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1、(10)申请公布号 CN 102872015 A (43)申请公布日 2013.01.16 CN 102872015 A *CN102872015A* (21)申请号 201210349112.9 (22)申请日 2012.09.18 A61K 31/4748(2006.01) A61K 36/59(2006.01) A61P 7/00(2006.01) (71)申请人 合肥七星医药科技有限公司 地址 230088 安徽省合肥市高新区黄山路 624 号桑夏广场 214 室 (72)发明人 邵旭 何万龙 李晓亮 牛海军 (74)专利代理机构 安徽合肥华信知识产权代理 有限公司 34112 代理人。
2、 余成俊 (54) 发明名称 一种白药子总生物碱提取物及其制备方法及 应用 (57) 摘要 本发明公开了一种白药子总生物碱提取物及 其制备方法， 包括以下步骤 ： 将白药子干品粉碎， 加热提取， 滤液减压浓缩 ； 加热水稀释， 酸化， 过 滤得滤液 ； 碱化， 过滤得滤液， 将所得滤液经陶瓷 膜过滤器进行分子截留滤过 ； 正丁醇萃取， 减压 浓缩 ； 浓缩液喷雾干燥得干粉提取物 ； 加乙醇超 声提取， 合并提取液， 提取液通过葡聚糖凝胶柱， 用 90 95% 的乙醇洗脱， 分段收集， 经高效薄层 色谱法鉴别， 合并含有生物碱部位， 低温冷冻， 析 出生物碱晶体粗品 ； 加乙醇溶解， 静置， 冷。
3、冻， 得 到白药子总生物碱纯品。本发明的白药子总生物 碱药物制剂， 对于白细胞减少症， 尤其是肿瘤病人 放、 化疗引起的白细胞减少症， 以及其他药物所致 的白细胞减少症都有辅助治疗的作用。 (51)Int.Cl. 权利要求书 2 页 说明书 6 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书 2 页 说明书 6 页 1/2 页 2 1. 一种白药子总生物碱提取物， 其特征在于它含有具有以下化学结构的异喹啉类生物 碱 ： （1） 头花千金藤碱分子式 ： C37H38N2O6 分子量 ： 606.71 （2） 异粉防己碱分子式 ： C38H42N2O6 分子量 ： 62。
4、2.75 （3） 轮环藤宁碱分子式 ： C38H42N2O6 分子量 ： 622.75 （4） 小檗胺分子式 ： C37H40N2O6 分子量 ： 608.72 。 2. 一种如权利要求 1 所述的白药子总生物碱提取物的制备方法， 其特征在于包括以下 步骤 ： （1） 将白药子干品粉碎成粗粉， 加浓度为 70 100乙醇加热提取， 提取液过 100 200 目筛， 滤液减压浓缩得浓缩液 ； （2） 将步骤 （1） 制备的浓缩液加热水稀释， 加盐酸调 pH 至 2 5 酸化， 搅拌， 静置， 过滤 得滤液 ； 权 利 要 求 书 CN 102872015 A 2 2/2 页 3 （3） 将步骤 。
5、（2） 制备滤液加氢氧化钠调 pH 至 9 12 碱化， 搅拌， 静置， 过滤得滤液， 将 所得滤液经陶瓷膜过滤器进行分子截留滤过， 陶瓷膜滤器孔径为 0.1m 0.3m， 所得滤 液即为精滤液 ； （4） 将步骤 （3） 中的精滤液通过离子交换树脂柱， 水洗除去杂质， 再用 80 95% 乙醇洗 脱， 收集洗脱液， 减压浓缩 ； 或将步骤 （3） 的精滤液用正丁醇萃取， 收集萃取液， 减压浓缩 ； （5） 将步骤 （4） 的浓缩液喷雾干燥得干粉提取物 ； （6） 将步骤 （5） 中的干粉提取物加乙醇超声提取， 合并提取液， 提取液通过葡聚糖凝胶 柱， 用9095%的乙醇洗脱， 分段收集， 经。
