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1、10申请公布号CN104087638A43申请公布日20141008CN104087638A21申请号201410363673322申请日20140729C12P21/00200601C12R1/12520060171申请人湖南农业大学东方科技学院地址410128湖南省长沙市芙蓉区农大路一号72发明人廖卢艳蒋立文吴卫国张喻胡肖容74专利代理机构长沙正奇专利事务所有限责任公司43113代理人何为袁颖华54发明名称一种利用枯草芽孢杆菌发酵米渣制备抗氧化肽的方法57摘要一种利用枯草芽孢杆菌发酵米渣制备抗氧化肽的方法，该方法是先制备枯草芽孢杆菌种子培养液，再接入发酵培养基中，进行摇床发酵培养以得到发酵。
2、液；将发酵液灭酶，冷却至室温，离心去除菌体和未发酵的米渣残渣，得到的发酵上清液过滤，滤液浓缩，冷冻干燥。本发明以米渣为原料制备抗氧化肽，来源广泛，价格低廉，不仅降低制备抗氧化肽的生产成本，而且有效地综合利用副产物米渣，提高米渣的附加值，拓展其应用范围，实现米渣抗氧化肽的大批量工业化生产。利用本发明方法制备的产品米渣蛋白抗氧化肽的品质好，抗氧化活性高，还原能力强。51INTCL权利要求书1页说明书3页19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书1页说明书3页10申请公布号CN104087638ACN104087638A1/1页21一种利用枯草芽孢杆菌发酵米渣制备抗氧化肽的方法，其特。
3、征在于，该方法步骤如下1）制备枯草芽孢杆菌种子培养液；2）将枯草芽孢杆菌种子培养液以58的接种重量接入发酵培养基中，在3035、转速180200R/MIN下摇床发酵培养4860H，得到发酵液；其中，该发酵培养基PH值为55，是按300ML水加100G米渣粉、15GNACL及03G葡萄糖的比例，于水中加入米渣粉、NACL及葡萄糖，灭菌，冷却得到；3将发酵液灭酶，冷却至室温，离心去除菌体和未发酵的米渣残渣，得到发酵上清液；4）将上清液过滤，滤液浓缩，冷冻干燥。2如权利要求1所述的一种利用枯草芽孢杆菌发酵米渣制备抗氧化肽的方法，其特征在于，步骤1）中的枯草芽孢杆菌种子培养液是将活化好的枯草芽孢杆菌斜。
4、面菌种单菌落接入灭菌后的种子培养基中，于旋转摇床180200R/MIN、3035恒温振荡培养2024H，即可。3如权利要求2所述的一种利用枯草芽孢杆菌发酵米渣制备抗氧化肽的方法，其特征在于，所述活化好的枯草芽孢杆菌斜面菌种单菌落是将枯草芽孢杆菌斜面菌种接种于斜面培养基，于3035培养2024H活化得到。4如权利要求2所述的一种利用枯草芽孢杆菌发酵米渣制备抗氧化肽的方法，其特征在于，所述种子培养基PH值为72，是按1000ML水加30G蛋白胨、5GNACL、5G牛肉膏及1G葡萄糖的比例，于水中加入蛋白胨、NACL、牛肉膏及葡萄糖，于121下灭菌20MIN，冷却，即可。5如权利要求1所述的一种利用。
5、枯草芽孢杆菌发酵米渣制备抗氧化肽的方法，其特征在于，所述步骤1）中枯草芽孢杆菌种子培养液含菌量为107108CFU/ML。6如权利要求1所述的一种利用枯草芽孢杆菌发酵米渣制备抗氧化肽的方法，其特征在于，所述步骤3）中灭酶温度为90110，时间为812MIN。7如权利要求1所述的一种利用枯草芽孢杆菌发酵米渣制备抗氧化肽的方法，其特征在于，所述步骤3）中离心转速为38004200R/MIN，时间为812MIN。8如权利要求1所述的一种利用枯草芽孢杆菌发酵米渣制备抗氧化肽的方法，其特征在于，所述步骤4）中上清液过滤是采用045M微孔滤膜。权利要求书CN104087638A1/3页3一种利用枯草芽孢杆。
