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1、10申请公布号CN104178418A43申请公布日20141203CN104178418A21申请号201310670380522申请日2013121010211872020130528TWC12M1/34200601C12Q1/6820060171申请人大江基因医学股份有限公司地址中国台湾台北市72发明人关淑君林咏翔施惠馨黄雪茵蔡岳颖74专利代理机构北京三友知识产权代理有限公司11127代理人韩蕾54发明名称检测阿兹海默症的方法及阿兹海默症基因检测装置57摘要本发明提供一种检测阿兹海默症的方法及阿兹海默症基因检测装置，所述装置包含一基板、一样品垫、一结合垫、一薄膜垫以及一第一SNP检测区，。
2、其中第一SNP检测区包括一第一检测线以及一第二检测线，其中第一、第二检测线分别固定不同的APOE等位基因的核苷酸探针，而第一与第二检测线的探针存有一核苷酸的差异。本发明藉由将多个涵盖APOE等位基因的单核苷酸多态性SINGLENUCLEOTIDEPOLYMORPHISM，SNP位点的探针并配合预定的侧向流方向配置于薄膜垫上形成所述的第一检测线以及第二检测线，达到有效且专一于单一步骤中测定APOE基因型的目的，以作为阿兹海默症的预防与治疗的依据。30优先权数据51INTCL权利要求书3页说明书8页序列表4页附图4页19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书3页说明书8页序列表4页。
3、附图4页10申请公布号CN104178418ACN104178418A1/3页21一种阿兹海默症基因检测装置，其包含一基板、一样品垫、一结合垫、一薄膜垫以及一吸附垫，其中样品垫、结合垫、薄膜垫依序排列设置于基板的一表面上并且彼此相互连接；薄膜垫设有一第一SNP检测区以及一控制线，其中第一SNP检测区包括一第一检测线以及一第二检测线，第一检测线、第二检测线分别具有APOE等位基因的核苷酸探针，其中第一检测线、第二检测线的APOE等位基因的核苷酸探针具有一核苷酸的差异。2如权利要求1所述的阿兹海默症基因检测装置，其中APOE等位基因的核苷酸探针选自于涵盖APOE的SNPRS429358或RS741。
4、2位点的APOE基因序列片段。3如权利要求2所述的阿兹海默症基因检测装置，其中第一检测线、第二检测线的APOE等位基因的核苷酸探针涵盖APOE的RS429358SNP位点。4如权利要求3所述的阿兹海默症基因检测装置，其中薄膜垫还设有一第二SNP检测区，第二SNP检测区包括一第三检测线以及一第四检测线，第三检测线以及第四检测线分别具有APOE等位基因的核苷酸探针，其中第三检测线、第四检测线的APOE等位基因的核苷酸探针具有一核苷酸的差异。5如权利要求4所述的阿兹海默症基因检测装置，其中第三检测线、第四检测线的APOE等位基因的核苷酸探针涵盖APOE的RS7412SNP位点。6如权利要求1至5任一。
5、项所述的阿兹海默症基因检测装置，其中第一检测线的APOE等位基因的核苷酸探针具有SEQIDNO1或SEQIDNO3所示序列，而第二检测线的APOE等位基因的核苷酸探针具有SEQIDNO2或SEQIDNO4所示序列。7如权利要求4或5所述的阿兹海默症基因检测装置，其中第三检测线的APOE等位基因的核苷酸探针具有SEQIDNO5或SEQIDNO7所示序列，而第四检测线的APOE等位基因的核苷酸探针具有SEQIDNO6或SEQIDNO8所示序列。8如权利要求6所述的阿兹海默症基因检测装置，其中第三检测线的APOE等位基因的核苷酸探针具有SEQIDNO5或SEQIDNO7所示序列，而第四检测线的APO。
6、E等位基因的核苷酸探针具有SEQIDNO6或SEQIDNO8所示序列。9如权利要求1至5中任一项所述的阿兹海默症基因检测装置，其中APOE等位基因的核苷酸探针的大小介于16至25核苷酸，其熔点温度为50至65。10如权利要求1至5中任一项所述的阿兹海默症基因检测装置，其中第一SNP检测区还可包括一第五检测线、一第六检测线，以及第二SNP检测区还可包括一第七检测线、一第八检测线。11如权利要求4所述的阿兹海默症基因检测装置，其中第一检测线、第二检测线、第三检测线、第四检测线的APOE等位基因的核苷酸探针分别具有SEQIDNO3、SEQIDNO4、SEQIDNO7及SEQIDNO8所示序列。12如。
