本申请是申请日为1991年6月25日的美国申请No.720,357的继续部分,也是申请日为1991年5月7日的美国申请No.696,893的继续部分。 本发明涉及揭示式Ⅰ纤维蛋白原受体拮抗剂,当该药施用于哺乳动物,特别是人体时,可用于抑制纤维蛋白原与血小板的结合和抑制血小板的聚集。
在保持止血时,血小板与凝结的互相作用及溶解纤维蛋白系统可能引起疾病,需要加以预防和治疗。式Ⅰ纤维蛋白原受体拮抗剂在治疗与血小板聚集和纤维蛋白的形成有关的各种疾病中是有用的。
对血小板抑制剂的兴趣再次产生,是由于对血管疾病的发病机理中,对血小板的作用和血栓的形成有了更好的了解,这些血管疾病包括不稳定的绞痛、急性心肌梗塞和发作。
血小板是与细胞相像的失核碎片,存在于所有哺乳动物的血中,并参与血的凝固。纤维蛋白原是糖蛋白,作为血浆的一个普通成分存在。在血凝固机理中,纤维蛋白原参与血小板聚集和纤维蛋白的形成。血小板沉积在血管损伤位置上,在此,多数生理促效药起的作用是使血小板聚集,导致血小板栓形成,使失血量最少。如果血小板栓出现在血管腔中,正常血流就受损害。
在血小板粘连和聚集过程中,血小板膜受体是必需的。已知在血小板膜复合体Ⅱb/Ⅲa上的纤维蛋白原与受体的相互作用,对正常血小板功能是必需的。
Zimmerman等人在美国专利No.4,683,291中,描述了在纤维蛋白原-血小板、血小板-血小板和细胞-细胞的相互作用的研究领域中有用的肽类。所描述地肽类可用于希望在血中推迟或预防血栓或血块的形成之处。
Pierschbacher等人在美国专利No.4,589,881中描述了(纤)粘连蛋白的一个11.5KDal多肽碎片的序列,这个序列具体化了(纤)粘连蛋白的细胞-接合(attachment)-促进活性。
Ruoslahti等在美国专利No.4,614,517中描述了四肽改变了细胞到各种底质的细胞-接合活性。图1列出多肽,这些多肽可以用Ruoslahti等人在“测定显示细胞接合活性的最小肽”中的方法合成,Ruoslahti等人在美国专利No.4,578,079中描述了类似的四肽。
Pierschbacher等人在美国Proc.Natl.Acad.Sci.Vol81 pp.5985-5988,1984年10月,描述了保持接合-促进活性的粘连蛋白的细胞识别位置的变异体。Pierschbacher等人进一步测定与Arg-Gly-Asp-Ser肽相类似的许多结构细胞接合-促进活性,并且发现“精氨酸、甘氨酸和天冬氨酸酯残基,即使用十分有关的氨基酸也不能替代,但有几个氨基酸可以代替丝氨酸,而不致丧失活性”。
Ruoslahti等人在1987年10月23日第238卷p491-497的科学杂志中讨论细胞粘连蛋白质的问题。他们具体说明“在粘连蛋白(fibronectin)中细胞-接合范围的氨基酸序列及其与合成肽的重迭的解释,确立了Arg-Gly-Asp(RGD)序列为在粘连蛋白中被细胞识别的基本结构”。
Cheresh 1987年9月在美国Proc.Natl.Acad.Sci杂志第84卷P6471-6475中描述了涉及连结在纤维蛋白原和Von Willebrand因子上的Arg-Gly-Asp-导向(directed)粘连受体。
Adams等人在美国专利No.4,857,508中描述了四肽,这些四肽抑制血小板聚集和血栓的形成。
因此,本发明目的之一是提供纤维蛋白原受体拮抗剂,用于抑制纤维蛋白原与血小板的接合和抑制血小板的聚集。本发明的另一个目的是提供新颖的纤维蛋白原受体拮抗剂化合物。本发明的另一个目的是提供抑制纤维蛋白原与血小板结合以及抑制血小板聚集的方法,途径是施用新颖的纤维蛋白原受体拮抗剂化合物。以上提到的以及其它目的将在本发明下述描述中加以说明。
本发明提供下式化合物的纤维蛋白原受体拮抗剂:
可以用于抑制纤维蛋白原与血小板的结合和抑制血小板的聚集。上面所提的化合物被用于对纤维蛋白原受体起作用的方法中,包括施入治疗有效而无毒量的化合物到哺乳动物身上,特别是人体上。包含药学上可接受的载体和分散于其中的有效但无毒量的这些化合物的药物组合物,也是本发明的另一个特点。
式Ⅰ的纤维蛋白原受体拮抗剂化合物,在抑制纤维蛋白原与血小板的结合和抑制血小板聚集的方法中是有用的。本发明的纤维蛋白原受体拮抗剂由下式化合物或其药学上可接受的盐,或其旋光异构体说明。
这里A=N和B=-CH2-,或A=-CH-和B=NR7;
Y是
这里R10是C1-8烷基,芳基,芳基C1-8烷基;
u是-CH-,-C-,或-N-;
v是-CH-,-C-,或-N-;
R和R1各自为氢,
芳基,其中芳基定义的单或多环芳香系,包括5元或6元环,并具有选自氮、氧和硫的0、1、2、3或4个杂原子;和未取代或被选自一个或一个以上下述基团取代的亚苯基:羟基、氟、氯、溴、碘、氰基、三氟甲基、C1-3烷氧基、C1-5烷基羰氧基、C1-5烷氧基羰基、C1-5烷基、氨基C1-5烷基、羟基羰基C0-5烷基或羟基羰基C1-5烷氧基,
C0-6烷基,它未被取代或被选自下面基团中的一个或一个以上基团所取代:氟、氯、溴、碘、羟基、C1-5烷基羰基(C0-8烷基)氨基、芳基C1-5烷基羰基(C0-8烷基)氨基、芳氧基、C1-10烷氧基、C1-5烷氧基羰基、C0-5烷基氨基羰基、C1-5烷基羰氧基、C3-8环烷基、芳基、氧代、氨基、C1-6烷基、C1-3烷基氨基、氨基C1-3烷基、芳基C0-5烷基氨基羰基、苯基C1-3烷基氨基、氨基羰基C0-4烷基、C1-8烷基磺酰基(C0-8烷基)氨基、芳基C0-10烷基磺酰基(C0-8烷基)-烷基磺酰基、C0-8烷基磺酰基、羟基羰基C0-5烷基、C1-8烷氧基羰基(C0-8烷基)氨基、芳基C0-10烷氧基羰基(C0-8烷基)氨基、C0-8烷基氨基羰基(C0-8烷基)氨基、芳基C0-8烷基氨基羰基(C0-8烷基)氨基、C0-8烷基氨基羰氧基、芳基C0-10烷基氨基羰氧基、C0-8烷基氨基磺酰基(C0-8烷基)氨基、芳基C0-8烷基氨基磺酰基(C0-8烷基)氨基、C0-8烷基氨基磺酰基或芳基C0-8烷基氨基磺酰基;
条件是与R或R1相连的碳原子只带有一个杂原子,
R2是氢
未取代或取代的C1-12烷基,取代基为一个或一个以上如下基团:C1-6烷基、
其中R9是支链或直链C1-6烷基,或苯基,当出现多于一个基团时,R9可以相同或不同;
R7、R3和R4各自为:
氢,
未取代或取代的C1-12烷基,取代基为一个或一个以上的C1-6烷基基团,
芳基C0-4烷基,或
氰基,
条件是当R7和R3各自为氰基时X是
K是 1-4;
m是 1-4;
p是 1-6;
q是 0-2。
本发明较优选如下式的化合物,或其药学上可接受的盐,或其旋光异构体。
Ⅰ
其中
X是-NR7R3,
Z是CO2R2
Y是
其中n是1、2或3;
R和R1各选自:
苯基、噻吩、咪唑、萘基、吲哚、吡唑、硫茚,上面这些基或者未取代或者被下述基团取代:羟基、卤素、羟基羰基C0-5烷基、C1-3烷基,或者未取代或者被一个或一个以上下述基团取代:芳基、芳氧基、C1-10烷氧基、C0-5烷基氨基羰基、芳基C0-5烷基氨基羰基,
氢,
未取代或取代的C0-6烷基,取代基是一个或一个以上的基团,选自卤素、羟基、C1-6烷基磺酰基氨基、芳基C0-6烷基磺酰基氨基、C1-6烷基磺酰基,芳基C0-6烷基磺酰基、C1-5烷基羰基氨基、芳基C1-5烷基羰基氨基、芳氧基、C1-10烷氧基、C1-5烷氧基羰基、C0-5烷基氨基羰基、C1-5烷基羰氧基、C3-8环烷基、芳基、氧代、氨基、C1-6烷基、C1-3烷基氨基、氨基C1-3烷基、芳基C0-5烷基氨基羰基、苯基C1-3烷基氨基、氨基羰基C0-4烷基或羟基羰基C0-5烷基,条件是与R或R1相连的碳原子只带有一个杂原子,
R2是氢,
未取代或取代的C1-12烷基,取代基是一个或一个以上
C1-6烷基、或
,其中R9=支链或直链C1-6烷基或苯基,当取代基多于一个基团时,则R9可以相同或不同;
R7、R3和R4各自为:
氢,或
未取代或取代的C1-3烷基、取代基是一个或一个以上C1-6烷基;
K是1-4;
m是1-4;
q是0或2;
p是1-3。
本发明最优选的化合物是下式化合物,或其药学上可接受的盐或其旋光异构体。
X是
-NR7R3;
这里D=-O-,-S-,或,
Z是CO2R2
Y是
其中n是1、2或3;
R和R1各选自苯基、噻吩、咪唑、萘基、吲哚、吡唑、硫茚,这些基团或者未取代或者被下述基团取代:羟基、卤素、羟基羰基C0-5烷基、C1-3烷基,或者未取代或者被一个或一个以上如下基团取代:芳基、芳氧基、C1-10烷氧基、C0-5烷基氨基羰基、芳基C0-5烷基氨基羰基,
氢,
未取代或取代的C0-6烷基,取代基选自下面的一个或一个以上基团:卤素、羟基、C1-5烷基羰基氨基、芳基C1-5烷基羰基氨基、芳氧基、C1-10烷氧基、C1-5烷氧基羰基、C0-5烷基氨基羰基、C1-5烷基羰氧基、C3-8环烷基、芳基、氧代、氨基、C1-6烷基、C1-3烷基氨基、氨基C1-3烷基、芳基C0-5烷氧氨基羰基、苯基C1-3烷基氨基、氨基羰基C0-4烷基或羟基羰基C0-5烷基,条件是与R或R1相连的碳原子只带有一个杂原子;
R2是氢;
R7、R3和R4是氢;
m是1-4;
p是2-4。
本发明包括下列缩写符号:Bn,苄基;NMM,N-甲基吗啉;HOBt,1-羟基苯并三唑;EDC,1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基羰化二亚胺盐酸化物;DMF,二甲基甲酰胺;BOC,叔-丁氧基羰基;pTSA,对-甲苯磺酸;DMS,二甲硫;TFA,三氟乙酸;THF,四氢呋喃;TBDMS,叔-丁基二甲基甲硅烷基。
式Ⅰ化合物的药学上可接受的盐包括所生成的式Ⅰ化合物的常用无毒盐或季铵盐,即从无毒无机酸或有机酸生成的盐。如这些常用无毒盐包括从无机酸中衍生出来的,如盐酸、氢溴酸、硫酸、氨基磺酸、磷酸、硝酸等;从有机酸制备的盐,有机酸如乙酸、丙酸、琥珀酸、乙醇酸、硬脂酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、抗坏血酸、2,2′-二羟基-1,1′-二萘基-甲烷-3,3′-二羧酸、马来酸、羟基马来酸、苯乙酸、谷氨酸、苯甲酸、水杨酸、磺胺酸、2-乙氧基苯甲酸、富马酸、甲苯磺酸、甲磺酸、乙烷二磺酸、草酸、羟乙磺酸等。
通过常规化学方法,从含有碱性或酸性部分的式Ⅰ化合物中可以合成本发明的药学上可接受的盐。一般来说,在合适溶剂或溶剂的各种结合中,通过游离碱或酸与等当量或过量的成盐所需的无机酸或有机酸或碱反应制得盐。
用常规方法如式Ⅰ的酸用适量碱(如碱金属或碱土金属氢氧化物如钠、钾、锂、钙或镁)或有机碱(如胺:二苄基亚乙基二胺、三甲基胺、哌啶、吡咯烷、苄胺等)或氢氧化季胺(氢氧化四甲胺)等处理很易制得药学上可接受的式Ⅰ酸的盐。
式Ⅰ化合物可用于抑制纤维蛋白原与血小板的结合、抑制血小板的聚集、治疗血栓形成或栓子形成,预防血栓形成或栓子形成,和调节细胞-细胞融合过程,如精子-卵子融合,导致哺乳动物受精的抑制。这些化合物可用作哺乳动物,特别是人的药剂。本发明化合物可施于病人,在病体内可望通过抑制纤维蛋白原与血小板膜糖蛋白复合Ⅱb/Ⅲa受体的结合而预防血栓的形成。本发明化合物也用于预防或调节急性或慢性的心肌梗塞、不稳定的绞痛和血栓的发作。此外,这些化合物还可用于在周围动脉(动脉移植、颈动脉动脉内膜切除术)外科手术,和心血管外科手术,其中对动脉和器官的操作法,和/或血小板与人工表面互相作用,导致血小板聚集和消耗。聚集的血小板可以形成血栓和血栓栓塞。本发明的化合物可以施于外科病人,预防血栓或血栓栓塞的形成。
通常体外循环用于心血管外科手术,以给血充氧。血小板粘附于体外回路的表面。粘连取决于在血小板膜上的GPⅡb/Ⅲa和吸附到回路表面纤维蛋白原之间的相互作用(Gluszko等,Amer.J.Physiol.,1987,252:H,pp615-621)。从人工表面释放出的血小板表明受损伤的止血作用。可施用本发明化合物以预防粘连。
这些化合物的其它用途,包括在溶解血栓治疗期间或之后的时期,预防血小板血栓形成、血栓栓塞、再闭塞和再狭窄,在冠状的或其它动脉血管成形术之后和冠状动脉分路迂回(bypass)过程之后,防止血小板血栓形成、血栓栓塞、再闭塞和再狭窄。
式Ⅰ化合物可以施用于哺乳动物上,最好与药学上可接受的载体或稀释剂结合施用,比较好的是与已知辅剂如明矾一起施用,所用的药物组合物是无毒的,按照标准药物上的实践,以治疗上有效量配置。化合物可以口服或胃肠外施用,包括静脉内、肌肉内、腹膜内、经皮、皮下和局部施用。
按照本发明作为口服用的纤维蛋白原受体拮抗剂,已选出的化合物可采用药片或胶囊形式,或作水溶液或悬浮液施用。药片用于口服的情况时,通常所用的载体包括乳糖和玉米淀粉,一般加入润滑剂,如硬脂酸镁。对口服胶囊形式,有用的稀释剂包括乳糖和干玉米淀粉。当需要口服用水悬浮液时,活性成分与乳化剂和悬浮剂结合使用。如需要,可以加入甜味剂和/或香味剂。
为肌内、腹膜内、皮下和静脉内施用,通常要制备成活性成分的无菌溶液。溶液的pH值应适当调节和缓冲。用于静脉,溶液的总浓度应该加以控制,以使制剂等渗。
本发明也包括药物组合物,用于治疗和预防与血小板聚集、纤维蛋白形成、血栓和栓子的形成有关的疾病,包括施用治疗有效而无毒量的式Ⅰ化合物,用或不用药物上可接受的载体或稀释剂。
本发明组合物包括本发明的纤维蛋白原受体拮抗剂化合物与药物上可接受的载体(如盐水,pH在7.4)的结合,适宜于达到抑制血小板聚集的目的。组合物也可以与抗凝结剂(如肝素或丙酮苄羟香豆素)结合使用。组合物也可与溶解血栓剂(如纤维蛋白溶酶原活性剂或链激酶)结合使用,以达到在急性情况下抑制血小板聚集。组合物还可进一步与抗血小板剂(如阿斯匹林)结合使用。组合物可溶于水介质中,因此可以有效地以溶液的形式施用。
