一种耐热高羊茅的培育方法.pdf

本发明涉及一种耐热高羊茅的培育方法，其特征在于包括以下步骤：取高羊茅的成熟种子为外植体，诱导形成愈伤组织，选择诱导形成1周的愈伤组织转移至含添加1％α－胡萝卜素的诱导培养基共培养至愈伤组织快速增殖期，挑取新增生的愈伤组织，置于高温和强光下筛选2次，取存活的愈伤组织分化成苗，按单株编号种植，取新鲜叶片，测定并选留叶黄素含量高于0.1％的高羊茅植株，进行种子繁育，继续种植在35℃下1周胁迫处理，入选耐热高羊茅，继续种植在自然环境条件下评价，入选耐热并能自然越夏的材高羊茅，继续种植评价验证耐热性和自然越夏能力的表达稳定性，获得耐热的高羊茅新材料。本发明培育的耐热高羊茅，可正常越夏，可保持四季常绿。

权利要求书
1.  一种耐热高羊茅的培育方法，其特征在于包括以下步骤：
1)取高羊茅的成熟种子为外植体，接种至诱导培养基，于28±1℃下诱导形成愈伤组织；
2)选择诱导产生1周的愈伤组织，转移至含添加1％α-胡萝卜素的诱导培养基，共培养至愈伤组织进入快速增殖期；
3)挑取新增生的愈伤组织，置于35℃和3000Lux强光下筛选1周，尔后移至继代培养基，继代培养2周，重新置于35℃和3000Lux下筛选1周；
4)选取仍存活的愈伤组织，转移至分化培养基，诱导分化成苗，单株编号种植；
5)摘取新鲜叶片，测定其中的叶黄素含量，保留叶黄素含量高于0.1％的草坪草植株，进行种子繁育；
6)继续种植步骤5)筛选的高羊茅材料，在人工模拟条件下进行35℃下1周胁迫处理评价入选高羊茅材料的耐热性，对耐热的材料进行繁殖；
7)继续种植步骤6)筛选的高羊茅材料，在自然环境条件下评价入选高羊茅的耐热性和自然越夏能力，对耐热并能自然越夏的材料进行繁殖；
8)继续种植步骤7)筛选的高羊茅材料，评价验证入选高羊茅的耐热性和自然越夏能力的表达稳定性，对稳定表达的材料进行繁殖，获得耐热的高羊茅新材料。

