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1、(10)申请公布号 CN 103120700 A (43)申请公布日 2013.05.29 CN 103120700 A *CN103120700A* (21)申请号 201210593450.7 (22)申请日 2012.12.22 A61K 31/715(2006.01) A61P 35/00(2006.01) C08B 37/00(2006.01) (71)申请人 北华大学 地址 132013 吉林省吉林市丰满区滨江东路 3999 号 (72)发明人 姜爽 杜培革 杨学良 苑广信 李洪宇 安丽萍 韩笑 赵南晰 (54) 发明名称 一种制备具有抗肿瘤活性天南星多糖的方法 (57) 摘要 本。
2、发明公开了一种具有抗肿瘤活性的天南星 多糖的制备方法和用途， 属于医药技术领域。 采用 水提、 醇沉的方法提取天南星多糖， 并对其抗肿瘤 活性做了初步评价， 上述提取的天南星多糖可用 于抗肿瘤药物的开发。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 3 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书1页 说明书3页 (10)申请公布号 CN 103120700 A CN 103120700 A *CN103120700A* 1/1 页 2 1. 天南星多糖在制备抗肿瘤药物中的应用。 2. 一种天南星多糖的制备方法是， 包括以下步骤 ： (1) 取天南星干燥根。
3、茎， 粉碎成粗粉 ； (2) 取步骤 (1) 中制得的粗粉 1 份， 加 5 倍量药材重量的水， 煎煮 3 次， 第一次加 2 倍量 水， 第二次加 2 倍量水， 第三次加 1 倍量水， 每次煮沸 1.5 小时， 合并水煎液 ； (3) 磷酸盐缓冲液调节步骤 (2) 制得的水煎液的 pH 值至 6， 加入 0.005 倍药材重量的 活性为 12U/mg 的木瓜蛋白酶， 在 45条件下水解 2 小时， 然后立即煮沸 5 分钟， 4静置 12 小时以上， 抽滤去沉淀， 将滤液装入分子量为 1000 的透析袋， 用自来水透析 1 天， 蒸馏水再 透析 1 天， 袋内多糖液浓缩成 2g/mL， 加无水。
4、乙醇至乙醇体积分数为 75， 4静置 12 小时 以上， 倾去上清液， 沉淀减压干燥得天南星多糖， 得率约为 10.2。 权 利 要 求 书 CN 103120700 A 2 1/3 页 3 一种制备具有抗肿瘤活性天南星多糖的方法 技术领域 ： 0001 发明涉及从天南星根茎中提取相关成分的技术领域， 具体涉及一种制备具有抗肿 瘤活性天南星多糖的方法。 背景技术 ： 0002 天南星属天南星科、 天南星属， 又名半夏精、 掌叶半夏、 蛇木等， 为多年生草本植 物。地下块茎呈球形、 扁平、 黄褐色， 除去须根及外皮， 以球茎入药。中药天南星药用历史悠 久， 其名最早见于唐代陈藏器的 本草拾遗 。。
5、具有燥湿化痰、 祛风止痉、 散结消肿之功效。 主治顽痰咳嗽、 口眼歪斜、 半身不遂、 手足麻木、 癫痫惊风。 破伤风、 跌打损伤及毒蛇咬伤等。 0003 现代医学研究表明， 天南星复方对小鼠 Lewis 肺癌、 肝癌、 艾氏腹水癌等多种移植 性肿瘤均有抑制作用， 同时对体外培养人胃癌、 肺癌、 肝癌细胞也有杀伤和抑制作用。鲜南 星水提取液在 1 16 的浓度时， 对 Hela 有抑制作用， 使细胞浓缩成团块， 破坏正常细胞结 构， 使部分细胞脱落 ； 对小鼠实验性肿瘤如肉瘤 S180、 HCA、 实体型 U14( 为鳞状上皮型子宫 颈癌移植于小鼠者 ) 等均有明显抑制作用。天南星醇提物对 He。
