菌效果 ( 评价 ： )。 0061 【2. 配合乳酸钠的组合物 ( 本发明品 ) 的杀菌效果】 0062 以表3及表4所示的配合处方制备配合贝壳煅烧钙(NC公司)和乙醇及乳酸钠(60 重量水溶液、 武藏野。

18、化学研究所 )， 余部为水的各种的组合物， 检查对大肠杆菌及金黄色 葡萄球菌的杀菌效果。杀菌有效判断试验及评价方法与上述 “1. 包括煅烧钙和乙醇的组合 物的杀菌效果 ( 参考例 )” 同样地进行。结果示于表 3 和表 4。 0063 【表 3】 对大肠杆菌的杀菌效果 0064 0065 ： 无杀菌效果 0066 ： 在步骤 (1) 有杀菌效果， 但在步骤 (2) 无杀菌效果 0067 ： 至步骤 (2) 有杀菌效果， 但在步骤 (3) 无杀菌效果 0068 ： 至步骤 (3) 有杀菌效果 0069 - ： 未实施 ( 由于效果明显 ) 0070 【表 4】 对金黄色葡萄球菌的杀菌效果 说 明。

19、 书 CN 102802448 A 6 5/17 页 7 0071 0072 ： 无杀菌效果 0073 ： 在步骤 (1) 有杀菌效果， 但在步骤 (2) 无杀菌效果 0074 ： 至步骤 (2) 有杀菌效果， 但在步骤 (3) 无杀菌效果 0075 ： 至步骤 (3) 有杀菌效果 0076 - ： 未实施 ( 由于效果明显 ) 0077 从表3的结果得知， 以乳酸钠单独， 在配合9重量的乳酸钠时也完全无法确认对 大肠杆菌的杀菌效果(参照表3之左列)， 与此相比， 配合5重量的乙醇、 配合0.1重量 的煅烧钙时， 配合 1.5 重量以上的乳酸钠， 则杀菌效果从评价变成 ( 参照表 3 之中央 。

20、列 )。即， 通过对含有乙醇和煅烧钙的组合物配合乳酸钠， 可确认对大肠杆菌的杀菌力的增 强效果。 0078 此倾向以对金黄色葡萄球菌的杀菌效果显著地确认。即， 配合 5 重量的乙醇、 配 合 0.1 重量的煅烧钙时， 配合 4.5 重量的乳酸钠， 则杀菌效果从评价 变成 ( 参照 表 4 之中央列 )、 配合 10 重量的乙醇、 配合 0.2 重量的煅烧钙时， 配合 6 重量以上的 乳酸钠， 则杀菌效果从评价变成 ( 参照表 4 之右列 )。 0079 由乳酸钠的杀菌力的增强效果推测为由升高组合物中的氢氧化钙的溶解性所致。 即， 配合的煅烧钙与组合物中的水反应而作为氢氧化钙存在， 一般认为此氢。

21、氧化钙是示杀 菌效果的物质。然后认为， 氢氧化钙对水的溶解度小， 因此不发挥原本的杀菌效果， 但可认 为上述的结果提示， 通过乳酸钠的添加， 生成的氢氧化钙的溶解度升高。 0080 【3. 配合其他有机酸盐的组合物 ( 比较品 ) 的杀菌效果】 0081 除了代替乳酸钠而配合表 5 及表 6 所示的 3 种有机酸盐而使用由同表所示的配合 处方组成的组合物以外， 通过与 “1. 包括煅烧钙和乙醇的组合物的杀菌效果 ( 参考例 )” 同 样的方法检查对大肠杆菌及金黄色葡萄球菌的杀菌效果。结果示于表 5 和表 6。 0082 【表 5】 对大肠杆菌的杀菌效果 0083 说 明 书 CN 102802。

