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1、10申请公布号CN104211699A43申请公布日20141217CN104211699A21申请号201310225328922申请日20130605C07D471/04200601A61P35/00200601A61P35/0220060171申请人首都医科大学地址100069北京市丰台区右安门外西头条10号72发明人赵明彭师奇王玉记吴建辉徐文筠54发明名称咔啉衍生物,其制备,纳米结构,抗肿瘤活性和应用57摘要咔啉衍生物，其制备，纳米结构，抗肿瘤活性和应用。本发明公开了式4AJ代表的咔啉3酰基NGNO2ARGOBZL与10种醛的缀合物。公开了它们的制备方法，公开了它们的纳米结构，公开了它。
2、们对HELA，HCT8，HL60，A549和SHSY5Y五株肿瘤细胞增殖的抑制作用，进一步公开了它们对荷S180小鼠肿瘤增长的抑制作用，结果表明本发明化合物具有优秀的抗肿瘤体内外活性。因而本发明公开了10种新型咔啉3酰基NGNO2ARGOBZL与醛的缀合物作为抗肿瘤药物的临床应用前景。51INTCL权利要求书1页说明书13页附图2页19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书1页说明书13页附图2页10申请公布号CN104211699ACN104211699A1/1页21式4AJ代表的化合物，4A中R氢，4B中R甲基，4C中R2，2二甲氧基乙基，4D中R4异丙基苯基，4E中R4硝。
3、基苯基，4F中R4羟基苯基，4G中R4羟基3甲氧基苯基，4H中R4羟基3，5二甲氧基苯基，4I中R4羟基3甲氧羰基苯基，4J中R苯基并D1，3间二氧杂环戊烯。2制备权利要求1的4AJ代表的化合物方法，该化合物包括以下步骤1L色氨酸甲酯在稀盐酸或冰醋酸催化下与醛类进行PICTETSPENGLER缩合生成3S1R2，3，4，9四氢1H吡啶并3，4B吲哚3羧酸甲酯或3S1R基取代2，3，4，9四氢1H吡啶并3，4B吲哚3羧酸与二氯亚砜甲酯化反应生成3S1R基取代2，3，4，9四氢1H吡啶并3，4B吲哚3羧酸甲酯1AJ；2将3S1R基取代2，3，4，9四氢1H吡啶并3，4B吲哚3羧酸甲酯氧化得到1R基。
4、取代9H吡啶并3，4B吲哚3羧酸甲酯2AJ；3将1R基取代9H吡啶并3，4B吲哚3羧酸甲酯水解得到1R基取代9H吡啶并3，4B吲哚3羧酸3AJ；4在13二甲氨基丙基3乙基碳二亚胺ECC和N羟基苯并三氮唑HOBT存在下1R基取代9H吡啶并3，4B吲哚3羧酸与硝基精氨酸苄酯反应得到1R基取代9H吡啶并3，4B吲哚3甲酰基硝基精氨酸苄酯4AJ；5L色氨酸在稀硫酸催化下与醛类进行PICTETSPENGLER缩合生成3S1RR基取代2，3，4，9四氢1H吡啶并3，4B吲哚3羧酸5A，B，G。3按照权利要求2所述方法，其特征在于步骤1中所述醛类选甲醛，乙醛，1，1，3，3四甲氧基丙烷，对异丙基苯甲醛，对硝。
5、基苯甲醛，对羟基苯甲醛，对羟基3甲氧基苯甲醛，对羟基3，5二甲氧基苯甲醛，对羟基3甲氧羰基苯甲醛和苯并D1，3间二氧杂环戊烯5甲醛。4按照权利要求2所述方法，其特征在于R基取代是指甲基，2，2二甲氧基乙基，4异丙基苯基，4硝基苯基，4羟基苯基，4羟基3甲氧基苯基，4羟基3，5二甲氧基苯基，4羟基3甲氧羰基苯基，苯基并D1，3间二氧杂环戊烯基取代。5权利要求1的4AJ代表的化合物的纳米结构。6权利要求1的4AJ代表的化合物的抗肿瘤细胞增殖的活性。7权利要求1的4AJ代表的化合物抑制肿瘤生长的活性。8权利要求1的4AJ代表的化合物作为抗肿瘤剂的应用。权利要求书CN104211699A1/13页3咔。
6、啉衍生物，其制备，纳米结构，抗肿瘤活性和应用发明领域0001本发明涉及10种新型咔啉衍生化合物，涉及它们的制备合成、进一步涉及它们对HELA，HCT8，HL60，A549和SHSY5Y五株肿瘤细胞细胞毒性以及对荷S180小鼠肿瘤增长的抑制作用。因而本发明涉及10种新型咔啉衍生化合物作为抗肿瘤药物的临床应用前景。本发明属于生物医药领域。背景技术0002恶性肿瘤是一种严重威胁人类健康的常见病和多发病，据统计，2010年中国城市地区主要死亡原因中，恶性肿瘤排位第一，占282，自1987年恶性肿瘤导致的死亡率排首位以来，中国城市地区的恶性肿瘤患病率一直居高不下。肿瘤的治疗方法有手术治疗，放射治疗和药物。
