线粒体功能提高剂.pdf

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1、(10)申请公布号 CN 102740865 A (43)申请公布日 2012.10.17 CN 102740865 A *CN102740865A* (21)申请号 201180008270.1 (22)申请日 2011.02.02 2010-022222 2010.02.03 JP A61K 35/20(2006.01) A23K 1/16(2006.01) A23L 1/30(2006.01) A61P 3/04(2006.01) A61P 3/10(2006.01) A61P 43/00(2006.01) (71)申请人 花王株式会社 地址 日本东京都 (72)发明人 原水聪史 太田宣。

2、康 村瀬孝利 (74)专利代理机构 北京尚诚知识产权代理有限 公司 11322 代理人 龙淳 (54) 发明名称 线粒体功能提高剂 (57) 摘要 本发明涉及一种以脂肪球皮膜成分作为有效 成分的线粒体功能提高剂、 能量消耗促进剂或者 脂质燃烧促进剂。 (30)优先权数据 (85)PCT申请进入国家阶段日 2012.08.03 (86)PCT申请的申请数据 PCT/JP2011/052099 2011.02.02 (87)PCT申请的公布数据 WO2011/096414 JA 2011.08.11 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 9 页 序列表 2 页 (19)中华人民共和国。

3、国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书 1 页 说明书 9 页 序列表 2 页 1/1 页 2 1. 一种线粒体功能提高剂， 其中， 所述线粒体功能提高剂以脂肪球皮膜成分作为有效成分。 2. 一种能量消耗促进剂， 其中， 所述能量消耗促进剂以脂肪球皮膜成分作为有效成分。 3. 一种脂质燃烧促进剂， 其中， 所述脂质燃烧促进剂以脂肪球皮膜成分作为有效成分。 4. 一种线粒体功能提高方法， 其中， 所述线粒体功能提高方法将脂肪球皮膜成分进行给药或者摄取。 5. 一种能量消耗促进方法， 其中， 所述能量消耗促进方法将脂肪球皮膜成分进行给药或者摄取。 6. 一种脂质燃烧促进方法， 其中， 所。

4、述脂质燃烧促进方法将脂肪球皮膜成分进行给药或者摄取。 7. 脂肪球皮膜成分在用于制造线粒体功能提高剂中的用途。 8. 脂肪球皮膜成分在用于制造能量消耗促进剂中的用途。 9. 脂肪球皮膜成分在用于制造脂质燃烧促进剂中的用途。 10. 一种用于提高线粒体功能的脂肪球皮膜成分。 11. 一种用于促进能量消耗的脂肪球皮膜成分。 12. 一种用于促进脂质燃烧的脂肪球皮膜成分。 权 利 要 求 书 CN 102740865 A 2 1/9 页 3 线粒体功能提高剂 技术领域 0001 本发明涉及线粒体功能提高剂、 能量消耗促进剂以及脂质燃烧促进剂。 背景技术 0002 我们的生命活动是由与被称为代谢的各种。

5、物理 化学过程的连锁所产生的三磷酸 腺苷 （ATP） 来支撑。线粒体负有能量代谢中心的作用， 通过脂肪酸的 氧化和由电子传递 体系的氧化磷酸化来供给 ATP。 0003 反映生物体内的能量消耗的氧消耗的特征为， 在骨骼肌、 肝脏、 或者心脏中较多， 这与线粒体在心肌和肝脏、 骨骼肌中大量分布的现象一致， 由此可知线粒体在能量代谢中 的作用很大。据称生物体内的氧消耗的 90% 以上是在线粒体进行的。 0004 近些年来， 逐渐知道线粒体的功能异常与生活习惯病及老化相关疾病密切相关。 已知由于老化产生的能量代谢的降低与线粒体 DNA 的变异和损伤等的线粒体功能的降低 相关 （非专利文献 1） 。 。

6、0005 线粒体功能的降低经由能量代谢的降低， 引起能量摄取和能量消耗的不平衡， 从 而成为生活习惯病的原因 （非专利文献 2） 。因此， 认为维持 提高线粒体功能并提高能量代 谢， 这与生活习惯病的预防改善发病风险的降低相关， 有助于提高生活质量 （QOL） 。 0006 另一方面， 已知运动是增加肌肉的线粒体量的方法之一 （非专利文献 3） 。因此， 认 为进行运动是通过增加肌肉中的线粒体， 从而增加在生物体中的能量消耗。 然而， 即使是在 广泛认识到运动的重要性的现代， 在现实中也难以定期进行运动， 因此希望能有更加有效 地促进能量代谢、 增加能量消耗的方法。 0007 从此观点出发， 。