当式Ⅰ化合物在人的受试者上用作纤维蛋白原受体拮抗剂时,每日剂量通常是由开处方的内科医生决定,剂量通常随每个病人的年龄、体重、反应以及病人症状的严重程度而变动。
在一个应用实施例中,适宜量的化合物以口服方式施用于在血管成形术之前或之后的心脏病发作受害者上。在血管成形术之前或之后进行施药,用量要足以抑制血小板聚集,例如用量所可以达到稳定状态血浆浓度,大约在0.01-100μM,最好在大约0.01-10μM之间。
本发明也包括一种药物上的组合物,此组合物包括本发明的化合物,与组织类型纤维蛋白溶酶原活性剂或链激酶结合使用。本发明也包括一种促进血栓溶解和预防病人体内的再闭塞的方法,包括对病人施用一种本发明有效量的组合物。
本发明提供一个方法抑制纤维蛋白原与血小板结合,抑制血小板聚集、治疗血栓的形成或栓塞的形成,预防哺乳动物血栓形成或栓塞形成,包括施用治疗上有效而无毒性量的本发明化合物,用或不用药学上可接受的载体或稀释剂。
本发明仍可进一步提供一种方法,以抑制纤维蛋白原与血小板结合、抑制血小板聚集、治疗血栓形成或栓子形成,在哺乳动物体内预防血栓形成或栓子形成,包括施用治疗上有效而无毒量的本发明化合物,与溶解血栓剂(如组织纤维蛋白溶酶原活性剂或链激酶)、抗凝结剂(如肝素或丙酮苄羟香豆素)或抗血小板剂(如阿斯匹林)相结合使用,可用或不用药学上可接受的载体或稀释剂。
下面化合物和相关的IC50值(浓度,此浓度与没有这种化合的对照物相对的抑制聚集达50%)是本发明的示例。
化合物 IC50
根据下面一般方法中的一个,可以制得本发明化合物:
反应流程1
如果需要,保护芳基或烷基醇通过草酰氯/DMSO、氯铬酸吡啶鎓或类似试剂氧化成相应的醛。这些氧化作用典型的在-78℃至室温,在卤化碳溶剂如CH2Cl2中反应0.5-6小时进行。所得的醛与烷氧羰基亚甲基正膦的烯化作用得所希望的不饱和酯。这个反应典型的在0-60℃,在卤化碳溶剂(如CH2Cl2)进行1-18小时。这个酯与手性胺(如R-(+)-α-甲基苄胺)处理得到非对映异构的胺混合物,并通过典型的柱色谱法分离。
反应流程2
用BOC或类似的合适基团(如CBZ、FMOC等)在N上保护氨基链烷醇,并且转化成烷基卤,典型的是碘化物。Ph3p和碘通常用于此目的,该反应在芳香溶剂(如苯或甲苯),在卤化碳(如CH2Cl2)中,于0-50°进行5分钟到10小时。用NaN3或类似叠氮转移剂处理完成烷基叠氮生成,在醇溶剂(EtOH、CH3OH)中,室温下,0.5-10小时把这个叠氮化物催化还原成相应的胺。
反应流程3
在合适碱(如LiN(TMS)2)或类似胺(如EtN(i-Pr)2)和合适烷基化剂(如烷基)存在下在烷基碘或烷基溴(如溴乙酸乙酯)中,产生环酰胺或脲中间体的烷基化。通过脱质子化作用/烷基化过程的重复,产生在中间体中的双取代。当烯丙基试剂用于烷基化时,接着用RuCl3/NaIO4或KMnO4或其它合适试剂氧化得末端羧酸。然后通过酰胺键与末端碳手性或非手性的胺键合使此酸偶合得另一个中间体。通常偶合反应在DMF或卤化碳溶剂(如CH2Cl2)中,用标准试剂(如DCC、EDC、氯甲酸异丁酯等)进行。中间体最终脱保护,通常包括催化酯水解的碱和催化N-脱保护的酸。
根据下面所列反应方案制备式Ⅰ化合物。化合物1,3-吲哚丙醇从商业Aldrich Chemical中很易得到。
反应流程1
反应流程Ⅰ 继续
化合物8 商业上从American Tokyo Kansei Inc很易得到
反应流程2
反应流程3
反应流程3 继续
反应流程4
反应流程4 继续
反应流程4 继续
反应流程5
反应流程5 继续
反应流程6
反应流程6 继续
反应流程6 继续
反应流程6 继续
反应流程9
反应流程9 继续
反应流程10
反应流程10 继续
反应流程11
反应流程11继续
反应流程13
反应流程13继续
反应流程14
反应流程14 继续
反应流程15
反应流程15 继续
反应流程15继续
制备3-(吲哚-3-基)丙醇-叔-丁基-二甲基甲硅烷基醚(2)
在0℃向3-吲哚丙醇1(15g,86mmol)、DMF(200ml)和咪唑(12.8g,0.19mol)的搅拌着的溶液中,加入氯代叔-丁基二甲基甲硅烷基(14.2g,95mmol),接着移走冷浴。20小时后,用乙醚稀释反应混合物,用水(2次)和盐水洗涤、干燥(MgSO4),浓缩得琥珀色油状甲硅烷基醚2(29g)。
TLC Rf=0.54(20% 乙酸乙酯/己烷);
1H NMR(CDCl3)δ8.07(bs,1H),7.77(d,J=7Hz,1H),7.49(d,J=7Hz,1H),7.33(t,J=7Hz,1H),7.26(t,J=7Hz,1H),7.12(s,1H),3.84(t,J=6Hz,2H),2.95(t,J=7Hz,2H),2.08(m,2H),1.08(s,9H),0.25(s,3H),0.22(s,3H).
制备N-乙酰基-3-(吲哚-3-基)丙醇-叔-丁基二甲基甲硅烷基醚(3)
在室温,将吲哚2(29g,86mmol)、CH2Cl2(450ml),1,8-重氮二环〔5.4.0〕十一碳-7-烯(38ml,0.26ml),4-二甲基氨基吡啶(1.0g,8.5mmol)和乙酸酐(32ml,0.34mol)的溶液搅拌一周。浓缩反应混合物,然后用醚稀释。该醚用H2O,5% KHSO4和盐水洗涤,干燥(MgSO4),浓缩。快速色谱(硅胶,5%乙酸乙酯/己烷)得黄色油状酰化了的产品3(27g)。
TLC Rf=0.56(20% 乙酸乙酯/己烷)。
制备N-乙酰基-3-(吲哚-3-基)丙醇(4)
把予先混合的n-Bu4NF(1M在THF中:244ml,0.24mol)和ACOH(14ml,0.24mmol)1∶1的溶液,于室温下,加到搅拌着的甲硅烷基醚3(27g,81mmol)的THF(270ml)溶液中。20小时后,用乙醚稀释反应混合物,然后用水(2次)和盐水洗涤,干燥(MgSO4),浓缩得黄色结晶固体的醇4(19g);
TLC Rf=0.35(60% 乙酸乙酯/己烷);
1H NMR(CDCl3)δ8.42(m,1H),7.55(d,J=7Hz,1H),7.36(t,J=7Hz,1H),7.29(t,J=7Hz,1H),7.27(7d,J=7Hz,1H),7.22(s,1H),3.76(t,J=7Hz,2H),2.82(t,J=7Hz,2H)2.61(s,3H),2.00(m,2H).
制备5-(N-乙酰基-吲哚-3-基)戊-2-烯酸乙酯(5)
在-78℃,把无水DMSO(12.4ml,0.17mol)滴加到搅拌着的草酰氯(11.4ml,0.13mol)的CH2Cl2(440ml)溶液中。5分钟后气体停止放出,加入醇4(19g,87mmol)的CH2Cl2(40ml)溶液。30分钟后,将NEt3(73ml,0.52mol)加入以产生浓浆。移走冷浴,反应物再搅拌15分钟,然后加入(乙酯基亚甲基)三苯基正膦(33.5g,96mmol)。2.0小时后,用醚稀释反应混合物,然后用水(2次),5%KHSO4和盐水洗涤,干燥(MgSO4),浓缩。快速色谱(20%乙酸乙酯/己烷)得白色固体的烯烃5(14g)。
TLC Rf=0.54(60% 乙酸乙酯/己烷);
1H NMR(CDCl3)8.42(bd,1H),7.50(d,J=7Hz,1H),7.34(t,J=7Hz,1H),7.28(t,J=7Hz,1H),7.19(bs,1H),7.03(dt,J=18 and 7Hz,1H),5.88(d,J=18Hz,1H),4.19(q,J=7Hz,2H),2.87(t,J=7Hz,2H),2.63(m,2H),2.61(s,3H),1.28(t,J=7Hz,3H).
制备N-(R)-α-甲基苄基-3(R)-〔2-(吲哚-3-基)乙基〕β-氨基丙酸乙酯(6a)和N-(R)-α-甲基苄基-3(S)-〔2-(吲哚-3-基)乙基〕β-氨基丙酸乙酯(6b)
在指形冷冻器中把烯烃5(2.77g,9.7mmol)和R-(+)-α-甲基苄胺(5.03ml,39mmol)的混合溶液在110℃加热40小时。冷的反应混合物直接用于快速色谱(硅胶,40∶2∶1,己烷∶乙酸乙酯∶2-丙醇)。(R,R)异构体6a首先洗脱(1.19g)为粘稠黄色油状物,静置固化。用己烷/乙酸乙酯重结晶得结晶物质。然后洗脱(R,S)异构体(6B)(1.55g)为粘稠黄色油状物,其中含大约10%(R,R)异构体。
6a:Rf=0.52(60% EtoAc/己烷);
1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ7.84(br s,1H),7.52(dd,J=7.9,0.7Hz,1H),7.20-7.35(m,6H),7.16(tm,J=7.1,1.3Hz,1H),7.08(tm,J=7.3,1.1Hz,1H),6.70(br d,J=2.4Hz,1H),4.10(q,J=7.1Hz,2H),3.90(q,J=6.6Hz,1H),2.80-2.90(m,2H),2.68(ABXdt,J=16,7.9Hz,1H),2.53(ABX dd,J=14.5,5.9Hz,1H),2.42(ABX dd,J=14.6,5.3Hz,1H),1.79(q,J=7.5Hz,2H),1.33(d,J=6.4Hz,3H),1.22(t,J=7.1Hz,3H).
6b:Rf=0.42(60% EtOAc/己烷):1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.95(br s,1H),7.57(dd,J=7.5,0.7Hz,1H),7.34(dm,J=8.1,0.7Hz,1H),7.17-7.30(m),7.11(tm,J=7.9,0.9Hz,1H),6.89(br d,J=2.2Hz,1H),4.02-4.15(ABX m,2H),3.89(q,J=6.6Hz,1H),2.95(m,1H),2.82(ABX ddd,J=15,9.7,5.9Hz,1H),2.69(ABX ddd,J=15,9.7,6.0Hz,1H),2.47(ABX dd,J=15.0,5.1Hz,1H),2.40(ABX dd,J=15.0,7.7Hz,1H),1.96(m,1H),1.83(m,1H),1.30(d,J=6.6Hz,3H),1.21(td,J=7.1,0.7Hz,3H).
制备3(R)-〔2-(吲哚-3-基)乙基〕β-氨基丙酸乙酯(7a)
将胺6a(996mg,2.74mmol)溶于10ml EtOH中。加Pearlman′s催化剂(20%pd(OH)2/C,128mg)后,将烧瓶充氢气,并保存球压,16小时后,将新鲜H2和另外一份催化剂(122mg)加入,4小时后,样品在硅藻土上过滤、浓缩得胺7a(707mg,99%,大约95%纯度)。
Rf=0.22(10∶1,NH3饱和,CHCl3∶EtOAc);
1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ8.01(br s,1H),7.60(dt,J=8.9,0.4Hz,1H),7.35(dt,J=8.1,0.9Hz,1H),7.19(td,J=7.1,1.3Hz,1H),7.11(td,J=7.1,1.2Hz,1H),6.99(br d,J=2.2Hz,1H),4.15(q,J=7.1Hz,2H),3.72(q,J=7.0Hz,1H),3.29(m,1H),2.92-2.78(m,2H),2.53(ABX dd,J=15.6,4.0Hz,1H),2.33(ABX dd,J=15.6,8.8Hz,1H),1.92-1.73(m,2H),1.25(q,J=7.1Hz,3H).
制备N-BOC-4-哌啶乙醇(9)
在0℃,把N-叔-丁氧基羰基酐(31g,0.14mol)加到搅拌着的4-哌啶乙醇8(18.7g,0.14mol)和DMF(200ml)溶液中。1小时后,移去冷浴,将反应混合物搅拌20小时。用醚稀释反应混合物,然后用水(2次)和盐水洗涤,干燥(MgSO4),浓缩,得无色油状物9(26g,62%)。
TLC Rf=0.25(40% 乙酸乙酯/己烷);
1H NMR(300 MHz,CDCl3)δ4.09(bs,2H),3.72(t,J=7Hz,2H),2.70(m,2H),1.75-1.10(m,7H),1.46(s,9H).
制备N-BOC-4-哌啶乙基碘化物(10)
室温下,把碘(22.0g,85mmol)加到搅拌着的9(18.0g,77mmol)、三苯基膦(22.2g,85mmol),咪唑(7.9g,115mmol)和苯(800ml)的溶液中。5分钟后,过滤非均相的反应混合物,浓缩过滤物。快速色谱(硅胶,10%乙酸乙酯/己烷)得油状物10(20g,59%)。
TLC Rf=0.95(50%乙酸乙酯/己烷);
1H NMR(300 MHz,CDCl3)δ4.11(m,2H),3.24(t,J=6Hz,2H),2.72(m,2H),1.82(dt,J=7,7Hz,2H),1.75,-1.55(m,5H),1.48(s,9H),1.12(m,2H).
制备N-BOC-4-哌啶乙基叠氮化物(11)
将10(5.0g,14.7mmol),DMSO(75ml)和NaN3(1.9g,29.4mmol)的溶液在70℃加热2小时。用乙酸乙酯稀释冷的反应混合物,用水(2次)和盐水洗涤、干燥(MgSO4),浓缩,得无色油状物11(3.6g,96%)。
TLC Rf=0.75(30%乙酸乙酯/己烷);
1H NMR(300 MHz,CDCl3)δ4.11(m,2H),3.36(t,J=7Hz,2H),2.73(m,2H),1.70(m,3H),1.49(s,9H),1.15(m,2H).