7、治疗。目前，化学治疗仍然是临床治疗肿瘤的主要手段。寻找新型抗肿瘤药物，一直是新药研究的热点。0003四氢咔啉类化合物，具有广泛的生物学活性。例如，它们能共价嵌入DNA双链而抑制拓扑异构酶和细胞周期蛋白依赖性激酶的活性，发挥抗肿瘤作用。从本质上看，这样产生的抗肿瘤作用属于细胞毒作用。四氢咔啉类化合物的毒性可来源于它们的细胞毒作用。0004发明人认为，四氢咔啉的1位由苯基取代，或3位由苄酯基取代，然后整个分子平面化。这样一来，一方面可使它们不以共价键的方式嵌入DNA双链而消去细胞毒作用，另一方面可使它们通过分子间的相互作用形成纳米结构而保留抗肿瘤作用。按照这些认识，发明人提出式4AJ代表1取代咔啉。
8、3甲酰硝基精氨酸苄酯的发明。与其它咔啉类抗肿瘤剂相比，本发明的突出创造性在于1四氢咔啉芳构化为咔啉而实现了分子平面化；21位由各种苯基取代增强了分子平面化；3或3位由羰基硝基精氨酸苄酯取代增强了分子平面化；4平面化的咔啉通过分子之间的相互作用形成纳米结构。这些创造性使得4AJ代表1取代咔啉3甲酰硝基精氨酸苄酯在MTT法测定的细胞毒作用弱，在小鼠上的抗肿瘤作用强，在透射电镜上测得纳米结构。发明内容0005本发明的第一个内容是提供1R取代咔啉3酰基NGNO2ARGOBZL4AJ。4AJ的4A中R氢；4B中R甲基；4C中R2，2二甲氧基乙基；4D中R4异丙基苯基；4E中R4硝基苯基；4F中R4羟基苯。
9、基；4G中R4羟基3甲氧基苯基；4H中R4羟基3，5二甲氧基苯基；4I中R4羟基3甲氧羰基苯基；4J中R苯基并D1，3间二氧杂环戊烯。0006说明书CN104211699A2/13页40007本发明的第二个内容是提供1R取代咔啉3酰基NGNO2ARGOBZL4AJ的制备方法，该方法包括00081L色氨酸甲酯在稀盐酸或冰醋酸催化下与醛类进行PICTETSPENGLER缩合，或3S1R取代2，3，4，9四氢1H吡啶并3，4B吲哚3羧酸与二氯亚砜及甲醇酯化生成3S1RR取代2，3，4，9四氢1H吡啶并3，4B吲哚3羧酸甲酯1AJ；000923S1R取代2，3，4，9四氢1H吡啶并3，4B吲哚3羧酸甲。
10、酯氧化得到3S1R取代1H吡啶并3，4B吲哚3羧酸甲酯2AJ；001033S1R取代1H吡啶并3，4B吲哚3羧酸甲酯2AJ水解得到3S1R取代1H吡啶并3，4B吲哚3羧酸3AJ；00114在13二甲氨基丙基3乙基碳二亚胺ECC和N羟基苯并三氮唑HOBT存在下3S1R取代1H吡啶并3，4B吲哚3羧酸3AJ与硝基精氨酸苄酯反应得到1R取代咔啉3酰基NGNO2ARGOBZL4AJ。0012本发明的第三个内容是评价1R取代咔啉3酰基NGNO2ARGOBZL4AJ抗肿瘤细胞增殖活性，即细胞毒作用。0013本发明的第四个内容是评价1R取代咔啉3酰基NGNO2ARGOBZL4AJ对荷S180小鼠肿瘤生长的抑。
11、制作用。0014本发明的第五个内容是测定1R取代咔啉3酰基NGNO2ARGOBZL4AJ的纳米结构。附图说明0015图153硝基胍基21R9H吡啶并3，4B吲哚3甲酰氨基戊酸苄酯R选自氢，甲基，2，2二甲氧基乙基，4异丙基苯基，4硝基苯基，4羟基苯基，4羟基3甲氧基苯基，4羟基3，5二甲氧基苯基，4羟基3甲氧羰基苯基，苯基并D1，3间二氧杂环戊烯的制备路线I浓盐酸/浓硫酸、甲醇、加热；IIKMNO4/DDQ/SEO2、四氢呋喃/丙酮/二氧六环；IIINAOH水溶液4M、甲醇/四氢呋喃；IVEDC、N甲基吗啉、N，N二甲基甲酰胺；V甲醇、二氯亚砜。0016图2化合物4AJ的透射电镜图。具体实施方。
12、式0017为了进一步阐述本发明，下面给出一系列实施例。这些实施例完全是例证性的，它们仅用来对本发明进行具体描述，不应当理解为对本发明的限制。0018实施例1制备L色氨酸甲酯盐酸盐0019100ML甲醇中，冰浴下逐滴加入28MLSOCL2，干燥活化半小时后加入2244G110MMOLL色氨酸，常温反应24H，利用薄层层析TLC监测至原料斑点消失，停止反应，加压浓缩至干，再加入30ML甲醇，摇匀后再抽干，重复两次，再加入乙醚30ML，抽说明书CN104211699A3/13页5干乙醚，再重复两次，即得258G923标题化合物，为淡紫灰色固体。ESIMSM/E219MH。0020实施例2制备硝基精氨。