7、权利要求10所述的阿兹海默症基因检测装置，其中第一检测区的第一检测线、第二检测线、第五检测线、第六检测线的APOE等位基因的核苷酸探针是选自于SEQIDNO1至SEQIDNO4所示序列的核苷酸探针；而第二检测区的第三检测线、第四检测线、第七检测线、第八检测线的APOE等位基因的核苷酸探针是选自于SEQIDNO5至SEQIDNO8所示序列的核苷酸探针。13一种检测阿兹海默症的方法，其包含提供一阿兹海默症基因检测装置，其包括一基板、一样品垫、一结合垫、一薄膜垫以及权利要求书CN104178418A2/3页3一吸附垫，其中样品垫、结合垫、薄膜垫依序排列设置于基板的一表面上并且彼此相互连接；其中结合垫。
8、具有一标定物；薄膜垫设有一第一SNP检测区以及一控制线，其中第一SNP检测区包括一第一检测线以及一第二检测线，第一检测线、第二检测线分别具有APOE等位基因的核苷酸探针，其中第一检测线、第二检测线的APOE等位基因的核苷酸探针具有一核苷酸的差异；将一含有经标定的APOE基因片段的溶液施用于样品垫，使该经标定的APOE基因片段朝向结合垫移动，经标定的APOE基因片段与标定物结合形成一复合物，继而朝向薄膜垫移动，所述的复合物与第一SNP检测区的第一检测线和/或第二检测线结合而产生讯号；以及依据第一SNP检测区的该第一检测线和/或第二检测线讯号的存在，判断该APOE基因片段的基因型。14如权利要求1。
9、3所述的方法，其中APOE等位基因的核苷酸探针选自于涵盖APOE的SNPRS429358或RS7412位点的APOE基因序列片段。15如权利要求14所述的方法，其中第一、第二检测线的APOE等位基因的核苷酸探针涵盖APOE的RS429358SNP位点。16如权利要求15所述的方法，其中薄膜垫还设有一第二SNP检测区，第二SNP检测区包括一第三检测线以及一第四检测线，第三检测线以及第四检测线分别具有APOE等位基因的核苷酸探针，其中第三检测线、第四检测线的APOE等位基因的核苷酸探针具有一核苷酸的差异。17如权利要求16所述的方法，其中第三检测线、第四检测线的APOE等位基因的核苷酸探针涵盖AP。
10、OE的RS7412SNP位点。18如权利要求13至17任一项所述的方法，其中第一检测线的APOE等位基因的核苷酸探针具有SEQIDNO1或SEQIDNO3所示序列，而第二检测线的APOE等位基因的核苷酸探针具有SEQIDNO2或SEQIDNO4所示序列。19如权利要求16或17所述的方法，其中第三检测线的APOE等位基因的核苷酸探针具有SEQIDNO5或SEQIDNO7所示序列，而第四检测线的APOE等位基因的核苷酸探针具有SEQIDNO6或SEQIDNO8所示序列。20如权利要求18所述的方法，其中第三检测线的APOE等位基因的核苷酸探针具有SEQIDNO5或SEQIDNO7所示序列，而第四。
11、检测线的APOE等位基因的核苷酸探针具有SEQIDNO6或SEQIDNO8所示序列。21如权利要求13至17中任一项所述的方法，其中APOE等位基因的核苷酸探针的大小介于18至25核苷酸，其熔点温度为55至60。22如权利要求13至17中任一项所述的方法，其中第一SNP检测区还可包括一第五检测线、一第六检测线，以及第二SNP检测区还可包括一第七检测线、一第八检测线。23如权利要求16所述的方法，其中第一检测线、第二检测线、第三检测线、第四检测线的APOE等位基因的核苷酸探针分别具有SEQIDNO3、SEQIDNO4、SEQIDNO7及SEQIDNO8所示序列。24如权利要求22所述的方法，其中。
12、第一SNP检测区的第一检测线、第二检测线、第五检测线、第六检测线的APOE等位基因的核苷酸探针是选自于SEQIDNO1至SEQIDNO4所示序列的核苷酸探针；而第二检测区的第三检测线、第四检测线、第七检测线、第八检测权利要求书CN104178418A3/3页4线的APOE等位基因的核苷酸探针是选自于SEQIDNO5至SEQIDNO8所示序列的核苷酸探针。25如权利要求23所述的方法，其还包括依据第二SNP检测区的该第三检测线和/或第四检测线讯号的存在，判断该APOE基因片段的基因型；以及第二检测线与第四检测线产生讯号，判断APOE基因片段的来源的基因型为E2/E2型。26如权利要求23所述的方。