制备N-BOC-4-哌啶乙胺(12)
将11(1.1g,4.3mmol),10%Pd/C(0.16g)和乙醇的混合物于氢气(1大气压)下搅拌1.5小时。在硅藻土填料上过滤反应混合物,浓缩过滤物,得粗油状物12(1.0g)。
TLC Rf=0.18(9∶1∶1 CH2Cl2/CH3OH/HOAC);
1H NMR(300 MHz,CDCl3)δ4.10(m,2H),2.78(t,J=7Hz,2H),2.70(m,2H),1.80(m,2H),1.67(m,2H),1.52(m,1H),1.47(s,9H),1.17(m,2H).
制备1-〔2-(N-BOC-哌啶-4-基)乙基〕-3-丙烯-2-基-(2-咪唑啉酮)(14)
在室温下,把LiN(TMS)2(1M在己烷中,17ml)加到搅拌着的13(1.5g,17mmol)的DMF(75ml)溶液中以产生沉淀。然后将烯丙基溴(1.6ml,19mmol)加到反应混合物中。15分钟后,又用LiN(TMS)2(14ml)处理均相混合物,5分钟后接着加碘化物10(5.9g,17mmol),将反应物搅拌20小时,然后用醚稀释。用水(2次),5%KHSO4和盐水洗涤醚的部分,干燥(MgSO4),浓缩。快速色谱(40%乙酸乙酯/己烷)得无色油状物14(0.8g,15%)。
TLC Rf=0.46(70%乙酸乙酯/己烷);
1H NMR(300 MHz,CDCl3)δ5.80(m,1H),5.23(m,2H),4.10(m,2H),3.82(m,2H),3.30(m,6H),2.72(m,2H),1.70(m,3H),1.50(m,2H),1.46(s,9H),1.15(m,2H).
制备1-〔2-(N-BOC-哌啶-4-基)乙基)-3-乙酸-(2-咪唑啉酮)(15)
在室温下,把RuCl3(12mg,4.4mol%)和过量NaIO4加到激烈搅拌的14(450mg,1.4mmol),CCl4、乙腈和水的溶液中。60小时后,反应混合物在硅藻填料上过滤,用乙酸乙酯洗涤。滤液用饱和NaHCO3萃取,接着用5%KHSO4酸化该水相为pH3。然后用乙酸乙酯(2次)萃取酸性水相,干燥(MgSO4)有机相部分,浓缩。快速色谱(硅胶,9∶0.2∶0.2 CH2Cl2/CH3OH/HOAC)得无色油状物15(60mg,12%)。
TLC Rf=0.29(9.5∶0.5∶0.5CH2Cl2/CH3OH/HOAC).
1H NMR(300 MHz,CDCl3)δ4.05(m,2H),3.90(m,2H),3.45(m,2H),3.40(m,2H),3.24(m,2H),2.69(m,2H),1.72(m,2H),1.46(m,3H),1.46(s,9H),1.15(m,2H).
制备〔1-〔2-(N-BOC-哌啶-4-基)乙基〕-(2-咪唑啉酮)-3〕-乙酰基-3(R)-〔2-(吲哚-3-基)-乙基〕β-氨基丙酸乙酯(16)
在0℃用EDC(42mg,0.22mmol)处理搅拌着的15(60mg,0.17mmol)、7a(66mg,0.25mmol)、HOBT(30mg,0.22mmol)、三乙胺(31uL,0.22mmol)和DMF(1.1ml)的溶液,接着移去冷浴。20小时后,用乙酸乙酯稀释反应液,然后用水、5%KHSO4和盐水洗涤、干燥(MgSO4),浓缩,快速色谱(硅胶、乙酸乙酯)得无色油状物16(35mg,35%)。
TLC Rf=0.20(乙酸乙酯);
1H NMR(300 MHz,CDCl3)δ8.07(bs,1H),7.57(d,J=8Hz,1H),7.37(d,J=8Hz,1H),7.18(t,J=8Hz,1H),7.11(t,J=8Hz,1H),7.05(bs,1H),6.89(d,J=9Hz,1H),4.37(m,1H),4.13(q,J=7Hz,2H),4.07(m,2H),3.83(dd,J=18Hz,2H),3.43-3.20(m,6H),2.80(m,2H),2.56(d,J=5Hz,2H),2.00-1.05(m,9H),1.47(s,9H),1.25(t,J=7Hz,3H).
制备〔1-〔2-(N-BOC-哌啶-4-基)乙基〕-(2-咪唑啉酮(imidazolidinone))-3〕-乙酰基-3(R)-〔2-(吲哚-3-基)乙基〕-β-氨基丙酸(17)
在室温下,把16(30mg,50μmol)、1N NaOH(0.2ml)和乙醇的混合物搅拌1小时。用乙酸乙酯和5% KHSO4稀释反应混合物,用水和盐水洗涤有机相部分,接着干燥(MgSO4),浓缩,得无色油状物17(30mg,100%)。
TLC Rf=0.74(9∶1∶1 CH2Cl2/CH3OH/HOAC)
制备〔1-〔2-哌啶-4-基)乙基〕-(2-咪唑啉酮)-3〕-乙酰基-3(R)-〔2-(吲哚-3-基)乙基〕β-氨基丙酸(18)
在-15℃,把TFA(0.3ml)加到搅拌着的17(30mg,50μmol),二氯甲烷(300μL)和苯甲醚(15μl,100μmol)溶液中。20分钟后,浓缩反应混合物。与甲苯共沸除去剩余物TFA。快速色谱(硅胶,10∶0.8∶0.8甲醇/NH4OH/水)得白色固体18(15mg,66%)。
TLC Rf=0.16(10∶1∶1甲醇/NH4OH/水);
1H NMR(300 MHz,CD3OD)δ7.44(d,J=Hz,1H),7.20(d,J=8Hz,1H),6.95(t,=J=8Hz,1H),6.94(s,1H),6.88(t,J=8Hz,1H),4.17(m,1H),3.71(s,2H),3.40)3.10(m,8H),2.86(m,2H),2.70(t,J=6Hz,2H),2.32(m,2H),1.90(m,4H),1.55(m,1H),1.43(m,2H),1.28(m,2H).
制备1-〔2-(N-BOC-哌啶-4-基)乙基〕-(2-吡咯烷酮(pyrrolidinone))(19)
在0℃把4-氯丁酰氯(2.6ml,23.6mmol)加到搅拌着的12(2.7g,11.8mmol)、乙腈(60ml)和二异丙基乙胺(4.1ml,23.6mmol)溶液中,接着移去冷浴。5小时后,用乙酸乙酯稀释反应混合物,用水(2次)和盐水洗涤,干燥(MgSO4),浓缩,在0℃将粗酰胺溶于DMF(60ml)中,然后用NaN(TMS)2(1M在THF中,11.8mL)处理。5分钟后,用乙酸乙酯稀释反应混合物,然后用水和盐水洗涤,干燥(MgSO4)、浓缩。快速色谱(硅胶,70%乙酸乙酯/己烷),得无色油状物19(0.4g,12%)。
TLC Rf=0.27(70%乙酸乙酯/己烷);
1H NMR(300 MHz,CDCl3)δ4.10(m,2H),3.39(t,J=7Hz,2H),3.34(t,J=7Hz,2H),2.70(m,2H),2.40(m,2H),2.05(m,2H),1.72(m,2H),1.46(m,3H),1.45(s,9H),1.13(m,2H).
制备1-〔2-(N-BOC-哌啶-4-基)乙基〕-3-丙烯-2-基-(2-吡咯烷酮)(20)
在-78℃,把LDA(0.5M在THF中,2.4ml)滴加到搅拌着的19(325mg,1.1mmol)的THF(5ml)溶液中。15分钟后将烯丙基溴(0.16ml,2.2mmol)加入,在-78℃搅拌反应混合物1小时,接着用HOAC(0.1ml)骤冷。用乙酸乙酯稀释反应混合物,用水和盐水洗涤、干燥(MgSO4),浓缩。快速色谱(硅胶,50%乙酸乙酯/己烷),得油状物20(160mg,45%)。
TLC Rf=0.23(50%乙酸乙酯/己烷);
1H NMR(300 MHz,CDCl3)δ5.80(m,1H),5.10(m,2H),4.10(m,2H),3.32(m,4H),2.70(m,2H),2.56(m,2H),2.20(m,2H),1.73(m,3H),1.48(s,9H),1.13(m,2H).
制备1-〔2-(N-BOC-哌啶-4-基)乙基〕-3-乙酸-2-吡咯烷酮(21)
用14转化为15的方法、20(130mg,0.4mmol)转为21(80mg,48%),快速色谱(硅胶,9∶0.2∶0.2CH2Cl2/CH3OH/HOAc)后为油状物。
TLC Rf=0.25(9∶0.2∶0.2 CH2Cl2/CH3OH/HOAc);
1H NMR(300 MHz,CDCl3)δ4.05(m,2H),3.40(m,4H),2.96(m,1H),2.83(m,1H),2.70(m,2H),2.55(m,1H),2.40(m,1H),1.90-1.10(m,7H),1.48(s,9H).
制备〔1-〔2-(N-BOC-哌啶-4-基)乙基〕-2-吡咯烷酮-3〕-乙酰基-〔2-(吲哚-3-基)-乙基〕β-氨基丙酸乙酯(22)
用15转化成16的方法,21(120mg,0.35mmol)快速色谱(硅胶,乙酸乙酯)后得22(90mg,48%)。
TLC Rf=0.40(乙酸乙酯);
1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ8.09(bd,1H),7.58(d,J=8Hz,1H),7.36(d,J=8Hz,1H),7.17(t,J=8Hz,1H),7.10(t,J=8Hz,1H),7.07(bs,1H),4.39(m,1H),4.12(q,J=7Hz,2H),4.05(m,2H),3.30(m,4H),2.90-2.25(m,8H),2.00-1.00(m,8H),1.48(s,9H),1.23(t,J=7Hz,3H).
制备〔1-〔2-(N-BOC-哌啶-4-基)乙基〕-2-吡咯烷酮-3〕乙酰基-〔2-(吲哚-3-基)-乙基〕β-氨基丙酸(23)
用16转化成17的方法,22(80mg,0.14mmol)处理后得23(80mg),直接用于下步反应。
TLC Rf=0.50(9∶1∶1CH2Cl2/CH3OH/HOAc)
制备〔1-〔2-(哌啶-4-基)乙基〕-2-吡咯烷酮-3〕乙酰基-〔2-(吲哚-3-基)-乙基〕β-氨基丙酸(24)
用17转成18的方法,23(80mg,0.14mmol)生成24(15mg,23%),24经快速色谱(硅胶,10∶0.65∶0.65甲醇/NH4OH/水)处理。
TLC Rf=0.53(10∶1∶1甲醇/NH4OH/水)
1H NMR(300 MHz,CD3OD)δ7.47(t,J=7Hz,1H),7.25(d,J=7Hz,1H),6.99(m,2H),6.88(t,J=7Hz,1H),4.19(m,1H),3.49(m,0.5H),3.40(m,0.5H),3.34-2.95(m,6H),2.90-2.60(m,4H),2.48(m,1H),2.40-2.20(m,4H),2.13(m,1H),2.00-1.05(m,11H).
制备5-氯-戊酰基-氨基-2-丙烯(26)
在室温,把4-氯丁酰氯(3.4ml,27mmol)加到搅拌着的烯丙胺25(2.0g,27mmol)、NMM(8.9ml,81mmol)和乙腈(140ml)的混合物中、20小时后,浓缩反应混合物。剩余物溶于乙酸乙酯中,然后用水、5% KHSO4和盐水洗涤,干燥(MgSO4),浓缩,得黄色油状物26(4.1g,87%)。
TLC Rf=0.17(40%乙酸乙酯/己烷)。
制备1-(丙烯-2-基)-2-哌啶酮(27)
在-78℃,气流中把NaN(TMS)2(1.0M在THF中,11ml)加到搅拌着的26(2.0g,11mmol)的THF(110ml)溶液中,接着移去冷浴。1.5小时后,用乙酸乙酯稀释反应混合物,用水、5%KHSO4和盐水洗涤,干燥(MgSO4)、浓缩,快速色谱(硅胶,60%乙酸乙酯/己烷)得油状物27(1.1g,72%)。
TLC Rf=0.15(60%乙酸乙酯/己烷);
1H NMR(300 MHz,CDCl3)δ5.78(m,1H),5.15,4.00(d,J=7Hz,2H),3.24(m,2H),2.41(m,2H),2.07(m,2H),1.80(m,4H).
制备3-〔2-(N-BOC-哌啶-4-基)乙基〕-1-乙酸-2-哌啶酮(28)
在-78℃,把LDA(0.5M在THF中,15.8ml)滴加到搅拌着的27(1.0g,7.2mmol)和THF(70ml)的溶液中。15分钟后,将在THF(5ml)中的碘化物10(2.7g,7.9mmol)加入,接着缓慢温热到-30℃1小时。反应物用乙酸(0.2ml)骤冷,然后浓缩。快速色谱(硅胶,40%乙酸乙酯/己烷)得油状物28(1.5g,59%)。
TLC Rf=0.58(乙酸乙酯);
1H NMR(300 MHz,CDCl3)δ5.77(m,1H),5.15(m,1H),4.06(m,2H),4.00(m,2H),3.23(m,2H),2.59(m,2H),2.19(m,1H),2.05-1.25(m,11H),1.48(s,9H),1.10(m,2H).
制备3-〔2-(N-BOC-哌啶-4-基)乙基〕-3-乙酸-2-哌啶酮(29)
在室温,用RuCl3(50mg,0.24mmol)处理激烈搅拌的28(0.84g,2.4mmol),CCl4(5ml)、乙腈(5ml),NaIO4(2.1g,9.8mmol)和水(7.5ml)的混合物。20小时后再加入RuCl3(50mg)。4小时后,将反应混合物用乙酸乙酯和半饱和NaHCO3稀释。摇动和分离后,用5%KHSO4酸化水相部分,用乙酸乙酯萃取。用盐水洗涤有机提取液,干燥(MgSO4),浓缩。快速色谱(硅胶,9∶0.2∶0.2CH2Cl2/甲醇/HOAc)得油状物29(280mg,30%)。
TLC Rf=0.36(9∶0.5∶0.5CH2Cl2/甲醇/HOAc)。
制备〔3-〔2-(N-BOC-哌啶-4-基)乙基〕-2-咪唑啉酮-1〕乙酰基-〔3(R)-〔2-(吲哚-3-基)乙基〕-β-氨基丙酸乙酯(30)
用15转成16的方法,29(280mg,0.76mmol)生成30(300mg,64%),快速色谱(硅胶,85%乙酸乙酯/己烷)后为油状物。
TLC Rf=0.18(85%乙酸乙酯/己烷);
1H NMR(300 MHz,CDCl3)δ8.14(m,1H),7.60(d,J=8Hz,1H),7.39(d,J=8Hz,1H),7.20(t,J=8Hz,1H),7.13(t,J=8Hz,1H),7.05(bs,1H),6.90(d,J=9Hz,1H),4.35(m,1H),4.11(q,J=7Hz,2H),4.05(m,2H),3.98(s,2H),3.40(m,2H),2.90-2.50(m,6H),2.33(m,1H),2.00-1.00(m,15H),1.48(s,9H),1.279t,J=7Hz,3H).
