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1、(10)申请公布号 CN 104067943 A (43)申请公布日 2014.10.01 CN 104067943 A (21)申请号 201410341422.5 (22)申请日 2014.07.18 A01H 4/00(2006.01) (71)申请人 内蒙古农业大学 地址 010019 内蒙古自治区呼和浩特市赛罕 区昭乌达路 306 号内蒙古农业大学 (72)发明人 白玉娥 何炎红 武欣慧 (74)专利代理机构 呼和浩特北方科力专利代理 有限公司 15100 代理人 徐小明 (54) 发明名称 蝴蝶兰无菌根扩繁的方法 (57) 摘要 本发明为一种蝴蝶兰无菌根扩繁的方法， 属 于植物栽培。
2、领域种苗技术， 具体的讲是一种红色 花蝴蝶兰无菌根诱导丛生芽增殖培养成苗方法。 本发明选取优良无病虫害蝴蝶兰品种的植株， 从 健壮母株上切取长度为 2cm 的花梗腋芽茎段为外 植体材料， 经过一个月的初代诱导培养， 待腋芽生 长切下腋芽进行 40 天的生根培养， 将根从腋芽处 切下， 接种至诱导丛生芽培养基中， 20 天后从切 口处长出许多芽点， 继续培养长出大量的芽丛， 待 芽丛长大后即可切下芽丛进行生根培养， 则无菌 根继续培养可再次得到大量丛生芽。本发明的优 点是， 所述的无菌根诱导丛生芽增殖获得大量丛 生芽进而对蝴蝶兰进行扩繁， 实现蝴蝶兰的工业 化生产， 通过该本发明方法极大提高繁育。
3、系数， 缩 短了繁育的周期， 成活率可达 90% 以上。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 3 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书1页 说明书3页 (10)申请公布号 CN 104067943 A CN 104067943 A 1/1 页 2 1. 一种蝴蝶兰无菌根扩繁的方法， 其特征在于， 包括如下步骤 ： （1） 选取根系较多的蝴蝶兰无菌植株， 切取无菌根为外植体材料， 接种到诱导丛生芽 培养基上培养， 15 25d 后切口处长出芽点， 把带芽点的根用原培养基继续进行继代培养 得到大量的丛生芽， 无菌根诱导丛生芽培养基为 ： 1/2。
4、MS 或 MS+5 10mg/L 的 6-BA+0.5 1.5mg/L 的 NAA+0.5 1.5mg/L 的 KT +25 30g/L 的蔗糖 +5 6.5g/L 的琼脂 +350 450mg/L 的柠檬酸或 / 和维生素 C 或 / 和 pvp 或 / 和活性炭 +40g/L 的香蕉泥或 / 和马铃薯 汁或 / 和椰子汁， pH 值为 5.4 5.9， 培养条件为 ： 温度为 252， 开始 5 8d 暗培养， 后 光照时间 12 14h/d, 光照强度 2000 3000lux ； （2） 将上述诱导培养生长良好的丛生芽， 从无菌根上切下接种到生根培养基中得到再 生植株， 生根培养基 ：。
5、 1/2MS+0.5 1.5mg/L 的 NAA+25 30g/L 的蔗糖 +5 6.5g/L 的琼 脂 +30 40g/L 的香蕉泥 +1 3g/L 的活性炭， pH 值为 5.85 5.90， 培养条件为 ： 光照强 度为 2000 3000lux、 光照时间为 12 14h/d， 培养温度为 252， 湿度 60 80% ； （3） 再生植株炼苗及移栽 ： 当试管苗长至 3 4cm 高， 诱导出 2 3 条根， 3 4 片叶 片， 长度 2 3cm 时， 进行炼苗， 将试管苗带试管放在自然光下炼苗 5d 6d， 后取掉瓶口上 的封口膜进行炼苗 2d 3d， 期间在叶片上喷洒水， 然后从培。
