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1、(10)申请公布号 CN 102854273 A (43)申请公布日 2013.01.02 CN 102854273 A *CN102854273A* (21)申请号 201210326788.6 (22)申请日 2012.09.06 G01N 30/60(2006.01) G01N 30/26(2006.01) (71)申请人 北京万全德众医药生物技术有限公 司 地址 102200 北京市昌平区科技园区超前路 37 号 6 号楼 4 层 1022 号 (72)发明人 陈东 李倩 郭夏 宋雪梅 (54) 发明名称 一种用液相色谱法分离测定度洛西汀原料及 其制剂的方法 (57) 摘要 本发明属分。
2、析化学领域， 具体公开了一种用 液相色谱法分离测定度洛西汀有关物质的方法， 该方法以十八烷基硅烷键合硅胶为填料的色谱 柱， 以一定比例的无机盐缓冲液有机相为流动 相， 定量测定度洛西汀及其有关物质的含量， 从而 有效控制度洛西汀及含度洛西汀制剂产品的质 量。本发明方法专属性强， 准确度高， 操作简便。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 4 页 附图 3 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书 1 页 说明书 4 页 附图 3 页 1/1 页 2 1. 一种液相色谱法分离测定度洛西汀有关物质的方法， 其特征在于 ： 十八烷基硅烷键 合硅胶为填。
3、料的色谱柱， 以一定比例的无机盐缓冲液有机相为流动相。 2. 根据权利要求 1 所述的分离测定方法， 色谱柱优选自品牌为 Kromasil 和 Merck 的 色谱柱。 3. 根据权利要求 1 所述的分离测定方法， 所说的有机相选自以下溶剂中的一种 ： 甲 醇、 乙腈、 丙醇、 异丙醇 ； 并进一步优选为甲醇或乙腈。 4. 根据权利要求 1 所述的分离测定方法， 所说的无机盐缓冲溶液中的缓冲盐， 选自以 下无机盐 ： 磷酸二氢钾、 磷酸二氢钠、 碳酸氢钠、 高氯酸。 5. 根据权利要求 5 方法中， 所说的缓冲溶液中所含缓冲盐的浓度为 0.02 0.05M， 并 进一步优选为磷酸二氢钾。 6.。
4、 根据权利要求 1 所述的分离测定方法， 所说的缓冲液的 pH 值为 3 5。 7. 根据权利要求 1 所述的分离测定方法， 其特征在于， 包括以下几个步骤 ： 1） 取度洛西汀或含度洛西汀的制剂样品适量， 分别用乙醇或流动相溶解样品， 配制成 每 1mL 含度洛西汀 0.1 1.5mg 的样品溶液 ； 2） 设置流动相流速为 0.5 1.5mL/min， 检测波长为 210 250nm， 色谱柱柱箱温度为 20 40 ； 3） 取 1） 的样品溶液 10 50L， 注入液相色谱仪， 完成度洛西汀及其有关物质的分离 测定。 8. 根据权利要求 5 方法中， 所说的缓冲溶液中所含缓冲液的浓度优选。
5、为 0.05M。 9. 根据权利要求 6 所述的分析分离方法， 缓冲液的 pH 值优选为 7.0。 10. 根据权利要求 8 所述的分析分离方法， 步骤 2） 所说的流动相流速优选为 1.0mL/ min， 所说的检测波长优选为 220 nm。 权 利 要 求 书 CN 102854273 A 2 1/4 页 3 一种用液相色谱法分离测定度洛西汀原料及其制剂的方法 技术领域 0001 本发明属于分析化学领域， 具体涉及一种液相色谱法分离测定度洛西汀原料及其 有关物质的方法。 背景技术 0002 度洛西汀是一种 5- 羟色胺和去甲肾上腺素再提取双重抑制剂， 用于治疗各种抑 郁症和焦虑症， 以及缓。