13、法，其还包括依据第二SNP检测区的该第三检测线和/或第四检测线讯号的存在，判断该APOE基因片段的基因型；以及第二检测线、第三检测线与第四检测线产生讯号，判断APOE基因片段的来源的基因型为E2/E3型。27如权利要求23所述的方法，其还包括依据第二SNP检测区的该第三检测线和/或第四检测线讯号的存在，判断该APOE基因片段的基因型；以及第一检测线、第二检测线、第三检测线与第四检测线产生讯号，判断APOE基因片段的来源的基因型为E2/E4型。28如权利要求23所述的方法，其还包括依据第二SNP检测区的该第三检测线和/或第四检测线讯号的存在，判断该APOE基因片段的基因型；以及第二检测线与第三检。
14、测线产生讯号，判断APOE基因片段的来源的基因型为E3/E3型。29如权利要求23所述的方法，其还包括依据第二SNP检测区的该第三检测线和/或第四检测线讯号的存在，判断该APOE基因片段的基因型；以及第一检测线、第二检测线与第三检测线产生讯号，判断APOE基因片段的来源的基因型为E3/E4型。30如权利要求23所述的方法，其还包括依据第二SNP检测区的该第三检测线和/或第四检测线讯号的存在，判断该APOE基因片段的基因型；以及第一检测线与第三检测线产生讯号，判断APOE基因片段的来源的基因型为E4/E4型。权利要求书CN104178418A1/8页5检测阿兹海默症的方法及阿兹海默症基因检测装置。
15、技术领域0001本发明是关于一种快速筛检基因的装置，尤指配置有适当检测部件而可供用于快速且精确的筛检阿兹海默症的检测试片。本发明亦关于一种检测方法，尤指利用筛检基因的装置检测阿兹海默症的方法。背景技术0002阿兹海默症初期最常见的症状是难以记住最近发生的事，随着疾病进展，症状将会包括谵妄、易怒、具攻击性、情绪起伏不定、丧失长期记忆等。病患通常因为无法发挥正常功能，而退出家庭和社会的社交关系，并随着身体功能逐渐丧失，终致死亡。初步怀疑罹患阿兹海默症时，通常藉由行为评估以及认知测试COGNITIVETEST来确认诊断，进阶的诊断为神经影像检查辅助诊断。0003阿兹海默症的症状可分为早期、中期以及晚。
16、期，各时期反应在行为与认知能力损害程度有所不同。此外，依据发作的时间早晚又分为主要发生于65岁以前的早发型与发生于65岁以后的晚发型阿兹海默症，其中10的患者属于早发型阿兹海默症，与家族病史强烈相关；而90的患者属于晚发型阿兹海默症，与家族病史较无直接关系。早发型阿兹海默症可分为第一型阿兹海默症ALZHEIMERDISEASETYPE1,AD1、第三型阿兹海默症ALZHEIMERDISEASETYPE3,AD3以及第四型阿兹海默症ALZHEIMERDISEASETYPE4,AD4，晚发型阿兹海默症即第二型阿兹海默症ALZHEIMERDISEASETYPE2,AD2。就两者的变异类型而言，相较于。
17、早发型阿兹海默症通常为APP、PSEN1、PSEN2基因突变所造成，晚发型阿兹海默症通常与单核苷酸多态性SINGLENUCLEOTIDEPOLYMORPHISM,SNP相关，例如与脂蛋白EAPOLIPOPROTEINE,APOE的单核苷酸多态性有高度相关性，例如APOERS7412以及APOERS429358。0004请配合参考图5所示，研究显示与晚发型阿兹海默症相关的基因型可依据SNP分为APOE2、APOE3、APOE4，如图5所示，APOE2是指SNPRS429358与RS7412皆为胸苷THYMIDINE,T，注记为E2型，为保护性基因型；APOE3是指SNPRS429358与RS74。
18、12分别为T与胞苷CYTIDINE,C，注记为E3型，为低风险性基因型；APOE4是指SNPRS429358与RS7412皆C，注记为E4型，为高风险性基因型。具有所述的保护性基因型、低风险性基因型与高风险性基因型的携带者CARRIER罹患阿兹海默症的风险依序由低至高。研究人员发现APOE等位基因皆为高风险性基因型的个体，注记为E4/E4，确实较为容易罹患晚发型阿兹海默症；相对的，APOE等位基因皆为保护性基因型的个体，注记为E2/E2，罹患晚发型阿兹海默症的风险相对最低INFLUENCEOFAPOLIPOPROTEINEGENOTYPEONTHETRANSMISSIONOFALZHEIMER。
19、DISEASEINACOMMUNITYBASEDSAMPLEGJARVIK,EBLARSON,KGODDARD,GDSCHELLENBERG,EMWIJSMANAMJHUMGENET1996JANUARY581191200。0005为了检测不同个体或者不同细胞的基因表达GENEEXPRESSION或者等位基因型ALLELEGENOTYPE，过去已经发展出多种检测基因的方法，其中北方墨点NORTHERN说明书CN104178418A2/8页6BLOT分析或者南方墨点SOUTHERNBLOT分析，其原理为令经标定的特定核苷酸探针NUCLEOTIDEPROBE与经电泳分离、转染而得的含有标的RNA或。