13、酸002120ML浓硫酸与20ML发烟硝酸混合后，冰盐浴下搅拌，缓慢分批加入118G678MMOLL精氨酸，冰浴反应4H。加入24ML冰水后浓氨水调PH8有白色沉淀生成，再用冰醋酸调PH6，4结晶过夜。冷热水重结晶，得874G587标题化合物，为无色固体。ESIMSM/E218MH。0022实施例3制备硝基精氨酸苄酯002382G376MMOLNGNO2ARG与93G489MMOL对甲苯磺酸溶于40ML苄醇与40ML环己烷中，油浴90加热反应，TLC监测原料点消失后，反应液中加入大量乙醚反复磨洗，得12G663标题化合物，为无色膏状固体。ESIMSM/E482MH。0024实施例4制备3S2，。
14、3，4，9四氢1H吡啶并3，4B吲哚3羧酸5A0025400ML水与02ML浓硫酸中，搅拌均匀后加入5G245MMOL色氨酸，超声溶解后加入10ML甲醛，反应一小时后出现白色沉淀，反应6H后用浓氨水调PH6，沉淀完全后过滤，得52G983标题化合物，为淡黄色固体。ESIMSM/E215MH。0026实施例5制备3S2，3，4，9四氢1H吡啶并3，4B吲哚3羧酸甲酯1A0027120ML甲醇中，冰浴搅拌下逐滴加入64ML二氯亚砜，半小时后加入52G241MMOL3S2，3，4，9四氢1H吡啶并3，4B吲哚3羧酸，反应两天后出现沉淀，抽干反应液后加入等量乙酸乙酯与饱和NAHCO3水溶液，充分搅拌后。
15、萃取得到酯层，酯层用饱和NACL水溶液洗至中性后减压浓缩，所得粗品经硅胶柱层析纯化二氯甲烷甲醇，1001301，得到24G426标题化合物，为淡黄色固体。ESIMSM/E231MH。0028实施例6制备9H吡啶并3，4B吲哚3羧酸甲酯2A00291G43MMOL3S2，3，4，9四氢1H吡啶并3，4B吲哚3羧酸甲酯溶于100ML丙酮中，冰浴下加入1G63MMOL高锰酸钾，TLC检测紫外点消失荧光点出现后过滤反应液，减压浓缩后硅胶柱层析纯化石油醚丙酮，5113，得到460MG468标题化合物，为淡黄色固体。ESIMSM/E227MH。0030实施例7制备9H吡啶并3，4B吲哚3羧酸3A00312。
16、60MG12MMOL9H吡啶并3，4B吲哚3羧酸甲酯溶解于20ML甲醇与20ML四氢呋喃中，使用NAOH水溶液4M调PH12，反应过夜后TLC监测荧光点出现在原点，饱和KHSO4水溶液调反应液PH7，减压浓缩后固体用水溶解后使用5KHSO4水溶液调PH2出现沉淀，过滤得215MG882标题化合物，为淡黄色固体。ESIMSM/E211MH。0032实施例8制备53硝基胍基29H吡啶并3，4B吲哚3甲酰氨基戊酸苄酯4A0033186MG09MMOL9H吡啶并3，4B吲哚3羧酸，201MG1MMOL13二甲氨基丙基3乙基碳二亚胺EDC，123MG09MMOL1羟基苯并三唑HOBT溶解于30MLN，N。
17、二甲基甲酰胺DMF中，冰浴搅拌半小时后加入826MG17MMOLNGNO2ARGOBZL，N甲基吗啉NMM调PH8，反应一天后TLC监测出现荧光新点，反应液吹干后硅胶柱层析纯化二氯甲烷甲醇，2001201，得到120MG272标题化合物，为无色固说明书CN104211699A4/13页6体。RF041二氯甲烷甲醇，301；MP115116；C1，CH3OH；ESIMSM/E504MH；1HNMR300MHZ，DMSOD6/PPM1199S，1H，894886M，3H，851S，1H，842D，J78HZ，1H，795S，1H，769758M，2H，740729M，6H，519S，2H，467D。
18、D，J178HZ，J2141HZ，1H，319D，J63HZ，2H，195D，J51HZ，2H，161D，J66HZ，2H；纯度982，流动相CH3OHH2O8515，保留时间92MIN。0034实施例9制备3S1甲基2，3，4，9四氢1H吡啶并3，4B吲哚3羧酸5B0035按实施例4的方法，由10G49MMOL色氨酸与30ML乙醛反应得到11G973标题化合物，为黄色固体。ESIMSM/E229MH。0036实施例10制备3S1甲基2，3，4，9四氢1H吡啶并3，4B吲哚3羧酸甲酯1B0037按实施例5的方法，由11G478MMOL3S1甲基2，3，4，9四氢1H吡啶并3，4B吲哚3羧酸，1。
