一种用于分辨3种水产源气单胞菌复合群的检测试剂盒.pdf

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摘要
申请专利号:

CN201410436513.7

申请日:

2014.08.29

公开号:

CN104178416A

公开日:

2014.12.03

当前法律状态:

驳回

有效性:

无权

法律详情:

发明专利申请公布后的驳回IPC(主分类):C12M 1/00申请公布日:20141203|||实质审查的生效IPC(主分类):C12M 1/00申请日:20140829|||公开

IPC分类号:

C12M1/00; C12Q1/26; C12R1/01(2006.01)N

主分类号:

C12M1/00

申请人:

中国水产科学研究院珠江水产研究所

发明人:

谭爱萍; 吴雅丽; 姜兰; 邓玉婷; 罗理; 王伟利; 梁爱玲

地址:

510380 广东省广州市荔湾区芳村西朗兴渔路1号

优先权:

专利代理机构:

广州市越秀区海心联合专利代理事务所(普通合伙) 44295

代理人:

任琳

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内容摘要

本发明公开了一种用于分辨3种水产源气单胞菌复合群的检测试剂盒,旨在提供一种同时筛选嗜水气单胞菌复合群、温和气单胞菌复合群、豚鼠气单胞菌复合群3种常见水产源气单胞菌复合群,且成本低,检测准确率高的试剂盒;其技术方案是这样的:该用于分辨3种水产源气单胞菌复合群的检测试剂盒,所述的试剂盒由下列鉴定材料组成:1)试剂A-无菌水;2)鉴定瓶1-无盐碱性蛋白胨水;3)鉴定瓶2-含氨苄西林的RS培养基;4)鉴定瓶3-胰蛋白胨大豆培养基;5)鉴定瓶4-阿拉伯糖培养基;6)鉴定瓶5-七叶苷培养基;7)鉴定瓶6-葡萄糖产气培养基;8)鉴定瓶7-氧化酶试纸;属于检测技术领域。

权利要求书

1.  一种用于分辨3种水产源气单胞菌复合群的检测试剂盒,其特征在于,所述的试剂盒由下述鉴定瓶和试剂组成:1)试剂A-无菌水;2)鉴定瓶1-无盐碱性蛋白胨水;3)鉴定瓶2-含氨苄西林的RS培养基;4)鉴定瓶3-胰蛋白胨大豆培养基;5)鉴定瓶4-阿拉伯糖培养基;6)鉴定瓶5-七叶苷培养基;7)鉴定瓶6-葡萄糖产气培养基;8)鉴定瓶7-氧化酶试纸。

2.
  根据权利要求1所述的用于分辨3种水产源气单胞菌复合群的检测试剂盒,其特征在于,所述的水产源气单胞菌复合群为嗜水气单胞菌复合群、温和气单胞菌复合群和豚鼠气单胞菌复合群。

3.
  根据权利要求1所述的用于分辨3种水产源气单胞菌复合群的检测试剂盒,其特征在于,所述的无盐碱性蛋白胨水由下述质量百分比的组分构成:蛋白胨1.9-2.1%,硝酸钾0.0095-0.015%,结晶碳酸钠0.015-0.025%,余量为水;pH8.2-8.5。

4.
  根据权利要求1所述的用于分辨3种水产源气单胞菌复合群的检测试剂盒,其特征在于,所述的含氨苄西林的RS培养基由下述质量百分比的组分制成:L-盐酸鸟氨酸0.60-0.70%,L-盐酸赖氨酸0.4-0.6%,L-盐酸半胱氨酸0.02-0.04%,麦芽糖0.30-0.40%,硫代硫酸钠0.60-0.75%,枸橼酸铁胺0.07-0.09%,脱氧胆酸钠0.09-0.11%,酵母膏0.25-0.35%,氯化钠0.4-0.6%,溴麝香草酚蓝0.002-0.004%,新生霉素0.0004-0.0006%,琼脂1.2-1.8%,氨苄西林0.0001%,余量为水;pH6.8-7.2。