20、DNA的薄膜进行杂交反应HYBRIDIZATION，进而通过经标定的探针的讯号以侦测目标RNA或DNA存在。此外，聚合酶链式反应配合定序分析，鉴定等位基因型亦为常见手段，但由于此类方法操作上的限制，并不利于使用者在家自行筛检，必须自始至终于专业的实验室经由特定的仪器进行反应。一般而言，对于一般APOE基因的SNP的检测，仍必须通过核酸分离与定序的程序予以确认。0006中国台湾第I352738号专利案提供一种侦测阿兹海默症的方法，其是针对ABCA2基因的RS908832变异基因的次要等位基因型进行检测，而可供用于测定白种人族群个体罹患早发型阿兹海默症的风险。该专利案并未提供检测晚发型阿兹海默症的。
21、技术，且此检测方法必须先萃取病人的DNA并经繁复的步骤以分别鉴定ABCA2等位基因的各种基因型，且并未提供利用侧向流分析核苷酸样品的检测装置，无法于一步骤试验中辨别特定基因的等位基因型。该专利案无法解决现有技术仍需要自始至终于专业实验室经由特定的仪器进行反应而需繁琐步骤进行检测的缺点。0007基于上述可知，现有技术缺乏一种快速筛检阿兹海默症的检测方法与装置，并藉由筛检的结果以帮助个体预防或治疗阿兹海默症。发明内容0008有鉴于现有技术仍需多步骤纯化检体、制备样品、分析样品，藉以确认阿兹海默症相关基因的单核苷酸多态性基因型SINGLENUCLEOTIDEPOLYMORPHISMGENOTYPIN。
22、G，本发明的目的在于解决现有技术需要重复进行不同等位基因的SNP分析的问题，提供一种阿兹海默症基因检测装置，其可同时针对APOE等位基因的单核苷酸多态性SINGLENUCLEOTIDEPOLYMORPHISM,SNP位点进行侦测，达到有效且专一的测定APOE基因型的目的。此外，现有技术缺乏针对晚发型阿兹海默症的快速筛检方法，故本发明亦提供针对晚发型阿兹海默症的检测技术。0009因此，一方面，本发明提供了一种阿兹海默症基因检测装置，其包含一基板、一样品垫、一结合垫、一薄膜垫以及一吸附垫，其中样品垫、结合垫、薄膜垫依序排列设置于基板的一表面上并且彼此相互连接；薄膜垫设有一第一SNP检测区以及一控制。
23、线，其中第一SNP检测区包括一第一检测线以及一第二检测线，第一检测线、第二检测线各自具有一APOE等位基因的核苷酸探针，前述第一检测线、第二检测线的APOE等位基因的核苷酸探针彼此之间具有一核苷酸差异。0010另一方面，本发明亦提供一种检测阿兹海默症的方法，其包含0011提供一阿兹海默症基因检测装置，其包括一基板、一样品垫、一结合垫、一薄膜垫以及一吸附垫，其中样品垫、结合垫、薄膜垫依序排列设置于基板的一表面上并且彼此相互连接；其中结合垫具有一标定物；薄膜垫设有一第一SNP检测区以及一控制线，其中第一SNP检测区包括一第一检测线以及一第二检测线，第一检测线、第二检测线分别具有APOE等位基因的核。
24、苷酸探针，且第一检测线、第二检测线的APOE等位基因的核苷酸探针具有一核苷酸的差异；0012将一含有经标定的APOE基因片段的溶液施用于样品垫，使该经标定的APOE基因片段朝向结合垫移动，经标定的APOE基因片段与标定物结合形成一复合物，继而朝向薄膜说明书CN104178418A3/8页7垫移动，所述的复合物与第一SNP检测区的第一检测线和/或第二检测线结合而产生讯号；以及0013依据该第一检测线和/或第二检测线产生讯号，判断该APOE基因片段的基因型。0014进一步的，所述的阿兹海默症基因检测装置，薄膜垫还设有一第二SNP检测区，第二SNP检测区包括一第三检测线以及一第四检测线，第三检测线以。
25、及第四检测线具有不同的APOE等位基因的核苷酸探针，所述的第二SNP检测区是用以侦测与第一SNP检测区不同的SNP位点，其中第三检测线以及第四检测线的APOE等位基因的核苷酸探针与第一检测线、第二检测线的APOE等位基因的核苷酸探针所涵盖的APOE的SNP位点不同。0015本发明的阿兹海默症基因检测装置于使用时，将样品溶液施用于样品垫上，令样品溶液的标的核酸分子通过侧向流LATERALFLOW朝向吸附垫方向移动，标的核酸分子通过结合垫而与结合垫内的标定物结合后，继而进入薄膜垫，而与所述检测线的APOE等位基因的核苷酸探针专一性的结合，依据侦测第一检测区、第二检测区的第一检测线、第二检测线、第三。
