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1、(10)申请公布号 CN 102836179 A (43)申请公布日 2012.12.26 CN 102836179 A *CN102836179A* (21)申请号 201210349880.4 (22)申请日 2012.09.19 A61K 36/00(2006.01) A61P 39/06(2006.01) A61P 9/00(2006.01) A61P 35/00(2006.01) (71)申请人 四川农业大学 地址 611130 四川省成都市温江区惠民路 211 号四川农业大学生态林业研究所 (72)发明人 武启骞 杨万勤 吴福忠 (74)专利代理机构 成都赛恩斯知识产权代理事 务所。
2、 ( 普通合伙 ) 51212 代理人 高利丹 (54) 发明名称 一种植物中多酚类物质的提取方法 (57) 摘要 本发明涉及一种从植物中提取多酚类物质 的方法。特点在于提取步骤包括 ：（1） 配制提取 剂， 即每升浓度为 30-70% 的丙酮溶液中加入 6g NaCl， 同时用稀 HCl 调节溶液的 pH 值为 2.5-3.5 ； （2） 超声波提取 ： 按料液比为1g ： 10-50ml的比例， 向原料中加入步骤 （1） 所述的提取剂， 采用超声 波提取 10-120min， 提取温度为 30-60 ； 离心分 离 ；（3） 微波提取 ： 将步骤 （2） 中离心分离后的液 体放入微波炉中，。
3、 于 120-700W 功率下， 微波辐射 1-3min。本发明将超声波提取方法与微波提取方 法结合， 优化了提取剂的配方， 使得提取剂更适合 植物多酚的提取， 增大了植物多酚的提取率， 找到 了一种更为简单、 高效、 成本低廉的提取植物中多 酚类物质方法。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 4 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书 1 页 说明书 4 页 1/1 页 2 1. 一种植物中多酚类物质的提取方法， 主要包括清洗、 干燥、 粉碎、 提取和测定步骤， 其 特征在于， 所述提取步骤包括 ： （1） 配制提取剂 ： 每升浓度为 30。
4、-70% 的丙酮溶液中加入 6g NaCl， 同时用稀 HCl 调节溶 液的 pH 值为 2.5-3.5 ； （2） 超声波提取 ： 按料液比为 1g ： 10-50ml 的比例加入步骤 （1） 中所述的提取剂， 使植 物样品被完全浸透， 振荡， 然后转移至超声波清洗仪中， 采用超声波提取 10-120min， 超声功 率为 40KHz， 提取温度为 30-60 ； 离心分离 ； （3） 微波提取 ： 将步骤 （2） 中离心分离后的液体放入微波炉中， 于 120-700W 功率下， 微 波辐射 1-3min。 2. 根据权利要求 1 所述的一种植物中多酚类物质的提取方法， 其特征在于， 配制提。
5、取 剂时， 丙酮浓度为 50%。 3.根据权利要求1或2所述的一种植物中多酚类物质的提取方法， 其特征在于， 按料液 比为 1g ： 40ml 的比例加入提取剂， 于 50温度下， 在超声波设备内提取 60min， 超声波频率 为 40KHz。 4.根据权利要求1或2所述的一种植物中多酚类物质的提取方法， 其特征在于， 微波提 取步骤中， 微波功率为 600W， 微波辐射 2min。 5. 根据权利要求 3 所述的一种植物中多酚类物质的提取方法， 其特征在于， 微波提取 步骤中， 微波功率为 600W， 微波辐射 2min。 权 利 要 求 书 CN 102836179 A 2 1/4 页 3。