6、高效薄层色谱法鉴别， 合并含有生物碱部位， 低温 冷冻， 析出生物碱晶体粗品 ； （7） 将步骤 （6） 的生物碱晶体粗品加乙醇溶解， 静置， 冷冻， 得到白药子总生物碱纯品， 干燥， 粉碎， 即得白药子总生物碱。 3. 权利要求 1 所述的白药子总生物碱提取物在制备治疗白细胞减少症药物中的应用。 权 利 要 求 书 CN 102872015 A 3 1/6 页 4 一种白药子总生物碱提取物及其制备方法及应用 技术领域 0001 本发明主要涉及医药技术领域， 尤其涉及一种白药子总生物碱提取物及其制备方 法及应用。 背景技术 0002 白药子系为防己科植物头花千金藤的块根。生长于肥沃湿润的草丛、。
7、 山坡路旁阴 处或灌木林中， 亦生于石灰质石山上 ； 夏秋季采收， 切片晒干。 资源丰富， 我国中南部均有分 布。具有清热解毒 ； 祛风止痛 ； 凉血止血功效， 古代中医用于治疗咽喉肿痛、 热毒痈肿、 风湿 痹痛、 腹痛泻痢、 吐血衄血、 外伤出血等。味苦辛， 凉。 0003 现代中医常用本品治疗各类感染， 临床取得显著效果。因此我们对白药子进行系 统成分、 药效、 毒理等研究， 证实本品具有治疗白细胞减少症作用， 但现有研究对白药子总 生物碱治疗白细胞减少症研究较少， 尚无有关文献记载或研究报道。由于汤剂的煎煮比较 麻烦， 落后， 剂量大， 且不能起到急救作用， 并且药效成分不稳定， 不明确。
8、， 无效杂质太多， 不 利于白药子治疗白细胞减少症的推广与临床应用， 因此， 开发高标准， 高效， 长效， 速效， 安 全的治疗白细胞减少症白药子有效部位药物成为当务之急。 发明内容 0004 本发明目的就是为了弥补已有技术的缺陷， 提供一种白药子总生物碱提取物及其 制备方法及应用。 0005 本发明是通过以下技术方案实现的 ： 0006 一种白药子总生物碱提取物， 它含有具有以下化学结构的异喹啉类生物碱 ： 0007 （1） 头花千金藤碱分子式 ： C37H38N2O6 0008 分子量 ： 606.71 0009 0010 （2） 异粉防己碱分子式 ： C38H42N2O6 0011 分子。
9、量 ： 622.75 0012 说 明 书 CN 102872015 A 4 2/6 页 5 0013 （3） 轮环藤宁碱分子式 ： C38H42N2O6 0014 分子量 ： 622.75 0015 0016 （4） 小檗胺分子式 ： C37H40N2O6 0017 分子量 ： 608.72 0018 。 0019 一种白药子总生物碱提取物的制备方法， 包括以下步骤 ： 0020 （1）将白药子干品粉碎成粗粉， 加浓度为 70 100乙醇加热提取， 提取液过 100 200 目筛， 滤液减压浓缩得浓缩液 ； 0021 （2） 将步骤 （1） 制备的浓缩液加热水稀释， 加盐酸调 pH 至 2 。
10、5 酸化， 搅拌， 静置， 过滤得滤液 ； 0022 （3） 将步骤 （2） 制备滤液加氢氧化钠调pH至912碱化， 搅拌， 静置， 过滤得滤液， 将所得滤液经陶瓷膜过滤器进行分子截留滤过， 陶瓷膜滤器孔径为 0.1m 0.3m， 所得 滤液即为精滤液 ； 0023 （4） 将步骤 （3） 中的精滤液通过已处理好的离子交换树脂柱， 水洗除去杂质， 再用 8095%乙醇洗脱， 收集洗脱液， 减压浓缩 ； 或将步骤 （3） 的精滤液用正丁醇萃取， 收集萃取 液， 减压浓缩 ； 0024 （5） 将步骤 （4） 的浓缩液喷雾干燥得干粉提取物 ； 0025 （6） 将步骤 （5） 中的干粉提取物加乙醇。