5.
  根据权利要求1所述的用于分辨3种水产源气单胞菌复合群的检测试剂盒,其特征在于,所述的胰蛋白胨大豆培养基由下述质量百分比的组分构成:胰蛋白胨1.3-1.7%,大豆蛋白胨0.4-0.6%,氯化钠0.4-0.6%,琼脂1.2-1.7%,余量为水;pH7.2-7.6。

6.
  根据权利要求1所述的用于分辨3种水产源气单胞菌复合群的检测试剂盒,其特征在于,所述的阿拉伯糖培养基由下述质量百分比的组分构成:牛肉 膏粉0.4-0.6%,蛋白胨0.8-1.2%,氯化钠0.2-0.4%,磷酸氢二钾0.15-0.25%,阿拉伯糖0.8-1.2%,溴百里酚蓝0.002-0.004%,余量为水;pH7.2-7.6。

7.
  根据权利要求1所述的用于分辨3种水产源气单胞菌复合群的检测试剂盒,其特征在于,所述的七叶苷培养基由下述质量百分比的组分构成:蛋白胨0.4-0.6%,牛肉浸膏0.2-0.4%,七叶苷0.09-0.11%,枸橼酸铁0.04-0.06%,琼脂1.2-1.8%,余量为水;pH7.2-7.6。

8.
  根据权利要求1所述的用于分辨3种水产源气单胞菌复合群的检测试剂盒,其特征在于,所述的葡萄糖产气培养基由下述质量百分比的组分构成:多价胨1.5-2.5%,酵母膏0.4-0.6%,氯化钠0.4-0.6%,葡萄糖2.5-3.5%,吐温-804-6%,溴百里酚蓝0.002-0.004%,余量为水;pH6.8-7.2。