7、进行提高线粒体功能、 能量代谢的成分的探索。 0008 例如， 作为促进能量代谢的成分， 报告有具有交感神经活化作用的咖啡因和辣椒 素等 （非专利文献 4、 5） 。然而， 咖啡因和辣椒素从安全性和刺激性的观点等出发， 其实用性 被限定而不能满足要求。作为其它的具有能量代谢促进作用的例子， 可以列举含有甜椒素 （capsinoids） 的组合物 （专利文献 1） 和黄烷类或者黄烷酮类 （专利文献 2） 。 0009 另外， 近些年来， 还报告有辣味少、 低刺激性的作为辣椒素类近缘体的辣椒素酯的 能量代谢促进作用 （非专利文献 6） 。 0010 进而， 发现茶儿茶素的抑制伴随老化的能量代谢降低。

8、， 线粒体功能降低的作用 （专 利文献3） 。 另外， 作为具有线粒体功能活化作用的例子， 可以列举苯并咪唑衍生物或者其盐 （专利文献 4） 、 1,2- 乙二醇或者其盐 （专利文献 5） 。 0011 然而， 提高能量代谢和线粒体功能的成分， 除这些以外， 基本不为所知。 0012 脂肪球皮膜成分是包覆从乳腺分泌的乳脂肪球的膜， 不仅具有将脂肪分散于乳 汁中的功能， 还具有作为新生动物的食物的多种生理功能。例如， 已知具有血中脂联素 （adiponectin） 增加和/或减少抑制效果 （专利文献6） 、 学习能力提高效果 （专利文献7） 、 唾 液酸粘蛋白的分泌促进效果等 （专利文献 8） 。

9、的生理功能。 0013 但是， 关于脂肪球皮膜成分对线粒体功能、 能量代谢所产生的影响， 至今完全不 说 明 书 CN 102740865 A 3 2/9 页 4 知。 0014 现有技术文献 0015 专利文献 0016 专利文献 1 ： 日本专利特开 2004-149494 号公报 0017 专利文献 2 ： 日本专利特开 2007-314446 号公报 0018 专利文献 3 ： 日本专利特开 2008-63318 号公报 0019 专利文献 4 ： 日本专利特开 2004-67629 号公报 0020 专利文献 5 ： 日本专利特开 2002-322058 号公报 0021 专利文献 。

10、6 ： 日本专利特开 2007-320901 号公报 0022 专利文献 7 ： 日本专利特开 2007-246404 号公报 0023 专利文献 8 ： 日本专利特开 2007-112793 号公报 0024 非专利文献 0025 非专利文献 1 ： 岩波讲座现代医学的基础 199912（2） ： 55-58. 0026 非专利文献 2 ： Ritz P.Diabetes Metab.2005 2:5S67-5S73. 0027 非专利文献 3 ： Holloszy JO.J.Physiol.Pharmacol.2008 59:5-18. 0028 非专利文献 4 ： Dulloo AG.A。

11、m J Clin Nutr.198949(1):44-50. 0029 非专利文献 5 ： Kawada T.Proc Soc Exp Biol Med.1986 183(2):250-6. 0030 非专利文献 6 ： Ohnuki K.Biosci Biotechnol Biochem.2001 65(12):2735-40. 发明内容 0031 本发明涉及下述 （1） （3） 。 0032 （1） 以脂肪球皮膜成分作为有效成分的线粒体功能提高剂。 0033 （2） 以脂肪球皮膜成分作为有效成分的能量消耗促进剂。 0034 （3） 以脂肪球皮膜成分作为有效成分的脂质燃烧促进剂。 具体实施方。

12、式 0035 本发明涉及提供以食用经验丰富的物质为来源， 安全性高， 在医药品、 医药部外 品、 食品或者饲料中有用的线粒体功能提高剂、 能量消耗促进剂、 脂质燃烧促进剂。 0036 本发明者们对线粒体功能提高、 能量消耗促进、 脂质燃烧促进的有效成分进行了 探索， 结果发现脂肪球皮膜成分具有线粒体功能提高效果、 能量消耗促进效果、 以及脂质燃 烧促进效果。 0037 本发明的线粒体功能提高剂、 能量消耗促进剂、 脂质燃烧促进剂， 其安全性高， 并 且具有优异的线粒体功能提高作用、 能量消耗促进作用、 脂质燃烧促进作用。因此， 作为用 于预防改善线粒体功能和能量代谢降低的、 用于在饮食品、 医。

13、药品、 医药部外品或者饲料 中作为有效成分来配合的素材有用。 0038 已知本发明的脂肪球皮膜成分定义为包覆乳中的脂肪球的膜和构成该膜的膜成 分混合物， 多含于酪乳 （buttermilk） 和奶油乳清 （butter serum） 等高含量含有乳复合脂质 的馏分中。乳脂肪球皮膜一般来说， 乳脂肪球皮膜的约 4045 质量 % 由蛋白质构成， 另外约 5055 质量 % 由脂质构成， 作为该蛋白质， 已知含有称为乳粘蛋白 （milk mucin） 的糖蛋白质 说 明 书 CN 102740865 A 4 3/9 页 5 （Mather IH,Biochim Biophys Acta.(1978。