6、 一种植物中多酚类物质的提取方法 技术领域 0001 本发明涉及一种从植物中提取多酚类物质的方法， 具体涉及采用超声波与微波综 合提取法从植物中提取多酚类物质。 背景技术 0002 植物多酚是一类广泛存在于植物体内的多酚类物质， 是植物的次生代谢产物， 主 要存在于植物的皮、 根、 茎、 叶、 果实中， 其含量仅次于纤维素、 半纤维素和木质素。 植物多酚 具有清除机体内自由基、 抗脂质氧化、 延缓机体衰老、 预防心血管疾病、 防癌、 抗辐射等生物 活性功能。因此， 开发和利用植物多酚在现实生活中具有重要意义。 0003 目前提取植物中多酚类物质的方法已有很多， 但提取工艺相对繁锁。 如水浴法、。
7、 溶 剂萃取法、 超声波浸提法、 微波浸提法等。 0004 水浴法是将待测样品粉碎后， 称取一定质量的粉末。加入适量的有机溶剂， 在 45-50的水浴条件下加热， 通常加热时间在8-12小时， 最后得到待测液。 此种方法主要 受水浴时间所限。因为酚类物质很不稳定， 长时间的加热提取会使得相当一部分的酚类物 质损失， 对最后结果造成影响。 0005 溶剂萃取法是目前国内使用最广泛的多酚提取方法之一， 该法常用的溶剂有甲 醇、 乙醇、 丙酮。以体积分数为 60%-70% 的乙醇最为常用。虽然溶剂萃取法操作简单， 但其 使用的有机试剂易燃， 且部分有毒， 对安全生产十分不利。 0006 近几年来， 。
8、利用超声波提取植物中的活性物质取得了良好的效果， 提取溶剂主要 采用乙醇等有机溶剂， 料液比一般为 1 ： 20 左右， 提取时间一般多在 24-35min 之间。 0007 微波浸提法也是最近几年研发的一种新方法， 提取溶剂均采用乙醇。与目前常规 使用的溶剂萃取方法相比， 具有节能、 省工、 省时、 对环境无污染等优点， 是一种可大力提倡 的应用技术。 0008 结合超声波与微波提取法的优点， 近年来出现了将超声波与微波联合用于植物多 酚类物质的提取。如申请号为 CN201110164647.4（西北师范大学， 从油橄榄加工废渣中同 时提取果渣油和多酚的方法） 的中国发明专利申请， 采用微波。
9、 （100-700W、 5-30min） 与超声 波 （100-300W、 20-60min、 20-60） 联用技术， 溶剂为乙醇或丙酮与非极性有机溶剂。 又如申 请号为 CN200910143440.1 （江南大学， 由亚麻籽或壳中提取亚麻木酚素的方法、 所得提取物 及其用途） 的中国发明专利申请， 采用超声波 （50-300W/g、 ） 与微波 （150-600W/g、 50-1000W/ s） 联用技术， 溶剂为乙醇。这两件发明所采用的方法由于只是单一的选择了非极性有机溶 剂作为提取剂， 提取率相对较低， 提取效果不稳定， 不能将样品中多酚类物质最大限度的提 取出来。 发明内容 000。
10、9 本发明要解决的技术问题是针对现有技术的不足， 提供一种简单、 高效、 成本低廉 的从植物中提取多酚类物质的方法。 说 明 书 CN 102836179 A 3 2/4 页 4 0010 本发明的目的通过以下技术方案实现 ： 0011 本发明所述的一种植物中多酚类物质的提取方法， 主要包括清洗、 干燥、 粉碎、 提 取和测定步骤， 其特征在于， 所述提取步骤包括 ： 0012 （1） 配制提取剂 ： 每升浓度为 30-70% 的丙酮溶液中加入 6g NaCl， 同时用稀 HCl 调 节溶液的 pH 值为 2.5-3.5 ； 0013 （2）超声波提取 ： 按料液比为 1g ： 10-50ml。