6、养瓶中取出小苗， 洗净根部培 养基， 把根部用 0.1% 高锰酸钾浸泡 4 6min 后取出用滤纸吸干或自然干燥， 用灭菌的水苔 包裹根部种植于穴盘中， 保持空气湿度在 80% 以上。 2. 根据权利要求 1 所述的蝴蝶兰无菌根扩繁的方法， 其特征在于， 步骤 （1） 中所述 的无菌根诱导丛生芽培养基为 ： 1/2MS+5 10mg/L 的 6-BA+0.5 1.5mg/L 的 NAA+0.5 1.5mg/L 的 KT +25 30g/L 的蔗糖 +5 6.5g/L 的琼脂 +350 450mg/L 的柠檬酸 +40g/ L 的香蕉泥， ， pH 值为 5.80。 3. 根据权利要求 1 所述。
7、的蝴蝶兰无菌根扩繁的方法， 其特征在于， 步骤 （2） 所述的生 根培养基 ： 1/2MS+1mg/L 的 NAA+25 30g/L 的蔗糖 +5 6.5g/L 的琼脂 +40g/L 的香蕉泥 +2g/L 的活性炭， pH 值为 5.90。 4. 根据权利要求 1 所述的蝴蝶兰无菌根扩繁的方法， 其特征在于， 步骤 （1） 中所述的 无菌根诱导丛生芽培养基为 ： 1/2MS+10mg/L 的 6-BA+1.5mg/L 的 NAA+0.5mg/L 的 KT +30g/ L 的蔗糖 +6g/L 的琼脂 +400mg/L 的柠檬酸 +40g/L 的香蕉泥， pH 值为 5.80。 5. 根据权利要求。
8、 1 所述的蝴蝶兰无菌根扩繁的方法， 其特征在于， 步骤 （2） 所述的生 根培养基 ： 1/2MS+1mg/L 的 NAA+30g/L 的蔗糖 +6g/L 的琼脂 +40g/L 的香蕉泥 +2g/L 的活性 炭， pH 值为 5.90。 6. 根据权利要求 1 所述的蝴蝶兰无菌根扩繁的方法， 其特征在于， 步骤 （1） 中所述的培 养条件为 ： 温度为 252， 开始 7d 暗培养， 后光照时间 12/d, 光照强度 2000 3000lux。 7. 根据权利要求 1 所述的蝴蝶兰无菌根扩繁的方法， 其特征在于， 步骤 （2） 所述的培养 条件为 ： 光照强度为 2000 3000lux、 。
9、光照时间为 12h/d， 培养温度为 252， 湿度 80%。 权 利 要 求 书 CN 104067943 A 2 1/3 页 3 蝴蝶兰无菌根扩繁的方法 技术领域 0001 本发明属于植物栽培领域种苗技术， 具体的讲是一种红色花蝴蝶兰无菌根诱导丛 生芽增殖培养成苗方法。 背景技术 0002 红花蝴蝶兰又称蝶兰， 属热带气生兰， 兰科蝴蝶兰属多年生草本植物。 原产地在阿 萨姆、 缅甸、 菲律宾、 台湾等亚洲热带地区， 其繁殖慢， 生长周期长， 株型美观、 花大色艳、 花 形别致、 花期持久 , 深受各国人民的喜爱， 是具有商业价值的四大观赏热带兰之一。全世界 原生种约有70多种， 经杂交选育。
10、的品种有530多个， 但原生种的观赏性较差， 商业上用于大 规模生产的品种多为杂交种。蝴蝶兰的学名按希腊文的原意为 “好像蝴蝶般的兰花” 。它 能吸收空气中的养分而生存， 归入气生兰范畴， 每棵只长出数张活象汤匙般肥厚的阔叶， 交 互叠列在基部之上。 白色粗大的气根则露在叶片周围， 有的攀附在花盆的外壁， 极富天然野 趣。到了新春时节， 一枝长达盈尺的花梗就从叶腋抽出， 然后一朵接一朵地开放。每花均有 5瓣， 中间嵌镶唇瓣。 其性喜高温、 高湿、 半阴环境， 生长适温为20 ， 冬季10以下就会停 止生长， 低于 5容易死亡。在岭南各地如要进行批量生产， 必须要有防寒设施， 实行保护 性栽培。。