26、检测线以及第四检测线的讯号可以判定标的核酸分子的APOE等位基因型，而再加以定序，依据本发明的手段可以直接简化现有技术的检测流程，于一步骤中即可测定待测对象的APOE的多种等位基因型。0016依据本发明，所述的样品溶液是由一待测对象的核酸检体所制备而得，其含有经标定的APOE基因片段的溶液；较佳的，样品溶液中含有待测对象的核酸检体，其是利用经标定的引物所扩增出APOE基因片段，诸如于一聚合酶链式反应中以经标定的APOE引物对扩增而得的经标定的APOE基因片段。0017所述的“APOE等位基因的核苷酸探针”可为已知的任何APOE等位基因的序列所设计出，较佳的选自于涵盖APOE的SNPRS4293。
27、58或RS7412位点的APOE基因序列片段，其中SNPRS429358为胸苷THYMIDINE,T与RS7412为胞苷CYTIDINE,C，即野生型正义探针；SNPRS429358为胞苷与RS7412为胸苷，即突变型正义探针；更佳的，APOE等位基因的核苷酸探针具有与E2、E3、E4型基因序列互补的序列，即野生型或突变型负义探针。0018依据本发明，所述的“APOE等位基因的核苷酸探针”的大小介于16至25核苷酸，其熔点温度MELTINGPOINTTEMPERATURE,TM为50至65。0019较佳的，所述的“APOE等位基因的核苷酸探针”的大小介于16至22核苷酸，其熔点温度MELTIN。
28、GPOINTTEMPERATURE,TM为50至60。0020依据本发明，所述的第一SNP检测区与第二SNP检测区可依照需求予以设置于薄膜垫选定的位置，而不限于第一SNP检测区介于结合垫与第二SNP检测区之间。另可选择的，第二SNP检测区介于结合垫与第一SNP检测区之间。0021依据本发明，所述的第一SNP检测区还可包含一第五检测线和/或第六检测线，而第二SNP检测区更可包含一第七检测线和/或第八检测线，其中与第一检测线、第二检测线的APOE等位基因的核苷酸探针为突变型负义探针以及野生型负义探针相对应的第五检测线、第六检测线的APOE等位基因的核苷酸探针为野生型正义探针与突变型正义探针。类似的。
29、情形适用于第三检测线、第四检测线、第七检测线、第八检测线的APOE等位基因的核苷酸探针。0022较佳的，所述的“APOE等位基因的核苷酸探针”具有SEQIDNO1至SEQIDNO8任一所示序列。第一检测区与第二检测区的第一检测线、第二检测线、第三检测线以及第四说明书CN104178418A4/8页8检测线的相对排列位置，可依据需求选择具有特定序列的APOE等位基因的核苷酸探针，达到避免噪声产生或避免非所欲的因素影响结果。0023较佳的，所述的第一SNP检测区的第一检测线、第二检测线的APOE等位基因的核苷酸探针，它们涵盖同一APOE的SNP位点，亦即第一检测线、第二检测线的APOE等位基因的核。
30、苷酸探针的序列只有一个核苷酸的差异。例如，但不限于所述的差异对应于APOERS429358的SNP位点，第一检测线的APOE等位基因的核苷酸探针具有SEQIDNO1所示序列，其涵盖的RS429358位点为C，而第二检测线的APOE等位基因的核苷酸探针具有SEQIDNO2所示序列，其涵盖的RS429358位点为T。类似的，第一检测线的APOE等位基因的核苷酸探针亦可具有SEQIDNO3所示序列，而第二检测线所具APOE等位基因的核苷酸探针为SEQIDNO4所示序列。0024承上所述，与第一检测线、第二检测线不同，第二SNP检测区的第三检测线、第四检测线为涵盖另一APOE的SNP位点的APOE等位。
31、基因的核苷酸探针。较佳的，所述的第二SNP检测区所涵盖的APOE的SNP位点为APOERS7412。例如，第三检测线的APOE等位基因的核苷酸探针具有SEQIDNO5所示序列，其涵盖的RS7412位点为C，而于第四检测线的APOE等位基因的核苷酸探针具有SEQIDNO6所示序列，其涵盖的RS7412位点为T。类似的，第三检测线的APOE等位基因的核苷酸探针亦可具有SEQIDNO7所示序列，而第四检测线所具APOE等位基因的核苷酸探针为SEQIDNO8所示序列。0025由于所述的APOE等位基因的核苷酸探针为涵盖诸如APOE的SNPRS429358或RS7412位点的APOE基因序列片段，因此当。