11、 的比例， 向原料中加入步骤 （1）所述 的提取剂， 使植物样品被完全浸透， 振荡， 然后转移至超声波清洗仪中， 采用超声波提取 10-120min， 超声功率为 40KHz， 提取温度为 30-60 ； 离心分离 ； 0014 （3） 微波提取 ： 将步骤 （2） 中离心分离后的液体放入微波炉中， 于 120-700W 功率 下， 微波辐射 1-3min。 0015 配制提取剂时， 最佳的丙酮浓度为 50%。 0016 超声波提取步骤中， 最佳的料液比为 1g ： 40ml， 提取温度为 50， 在超声波设备内 提取 60min， 超声波频率为 40KHz。 0017 微波提取步骤中， 优选。
12、的微波功率为 600W， 微波辐射 2min。 0018 本发明将现有超声波提取方法与微波提取方法结合， 并对提取工艺进行了优化， 优化了提取剂的配方， 使得提取剂更适合植物多酚的提取， 增大了植物多酚的提取率， 找到 了一种更为简单、 高效、 成本低廉的提取植物中多酚类物质方法。 0019 通过试验对比可以发现， 本发明所采用的方法的提取效率是微波提取法提取效率 的 1.023 倍， 效率提高了 2.35% ； 是超声波提取法提取效率的 1.017 倍， 效率提高了 1.69% ； 是水浴加热法提取效率的1.472倍， 效率提高了47.24%。 同时， 发明人员以4个树种叶片为 样品， 对酸。
13、性丙酮 -NaCl 溶液的作用进行了检验。对比实验的提取剂为 50% 的丙酮溶液， 检 验实验的提取剂为酸性丙酮 -NaCl 溶液， 二者实验条件相同。实验结果数据如表 1 所示， 结 果表明， 使用酸性丙酮 -NaCl 溶液后， 多酚类物质的提取率均有提高。 0020 表 1 实验条件相同情况下丙酮与酸性丙酮 -NaCl 溶剂提取率对比 0021 样品 丙酮提取剂的提取率 酸性丙酮 -NaCl 溶剂的提取率 提取效率提高比例 冷杉 4.74% 4.80% 1.27% 红桦 1.44% 1.49% 3.47% 红杉 4.45% 4.50% 1.12% 方枝柏 3.17% 3.21% 1.26%。
14、 0022 实施例一 0023 冷杉凋落物采自四川省阿坝州理县境内的毕棚沟风景区， 自然阴干后粉碎， 过 60 目筛备用。 0024 准确称取 1.0g 冷杉样品于三角瓶中， 加入 10ml 浓度为 30% 的丙酮溶剂， 同时加入 6gNaCl， 并用稀 HCl 调整溶液 pH 为 2.5。振荡 10min 后， 于 30下超声波提取 120min， 超声 波频率为 40KHz。离心 5min 后， 再将离心分离后的液体置于容器中， 放至微波炉， 120W 微波 说 明 书 CN 102836179 A 4 3/4 页 5 处理3min。 然后将上清液转移到50ml容量瓶中定容， 得待测液， 。
15、测其吸光值， 计算多酚类物 质的总的提取率为 4.54%。 0025 实施例二 0026 冷杉凋落物采自四川省阿坝州理县境内的毕棚沟风景区， 自然阴干后粉碎， 过 60 目筛备用。 0027 准确称取 1.0g 冷杉样品于三角瓶中， 加入 50ml 浓度为 40% 的丙酮溶剂， 同时加入 6gNaCl， 并用稀 HCl 调整溶液 pH 为 3.0。振荡 10min 后， 于 40下超声波提取 90min， 超声 波频率为 40KHz。离心 5min 后， 再将离心分离后的液体置于容器中， 放至微波炉中， 400W 微 波处理2min。 然后将上清液转移到50ml容量瓶中定容， 得待测液， 测其。
16、吸光值， 计算多酚类 物质的总的提取率为 4.61%。 0028 实施例三 0029 冷杉凋落物采自四川省阿坝州理县境内的毕棚沟风景区， 自然阴干后粉碎， 过 60 目筛备用。 0030 准确称取 1.0g 冷杉样品于三角瓶中， 加入 40ml 浓度为 50% 的丙酮溶剂， 同时加入 6gNaCl， 并用稀 HCl 调整溶液 pH 为 3.0。振荡 10min 后， 于 50下超声波提取 60min， 超声 波频率为 40KHz。离心 5min 后， 再将离心分离后的液体置于容器中， 并放至微波炉中， 600W 微波处理 2min， 将上清液转移到 50ml 容量瓶中定容， 得待测液， 测其吸。