制备[3-[2-(N-BOC-哌啶-4-基)乙基]-2-哌啶酮-1]乙酰基-[3(R)-[2-吲哚-3-基)乙基]β-氨基丙酸(31)
用16转成17的方法,30(160mg,0.26mmol)生成31(140mg,92%),处理后为白色固体。
TLC Rf=0.59(9∶1∶1CH2Cl2/甲醇/HOAc)
制备〔3-〔2-(哌啶-4-基)乙基〕-2-哌啶酮-1〕乙酰基-〔3(R)-〔2-吲哚-3-基)乙基〕β-氨基丙酸(32)
用17转成18的方法,31(140mg,0。24mmol)生成32(55mg,47%),快速色谱后为白色固体(硅胶,10∶0.4∶0.4甲醇/NH4OH/水)。
TLC Rf=0.46(10∶1∶1甲醇/NH4OH/水);
1H NMR(300 MHz,CD3OD)δ7.54(d,J=8Hz,1H),7.30(d,J=8Hz,1H),7.03(t,J=8Hz,1H),7.02(bs,1H),6.97(m,1H),4.28(m,1H),4.20(d,J=16Hz,0.5H),3.75(d,J=16Hz,0.5H),3.50-3.15(m,4H),2.80(m,4h),2.50-2.30(m,3H),2.00-1.20(m,15H).
制备3-〔2-(N-BOC-哌啶-4-基)乙基〕-2-吡咯烷酮(36a)
在-78℃,向苄基酰胺35a(0.8g,2.2mmol)(在THF(20ml)中)分两次加入新制得的二-叔-丁基二苯基锂(0.5M的THF,10.8ml)。反应1小时后用HOAC(0.1ml)骤冷并接着浓缩反应混合物。快速色谱(5%甲醇/乙酸乙酯)得白色固体36a(470mg,72%)。
TLC Rf=0.27(10%甲醇/乙酸乙酯);
1H NMR(300 MHz,CDCl3)δ6.03(m,1H),4.10(m,2H),3.35(m,2H),2.70(m,2H),2.33(m,2H),1.92(m,1H),1.80(m,1H),1.70(m,2H),1.50-1.30(m,4H),1.48(s,9H),1.12(m,2H).
制备1-乙酸甲酯-3-[2-(N-BOC-哌啶-4-基)乙基]-2-吡咯烷酮(37a)
把NaN(TMS)2(1.0M的THF,1.1ml)加到-78℃搅拌着的36a(340mg,1.1mmol)的THF(10ml)溶液中。15分钟后,加入溴乙酸乙酯(250μl,2.2mmol),将反应混合物温热到-20℃。2小时后,把反应物用HOAc(0.1ml)骤冷、浓缩、快速色谱(硅胶,50%乙酸乙酯/己烷),得油状37a(380mg,90%)。
TLC Rf=0.66(10%甲醇/乙酸乙酯);
1H NMR(300MHz,CDCl3)δ4.22(q,J=7Hz,2H),4.10(m,2H),4.08(s,2H),3.24(m,2H),2.70(m,2H),2.44(m,1H),2.26(m,1H),2.00-1.65(m,4H),1.48(s,9H),1.50-1.30(m,4H),1.31(t,J=7Hz,3H),1.12(m,2H).
制备[3-[2-(N-BOC-哌啶-4-基)乙基]-2-吡咯烷酮-1-乙酸(38a)
用16转成17的方法,37a(390mg,1.1mmol)转成38a,处理后为白色泡沫状38a(340mg,91%)。TLC Rf=0.39(9∶0.5∶0.5CH2Cl2/甲醇/HOAc)。
制备〔3-〔2-(N-BOC-哌啶-4-基)乙基〕-2-吡咯烷酮-1〕乙酰基-〔3(R)-(吲哚-3-基)-乙基〕β-氨基丙酸乙酯(39a)
用把15转成16的方法,38a(310mg,0.92mmol)转成39a(460mg,86%),在快速色谱处理后39a为黄色油状物(硅胶,85%乙酸乙酯/己烷)。
TLC Rf=0.16(85%乙酸乙酯/己烷);
1H NMR(300 MHz,CDCl3)δ8.21(bs,1H),7.58(d,J=8Hz,1H),7.38(d,J=8Hz,1H),7.20(t,J=8Hz,1H),7.13(t,J=8Hz,1H),7.05(bs,1H),6.72(d,J-10Hz,1H),4.35(m,1H),4.13(q,J=7Hz,2H),4.09(m,2H),3.97(d,J=15Hz,1H),3.86(d,J=15Hz,1H),3.41(m,2H),2.80(m,2H),2.65(m,2H),2.55(dd,J=1.5Hz,2H),2.45(m,1H),2.24(m,1H),2.00-1.20(m,10H),1.48(s,9H),1.26(t,J=7Hz,3H),1.04(m,2H).
制备〔3-〔2-(N-BOC-哌啶-4-基)乙基-1〕-乙酰基-〔3(R)-〔2-(吲哚-3-基)乙基)β-氨基丙酸(40a)
用16转成17的方法,则39a(460mg,0.79mmol)生成40a(360mg,86%),处理后为泡沫状。
TLC Rf=0.57(9∶1∶1CH2Cl2/甲醇/HOAC)。
制备〔3-〔2-(哌啶-4-基)乙基-1〕乙酰基-〔3(R)-〔2-(吲哚-3-基)乙基〕β-氨基丙酸(41a)
用17转成18的方法,40a(360mg,0.65mmol)生成41a(180mg,59%),快速色谱处理后为白色固体(硅胶,10∶0.4∶0.4甲醇/NH4OH/水)。
TLC Rf=0.21(10∶0.4∶0.4甲醇/NH4OH/水。
1H NMR(300 MHz,CD3OD)δ7.36(d,J=8Hz,1H),7.13(d,J=8Hz,1H),6.87(t,J=8Hz,1H),6.86(s,1H),6.78(t,J=8Hz,1H),4.09(m,1H),3.82(d,J=16Hz,1H),3.70(d,J=16Hz,1H),3.33(m,2H),3.07(m,2H),2.63(m,4H),2.30(m,1H),2.25(m,2H),2.05(m,1H),1.90-1.50(m,6H),1.40-1.05(m,6H).
制备3-〔2-(N-BOC-哌啶-4-基)乙基〕-2-吡咯烷酮(36b)
用35a转成36a的方法,35b(0.7g,1.7mmol)生成36b(260mg,62%),快速色谱(硅胶,5%甲醇/乙酸乙酯)处理后为白色固体。
TLC Rf=0.27(10%甲醇/乙酸乙酯)。
制备3-〔2-N-BOC-哌啶-4-基)乙基〕-2-吡咯烷酮-1-乙酸乙酯(37b)
用36a转成37a的方法,36b(260mg,0.88mmol)生成37b(300mg,89%),快速色谱(硅胶,50%乙酸乙酯/己烷)处理后为油状物。
TLC Rf=0.66(10%甲醇/乙酸乙酯)
制备3-〔2-(N-BOC-哌啶-4-基)乙基〕-2-吡咯烷酮-1-乙酸(38b)
用16转成17的方法,37b(300mg,0.78mmol)生成38b(260mg,98%)、为结晶固体。
TLC Rf=0.38(9∶0.5∶0.5CH2Cl2/甲醇/HOAc)。
制备〔3-〔2-(N-BOC-哌啶-4-基)乙基〕-2-吡咯烷酮-1〕乙酰基-〔3(R)-〔2-(吲哚-3-基)-乙基〕β-氨基丙酸乙酯(39b)
用15转成16的方法,38b(260mg,0.73mmol)生成39b(360mg,83%),快速色谱后为油状物(硅胶,85%乙酸乙酯/己烷)。
TLC Rf=0.16(85%甲醇/乙酸乙酯);
1H NMR(300 MHz,CDCl3)δ8.29(bs,1H),7.57(d,J=8Hz,1H),7.38(d,J=8Hz,1H),7.19(t,J=8Hz,1H),7.12(t,J=8Hz,1H),7.04(d,J=1Hz,1H),6.67(d,J=10Hz,1H),4.33(m,1H),4.13(q,J=7Hz,2H),4.07(m,2H),3.99(d,J=16Hz,1H),3.82(d,J=16Hz,1H),3.40(m,2H),2.80(m,2H),2.68(m,3H),2.55(dd,J=5,2Hz,2H),2.43(m,1H),2.22(m,1H),2.00-1.00(m,11H),1.47(s,9H),1.28(t,J=7Hz,3H).
制备〔3-〔2-(N-BOC-哌啶-4-基)乙基〕-2-吡咯烷酮-1〕乙酰基-〔3(R)-〔2-吲哚-3-基)-乙基〕β-氨基丙酸(40b)
用16转成17的方法,39b(280mg,0.47mmol)生成40b(250mg,94%),快速色谱(硅胶,9∶1∶1CH2Cl2/甲醇/HOAc)后为白色固体。
TLC Rf=0.21(9∶1∶1CH2Cl2/甲醇/HOAc)
制备〔3-〔2-(N-哌啶-4-基)乙基〕-2-吡咯烷酮-1〕乙酰基-〔3(R)-〔2-(吲哚-3-基)乙基〕β-氨基丙酸(41b)
用17转成18的方法,40b(250mg,0.44mmol)生成41b(100mg,49%),快速色谱处理后为白色固体(硅胶,10∶0.4∶0.4甲醇/NH4OH/水)。
TLC Rf=0.46(10∶0.4∶0.4甲醇/NH4OH/水);
1H NMR(300 MHz,CD3OD)δ7.52(d,J=8Hz,1H),7.29(d,J=8Hz,1H),7.03(t,J=8Hz,1H),7.02(s,1H),6.95(t,J=8Hz,1H),4.27(m,1H),4.05(d,J=16Hz,1H),3.81(d,J=16Hz,1H),3.42(m,2H),3.26(m,2H),2.90-2.70(m,4H),2.49(m,1H),2.40(d,J=6Hz,2H),2.22(m,1H),2.05-1.70(m,5H),1.60-1.25(m,5H).
4-(N-BOC-哌啶-4-基)丁烯酸乙酯(42)
在-78℃把DMSO(0.52ml,7.0mmol)滴加到搅拌着的草酰氯(0.43ml,5.0mmol)的CH2Cl2(20ml)溶液中。气体释放减少之后(5分钟)在气流中加入醇9(0.8g,3.5mmol)(在CH2Cl2(20ml)中)。20分钟后,滴加入三乙胺(1.7ml,12mmol),然后移去冷浴。20分钟后,将乙氧基羰基亚甲基三苯正膦(1.4g,4.0mmol)以一份加入。2.0小时后,用石油醚稀释反应混合物,然后依次用H2O、5%KHSO4和盐水洗涤、干燥(MgSO4)、浓缩。快速色谱(硅胶,15%乙酸乙酯/己烷)处理后得无色油状物酯(42)。
TLC Rf=0.79(50%乙酸乙酯/己烷);
1H NMR(300 MHz,CDCl3)δ6.91(dt,J=16和7Hz,1H),5.81(bd,J=17Hz,1H),4.18(q,J=7Hz,2H),4.08(m,2H),2.67(m,2H),2.14(t,J=7Hz,2H),1.70-1.05(m,5H),1.44(s,9H),1.28(t,J=7H,3H).
制备4-(N-BOC-哌啶-4-基)-丁酸乙酯(43)
在10%Pd/c(5.0g)存在下,于室温,在氢气氛(1大气压)下,氢化一夜烯烃42(26g,87mmol)(在乙酸乙酯(500ml)中)。然后用氩通到反应混合物中,通过硅藻填料过滤。用快速色谱处理浓缩过滤物(硅胶,10%乙酸乙酯/己烷)生成结晶状固体酯43。
TLC Rf=0.42(20%乙酸乙酯/己烷);1H NMR(300 MHz,CDCl3)δ4.16(q,J=7Hz,2H),4.10(m,2H),2.69(m,2H),2.31(t,J=7Hz,2H),1.68(m,4H),1.38(s,9H),1.40(m,1H),1.11(m,2H).
制备4-(N-BOC-哌啶-4-基)丁酸(44)
在室温下,把酯43(19g,63mmol)、乙醇(300ml)和1N NaOH(100ml,100mmol)的溶液搅拌2.5小时,然后浓缩。剩余物用5%KHSO4和乙酸乙酯稀释,并转移到分液漏斗中。摇动多相并分离,用盐水洗涤有机相、干燥(MgSO4)、浓缩,得无色油状酸44,静置结晶。
mp=80-81℃;TLC Rf=0.68(乙酸 乙酯);1H NMR(300 MHz,CDCl3)δ4.10(m,2H),2.71(m,2H),2.38(t,J=7Hz,2H),1.70(m,4H),1.60-1.30(m,3H),1.48(s,9H),1.12(m,2H).
制备4(S)-苄基-2-噁唑烷酮-4-(BOC-哌啶-4-基)-丁酸酯(45)
在-78℃,气流中,把三甲基乙酰氯(7.6ml,61mmol)加到搅拌着的44(15.3g,56mmol),NEt3(9.4ml,67mmol)和无水THF(240ml)的溶液中。10分钟后,移去冷浴,改用冰浴。1.0小时后,非均相混合物再冷至-78℃,接着通过套管在-78℃加入(S)-(-)-4-苄基-2-噁唑烷酮锂(62mmol)(在无水THF(150ml)中)和正-BuLi(38.8ml,62mmol,1.6M/己烷)。反应完成后,反应混合物温热到0℃1小时,然后用乙酸乙酯稀释,用水,饱和NaHCO3,5%KHSO4和盐水洗涤,干燥(MgSO4),浓缩。快速色谱(硅胶,30%乙酸乙酯/己烷)处理得无色油状物45
TLC Rf=0.45(30% 乙酸乙酯/己烷);1H NMR(400MHz,CDCl3)7.36-7.20(m,5H),4.67(m,1H),4.18(m,2H),4.08(m,2H),3.30(dd,J=13 and 3Hz,1H),2.93(m,2H),2.77(dd,J=13 and 10Hz,1H),2.69(m,2H),1.70(m,4H),1.50-1.30(m,3H),1.45(s,9H),1.11(m,2H).
制备4(S)-苄基-1-噁唑烷酮-4-(BOC-哌啶-4-基)-2(R)-(2-氰基乙基)丁酸酯(46)
在0℃,把异丙氧基钛(Ⅳ)(4.2ml,14mmol)加到搅拌着的TiCl4(42ml,42mmol,1M/CH2Cl2)和CH2Cl2(250ml)的溶液中。15分钟后,将二异丙基乙胺(11.0ml)(在CH2Cl2(75ml)中)加入,接着在0℃继续搅拌至深红色溶液。10分钟后,加入45(21.8g,51mmol)(在CH2Cl2(75ml)中)接着0℃继续搅拌1.0小时。在0℃加入丙烯腈(33.4ml,0.50mol)至呈深红色溶液。4.0小时后,在0℃用饱和NH4Cl(150ml)把反应物骤冷,然后用CH2Cl2(3×250ml)提取。用饱和NaHCO3和盐水洗涤合并的有机萃取物,干燥(MgSO4),浓缩。快速色谱(硅胶,25%乙酸乙酯/己烷)处理,得黄色油状粗产品46。粗产品46经色谱(硅胶,2.5%丙酮/CH2Cl2)分离得油状物46,除去混合馏分(1.6g)外,用HPLC分离纯度为97%。
TLC Rf=0.35(2.5%丙酮/CH2Cl2);1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ7.50-7.30(m,5H),4.68(m,1H),4.21(m,2H),4.07(m,2H),3.80(m,1H),3.33(dd,J=13 and 4Hz,1H),2.77(dd,J=13 and 10Hz,1H),2.65(m,2H),2.38(m,2H),2.13(m,1H),1.89(m,1H),1.75(m,1H),1.63(m,2H),1.50(m,2H),1.45(s,9H),1.35(m,1H),1.25(m,2H),1.08(m,2H).