32、待测对象的检体被施用于所述的阿兹海默症基因检测装置，可藉由第一检测线、第二检测线、第三检测线以及第四检测线是否产生讯号，以及讯号的组合形式，决定待测对象的APOE等位基因型是E2/E2、E2/E3、E3/E3、E2/E4、E3/E4或E4/E4，进而提供罹患晚发型阿兹海默症的风险为低至高的判断结果。0026综上所述，本发明藉由将涵盖不同的APOE等位基因的单核苷酸多态性SINGLENUCLEOTIDEPOLYMORPHISM,SNP位点的核苷酸探针，依照预定的侧向流方向固定于薄膜垫的第一检测线、第二检测线、第三检测线及第四检测线，施用样品溶液于样品垫，经反应后，比较参照第一SNP检测区与第二S。
33、NP检测区的第一检测线、第二检测线、第三检测线及第四检测线的讯号，而可以于单一步骤反应中专一且准确的测定待测对象的APOE的SNP基因型，而判定APOE等位基因型，提供罹患晚发型阿兹海默症风险的预测，以作为预防与治疗的依据。附图说明0027图1是本发明的较佳实施例的俯视示意图。0028图2是图1的侧视剖面示意图。0029图3是本发明的薄膜垫的操作原理示意图。0030图4A至图4F为本发明的较佳实施例的实施状态参考图。0031图5是现有技术APOE多态性的示意图。0032图中符号说明003310基板003420样品垫说明书CN104178418A5/8页9003530吸附垫003640结合垫00。
34、3750薄膜垫0038511第一检测线0039512第二检测线0040521第三检测线0041522第四检测线004253控制线具体实施方式0043本发明的一种阿兹海默症基因检测装置，其包含一基板、一样品垫、一结合垫、一薄膜垫以及一吸附垫，其中样品垫、结合垫、薄膜垫依序排列设置于基板的一表面上并且彼此相互连接；薄膜垫设有一第一SNP检测区、一第二SNP检测区以及一控制线，其中第一SNP检测区包括一第一检测线以及一第二检测线，以及第二SNP检测区包括一第三检测线以及一第四检测线，第一检测线、第二检测线、第三检测线以及第四检测线分别固定一APOE等位基因的核苷酸探针。所述的阿兹海默症基因检测装置是。
35、将样品垫20、吸附垫30、结合垫40、薄膜垫50固定于基板10上而组装成。0044所述的第一SNP检测区的第一检测线511、第二检测线512各自具有一APOE等位基因的核苷酸探针，所述APOE等位基因的核苷酸探针彼此之间具有一核苷酸差异，通过第一SNP检测区的第一检测线、第二检测线讯号，可以判断待侧对象的APOE基因的特定位点的单核苷酸多态性。0045在本发明的一较佳实施例中，第一检测线、第二检测线的APOE等位基因的核苷酸探针涵盖同一APOE的RS429358SNP位点，二者只有一个核苷酸的差异，第一检测线的APOE等位基因的核苷酸探针具有SEQIDNO1所示序列，其涵盖的RS429358位。
36、点为C，而第二检测线的APOE等位基因的核苷酸探针具有SEQIDNO2所示序列，其涵盖的RS429358位点为T。在本发明的另一较佳实施例中，第一检测线的APOE等位基因的核苷酸探针亦可具有SEQIDNO3所示序列，其涵盖的RS429358位点为C，而第二检测线所具APOE等位基因的核苷酸探针为SEQIDNO4所示序列，其涵盖的RS429358位点为T。0046在本发明的一较佳实施例中，第三检测线、第四检测线为涵盖APOE的SNPRS7412位点的APOE等位基因的核苷酸探针，第三检测线的APOE等位基因的核苷酸探针具有SEQIDNO5所示序列，其涵盖的RS7412位点为C，而于第四检测线的A。
37、POE等位基因的核苷酸探针具有SEQIDNO6所示序列，其涵盖的RS7412位点为T。在本发明的另一较佳实施例中，第三检测线的APOE等位基因的核苷酸探针亦可具有SEQIDNO7所示序列，其涵盖的RS7412位点为C，而第四检测线所具APOE等位基因的核苷酸探针为SEQIDNO8所示序列，其涵盖的RS7412位点为T。0047在本发明的一较佳实施例中，所述阿兹海默症基因检测装置具有主要如上述所述的结构，除此之外，其中第一SNP检测区还可包括一第五检测线、一第六检测线，以及第二SNP检测区还可包括一第七检测线、一第八检测线。0048在本发明的一较佳实施例中，第一检测区包括第一检测线、第二检测线、。