14、)514:25-36.） 等， 另外， 作为该脂质， 大量含有甘 油三酯和磷脂质 （例如， 鞘磷脂质、 甘油磷脂质等） ， 此外还含有鞘糖脂质 （例如， 葡萄糖神经 酰胺、 神经节苷脂等） （Keenan TW， Applied Science Publishers.(1983)pp89-pp130.） 。 0039 作为本发明的脂肪球皮膜成分中所含的磷脂质， 除了鞘磷脂等的鞘磷脂质之外， 还可以列举磷脂酰胆碱和磷脂酰乙醇胺等甘油磷脂质。其中， 优选在脂肪球皮膜成分中含 有作为以来源于乳为特征的磷脂质的鞘磷脂。 0040 本发明的脂肪球皮膜成分中脂质的含量没有特别的限定， 以干燥物换算优选为 。

15、20100 质量 %， 进一步优选为 3590 质量 %， 更加优选为 5090 质量 %。 0041 本发明的脂肪球皮膜成分中磷脂质的含量没有特别限定， 以干燥物换算优选为 3100质量%， 进一步优选为10100质量%， 更加优选为1585质量%， 更进一步优选为2070 质量 %。 0042 脂肪球皮膜成分中各磷脂质的含量没有特别限定， 例如鞘磷脂在脂肪球皮膜成分 中的含量， 以干燥物换算优选为 150 质量 %， 进一步优选为 230 质量 %， 更加优选为 325 质量 %， 更进一步优选为 420 质量 %。 0043 作为本发明的脂肪球皮膜成分， 可以使用通过从乳原料等中用离心分。

16、离法或有机 溶剂提取法等各种脂肪球皮膜成分的调制法而得到的脂肪球皮膜成分。 进一步也可以使用 透析、 硫酸铵分馏、 凝胶过滤、 等电点沉淀、 离子交换色谱法、 溶剂分馏等方法进行精制而提 高纯度的脂肪球皮膜成分。 0044 作为本发明的脂肪球皮膜成分的乳原料， 可以列举牛乳和羊乳等， 在乳中， 来源于 牛乳的脂肪球皮膜成分由于食用经验丰富， 高纯度且价格便宜的产品业已上市， 因此特别 优选。 0045 另外， 在乳原料中， 除了生乳、 脱脂乳和加工乳等乳之外， 还包括乳制品， 作为乳制 品， 可以列举酪乳 （butter milk） 、 乳脂油 （butter oil） 、 奶油乳清 （but。

17、ter serum） 、 乳清蛋 白浓缩物 （whey protein concentrate,WPC） 等。 0046 该脂肪球皮膜成分的调制， 例如可以通过用醚或丙酮来提取乳或者乳清蛋白浓缩 物 （WPC） 等乳制品的方法 （特开平 3-47192 号公报） ； 或通过将酪乳调整到酸性范围内， 除去 进行等电点沉淀所生成的蛋白质， 用精密过滤膜处理上清， 然后将得到的浓缩液干燥的方 法 （日本专利第 3103218 号公报） 进行。 0047 另外， 也可以使用从奶油乳清中凝聚除去蛋白质之后将其过滤浓缩并干燥的方法 （特开 2007-89535） 等。如果根据该制法， 例如可以调制如下的脂。

18、肪球皮膜成分， 其在干燥 物中含有 20 重量 % 以上的来源于乳的复合脂质。另外， 脂肪球皮膜成分的形态没有特别限 定， 可以是液状、 半固体状或固体状、 粉状等任意形态， 这些形态可以单独使用也可以组合 2 种以上使用。 0048 另外， 作为脂肪球皮膜成分， 可以使用市售品。作为这样的市售品， 可以列举 MEGGLE JAPAN（株） 的 “BSCP” 、 雪印乳业 （株） 的 “Milk ceramide MC-5” 、（株） New Zealand Milk Products 的 “Phospholipid Concentrate” 等。 0049 另外， 因为脂肪球皮膜成分在从离心。