22、448 A 7 6/17 页 8 0084 ： 无杀菌效果 0085 ： 在步骤 (1) 有杀菌效果， 但在步骤 (2) 无杀菌效果 0086 ： 至步骤 (2) 有杀菌效果， 但在步骤 (3) 无杀菌效果 0087 ： 至步骤 (3) 有杀菌效果 0088 - ： 未实施 ( 由于效果明显 ) 0089 【表 6】 对金黄色葡萄球菌的杀菌效果 0090 0091 ： 无杀菌效果 0092 ： 在步骤 (1) 有杀菌效果， 但在步骤 (2) 无杀菌效果 0093 ： 至步骤 (2) 有杀菌效果， 但在步骤 (3) 无杀菌效果 0094 ： 至步骤 (3) 有杀菌效果 0095 - ： 未实施 。

23、( 由于效果明显 ) 0096 从表 5 的结果得知， 在配合 5 重量乙醇、 0.1 重量煅烧钙时， 配合 5 重量柠 檬酸三钠的组合物的对大肠杆菌的杀菌效果示评价。但是， 以配合 5 重量乙醇、 0.1 重 量煅烧钙的组合物也示与上述同样的杀菌效果(参照表3之中央列第一上)。 从而， 即便 配合 5 重量柠檬酸三钠， 也无法确认对大肠杆菌的杀菌力的增强效果。 0097 另外， 配合 5 重量醋酸钠或酒石酸钠的组合物的对大肠杆菌的杀菌效果示。 从而， 配合 5 重量醋酸钠或酒石酸钠时， 确认杀菌效果相反降低。 0098 如上所述， 将本试验中使用的 3 种有机酸盐配合到含有乙醇和煅烧钙的组合。

24、物 中， 也不增强对大肠杆菌的杀菌效果。 0099 上述的结果通过检讨对金黄色葡萄球菌的杀菌效果的表 6 更显著地确认。 0100 【4. 对各种食中毒菌的杀菌效果比较测试 1】 0101 配合贝壳煅烧钙 (NC 公司 )、 乙醇、 乳酸钠 (60 重量水溶液、 武藏野化学研究 所 )， 余部为水而制备下述处方的水分散体， 用膜滤器 ( 孔径 ： 0.45m) 过滤而制备透明的 水溶液 ( 本发明品 )， 供于以下的杀菌测试。作为比较品， 使用乙醇液 (30 重量 ) 和次氯 酸钠液 ( 有效氯量 150ppm)。 0102 0103 煅烧钙 0.2 重量 乙醇 10 重量 说 明 书 CN 。

25、102802448 A 8 7/17 页 9 乳酸钠 6 重量 水 83.8 重量 0104 对表 7 所示的 33 种食中毒菌比较了本发明品和比较品的杀菌效果。杀菌效果判 断试验及评价方法与上述 “1. 包括煅烧钙和乙醇的组合物的杀菌效果 ( 参考例 )” 同样地 进行。结果示于表 7。 0105 【表 7】 0106 说 明 书 CN 102802448 A 9 8/17 页 10 0107 EtOH ： 乙醇的缩写 0108 S.H ： 次氯酸钠的缩写 说 明 书 CN 102802448 A 10 9/17 页 11 0109 ： 无杀菌效果 0110 ： 在步骤 (1) 有杀菌效果，。

26、 但在步骤 (2) 无杀菌效果 0111 ： 至步骤 (2) 有杀菌效果， 但在步骤 (3) 无杀菌效果 0112 ： 至步骤 (3) 有杀菌效果 0113 【5. 对各种食中毒菌的杀菌效果比较测试 2】 0114 除了向上述 “4. 对各种食中毒菌的杀菌效果比较测试 1” 中使用的供试菌液配合 酵母提取物至成 4 重量的作为供试菌液以外， 以与上述 “4. 对各种食中毒菌的杀菌效果 比较测试 1” 同样的方法比较本发明品和比较品的杀菌效果。结果示于表 8。 0115 【表 8】 0116 说 明 书 CN 102802448 A 11 10/17 页 12 0117 EtOH ： 乙醇的缩写。

