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1、(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201410755798.0 (22)申请日 2014.12.10 G01N 27/42(2006.01) (71)申请人 宁夏医科大学 地址 750004 宁夏回族自治区银川市兴庆区 胜利街 11601 号 (72)发明人 黄宇 樊艳茹 张霞 陈靖 冯军 (74)专利代理机构 宁夏专利服务中心 64100 代理人 古玲玉 (54) 发明名称 用于测定青蒿素含量的电位滴定法 (57) 摘要 本发明涉及一种分析方法， 尤其是涉及用于 测定青蒿素含量的电位滴定法， 其特征在于 ： 该 方法为于 150mL 烧瓶中加入碘盐、 碳酸氢盐或碳 酸盐。
2、、 酸、 乙醇及水， 之后加入待测青蒿素样品， 加 热反应并冷却后， 利用全自动电位滴定仪以硫代 硫酸钠标准溶液测定并计算样品含量即可 ； 本发 明方法简单、 成本低廉、 不需要使用大型仪器即可 准确测定青蒿素含量。 (51)Int.Cl. (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书1页 说明书4页 附图1页 (10)申请公布号 CN 104483369 A (43)申请公布日 2015.04.01 CN 104483369 A 1/1 页 2 1. 一种用于测定青蒿素含量的电位滴定法， 其特征在于 ： 该方法为于 150mL 烧瓶中加 入碘盐、 碳酸氢盐或碳酸盐、。
3、 酸、 乙醇及水， 之后加入待测青蒿素样品， 加热反应并冷却后， 利用全自动电位滴定仪以硫代硫酸钠标准溶液测定并计算样品含量即可。 2. 如权利要求 1 所述的用于测定青蒿素含量的电位滴定法， 其特征在于 ： 所述碘盐为 碘化钾或碘化钠， 用量为样品中青蒿素物质的量的 5-10 倍。 3. 如权利要求 1 所述的用于测定青蒿素含量的电位滴定法， 其特征在于 ： 所述碳酸氢 盐及碳酸盐为碳酸氢钠、 碳酸钠、 碳酸氢钾、 碳酸钾中的任意一种， 用量为 10-1000mg。 4. 如权利要求 1 所述的用于测定青蒿素含量的电位滴定法， 其特征在于 ： 所述酸为硫 酸或盐酸。 5. 如权利要求 1 所。
4、述的用于测定青蒿素含量的电位滴定法， 其特征在于 ： 所述加热温 度为 0-100 。 6. 如权利要求 1 所述的用于测定青蒿素含量的电位滴定法， 其特征在于 ： 所述加热时 间为 0-24 小时。 7. 如权利要求 1 所述的用于测定青蒿素含量的电位滴定法， 其特征在于 ： 所述实验所 用使用仪器为电位滴定仪， 仪器中采用电极为氧化还原电极。 权 利 要 求 书 CN 104483369 A 2 1/4 页 3 用于测定青蒿素含量的电位滴定法 技术领域 0001 本发明涉及一种分析方法， 尤其是涉及用于测定青蒿素含量的电位滴定法。 背景技术 0002 如图1所示青蒿素是一种含有过氧桥的倍半。
5、萜内酯， 于上个世纪70年代由我国科 学家从黄花蒿中分离出的一种活性单体成分， 在治疗脑型疟、 恶性疟、 间日疟等疾病方面具 有高效、 低毒、 速效、 使用安全等优点。尽管目前单一使用青蒿素类药物已经使得疟原虫产 生抗药性， 基于青蒿素类药物的联合疗法仍然是 WHO 推荐的针对疟疾的首选疗法， 其中青 蒿素类药物仍然作为治疗疟疾的重要药物之一。从 80 年代中期开始， 国内研究人员在青蒿 素的基础上又相继成功研发出青蒿琥酯、 蒿甲醚和双氢青蒿素等新药， 但这些新药都是以 青蒿素为原料半合成制得， 因此， 青蒿素作为青蒿素类抗疟药物的原料， 在抗疟药物的生产 中有着重要的作用。 0003 因此，。
6、 针对青蒿素类药物的含量测定方法研究也得到了广泛的关注， 并开发出了 一系列的青蒿素等药物含量测定方法， 如 TLC 法， 碱处理后紫外可见分光光度测定法， GC， HPLC-CD， HPLC-UV， HPLC-ELSD， HPLC-MS 等。其中， 高效液相色谱法是通用的青蒿素类药物 的含量测定方法， 碱处理后紫外可见分光光度测定法也常用于青蒿素和青蒿琥酯的含量测 定， 这两种方法也是 中国药典 收录的含量测定方法。 0004 碱处理后紫外可见分光光度测定法目前主要用于青蒿素的含量测定。 其通常的操 作步骤为， 通过使用 NaOH 处理青蒿素乙醇溶液 30 分钟， 使青蒿素反应生成在 292。