19、分离牛乳等而得到的奶油 （cream） 制造黄油 （butter） 粒时得到的酪乳中大量含有， 因此也可以直接使用酪乳。 同样， 因为脂肪球皮膜成 分在制造乳脂油时所产生的奶油乳清中也大量含有， 因此， 也可以直接使用奶油乳清。 说 明 书 CN 102740865 A 5 4/9 页 6 0050 如后面的实施例所示， 脂肪球皮膜成分具有线粒体功能提高作用、 能量消耗促进 作用以及脂质燃烧促进作用。 0051 因此， 脂肪球皮膜成分可以通过向包括人的动物进行给药或者摄取， 从而在用于 实现提高线粒体功能、 促进能量消耗、 以及促进脂质燃烧的方法中使用。 0052 线粒体存在于生物体内的大量细。

20、胞中， 作为特别重要的功能其负有通过氧化磷酸 化反应产生 ATP。即， 在本发明中线粒体功能是指从糖质和脂质等的营养素中， 获取细胞生 存 / 活动能量。另外， 因为认为线粒体功能异常与生活习惯病和老化相关疾病等密切相关， 因此， 本发明的脂肪球皮膜成分可以用于以肥胖和糖尿病为首的胰岛素抗性相关疾病、 老 龄化和不活动造成的虚弱和疲劳的预防和改善。 0053 另外， 本发明中能量消耗是指营养素 （能量源） 在生物体各组织中代谢， 转化为化 学能或者热能， 能量消耗量从该过程中所消耗的氧量算出， 是指个体水平的宏观的物理化 学能量产生量。即， 能量消耗促进作用是指增加如上述定义的能量消耗量的作用。

21、。另外， 脂 质燃烧是指脂肪酸在生物体各组织中代谢， 转化为化学能或者热能。 0054 脂质燃烧量是从其氧化的代谢过程中所消耗的氧量和排出的二氧化碳量， 通过例 如下述的 Peronnet 等的式 （i） 算出的值 （Peronnet 等， Can J Sport Sci.199116:23-29） ， 是指个体水平的来源于脂质的能量产生量。即， 脂质燃烧促进作用是指增加如上述定义的 脂质燃烧量的作用。 0055 脂质燃烧量 1.695（1-1.701 1.695 呼吸商） 氧消耗量 （i） 0056 （呼吸商二氧化碳排出量氧消耗量） 0057 另外， 脂肪球皮膜成分可以作为线粒体功能提高剂、。

22、 能量消耗促进剂、 脂质燃烧促 进剂 （以下称为 “线粒体功能提高剂等” ） 使用， 进一步可以在用于制造该线粒体功能提高剂 等中使用。 在该线粒体功能提高剂等中可以单独使用该脂肪球皮膜成分， 或者除此之外， 还 可以使用根据需要适当选择的载体等的在要配合的后述对象物中所接受的物质。另外， 该 制剂可以根据要配合的对象物通过常用方法来制造。 0058 本发明的线粒体功能提高剂等， 除了可以对人以及动物进行给药之外， 还可以作 为各种饮食品、 医药品、 医药部外品、 宠物食品等的有效成分配合使用。 作为食品， 可以应用 于以提高线粒体功能、 或者促进能量消耗以及生活习惯病的预防改善发病风险的降低。

23、 等生理功能为概念， 根据需要表达该宗旨的饮食品、 功能性食品、 病人用饮食品、 特定保健 用食品等中。 0059 将本发明的线粒体功能提高剂等作为医药品、 医药部外品的有效成分使用的情况 下的给药方式， 例如可以列举片剂、 胶囊剂、 颗粒剂、 散剂、 糖浆剂等经口给药 ； 或者注射剂、 栓剂、 吸入药、 经皮吸收剂、 外用剂等非经口给药。另外， 在调制这些各种剂型的制剂时， 可 以单独使用本发明的线粒体功能提高剂等， 或者适当组合其它药学上可接受的赋形剂、 粘 合剂、 增量剂、 崩解剂、 表面活性剂、 润滑剂、 分散剂、 缓冲剂、 保存剂、 矫味剂、 香料、 包膜剂、 载体、 稀释剂等使用。。

24、另外， 这些给药方式中优选的方式为经口给药， 在调制经口用液体制 剂的情况下， 可以加入矫味剂、 缓冲剂、 稳定剂等根据常用方法来制造。 0060 将本发明的线粒体功能提高剂等作为食品的有效成分使用的情况下， 作为该食品 的形态， 除了牛乳、 加工乳、 乳饮料、 酸奶、 清凉饮料水、 茶类饮料、 咖啡类饮料、 果汁饮料、 碳 酸饮料、 果汁、 果冻 （jelly） 、 威化饼、 饼干、 面包、 面、 香肠等饮食品和营养食品等各种食品 说 明 书 CN 102740865 A 6 5/9 页 7 之外， 进一步还可以列举与上述经口给药制剂相同的形态 （片剂、 胶囊剂、 糖浆剂等） 的营养 补充用。