27、 0118 S.H ： 次氯酸钠的缩写 说 明 书 CN 102802448 A 12 11/17 页 13 0119 ： 无杀菌效果 0120 ： 在步骤 (1) 有杀菌效果， 但在步骤 (2) 无杀菌效果 0121 ： 至步骤 (2) 有杀菌效果， 但在步骤 (3) 无杀菌效果 0122 ： 至步骤 (3) 有杀菌效果 0123 如从表 7 得知， 对未配合酵母提取物的供试菌液而言， 本发明品相比乙醇液确认 高的杀菌效果， 确认与次氯酸钠液同等的高的杀菌效果。再者， 从表 8 的结果得知， 对配合 酵母提取物的供试菌液 ( 难呈现杀菌效果的菌液 ) 而言， 本发明品相比乙醇液或次氯酸钠 液。

28、确认高的杀菌效果。 0124 【6. 使用本发明品的杀菌测试】 0125 上述 “4. 对各种食中毒菌的杀菌效果比较测试 1” 中使用的本发明品供于以下的 杀菌测试。 0126 【6-1. 案板的杀菌测试】 0127 向含1105cfu/ml左右的大肠杆菌O-157(肠出血性大肠埃希氏菌(Escherichia coli)O157:H7 EDL 933) 的生理盐水浸渍案板 1 小时， 将此案板轻轻除水之后， 喷雾 (0.7ml) 本发明品， 1 分钟后， 使用灭菌绵棒， 从喷雾本发明品的部分采集待测样品而接种 到一 O-157 琼脂培养基 ( 关东化学 ) 中， 于 37培养 24 小时， 。

29、测定活菌数。 0128 作为比较品而使用一般在食品工场中以杀菌的目的使用的 70 重量乙醇而通过 与上述同样的方法进行杀菌处理， 测定活菌数。结果示于表 9。 0129 如从表 9 得知， 相比未进行杀菌处理的试验区、 用 70 重量乙醇进行杀菌处理的 试验区， 确认用本发明品进行处理的试验区中活菌数显著地降低。 0130 【表 9】 案板的除菌结果 ( 一般活菌数 ) 0131 本发明品 300 以下 乙醇 70 2.8104 未添加 6.8105 0132 【6-2. 使用本发明品的杀菌测试 2】 0133 向洗手后干燥的手喷雾 1.4ml 本发明品， 喷及到整个手， 1 分钟后， 使用灭。

30、菌绵棒， 从喷雾本发明品的部分采集待测样品而接种到标准琼脂培养基 ( 日水制药 )， 于 37培养 48 小时， 测定活菌数。 0134 作为比较品使用一般在食品工场以杀菌的目的使用的 70 重量乙醇， 通过与上 述同样的方法进行杀菌处理， 测定活菌数。结果示于表 10。 0135 如从表10得知， 相比用70重量乙醇进行杀菌处理的试验区， 确认用本发明品处 理的试验区中的活菌数显著地降低。 0136 【表 10】 手的杀菌结果 ( 一般活菌数 ) 0137 说 明 书 CN 102802448 A 13 12/17 页 14 本发明品 300 以下 乙醇 70 6.2103 0138 【6-。

31、3. 使用本发明品的杀菌测试 3】 0139 向 牛 肉 ( 肉 脍 )200g 加 2ml 弯 曲 杆 菌 菌 液 ( 空 肠 弯 曲 杆 菌 空 肠 亚 种 (Campylobacterjejuni subsp.Jejuni)JCM2013)1104cfu/ml 而混合之后， 在下述 1 4 的试验区进行处理， 于10储存处理后的牛肉(肉脍)， 储存后立即， 5小时后及24小时后， 分别采集20g牛肉， 用180ml的灭菌生理盐水(食盐浓度0.85)稀释、 将用细菌分离器破 碎的试验液 1ml 移到灭菌培养皿， 加 BHI 琼脂培养基 ( 荣研化学 )， 干燥之后于 42微好氧 培养 48。