19、6ML二氯亚砜与300ML甲醇反应得到18G153标题化合物，为黄色固体。ESIMSM/E245MH。0038实施例11制备1甲基9H吡啶并3，4B吲哚3羧酸甲酯2B003918G73MMOL3S1甲基2，3，4，9四氢1H吡啶并3，4B吲哚3羧酸甲酯溶于30ML丙酮，冰浴下加入33G145MMOL二氯二氰基苯醌DDQ，反应一天后TLC监测出现荧光点，反应液减压浓缩后硅胶柱层析纯化二氯甲烷甲醇，1001201，得到1G565标题化合物，为黄色固体。ESIMSM/E241MH。0040实施例12制备1甲基9H吡啶并3，4B吲哚3羧酸3B0041按实施例7的方法，由560MG23MMOL1甲基9H。
20、吡啶并3，4B吲哚3羧酸甲酯制备得到450MG854标题化合物，为黄色固体。ESIMSM/E225MH。0042实施例13制备53硝基胍基21甲基9H吡啶并3，4B吲哚3甲酰氨基戊酸苄酯4B0043按实施例8的方法，由450MG2MMOL1甲基9H吡啶并3，4B吲哚3羧酸，460MG24MMOLEDC，270MG2MMOLHOBT，144G3MMOLNGNO2ARGOBZL反应得到60MG6标题化合物，为淡黄色固体。RF045二氯甲烷甲醇，301；MP116117C；C1，CH3OH；ESIMSM/E518MH；1HNMR300MHZ，DMSOD6/PPM1199S，1H，881D，J78HZ。
21、，1H，869S，1H，852S，1H，835D，J78HZ，1H，797783M，2H，767756M，2H，740734M，7H，519S，2H，467DD，J184HZ，J2138HZ，1H，319D，J66HZ，2H，286S，3H，200191M，2H，161156M，2H；纯度991，流动相CH3OHH2O8515，保留时间117MIN。0044实施例14制备3S12，2二甲氧基乙基2，3，4，9四氢1H吡啶并3，4B吲哚3羧酸甲酯1C00455G196MMOL色氨酸甲酯溶解于50ML甲醇中，加入32ML1，1，3，3四甲氧基丙烷与5ML三氟乙酸，反应TLC监测出现新点后2H用浓氨。
22、水调PH7，过滤得49G79标题化合物，为淡黄色固体。ESIMSM/E319MH。0046实施例15制备12，2二甲氧基乙基9H吡啶并3，4B吲哚3羧酸甲酯2C说明书CN104211699A5/13页70047按实施例6的方法，由49G154MMOL3S12，2二甲氧基乙基2，3，4，9四氢1H吡啶并3，4B吲哚3羧酸甲酯，47G30MMOL高锰酸钾反应得到12G248标题化合物，为淡黄色固体。ESIMSM/E315MH。0048实施例16制备12，2二甲氧基乙基9H吡啶并3，4B吲哚3羧酸3C0049按实施例7的方法，由820MG26MMOL12，2二甲氧基乙基9H吡啶并3，4B吲哚3羧酸甲。
23、酯反应得到601MG768标题化合物，为淡黄色固体。ESIMSM/E299MH。0050实施例17制备53硝基胍基212，2甲氧基乙基9H吡啶并3，4B吲哚3甲酰氨基戊酸苄酯4C0051按实施例8的方法，由600MG2MMOL12，2二甲氧基乙基9H吡啶并3，4B吲哚3羧酸，600MG31MMOLEDC，352MG26MMOLHOBT，15G31MMOLNGNO2ARGOBZL反应得到300MG254标题化合物，为黄色固体。RF048二氯甲烷甲醇，301；MP9899；C1，CH3OH；ESIMSM/E592MH；1HNMR300MHZ，DMSOD6/PPM1201S，1H，883D，J81H。
24、Z，1H，872S，1H，837D，J78HZ，1H，816779M，2H，768757M，2H，741736M，6H，520S，2H，469DD，J184HZ，J2141HZ，1H，370S，1H，349D，J6HZ，2H，330S，6H，319D，J6HZ，2H，298DD，J169HZ，J2135HZ，2H，161159M，2H；纯度981，流动相CH3OHH2O8515，保留时间119MIN。0052实施例18制备3S14异丙基苯基2，3，4，9四氢1H吡啶并3，4B吲哚3羧酸甲酯1D0053168G66MMOL色氨酸甲酯溶于30ML甲醇中，加入09ML枯茗醛，浓HCL调PH2，反应在。