25、组合物。 0061 在调制各种形态的食品时， 本发明的线粒体功能提高剂等可以单独使用， 或者也 可以适当组合其它的食品材料或溶剂、 软化剂、 油、 乳化剂、 防腐剂、 香料、 稳定剂、 着色剂、 抗氧化剂、 保湿剂、 增粘剂等使用。 0062 另外， 在将本发明的线粒体功能提高剂等作为饲料的有效成分使用的情况下， 可 以大范围用于所有家畜的饲料， 例如， 用于牛、 猪、 鸡、 羊、 马、 山羊等的家畜用饲料 ； 用于兔 子、 大鼠、 小鼠等的小动物用饲料 ； 用于金枪鱼、 鳗鱼、 鲷鱼、 幼年黄鰤鱼、 虾等的鱼类和贝类 用饲料 ； 用于狗、 猫、 小鸟、 松鼠等的宠物食品等。 0063 在饲料。

26、中除了本发明的线粒体功能提高剂等之外， 还可以适当配合肉类、 蛋白质、 谷物类、 糠类、 酒糟类、 糖类、 蔬菜、 维生素类、 矿物质类等通常使用的饲料原料 ； 或者溶剂、 软化剂、 油、 乳化剂、 防腐剂、 香料、 稳定剂、 着色剂、 抗氧化剂、 保湿剂、 增粘剂等， 可以按照 常用方法来制造该饲料。 0064 本发明的线粒体功能提高剂等中除了脂肪球皮膜成分之外， 还可以并用根据需要 而适当选择的其它药效成分。 0065 相对于含有本发明的线粒体功能提高剂等的饮料， 例如乳饮料、 清凉饮料水、 茶类 饮料等， 脂肪球皮膜成分的配合量为， 脂肪球皮膜成分 （干燥物换算） 优选为 0.0015.。

27、0 质 量 %， 进一步优选为 0.013.0 质量 %， 特别优选为 0.12.0 质量 %。 0066 在含有本发明的线粒体功能提高剂等的饮料以外的食品或饲料、 或者医药品， 例 如片剂、 颗粒剂、 胶囊剂等经口用固体制剂 ； 内服液剂、 糖浆剂等经口用液体制剂的情况下， 脂肪球皮膜成分 （干燥物换算） 优选为 0.0280 质量 %， 进一步优选为 0.275 质量 %， 特别优 选为 2.050 质量 %。另外， 脂肪球皮膜成分不限定其存在状态， 可以为溶解状态， 也可以为 分散状态。 0067 本发明的线粒体功能提高剂等的摄取量根据其剂型和用途而不同， 作为上述脂肪 球皮膜成分 （干。

28、燥物换算） ， 对于成人而言， 优选每 1 天为 1010000mg/60kg 体重， 特别优选 为 1005000mg/60kg 体重， 更加优选为 5005000mg/60kg 体重。另外， 线粒体功能提高剂等 可以根据任意的给药摄取计划来进行给药， 优选分 1 天 1 次 数次进行给药摄取。 0068 本发明的线粒体功能提高剂等没有特别限定， 优选在日常活动时， 例如在做家务 或者工作中、 上班上学等时进行给药或者摄取。另外， 上述制剂优选 1 周内给药或者摄取 3 天以上， 特别优选 5 天以上， 更加优选每天给药或者摄取。另外， 给药或者摄取持续期间优 选为 2 周以上， 进一步优选。

29、为 4 周以上。 0069 作为给药或者摄取对象者， 只要是有需要者就没有特别限定， 本发明的线粒体功 能提高剂等可以实现线粒体的功能的提高、 能量消耗的促进、 脂质燃烧的促进， 因此， 特 别是对肥胖者、 糖尿病患者等的胰岛素抗性发病者、 高龄者、 其它线粒体功能障碍相关疾 病 （肌阵挛性癫痫发作伴破碎红纤维 （myoclonus epilepsy with ragged red fibers， MERRF） 、 Leigh 综合症、 线粒体糖尿病、 Leber 病、 Pearson 综合症、 Kearns-Sayre 综合症、 脑 卒中样症候群等的线粒体病、 脂肪肝疾病等） 患者进行给药或。

30、者摄取有效。 0070 实施例 0071 试验例 1 脂肪球皮膜成分的能量消耗以及脂质燃烧促进作用 说 明 书 CN 102740865 A 7 6/9 页 8 0072 按照下述方法进行对脂肪球皮膜成分的能量消耗以及脂质燃烧促进作用的评价。 作为脂肪球皮膜成分， 使用 MEGGLE JAPAN 公司制造的 BSCP。 0073 在 BSCP 中， 以干燥物换算， 含有蛋白质 49 质量 %（以下， 记为 “%” ） 以及脂质 39%， 作为鞘磷脂质， 含有鞘磷脂 3.7%， 作为鞘糖脂质， 含有葡萄糖神经酰胺 2.4%、 以及神经节苷 脂 0.4%。 0074 作为脂肪球皮膜成分中的蛋白质以。