32、 小时而测定活菌数。结果示于图 1。 0140 ( 试验区 ) 0141 试验区 1 ： 喷雾本发明品后混合 0142 试验区 2 ： 在本发明品中浸渍 1 分钟后， 除液 0143 试验区 3 ： 喷雾 70 重量乙醇后混合 0144 试验区 4 ： 无处理 0145 24 小时后， 用本发明品进行杀菌处理的试验区 1 中示 104程度的活菌数， 与此相 比， 用 70 重量乙醇杀菌处理的试验区 3 中示 105 106程度的活菌数。从而， 确认本发明 品相比 70 重量乙醇示更优良的杀菌力。 0146 另外， 不同地在牛肉 ( 肉脍 ) 调节试验区 1 4， 在未调味的状态下实施牛肉 ( 。

33、肉 脍 ) 的食味测试时， 试验区 1 与未进行杀菌处理的试验区 4 有同等的食味， 但在试验区 3 感 觉到来源于乙醇的苦味。 0147 再者知， 作为将本发明品向食品的处理方法， 浸渍处理 ( 试验区 2) 相比喷雾处理 ( 试验区 1) 在杀菌力的持续性的方面更优良。 0148 【7. 使用本发明品的安全性试验】 0149 上述 “4. 对各种食中毒菌的杀菌效果比较测试 1” 中使用的本发明品供于接下来 所述的 3 种安全性试验。 0150 【7-1. 使用小鼠的急性经口毒性试验】 0151 将本发明品作为待测样品， 研究了在小鼠中的急性经口毒性。 0152 购入 5 周龄的 ICR 系。

34、雌雄小鼠 ( 日本一株式会社 )， 进行约 1 周预备 饲育而确认在一般状态无异常之后， 在试验中使用。将试验动物在聚碳酸酯制笼中收容各 5 只， 在设定到室温 232、 照明时间 12 小时 / 日的饲育室中饲育。使自由摄取饲料 ( 小 鼠 - 大鼠用固型饲料 ： MR 、 日本农产工业株式会社 ) 及饮料水 ( 自来水 )。 0153 将待测样品用注射用水稀释而制备 100mg/ml 的试验液。作为待测样品施用量， 设 定施用 2000mg/kg 的试验组， 及作为溶剂对照， 设定施用注射用水的对照组， 各组使用雌雄 分别 5 只。 0154 在施用前让试验动物绝食约 4 小时。测定体重之。

35、后， 以分别 20ml/kg 的施用容量， 使用胃探测器强制单次经口施用， 在试验组施用试验液、 在对照组施用注射用水。 观察期间 作为 14 天。施用日进行多次、 从次日开始进行 1 天 1 次的观察。在施用后 7 及 14 天测定 体重， 通过 t- 检验， 以显著水平 5进行组间的比较。体重测定的结果示于表 11( 雄 )、 表 说 明 书 CN 102802448 A 14 13/17 页 15 12( 雌 )。观察期间结束时将动物全部剖检。 0155 【表 11】 体重变化 ( 雄 ) 0156 0157 体重用平均值 标准偏差表示 ( 单位 ： g)。 0158 括弧内示动物数。 。

36、0159 【表 12】 体重变化 ( 雌 ) 0160 0161 体重用平均值 标准偏差表示 ( 单位 ： g)。 0162 括弧内示动物数。 0163 试验的结果， 关于死亡例， 无论雌雄， 在任何的施用组中， 在观察期间均未确认到 死亡例。关于一般状态， 无论雌雄， 在任何的施用组中， 在观察期间均未确认到异常。在施 用后 7 及 14 天的体重测定中， 无论雌雄， 试验组相比对照组， 未观察到体重值的差。在观察 期间结束时的剖检中， 无论雌雄， 全部的试验动物中未观察到异常。从这些的结果， 在待测 样品的小鼠中， 通过单次经口施用的 LD50 值， 无论雌雄均在 2000mg/kg 以上。