说明书

一种用于分辨3种水产源气单胞菌复合群的检测试剂盒
技术领域
本发明涉及一种检测试剂盒,更具体的说是一种用于分辨嗜水气单胞菌复合群、温和气单胞菌复合群、豚鼠气单胞菌复合群3种常见水产源气单胞菌复合群的检测试剂盒。 
背景技术
气单胞菌属于气单胞菌科,广泛分布在水环境,也常在人体、水产动物和食物中检出。水产动物源气单胞菌分成3个复合群,包括嗜水气单胞菌复合群、温和气单胞菌复合群、豚鼠气单胞菌复合群,主要有嗜水气单胞菌、温和气单胞菌、维氏气单胞菌、豚鼠气单胞菌等,同时也是常见的人鱼共患病原菌,能引起人的食物中毒、腹泻、败血症等。气单胞菌具有广泛的致病性,在高温季节,容易单独或者混合感染包括鱼虾类、贝类、爬行两栖类等多种水产动物,是水产养殖中一种危害性较高的病原菌,容易引起水生动物多种细菌病的暴发,且危害程度高于其它细菌性疾病,成为我国淡水水产养殖业发展的主要威胁(唐江芳,气单胞菌及其在水产中的危害,2007)。而临床上的盲目用药,使病原菌在大范围药物选择压力下,渐渐保留了气单胞菌耐药菌株,甚至是多重耐药菌株,致使抗生素疗效下降(蔡丽娟,等,水产致病性嗜水气单胞菌耐药性比较与分析,水产科学,2011)。这不仅导致药物对水生动物疾病的防控能力大大减弱,同时也严重影响水产动物源食品的质量安全,还存在将耐药性传播给人类致病菌的潜在风险。因此,监测养殖动物和养殖水体中不同气单胞菌复合群的存在及其耐药性是防治相关水产动物疾病和保证食品安全的重要措施,而如何高效简便的分辨出水产源气单胞菌复合群是目前最需解决的问题。 
目前分辨出水产源气单胞菌复合群的技术有:1、通过普通培养基培养纯化单菌落后利用细菌快速自动鉴定系统进行鉴定分辨,该法需要昂贵的仪器设备和技术熟练的操作人员;2、通过普通培养基培养纯化单菌落后利用核酸的检测技术,包括DNA和PCR技术(聚合酶链式反应技术),虽然具有快速、简洁和灵敏的特点,但该法需要昂贵的仪器设备和技术熟练的操作人员;3、经典的生理生化鉴定方法,该法不仅繁琐、耗时、且要求操作人员有良好的专业素质;4、目前也有些商品化的气单胞菌培养基,如RS培养基、AHM培养基和APM培养基等,但分离率和准确率不高(凌红丽,等,嗜水气单胞菌选择性培养基鉴别效果的比较,1998)。 
发明内容
针对上述不足,本发明的目的是提供了一种同时筛选嗜水气单胞菌复合群、温和气单胞菌复合群、豚鼠气单胞菌复合群3种常见水产源气单胞菌复合群且成本低,准确率高的试剂盒。 
为此,本发明提供的技术方案是这样的:该用于分辨3种水产源气单胞菌复合群的检测试剂盒,所述的试剂盒由下述鉴定瓶和试剂组成:1)试剂A-无菌水;2)鉴定瓶1-无盐碱性蛋白胨水;3)鉴定瓶2-含氨苄西林的RS培养基;4)鉴定瓶3-胰蛋白胨大豆培养基;5)鉴定瓶4-阿拉伯糖培养基;6)鉴定瓶5-七叶苷培养基;7)鉴定瓶6-葡萄糖产气培养基;8)鉴定瓶7-氧化酶试纸。 
上述的用于分辨3种水产源气单胞菌复合群的检测试剂盒,所述的水产源气单胞菌复合群为嗜水气单胞菌复合群、温和气单胞菌复合群和豚鼠气单胞菌复合群。 
进一步的,上述的用于分辨3种水产源气单胞菌复合群的检测试剂盒,所述的无盐碱性蛋白胨水由下述质量百分比的组分构成:蛋白胨1.9-2.1%,硝酸钾0.0095-0.015%,结晶碳酸钠0.015-0.025%,余量为水;pH8.2-8.5。 
进一步的,上述的用于分辨3种水产源气单胞菌复合群的检测试剂盒,所述的含氨苄西林的RS培养基由下述质量百分比的组分制成:L-盐酸鸟氨酸0.60-0.70%,L-盐酸赖氨酸0.4-0.6%,L-盐酸半胱氨酸0.02-0.04%,麦芽糖0.30-0.40%,硫代硫酸钠0.60-0.75%,枸橼酸铁胺0.07-0.09%,脱氧胆酸钠0.09-0.11%,酵母膏0.25-0.35%,氯化钠0.4-0.6%,溴麝香草酚蓝0.002-0.004%,新生霉素0.0004-0.0006%,琼脂1.2-1.8%,氨苄西林0.0001%,余量为水;pH6.8-7.2。 
进一步的,上述的用于分辨3种水产源气单胞菌复合群的检测试剂盒,所述的胰蛋白胨大豆培养基由下述质量百分比的组分构成:胰蛋白胨1.3-1.7%,大豆蛋白胨0.4-0.6%,氯化钠0.4-0.6%,琼脂1.2-1.7%,余量为水;pH7.2-7.6。 
进一步的,上述的用于分辨3种水产源气单胞菌复合群的检测试剂盒,所述的阿拉伯糖培养基由下述质量百分比的组分构成:牛肉膏粉0.4-0.6%,蛋白胨0.8-1.2%,氯化钠0.2-0.4%,磷酸氢二钾0.15-0.25%,阿拉伯糖0.8-1.2%,溴百里酚蓝0.002-0.004%,余量为水;pH7.2-7.6。 
进一步的,上述的用于分辨3种水产源气单胞菌复合群的检测试剂盒,所述的七叶苷培养基由下述质量百分比的组分构成:蛋白胨0.4-0.6%,牛肉浸膏0.2-0.4%,七叶苷0.09-0.11%,枸橼酸铁0.04-0.06%,琼脂1.2-1.8%,余量为水;pH7.2-7.6。 