6、la 细胞有较强抑制作用， 对 S180 的抑制率为 45.8 53.7， 对 HCA 的抑制率为 37.1 53.4， 对 U4 抑制率达 61.7 84.8， 说明该提取液对 3 种动物肿瘤模型均有抑制作用。天南星中提取分离的 总蛋白以 1的生理盐水液给小鼠腹腔注射， 对小鼠 S180 瘤株抑制率为 50.1 67.0， 平均值 58.3， 表明天南星总蛋白对小鼠 S180 瘤细胞生长有明显的抑制作用。 0004 大量药理及临床研究证实， 植物多糖有抗癌、 抗肥胖、 控制血糖、 降胆固醇、 降血脂 和增强免疫作用等生理功能。但是迄今为止， 国内外对天南星多糖的研究鲜见于报道。 发明内容 ：。
7、 0005 本发明的目的之一是提供一种具有抗肿瘤活性的天南星多糖， 目的之二是提供上 述天南星多糖的制备方法， 目的之三是提供上述天南星多糖在制备抗肿瘤药物中的应用。 0006 本发明的天南星多糖的制备方法包括以下步骤 ： 0007 (1) 取天南星干燥根茎， 粉碎成粗粉 ； 0008 (2) 取步骤 (1) 中制得的粗粉 1 份， 加 5 倍量药材重量的水， 煎煮 3 次， 第一次加 2 倍量水， 第二次加 2 倍量水， 第三次加 1 倍量水， 每次煮沸 1.5 小时， 合并水煎液 ； 0009 (3) 磷酸盐缓冲液调节步骤 (2) 制得的水煎液的 pH 值至 6， 加入 0.005 倍药材。
8、重 量的活性为 12U/mg 的木瓜蛋白酶， 在 45条件下水解 2 小时， 然后立即煮沸 5 分钟， 4静 置 12 小时以上， 抽滤去沉淀， 将滤液装入分子量为 1000 的透析袋， 用自来水透析 1 天， 蒸馏 水再透析 1 天， 袋内多糖液浓缩成 2g/mL， 加无水乙醇至乙醇体积分数为 75， 4静置 12 小时以上， 倾去上清液， 沉淀减压干燥得天南星多糖， 得率约为 10.2。 0010 本发明就天南星多糖对小鼠黑色素瘤细胞 B16-F10 的体外抑制作用及人工肺转 移模型的治疗作用做了研究， 结果表明天南星多糖在体内、 体外均表现出显著的抗肿瘤作 用， 天南星多糖能作为治疗肿瘤。
9、的有效药物。 说 明 书 CN 103120700 A 3 2/3 页 4 0011 本发明的优点在于 ： 0012 1. 天南星资源丰富， 且本发明提供的制备方法简单易操作， 适用于大规模工业化 生产。 0013 2. 本发明制备的多糖， 经分离、 纯化后， 在体内外均表现出显著的抗肿瘤作用， 与 其它化疗药物同服， 可以减轻化疗药物的副作用， 提高患者的耐受性。 0014 3. 安全可靠， 本发明制备得到的天南星多糖毒副作用较低， 可长期服用， 避免化疗 药物引起的严重毒副作用。 具体实施方式 ： 0015 实施例 1 天南星多糖的制备 0016 取天南星干燥根茎 5kg， 粉碎成粗粉， 。
10、加水煮 3 次， 第一次加水 10L， 第二次加水 10L， 第三次加水5L， 每次煮沸1.5小时， 合并水煎液， 用磷酸盐缓冲液调pH值至6， 加入25g 活性为 12U/mg 的木瓜蛋白酶， 在 45条件下水解 2 小时， 然后立即煮沸 5 分钟， 4静置 12 小时以上， 抽滤去沉淀， 将滤液装入分子量为 1000 的透析袋， 用自来水透析 1 天， 蒸馏水再 透析 1 天， 袋内多糖液浓缩成 2g/mL， 加无水乙醇至乙醇体积分数为 75， 4静置 12 小时 以上， 倾去上清液， 沉淀减压干燥得天南星多糖， 510g。 0017 实施例 2 天南星多糖药物胶囊的制备 0018 在实施。