11、超声提取， 合并提取液， 提取液通过葡聚糖 凝胶柱， 用9095%的乙醇洗脱， 分段收集， 经高效薄层色谱法鉴别， 合并含有生物碱部位， 低温冷冻， 析出生物碱晶体粗品 ； 0026 （7） 将步骤 （6） 的生物碱晶体粗品加乙醇溶解， 静置， 冷冻， 得到白药子总生物碱纯 品， 干燥， 粉碎， 即得白药子总生物碱。 说 明 书 CN 102872015 A 5 3/6 页 6 0027 所述的白药子总生物碱提取物在制备治疗白细胞减少症药物中的应用。 0028 本发明的优点是 ： 所述的白药子总生物碱药物制剂， 对于白细胞减少症， 尤其是肿 瘤病人放、 化疗引起的白细胞减少症， 以及其他药物所。
12、致的白细胞减少症都有辅助治疗的 作用。 具体实施方式 0029 实施例 1 0030 白药子总生物碱提取方法 ： 0031 取处方量的白药子加乙醇 6 倍量进行逆流动态加热萃取， 每次 3 小时， 收集提取 液， 滤过， 滤液减压浓缩至 （温度 70， 真空数 -0.08Npa） 每 1ml 相当于原生药材 5g， 用热水 溶解， 加盐酸酸化， 搅拌， 静置， 滤过得滤液， 冷藏静置 48 小时， 滤过， 加碱碱化， 搅拌， 静置， 滤过得滤液， 将所得药液经陶瓷膜过滤器进行分子截留滤过， 陶瓷膜滤器孔径为 0.1m 0.3m， 所得滤液即为精滤液 ； 将精滤液通过已处理好的离子型树脂柱， 水。
13、洗除去杂质， 再 用 85% 乙醇洗脱， 收集洗脱液， 减压浓缩 ； 再喷雾干燥得干粉提取物。干粉提取物加乙醇超 声提取二次， 合并提取液， 提取液通过葡聚糖凝胶柱， 收集生物碱部位， 低温冷冻， 析出生物 碱晶体粗品 ； 生物碱晶体粗品加乙醇溶解， 静置， 冷冻， 得到白药子总生物碱纯品， 干燥， 粉 碎， 即得白药子总生物碱 ； 0032 调 pH 至 2 5 为酸化， 调 pH 至 9 12 为碱化， 下同。 0033 实施例 2 0034 白药子总生物碱提取方法 ： 0035 取处方量的白药子加乙醇 8 倍量进行逆流动态加热萃取， 每次 2 小时， 收集提取 液， 滤过， 滤液减压浓缩。
14、至 （温度 70， 真空数 -0.08Npa） 每 1ml 相当于原生药材 4g， 用热水 溶解， 加盐酸酸化， 搅拌， 静置， 滤过得滤液， 冷藏静置 48 小时， 滤过， 加碱碱化， 搅拌， 静置， 滤过得滤液， 将所得药液经陶瓷膜过滤器进行分子截留滤过， 陶瓷膜滤器孔径为 0.1m 0.2m， 所得滤液即为精滤液 ； 将精滤液通过已处理好的离子型树脂柱， 水洗除去杂质， 再 用 90% 乙醇洗脱， 收集洗脱液， 减压浓缩 ； 再喷雾干燥得干粉提取物。干粉提取物加乙醇超 声提取二次， 合并提取液， 提取液通过葡聚糖凝胶柱， 收集生物碱部位， 低温冷冻， 析出生物 碱晶体粗品 ； 生物碱晶体。
15、粗品加乙醇溶解， 静置， 冷冻， 得到白药子总生物碱纯品， 干燥， 粉 碎， 即得白药子总生物碱 ； 0036 实施例 3 0037 白药子总生物碱提取方法 ： 0038 取处方量的白药子加乙醇 5 倍量进行逆流动态加热萃取， 每次 4 小时， 收集提取 液， 滤过， 滤液减压浓缩至 （温度 70， 真空数 -0.08Npa） 每 1ml 相当于原生药材 5g， 用热水 溶解， 加硫酸酸化， 搅拌， 静置， 滤过得滤液， 冷藏静置 48 小时， 滤过， 加碱碱化， 搅拌， 静置， 滤过得滤液， 将所得药液经陶瓷膜过滤器进行分子截留滤过， 陶瓷膜滤器孔径为 0.2m 0.3m， 所得滤液即为精滤。