进一步的,上述的用于分辨3种水产源气单胞菌复合群的检测试剂盒,所述的葡萄糖产气培养基由下述质量百分比的组分构成:多价胨1.5-2.5%,酵母膏0.4-0.6%,氯化钠0.4-0.6%,葡萄糖2.5-3.5%,吐温-804-6%,溴百里酚蓝0.002-0.004%,余量为水;pH6.8-7.2。 
与现有技术相比,本发明提供的技术方案具有如下技术优点: 
本发明提供的技术方案是在研究分析现有选择性培养基特性和气单胞菌不同生理生化特性的基础上建立的。通过用3种培养基筛选分离和4个生化反应结果进行归纳判断,能简便分离嗜水气单胞菌复合群、温和气单胞菌复合群、豚鼠气单胞菌复合群3种常见水产源气单胞菌复合群。 
本发明的试剂盒试剂构成、配制方法、使用方法简单,成本低,与细菌自动或半自动快速鉴定系统和基于核酸的检测技术相比,不需要昂贵的仪器设备和技术熟练的操作人员,为筛选分离水产源气单胞菌复合群提供了极大的方便。 
具体实施方式
为了更好的理解、实施本发明的权利要求,下面结合具体实施例对本发明的权利要求做进一步的详细说明,但本发明并不限于下述实施例,而是以权利要求为限。 
实施例1 
本发明提供的一种用于分辨嗜水气单胞菌复合群、温和气单胞菌复合群、豚鼠气单胞菌复合群3种常见水产源气单胞菌复合群的检测试剂盒,具体由下列鉴定瓶和试剂组成: 
1)用于稀释池塘底泥试剂A-无菌水; 
2)用于除去需盐并在酸性和中性环境中均能生长的细菌,特别是弧菌科细菌的鉴定瓶1-无盐碱性蛋白胨水,该鉴定瓶所含组分按质量分数100%计为:蛋白胨2%,硝酸钾0.01%,结晶碳酸钠0.02%,余量为水,pH8.4; 
3)用于筛选对氨苄西林不敏感的疑似气单胞菌的鉴定瓶2-含氨苄西林RS培养基,该鉴定瓶所含组分按质量分数100%计为:L-盐酸鸟氨酸0.65%,L-盐酸赖氨酸0.5%,L-盐酸半胱氨酸0.03%,麦芽糖0.35%,硫代硫酸钠0.68%,枸橼酸铁胺0.08%,脱氧胆酸钠0.1%,酵母膏0.3%,氯化钠0.5%,溴麝香草酚蓝 0.003%,新生霉素0.0005%,琼脂1.5%,氨苄西林0.0001%,余量为水,pH7.0; 
需要说明的是,本培养基现配现用,首先把RS培养基煮沸溶解1-2分钟,待培养基冷却至40-50℃后把氨苄西林加入培养基摇均匀,然后倒制琼脂平板。 
4)用于细菌的培养的鉴定瓶3-胰蛋白胨大豆培养基,该鉴定瓶所含组分按质量分数100%计为:胰蛋白胨1.5%,大豆蛋白胨0.5%,氯化钠0.5%,琼脂1.5%,余量为水,pH7.4; 
5)用于检查细菌对阿拉伯糖类发酵的特性,观察被检细菌的产酸能力的鉴定瓶4-阿拉伯糖培养基,该鉴定瓶所含组分按质量分数100%计为:牛肉膏粉0.5%,蛋白胨1%,氯化钠0.3%,磷酸氢二钾0.2%,阿拉伯糖1%,溴百里酚蓝0.003%,余量为水,pH7.4; 
6)用于检测细菌对七叶苷的水解能力的鉴定瓶5-七叶苷培养基,该鉴定瓶所含组分按质量分数100%计为:含蛋白胨0.5%,牛肉浸膏0.3%,七叶苷0.1%,枸橼酸铁0.05%,琼脂1.5%,余量为水,pH7.4; 
7)用于检测细菌产酸产气的能力的鉴定瓶6-葡萄糖产气培养基,该鉴定瓶所含组分按质量分数100%计为:多价胨2%,酵母膏0.5%,氯化钠0.5%,葡萄糖3%,吐温-805%,溴百里酚蓝0.003%,余量为水,将所有组分倒置放入直径2-3毫米发酵小管;pH7.0。 
8)用于检查细菌中是否含有细胞色素氧化酶鉴定瓶7-氧化酶试纸。 
上述各个鉴定瓶中的培养基以及试剂A中试剂组份都可以从现有产品中购买到,并可按照公知常规的方法进行配制。 
实施例2 
本发明提供的一种用于分辨嗜水气单胞菌复合群、温和气单胞菌复合群、豚鼠气单胞菌复合群3种常见水产源气单胞菌复合群的检测试剂盒,具体由下 列鉴定瓶和试剂组成: 
1)用于稀释池塘底泥试剂A-无菌水; 
2)用于除去需盐并在酸性和中性环境中均能生长的细菌,特别是弧菌科细菌的鉴定瓶1-无盐碱性蛋白胨水,该鉴定瓶所含组分按质量分数100%计为:蛋白胨2.1%,硝酸钾0.015%,结晶碳酸钠0.015%,余量为水;pH8.2; 
3)用于筛选对氨苄西林不敏感的疑似气单胞菌的鉴定瓶2-含氨苄西林RS培养基,该鉴定瓶所含组分按质量分数100%计为:L-盐酸鸟氨酸0.60%,L-盐酸赖氨酸0.6%,L-盐酸半胱氨酸0.02%,麦芽糖0.40%,硫代硫酸钠0.60%,枸橼酸铁胺0.09%,脱氧胆酸钠0.09%,酵母膏0.35%,氯化钠0.4%,溴麝香草酚蓝0.004%,新生霉素0.0004%,琼脂1.8%,氨苄西林0.0001%,余量为水;pH7.2。 
需要说明的是:本培养基现配现用,首先把RS培养基煮沸溶解1-2分钟,待培养基冷却至40-50℃后把氨苄西林加入培养基摇均匀,然后倒制琼脂平板。 
4)用于细菌的培养的鉴定瓶3-胰蛋白胨大豆培养基,该鉴定瓶所含组分按质量分数100%计为:胰蛋白胨1.3%,大豆蛋白胨0.6%,氯化钠0.4%,琼脂1.7%,余量为水;pH7.2。 
5)用于检查细菌对阿拉伯糖类发酵的特性,观察被检细菌的产酸能力的鉴定瓶4-阿拉伯糖培养基,该鉴定瓶所含组分按质量分数100%计为:牛肉膏粉0.4%,蛋白胨1.2%,氯化钠0.2%,磷酸氢二钾0.25%,阿拉伯糖0.8%,溴百里酚蓝0.004%,余量为水;pH7.2。 