11、例 1 中所得的 510g 天南星多糖粉末中加入 16g 微晶纤维素， 混匀， 过筛， 干 燥后， 制得药物胶囊的药用原料。药用原料填充入 1545 个胶囊中， 制得每个胶囊含 0.33g 天南星多糖的药物胶囊， 相当于每个胶囊含天南星生药材 3.24g。建议的用法用量 ： 成人每 天服用天南星多糖胶囊 1 次， 每次一粒， 连续服用 30 天以上。 0019 本发明并不局限于说明书中所举的实施例， 本发明的药物剂型可以是片剂、 胶囊 等各种口服使用的剂型。 0020 本发明产物在制备抗肿瘤药物中的应用通过下面的实验数据说明 ： 0021 1. 天南星多糖对小鼠黑色素瘤细胞 B16-F10 的。
12、体外抑制作用 0022 本试验取对数生长期的小鼠黑色素瘤细胞 B16-F10 单细胞悬液， 调整细胞浓度至 2105/ml， 以每孔 100l 接种于 96 孔板， 37、 5 CO2孵育 24 小时。弃上清， 每孔加入 无血清 IMDM 配制的天南星多糖 100l， 药物终浓度分别为 100g/mL， 50g/mL， 25g/ mL， 以无血清 IMDM 为对照组。每组设 4 个复孔。37、 5 CO2分别培养 24 小时， 48 小时。 离心去上清， 加入 MTS/PMS 液 40l， 37、 5 C02孵育 4 小时。离心去上清， 混匀于 490nm 处测吸光度 (A) 值。按下式计算细。
13、胞抑制率。细胞抑制率 (1- 给药组 A 值 / 对照组 A 值 )100。本发明中的天南星多糖浓度为 25 100g/mL 在体外产生对小鼠黑色素瘤 细胞 B16-F10 较明显的生长抑制， 这种抑制作用具有剂量依赖性， 具体结果如下 ： 0023 表 1 天南星多糖对小鼠黑色素瘤细胞 B16-F10 的体外抑制作用 0024 说 明 书 CN 103120700 A 4 3/3 页 5 0025 2. 天南星多糖对小鼠黑色素瘤细胞 B16-F10 人工肺转移模型的治疗作用 0026 取对数生长期小鼠黑色素瘤细胞 B16-F10， Hanks 液调整细胞浓度至 1106/ ml， C57BL。
14、/6J 小鼠尾静脉注射， 每只 0.2mL。随机分为生理盐水组， 天南星多糖高剂量 组 400mg(kgd)， 天南星多糖中剂量组 200mg(kgd)， 天南星多糖低剂量组 100mg(kgd)， 环磷酰胺组 30mg(kgd)。肿瘤接种后次日经口服灌胃给药， 每日 一次， 连续给药 30 天。于给药结束后次日脱颈椎处死小鼠， 取肺， Bouin 液固定， 解剖显微 镜下计数肺转移瘤灶数， 并将动物肺组织进行石蜡切片， 按下式计算抑制率。 0027 抑制率 (1- 给药组平均转移瘤灶数 / 生理盐水组平均转移瘤灶数 )100 0028 本发明中的天南星多糖对黑色素肿瘤 B16-F10 细胞人工肺转移模型的治疗作用 结果如下所示 ： 0029 表 2 ： 天南星对小鼠黑色素瘤细胞 B16-F10 人工肺转移的治疗作用 0030 0031 * ： 与对照组比较， P 0.05. 0032 病理观察结果 ： 显微镜下， 生理盐水组肺转移瘤组织呈巢状、 片块， 多分布于血管 周围或胸膜处， 呈多发、 散在分布， 面积较大， 偶见血管内瘤栓。 给药组肺转移瘤组织呈圆球 状居多， 多位于管周或胸膜处， 但面积较小， 甚至由几个细胞构成， 面积较大者， 可见中央或 偏位处片状坏死。上述两组瘤细胞形态大小基本一致。 说 明 书 CN 103120700 A 5 。