7、nm 波长 处有明显吸收的衍生物， 对衍生物在 292nm 波长处的吸光度进行测量并通过标准曲线法计 算出相应的青蒿素含量。该方法操作简单， 使用的仪器 - 紫外可见光谱仪也较为普遍。但 是， 在实际测量中， 特别是测定复方制剂中青蒿素类药品或者植物提取液中的青蒿素的含 量时， 往往会因为其它杂质在 292nm 波长处的背景干扰而导致测定结果不准确。 0005 高效液相色谱法 (HPLC-UV/HPLC-DAD) 是目前广泛使用的青蒿素类药物含量测定 方法之一，中国药典 中通常将样品溶解后直接进样， 以外标法测定青蒿素类药物的含量。 需要注意的是， 在测定青蒿素类药品与其他药品制成的复方药物中。
8、或植物提取物中的青蒿 素含量时， 虽都可以采用 HPLC 法， 但由于样品中杂质的干扰， 使得一些分析方法不能直接 使用， 需要进行衍生化处理后进行测定。比如， 在测定黄花蒿药材中青蒿素的含量时， 由于 青蒿素最大吸收波长在 205nm 左右， 提取物中的其他成分比较复杂， 使得直接使用紫外检 测器 (UV 或 DAD) 检测器测定会有一定干扰， 需将青蒿素类药品进行柱前衍生化， 然后再进 行测定。青蒿素与碱反应后生成 292nm 处有吸收的物质， 之后将其在 pH 5.6-6.0 定量转化 为最大吸收波长在 260nm 处有吸收的物质， 再使用 HPLC 进行测定。不对青蒿素进行衍生化 也可。
9、以使用其它检测器直接测定， 如蒸发光散射检测器 (ELSD)， 质谱 (MS) 等。HPLC 法准确 可靠、 重现性好、 专属性强， 可广泛用于青蒿素类药物原料、 制剂及生物样品分析。 但由于使 用 HPLC-UV 法进行含量测定复杂样品时常需对样品进行柱前衍生化处理， 以排除干扰， 而 使用 MS， ELSD 等检测器则较为昂贵。而且， HPLC 检测耗时长， 单个样品检测时间通常在 10 说 明 书 CN 104483369 A 3 2/4 页 4 分钟以上， 使用的甲醇、 乙腈等 HPLC 级试剂及色谱柱等耗材价格较贵， 从而使得 HPLC 法检 测青蒿素类药物成本较高。 0006 虽然。
10、目前青蒿素类药物的含量测定有很多方法。 但是目前所使用的测定青蒿素类 药物含量的方法有的仪器昂贵、 有的使用成本很高、 有的样品处理方法复杂、 有的结果误差 较大， 往往不能满足生产、 科研中需要快速、 简单、 成本低廉并能够测定大量样品时的需要。 发明内容 0007 本发明的目的主要是克服现有技术的不足， 提供一种方法简单、 成本低廉、 不需要 使用大型仪器即可准确测定青蒿素含量的用于测定青蒿素含量的电位滴定法。 0008 本发明通过如下方式实现 ： 0009 一种用于测定青蒿素含量的电位滴定法， 其特征在于 ： 该方法为于 150mL 烧瓶中 加入碘盐、 碳酸氢盐或碳酸盐、 酸、 乙醇及水。
11、， 之后加入待测青蒿素样品， 加热反应并冷却 后， 利用全自动电位滴定仪以硫代硫酸钠标准溶液测定并计算样品含量即可 ； 0010 所述碘盐为碘化钾或碘化钠， 用量为样品中青蒿素物质的量的 5-10 倍 ； 0011 所述碳酸氢盐及碳酸盐为碳酸氢钠、 碳酸钠、 碳酸氢钾、 碳酸钾中的任意一种， 用 量为 10-1000mg ； 0012 所述酸为硫酸或盐酸 ； 0013 所述加热温度为 0-100 ； 0014 所述加热时间为 0-24 小时 ； 0015 所述实验所用使用仪器为电位滴定仪， 仪器中采用电极为氧化还原电极。 0016 本发明具有如下效果 ： 0017 1) 方法简单 ： 本发明的。
12、原理青蒿素中过氧桥与碘离子定量反应生成单质碘， 使用 全自动电位滴定仪以硫代硫酸钠标准溶液滴定反应产生的单质碘， 依据消耗的硫代硫酸钠 标准溶液体积计算青蒿素含量， 实验原理为氧化还原滴定。通过以下公式计算得出样品中 青蒿素的含量。m( 样品中青蒿素质量 ) (N*V*282.33)/2， 其中， N 为 Na2S2O3标准溶液的 物质的量浓度， V 为消耗 Na2S2O3标准溶液的体积， 282.33 为青蒿素的分子量。在 药学通 报 1980 年 15 卷第 8 期中， 朱汉松在 “青蒿素的滴定分析法” 一文中报道了利用电位滴定 仪测定青蒿素含量的方法。但该方法是用 NaOH 溶液水解青蒿。