16、液 ； 将精滤液通过已处理好的离子型树脂柱， 水洗除去杂质， 再 用乙醇洗脱， 收集洗脱液， 减压浓缩 ； 再喷雾干燥得干粉提取物。干粉提取物加乙醇超声提 取二次， 合并提取液， 提取液通过葡聚糖凝胶柱， 收集生物碱部位， 低温冷冻， 析出生物碱晶 体粗品 ； 生物碱晶体粗品加乙醇溶解， 静置， 冷冻， 得到白药子总生物碱纯品， 干燥， 粉碎， 即 说 明 书 CN 102872015 A 6 4/6 页 7 得白药子总生物碱 ； 0039 实施例 4 0040 白药子总生物碱提取方法 ： 0041 取处方量的白药子加乙醇 6 倍量进行逆流动态加热萃取， 每次 3 小时， 收集提取 液， 滤过。
17、， 滤液减压浓缩至 （温度 70， 真空数 -0.08Npa） 每 1ml 相当于原生药材 5g， 用热 水溶解， 加硫酸酸化， 搅拌， 静置， 滤过得滤液， 冷藏静置 48 小时， 滤过， 加碱碱化， 搅拌， 静 置， 离心滤过得滤液， 将所得药液经陶瓷膜过滤器进行分子截留滤过， 陶瓷膜滤器孔径为 0.1m 0.3m， 所得滤液即为精滤液 ； 将精滤液用正丁醇萃取， 合并萃取液， 减压浓缩 ； 再喷雾干燥得干粉提取物。 干粉提取物加乙醇超声提取二次， 合并提取液， 提取液通过葡聚 糖凝胶柱， 收集生物碱部位， 低温冷冻， 析出生物碱晶体粗品 ； 生物碱晶体粗品加乙醇溶解， 静置， 冷冻， 得。
18、到白药子总生物碱纯品， 干燥， 粉碎， 即得白药子总生物碱 ； 0042 实施例 5 0043 白药子总生物碱提取方法 ： 0044 取处方量的白药子加乙醇 6 倍量进行逆流动态加热萃取， 每次 3 小时， 收集提取 液， 滤过， 滤液减压浓缩至 （温度 70， 真空数 -0.08Npa） 每 1ml 相当于原生药材 5g， 用热水 溶解， 加盐酸酸化， 搅拌， 静置， 滤过得滤液， 冷藏静置 48 小时， 滤过， 加碱碱化， 搅拌， 静置， 滤过得滤液， 将所得药液经陶瓷膜过滤器进行分子截留滤过， 陶瓷膜滤器孔径为 0.1m 0.3m， 所得滤液即为精滤液 ； 将精滤液用正丁醇萃取， 合并萃。
19、取液， 减压浓缩 ； 再喷雾干 燥得干粉提取物。干粉提取物加乙醇超声提取二次， 合并提取液， 提取液通过葡聚糖凝胶 柱， 收集生物碱部位， 低温冷冻， 析出生物碱晶体粗品 ； 生物碱晶体粗品加乙醇溶解， 静置， 冷冻， 得到白药子总生物碱纯品， 干燥， 粉碎， 即得白药子总生物碱 ； 0045 实施例 6 0046 白药子总生物碱提取方法 ： 0047 取处方量的白药子加 85% 乙醇 8 倍量进行逆流动态加热萃取， 每次 3 小时， 收集 提取液， 滤过， 滤液减压浓缩至 （温度 70， 真空数 -0.08Npa） 每 1ml 相当于原生药材 4g， 用热水溶解， 加盐酸酸化， 搅拌， 静置。
20、， 滤过得滤液， 冷藏静置 48 小时， 滤过， 加碱碱化， 搅 拌， 静置， 滤过得滤液， 将所得药液经陶瓷膜过滤器进行分子截留滤过， 陶瓷膜滤器孔径为 0.1m 0.3m， 所得滤液即为精滤液 ； 将精滤液通过已处理好的离子型树脂柱， 水洗除 去杂质， 再用乙醇洗脱， 收集洗脱液， 减压浓缩 ； 再喷雾干燥得干粉提取物。干粉提取物加 乙醇超声提取二次， 合并提取液， 提取液通过葡聚糖凝胶柱， 收集生物碱部位， 低温冷冻， 析 出生物碱晶体粗品 ； 生物碱晶体粗品加乙醇溶解， 静置， 冷冻， 得到白药子总生物碱纯品， 干 燥， 粉碎， 即得白药子总生物碱 ； 0048 实施例 7 0049 。
21、白药子总生物碱提取方法 ： 0050 取处方量的白药子加 75% 乙醇 8 倍量进行逆流动态加热萃取， 每次 4 小时， 收集 提取液， 滤过， 滤液减压浓缩至 （温度 70， 真空数 -0.08Npa） 每 1ml 相当于原生药材 5g， 用热水溶解， 加盐酸酸化， 搅拌， 静置， 滤过得滤液， 冷藏静置 48 小时， 滤过， 加碱碱化， 搅 拌， 静置， 滤过得滤液， 将所得药液经陶瓷膜过滤器进行分子截留滤过， 陶瓷膜滤器孔径为 0.1m 0.3m， 所得滤液即为精滤液 ； 将精滤液通过已处理好的离子型树脂柱， 水洗除 说 明 书 CN 102872015 A 7 5/6 页 8 去杂质，。
