一种普萘洛尔、丁香罗勒油纳米乳药物及其制备方法技术领域
本发明属于医药领域，涉及一种抗高血压药物普萘洛尔和丁香罗勒油的新剂型，特别涉及一种普萘洛尔、丁香罗勒油纳米乳药物及其制备方法。
背景技术
普萘洛尔（ Propranolol）。化学名：1-异丙氨基-3-（1-萘氧基）-2-丙醇盐酸盐。其左旋体活性较右旋要强。临床用其外消旋体。本品是最早应用于临床的β受体阻断剂。口服后可在胃肠道迅速而完全吸收，但在肝内首次通过的清除率很高，仅约30%进入血液循环。血浆中药物浓度变化很大，因此临床用药剂量有显著个体差异。主要在肝内代谢，大部分经肾排泄。
与去甲肾上腺素能神经递质或拟肾上腺素因药物竞争β受体，从而抑制去甲肾上腺素能经神支配器官的β效应。对心血管的作用，对心脏β1受体阻断作用较强，可使心率减慢，心肌收缩力减弱；能降低心肌自律性，延长有效不应期（ERP)，减慢传导，使心输出量减少，心肌耗氧降低，血压稍降低。心得安对心脏抑制作用强度与心脏交感神经的张力大小有关，如运动、病理状态时交感神经的张力增高，心得安对心脏的抑制作用较强，对正常人休息时心脏作用较弱。心得安可反射性引起外周阻力增加，使内脏（肝、肾等）器官血流减少，冠脉流量亦降低。
丁香罗勒油丁香罗勒油主要成分为单萜和倍半萜烯。研究表明丁香罗勒油及其主要单体成分丁子香酚具血管舒张作用。
现在市场上已有如普萘洛尔片剂的降压药物，也有丁香罗勒油的使用，虽然口服后能从胃肠道吸收，但吸收不完全，另外药物的溶出速率慢，生物利用度差；再加上普萘洛尔作用缓慢，使得普萘洛尔和丁香罗勒油的药效无法得到利用。
发明内容
针对现有技术中存在的缺陷与不足，本发明的目的在于提供一种能将高效降压的水溶性药物普萘洛尔和脂溶性丁香罗勒油结合起来，并且药物分布均匀、稳定性好、渗透性高、溶解度好、生物利用度高的普萘洛尔、丁香罗勒油纳米乳药物。
实现上述发明目的的技术方案是：一种普萘洛尔、丁香罗勒油纳米乳药物，其原料及各原料质量百分比为：
普萘洛尔 1％～10％
表面活性剂 10％～30％
助表面活性剂 0～25％
丁香罗勒油 1％～15％
其余成分为蒸馏水，上述原料的质量百分比之和为100％。
所述的表面活性剂为聚氧乙烯40氢化蓖麻油、蓖麻油聚氧乙烯醚40、吐温80或泊洛沙姆188中的任意一种或与span80的混合物，这些表面活性剂对人体低毒、安全、无刺激。
所述的助表面活性剂为无水乙醇、1,2-丙二醇、聚乙二醇400或丙三醇中的任意一种或几种的混合物。
本发明在药物中加入刺激性小的助表面活性剂如乙醇、1,2-丙二醇、丙三醇或聚乙二醇400，除了助溶作用外，助表面活性剂主要是为了调整表面活性剂的亲水亲油平衡值（HLB），使得油水界面张力进一步降低，增大界膜的油水性和刚性。助表面活性剂掺入到界面膜中，促进曲率半径很小膜的形成，扩大纳米乳的乳区面积。
本发明还有一个目的是提供上述普萘洛尔、丁香罗勒油纳米乳药物的制备方法，其特征在于，包括下列步骤：
1）称取普萘洛尔、表面活性剂、助表面活性剂、丁香罗勒油、蒸馏水备；
2）将丁香罗勒油、表面活性剂和助表面活性剂混合搅拌均匀；
3）将普萘洛尔容于蒸馏水中；