38、第五检测说明书CN104178418A6/8页10线、第六检测线的APOE等位基因的核苷酸探针，它们为涵盖SNPRS4293582位点的野生型与突变型正义、负义探针，如选自于SEQIDNO1至SEQIDNO4所示序列的核苷酸探针；而第二检测区包括第三检测线、第四检测线、第七检测线、第八检测线的APOE等位基因的核苷酸探针，它们为涵盖SNPRS7412位点的野生型与突变型正义、负义探针，如选自于SEQIDNO5至SEQIDNO8所示序列的核苷酸探针。如前所述，当正义、负义探针同时存在时，作为检测结果的准确性的重复确认，而更进一步避免假性检测结果发生。0049在本发明的另一较佳实施例中，第一检测线。
39、、第二检测线、第五检测线、第六检测线的APOE等位基因的核苷酸探针选自于SEQIDNO5至SEQIDNO8，第一检测线、第二检测线、第五检测线、第六检测线的APOE等位基因的核苷酸探针各自为具有SEQIDNO5至SEQIDNO8所示不同序列的核苷酸探针；而第三检测线、第四检测线、第七检测线、第八检测线的APOE等位基因的核苷酸探针选自于SEQIDNO1至SEQIDNO4，第三检测线、第四检测线、第七检测线、第八检测线的APOE等位基因的核苷酸探针各自为具有SEQIDNO1至SEQIDNO4所示不同序列的核苷酸探针。0050在本发明的一较佳实施例中，结合垫的标定物是由胶体金、酶、荧光物质、染料、。
40、碳黑或乳胶与一能够专一性辨识经标定的APOE基因片段的分子所形成的。例如，与胶体金结合的抗DIG抗体。如本领域所知晓的，可以依据需求选择适当的标定物，并针对标定物的物理或化学性质变化所产生的讯号，侦测经标定的APOE基因片段的存在与否。0051本发明藉由下列实施例作为例示说明，以使得所请发明的范畴更为清楚，而不应作为解释保护范围的限制。0052实施例0053阿兹海默症基因检测装置的制造0054如图1与图2所示，本实施例提供一阿兹海默症基因检测装置，其包括一基板10、一样品垫20、一吸附垫30、一结合垫40以及一薄膜垫50，其中基板10的一侧面的一端设置样品垫20，基板10的该侧面的另一端设置吸。
41、附垫30，位于样品垫20与吸收垫30之间并与样品垫20邻接设置结合垫40，结合垫40与吸附垫30之间设置薄膜垫50，薄膜垫50横向平行设置有一第一SNP检测区51以及一第二SNP检测区52以及一控制线53，其中该第一SNP检测区51包括一第一检测线511和一第二检测线512，该第二SNP检测区52包括一第三检测线521和一第四检测线522。0055所述的阿兹海默症基因检测装置的制备方式简述如下，其与一般免疫层析检测大致相同。首先提供一基板10、一样品垫20、一吸附垫30、一结合垫40的本体以及一薄膜垫50，所述的基板10为塑料材料所制造而成；所述的样品垫20为玻璃纤维所制成；所述的吸附垫30为。
42、纤维纸；所述的结合垫40的本体为玻璃纤维所制成；所述的薄膜垫50为硝化纤维素薄膜。0056所述的结合垫40包括一本体与一标定物，此处的标定物为与胶体金结合的抗DIGOXIGENINDIG抗体，其能够辨识DIG，而能与经DIG标定的APOE基因片段结合，胶体金的聚集沉淀会呈现肉眼可见的颜色，可藉此判定与标定物结合的标的基因片段的存在与否。结合垫40是藉由将玻璃纤维本体浸渍于含有与胶体金结合的抗DIGOXIGENINDIG抗体的溶液后干燥而得。0057将卵白素STREPTAVIDIN与经生物素BIOTIN标定的具有SEQIDNO3、SEQID说明书CN104178418A107/8页11NO4、S。
43、EQIDNO7及SEQIDNO8所示序列的探针的混合溶液喷涂于薄膜垫50，形成四条间隔的并行线，形成所述的第一检测线511、第二检测线512、第三检测线521、第四检测线522，如图3所示，藉以分别与RS429358为C、RS429358为T、RS7412为C、RS7412为T的APOE等位基因片段相结合。0058将经生物素标定的RS429358突变型负义探针注记为MAT，即经生物素标定的具有如SEQIDNO3所示序列的APOE等位基因的核苷酸探针，通过与卵白素结合而固定于薄膜垫，以形成所述的第一检测线511。0059将经生物素标定的RS429358野生型负义探针注记为WAT，即经生物素标定的。
44、具有如SEQIDNO4所示序列的APOE等位基因的核苷酸探针，通过与卵白素结合而固定于薄膜垫，以形成所述的第二检测线512。0060将经生物素标定的RS7412野生型负义探针注记为WAT，即经生物素标定的具有如SEQIDNO7所示序列的APOE等位基因的核苷酸探针，通过与卵白素结合而固定于薄膜垫，以形成所述的第三检测线521。0061将经生物素标定的RS7412突变型负义探针注记为MAT，即经生物素标定的具有如SEQIDNO8所示序列的APOE等位基因的核苷酸探针，通过与卵白素结合而固定于薄膜垫，以形成所述的第四检测线522。0062另于薄膜垫50第四检测线522与吸附垫30之间涂布针对抗DI。