6、解中枢性疼痛如糖尿病外周神经病性疼痛和妇女纤维肌痛等的药 物， 其化学名为 (S)-(+)-N- 甲基 -3-(1- 萘氧基 )-3-(2- 噻吩 ) 丙胺盐酸盐， 分子式为 C18H18NOS HCl。度洛西汀结构式为 ： 在合成该化合物的过程中， 有几个重要的中间体可能会由于去除不完全而影响药物 的纯度和质量， 这几个中间体即药物质量控制中的有关物质， 对于度洛西汀的合成主要 控制的有关物质有四个， 分别是中间体 1（Dimethyl- 3-(naphthalene- 1-yloxy)-3 -thiophen- 2-yl-propyl- amine） 、 中间体 2（Methyl- 3-(。
7、naphthalene- 1-yloxy)-3- thiophen-2- yl-propyl-carbamic aicd phenyl ester） 、 中间体 3（Phenol） 、 中间体 4 （Naphthalen-1-ol） 、 结构式分别为 ： 中间体 1 中间体 2 中间体 3 中间体 4 对于合成度洛西汀中引入的有关物质， 不论是在原料药还是制剂中都是需要进行质量 控制的， 因此， 实现度洛西汀及其有关物质的分离， 在度洛西汀的合成和制剂过程的质量控 制方面具有重要的现实意义。 发明内容 0003 本发明的目的在于提供一种分析度洛西汀的纯度以及分离其有关物质的方法， 从 而实现度。
8、洛西汀与其有关物质的分离和测定， 保证度洛西汀及含度洛西汀制剂的质量。 0004 本发明所述的用液相色谱法分析度洛西汀的纯度以及分离其有关物质的方法， 是 采用十八烷基硅烷键合硅胶为填料的色谱柱， 以一定比例的无机盐缓冲液有机相为流动 相。 说 明 书 CN 102854273 A 3 2/4 页 4 0005 上 述 所 说 的 色 谱 柱 以 十 八 烷 基 硅 烷 键 合 硅 胶 为 填 料， 选 自 Kromasil Eternity5-C18。 0006 上述所说的有机相选自以下溶剂中的一种 ： 甲醇、 乙腈、 丙醇、 异丙醇， 优选为甲醇 或乙腈。 0007 上述所说的方法， 其流。
9、动相无机盐缓冲液 - 有机相采用梯度洗脱。 0008 上述所说的方法中， 无机盐缓冲液中包含的无机盐选自磷酸二氢钾、 磷酸二氢钠、 碳酸氢钠、 高氯酸， 优选为磷酸二氢钾。 0009 其中无机盐缓冲液中包含的无机盐的浓度为 0.01 0.05M， 优选浓度为 0.05M。 0010 本发明所述的分离测定方法， 可按照以下方法实现 ： 1) 取度洛西汀或含度洛西汀的制剂样品适量， 用甲醇或流动相溶解样品， 配制成含度 洛西汀 0.1 1.5mg 的样品溶液。 0011 2) 设置流动相流速为 0.5 1.5mL/min ， 流动相流速优选为 1.0mL/min， 检测波 长为 210 250nm。
10、， 最佳检测波长为 220nm， 色谱柱柱箱温度为 20 40， 柱箱柱温最佳为 30。 0012 3) 取1)的样品溶液1050L， 注入液相色谱仪， 完成度洛西汀与有关物质的分 离测定。其中 ： 高效液相色谱仪的型号， 无特别要求， 本发明采用的色谱仪为岛津岛津 ： LC-10ATvp， SPD-M10Avp 色谱柱 ： C18 (Kromasil Eternity5-C18， 250*4.6mm， 5m) 流动相 ： A ： 0.05M 磷酸二氢钾缓冲液 （pH7.0） ； B ： 乙腈， 按以下梯度进行洗脱 时间 （min）0 15 25 50 60 70 B%35 35 60 60 。
11、35 35 流速 ： 1.0mL/min 检测波长 ： 220nm 柱温 ： 30 进样体积 ： 10L 本发明采用 C18 (Kromasil Eternity5-C18， 250*4.6mm， 5m)， 能够有效的分离度洛西 汀及其有关物质。本发明解决了度洛西汀及其有关物质的分离测定问题， 从而确保了度洛 西汀及其制剂的质量可控。 0013 附图说明 图 1 空白溶剂的高效液相色谱图 图 2 度洛西汀及其有关物质的高效液相色谱图 图 3 度洛西汀原料的高效液相色谱图 图 4 度洛西汀片辅料空白的高效液相色谱图 图 5 度洛西汀片的高效液相色谱图 具体实施方式 ： 以下实施例用于进一步理解本。