37、。 0164 【7-2. 使用兔的眼刺激性试验】 0165 将本发明品作为待测样品， 根据 OECD 化学物质毒性试验指针 (2002)， 在兔中研究 眼刺激性。 0166 购入日本白色种雄兔(北山株式会社)， 进行1周以上的预备饲育而确认一 般状态无异常之后， 将 3 只在试验中使用。将试验动物个别地收容到 FRP 制笼， 在设定到室 温 222、 照明时间 12 小时 / 日的饲育室中饲育。饲料是限制供给兔 - 豚鼠用固型饲料 (LRC4、 ORIENTAL 酵母工业株式会社 )， 饮料水是自由摄取自来水。将试验开始时的体重为 3.22kg、 3.23kg、 3.06kg 的兔各自作为兔 。

38、No.1、 兔 No.2、 兔 No.3。 0167 在试验开始当日检查各试验动物的两眼之前眼部， 确认无异常。 体重测定后， 向各 试验动物的一侧眼结膜囊内点眼0.1ml待测样品， 保持约1秒钟上下稳合眼睑。 另一眼作为 无处置的对照。在点眼后 1、 24、 48 及 72 小时时， 使用裂隙灯 (10)( 株式会社一 ) 进行角膜、 虹膜、 结膜等的观察， 根据 Draize 法的基准对眼刺激性的程度记分。使用得到的 记分值计算各试验动物的合计评分， 每观察时间求出 3 只的平均合计评分。 0168 再有， 除点眼后 1 小时之外， 在各观察时间使用荧光素钠， 详细地观察角膜上皮障 碍的有。

39、无和程度。 0169 结果示于表 13( 兔 No.1)、 表 14( 兔 No.2)、 表 15( 兔 No.3)。 0170 【表 13】 兔 No.1 的记分结果 0171 说 明 书 CN 102802448 A 15 14/17 页 16 0172 括弧内示对照眼的结果。 0173 - ： 未判断 0174 ： 见到角膜表面的粗造化。 0175 【表 14】 兔 No.2 的记分结果 0176 0177 括弧内示对照眼的结果。 0178 - ： 未判断 0179 ： 见到角膜表面的粗造化。 0180 【表 15】 兔 No.3 的记分结果 0181 说 明 书 CN 10280244。

40、8 A 16 15/17 页 17 0182 括弧内示对照眼的结果。 0183 - ： 未判断 0184 ： 见到角膜表面的粗造化。 0185 将待测样品 0.1ml 点眼到兔 3 只的一侧眼的结果， 在试验眼， 从点眼后 1 小时， 在 全例观察到眼睑及眼球结膜的发红(点数1)以及白浊液状的分泌物(点数12)、 而且见 到角膜表面的粗造化。在 24 小时时， 在 2 例 ( 兔 No.2 及 No.3) 观察到分泌物及角膜表面 的粗造化、 在 48 小时时， 残留的刺激反应消失。此外， 有看到瞬膜的充血的例。 0186 在对照眼中， 在全例中， 在整个观察期间未观察到刺激反应。另外， 对试验。

41、眼及对 照眼进行由荧光素钠的检查时， 在全部的观察时间均未观察到染色。 0187 观察期间中的平均合计评分的最高值在试验眼是 4.0( 点眼后 1 小时 )、 在对照眼 是 0。从这些的结果， 在使用兔的眼刺激性试验中， 将待测样品评价为在 “无刺激物” 的范畴 内。 0188 【7-3. 使用兔的皮肤一次刺激性试验】 0189 将本发明品作为待测样品， 根据 OECD 化学物质毒性试验指针 (2002)， 在兔中研究 皮肤一次刺激性。 0190 购入日本白色种雄兔(北山株式会社)， 进行1周以上的预备饲育而确认在 一般状态无异常之后， 将 3 只在试验中使用。将试验动物个别地收容到 FRP 。

