1，6二磷酸果糖的生产方法.pdf

摘要
申请专利号：	CN93110528.5	申请日：	1993.01.11
公开号：	CN1089654A	公开日：	1994.07.20
当前法律状态：	撤回	有效性：	无权
法律详情：	\|\|\|\|\|\|公开
IPC分类号：	C12P19/02; C12N1/18; //(C12P19/02,C12R1:85)	主分类号：	C12P19/02; C12N1/18; //
申请人：	欧阳平凯;
发明人：	殷志敏; 应汉杰; 欧阳平凯
地址：	210009江苏省南京市化工学院应化系
优先权：
专利代理机构：	江苏省专利服务中心	代理人：	孙鸥
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内容摘要

本发明是一种生化药品的生产方法，特别涉及1，6—二磷酸果糖(又称FDP)的生产方法。本方法以高活性干酵母作底物，采用适当的酶激活剂和抑制剂调控酶反应，改变细胞壁透性，使FDP通过细胞膜进入到溶液中，使FDP不断积累，获得FDP对无机磷高达90％以上的转化率。解决了国内外目前生产FDP的方法中酶流失过大、副产品过多、工艺流程复杂过长、操作繁琐以及转化率过低的缺陷。

权利要求书

1： 1，6--二磷酸果糖的生产方法，其特征在于： (1)在敞口式发酵罐或摇瓶里加入混合液，由 0.5M 葡萄糖 0.2M Na 2 HPO 4 0.2M NaH 2 PO 4 4g/l 发酵膏组成，加温在35°-38℃； (2)在上述混合液中加入干酵母，一边缓慢搅拌，保温在35-39℃； (3)加入5-6%的胞质分离剂甲苯或Triton-X100，使之成细胞悬浮液； (4)以6-10g/l的Mg离子作酶激活剂加入到细胞悬浮液中； (5)保持反应时间2小时45分至3小时45分； (6)停止反应并加热至80℃，灭酶； (7)将反应液送入离心机里离心，得到FDP清液。

说明书

本发明是一种生化药品的生产方法，特别涉及1，6-二磷酸果糖的生产方法。
    1，6-二磷酸果糖，又称FDP（Fructose-1，6-diphosphate），是一种重要的有机磷药物。目前，国际上普遍采用葡萄糖的磷酸化进行FDP的商业化生产，利用有机溶剂甲苯处理酵母细胞，增强其透性，通过Harden-Young发酵法合成FDP;德国《生物化学》杂志1986年8月期上公开了一种“用戊二醛交联酵母细胞连续化生产FDP”，它是在上述生产方法基础上作了适当改进，利用戊二醛把酶固定在酵母上，以防止酶的渗漏，另外，国际上也有用中空纤维超滤分离可渗透的底物，以利连续化生产FDP。

    但是，在用上述这些方法生产FDP的过程中，酶流失过大，副产品也多，且工艺流程复杂、过长，操作繁琐。最致命的是FDP的转化率太低，最高只有55%。

    本发明的目的就是采用适当的酶激活剂和抑制剂调控酶反应，提高葡萄糖和无机磷的转化率以及发酵单位，简化工艺流程，稳定质量，提高FDP的转化率并降低工业化生产FDP的成本。

    本发明的其它目的和优点将在下面的说明中作进一步的阐述。

    本发明地基本原理就是改变细胞壁透性，使FDP通过细胞膜进入到溶液中，选择适当的金属离子和AMP/ATP的比例，提高果糖激酶的活性，使FDP不断积累。

    根据这一原理及技术方案，制定出如下的生产方法并得以实现。

    实施例1：

    在150升敞口式发酵罐或摇瓶里加入100升混合液，该混合液由

    0.5M  葡萄糖

    0.2M NaH2PO4

    0.2M Na2HPO4

    4g/l  酵母膏

    组成，加热并保温在35°-37℃，此时以高活性干酵母12.5kg作底物加入到该混合液中，开动搅拌机搅拌并保温在36°-38℃;待搅拌均匀后加入1升6%的胞质分离剂甲苯，破坏细胞壁，使FDP从细胞内流到溶液中，溶液成细胞悬浮液，再加入8g/l氯化镁，继续搅拌，激活酶的活性，使FDP累积速度加快，3小时30分钟后停止反应，加热至80℃，灭酶;然后将反应液倒入离心机内离心后，得到FDP清液87升，其中含208mMFDP和36mM无机磷，FDP对无机磷的得率为90.5%，大大高于其他方法。

    实施例2：

    在150升反应罐中加入100升混合液，由

    0.40M  葡萄糖

    0.15M  磷酸氢二钠

    0.25M  磷二氢钠

    4g/l  酵母膏

    组成，加热并保温在35°-37℃，加入高活性干酵母13Kg作底物，搅拌均匀后再加入6-10g/l氯化镁，搅拌均匀后加入4.5%的Triton  X-300，在36°-38℃温度下搅拌，3小时后中止反应，再加温至80℃灭酶，离心后得86升FDP清液，每升含有214.5mMFDP和30mM无机磷，FDP对无机磷的转化率为92%。