11、如果家庭小量种植， 在遇冷时立即移入室内便可以安全过冬。对它的繁殖大多采 用细胞组织培养， 经试管育成幼苗移栽， 大约经过两年左右便可开花。 有些母株当花期结束 后， 有时花梗上的腋芽也会生长发育成为子株， 当它长出根时可从花梗上切下进行分株繁 殖。其盆栽的植料不一宜用泥土， 而要采用水苔、 浮石、 秒锣屑、 木炭碎等， 或者直接把幼苗 固定在渺楞板上， 让它自行附着生长。这种栽培方法乃系仿照它在原始时的生态环境。 发明内容 0003 本发明目的在于提供一种蝴蝶兰无菌根扩繁的方法， 采用无菌根诱导丛生芽增殖 获得大量丛生芽进而对蝴蝶兰进行扩繁。 0004 本发明目的实现由以下技术方案实现 ： 。
12、本发明包括以下技术步骤 ： （1） 选取无病虫害的蝴蝶兰植株， 切取带腋芽的 2-3cm 的花梗茎段为外植体材料 ； 将芽 点外层的苞叶用镊子剔除， 加入 2 滴吐温 20 在自来水下冲洗半个小时， 转移至超净工作台 内用 75% 的酒精消毒 30s， 用无菌水处理 2 次， 加入 2%NaClO 溶液处理 5 6min 后用无菌 水冲洗 4 5 遍， 用消毒滤纸吸干表面水分 ； 切去花梗上下两端与消毒液接触的表面， 接种 至初梗代培养基中培养， 花梗初代培养为 :1/2MS +5mg/L6-BA +0.5mg/L NAA +30g/L 蔗糖 +6g/L 琼脂 +400mg/L 柠檬酸 +40。
13、g/L 香蕉泥， pH 值为 5.4 ； （2） 待花梗腋芽叶片伸展至 2cm， 在无菌操作台上切下腋芽接种到生根培养基上进行 生根培养， 生根培养基为 ： 1/2MS +0.5mg/L +NAA +30g/L 蔗糖 +6g/L 琼脂 +1g/L 活性炭 +40g/L 香蕉泥， pH 值为 5.4 ； （3） 当有 2 3 条根， 长到 2 3cm 时， 切下腋芽的根接种到诱导丛生芽培养基上培养， 说 明 书 CN 104067943 A 3 2/3 页 4 20 天后从切口处长出芽点， 继续进行继代培养得到大量的丛生芽， 无菌根诱导丛生芽培养 基为 ： 1/2MS +10mg/L、 6-BA。
14、 +0.5mg/L、 NAA +30g/L 蔗糖 +6 g/L 琼脂 +400mg/L 柠檬酸 +40g/L 香蕉泥， pH 值为 5.4， 培养条件为 ： 培养温度为 252， 光照时间 12h/d, 光照强度 2000 3000lux ； （4） 将上述诱导培养生长良好的丛生芽， 从无菌根上切下接种到生根培养基中， 再次将 无菌根接种到诱导丛生芽培养基上继代培养， 可再次得到大量的丛生芽丛， 分别接种在芽 增殖培养基中继代培养 ； 由于褐化对外植体的影响， 20 天继代一次， 增殖倍数为 10 株以上， 试管苗出瓶种植生长性状稳定 ； （5） 诱导生根成苗 ： 当丛生芽长至 2cm 高时，。
15、 将芽分割成单株， 转移到生根培养基中如 步骤 2 ； （6） 小苗移栽 ： 当试管苗长至 3 4cm 高， 有 2 3 条根， 3 4 片叶片， 长度 2 3cm 时， 可进行炼苗， 将试管苗放在自然光下炼苗5天， 打开瓶盖上的封口膜先进行炼苗2天， 期 间用喷壶喷洒叶片保证叶片不失水以增强试管苗对室外环境的适应能力 ； 然后从培养瓶中 取出小苗， 洗净根部培养基， 对根用 0.1% 高锰酸钾侵泡 5min 后取出晒干， 用干净的水苔包 裹根部种植于穴盘中， 保持空气湿度在 80% 以上， 放置在阴凉通风处， 光线由前期弱到强。 0005 本发明的优点是， 采用本发明所述的无菌根诱导丛生芽增。