31、及脂质的分析方法， 按照凯氏定氮法 （Kjeldahl method） （神立诚著， 最新食品分析法， 同文书院）以及罗兹 - 哥特里法 （Roese-Gottlieb method） （日本食品工业学会编， 食品分析法， 光琳） 进行。 0075 另外， 脂肪球皮膜成分中磷脂质的分析按照 LC-MS 法进行。即， 使用氯仿甲醇 （=2 ： 1） 从脂肪球皮膜成分中提取脂质馏分， 在氮气流下干燥之后， 溶解于己烷异丙醇 （=95 ： 5） 中。将该样品供给下述 LC-MS 分析， 进行磷脂质的定量。 0076 作为具体的分析方法， 使用以下条件。 0077 柱 ： Intertsil SIL 。

32、100A-3（GL Sciences 公司制造， 1.5mm150mm） 0078 柱温度 ： 40 0079 流速 ： 0.1mL/min 0080 检测器 ： Agilent， 1100LC/MSD 0081 流动相 ： A 液 （己烷 ： 异丙醇 ： 甲酸 =95 ： 5 ： 0.1） 以及 B 液 （己烷 ： 异丙醇 ： 50mM 甲酸 铵 =25 ： 65 ： 10） 的梯度分离 0082 将进行一周预饲养之后的 9 周龄 BALB/c 小鼠 （雄性， Oriental BioService） 以体 重相等的方式分成 2 组 （每组 8 只） 。之后， 对于对照食组， 用对照食物 （。

33、10% 脂质、 20% 干酪 素、 55.5% 土豆淀粉、 8.1% 纤维素、 0.2% 蛋氨酸、 2.2% 维生素 （商品名 ： 维生素混合 AIN-76， Oriental BioService） 、 4% 矿物质 （商品名 ： 矿物质混合 AIN-76， Oriental BioService） ） 进行喂食， 另外， 对于试验食组， 用含有脂肪球皮膜成分的试验食物 （10% 脂质、 20% 干酪素、 54.5% 土豆淀粉、 8.1% 纤维素、 0.2% 蛋氨酸、 2.2% 维生素、 4% 矿物质、 1% 脂肪球皮膜成分） 进 行喂食， 分别喂食 8 周， 在第 9 周进行呼气分析。 0。

34、083 将 小 鼠 移 入 呼 气 分 析 用 腔 室 中，进 行 48 小 时 环 境 驯 化 之 后，使 用 Arco-2000system（Alco Systems） 测定 24 小时各小鼠的氧消耗量以及呼吸商。在此， 氧 消耗量是指能量消耗量 （每 1min 的每 1kg 小鼠体重的氧消耗量 mL（mL/kg/min） ） ， 呼吸商 是指二氧化碳排出量和氧消耗量的比。从这些氧消耗量和呼吸商， 使用 Peronnet 的式子 （Peronnet F,and Massicotte D(1991)Can J Sport Sci 16:23-29.） ， 算出脂质燃烧量。 在 表 1 中表示。

35、 24 小时的平均能量消耗 （mL/kg/min） 、 平均脂质燃烧量 （mg/kg/min） 。 0084 表 1 0085 饲养 8 周后的 24 小时的平均氧消耗量 0086 氧消耗量 （mL/kg/min） 脂质燃烧量 （mg/kg/min） 对照组 44.80.8 4.10.5 试验食组 47.00.8* 6.50.9* 说 明 书 CN 102740865 A 8 7/9 页 9 0087 相对于对照组的统计学的显著差 ： *p0.05（t 检验） 0088 从表1可知， 在摄取含有脂肪球皮膜成分的试验食物的小鼠 （试验食组） 中， 与对照 食组相比较， 氧消耗量以及脂质燃烧量显著。

36、多。 因此， 本发明的脂肪球皮膜成分作为能量消 耗促进剂以及脂质燃烧促进剂或者作为这些材料的素材有用。 0089 试验例 2 脂肪球皮膜成分的线粒体功能提高效果 0090 按照下述方法进行对于脂肪球皮膜成分的能量消耗、 脂质燃烧促进、 线粒体功能 提高作用的评价。作为脂肪球皮膜成分， 使用 New Zealand Milk Products 公司制造的 Phospholipid Concentrate 700。 0091 在 Phospholipid Concentrate 700 中， 以干燥物换算， 含有脂质 85%， 鞘磷脂 16.5%。 0092 将进行 1 周预饲养之后的 9 周龄 。