42、制笼， 在设定到 室温 222、 照明时间 12 小时 / 日的饲育室中饲育。饲料是限制供给兔 - 豚鼠用固型饲 料 (LRC4、 ORIENTAL 酵母工业株式会社 )， 饮料水是使自由摄取自来水。将试验开始时的体 重为 3.48kg、 3.17kg、 3.09kg 的兔分为作为兔 No.1、 兔 No.2、 兔 No.3。 0191 将各试验动物的体干背部被毛在试验的约 24 小时前剪毛。体重测定后， 对于试验 动物 1 只， 以约 6cm2的面积设定 4 个位置， 在其中的 2 个位置以达不到真皮的程度给角化 层赋予擦伤 ( 有伤皮肤 )、 在其他 2 个位置作为无处置 ( 无伤皮肤 )。

43、。向截断成约 2cm3cm 的纱布贴片均一地涂布待测样品 0.5ml， 适用到无伤及有伤皮肤的各 1 位置之后， 用 一 ( 株式会社 ) 固定。另外， 再用一一 一 ( 一株式会社 ) 保持， 以使贴片与皮肤接触。将其余的无伤及有 伤皮肤作为对照。 0192 适用时间作为 4 小时， 其后去除贴片， 将适用部位用注射用水清拭。除去后 1、 24、 说 明 书 CN 102802448 A 17 16/17 页 18 48 及 72 小时进行观察， 根据下述基准实施刺激反应的记分。 0193 0194 无红斑 0 非常地轻度的红斑 ( 勉勉强强可识别 ) 1 清楚的红斑 2 中度高度红斑 3 。

44、从高度红斑到微少的痂皮的形成 ( 至深部损伤 ) 4* ( 最高点 4) 0195 * 出血、 溃疡及坏死作为深部损伤， 分类到点数 4。 0196 0197 无浮肿 0 非常地轻度的浮肿 ( 勉勉强强可识别 ) 1 轻度浮肿 ( 可识别由清楚的膨隆所致的明确的缘 ) 2 中度浮肿 ( 约 1mm 的膨隆 ) 3 高度浮肿 (1mm 以上的膨隆和超出暴露范围的扩大 ) 4* ( 最高点 4) 0198 另外， 根据Federal Register(1972)， 将除去贴片后1、 24及48小时的记分值合计 而除以 6， 再算出各试验动物的平均而作为一次刺激性指数 (P.I.I.)， 基于以下所。

45、示的 ISO 10993-10 的基准， 进行待测样品的刺激性的评价。结果示于表 16。 0199 0200 ( 反应的分类 ) (P.I.I.) 无刺激性 0 0.4 弱的刺激性 0.5 1.9 中度的刺激性 2 4.9 强的刺激性 5 8 0201 【表 16】 皮肤反应的记分结果 说 明 书 CN 102802448 A 18 17/17 页 19 0202 0203 结果以红斑 - 痂皮 / 浮肿的顺序显示。 0204 除去后1小时时， 在全部的适用部位观察到清楚的红斑(点数2)， 在24小时时， 在 2 例 ( 兔 No.1、 兔 No.2) 的无伤皮肤及全例的有伤皮肤、 在 48 小时时， 在其余的适用部位消 失， 其后看不到刺激反应。根据 FederalRegister(1972) 求出的一次刺激性指数 (P.I.I.) 是 0.7， 在使用兔的皮肤一次刺激性试验中， 将待测样品评价为落入 “弱的刺激物” 的范畴。 0205 【工业实用性】 0206 本发明中涉及的杀菌剂可作为除了食品本身之外、 还可适用于调理器具、 调理设 备等的食品制备设备的杀菌剂而广泛利用。 说 明 书 CN 102802448 A 19 1/1 页 20 图 1 说 明 书 附 图 CN 102802448 A 20 。