说明书一种耐热高羊茅的培育方法
技术领域
本发明涉及一种耐热高羊茅的培育方法。
背景技术
草坪是现代文明社会发展的产物，具有保持水土、改造自然、美化环境等多种功能，在改善城市人居环境和营造休闲场所等方面起重要作用，被誉为“文明生活的象征、休息游览的乐园、生态环境的卫生、运动健儿的摇篮”。随着我国经济建设步伐的加快、国民环境意识的不断增强，草坪园林已提到政府的议事日程，成为老百姓关心的热点，成为城市规划与社区建设中不可缺少的重要内容。在很多时候，人们将人均绿地面积作为评价城市环境和生活质量的重要指标之一。以北京2008奥运会为背景，我国体育产业和现代园林绿化业的产业步入迅猛发展期，草坪质量的优劣越来越被世界上许多国家所重视。提高草坪草的耐热性，是国际上草坪草研究的前沿。
草坪草具有两大类型---冷季型和暖季型草坪草。高羊茅耐冷能力强，冬天叶片为正常绿色，由于耐热能力差，夏天叶片枯黄，难以越夏，进入休眠或自然死亡。
发明内容
本发明的目的在于提供一种可正常越夏，在盛夏炎热季节仍能正常生长，叶片保持常绿的耐热高羊茅的培育方法。
耐热高羊茅的培育方法，其特征在于包括以下步骤：
1)取高羊茅的成熟种子为外植体，接种至诱导培养基，于28±1℃下诱导形成愈伤组织；
2)选择诱导产生1周的愈伤组织，转移至含添加1％α-胡萝卜素的诱导培养基，共培养至愈伤组织进入快速增殖期；
3)挑取新增生的愈伤组织，置于35℃和3000Lux强光下筛选1周，尔后移至继代培养基，继代培养2周，重新置于35℃和3000Lux强光下筛选1周；
4)选取仍存活的愈伤组织，转移至分化培养基，诱导分化成苗，单株编号种植；
5)摘取新鲜叶片，测定其中的叶黄素含量，保留叶黄素含量高于0.1％的高羊茅植株，进行种子繁育；
6)继续种植步骤5)筛选的高羊茅材料，在人工模拟条件下进行35℃下1周胁迫处理评价入选高羊茅材料的耐热性，对耐热的材料进行繁殖；
7)继续种植步骤6)筛选的高羊茅材料，在自然环境条件下评价入选高羊茅的耐热性和自然越夏能力，对耐热并能自然越夏的材料进行繁殖；
8)继续种植步骤7)筛选的高羊茅材料，评价验证入选高羊茅的耐热性和自然越夏能力的表达稳定性，对稳定表达的材料进行繁殖，获得耐热的高羊茅新材料。
上述的稳定性是指入选草坪草的耐热性和自然越夏能力可在不同年份间(2年及以上)、季节间(2季及以上)以及地点间(2个地点及以上)表达一致，特性不受年份、季节以及地点的显著影响。
本发明中所说的诱导培养基是MS基本培养基添加蔗糖60g、琼脂10g、2，4-D8mg/L和ABA2mg/L。
本发明中所说的继代培养基是MS基本培养基添加蔗糖60g、琼脂10g、2，4-D4mg/L、ABA1mg/L、BAP0.2mg/L和硫酸铜2.5mg/L。
本发明中所说的分化培养基是MS基本培养基添加蔗糖60g、琼脂10g、BAP2.0mg/L、KT0.5mg/L和NAA0.5mg/L。
本发明具有以下几方面的有益效果：
本发明培育的耐热高羊茅，耐热性能好，可正常越夏，即盛夏炎热季节叶片保持常绿，能正常生长，可保持四季常绿。
具体实施方式
以下通过具体实例进一步说明本发明。
实施例1：
以高羊茅的成熟种子为外植体，接种至诱导培养基，于28±1℃下诱导形成愈伤组织，选择诱导形成1周的愈伤组织，转移至含添加1％α-胡萝卜素的诱导培养基，培养至2周后愈伤组织进入快速增殖期，挑取新增生的愈伤组织，置于35℃和3000Lux强光下筛选1周，然后转移至继代培养基，继代培养2周，重新置于35℃和3000Lux强光下筛选1周，选择存活的愈伤组织，转移至分化培养基，诱导分化成苗，单株编号种植幼苗2821株。摘取新生叶片，采用高效液相色谱法[色谱柱为C18柱(4.6mm×150mm；5μm)，流动相为乙腈-甲醇(95∶5)；流速0.7mL/min，检测波长446nm；柱温：室温。结果叶黄素在7.686～17.93μg/mL范围内线性关系良好]测定叶黄素含量，入选叶黄素含量高于0.1％的高羊茅植株16株，进行种子繁育，继续种植在35℃下1周胁迫处理，入选耐热高羊茅株系3个，继续种植在自然环境条件下评价入选高羊茅的耐热性和自然越夏能力，入选耐热并能自然越夏的材高羊茅株系2个，继续种植评价验证入选高羊茅的耐热性和自然越夏能力的表达稳定性，获得稳定耐热的高羊茅新材料1个HT-TallF-1。种植培育出的HT-TallF-1，耐热性能好，可正常越夏，即盛夏炎热季节叶片保持绿色，能正常生长，而普通高羊茅材料由于不耐热，休眠停滞生长，叶片枯黄，绝大多数植株受热胁迫自然死亡。