37、BALB/c 小鼠 （雄性， Oriental BioService） 以体 重和游泳持久力 （按照后述方法， 使用小鼠用流水池 （京大松元式运动量测定流水槽） 测定 极限游泳时间） 相等的方式分成 2 组 （每组 8 只） 。 0093 分组之后， 作为对照组， 用对照食物 （10% 脂质、 20% 干酪素、 55.5% 土豆淀粉、 8.1% 纤维素、 0.2% 蛋氨酸、 2.2% 维生素 （商品名 ： 维生素混合 AIN-76， Oriental BioService） 、 4% 矿物质 （商品名 ： 矿物质混合 AIN-76， Oriental BioService） ） 进行喂食， 另。

38、外， 作为试验食 组， 用含有脂肪球皮膜成分的试验食物 （10% 脂质， 20% 干酪素、 54.5% 土豆淀粉、 8.1% 纤维 素、 0.2% 蛋氨酸、 2.2% 维生素、 4% 矿物质、 1% 脂肪球皮膜成分） 进行喂食， 分别喂食 13 周。 另外， 在此期间， 为了使小鼠 （对照食组、 试验食组） 习惯运动， 每周进行 2 次游泳训练 （6L/ min， 30min） 。测定在 7L/min 的流量下小鼠变得不能游泳的时刻作为极限游泳时间。 0094 在饲养 8 周之后进行呼气分析。将小鼠移入呼气分析用腔室中， 进行 48 小时环境 驯化之后， 使用 Arco-2000system（。

39、Alco Systems） 测定 24 小时呼气。从各小鼠的氧消耗 量 （能量消耗量） 和呼吸商， 使用 Peronnet 的式子 （Peronnet F， and Massicotte D(1991) Can J Sport Sci16:23-29.） ， 算出脂质燃烧量。在表 2 中表示 24 小时的平均能量消耗量、 平均脂质燃烧量。 0095 表 2 0096 饲养 8 周后的 24 小时的平均氧消耗量和脂质燃烧量 0097 氧消耗量 （mL/kg/min） 脂质燃烧量 （mg/kg/min） 对照组 46.50.8 5.10.4 试验食组 49.40.4* 7.80.6* 0098 相。

40、对于对照组的统计学的显著差 ： *p0.05（t 检验） 0099 从表 2 可知， 在摄取含有脂肪球皮膜成分的试验食物的小鼠中， 与对照食组相比， 氧消耗量和脂质燃烧量显著多。因此， 本发明的脂肪球皮膜成分作为能量消耗促进剂以及 脂质燃烧促进剂或者作为这些材料的素材有用。 0100 取饲养13周之后的各组的小鼠的腓肠肌， 使用RNeasy Fibrous Tissue Mini Kit （Qiagen） ， 得到 RNA 样品。定量各 RNA 样品， 在每 1 次反应的 RNA 量为 125ng 的反应液中 说 明 书 CN 102740865 A 9 8/9 页 10 （1PCR 缓冲液 。

41、II（Applied Biosystems 公司） 、 5mM MgCl2、 1mM dNTP mix、 2.5M Oligo dT18（New England Biolabs 公司） 、 1U/ml RNase 抑制剂 （TAKARA BIO 公司） ） 进行逆转录 反应， 得到 cDNA。反应条件为 42下 10 分钟， 52下 30 分钟， 99下 5 分钟。 0101 以 得 到 的 cDNA 作 为 模 板，利 用 ABI PRISM 7700Sequence Det ector （Applied Biosystems 公司）进行定量 PCR。将 36B4mRNA 的表达量作为基准进。

42、行补 正， 作为相对的 mRNA 表达量来表示。作为引物， 使用 PGC-1（GenBank ： NM 133249、 正 向 ： ACGGTTTTATCACCTTCCGGT（序 列 号 1） 、反 向 ： ATAGCTCAGGTGGAAGGAGGG（序 列 号 2） ） 、 CPT1b（GenBank ： NM 009948、 正向 ： ACTGTTGGACATCGCCGAAC（序列号 3） 、 反向 ： CCTCTTCTTCCACCAGGTGG（序列号 4） ） 、 36B4（GenBank ： NM 007475、 正向 ： GACATCACAGAGCAGGCCCT（序列号 5） 、 反。

43、向 ： TCTCCACAGACAATGCCAGG（序列号 6） ） 。结果如表 3 所示。 0102 表 3 0103 饲养 13 周之后的腓肠肌线粒体功能相关基因表达 0104 基因 对照组 试验食组 PGC-1 0.700.03 0.780.03* CPT1b 0.750.03 0.910.04* 0105 相对于对照组的统计学的显著差 ： *p0.05（t 检验） 0106 从表 3 可知， 在摄取含有脂肪球皮膜成分的试验食物的小鼠中， 与对照食组相比， 参与线粒体新生和脂肪燃烧的 PGC-1 和 CPT1b 基因表达在腓肠肌中显著高。因此， 本发 明的脂肪球皮膜成分作为线粒体功能提高剂。