制备4(S)-环己基甲基-2-噁唑烷酮-4-(BOC-哌啶-4-基)-2(R)-(2-氨基丙基)丁酸酯·HCl(47)
室温下,在Parr仪器中,氢气氛下(60PSI),摇动46(19.2g,40mmol),PtO2(2.0g),CH3OH(70ml)和CHCl3(7.0ml)的混合物3小时。反应混合物通过硅藻土填料过滤,然后浓缩得白色固体粗胺·HCl47。该物直接用于下一步反应
TLC Rf=0.50(10∶1∶1 CH2Cl2/CH3OH/HOAc);1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ8.28(bs,2H),4.50(m,1H),4.35(m,1H),4.14(m,1H),4.03(m,2H),3.63(m,1H),3.02(m,2H),2.63(m,2H),2.00-1.00(m,24H),1.45(s,9H).
制备3-(R)-〔N-BOC-2-(哌啶-4-基)乙基〕-2-哌啶酮(48)
室温下,搅拌粗胺·HCl47(16.6g,31mmol)、乙腈(750ml)和NaHCO3(10.0g)20小时。非均相混合物用二-叔-丁基二碳酸酯(3.0g)处理,接着继续搅拌1.0小时,再保护在先前反应中生成的少量游离哌啶。过滤除去NaHCO3,浓缩过滤物。快速色谱(硅胶,5% CH3OH/乙酸乙酯)处理得无色结晶固体的内酰胺48
mp=110-111℃;TLC Rf=0.65(20%甲醇/乙酸乙酯);1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ6.31(bs,1H),4.06(m,2H),3.31(m,2H),2.67(m,3H),2.28(m,1H),2.00-1.20(m,11H),1.45(s,9H),1.10(m,2H).
制备〔3(R)-〔N-BOC-2-(哌啶-4-基)-乙基〕-2-哌啶酮-1〕乙酸乙酯(49)
在-78℃,把NaN(TMS)2(24.5ml,24.5mmol,1M/己烷滴加入搅拌着的48(6.7g,22mmol)和无水THF(150ml)的溶液中。15分钟后,加入溴代乙酸乙酯(5.2ml,45mmol),反应混合物温热至0℃ 1.0小时。用AcOH(1.0ml)骤冷,用乙酸乙酯稀释,用水和盐水洗涤,干燥(MgSO4),浓缩。快速色谱(硅胶,40%乙酸乙酯/己烷)处理,得黄色油状的酯49。
TLC Rf=0.26(40% 乙醚乙酯/己烷);1H NMR(300MHz,CDCl3)δ4.20(q,J=7Hz,2H),4.17(d,J=18Hz,1H),4.08(m,2H),3.98(d,J=18Hz,1H),3.37(m,2H),2.68(m,2H),2.32(m,1H),2.00-1.25(m,11H),1.45(s,9H),1.30(t,J=7Hz,3H),1.11(m,2H).
制备3-(R)-〔N-BOC-2-(哌啶-4-基)乙基〕-2-哌啶酮-1〕乙酸(50)
室温搅拌49(6.0g,15mmol),1N NaOH(50ml,50mmol)和CH3OH(75ml)的溶液1.0小时。反应混合物用5%KHSO4水溶液酸化,然后用乙酸乙酯提取。用盐水洗涤有机相部分,干燥(MgSO4),浓缩得黄色油状羧酸。用己烷研制油状物得松软的白色固体。
TLC Rf=0.31(9∶0.5∶0.5 CH2Cl2/CH3OH/AcOH);1H NMR(400MHz,CDCl)δ4.13(d,J=17Hz,1H),4.07(m,2H),4.06(d,J=17Hz,1H),3.39(m,2H),2.33(m,1H),1.95(m,3H),1.81(m,1H),1.70-1.25(m,7H),1.45(s,9H),1.08(m,2H).
制备3(R)-BOC-氨基-1-偶氮丁-2-酮(52)
在-15℃把氯代甲酸异丁酯(2.6ml,20mmol)加入到搅拌着的51(3.8g,20mmol)、4-甲基吗啉(2.2ml,20mmol)和乙酸乙酯(200ml)的溶液中。1.0小时后,用水和盐水洗涤反应混合物,干燥(MgSO4),过滤入园底烧瓶中。冷至0℃后,混合酐用重氮甲烷(80ml,40mmol,δ0.5M溶液)的醚溶液分批处理。2.0小时后移去冷浴,用氩气通到溶液中30分钟除去过量重氮甲烷。浓缩得粗重氮甲酮52,并直接用于下一步反应。
TLC Rf=0.37(30%乙酸乙酯/己烷)。
制备乙基-N-BOC-3(R)-甲基-β-氨基丙酸(53)
粗产品重氮甲酮52(4.3g,~20.0mmol)溶于乙醇(250ml),接着用NEt3(3.4ml,24mmol)和苯甲酸银(1.4g,6.0mmol)处理,激烈放出气体和产生黑色沉淀。1.0小时后,浓缩反应混合物,用快速色谱法纯化剩余物(硅胶,10%乙酸乙酯/己烷),得无色油状乙酯53。
TLC Rf=0.42(30% 乙酸乙酯/己烷);1H NMR(400MHz,CDCl3)δ4.96(m,1H),4.19(q,J=7Hz,2H),4.04(m,1H),2.52(dd,J=15 and 6Hz,1H),2.46(dd,J=15 and 6Hz,1H),1.44(s,9H),1.26(t,J=7Hz,3H),1.21(d,J=7Hz,3H).
制备乙基3(R)-甲基-β-氨基丙酸·HCl(54)
在-15℃,机械搅拌53(2.2g,9.7mmol)的乙酸乙酯(180ml)溶液,激烈鼓泡通入HCl气体30分钟。除去冷浴(乙醇/冰)。用氩气通到溶液中1.0小时以除去过量HCl。浓缩得黄色油状胺·HCl54。
1H NMR(400 MHz,D2O)δ4.23(q,J=7Hz,2H),3.78(m,1H),2.79(m,2H),1.38(d,J=7Hz,3H),1.29(t,J=Hz,3H).
制备〔3(R)-〔N-BOC-2-(哌啶-4-基)乙基〕-2-哌啶酮-1〕乙酰基-3(R)-甲基-β-氨基丙酸乙酯(55)
向搅拌着的50(1.0g,2.7mmol)54(0.48g,2.8mmol),HOBT(0.39g,2.8mmol),N(i-pr)2Et(1.5ml,8.5mmol)和无水DMF(100ml)的溶液于-15℃加入EDC(0.95g,2.8mmol),接着移去冷浴。20小时后,反应混合物用乙酸乙酯稀释,用水、饱和NaHCO3,5%KHSO4水溶液和盐水洗涤,干燥(MgSO4),浓缩。快速色谱(硅胶,乙酸乙酯)得无色油状物55。
TLC Rf=0.35(乙酸乙酯);1H NMR(300MHz,CDCl3)δ6.82(bd,1H),4.32(m,1H),4.13(q,J=7Hz,2H),4.10(d,J=15Hz,1H),4.08(m,2H),4.82(d,J=15Hz,1H),3.36(m,2H),2.67(m,2H),2.48(dd,J=5 and 1Hz,2H),2.33(m,1H),2.00-1.20(m,11H),1.45(s,9H),1.27(t,J=7Hz,3H),1.21(d,J=7Hz,3H),1.10(m,2H).
制备〔3(R)-〔N-BOC-2-(哌啶-4-基)乙基〕-2-哌啶酮-1〕乙酰基-3(R)-甲基-β-氨基丙酸(56)
室温搅拌55(1.2g,2.5mmol),1N NaOH(10ml,10mmol)和CH3OH(18ml)的溶液1.0小时。用5%KHSO4水溶液酸化反应混合物,然后用乙酸乙酯提取。用盐水洗涤有机相部分,干燥(MgSO4),浓缩。与甲苯共沸除去残余HOAc后,经快速色谱(硅胶10∶0.5∶0.5 CH2Cl2/CH3OH/HOAc)得无色油状羧酸56。
TLC Rf=0.40(10∶0.5∶0.5 CH2Cl2/CH3OH/HOAc);1H NMR(300 MHz,CDCl3)δ7.02(bd,1H),4.35(m,1H),4.12(d,J=16Hz,1H),4.08(m,2H),3.87(d,J=16Hz,1H),3.32(m,2H),2.69(m,2H),2.56(m,2H),2.36(m,1H),2.00-1.25(m,11H),1.45(s,9H),1.03(m,2H).
制备〔3(R)-〔2-哌啶-4-基)乙基〕-2-哌啶酮-1〕乙酰基-3(R)-甲基-β-氨基丙酸(57)
室温搅拌56(0.74g,1.6mmol),三氟乙酸(10ml)和CH2Cl2(10ml)的溶液1.0小时。浓缩反应混合物。与甲苯共沸除去剩余的三氟乙酸。快速色谱(硅胶10∶1∶1CH3OH/NH4OH/H2O)得白色无定形固体57(100mg)。从热乙醇(4.0ml)中结晶57(100mg),室温过滤后得57(45mg)晶体。
mp=240°(D);TLC Rf=0.48(10∶1∶1 CH3OH/NH4OH/H2O);1H NMR(400 MHz,D2O)δ4.18(m,1H),4.06(d,J=16Hz,1H),3.95(d,J=16Hz,1H),3.41(m,4H),2.99(m,ml)的溶液中。10分钟后,移去冷浴,用冰浴代替。1.0小时后,将非均相混合物再冷至-78℃,并通过导管加(R)-(+)-4-苄基-2-噁唑烷酮锂(28.2mmol)的无水THF(43ml)溶液进行处理,(R)-(+)-4-苄基-2-噁唑烷酮锂是在-78℃用正-BuLi(17.8ml,28.2mmol,1.6M/己烷)处理(R)-(+)-4-苄基-2-噁唑烷酮(5.0g,28.2mmol)(在无水THF(43ml)中)制得。加完之后,将反应混合物温热至室温过夜。用乙酸乙酯稀释反应混合物,用水、饱和NaHCO3,5%KHSO4水溶液和盐水洗涤,在MgSO4上干燥和浓缩,快速色谱(硅胶,20%乙酸乙酯/己烷)得白色晶形固体70。
TLC Rf=0.48(30%乙酸乙酯/己烷);
1H NMR(300 MHz,CDCl3)δ7.30(m,5H),4.68(m,1H),4.21(m,2H),3.72(s,3H),3.28(m,3H),2.80(dd,J=13 and 4Hz,1H),2.73(m,2H).
制备4(R)-苄基-2-噁唑烷酮(oxazolidinone)-2(R)-(2-氰基乙基)琥珀酸甲酯(71)
0℃下把异丙氧基钛(Ⅳ)(1.2ml,4.1mmol)加到搅拌着的TiCl4(12.3ml,12.3mmol,1M/CH2Cl2)和无水CH2Cl2(83ml)的溶液中。15分钟后,将二异丙基乙胺(3.0ml,17.3mmol)滴加到形成深褐色溶液。10分钟后,接着加70(4.8mg,16.5mmol),0℃继续搅拌1小时。滴加入丙烯腈(4.3ml,66mmol)至呈深色溶液,在0℃接着搅拌72小时。0℃用饱2H),2.45(m,1H),3.41(m,4H),2.99(m,2H),2.45(m,1H),2.42(dd,J=18 and 6Hz,1H),2.33(dd,J=18 and 7Hz,1H),1.97(m,4H),1.90-1.55(m,5H),1.38(m,4H),1.19(d,J=7Hz,3H).
制备1-〔2-(N-BOC-哌啶-4-基)乙基〕-3-丙烯-2-基-(1H-四氢嘧啶-2-酮)(59)
把1.0摩尔浓度双(三甲基甲硅烷基)氨基化锂(10ml,10mM)溶液,加到搅拌着的1H-四氢嘧啶2-酮(1.0g,10mM)的DMF(50ml)悬浮液中,半小时后,加入烯丙基溴(1.0ml,1.17mM),继续搅拌1小时。第二次加入双(三甲基甲硅烷基)氨基化锂(10ml,10mM),接着半小时后加(N-BOC-哌啶-4-基)乙基碘(10)。于25℃搅拌反应物一夜。把反应混合物倾入冰和15%KHSO4(50ml)中,用醚(2×100ml)提取,用水(2×100ml)盐水洗涤,干燥(Na2SO4),真空蒸发。在SiO2上快速色谱(乙酸乙酯-己烷1∶1),得纯59。
1H NMR(300 MHz,CDCl3)δ1.14(2H,m),1.46(9H,s),1.74(3H,m),1.95(2H,m)2.68(2H,t),3.22(4H,m),3.38(2H,m),3.95(2H,m),4.06(2H,m),5.13(2H,dd).
制备1-〔2-(N-BOC-哌啶-4-基)乙基〕-3-乙醛-(1H-四氢嘧啶-2-酮)(60)
2.5%四氧化锇的2-甲基-丙醇(413μl,1.28mM)的溶液,加到搅拌着的59(430mg,1.27mM)
1H NMR(300 MHz,CDCl3)δ1.14(2H,m),1.45(9H,s),1.70(2H,m),1.86(2H,m),2.02(2H,m),2.58(2H,d),2.66(3H,m),3.36(5H,m),3.68(2H,m),3.93(1H,d),4.07(2H,m),7.02(1H,m),7.20(2H,m),7.29(2H,m).
制备1-〔2-(N-BOC-哌啶-4-基)乙基〕-〔1H-四氢嘧啶-2-酮)-3〕-乙酰基-3(R)-(2-苯基乙基)β-氨基丙酸(64)
将63(168mg,0.31mM)的THF(15ml)和水(15ml)的溶液冷到0℃,用1N LiOH(1.2ml)处理,然后在25℃搅拌过夜。减压蒸发除去THF,剩余物用10%柠檬酸酸化,用乙酸乙酯(2×50ml)提取,用盐水洗涤,在Na2SO4上干燥,真空蒸发得64。
制备〔1-(2-哌啶-4-基)乙基〕-〔(1H-四氢嘧啶-2-酮)-3〕-乙酰基-3(R)-(2-苯基乙基)β-氨基丙酸(65)
把64(128mg)的二氯甲烷(8ml)和苯甲醚(1.5ml)的溶液冷到-20℃,然后用三氟乙酸(8ml)处理5分钟。在-5℃下搅拌反应混合物1小时,然后真空蒸发。剩余物在SiO2(乙醇-H2O-NH4OH,10∶1∶1)进行色谱分离得65。
元素分析C24H36N4O4·2.5H2O
计算值:C,57.84;H,8.65;N,11.73。
实测值:C,57.94;H,8.39;N,11.47。
制备〔1-(2-哌啶-4-基)乙基〕-〔1H-四氢嘧啶-的THF(7ml)溶液,水(5ml)和高碘酸钠(0.68g,3.19mM)中。搅拌4小时后,加入乙酸乙酯(70ml),用50%盐水/10%硫酸钠(1∶1),然后用盐水洗涤混合物。此溶液用Na2SO4干燥,真空蒸发得60。
制备1-〔2-(N-BOC-哌啶-4-基)乙基〕-3-乙酸-(1H-四氢嘧啶-2-酮)(61)
将60(374mg)的丙酮(7ml)溶液冷至-15℃,然后滴入Jones试剂进行处理,直到橙色持续5分钟。将乙酸乙酯(60ml)加入,用水、盐水洗涤溶液,干燥(Na2SO4),真空蒸发得61。
1H NMR(300MHz,CDCl3)δ1.12(2H,m),1.45(9H,s),1.70(2H,bd),2.03(2H,m),2.70(2H,bt),3.37(4H,m),3.95(2H,m),4.05(2H,m).