6)用于检测细菌对七叶苷的水解能力的鉴定瓶5-七叶苷培养基:按质量分数100%计,蛋白胨0.6%,牛肉浸膏0.4%,七叶苷0.09%,枸橼酸铁0.06%,琼脂1.2%,余量为水;pH7.6。 
7)用于检测细菌产酸产气的能力的鉴定瓶6-葡萄糖产气培养基,该鉴定瓶 所含组分按质量分数100%计为:多价胨2.5%,酵母膏0.4%,氯化钠0.6%,葡萄糖2.5%,吐温-806%,溴百里酚蓝0.002%,余量为水;pH7.2。 
8)用于检查细菌中是否含有细胞色素氧化酶鉴定瓶7-氧化酶试纸。 
上述各个鉴定瓶中的培养基以及试剂A中试剂组份都可以从现有产品中购买到,并可按照公知常规的方法进行配制。 
实施例3 
本发明提供的一种用于分辨嗜水气单胞菌复合群、温和气单胞菌复合群、豚鼠气单胞菌复合群3种常见水产源气单胞菌复合群的检测试剂盒,具体由下列鉴定瓶和试剂组成: 
1)用于稀释池塘底泥试剂A-无菌水; 
2)用于除去需盐并在酸性和中性环境中均能生长的细菌,特别是弧菌科细菌的鉴定瓶1-无盐碱性蛋白胨水,该鉴定瓶所含组分按质量分数100%计为:蛋白胨1.9%,硝酸钾0.015%,结晶碳酸钠0.015%,余量为水;pH8.5; 
3)用于筛选对氨苄西林不敏感的疑似气单胞菌的鉴定瓶2-含氨苄西林RS培养基,该鉴定瓶所含组分按质量分数100%计为:L-盐酸鸟氨酸0.70%,L-盐酸赖氨酸0.4%,L-盐酸半胱氨酸0.04%,麦芽糖0.30%,硫代硫酸钠0.75%,枸橼酸铁胺0.07%,脱氧胆酸钠0.11%,酵母膏0.25%,氯化钠0.6%,溴麝香草酚蓝0.002%,新生霉素0.0006%,琼脂1.2%,氨苄西林0.0001%,余量为水;pH6.8。 
需要说明的是,本培养基现配现用,首先把RS培养基煮沸溶解1-2分钟,待培养基冷却至40-50℃后把氨苄西林加入培养基摇均匀,然后倒制琼脂平板。 
4)用于细菌的培养的鉴定瓶3-胰蛋白胨大豆培养基,该鉴定瓶所含组分按质量分数100%计为:胰蛋白胨1.7%,大豆蛋白胨0.4%,氯化钠0.6%,琼脂1.2%,余量为水;pH7.6; 
5)用于检查细菌对阿拉伯糖类发酵的特性,观察被检细菌的产酸能力的鉴定瓶4-阿拉伯糖培养基,该鉴定瓶所含组分按质量分数100%计为:牛肉膏粉0.6%,蛋白胨0.8%,氯化钠0.4%,磷酸氢二钾0.15%,阿拉伯糖1.2%,溴百里酚蓝0.002%,余量为水;pH7.6; 
6)用于检测细菌对七叶苷的水解能力的鉴定瓶5-七叶苷培养基:按质量分数100%计,蛋白胨0.4%,牛肉浸膏0.4%,七叶苷0.09%,枸橼酸铁0.06%,琼脂1.2%,余量为水;pH7.6。 
7)用于检测细菌产酸产气的能力的鉴定瓶6-葡萄糖产气培养基,该鉴定瓶所含组分按质量分数100%计为:多价胨1.5%,酵母膏0.6%,氯化钠0.4%,葡萄糖3.5%,吐温-804%,溴百里酚蓝0.004%,余量为水;pH6.8。 
8)用于检查细菌中是否含有细胞色素氧化酶鉴定瓶7-氧化酶试纸。 
上述各个鉴定瓶中的培养基以及试剂A中试剂组份都可以从现有产品中购买到,并可按照公知常规的方法进行配制。 
具体检测方法为: 
(1)样品采集 
①样品要求: 
A:底泥取约3g加入2mL无菌水混匀并静止10min后取100μL上层液体; 
B:环境水样(池塘表面下20-30cm)100μL; 
C:用镊子或剪子取绿豆大小的动物组织样品(鳃、肝脏、病灶); 
②样品处理: 
将以上三类样品分别接种于3ml无盐碱性蛋白胨水中增菌,28℃振荡培养18-20h。剩余样品置4℃保存备用。 
③样品编号。 
(2)3种常见水产源气单胞菌复合群分离与鉴定(在无菌条件下进行操作) 
①筛选培养: 
用接种环蘸取各个样品增菌液,分别接种于含氨苄西林RS平板,28℃静置培养18-20h。若菌落在含氨苄西林RS平板上呈黄色且光滑,则初步判断为气单胞菌疑似菌; 
②分离纯化: 
每个平板挑取同1个优势黄色单菌落,分别接种于含氨苄西林RS平板和胰蛋白胨大豆培养基平板进行纯化,28℃静置培养18-20h; 
③用接种环取在胰蛋白胨大豆培养基平板上纯化培养的疑似菌,划于氧化酶试纸条,1min内观察,若划线处呈紫色或者紫红色,为氧化酶阳性;同时挑取适量氧化酶阳性的菌落分别接种于阿拉伯糖培养基、七叶苷培养基、葡萄糖产气培养基,35℃静置培养18-24h,观察培养基颜色的变化和葡萄糖产气培养基小管气体的产生。 
(3)结果判定 
若菌株在无盐碱性蛋白胨水生长良好,记为“+”,不生长记为“-”;菌落在含氨苄西林RS平板上呈黄色且光滑记为“+”,不生长或菌落为绿色或绿黄色记为“-”;菌落在胰蛋白胨大豆培养基上生长良好、呈米白色且光滑记为“+”,不生长或菌落为其他颜色记为“-”;阿拉伯糖培养基呈黄色记为“+”,紫色记为“-”;七叶苷培养基呈黄色记为“+”,紫色记为“-”;葡萄糖产气培养基中的发酵管有气泡记为“+”,无气泡记为“-”;氧化酶实验结果阳性记为“+”,阴性记为“-”;。把待检菌各反应结果与细菌鉴定表(表1)对照,如果与鉴定表中的细菌结果一致,则可判断待测菌为相应的复合群菌,因此可确定待检菌的分类位置。 
表1 细菌鉴定表 