44、或者作为其素材有用。 0107 制剂例 0108 配方例 1 线粒体功能提高、 能量消耗促进用果冻食品 0109 将卡拉胶和刺槐豆胶的混合凝胶化剂 0.65%、 橙子的 50% 浓缩果汁 5.0%、 柠檬酸 0.05%、 维生素 C 0.05%、 以及脂肪球皮膜成分 （New Zealand Milk Products 公司制造的 Phospholipid Concentrate 700） 1.0%混合， 向其中添加水调节至100%， 在65下溶解。 进 一步向其中添加少量的橙子香料， 在85下保持5分钟进行杀菌处理之后， 分注到100mL的 容器中。 静置8小时缓慢冷却并冷却至5， 使其凝胶。

45、化， 得到含于口中时口溶性良好， 具有 水果风味且食感良好的含有脂肪球皮膜成分的果冻食品。 0110 配方例 2 线粒体功能提高、 能量消耗促进用片剂 0111 按照抗坏血酸 180mg、 柠檬酸 50mg、 阿斯巴甜 12mg、 硬脂酸镁 24mg、 结晶纤维素 120mg、 乳糖274mg、 以及脂肪球皮膜成分 （MEGGLE JAPAN公司制BSCP） 800mg构成的配方 （一 日量 2000mg） ， 基于日本药局方 （制剂总则 “片剂” ） 来制造片剂， 得到含有脂肪球皮膜成分的 片剂。 0112 配方例 3 线粒体功能提高、 能量消耗促进用酸奶 0113 将 20% 脱脂乳在 1。

46、20下杀菌 3 秒之后， 培养嗜热链球菌 (Streptoc occus thermophilus)以及干酪乳杆菌 （Lactobacillus casei） 的种菌得到酸奶基300g。 进一步， 说 明 书 CN 102740865 A 10 9/9 页 11 将砂糖 50g、 果胶 3g、 脂肪球皮膜成分 （雪印乳业株式会社的 Milk ceramide MC-5） 5000mg 溶解于水， 添加水至总量为 450g。将此溶液在 120下杀菌 3 秒得到糖浆。将上述酸奶基 和糖浆混合， 添加 1g 香料之后， 均匀化， 得到含有脂肪球皮膜成分的线粒体功能提高、 能量 消耗促进用酸奶。 01。

47、14 配方例 4 线粒体功能提高、 能量消耗促进用蛋黄酱 0115 向蛋黄 16g 中加入食盐 2.8g、 蔗糖 0.9g、 香辛料 （芥末粉） 0.4g、 调味料 （谷氨酸钠） 0.5g、 增粘剂 0.5g、 水 23.0ml、 食醋 （酸度 10%） 8g、 脂肪球皮膜成分 （雪印乳业株式会社的 Milk ceramide MC-5） 3000mg、 并向其中加入沙拉油 50g 充分搅拌， 得到含有脂肪球皮膜成 分的线粒体功能提高、 能量消耗促进用蛋黄酱。 0116 配方例 5 线粒体功能提高、 能量消耗促进用内服液 0117 将牛磺酸 1000mg、 蔗糖 1000mg、 焦糖 50mg。

48、、 苯甲酸钠 30mg、 维生素 B1 硝酸盐 5mg、 维生素 B220mg、 维生素 B620mg、 维生素 C2000mg、 维生素 E 100mg、 维生素 D32000IU、 烟酸 酰胺 20mg、 脂肪球皮膜成分 （雪印乳业株式会社的 Milk ceramide MC-5） 1000mg、 亮氨酸 300mg、 异亮氨酸 150mg、 缬氨酸 150mg 加入到适量的精制水中溶解， 用磷酸水溶液调节至 pH3 之后， 进一步添加精制水至总量为 50mL。将其在 80下灭菌 30 分钟， 得到含有脂肪球 皮膜成分和氨基酸类的线粒体功能提高、 能量消耗促进用饮料。 0118 配方例 6 线粒体功能提高、 能量消耗促进用乳系饮料 0119 向脱脂乳粉 1.8g、 植脂末 （Creaming Powder） 2.5g、 糊精 6.5g、 蔗糖 3g、 矿物 质类 1.2g、 维生素类 0.3g、 脂肪球皮膜成分 （New ZealandMilk Products 公司制造的 Phospholipid Concentrate 500） 1.0g 中加入精制水， 将各成分均匀混合， 得到含有脂肪球 皮膜成分的线粒体功能提高、 能量消耗促进用乳系饮料 （100mL） 。 说 明 书 CN 102740865 A 11 1/2 页 12 。