25、80油浴下进行，半天后TLC监测反应出现新点，反应液加入乙酸乙酯与饱和NAHCO3水溶液，萃取，收集酯层，减压浓缩后硅胶柱层析纯化二氯甲烷甲醇，1001201，得146G60标题化合物，为黄色固体。ESIMSM/E349MH。0054实施例19制备14异丙基苯基9H吡啶并3，4B吲哚3羧酸甲酯2D0055146G4MMOL3S14异丙基苯基2，3，4，9四氢1H吡啶并3，4B吲哚3羧酸甲酯溶于40ML二氧六环中，加入057G51MMOL二氧化硒，反应在90油浴下进行，半天后TLC监测反应出现新点，过滤反应液得13G90标题化合物，为黄色固体。ESIMSM/E345MH。0056实施例20制备1。
26、4异丙基苯基9H吡啶并3，4B吲哚3羧酸3D0057按实施例7的方法，由13G36MMOL14异丙基苯基9H吡啶并3，4B吲哚3羧酸甲酯反应得到12G96标题化合物，为黄色固体。ESIMSM/E329MH。0058实施例21制备53硝基胍基214异丙基苯基9H吡啶并3，4B吲哚3甲酰氨基戊酸苄酯4D0059按实施例8的方法，由04G11MMOL14异丙基苯基9H吡啶并3，4B吲哚3羧酸，269MG14MMOLEDC，148MG11MMOLHOBT，673MG14MMOLNGNO2ARGOBZL反应得到100MG141标题化合物，为黄色固体。RF049二氯甲说明书CN104211699A6/13。
27、页8烷甲醇，301；MP113114；C1，CH3OH；ESIMSM/E624MH；1HNMR300MHZ，DMSOD6/PPM1187S，1H，890D，J84HZ，1H，883S，1H，852S，1H，839D，J78HZ，1H，804D，J84HZ，3H，760S，1H，771730M，10H，520S，2H，478470M，1H，321318M，2H，312300M，1H，205189M，2H，163159M，2H；纯度991，流动相110MINCH3OHH2O8515，1030MINCH3OHH2O9010，保留时间188MIN。0060实施例22制备3S14硝基苯基2，3，4，9四。
28、氢1H吡啶并3，4B吲哚3羧酸甲酯1E006112G47MMOL色氨酸甲酯溶于30ML甲醇中，加入077G51MMOL对硝基苯甲醛，浓HCL调PH2，反应在80油浴下进行，一天后TLC监测反应出现新点，反应液用饱和NAHCO3水溶液调至中性，减压浓缩后硅胶柱层析二氯甲烷甲醇，1001分离得11G611标题化合物，为黄色固体。ESIMSM/E352MH。0062实施例23制备14硝基苯基9H吡啶并3，4B吲哚3羧酸甲酯2E00631G28MMOL3S14硝基苯基2，3，4，9四氢1H吡啶并3，4B吲哚3羧酸甲酯与13G57MMOLDDQ溶解于丙酮中，反应过夜后TLC监测有荧光新点生成，反应液有大。
29、量不溶物，过滤反应液得730MG739标题化合物，为黄色固体。ESIMSM/E348MH。0064实施例24制备14硝基苯基9H吡啶并3，4B吲哚3羧酸3E0065按实施例7的方法，由730MG21MMOL14硝基苯基9H吡啶并3，4B吲哚3羧酸甲酯反应得690MG986标题化合物，为黄色固体。ESIMSM/E332MH。0066实施例25制备53硝基胍基214硝基苯基9H吡啶并3，4B吲哚3甲酰氨基戊酸苄酯4E0067按实施例8的方法，由690MG21MMOL14硝基苯基9H吡啶并3，4B吲哚3羧酸，484MG25MMOLEDC，283MG21MMOLHOBT，12G25MMOLNGNO2A。
30、RGOBZL反应得到296MG226标题化合物，为黄色固体。RF056二氯甲烷甲醇，301；MP121122；C1，CH3OH；ESIMSM/E626MH；1HNMR300MHZ，DMSOD6/PPM1209S，1H，894S，2H，850842M，5H，796S，1H，773762M，2H，740731M，6H，520S，2H，473DD，J181HZ，J2132HZ，1H，321D，J48HZ，2H，219DD，J172HZ，J2138HZ，2H，164160M，2H；纯度981，流动相110MINCH3OHH2O8515，1030MINCH3OHH2O9010，保留时间159MIN。00。