22、 再用95%乙醇洗脱， 收集洗脱液， 减压浓缩 ； 再喷雾干燥得干粉提取物。 干粉提取物 加乙醇超声提取二次， 合并提取液， 提取液通过葡聚糖凝胶柱， 收集生物碱部位， 低温冷冻， 析出生物碱晶体粗品 ； 生物碱晶体粗品加乙醇溶解， 静置， 冷冻， 得到白药子总生物碱纯品， 干燥， 粉碎， 即得白药子总生物碱 ； 0051 对比试验 1 ： 0052 昆明种小鼠 120 只， 雌雄各半， 分为 6 组 ： 正常对照组、 模型对照组、 白药子总生物 碱高、 中、 低剂量组， 鲨肝醇组。以上 6 组动物， 除正常对照组动物外， 其余 5 组动物均在给 药前 1 天用 60Co- 射线照射一次， 剂。
23、量为 4Gy， 24 小时后再随即分为 5 组， 除正常对照组和 模型对照组灌胃蒸馏水 0.4ml/ 只， 其余各组按不同剂量灌胃给药， 每日 1 次， 连续 7 日。末 次给药24小时， 拔除小鼠眼球取血， 检测血中白细胞总数(WBC)、 红细胞总数(RBC)、 血小板 数 (PLT)， 结果见表 1。 0053 表 1 白药子总生物碱对 60Co- 照射损伤小鼠血液学的影响 （XSD） 0054 0055 注 ： 模型组与正常对照组比较， P 0.01 0056 药物治疗组与模型组比较， *P 0.05， *P 0.01 0057 表 1 结果显示， 白药子总生物碱各剂量与模型对照组比较有。
24、极显著行或显著性差 异， 即白药子总生物碱对 60Co- 照射所致外用血白细胞减少有明显保护作用， 大、 中剂量 组疗效明显优于阳性对照药鲨肝醇组。 0058 对比试验 2 ： 0059 昆明种小鼠120只， 雌雄各半， 随机分为6组， 即正常对照组， 环磷酰胺模型对照组 （Cy） ， 白药子总生物碱 （Cy+） 高、 中、 低剂量组， Cy+ 鲨肝醇组。除正常对照组外， 其余各组小 说 明 书 CN 102872015 A 8 6/6 页 9 鼠均腹腔注射环磷酰胺 （Cy） 150mg/kg 造成白细胞减少症模型。与注射 Cy 当日开始按正常 组和 Cy 模型对照组分别按 20ml/kg 给。
25、予蒸馏水。其余各组按不同剂量分别给予不同药物， 每日 1 次， 灌胃给药， 连续 10 天。末次给药后 24 小时后， 摘眼球取血， 并检测血中白细胞总 数 WBC， 结果见表 2. 0060 表 2 白药子总生物碱对环磷酰胺致小鼠白细胞减少的影响 （XSD） 0061 组别动物数 ( 只 )剂量 （mg/kg）WBC（109/L） 正常组20-8.021.78 Cy 模型组20-0.660.11 Cy+ 高剂量组200.601.030.88 Cy+ 中剂量组200.304.622.91* Cy+ 低剂量组200.151.591.74* Cy 鲨肝醇组201002.671.44* 0062 注 ： 模型组与正常对照组比较， P 0.01 0063 药物治疗组与模型组比较， *P 0.05， *P 0.01 0064 表 2 结果显示， 白药子总生物碱各剂量与模型对照组比较有极显著性或显著性差 异， 即白药子总生物碱对环磷酰胺所致外周血白细胞减少有明显保护作用。 0065 通过以上药理实验可以证明， 本发明的白药子总生物碱， 对骨髓损伤及白细胞减 少有明显的治疗作用。 说 明 书 CN 102872015 A 9 。