13、素， 再通过标准 HCl 溶液利用 酸碱滴定测定剩余 NaOH 含量， 计算水解反应所消耗 NaOH 含量， 进而计算青蒿素含量。该方 法为酸碱滴定法， 在实验原理及实验方法上与本专利中涉及内容有很大的差异。 0018 2) 成本低廉、 不需要使用大型仪器即可准确测定青蒿素含量 ： 本发明提供的方法 的具体步骤为于 150mL 烧瓶中加入碘盐、 碳酸氢盐 ( 或碳酸盐 )、 酸、 乙醇及水， 之后加入待 测青蒿素样品。加热反应并冷却后， 利用全自动电位滴定仪以硫代硫酸钠标准溶液测定并 计算样品含量 ； 该方法成本低廉， 只需使用硫代硫酸钠等常用分析纯化学试剂， 价格便宜同 时所需的化学试剂均为。
14、分析常用试剂， 容易购买获得 ； 操作简单快捷， 能够在较短时间内测 定样品中青蒿素含量。实验只需全自动电位滴定仪， 该仪器价格便宜， 利于普及， 同时滴定 精度较传统手工滴定法精度高， 由仪器自动控制， 实验数据准确可靠。 0019 3) 本发明提供的方法能够快速、 简单、 成本低廉并能够测定大量青蒿素类药物含 量的方法不但能够有利于青蒿素类药物生产及销售过程中的质量控制， 而且在青蒿素的品 说 明 书 CN 104483369 A 4 3/4 页 5 种选育、 药材收购及提取等过程中具有很重要的应用价值。 附图说明 0020 图 1 为青蒿素结构式 ； 0021 图 2 为青蒿素标准曲线。。
15、 具体实施方式 0022 实例一、 不同反应时间下， 测定青蒿素含量 ： 0023 取含量为 98的青蒿素， 0.3g 碘化钾及 50mg 碳酸氢钠， 加入 2mL20硫酸， 10mL 乙醇及 10mL 水， 70反应， 之后将其冷却。在瑞士万通 905 型全自动电位滴定仪上利用 0.1mol/L 硫代硫酸钠标准溶液滴定。结果如下表所示 ： 0024 表 1 反应时间 15min 0025 0026 0027 表 2 反应时间 30min 0028 0029 表 3 反应时间 45min 0030 0031 由以上三个表可以看出， 不同加热时间下均能测定青蒿素含量， 但反应时间控制 在 30m。
16、in 左右较为适合， 时间过长或过短均会造成实验结果与理论值偏差过大。 说 明 书 CN 104483369 A 5 4/4 页 6 0032 实例二、 标准曲线 0033 取不同质量青蒿素标准品， 加入 0.3g 碘化钾及 50mg 碳酸氢钠， 加入 2mL 20硫 酸， 10mL 乙醇及 10mL 水， 70反应 30 分钟， 之后将其冷却。在瑞士万通 905 型全自动电 位滴定仪上利用 0.1mol/L 硫代硫酸钠标准溶液滴定， 以青蒿素标准品质量为横坐标， 消耗 0.1mol/L 硫代硫酸钠标准溶液体积为纵坐标作图。结果如图 2 ： 0034 标准曲线为 y 65.687x+0.001。
17、6， R2 0.998。 0035 标准曲线说明， 实验结果可靠。 0036 实例三、 黄花蒿提取液中青蒿素含量测定 0037 取 5mL 黄花蒿提取液， 加入 0.3g 碘化钾及 50mg 碳酸氢钠， 加入 2mL 20硫酸， 10mL 乙醇及 10mL 水， 70反应 30 分钟， 之后将其冷却。在瑞士万通 905 型全自动电位滴定 仪上利用 0.1mol/L 硫代硫酸钠标准溶液滴定， 结果如下表 ： 0038 表 4 黄花蒿提取液中青蒿素含量测定 0039 0040 一种用于测定青蒿素含量的电位滴定法， 其特征在于 ： 该方法为于 150mL 烧瓶中 加入碘盐、 碳酸氢盐或碳酸盐、 酸、。
18、 乙醇及水， 之后加入待测青蒿素样品， 加热反应并冷却 后， 利用全自动电位滴定仪以硫代硫酸钠标准溶液测定并计算样品含量即可。 0041 所述碘盐为碘化钾或碘化钠， 用量为样品中青蒿素物质的量的 5-10 倍。 0042 所述碳酸氢盐及碳酸盐为碳酸氢钠、 碳酸钠、 碳酸氢钾、 碳酸钾中的任意一种， 用 量为 10-1000mg。 0043 所述酸为硫酸或盐酸。 0044 所述加热温度为 0-100。 0045 所述加热时间为 0-24 小时。 0046 所述实验所用使用仪器为电位滴定仪， 仪器中采用电极为氧化还原电极。 说 明 书 CN 104483369 A 6 1/1 页 7 图 1 图 2 说 明 书 附 图 CN 104483369 A 7 。