12、发明， 但不限于本实施的范围。 0014 实施例 1 仪器与条件 高效液相色谱仪 ： 岛津 ： LC-10ATvp， SPD-M10Avp ； 说 明 书 CN 102854273 A 4 3/4 页 5 色谱柱 ： C18 (Kromasil Eternity5-C18， 250*4.6mm， 5m) ； 流动相 ： A 相 0.05M 磷酸二氢钾缓冲液 （pH3.0） ， B 相乙腈 按以下梯度洗脱 ： 时间 （min）0 15 25 50 60 70 B%35 35 60 60 35 35 流速 ： 1.0 mL/min ； 检测波长 ： 220nm ； 柱温 ： 30 ； 进样体积 ：。
13、 10L。 0015 实验步骤 分别取度洛西汀及其中间体各约 25mg， 置 50mL 量瓶中， 加甲醇溶解并稀释至刻度， 摇 匀， 各取适量配制成混合样品溶液。 0016 分别取试剂空白溶液和混合样品溶液， 按上述条件进行高效液相色谱分析， 记录 色谱图， 结果见图 1、 图 2。 0017 图 2 中保留时间为 14.885min 的色谱峰为度洛西汀的色谱峰， 其余色谱峰为度洛 西汀各中间体的色谱峰， 由图可以看出， 度洛西汀与其中间体能够达到基线分离， 符合中国 药典的要求。 0018 实施例 2 仪器与条件 高效液相色谱仪 ： 岛津 ： LC-10ATvp， SPD-M10Avp ； 。
14、色谱柱 ： C18（Merck， 2504.6 mm， 5m） ； 流动相 ： A 相 0.05M 磷酸二氢钾缓冲液 （pH3.0） ， B 相甲醇 按以下梯度洗脱 ： 时间 （min）0 15 25 50 60 70 B%50 50 75 75 50 50 流速 ： 1.0 mL/min ； 检测波长 ： 220nm ； 柱温 ： 30 ； 进样体积 ： 10L。 0019 实验步骤 取度洛西汀原料约 25mg， 置 50mL 量瓶中， 加甲醇溶解并稀释至刻度， 摇匀， 作为供试品 溶液。 0020 取供试品溶液， 按上述条件进行高效液相色谱分析， 记录色谱图， 结果见图 4。 0021 图。
15、3中保留时间为14.791min的色谱峰为度洛西汀的色谱峰， 由图可以证明， 度洛 西汀的化学纯度达到原料药的要求， 本法可以用于度洛西汀的质量监测。 0022 实施例 3 仪器与条件 色谱柱 ： C18 (Kromasil Eternity5-C18， 250*4.6mm， 5m) ； 流动相 ： A 相 0.05M 磷酸二氢钾缓冲液 （pH5.0） ， B 相乙腈 按以下梯度洗脱 ： 时间 （min）0 15 25 50 60 70 说 明 书 CN 102854273 A 5 4/4 页 6 B%35 35 60 60 35 35 流速 ： 1.0 mL/min ； 检测波长 ： 220。
16、nm ； 柱温 ： 30 ； 进样体积 ： 10L。 0023 实验步骤 取度洛西汀片适量， 约相当于度洛西汀 12.5mg， 置 25mL 量瓶中， 加流动相超声处理溶 解， 并用甲醇稀释至刻度， 摇匀， 滤过， 取续滤液作为供试品溶液。 0024 取供试品溶液， 按上述条件进行高效液相色谱分析， 记录色谱图， 并同法进行空白 辅料试验， 结果见图 4、 图 5。 0025 图4证明， 空白辅料不干扰本品的测定， 图5证明本法可以用于度洛西汀片的质量 监测。 15.244min 的色谱峰为度洛西汀的色谱峰。 0026 从图 1 图 5 表明 ： 本发明的方法， 可以清楚地将度洛西汀与其中间体体分离， 并 可以准确进行检测定量， 以计算出度洛西汀的含量， 从而有效控制度洛西汀的产品质量。 说 明 书 CN 102854273 A 6 1/3 页 7 图 1 图 2 说 明 书 附 图 CN 102854273 A 7 2/3 页 8 图 3 图 4 说 明 书 附 图 CN 102854273 A 8 3/3 页 9 图 5 说 明 书 附 图 CN 102854273 A 9 。