3）在25℃条件下将步骤3）制备的溶液缓慢滴入步骤2）制备的溶液中，随着蒸馏水量的增加，体系黏稠度增大，当加入蒸馏水的量使体系由油包水变为水包油型纳米乳时，体系粘稠度从最粘稠的状态变稀即可。
本发明的一种普萘洛尔、丁香罗勒油纳米乳通过口服给药，极大的提高了丁香罗勒油的溶解度，减少药物在体内的首过效应，促进丁香罗勒油的的胃肠道吸收，并创新性的将水溶性药物和脂溶性药物有机的结合起来，提高了药物的治疗能力。丁香罗勒油为脂溶性植物油，人体对药物的转运及吸收极其困难，纳米乳基质为丁香罗勒油提供良好的溶解环境，口服时可经淋巴吸收，克服首过效应和分子通过胃肠道时的屏障。通过加入丁香罗勒油，另一方面还提高了普萘洛尔的降压能力，使降压更稳定、效果更好。
本发明的普萘洛尔、丁香罗勒油纳米乳与现有技术相比，具有以下优点：
1.本发明的普萘洛尔、丁香罗勒油抗高血压纳米乳的药物粒径在介10～100nm之间。
2.本发明的普萘洛尔、丁香罗勒油抗高血压纳米乳分布均匀，体系透明、稳定性好，有较低的表面张力，具有良好的流动性，服用方便。
3.本发明的普萘洛尔、丁香罗勒油抗高血压纳米乳给药后迅速被网状内皮细胞吞噬，使药物迅速起效，并维持恒定的血药浓度及药理效应，提高药物的生物利用度，增强药效、减少药物的用量和使用次数。
4.本发明的普萘洛尔、丁香罗勒油纳米乳药效稳定，耗能低。
5.本发明制成纳米乳后可制成口服液直接服用、也可经胶囊包封或经冻干粉技术等处理。
附图说明
图1是本发明普萘洛尔、丁香罗勒油纳米乳电镜照片。
图2是本发明普萘洛尔、丁香罗勒油纳米乳粒径分析图。
具体实施方式
发明人给出具体制备方法实施例及使用药效试验来进一步说明本发明药物的效果。
试验例1 丁香罗勒油和丁子香酚对醋酸去氧皮质酮(DOCA)引起的大鼠高血压的降压作用。
对丁香罗勒油和丁子香酚的实验均分为2组，即DOCA诱导的雄性Wistar大鼠高血压组和单侧肾切除清醒大鼠对照组，分别给以DOCA和赋形剂(橄榄油)4周。在上述处理的最后1d，将大鼠麻醉，腹主动脉插管测平均动脉压(MAP)，下腔静脉插管给药，记录基础MAP和心率(HR)后，以逐渐加大剂量的方式给试药，记录试药引起的MAP和HR变化。结果显示给DOCA 高血压组及其对照组大鼠iv丁香罗勒油(1～20 mg/kg) 和丁子香酚(1～10 mg/kg)，立即及剂量相关地产生降压作用并使心搏徐缓。与单侧肾切除对照组相比，丁香罗勒油和丁子香酚对DOCA高血压大鼠MAP的最大降压值明显增加，而其心搏徐缓作用未受影响；六甲双胺对DOCA高血压大鼠的降压最大值亦明显高于单侧肾切除对照组。若预先注射六甲双铵或甲基阿托品则不影响EOOG和丁子香酚的降压作用，但能明显减弱2个试药对HR的作用。以上结果表明，静脉注射丁子香酚或丁香罗勒油可剂量相关地降低DOCA诱导的清醒大鼠高血压，其作用强于对单侧肾切除大鼠的作用。丁香罗勒油和丁子香酚直接作用于血管平滑肌使血管扩张，而不是通过增强交感神经系统活动而产生降压作用的。
试验例2 本发明普萘洛尔、丁香罗勒油纳米乳抗高血压药物粒径大小分析
本发明经透射电子显微镜检测（图1），液滴呈类球形，分散性好，无粘连。经马尔文粒度分析仪检测（图2）其直径分布在30.4～71.4nm之间,平均粒径为55.8nm。