6、菌发酵米渣制备抗氧化肽的方法技术领域0001本发明属于食品工程及生物技术领域，具体涉及一种利用枯草芽孢杆菌发酵米渣制备抗氧化肽的方法。背景技术0002长期以来，稻米生产及其副产物的综合利用一直受到高度关注。稻米经生产加工后剩下的大量副产物如米渣、稻壳、米糠、碎米等可进一步深加工处理，国内外有大量有关大米副产物综合利用的文献报道。以大米为原料生产淀粉糖、谷氨酸、柠檬酸、乳酸及生化药品等产品时，大米经液化或糖化后会产生副产物米渣，由于大量淀粉已被利用，米渣中蛋白质含量高，其蛋白质干基含量高达4060，是宝贵的蛋白质资源，实际生产中一般都是当作饲料被廉价处理掉，没有实现副产物的加工增值。据资料显示在。
7、大米淀粉糖的生产过程中每消耗7吨大米就要产出1吨米渣。若能将这些米渣充分用于大米蛋白活性肽、浓缩蛋白、分离蛋白等产品的开发，将极大地提高大米加工的附加值，带来可观的经济效益。0003目前，常规的大米蛋白抗氧化活性肽的生产方法是以大米分离蛋白为原料，使用多种商品酶制剂酶解大米蛋白来制备。但是这种生产方法有着明显的不足一是作为主要原料的大米分离蛋白成本较高；二是规模化生产时所需商品酶制剂用量大且价格昂贵，使得生产成本显著增加。如果能够筛选到一些可以直接利用米渣中的蛋白质发酵生产大米抗氧化肽的微生物菌种，再选择适宜的发酵工艺，就能以低廉的米渣大规模地制备大米抗氧化肽，这样原料廉价生产成本低。发明内容。
8、0004本发明所要解决的技术问题是针对上述现有技术的不足，提供一种大规模、低成本生产具有天然芳香味、适口性好等特点的利用枯草芽孢杆菌发酵米渣制备抗氧化肽的方法，该方法可降低制备抗氧化肽的生产成本，有效地综合利用副产物米渣，提高米渣的附加值，拓展其应用范围，实现米渣抗氧化肽的大批量工业化生产。0005为了解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案为一种利用枯草芽孢杆菌发酵米渣制备抗氧化肽的方法，该方法步骤如下1）制备枯草芽孢杆菌种子培养液是将枯草芽孢杆菌斜面菌种接种于斜面培养基（现有常规培养基），于3035培养2024H活化得到枯草芽孢杆菌斜面菌种单菌落，再将活化好的枯草芽孢杆菌斜面菌种单菌落接入。
9、灭菌后的种子培养基中，于旋转摇床180200R/MIN、3035恒温振荡培养2024H，即可。该枯草芽孢杆菌种子培养液含菌量为107108CFU/ML。0006上述种子培养基PH值为72，是按1000ML水加30G蛋白胨、5GNACL、5G牛肉膏及1G葡萄糖的比例，于水中加入蛋白胨、NACL、牛肉膏及葡萄糖，于121下灭菌20MIN，冷却，即可。00072）将枯草芽孢杆菌种子培养液以58的接种重量接入发酵培养基中，在说明书CN104087638A2/3页43035、转速180200R/MIN下摇床发酵培养4860H，得到发酵液；其中，该发酵培养基PH值为55，是按300ML水加100G米渣粉、。
10、15GNACL及03G葡萄糖的比例，于水中加入米渣粉、NACL及葡萄糖，121下灭菌20MIN，冷却得到；3将发酵液于90110灭酶812MIN，冷却至室温，以38004200R/MIN离心812MIN去除菌体和未发酵的米渣残渣，得到发酵上清液；4）将上清液采用045M微孔滤膜过滤，滤液浓缩，冷冻干燥。0008本发明使用的原料米渣是大米制作淀粉糖所产下的下脚料，其蛋白质含量高达60以上（干基），有良好的氨基酸组成配比，且来源广泛，价格低廉；以米渣为原料制备抗氧化肽，使米渣得到了综合利用，为充分开发米渣生产高附加值的功能食品和生物制品奠定了基础。利用本发明方法制备的产品米渣蛋白抗氧化肽的品质好，。
11、抗氧化活性高，还原能力强。现有抗氧化肽的400UMOL/L天然抗坏血酸还原力为0648，其还原力只与本方法中制备的068MG/ML米渣抗氧化肽还原力相当。0009本方法利用米渣结合微生物（枯草芽孢杆菌）发酵法制备大米蛋白抗氧化活性肽，与现有的酶制剂直接酶解法制备抗氧化肽相比，具有如下优点一是直接利用大米加工中的废弃物米渣为原料，不但成本低廉，而且变废为宝，防止环境污染；二是以枯草芽孢杆菌替代大量昂贵的商品酶制剂制备抗氧化肽，节省了大量酶制剂；三是微生物（枯草芽孢杆菌）发酵法制备的多肽通常没有苦味或苦味很低，解决了酶制剂生产中控制水解度防止苦味肽的生成，而且发酵过程中还会产生大量的风味物质，使发。