45、G抗体的二级抗体ANTIDIGSECONDARYANTIBODY，形成控制线53，以辨识标定与胶体金结合的抗DIG抗体，作为阳性反应的对照组。0063将样品垫20、吸附垫30、结合垫40、薄膜垫50固定于基板10上，组装成所述的阿兹海默症基因检测装置。0064由检体准备样品溶液0065取待测对象A、B、C、D、E及F的核酸检体，使用经DIG标定的引物APOEASEQIDNO9以及APOECSEQIDNO10，进行聚合酶链式反应扩增大小为303碱基对的经DIG标定的APOE基因片段，其涵盖RS429358以及RS7412的SNP位点，并且齐备含有该经标定的APOE基因片段的样品溶液A、B、C、D。
46、、E及F。0066以阿兹海默症基因检测装置分析检体0067配合参考图3所示，将前述样品溶液各自施用于一阿兹海默症基因检测装置的样品垫10，使之均匀分布进入结合垫40，该经DIG标定的APOE基因片段于结合垫40中与胶体金结合的抗DIG抗体结合，胶体金结合的抗DIG抗体与经DIG标定的APOE基因片段通过毛细现象继续移动进入薄膜垫50，第一检测线511、第二检测线512、第三检测线521、第四检测线522的具有如SEQIDNO3、SEQIDNO4、SEQIDNO7及SEQIDNO8所示序列的APOE等位基因的核苷酸探针会专一性的与结合有胶体金结合的抗DIG抗体的经DIG标定的APOE基因片段反应。
47、，而胶体金聚集而显现颜色，没有作用的胶体金结合的抗DIG抗体会与控制线53的针对抗DIG抗体的抗体结合而显现颜色。0068样品溶液A施用于一阿兹海默症基因检测装置，结果如图4A所示，显示样品溶液A中经DIG标定的APOE基因片段与第一SNP侦测区的第二检测线512以及第二SNP侦测区的第四检测线522结合，表示检体A的APOE等位基因型为E2/E2型。0069样品溶液B施用于一阿兹海默症基因检测装置，结果如图4B所示，显示样品溶液说明书CN104178418A118/8页12B中经DIG标定的APOE基因片段与第一SNP侦测区51的第二检测线512以及第二SNP侦测区52的第三检测线521、第。
48、四检测线522结合，表示检体B的APOE等位基因型为E2/E3型。0070样品溶液C施用于一阿兹海默症基因检测装置，结果如图4C所示，显示样品溶液C中经DIG标定的APOE基因片段与第一SNP侦测区51的第一检测线511、第二检测线512以及第二SNP侦测区52的第三检测线521、第四检测线522结合，表示检体C的APOE等位基因型为E2/E4型。0071样品溶液D施用于一阿兹海默症基因检测装置，结果如图4D所示，显示样品溶液D中经DIG标定的APOE基因片段与第一SNP侦测区51的第二检测线512以及第二SNP侦测区52的第三检测线521结合，表示检体D的APOE等位基因型为E3/E3型。0。
49、072样品溶液E施用于一阿兹海默症基因检测装置，结果如图4E所示，显示样品溶液E中经DIG标定的APOE基因片段与第一SNP侦测区51的第一检测线511、第二检测线512以及第二SNP侦测区52的第三检测线521结合，表示检体E的APOE等位基因型为E3/E4型。0073样品溶液F施用于一阿兹海默症基因检测装置，结果如图4F所示，显示样品溶液F中经DIG标定的APOE基因片段与第一SNP侦测区51的第一检测线511以及第二SNP侦测区52的第三检测线521结合，表示检体F的APOE等位基因型为E4/E4型。0074基于上述检测结果可见，所述样品溶液制备后施用于所述的阿兹海默症基因检测装置，可于单一的步骤于检测线位置呈现颜色，显示检体AF的来源待检测对象的APOE等位基因型分别为E2/E2型、E2/E3型、E3/E3型、E2/E4型、E3/E4型、E4/E4型，判定所属检测对象罹患晚发型阿兹海默症的风险分别为低至高。说明书CN104178418A121/4页1300010002序列表CN104178418A132/4页140003序列表CN104178418A143/4页150004序列表CN104178418A154/4页16序列表CN104178418A161/4页17图1图2说明书附图CN104178418A172/4页18图3图4A说明书附图CN。