31、68实施例26制备3S14羟基苯基2，3，4，9四氢1H吡啶并3，4B吲哚3羧酸甲酯1F006931G122MMOL色氨酸甲酯与15G123MMOL对羟基苯甲醛溶30ML甲醇中，浓HCI调PH2，反应在80油浴下进行，一天后TLC监测反应出现新点，反应液用饱和NAHCO3水溶液调至中性，减压浓缩后甲醇溶解有不溶物生成，过滤得3G759标题化合物，为黄色固体。ESIMSM/E323MH。0070实施例27制备14羟基苯基9H吡啶并3，4B吲哚3羧酸甲酯2F0071按实施例6的方法，由3G93MMOL3S14羟基苯基2，3，4，9四氢1H吡说明书CN104211699A7/13页9啶并3，4B吲哚。
32、3羧酸甲酯，25G11MMOLDDQ反应得11G372标题化合物，为黄色固体。ESIMSM/E319MH。0072实施例28制备14羟基苯基9H吡啶并3，4B吲哚3羧酸3F0073按实施例7的方法，由1G31MMOL14羟基苯基9H吡啶并3，4B吲哚3羧酸甲酯反应得到550MG575标题化合物，为黄色固体。ESIMSM/E303MH。0074实施例29制备53硝基胍基214羟基苯基9H吡啶并3，4B吲哚3甲酰氨基戊酸苄酯4F0075按实施例8的方法，由550MG18MMOL14羟基苯基9H吡啶并3，4B吲哚3羧酸，417MG22MMOLEDC，244MG18MMOLHOBT，1G21MMOLN。
33、GNO2ARGOBZL反应得到320MG297标题化合物，为无色固体。RF055二氯甲烷甲醇，301；MP124125；C1，CH3OH；ESIMSM/E596MH；1HNMR300MHZ，DMSOD6/PPM1178S，1H，987S，1H，887D，J81HZ，1H，877S，1H，852S，1H，839D，J78HZ，1H，800D，J87HZ，3H，772757M，2H，741729M，6H，704D，J84HZ，2H，520S，2H，477470M，1H，320D，J63HZ，2H，205188M，2H，163158M，2H；纯度996，流动相CH3OHH2O9010，保留时间112。
34、MIN。0076实施例30制备3S14羟基3甲氧基苯基2，3，4，9四氢1H吡啶并3，4B吲哚3羧酸5G0077800MG39MMOL色氨酸与1G74MMOL香草醛混旋于12ML冰醋酸中，反应在50油浴下进行，反应两小时后溶液澄清三小时后出现无色沉淀，过滤反应液得591MG446标题化合物，为无色固体。ESIMSM/E337MH。0078实施例31制备3S14羟基3甲氧基苯基2，3，4，9四氢1H吡啶并3，4B吲哚3羧酸甲酯1G0079按实施例5的方法，由591MG17MMOL3S14羟基3甲氧基苯基2，3，4，9四氢1H吡啶并3，4B吲哚3羧酸，10ML甲醇，05ML二氯亚砜反应得到610M。
35、G992标题化合物，为黄色固体。ESIMSM/E353MH。0080实施例32制备14羟基3甲氧基苯基9H吡啶并3，4B吲哚3羧酸甲酯2G0081610MG17MMOL3S14羟基3甲氧基苯基2，3，4，9四氢1H吡啶并3，4B吲哚3羧酸甲酯与606MG27MMOLDDQ溶解于四氢呋喃中，反应过夜后TLC监测有荧光新点生成，反应液有黄色不溶物，过滤反应液得310MG50标题化合物，为黄色固体。ESIMSM/E349MH。0082实施例33制备14羟基3甲氧基苯基9H吡啶并3，4B吲哚3羧酸3G0083按实施例7的方法，由310MG089MMOL14羟基3甲氧基苯基9H吡啶并3，4B吲哚3羧酸甲。
36、酯反应得到200MG673标题化合物，为黄色固体。ESIMSM/E333MH。0084实施例34制备53硝基胍基214羟基3甲氧基苯基9H吡啶并说明书CN104211699A8/13页103，4B吲哚3甲酰氨基戊酸苄酯4G0085按实施例8的方法，由603MG18MMOL14羟基3甲氧基苯基9H吡啶并3，4B吲哚3羧酸，416MG22MMOLEDC，244MG18MMOLHOBT，1G22MMOLNGNO2ARGOBZL反应得到180MG16标题化合物，为黄色固体。RF046二氯甲烷甲醇，301；MP123124；C1，CH3OH；ESIMSM/E626MH；1HNMR300MHZ，DMSOD。
37、6/PPM1183S，1H，946S，1H，894D，J81HZ，1H，877S，1H，853S，1H，840D，J81HZ，1H，800S，1H，776729M，11H，702D，J66HZ，2H，520S，2H，470DD，J181HZ，J2138HZ，1H，393S，3H，319D，J57HZ，2H，200196M，2H，162156M，2H；纯度993，流动相CH3OHH2O9010，保留时间103MIN。0086实施例35制备3S14羟基3，5二甲氧基苯基2，3，4，9四氢1H吡啶并3，4B吲哚3羧酸甲酯1H0087255G10MMOL色氨酸甲酯与234G128MMOL丁香醛溶于13。