试验例3本发明普萘洛尔、丁香罗勒油纳米乳抗高血压药物稳定性分析
通过以下离心试验、光稳定性试验、温度稳定性试验等观察本发明普萘洛尔、丁香罗勒油纳米乳抗高血压药物的稳定性，观察本发明是否有分层、浑浊或晶体析出等不稳定现象。
1. 高速离心试验
取适量制备好的本发明普萘洛尔、丁香罗勒油纳米药物于离心管中，以15 000r/min的转速离心10 min，离心试验后，本发明普萘洛尔、丁香罗勒油纳米乳抗高血压药物依然保持离心前的澄清透明，未见分层、浑浊或晶体析出等不稳定现象。
2. 光稳定性试验
将适量制备好的普萘洛尔、丁香罗勒油纳米乳药物装入透明好的无色、透明小玻璃瓶中，密封，放置于正常光照条件下10d，分别于1d、2d、4d、6d、8d、10d取样观察。结果表明普萘洛尔、丁香罗勒油纳米乳抗高血压药物每份样品均保持澄清透明，未见分层、浑浊或晶体析出等不稳定现象。
3. 温度稳定性试验
将适量制备好的普萘洛尔、丁香罗勒油纳米乳抗高血压药物装入透明度好的无色玻璃瓶中，密封，放置于4℃、室温（25℃）和40℃三中温度条件下留样考察各30d，每隔5d取样观察。结果表明，普萘洛尔、丁香罗勒油纳米乳抗高血压药物在此三种温度条件下均保持澄清透明，未见分层、浑浊或晶体析出等不稳定现象。
4. 长期稳定性试验
将3批纳米乳密封于棕色玻璃瓶内，置于(25±2)℃、相对湿度(60±5)％条件下12个月，分别于 0、3、6、9和12个月时取样，考察纳米乳的性状及含量变化，并参考文献统计分析方法，计算普萘洛尔、丁香罗勒油纳米乳药物的有效期。试验结果表明在长期试验条件下，普萘洛尔、丁香罗勒油纳米乳药物的外观一直保持澄明、均一，未见分层、色变、絮凝和破乳等现象；体系中的普萘洛尔和丁香罗勒油含量随时间延长而逐渐降低，其含量—时间变化曲线提供的线性回归方程，计算出普萘洛尔、丁香罗勒油纳米乳药物的有效期为34.11个月（以时间短者为标准）。
试验例4 大鼠尾部测压法测定普萘洛尔、丁香罗勒油纳米乳药物的药效（与丁香罗勒油和市售普萘洛尔片对比）
SHR大鼠40只随机分为4组,每组10只，分别设为普萘洛尔片，丁香罗勒油组，普萘洛尔、丁香罗勒油纳米乳组和阳性空白组，前三组分别给予普萘洛尔片混悬液、丁香罗勒油和普萘洛尔、丁香罗勒油纳米乳各15mg/kg·d，溶于饮水中给药,1次/d，连续12周。WKY大鼠10只为正常对照组，SHR大鼠10只阳性对照组不给药物，正常饮水。
测量各组大鼠尾动脉血压。鼠龄为6周时(即用药前) 测压1次,鼠龄7周(用药后1 周)测压1次，以后每隔一周测1次血压,直到实验结束。结果见表1。
表1 各组大鼠SBP的比较 (x±s，n=10)
组别收缩压(mmHg)
阳性对照201.3±10.4
普萘洛尔片138.9±10.9
丁香罗勒油178.2±11.8
普萘洛尔、丁香罗勒油纳米乳127.4±8.1
WKY正常对照组124.9±10.4
结果显示，普萘洛尔、丁香罗勒油纳米乳与阳性对照组、普萘洛尔片和丁香罗勒油组比较，差异均极显著，表明普萘洛尔不但能显著降低阳性大鼠的血压，而且降压效果与市售普萘洛尔片和丁香罗勒油相比效果更为显著。
试验例5 毒性试验
1.毒理研究项目及结论：