制备〔1-〔2-(N-BOC-哌啶-4-基)乙基〕-(1H-四氢嘧啶-2-酮)-3〕-乙酰基-3(R)-(2-苯基乙基)β-氨基丙酸甲基酯(63)
25℃搅拌61(125mg,0.34mM),(R)-3-(2-苯基乙基)β-氨基丙酸甲酯盐酸化物(83mg,0.34mM)(62),1-羟基苯并三唑水合物(48.3mg,0.35mM),1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)-碳化二亚胺盐酸化物(70mg,0.37mM)和三乙胺(107μl,0.77mM)的无水DMF(1.6ml)的混合物18小时。将反应混合物倒入冰水中,用乙酸乙酯(2×50ml)提取,用10%柠檬酸、盐水洗涤,在Na2SO4上干燥,真空蒸发得63。
2-酮)-3-〕-乙酰基-3(R)-(2-吲哚-3-基)-乙基〕β-氨基丙酸(66)
用制备63所叙述基本方法,但用等当量的3R-〔2-(吲哚-3-乙基〕β-氨基丙酸乙酯代替3(R)-(2-苯基乙基)β-氨基丙酸甲酯盐酸化物,接着用制备64和65所述的方法,制得66。
元素分析C26H37N5O4:
计算值:C,56.3;H,8.0;N,12.6。
实测值:C,56.3;H,7.9;N,12.2。
制备〔1-(2-哌啶-4-基)乙基-(1H-四氢嘧啶-2-酮)-3〕-乙酰基-3(R)-甲基β-氨基丙酸(67)
用制备63所述的基本方法,但用等当量3(R)甲基β-氨基丙酸乙基酯盐酸化物代替(R)-3-(2-苯基乙基)β-氨基丙酸甲酯盐酸化物,接着用64和65所述的方法,制得67。
制备〔1-(2-哌啶-4-基)乙基〕-〔(1H-四氢嘧啶-2-酮)-3〕-乙酰基-2(R)-〔丁基磺酰基氨基〕β-氨基丙酸(68)。
用制备63所述的基本方法,但用等当量的2(S)-丁基磺酰基氨基β-氨基丙酸乙酯盐酸化物代替(R)-3-(2-苯基乙基)β-氨基丙酸甲酯,并接着用制备64和65的方法制得68。
制备4(R)-苄基-2-噁唑烷酮琥珀酸甲酯(70)
在-78℃把三甲基乙酰氯(3.6ml,28.2mmol)滴加到搅拌着的琥珀酸单甲酯69(3.7g,28.2mmol),NEt3(4.0ml,28.2mmol)和无水THF(160和NH4Cl骤冷反应混合物,然后用CH2Cl2提取。用饱和NaHCO3和盐水洗涤合并的有机相提取物,MgSO4干燥,浓缩。快速色谱(硅胶 25%乙酸乙酯/己烷)得晶形固体71。
TLC Rf=0.22(30%乙酸乙酯/己烷);
1H NMR(300 MHz,CDCl3)δ7.40-7.20(m,5H),4.70(m,1H),4.25(m,2H),4.13(m,1H),3.67(s,3H),3.30(dd,J=13 and 4Hz,1H),2.93(dd,J=17 and 10Hz,1H),2.80(dd,J=17 and 10Hz,1H),2.55(dd,J=13 and 4Hz,1H),2.43(t,J=7Hz,2H),2.10(m,1H),1.90(m,1H).
制备4(R)-苄基-2-噁唑烷酮-2(R)-(3-氨基丙基)琥珀酸甲酯(72)
室温在氢气(60PSI)下于parr仪器上振荡71(2.0g,5.8mmol)PtO2(0.8g),CH3OH(50ml)和CHCl3(5ml)的混合物3小时。反应混合物在硅藻填料上过滤,浓缩得黄色油状物粗胺·HCl72。
TLC Rf=0.50(CH2Cl2/CH3OH/ACOH9∶1∶1)。
制备〔2-哌啶酮-3(R)〕乙酸甲酯(73)
室温搅拌粗胺·HCl72(2.0g,~5.8mmol)、乙腈(250ml)和NaHCO3(5g)过夜。过滤反应混合物,浓缩过滤物。快速色谱(硅胶,乙酸乙酯),得无色晶形固体内酰胺73。
TLC Rf=0.22(乙酸乙酯);
1H NMR(300MHz,CDCl3)δ5.82(bs,1H),3.70(s,3H),3.33(m,2H),2.88(dd,J=16 and 4Hz,1H),2.75(m,1H),2.58(dd,J=16 and 7Hz,1H),2.10-1.60(m,4H).
制备〔1-〔N-BOC-2-(哌啶-4-基)-乙基〕-2-哌啶酮-3(R)〕乙酸甲酯(74)
在-15℃把NaN(TMS)2(6.4ml,6.4mmol,1M/己烷)滴加入搅拌着的73(1.1g,6.4mmol)的无水DMF(60ml)溶液中,接着移去冷浴。10分钟后,加碘化物10(2.3g,7.0mmol)接着室温搅拌4小时。用乙酸乙酯稀释反应混合物,用水(2X)和盐水洗涤,干燥(MgSO4),浓缩。快速色谱(硅胶,40%乙酸乙酯/己烷)处理,得油状物74。
TLC Rf=0.29(40%乙酸乙酯/己烷)。
制备〔1-〔N-BOC-2-(哌啶-4-基)乙基〕-2-哌啶酮-3(R)〕乙酸(75)
用49转成50的方法,74(0.44g,1.1mmol)生成油状物75。
TLC Rf=0.52(CH2Cl2/CH3OH/ACOH9∶0.5∶0.5)。
制备〔1-〔N-BOC-2-(哌啶-4-基)乙基〕-2-哌啶酮-3(R)〕乙酰基-3(R)-甲基-β-氨基丙酸乙酯(76)
用50转化成55的方法,75(0.40g,1.1mmol)偶合54(0.27g,1.6mmol)得76,快速色谱(硅胶,乙酸乙酯)处理后为油状物。
TLC Rf=0.20(乙酸乙酯)。
制备〔1-〔N-(BOC-2-(哌啶-4-基)乙基〕-2-哌啶酮-3(R)〕乙酰基-3(R)-甲基-β-氨基丙酸(77)
用55转化成56的方法,76(0.30g,0.64mmol)生成油状物77。
TLC Rf=0.24(CH2Cl2/CH3OH/AcOH 9∶0.5∶0.5);
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.93(m,1H),4.32(m,1H),4.06(m,2H),3.35(m,2H),3.29(m,2H),2.70-2.50(m,6H),2.38(m,1H),2.00-1.20(m,9H),1.45(s,9H),1.27(d,J=6Hz,3H),1.06(m,2H).
制备〔1-〔2-哌啶-4-基)乙基〕-2-哌啶酮-3(R)-甲基-β-氨基丙酸(78)
用56转成57的方法,77(0.24g,0.53mmol)生成78,快速色谱(硅胶,10∶1∶1乙醇/水/NH4OH)处理后为无定形固体。
1H NMR(400MHz,D2O)δ4.19(m,1H),3.40(m,6H),3.00(m,2H),2.70(m,1H),2.64(m,1H),2.47(m,2H),2.30(dd,J=14 and 8Hz,1H),2.00(m,2H),1.92(m,2H),1.79(m,1H),1.61(m,4H),1.45(m,2H),1.18(d,J=7Hz,3H).
制备N-Cbz-Gly-3(R)-甲基-β-氨基丙酸乙酯(79)
在-15℃,用氯代甲酸异丁酯(0.61ml,4.7mmol)一份处理搅拌着的Cbz-Gly(0.94g,4.5mmol)、4-甲基吗啉(1.1ml,4.9mmol)和乙酸乙酯(50ml)的溶液。15分钟后,将54(0.75g,4.5mmol)的乙酸乙酯(1ml)溶液加入,接着温热至室温过夜。反应混合物用1M NaHSO4,盐水,饱和NaHCO3和盐水洗涤,干燥(MgSO4),浓缩,得黄色油状物79。
1H NMR(300 MHz,CDCl3)δ7.48(m,5H),6.73(m,1H),5.58(m,1H),5.13(s,2H),4.48(m,1H),4.30(q,J=7Hz,2H),3.95(m,2H),2.62(m,2H),1.37(t,J=7Hz,3H).
制备Gly-3(R)-甲基-β-氨基丙酸乙酯乙酸盐(80)
在氢气(60PSI)下于parr仪器上振荡79(1.4g,4.5mmol),10%ACOH/CH3OH(50ml)和20%Pd(OH)2(0.14g)的混合物过夜。24小时后,使反应混合物通过硅藻填料过滤,过滤物浓缩。快速色谱(硅胶,5∶3∶1CH2Cl2/乙醇/ACOH)处理,得无定形固体80。
TLC Rf=0.41(5∶3∶1CH2Cl2/乙醇/ACOH)。
制备4(S)-苄基-2-噁唑烷酮-4-(N-BOC-哌啶-4-基)-2(R)-(丙-2-烯)丁酸酯(81)
-78℃把双(三甲基甲硅烷基)氨基化锂(7.0ml,7.0mmol 1M/己烷)加到搅拌着的45(2.5g,5.8mmol)的THF(50ml)溶液中,接着加入烯丙基溴(2.5ml,29mmol)。移去冷浴,0℃下搅拌反应物1.5小时。用饱和NH4Cl骤冷反应物,用EtOAC稀释,接着用饱和NaHCO3,5%KHSO4和盐水洗涤,干燥(MgSO4),浓缩。快速色谱(硅胶,15%EtOAC/己烷)处理得无色油状物81。
TLC Rf=0.53(30%EtOAC/己烷);
1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.40-7.20(m,5H),5.82(m,1H),5.10(m,2H),4.80(m,1H),4.20(m,2H),4.07(m,2H),3.90(m,1H),3.31(dd,J=13 and 3Hz,1H),2.68(m,2H),2.48(m,1H),2.35(m,1H),1.90-1.20(m,7H),1.47(s,9H),1.10(m,2H).
制备4-(N-BOC-哌啶-4-基)-2(R)-(丙-2-烯)丁酸(82)
室温下把LiOH(14ml,14mmol,1N)加到搅拌着的81(1.8g,3.8mmol),30%H2O2(8.5ml,83mmol),THF(41ml)和水(12ml)的溶液中。2小时后,0℃用滴状10%NaHSO4骤冷过量的LiOH。用5%KHSO4酸化反应物,用EtOAC提取。用盐水洗涤EtOAC部分,干燥(MgSO4),浓缩,得无色油状物82。
TLC Rf=0.79(10%甲醇/EtOAC);
制备〔4-(N-BOC-哌啶-4-基)-2(R)-(丙-2-烯)丁酸酯〕-Gly-3(R)-甲基-β-氨基丙酸乙酯(83)
用50转化成为55的方法,使82(1.3g,2.5mmol)和80(0.62g,2.5mmol)偶合,快速色谱得83(硅胶,10%异丙醇/己烷)。
TLC Rf=0.50(20%异丙醇/己烷);
1H NMR(300MHz,CDCl3)δ6.67(bd,J=8Hz,1H),6.37(m,1H),5.72(m,1H),5.02(m,1H),4.35(m,1H),4.13(q,J=7Hz,2H),4.03(m,1H),3.88(m,2H),2.63(m,2H),2.51(m,2H),2.35(m,1H),2.20(m,2H),1.70-1.20(m,7H),1.44(s,9H),1.26(t,J=7Hz,3H),1.07(m,2H).
制备〔3-〔2-(N-BOC-哌啶-4-基)乙基〕-5-羟基-2-吡咯烷酮-1〕乙酰基-3(R)-甲基-β-氨基丙酸乙酯(84)
室温下把OSO4(0.96ml,80μmol;2.5%叔-丁醇)加到83(0.74g,1.5mmol),THF(12.2ml),水(9.2ml)和NaIO4(0.82g,3.8mmol)的溶液中。2.0小时后,用醚稀释反应混合物,然后用水,10%Na2S2O3水溶液和盐水洗涤,干燥(MgSO4),浓缩,得黄色油状物84。
TLC Rf=0.26(20%异丙醇/己烷)。
制备〔3-〔2-(N-BOC-哌啶-4-基)乙基〕-5-羟基-2-吡咯烷酮-1〕乙酰基-3(R)-甲基-β-氨基丙酸(85)
用55转为56的方法,84(0.73g,1.5mmol)生成浅黄色泡沫物85。
1H NMR(300MHz,CDCl3)δ5.23(d,J=5Hz,1H),4.58(d,J=16Hz,1H),4.32(m,1H),4.05(m,2H),3.70(d,J=16Hz,1H),2.80-2.40(m,6H),2.22(m,1H),2.00-1.00(m,9H),1.45(s,9H),1.27(d,J=7Hz,3H).
制备〔3-〔2-(哌啶-4-基)乙基〕-2-吡咯烷酮-1〕乙酰基-3(R)-甲基-β-氨基丙酸(86)
室温下用CF3CO2H(5.8ml)和三乙基硅烷(0.8ml,5.2mmol)的溶液处理搅拌着的85(0.61g,1.3mmol)的CH2Cl2(50ml)溶液。2小时后,浓缩反应混物,接着用甲苯共沸除去剩余的CF3COaH。快速色谱(硅胶,10∶1∶1乙醇/水/NH4OH)生成无色固体86。
TLC Rf=0.17(9∶1∶1 乙醇 /H2O/NH4OH);
1H NMR(300 MHz,CD3OD)δ4.20(m,1H),3.97(d,J=17Hz,1H),3.85(d,J=17Hz,1H),3.40(m,4H),2.95(m,2H),2.52(m,1H),2.30(m,2H),2.00-1.30(m,11H),1.20(d,J=7Hz,3H).
制备2-(2,3,4,5,6-四氢-1,1-二氧代-2H-1,2-噻嗪-2-基)丙-2-烯(88)
0℃下用NaN(TMS)2(3.9ml,3.9mmol,1M/己烷)滴加到87(J。O。C,52,P。2162(1987)。E.H.White.H.M.Lim)(0.35g,2.6mmol)的DMF的溶液中。30分钟后,将烯丙基溴(0.45ml,5.2mmol)一份加入,接着继续搅拌30分钟。用乙酸乙酯稀释反应混合物,用饱和NH4Cl和盐水洗涤,干燥(MgSO4),浓缩。快速色谱(硅胶,30%乙酸乙酯/己烷)处理;得无色油状物88。
TLC Rf=0.29(30%乙酸乙酯/己烷);
1H NMR(300MHz,CDCl3)δ5.80(m,1H),5.25(m,2H),3.78(m,2H),3.30(m,2H),3.02(m,2H),2.21(m,2H),1.68(m,2H).