12、酵后得到的多肽具有天然芳香味，适口性较好。0010具体实施方式以下结合实施例对本发明作进一步说明。0011制备种子培养基于1000ML水中加入30G蛋白胨、5GNACL、5G牛肉膏及1G葡萄糖，PH值为72，121下灭菌20MIN，冷却。0012制备发酵培养基于3000ML水加1000G米渣粉、15GNACL及3G葡萄糖，PH值为55，121下灭菌20MIN，冷却；实施例1将保藏完好的枯草芽孢杆菌斜面菌种接种于斜面培养基，32培养22H进行菌种活化；将活化好的枯草芽孢杆菌斜面菌种单菌落接入灭菌后的种子培养基中，于旋转摇床190R/MIN、32恒温振荡培养22H，得到含菌量为108CFU/ML的。
13、枯草芽孢杆菌种子培养液；将得到的种子培养液以5的接种重量接入装有300ML发酵培养基的三角瓶中，三角瓶采用棉塞塞住瓶口，在32、转速200R/MIN摇床培养48H，得到发酵液，发酵液在100下灭酶10MIN，待发酵液冷却至室温以4000R/MIN离心10MIN去除菌体和未发酵的米渣残渣，得到发酵上清液，将上清液经045M微孔滤膜过滤，将滤液进行浓缩，冷冻干燥，得到的粉末状产品即为米渣蛋白抗氧化肽。0013本实施例得到的米渣蛋白抗氧化肽2MG/ML时还原力达1907，400UMOL/L抗坏血酸还原力为0648，与068MG/ML米渣抗氧化肽的还原力相当。表明此实施例得到的米渣蛋白抗氧化肽的抗氧化。
14、活性很强。0014实施例2将保藏完好的枯草芽孢杆菌斜面菌种接种于斜面培养基，30培养24H，进行菌种活说明书CN104087638A3/3页5化；将活化好的枯草芽孢杆菌斜面菌种单菌落接入灭菌后的种子培养基中，于旋转摇床200R/MIN、30恒温振荡培养24H，得到含菌量为107CFU/ML的枯草芽孢杆菌种子培养液；将得到的种子培养液以8的接种重量接入装有200ML发酵培养基的三角瓶中，三角瓶采用胶塞塞住瓶口，在35、转速180R/MIN摇床培养60H，得到发酵液，发酵液在100下灭酶10MIN，待发酵液冷却至室温以4000R/MIN离心10MIN去除菌体和未发酵的米渣残渣，得到发酵上清液，将上。
15、清液经045M微孔滤膜过滤，滤液进行浓缩，冷冻干燥，得到的粉末状产品即为米渣蛋白抗氧化肽。本实施例得到的米渣蛋白抗氧化肽2MG/ML时还原力达1898。0015实施例3将保藏完好的枯草芽孢杆菌斜面菌种接种于斜面培养基，35培养20H进行菌种活化；将活化好的枯草芽孢杆菌斜面菌种单菌落接入灭菌后的种子培养基中，于旋转摇床180R/MIN、35恒温振荡培养20H，得到含菌量为108CFU/ML的枯草芽孢杆菌种子培养液；将得到的种子培养液以7的接种重量接入装有280ML发酵培养基的三角瓶中，三角瓶采用棉塞塞住瓶口，在30、转速190R/MIN摇床培养54H，得到发酵液，发酵液在110下灭酶8MIN，待。
16、发酵液冷却至室温以3800R/MIN离心12MIN去除菌体和未发酵的米渣残渣，得到发酵上清液，将上清液经045M微孔滤膜过滤，将滤液进行浓缩，冷冻干燥，得到的粉末状产品即为米渣蛋白抗氧化肽。本实施例得到的米渣蛋白抗氧化肽2MG/ML时还原力达1901。0016本发明中，还原力的测定方法用蒸馏水将米渣蛋白抗氧化肽制成1MG/ML的水溶液。取发酵产物水溶液2ML，加入磷酸盐缓冲溶液02MOL/L,PH665ML和1铁氰化钾5ML，置于50水浴中反应20MIN，然后加入10的三氯乙酸10ML，经充分混合后以3000R/MIN离心10MIN。吸取上清液5ML，加入5ML蒸馏水和1ML01的三氯化铁溶液，在700NM处测定吸光值，吸光值越大表明还原力越强。由于抗氧化剂是通过自身的还原作用给出电子而清除自由基的，还原力越强，抗氧化性越强，因此可通过测定还原力来说明抗氧化活性的强弱。说明书CN104087638A。