本发明是关于测定血液中血红蛋白浓度的试剂。 测定血液试样中的血红蛋白浓度,对于贫血症等的临床诊断是非常重要的。
血红蛋白的测定方法,通常是氰化高铁血红蛋白法、作为国际标准方法被采用了。
氰化高铁血红蛋白法,是通过含铁氰化钾和氰基的溶剂的作用、将血红蛋白转化为氰化高铁血红蛋白、测定540nm附近的吸光度的方法。
另外,还有将血红蛋白转化为氧合血红蛋白、同样测定吸光度的氧合血红蛋白法。
上述氰化高铁血红蛋白法,由于使用了有毒的氰基,所以试剂的处理带有危险性。而且,测定后的废液、必须在无毒化之后排放、而废液的处理是麻烦的。
另一方面,在氧合血红蛋白法中、虽然它的优点是试剂的处理是安全的、不需要处理废液,但是它的缺点是不能将高铁血红蛋白转化为氧合血红蛋白。尤其是,当使用对照液(ユントロ-ル血液)对于血球计数装置进行校准精度管理时,为了使之转化为高铁血红蛋白例如使对照血液中的血红蛋白经过一天,在氧合血红蛋白法中、看到血红蛋白浓度逐渐减少。这时,不能辨别这种减少是由装置本身的波动引起地,还是由对照血液的时效变化而引起的。
因此,作为本发明的目的、所提供试剂是一种操作安全、没有必要对废液进行处理、而且与转化为高铁血红蛋白的程度没有关系、又能够稳定地测定血红蛋白浓度的试剂。
为了解决上述课题,本发明使用含有十二(烷)基硫酸钠1.0-3.0g/l的试剂。在此浓度范围之外担心会造成溶血不良或是引起表面活性剂的析出。根据需要,可以加入水溶性的非离子型表面活性剂。最好是使用聚氧乙烯壬基苯醚。另外,也可以含有维持水溶液PH值为7.0-9.0的缓冲剂。
十二(烷)基硫酸钠与随着红血球溶解放出的血红蛋白相结合,生成SLS-血红蛋白。非离子型表面活性剂,可防止在低温十二(烷)基硫酸钠的析出。
本发明的实施例如下:
试剂组成
十二(烷)基硫酸钠 0.40-0.66g
聚氧乙烯壬基苯醚 0.33-0.60g
蒸馏水 11
制备上述试剂、用自动血球计数装置K-1000(东亚医用电子株式会社)测定了血液中的血红蛋白浓度。
图1中给出了与国际标准方法比较的结果。得到了与国际标准方法大致相同的结果。
另外,表1中给出了与作为检体使用的对照血液的氧合血红蛋白法的比较。与氧合血红蛋白法相比本发明的试剂得到了稳定的结果。
表1 对照血液测定结果
氧合血红蛋白法 实施例
起始值 15.7g/dl 17.3g/dl
22℃,保存7天 14.4g/dl 17.3g/dl
22℃,保存15天 13.5g/dl 17.3g/dl
根据本发明、通过红血球的溶血作用放出的血红蛋白与十二烷基硫酸钠结合、形成SLS-血红蛋白,进而也将高铁血红蛋白转化为SLS-血红蛋白。由此,也可以把用氧合血红蛋白法不能测定的血液(例如对照血液)中的高铁血红蛋白作为血红蛋白进行稳定的测定。
而且,由于不使用有毒的氰基,所以试剂的处理是安全的、而且没有必要进行废液处理。
图1是本实施例与国际标准方法的相关图。