实验例1 
对本实验室分离保存的已鉴定的细菌进行筛选鉴定。 
实验步骤: 
1、开菌株冻干保存管,用无盐碱性蛋白胨水增菌,28℃振荡培养18-20h。 
2、用接种环蘸取增菌液,分别接种于含氨苄西林RS平板和胰蛋白胨大豆培养基平板进行纯化,28℃静置培养18-20h。 
3、用接种环取在胰蛋白胨大豆培养基平板上纯化培养的疑似菌,划于氧化酶试纸条,1min内观察。 
4、结果记录 
试验所使用的90株细菌中,有77株为水产源气单胞菌,其中嗜水气单胞菌复合群43株(嗜水气单胞菌43株),温和气单胞菌复合群21株(温和气单胞菌5株,维氏气单胞菌10株,脆弱气单胞菌3株,简达气单胞菌3株),豚鼠气单胞菌复合群7株(豚鼠气单胞菌6株,中间气单胞菌1株),A.aquariorum (气单胞菌属的国内暂无译文的菌株)5株,其他未定种的气单胞菌属菌株1株;金黄色葡萄球菌等非水产源气单胞菌14株。实验结果显示,除了5株A.aquariorum和1株未定种的气单胞菌属菌株外,其他71株已分类的常见水产源气单胞菌复合群中,除1株脆弱气单胞菌、1株维氏气单胞菌在无盐碱性蛋白胨水不生长外,其他69株水产源气单胞菌均能确定复合群的种类,准确率为97.18%;其他13株非水产源气单胞菌的实验结果均不符合本发明所判定的常见水产源气单胞菌复合群。结果见表2: 
表2 实验室分离保存的已鉴定的细菌筛选鉴定结果 