38、0ML甲醇中，加入1ML浓H2SO4，反应在80油浴下进行，反应两天后TLC监测新点生成，反应液用饱和NAHCO3水溶液调至中性，减压浓缩后用乙酸乙酯溶解有不溶物生成，过滤得3G612标题化合物，为无色固体。ESIMSM/E383MH。0088实施例36制备14羟基3，5二甲氧基苯基9H吡啶并3，4B吲哚3羧酸甲酯2H008913G34MMOL3S14羟基3，5二甲氧基苯基2，3，4，9四氢1H吡啶并3，4B吲哚3羧酸甲酯溶于40ML丙酮中，加入850MG77MMOL二氧化硒，反应在80油浴下进行，一天后TLC监测反应出现新点，过滤反应液，滤液减压浓缩后硅胶柱层析丙酮石油醚，31分离得600M。
39、G43标题化合物，为黄色固体。ESIMSM/E379MH。0090实施例37制备14羟基3，5二甲氧基苯基9H吡啶并3，4B吲哚3羧酸3H0091按实施例7的方法，由600MG16MMOL14羟基3，5二甲氧基苯基9H吡啶并3，4B吲哚3羧酸甲酯反应得到230MG399标题化合物，为黄色固体。ESIMSM/E363MH。0092实施例38制备53硝基胍基214羟基3，5二甲氧基苯基9H吡啶并3，4B吲哚3甲酰氨基戊酸苄酯4H0093按实施例8的方法，由200MG05MMOL14羟基3，5二甲氧基苯基9H吡啶并3，4B吲哚3羧酸，128MG067MMOLEDC，75MG056MMOLHOBT，3。
40、20MG067MMOLNGNO2ARGOBZL反应得到208MG578标题化合物，为黄色固体。RF044二氯甲烷甲醇，301；MP109110；C1，CH3OH；ESIMSM/E；656MH；1HNMR300MHZ，DMSOD6/PPM1185S，1H，895S，1H，879S，2H，842836M，1H，795S，1H，771735M，10H，520S，2H，470DD，J178HZ，J2138HZ，1H，392S，6H，320D，J6HZ，2H，200192M，2H，165155M，2H；纯度995，流动相CH3OHH2O9010，保留时间98MIN。0094实施例39制备3S14羟基3甲。
41、氧羰基苯基2，3，4，9四氢1H吡啶并说明书CN104211699A109/13页113，4B吲哚3羧酸苄酯1I0095360MG2MMOL水杨醛甲酯与600MG21MMOL色氨酸苄酯溶解于40ML甲醇中，加入03ML浓盐酸，反应在80油浴下进行，反应一天后TLC监测新点生成，反应液用饱和NAHCO3水溶液调至中性，减压浓缩后硅胶柱层析二氯甲烷；甲醇，1001301得400MG438标题化合物，为黄色固体。ESIMSM/E457MH。0096实施例40制备14羟基3甲氧羰基苯基9H吡啶并3，4B吲哚3羧酸苄酯2I0097按实施例32的方法，由400MG09MMOL3S14羟基3甲氧羰基苯基2，。
42、3，4，9四氢1H吡啶并3，4B吲哚3羧酸苄酯，400MG18MMOLDDQ反应得到280MG701标题化合物，为黄色固体。ESIMSM/E453MH。0098实施例41制备14羟基3甲氧羰基苯基9H吡啶并3，4B吲哚3羧酸3I0099280MG06MMOL14羟基3甲氧羰基苯基9H吡啶并3，4B吲哚3羧酸苄酯溶解于50ML甲醇与50ML二氯甲烷中，加入60MG钯碳，反应液抽气三分钟后通三分钟氢气，重复三次，反应在氢气环境中进行，反应两天后TLC监测荧光点出现在原点，过滤反应液，滤液减压浓缩得200MG893标题化合物，为黄色固体。ESIMSM/E361MH。0100实施例42制备53硝基胍基。
43、214羟基3甲氧羰基苯基9H吡啶并3，4B吲哚3甲酰氨基戊酸苄酯4I0101按实施例8的方法，由200MG06MMOL14羟基3甲氧羰基苯基9H吡啶并3，4B吲哚3羧酸，142MG07MMOLEDC，83MG06MMOLHOBT，357MG07MMOLNGNO2ARGOBZL反应得到80MG198标题化合物，为无色固体。RF053二氯甲烷甲醇，301；MP134135；C1，CH3OH；ESIMSM/E654MH；1HNMR300MHZ，DMSOD6/PPM1192S，1H，1075S，1H，888D，J81HZ，1H，883S，1H，846824M，3H，795S，1H，771727M，9H。