16、殖获得大量丛生芽进而 对蝴蝶兰进行扩繁， 实现蝴蝶兰的工业化生产， 通过该本发明方法极大提高繁育系数， 缩短 了繁育的周期， 成活率可达 90% 以上。 具体实施方式 0006 本发明包括以下技术步骤 ： （1） 选取无病虫害的红花蝴蝶兰品种的植株， 切取带腋芽的 2-3cm 的花梗茎段为外植 体材料 ； 将芽点外层的苞叶用镊子剔除， 加入2滴吐温20在自来水下冲洗半个小时， 转移至 超净工作台内以质量浓度为 75% 的酒精消毒摇荡 30s后倒出酒精， 用无菌水处理 2 次， 加 入质量分数为 2%NaclO 溶液处理 5 6min， 将 NacloO 倒出用无菌水冲洗 4 5 遍后， 用消 。
17、毒滤纸吸干表面水分 ； 切去花梗上下两端与消毒液接触的表面， 接种至初代培养基中培养。 花梗初代培养为 :1/2MS +5mg/L 6-BA +0.5mg/L NAA +30g/L、 蔗糖 +6 g/L 琼脂 +400mg/ L、 柠檬酸 +40g/L 香蕉泥， pH 值为 5.4。 0007 （2） 待花梗腋芽叶片伸展至 2cm， 在无菌操作台上切下腋芽接种到生根培养基上。 腋芽诱导生根培养基为 ： 1/2MS +0.5mg/L +NAA +30g/L 蔗糖 +6 g/L 琼脂 +1g/L 活性炭 +40g/L 香蕉泥 pH 值为 5.4 ； （3） 当腋芽有 2 3 条根长约 2 3cm 。
18、时， 切下腋芽的根接种到诱导丛生芽培养基上培 养。20 天后从切口处长出芽点， 继续进行继代培养得到大量的丛生芽。无菌根诱导丛生芽 培养基为 ： 1/2MS +10mg/L 6-BA +0.5mg/LNAA +30g/L 蔗糖 +6 g/L 琼脂 +400mg/L 柠檬 酸 +40g/L 香蕉泥 pH 值为 5.4。培养条件为 ： 培养温度为 252， 光照时间 12h/d, 光照 强度 2000 3000lux ； (4) 将上述诱导培养生长良好的丛生芽， 从无菌根上切下接种到生根培养基中， 再次将 无菌根接种到诱导丛生芽培养基上继代培养， 可再次得到大量的丛生芽丛， 分别接种在芽 增殖培养。
19、基中继代培养 ； 由于褐化对外植体的影响， 20 天继代一次， 增殖倍数为 10 株以上， 说 明 书 CN 104067943 A 4 3/3 页 5 试管苗出瓶种植生长性状稳定。 0008 (5) 诱导生根成苗 ： 当丛生芽长至 2cm 高时， 将芽分割成单株， 转移到生根培养基 中如步骤 2 ； (6) 小苗移栽 ： 当试管苗长至 3 4cm 高， 有 2 3 条根， 3 4 片叶片， 长度 2 3cm 时， 可进行炼苗， 将试管苗放在自然光下炼苗5天， 打开瓶盖上的封口膜先进行炼苗2天， 期 间用喷壶喷洒叶片保证叶片不失水以增强试管苗对室外环境的适应能力 ； 然后从培养瓶中 取出小苗， 洗净根部培养基， 对根用 0.1% 高锰酸钾侵泡 5min 后取出晒干， 用干净的水苔包 裹根部种植于穴盘中， 保持空气湿度在 80% 以上， 放置在阴凉通风处， 光线由前期弱到强。 0009 虽然以上对本发明目的的构思和实施例作了详尽说明， 但本领域普通技术人员可 以认识到， 在没有脱离权利要求限定范围的前提条件下， 仍然可以对本发明作出各种改进 和变换， 而这种改进和变换仍然应当属于本发明的保护范围。 说 明 书 CN 104067943 A 5 。