注:“/”表示不能确定的复合群,“?”表示使用本试剂盒鉴定结果与原鉴定结果不符,不能确定复合群。 
其中:“A”代表嗜水气单胞菌复合群;“B”代表温和气单胞菌复合群;“C”代表豚鼠气单胞菌复合群。 
实施例2 
采用本发明随机取三水、珠海、顺德养殖池塘的底泥、水和鱼组织分离水产源气单胞菌,结果显示,经细菌半自动鉴定仪和分子生物学技术分析,所采集的69份样品中,分离出68株水产源气单胞菌,其中A11株(嗜水气单胞菌11株),B44株(温和气单胞菌6株,维氏气单胞菌31株,简达气单胞菌7株),C6株(豚鼠气单胞菌6株),斑点气单胞菌7株;希瓦氏菌属1株。实验结果显示,除了7株斑点气单胞菌外,其他71株待测菌均能确定复合群的种类,准确 率为100%。结果见表3: 
表3 常见水产源气单胞菌复合群筛选分离结果 




注:“/”表示不能确定的复合群。 
其中:“A”代表嗜水气单胞菌复合群;“B”代表温和气单胞菌复合群;“C”代表豚鼠气单胞菌复合群。 

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1、10申请公布号CN104178416A43申请公布日20141203CN104178416A21申请号201410436513722申请日20140829C12M1/00200601C12Q1/26200601C12R1/0120060171申请人中国水产科学研究院珠江水产研究所地址510380广东省广州市荔湾区芳村西朗兴渔路1号72发明人谭爱萍吴雅丽姜兰邓玉婷罗理王伟利梁爱玲74专利代理机构广州市越秀区海心联合专利代理事务所普通合伙44295代理人任琳54发明名称一种用于分辨3种水产源气单胞菌复合群的检测试剂盒57摘要本发明公开了一种用于分辨3种水产源气单胞菌复合群的检测试剂盒,旨在提供一种。