44、，521S，2H，472D，J58HZ，1H，395S，3H，320D，J6HZ，2H，201196M，2H，164159M，2H；纯度991，流动相CH3OHH2O9010，保留时间121MIN。0102实施例43制备3S1苯基并D1，3间二氧杂环戊烯2，3，4，9四氢1H吡啶并3，4B吲哚3羧酸甲酯1J0103按实施例26的方法，由25G98MMOL色氨酸甲酯与18G12MMOL胡椒醛反应得到11G324标题化合物，为无色固体。ESIMSM/E351MH。0104实施例44制备1苯基并D1，3间二氧杂环戊烯9H吡啶并3，4B吲哚3羧酸甲酯2J0105按实施例23的方法，由1G28MMOL3。
45、S1苯基并D1，3间二氧杂环戊烯2，3，4，9四氢1H吡啶并3，4B吲哚3羧酸甲酯与970MG43MMOLDDQ反应得到900MG91标题化合物，为黄色固体。ESIMSM/E347MH。0106实施例45制备1苯基并D1，3间二氧杂环戊烯9H吡啶并3，4B吲哚3羧酸3J0107按实施例7的方法，由900MG26MMOL1苯基并D1，3间二氧杂环戊说明书CN104211699A1110/13页12烯9H吡啶并3，4B吲哚3羧酸甲酯反应得到770MG892标题化合物，为黄色固体。ESIMSM/E331MH。0108实施例46制备53硝基胍基21苯基并D1，3间二氧杂环戊烯9H吡啶并3，4B吲哚3甲。
46、酰氨基戊酸苄酯4J0109按实施例8的方法，由770MG23MMOL1苯基并D1，3间二氧杂环戊烯9H吡啶并3，4B吲哚3羧酸，534MG28MMOLEDC，313MG23MMOLHOBT，13G28MMOLNGNO2ARGOBZL反应得到150MG104标题化合物，为无色固体。RF059二氯甲烷甲醇，301；MP115116；C1，CH3OH；ESIMSM/E624MH；1HNMR300MHZ，DMSOD6/PPM1185S，1H，892D，J84HZ，1H，881S，1H，853S，1H，841D，J78HZ，1H，802776M，2H，775758M，5H，741722M，6H，7217。
47、18M，1H，618S，2H，520S，2H，476469M，1H，319D，J63HZ，2H，204189M，2H，163158M，2H；纯度982，流动相CH3OHH2O9010，保留时间113MIN。0110实验例1评价4AJ抗肿瘤细胞毒活性0111分别将生长状态良好，处于对数生长期的HL60人早幼粒白血病细胞，HCT8人结肠癌细胞，HELA人宫颈癌细胞，A549人肺癌细胞和SHSY5Y人神经瘤细胞母细胞分别按照5104个/ML的密度接种于96孔板，每孔100L。在37，5CO2培养箱中培养4小时，按预设的浓度梯度100M，50M，25M，125M和625M加入经灭菌处理的4AJ，采用阿。
48、霉素作对照。继续培养48小时后，每孔加25L浓度为5MG/ML的MTT溶液，置于37孵育4小时，小心除去上清液悬浮细胞经离心后除去上清液后每孔加入100LDMSO二甲基亚砜，振荡约15MIN溶解沉淀。立即于酶标仪上570NM波长下测定OD吸光度值。以生长抑制率对照组平均OD值一样品组平均OD值/空白组平均OD值100，实验重复3次，求出每一个浓度下的样品对肿瘤细胞的抑制率抑制率对药物浓度作图，求IC50半数有效抑制浓度值。实验结果见表1。数据表明，4AJ对五种细胞增殖的IC50313M，即显示弱细胞毒作用。0112表14AJ抗肿瘤细胞增殖活性IC50SDM说明书CN104211699A1211/13页1301130114实验例2评价4AJ抗肿瘤生长活性0115测定前将本发明的化合物加吐温80助溶，悬浮于05羧甲基纤维素钠水溶液中。无菌条件下取接种于ICR小鼠710天的S180肉瘤，加入适量生理盐水配制成瘤细胞悬液，细胞数为2107/ML，接种于健康雄性ICR小鼠前肢腋皮下，每只小鼠注射02ML。肿瘤接种24H后，治疗组小鼠每日口服02ML4AJ的水溶液，4AJ剂量为1MOL/KG。空白组小鼠每日口服02ML05羧甲基纤维素钠水溶液。以阿霉素腹腔注射剂量为2MOL/KG作阳性对照。实验进行至第8天，称小鼠体重，并剖取各组小鼠的肿瘤称重，。