本发明药物严格按照新药非临床安全性评价方法与市售普萘洛尔片剂对比进行了急性毒性试验，重复给药毒性试验、遗传毒性试验（包括Ames 试验、小鼠骨髓微核试验、体外培养哺乳动物细胞染色体突变试验）、生殖毒性试验（一般生殖毒性试验、致畸敏感期毒性试验、围产期毒性试验）、致癌试验、免疫毒性试验和局部刺激性试验，试验结果如下。
本发明药物对小鼠急性毒性实验结论：与市售普萘洛尔片剂对比，普萘洛尔、丁香罗勒油纳米乳未出现计量内不良反应及死亡。
本发明药物的Ames试验、小鼠精子畸形试验和睾丸染色体畸变试验等遗传毒性试验的结果均为阴性。
大鼠30d 喂养本发明产品的结果表明：与市售普萘洛尔片剂对比，在试验期内，普萘洛尔、丁香罗勒油纳米乳计量内各实验组动物生长发育良好，体重、摄食量、血常规、血生化、脏器系数等指标均在正常范围内，病理组织学检查亦未见异常。
本发明药物长期毒性实验结论：与市售普萘洛尔片剂对比，在试验期内，普萘洛尔、丁香罗勒油纳米乳计量内，本发明药物在连续灌胃给药三个月未见大鼠不良反应，各项检查指标均在正常范围内，病理检查其主要脏器及靶器官均未见该药引起的中毒性病理改变。
试验例6 药物动力学
试验结果表明，普萘洛尔、丁香罗勒油纳米乳口服后胃肠道吸收较完全(94%), 1.25小时血药浓度达峰值，生物利用度为76％（普萘洛尔生物利用度仅为30%）。与血浆蛋白的结合率很高, 为93%, 半衰期为3.5小时,经肾脏排泄,主要为代谢产物,小部分(<1%)为原形物。
实施例1
精确称取丁香罗勒油6g、EL40 25g和乙醇5g在室温（25℃）条件下搅拌均匀，然后向其中缓慢滴入溶解有普萘洛尔的蒸馏水。随着蒸馏水量的增加，体系黏稠度增大，当加入蒸馏水的量使体系由油包水变为水包油型纳米乳时，体系粘稠度从最粘稠的状态变稀，此时产生的即是无色透明的普萘洛尔、丁香罗勒油纳米乳，此时加入水的量为59g、普萘洛尔为5g。此比例即为普萘洛尔、丁香罗勒油纳米乳的最优配比。
以下实施例步骤同实施例1：
实施例2
丁香罗勒油15g，EL40 20g，span80 10g，蒸馏水54g，普萘洛尔1g。
实施例3
丁香罗勒油10g，RH40 25g，span80 5g，蒸馏水53g，1,2-丙二醇5g，普萘洛尔2g。
实施例4
丁香罗勒油5g，吐温80 20g，span80 10g，蒸馏水55g，聚乙二醇400 5g，普萘洛尔5g。
实施例5
丁香罗勒油1g，泊洛沙姆188 20g，span80 5g，丙三醇5g，蒸馏水59g，普萘洛尔10g。
实施例6
丁香罗勒油15g，EL40 25g，蒸馏水49g，聚乙二醇400 5g，丙三醇 5g，普萘洛尔1g。
实施例7
丁香罗勒油5g，RH40 25g，丙三醇25g，蒸馏水40.5g，普萘洛尔4.5g。
实施例8
丁香罗勒油7g，RH40 30g，乙醇25g，蒸馏水37g，普萘洛尔为1g。
实施例9
丁香罗勒油4.5g，吐温80 25g，丙三醇 15g，蒸馏水49g、普萘洛尔6.5g。
实施例10
丁香罗勒油5g，吐温80 30g，PEG400 5g，蒸馏水55g、普萘洛尔5g。
实施例11
丁香罗勒油5g，吐温80 25g，PEG400 5g，1,2-丙二醇 5g，蒸馏水50g、普萘洛尔10g。