制备2-〔6-〔2-(N-BOC-哌啶-4-基)乙基〕-(3,4,5,6-四氢-1,1-二氧代-2H-1,2-噻嗪-2-基)〕-丙-2-烯(89)
在-78℃,用正-BuLi(1.45ml,2.3mmol;1.6M/己烷)滴加处理搅拌着的88(0.34g,1.93mmol)的THF(10ml)溶液。30分钟后,反应混合物用1-甲基-2-吡咯烷酮(1ml)和10(0.86g,2.7mmol)在THF(10ml)中)顺序处理,接着温热到-23℃。2小时后,在-23℃将反应物用饱和NH4Cl骤冷,然后用乙酸乙酯稀释,用水和盐水洗涤,干燥(MgSO4),浓缩、快速色谱(硅胶,30%乙酸乙酯/己烷)处理后,得晶形固体89。
TLC Rf=0.27(30%乙酸乙酯/己烷);
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ5.80(m,1H),5.25(m,2H),4.07(m,2H),3.78(m,2H),3.34(m,2H),3.17(m,1H),3.02(m,1H),2.82(m,2H),2.66(m,2H),2.24-2.04(m,3H),1.89(m,1H),1.70-1.35(m,7H),1.08(m,2H).
制备2-〔6-〔2-(N-BOC-哌啶-4-基)乙基〕-(3,4,5,6-四氢-1,1-二氧代-2H-1,2-噻嗪-2-基)〕-乙醛(90)
把OsO4(1ml,0.1mmol;2.5%/叔-丁醇)加到89(0.50g,1.29mmol),THF(16ml),H2O(12ml)和NaIO4(0.69g,3.2mmol)的搅拌着的溶液中至产生白色沉淀。3.0小时后,用乙酸乙酯稀释反应混合物,用水,5%KHSO4和饱和NaHCO3和盐水洗涤,干燥(MgSO4),浓缩得油状物醛90。
1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ9.64(s,1H),4.08(m,2H),4.00(d,J=17Hz,1H),3.89(d,J=17Hz,1H),3.62(m,1H),3.14(m,1H),2.96(m,1H),2.66(m,2H),2.20(m,1H),2.08(m,1H),2.00-1.35(m,9H),1.10(m,2H).
制备2-〔6-〔2-(N-BOC-哌啶-2-基)乙基〕-(3,4,5,6-四氢-1,1-二氧代-2H-1,2-噻嗪-2-基)〕-乙酸(91)
0℃用琼斯试剂(1.0ml)三份处理搅拌着的90(0.44g,1.13mmol)的丙酮(10ml)溶液。5分钟后,用异丙醇骤冷过量的琼斯试剂,用水稀释。反应混合物用乙酸乙酯提取。用盐水洗涤有机提取液,干燥(MgSO4),浓缩。快速色谱(硅胶,20∶1∶1CH2Cl2/CH3OH/ACOH),得浅黄色油状91。
TLC Rf=0.45(20∶1∶1CH2Cl2/CH3OH/ACOH)。
制备2-〔6-〔2-(N-BOC-哌啶-4-基)乙基〕-(3,4,5,6-四氢1,1-二氧代-2H-1,2-噻嗪-2-基)〕-乙酰基-3(R)-甲基-β-氨基丙酸乙酯(92)
用50转化为55的方法,使91(98mg,0.24mmol)和54(120mg,0.71mmol)偶合,得92,快速色谱处理后为黄色油状物(硅胶,乙酸乙酯)。
TLC Rf=0.28(乙酸乙酯);
1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.08(m,1H),4.37(m,1H),4.08(m,2H),3.89(d,J=17Hz,1H),3.77(d,J=17Hz,1H),3.60(m,1H),3.15(m,1H),2.88(m,1H),2.68(m,2H),2.52(m,2H),2.20-1.00(m,13H),1.27(t,J=7Hz,3H),1.25(t,J=7Hz,3H).
制备2-〔6-〔2-(N-BOC-哌啶-4-基)乙基〕-(3,4,5,6-四氢-1,1-二氧代-2H-1,2-噻嗪-2-基)〕-乙酰基-3(R)-甲基-β-氨基丙酸(93)
用55转成56的方法,使92(76mg,0.15mmol)生成油状93。
TLC Rf=0.42(20∶1∶1 CH2Cl2/CH3OH/AcOH);
1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.20(m,1H),4.39(m,1H),4.10(q,J=7Hz,2H),4.08(m,2H),3.92(d,J=17Hz,1H),3.74(m,1H),3.53(m,1H),3.15(m,1H),2.90(m,1H),2.77(m,2H),2.59(m,2H),2.10(m,1H),2.10-1.10(m,12H),1.27(t,J=7Hz,3H),1.25(t,J=7Hz,3H).
制备2-〔6-〔2-(哌啶-4-基)乙基〕-(3,4,5,6-四氢-1,1-二氧代-2H-1,2-噻嗪-2-基〕乙酰基-3-(R)-甲基-β-氨基丙酸(94)
用56生57的方法,使93(61mg,0.12mmol)生成94,快速色谱(硅胶,10∶1∶1乙醇/NH4OH/H2O)处理后为灰白色固体94。
TLC Rf=0.26(10∶1∶1 乙醇/NH4OH/H2O);
1H NMR(300MHz,D2O)δ4.08(m,1H),3.71(m,2H),3.40(m,1H),3.29(m,2H),3.14(m,2H),2.83(m,2H),2.25(m,2H),2.12(m,1H),1.90-1.20(m,12H),1.05(d,J=7Hz,3H).
制备1-〔2-(N-BOC-哌啶-4-基)乙基〕-3-丙醇-2-吡咯烷酮(95)
在0℃把20(1.20g,3。6mmol)的THF(3ml)溶液加到甲硼烷-二甲硫(3.6mmol)的THF(3ml)溶液中,于0℃搅拌2.5小时。在0℃把H2O(0.15ml),10N NaOH水溶液(0.65ml)、THF(1ml)和C2H5OH(0.36ml)加入并搅拌,反应混合物温热到23℃,用30%H2O2(0.36ml)处理。把该溶液加热到55℃,然后搅拌2小时。使反应混合物冷却,用K2CO3饱和,分离有机相,干燥(MgSO4)并除去溶剂。所得剩余物在硅胶上用快速色谱纯化,洗脱剂为10%MeOH/EtOAC,得95。
Rf=0.3(硅胶,10%MeOH/EtOAC)。
1-〔2-(N-BOC-哌啶-4-基)乙基〕-3-丙酸-2-吡咯烷酮(96)
将95(1.14mmol)的丙酮(5ml)溶液冷到-15℃,然后用琼斯试剂处理直到颜色保持琥珀色/褐色。反应混合物用饱和NaHCO3溶液稀释到pH为9,用EtOAC提取。用KHSO4溶液酸化水相pH为3,并用几份EtOAC提取。合并有机提取物在MgSO4上干燥,除去溶剂得96。
Rf=0.3(硅胶,9/1/1 CH2Cl2/MeOH/HOAC)。
〔1-〔2-(N-BOC-哌啶-4-基)乙基〕-2-吡咯烷酮-3〕丙酰基-β-氨基丙酸乙酯(97)
于23℃用BOP(0.825mmol)处理96(0.55mmol),β-氨基丙酸乙酯·HCl(0.825mmol),N-甲基吗啉(1.65mmol)的CH3CN(5ml)溶液,将所得溶液搅拌48小时。用EtOAC稀释反应混合物,用10%KHSO4,盐水、水、盐水洗涤,用MgSO4干燥,除去溶剂。剩余物在硅胶上用快速色谱纯化,洗脱剂为30%丙酮/己烷,得清亮油状物97。
Rf=0.25(硅胶,30%丙酮/己烷)。
〔1-〔2-(N-BOC-哌啶-4-基)乙基〕-2-吡咯烷酮-3〕丙酰基-β-氨基丙酸(98)
将97(0.29mmol)、LiOH·H2O(1.45mmol),THF/MeOH/H2O(1∶1∶1,3ml)的溶液搅拌2小时。用EtOAC稀释,用10%KHSO4、H2O,盐水洗涤,干燥(MgSO4)。除去溶剂得油状98。
Rf=0.5(硅胶,9/1/1 CH2Cl2/MeOH/HOAC)。
〔1-〔2-(哌啶-4-基)乙基〕-2-吡咯烷酮-3〕丙酰基-β-氨基丙酸·HCl(99)
使98(0.18mmol)的EtOAC(2ml)溶液冷到-78℃,用HCl气体处理。0.5小时后,除去溶剂,得白色固体99。
Rf=0.22(硅胶,10/1/1 EtOH,NH4OH,H2O)。
制备N-BOC-4-哌啶甲基碘(101)
用9生成10的方法,100(12.3g,57mmol)(Carr.等EP317997,1989年5月31日)快速色谱处理后生成101(硅胶,15%EtOAC/己烷)。
Rf=0.38(硅胶,10%EtOAC/己烷)。
1H NMR(300 MHz,CDCl3)δ1.15(2H,m),1.48(9H,s),1.62(1H,m),1.84(2H,m),2.70(2H,m),3.11(2H,m),4.12(2H,m).
制备碘化N-BOC-哌啶亚甲基三苯基鏻(102)
将101(5.1g,15.7mmol),CH3CN(75ml)和三苯基膦(4.5g,17.3mmol)的溶液加热至80℃60小时。浓缩冷却的反应混合物,用醚研制剩余油状物,放在真空下,得黄色泡状102。
1H NMR(CDCl3,300MHz)δ7.31(m,15H),4.10(m,2H),3.97(m,2H),2.69(m,2H),2.00-1.10(m,5H),1.48(s,9H).
制备3-〔2-(N-BOC-哌啶-4-基)亚乙基〕-2-(甲氧基)吡啶(104)
0℃,将NaN(TMS)2(9.4ml,9.4mmol,1M/己烷)滴加到102(5.0g,8.5mmol)的无水THF悬浮液中。15分钟后,将103溶液(0.97g,7.0mmol)(TeTrahedron Letters(1988)29,773)的THF(3ml)滴加入,以生成黄色/橙色均相反应混合物。1小时后,移去冷浴,接着搅拌30分钟。用水和醚骤冷溶液。用醚再提取水相,合并有机层,用盐水洗涤,干燥(Na2SO4),浓缩。快速色谱(硅胶,15%乙酸乙酯/己烷)处理后得无色油状104。
TLC Rf=0.15(10% 乙酸乙酯/己烷1H NMR(300MHz,CDCl3)δ8.09(dd,J=5 and 2 Hz,1H),7.42(dd,J=7 and 2Hz,1H),6.87(dd,J=7 and 5 Hz,1H),6.37(d,J=12Hz,1H),5.58(dd,J=12 and 10Hz,1H),4.10(m,2H),3.95(s,3H),2.70(m,2H),2.50(m,1H),1.80-1.20(m,4H),1.47(s,9H).
制备3-〔2-(N-BOC-哌啶-4-基)乙基〕-2-甲氧基吡啶(105)
室温,氢气(1大气压)下,搅拌104(1.4g,4.3mmol),乙酸乙酯(22ml)和10%Pd/C(0.27g,20%重量)4小时。反应混合物通过硅藻填料过滤,浓缩过滤物,得混浊的无色油状物105。
TLC Rf=0.17(10% 乙酸乙酯/己烷);1H NMR(CDCl3,300 MHz)δ8.02(dd,J=5 and 2 Hz,1H),7.36(dd,J=7 and 2 Hz,1H),6.80(dd,J=7 and 5Hz,1H),4.10(m,2H),3.94(s,3H),2.69(m,2H),2.58(m,2H),1.72(m,2H),1.55-1.35(m,3H),1.48(s,9H),1.13(m,2H).
制备3-〔2-(N-BOC-哌啶-4-基)乙基〕-2-吡啶酮-1基(106)
将NaI(0.94g,6.3mmol)加到105(0.81g,2.5mmol)的无水CH3CN(13ml)溶液中,接着用氯代三甲基硅烷(0.80ml,6.3mmol)处理。将所得不透明黄色溶液加热至60℃2小时,冷的反应混合物用甲醇(50ml)骤冷,搅拌10分钟,浓缩。剩余物溶于二噁烷/水(6.7ml/3.3ml),然后用1N NaOH(5.0ml,5.0mmol)处理。将溶液冷至0℃,用BOC2O(1.1g,5.0mmol)处理,接着移去冷浴。搅拌过夜后,蒸发二噁烷,用水(10ml)和乙酸乙酯(50ml)稀释残余物,接着用20%KHSO4酸化至pH~1.0。分离有机相,用水和盐水洗涤,干燥(MgSO4),浓缩。快速色谱(硅胶,2∶1CH2Cl2/丙酮)处理后得浅黄色固体106。
TLC Rf=0.19(2∶1 CH2Cl2/丙酮):1H NMR(CDCl3,400MHz)δ7.30(m,3H),6.23(t,J=7Hz,1H),4.04(m,2H),2.69(m,2H),2.57(m,2H),1.74(m,2H),1.56(m,2H),1.48(m,1H),1.47(s,9H),1.16(m,2H).
制备{3-〔2-(N-BOC-哌啶-4-基)-乙基〕-2-吡啶酮-1-基}乙酸乙酯(107)
0℃把NaN(TMS)2(2.1ml,2.1mmol,1M/己烷)滴加入106(0.44g,1.4mmol)的无水DMF(7.2ml)的搅拌着的溶液中。30分钟后,将溴代乙酸乙酯(0.79ml,7.2mmol)滴加到反应混合物中。加入1小时后,用乙酸乙酯稀释反应物,用水,5%KHSO4,饱和NaHCO3和盐水洗涤,干燥(MgSO4),浓缩。快速色谱(硅胶,45%乙酸乙酯/己烷)处理后,得无色油状物107。
TLC Rf=0.33(60% 乙酸乙酯 /己烷);7.20(dd,J=6 and 1 Hz,1H),7.11(dd,J=7 and 2 Hz,1H),6.15(t,J=7 Hz,1H),4.62(s,2H),4.24(q,J=7Hz,2H),4.04(m,2H),2.69(m,2H),2.55(m,2H),1.72(m,2H),1.52(m,2H),1.78(m,1H),1.48(s,9H),1.13(m,2H).
制备{3-〔2-(N-BOC-哌啶-4-基)乙基〕-2-吡啶酮-1-基}乙酸(108)
用55生成56的方法,107(0.51g,1.3mmol)生成无色泡状108。
TLC Rf=0.58(9∶1∶1 CH2Cl2/CH3OH/HOAC)。
制备{3-〔2-(N-BOC-哌啶-4-基)乙基〕-2-吡啶酮1-基}乙酰基-3(R)-甲基-β-氨基甲酸乙酯(109)
用15转成16的方法,108(0.15g,0.41mmol)生成109,快速色谱(硅胶,乙酸乙酯)处理后为蜡状固体。
TLC Rf=0.38(乙酸乙酯)1H NMR(CDCl3,400MHz)δ7.24(dd,J=7 and 2Hz,1H),7.21(dd,J=7 and 2Hz,1H),7.07(bd,J=8Hz,1H),6.19(t,J=7Hz,1H),4.51(s,2H),4.30(m,1H),4.08(q,J=7Hz,2H),4.08(m,2H),2.69(m,2H),2.55(m,2H),1.72(m,2H),1.51(m,2H),1.45(s,9H),1.43(m,1H),1.23(t,J=7Hz,3H),1.22(d,J=7Hz,3H),1.13(m,2H).