17、光值， 计算多酚类物 质的总的提取率为 4.80%。 0031 实施例四 0032 冷杉凋落物采自四川省阿坝州理县境内的毕棚沟风景区， 自然阴干后粉碎， 过 60 目筛备用。 0033 准确称取 1.0g 冷杉样品于三角瓶中， 加入 20ml 浓度为 70% 的丙酮溶剂， 同时加入 6gNaCl， 并用稀 HCl 调整溶液 pH 为 3.5。振荡 10min 后， 于 60下超声波提取 10min， 超声 波频率为 40KHz。离心 5min 后， 再将离心分离后的液体置于容器中， 并放至微波炉中， 700W 微波处理1min。 然后将上清液转移到50ml容量瓶中定容， 得待测液， 测其吸光值。
18、， 计算多酚 类物质的总的提取率为 4.57%。 0034 实施例五 0035 红桦凋落物采自四川省阿坝州理县境内的毕棚沟风景区， 自然阴干后粉碎， 过 80 目筛备用。 0036 准确称取 1.0g 红桦样品于三角瓶中， 加入 40ml 浓度为 50% 的丙酮溶剂， 同时加入 6gNaCl， 并用稀 HCl 调整溶液 pH 为 3.0。振荡 10min 后， 于 50下超声波提取 30min， 超声 波频率为 40KHz。离心 5min 后， 再将离心分离后的液体置于容器中， 并放至微波炉中， 600W 微波处理 2min， 将上清液转移到 50ml 容量瓶中定容， 得待测液， 测其吸光值，。
19、 计算多酚类物 质的总的提取率为 1.47%。 0037 实施例六 0038 红桦凋落物采自四川省阿坝州理县境内的毕棚沟风景区， 自然阴干后粉碎， 过 80 目筛备用。 0039 准确称取 1.0g 红桦样品于三角瓶中， 加入 40ml 浓度为 50% 的丙酮溶剂， 同时加入 6gNaCl， 并用稀 HCl 调整溶液 pH 为 3.0。振荡 10min 后， 于 50下超声波提取 60min， 超声 说 明 书 CN 102836179 A 5 4/4 页 6 波频率为 40KHz。离心 5min 后， 再将离心分离后的液体置于容器中， 并放至微波炉中， 600W 微波处理 2min， 将上清。
20、液转移到 50ml 容量瓶中定容， 得待测液， 测其吸光值， 计算多酚类物 质的总的提取率为 1.49%。 0040 实施例七 0041 四川红杉凋落物采自四川省阿坝州理县境内的毕棚沟风景区， 自然阴干后粉碎， 过 60 目筛备用。 0042 准确称取 1.0g 四川红杉样品于三角瓶中， 加入 40ml 浓度为 50% 的丙酮溶剂， 同时 加入6g NaCl， 并用稀HCl调整溶液pH为3.5。 振荡10min后， 于50下超声波提取60min， 超声波频率为 40KHz。离心 5min 后， 再将离心分离后的液体置于容器中， 并放至微波炉中， 600W微波处理2min， 将上清液转移到50m。
21、l容量瓶中定容， 得待测液， 测其吸光值， 计算多酚 类物质的总的提取率为 4.50%。 0043 实施例八 0044 方枝柏凋落物采自四川省阿坝州理县境内的毕棚沟风景区， 自然阴干后粉碎， 过 60 目筛备用。 0045 准确称取 1.0g 方枝柏样品于三角瓶中， 加入 40ml 浓度为 50% 的丙酮溶剂， 同时加 入 6gNaCl， 并用稀 HCl 调整溶液 pH 为 2.5。振荡 10min 后， 于 50下超声波提取 60min， 超声波频率为 40KHz。离心 5min 后， 再将离心分离后的液体置于容器中， 并放至微波炉中， 600W微波处理2min， 将上清液转移到50ml容量瓶中定容， 得待测液， 测其吸光值， 计算多酚 类物质的总的提取率为 3.21%。 说 明 书 CN 102836179 A 6 。