制备{3-〔2-(N-BOC-哌啶-4-基)乙基〕-2-吡啶酮-1-基}乙酰基-3(R)-甲基-β-氨基丙酸(110)
用55生成56的方法,109(0.19g,0.41mmol)生成无色油状110。
TLC=0.59(9.5/0.5/0.5 CH2Cl2/CH3OH/HOAC)。
制备{3-〔2-(哌啶-4-基)乙基〕-2-吡啶酮-1}乙酰基-3(R)-甲基-β-氨基丙酸(11l)
将103(0.18g,0.40mmol),CH2Cl2(2.0ml),苯甲醚(86μl,0.80mmol)和三氟乙酸(2.0ml)的溶液于-15℃搅拌15分钟。浓缩黄色反应混合物,用甲苯共沸除去剩余的三氟乙酸。快速色谱(硅胶,10/1.3/1.3乙醇/NH4OH/水)处理后,得白色无定形固体111。
TLC Rf=0.17(10∶1∶1 乙醇/NH4OH/H2O);1H NMR(D2O,400 MHz)δ7.57(dd,J=7 and 1 Hz,1H),7.49(dd,J=7 and 1Hz,1H),6.51(t,J=7Hz,1H),4.66(m,2H),4.20(m,1H),3.42(m,2H),2.97(m,2H),2.59(m,2H),2.46(dd,j=14 and 6Hz,1H),2.32(dd,J=14 and 7Hz,1H),2.00(m,2H),1.60(m,3H),1.42(m,2H).
制备N-Cbz-4-哌啶乙醇(112)
0℃把氯代甲酸苄酯(16.5ml,0.12mmol)加到4-哌啶乙醇8(15g,0.12mol),THF(500ml)和二异丙基乙胺(40.5ml,0.23mol)的搅拌着的溶液中。0℃下,1小时后,反应混合物用乙酸乙酯稀释,用H2O(2X),10%KHSO4和盐水洗涤,干燥(MgSO4),浓缩,得无色油状物112。
TLC Rf=0.60(乙酸乙酯);1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.35(m,5H),5.13(s,2H),4.18(m,2H),3.70(q,J=7Hz,2H),2.80(m,2H),1.80-1.50(m,5H),1.19(m,2H).
制备N-Cbz-4-哌啶乙基碘(113)
用9制成10的方法,112(30.6g,0.12mol)生成113。快速色谱(硅胶,10%乙酸乙酯/己烷)处理后为无色油状物。
制备1-〔2-(N-Cbz-哌啶-4-基)乙基〕-(2-吡咯烷酮)(114)
室温把NaN(TMS)2(129ml,129mmol,1M/THF)滴加入2-吡咯烷酮(11.0g,0.13mol)的无水DMF(500ml)的搅拌着的溶液中。10分钟后,将碘化物113(24.1g,64.6mmol)的DMF(50ml)溶液加到反应容器中。1小时后,反应混合物用乙酸乙酯稀释,用水饱和NaHCO3和盐水洗涤,干燥(MgSO4),浓缩。快速色谱(硅胶、乙酸乙酯)处理后得无色油状物114。
TLC Rf=0.16(乙酸乙酯);1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.40-7.20(m,5H),5.12(s,2H),4.19(m,2H),3.34(m,2H),2.77(m,2H),2.40(m,2H),2.04(m,2H),1.74(m,2H),1.47(m,3H),1.15(m,2H).
制备1-〔2-(N-Cbz-哌啶-4-基)乙基〕-3-丙烯-2-基-(2-吡咯烷酮)(115)
在-78℃把LDA(50ml,25mmol,0.5M/THF)滴加到114(8.0g,24.2mmol)和THF(180ml)的搅拌着的溶液中,15分钟后加入烯丙基溴(2.3ml,26.6mmol)。1.0小时后,反应混合物温热到0℃10分钟。反应混合物用乙酸乙酯稀释,用5%KHSO4和盐水洗涤,干燥(MgSO4),浓缩,快速色谱(硅胶,50%乙酸乙酯/己烷)处理后得115。
TLC Rf=0.65(乙酸乙酯);1H NMR(300 MHz,CDCl3)δ7.35(m,5H),5.80(m,1H),5.12(m,2H),4.18(m,2H),3.33(m,4H),2.80(m,2H),2.56(m,2H),2.20(m,2H),1.78(m,2H),1.48(m,3H),1.20(m,2H).
制备1-〔2-(N-Cbz-哌啶-4-基)-乙基〕-3-乙酸-2-吡咯烷酮(116)
用14生成15的方法,115(4.7g,12.7mmol)生成116,快速色谱(硅胶,CH2Cl2/CH3OH/HOAC 9.5∶0.5∶0.5)处理后为浅褐色油状物。
TLC Rf=0.63(CH2Cl2/CH3OH/HOAc 9.0∶0.5∶0.5);1H NMR(300 MHz,CDCl3)δ7.37(m,5H),5.15(s,2H),4.18(m,2H),3.37(m,4H),3.00-2.30(m,5H),1.77(m,2H),1.46(m,3H),1.18(m,2H).
制备〔1-〔2-(N-Cbz-哌啶-4-基)乙基〕-2-吡咯烷酮-3〕乙酰基-2-氨基乙基膦酸(117)
0℃用氯代甲酸异丁酯(0.13ml,1.0mmol)处理116(388mg,1.0mmol),Et3N(0.14ml,1.0mmol)和无水二噁烷(5ml)的溶液。将反应混合物温热直到二噁烷熔化。室温下将2-氨基乙基膦酸(125mg,1.0mmol),Na2CO3(106mg)和水(2ml)溶液加到反应容器中。4小时后,蒸发二噁烷。用1N HCl酸化剩余物。用乙酸乙酯(3X)洗涤混合物。浓缩水相部分至干得粗117。
TLC Rf=0.15(9∶1.0∶1.0 CH2CL2/CH3OH/HOAC)。
制备〔1-〔2-(哌啶-4-基)乙基〕-2-吡咯烷酮-3〕乙酰基-2-氨基乙基膦酸(118)
将粗磷酸117(464mg)溶于10%HOAc/CH3OH(20ml)中,然后加入Pd(OH)2(50mg),使混合物于Parr仪器(50PSI)上氢化过夜。20小时后,反应混合物在硅藻填料上过滤,浓缩过滤物。快速色谱(硅胶,8∶1∶1CH3OH/水/NH4OH)处理后,得无定形固体118。
TLC Rf=0.14(8∶1∶1 CH3OH/H2O/NH4OH);1H NMR(300 MHz,H2O)δ3.40(m,8H),3.18(m,1H),2.92(m,3H),2.60(m,1H),2.38(m,1H),2.26(m,1H),1.97(m,2H),1.79(m,3H),1.56(m,2H),1.40(m,2H).
制备(4-N-Cbz-氨基)环己基羧酸甲酯(121)
在-10℃把亚硫酰氯(13.4ml,0.18mol)在5分钟内分批加入120(17.5g,0.12mol)的CH3OH(150ml)的悬浮液中,接着移去冷浴。16小时后,浓缩所得溶液,剩余物溶于DMF(150ml),冷至0℃,然后顺序地用N(i-pr)2Et(52ml,0.3mol)和氯代甲酸苄酯(18.6ml,0.13mol)处理。移去冷浴,24小时后,浓缩反应混合物。用乙酸乙酯洗涤剩余物,用饱和NaHCO3,5%KHSO4和盐水洗涤,干燥(MgSO4),浓缩。快速色谱(硅胶,20%乙酸乙酯/己烷)处理后得蜡状晶形固体121。
TLC Rf=0.34,0.39(30%乙酸乙酯/己烷);1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.38(m,5H),5.09(bs,2H),4.68(m,0.5H),4.59(m,0.5H),3.72(m,0.5H),3.68(s,1.5H),3.67(s,1.5H),3.50(m,0.5H)2.45(m,1H),2.13-1.50(m,8H).
制备(4-N-Cbz-氨基)〔1-(丙烯-3-基)〕环己基羧酸甲酯(122)
在-78℃,将LDA(4.3ml,8.6mmol,2.0M)滴加入搅拌着的121(1.0g,3.4mmol)的无水THF(17.2ml)溶液中。冷浴温热到-40℃。-40℃搅拌15分钟后,将反应混合物再冷至-78℃,然后用1,3-二甲基-3,4,5,6-四氢-2-(1H-嘧啶酮)(2.0ml,17mmol)和烯丙基溴(0.44ml,5.1mmol)顺序进行处理。2小时后,用乙酸乙酯稀释反应物,然后用水,饱和NH4Cl,饱和NaHCO3和盐水洗涤。干燥(MgSO4),浓缩得黄色油状物。经快速色谱(硅胶,20%乙酸乙酯/己烷)处理后,得蜡状晶形固体122。
TLC Rf=0.31(20% 乙酸乙酯/己烷);1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.34(m,5H),5.67(m,1H),5.10(s,2H),5.05(m,2H),4.54(m,1H),3.67(s,3H),3.48(m,1H),2.21(m,2H),2.00-1.00(m,8H).
制备4-氨基,1-(丙烯-3基)环己烷羧酸甲酯(123)
0℃,把三氟乙酸(19ml)加到122(0.63g,1.9mmol)和苯甲醚(0.41g,3.8mmol)的混合物中。5分钟后,反应混合物变成均相,移去冷浴,接着搅拌过夜。浓缩、快速色谱(硅胶,17∶1∶1乙醇/NH4OH/水)处理后得黄色油状123。
TLC Rf=0.53(30%乙酸乙酯/己烷)。
制备〔2-氮杂-3-氧代-〔2,2,2〕二环辛-4-基〕-丙-3烯(124)
123(0.39g,1.97mmol)的甲苯(10ml)溶液在封管中加热至170℃过夜。冷的黑色反应混合物用快速色谱(硅胶,85%乙酸乙酯/己烷)纯化,得褐色油状物124。
TLC Rf=0.30(85% 乙酸乙酯/己烷);1HNMR(400MHz,CDCl3)δ6.08(m,1H),5.88(m,1H),5.04(m,2H),3.61(m,1H),2.35(d,J=7Hz,2H),1.80-1.50(m,8H).
制备(〔2-(N-BOC-哌啶-4-基)乙基〕-2-氮杂-3-氧代-〔2,2,2〕二环辛-4-基)丙-3-烯(125)
用36a生成37a的方法,124(0.18g,1.1mmol)经快速色谱(硅胶,40%乙酸乙酯/己烷)处理后得125(0.45g,100%)。
TLC Rf=0.36(40% 乙酸乙酯/己烷);1H NMR(400MHz,CDCl3)δ5.87(m,1H),5.05(m,2H),4.08(m,2H),3.51(m,1H),3.40(t,J=8Hz,2H),2.67(m,2H),2.34(d,J=7Hz,2H),1.75-1.35(m,13H),1.47(s,9H),1.12(m,2H).
制备3-(1-〔2-(N-BOC-哌啶-4-基)乙基〕-2-氮杂-3-氧代-〔2,2,2〕二环辛-4-基)乙酸(126)
用14生成15的方法,125(0.42g,1.1mmol)生成白色粘稠泡状物126(0.34g,76%)。
TLC Rf=0.58(9.5∶0.5∶0.5 CH2Cl2/CH3OH/AcOH)。
制备(〔2-(N-BOC-哌啶-4-基)乙基〕-2-氮杂-3-氧代-〔2,2,2〕二环辛-4-基)乙酰基-β-氨基丙酸-叔-丁酯(127)
用15生成16的方法,126(0.14g,0.35mmol)生成127(0.10g,55%),经快速色谱(硅胶,6∶1 CH2Cl2/丙酮)处理后为无色油状物。
TLC Rf=0.52(2∶1 CH2Cl2/丙酮);1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ7.90(m,1H),4.04(m,2H),3.56(m,1H),3.42(m,4H),2.67(m,2H),2.42(t,J=7Hz,2H),1.76-1.34(m,13H),1.46(s,18H),1.12(m,2H).
制备(〔2-(哌啶-4-基)乙基〕-2-氮杂-3-氧代-〔2,2,2〕二环辛-4-基)乙酰基-β-氨基丙酸(128)
用40a生成41a的方法,127(0.10g,0.19mmol)生成128(29mg,39%),经快速色谱(硅胶,10∶1.2∶1.2乙醇/水/NH4OH)处理后为松散的固体。
TLC Rf=0.17(10∶1∶1 乙醇/NH4OH/H2O);1H NMR(400 MHz,D2O)δ3.78(m,1H),3.50-3.35(m,6H),2.97(m,2H),2.48(s,2H),2.38(t,J=7Hz,2H),2.02(m,2H),1.78(m,6H),1.58(m,5H),1.42(m,2H).
这里申请人结合参考文献方法制备本发明化合物,其中胍从胺制得,脒从相应的腈制得。本专业技术领域的熟练人员从胺制备胍是基于3,5-二甲基吡唑1-甲脒硝酸盐的反应(MethodsEnzymol.,25b,558,1972)。本技术领域熟悉的技术人员从相应的腈制备脒是使用了Boere,R.T.,et.al.J.Organomet.Chem.,331(2),161-7,1987;and Fuks,R.,Tetrahedron,29(14),2147-51,1973。所述的方法。
用本发明所说明的方法,包括下列表Ⅰ中的所述化合物,是根据本发明可以制得化合物的实施例。
表Ⅰ
表Ⅰ续
体内活性
用下列的方法(protocols)来测定在狗体内的本发明纤维蛋白原受体拮抗剂的体内活性。
将雌性或雄性杂种狗(重7.5-11.5公斤)比较舒适地捆绑在尼龙吊绳上,把腿露出,使狗静止不动。用通过19度量级活动目标探测器(butterfly),将含0.5毫升的3.8%柠檬酸盐的塑料注射器,从隐静脉或头(侧)静脉抽出5ml血。再抽出1毫升的柠檬酸盐的血以测定全部血小板数,用促效药ADP(10μM)和胶原(10μg/ml)(两者皆注以肾上腺素)进行体外血小板聚集。血小板-富集的血浆(PRP)通过以150Xg离心血液5分钟获得。血小板数用血小板-贫的血浆调节到200,000/mm3。
口服施药用明胶胶囊或胃的灌注进行。对胃的灌注的方法,通过输食管将5毫升药的溶液施入狗体中,在下列时间内采体外血小板聚集的血样:0,20,40,70,90,150,200,250,300,350,480分钟,24小时,30小时和48小时。每个时间点上,把保持的血小板-贫的血浆贮存并冷冻起来,供药物级别用。用药物血浆级别给药之后,在30,55和110分钟再取三次血样。
作静脉注射用,体外血小板聚集的血样采集在下列的时间点上,注射时在0,30,45,60,90和120分钟,和注射停止后2,5,15,30,60,90,120,180,240,300,360和420分钟。每个时间点上,余下的血小板-贫血浆贮存和冷冻供药物级别用,药物以0.1ml/分钟的不变速度注射120分钟。
为静脉速注,很快地施用5毫升的药物溶液。体外血小板聚集的血样采集时间在速注之后的0,1,5,10,15,30,45,60,90,120,180和240分钟。在所有这里时间点上,余下的血小板-贫血浆贮存和冷冻供药物级别用。
在口服和静脉组中,在每个时间点上记录血的收集次数以测定药物血浆的级别。
下列化合物
以上述的方法进行评估。
以速率为10μg/kg/分和25μg/kg/分用静脉注射引起血小板聚集(对照组%)的抑制于以测定。在注射期间抑制接近完成。部分抑制在注射停止后数小时内还存在。
对单用口服施药的2mg/kg引起的血小板聚集(对照组%)抑制也进行测定。在八小时的期间内,血小板聚集的抑制百分率大于50%。