2、同时筛选嗜水气单胞菌复合群、温和气单胞菌复合群、豚鼠气单胞菌复合群3种常见水产源气单胞菌复合群,且成本低,检测准确率高的试剂盒;其技术方案是这样的该用于分辨3种水产源气单胞菌复合群的检测试剂盒,所述的试剂盒由下列鉴定材料组成1试剂A无菌水;2鉴定瓶1无盐碱性蛋白胨水;3鉴定瓶2含氨苄西林的RS培养基;4鉴定瓶3胰蛋白胨大豆培养基;5鉴定瓶4阿拉伯糖培养基;6鉴定瓶5七叶苷培养基;7鉴定瓶6葡萄糖产气培养基;8鉴定瓶7氧化酶试纸;属于检测技术领域。51INTCL权利要求书1页说明书15页19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书1页说明书15页10申请公布号CN104178416。

3、ACN104178416A1/1页21一种用于分辨3种水产源气单胞菌复合群的检测试剂盒,其特征在于,所述的试剂盒由下述鉴定瓶和试剂组成1试剂A无菌水;2鉴定瓶1无盐碱性蛋白胨水;3鉴定瓶2含氨苄西林的RS培养基;4鉴定瓶3胰蛋白胨大豆培养基;5鉴定瓶4阿拉伯糖培养基;6鉴定瓶5七叶苷培养基;7鉴定瓶6葡萄糖产气培养基;8鉴定瓶7氧化酶试纸。2根据权利要求1所述的用于分辨3种水产源气单胞菌复合群的检测试剂盒,其特征在于,所述的水产源气单胞菌复合群为嗜水气单胞菌复合群、温和气单胞菌复合群和豚鼠气单胞菌复合群。3根据权利要求1所述的用于分辨3种水产源气单胞菌复合群的检测试剂盒,其特征在于,所述的无盐。

4、碱性蛋白胨水由下述质量百分比的组分构成蛋白胨1921,硝酸钾000950015,结晶碳酸钠00150025,余量为水;PH8285。4根据权利要求1所述的用于分辨3种水产源气单胞菌复合群的检测试剂盒,其特征在于,所述的含氨苄西林的RS培养基由下述质量百分比的组分制成L盐酸鸟氨酸060070,L盐酸赖氨酸0406,L盐酸半胱氨酸002004,麦芽糖030040,硫代硫酸钠060075,枸橼酸铁胺007009,脱氧胆酸钠009011,酵母膏025035,氯化钠0406,溴麝香草酚蓝00020004,新生霉素0000400006,琼脂1218,氨苄西林00001,余量为水;PH6872。5根据权利要。

5、求1所述的用于分辨3种水产源气单胞菌复合群的检测试剂盒,其特征在于,所述的胰蛋白胨大豆培养基由下述质量百分比的组分构成胰蛋白胨1317,大豆蛋白胨0406,氯化钠0406,琼脂1217,余量为水;PH7276。6根据权利要求1所述的用于分辨3种水产源气单胞菌复合群的检测试剂盒,其特征在于,所述的阿拉伯糖培养基由下述质量百分比的组分构成牛肉膏粉0406,蛋白胨0812,氯化钠0204,磷酸氢二钾015025,阿拉伯糖0812,溴百里酚蓝00020004,余量为水;PH7276。7根据权利要求1所述的用于分辨3种水产源气单胞菌复合群的检测试剂盒,其特征在于,所述的七叶苷培养基由下述质量百分比的组分。

6、构成蛋白胨0406,牛肉浸膏0204,七叶苷009011,枸橼酸铁004006,琼脂1218,余量为水;PH7276。8根据权利要求1所述的用于分辨3种水产源气单胞菌复合群的检测试剂盒,其特征在于,所述的葡萄糖产气培养基由下述质量百分比的组分构成多价胨1525,酵母膏0406,氯化钠0406,葡萄糖2535,吐温8046,溴百里酚蓝00020004,余量为水;PH6872。权利要求书CN104178416A1/15页3一种用于分辨3种水产源气单胞菌复合群的检测试剂盒技术领域0001本发明涉及一种检测试剂盒,更具体的说是一种用于分辨嗜水气单胞菌复合群、温和气单胞菌复合群、豚鼠气单胞菌复合群3种常。

7、见水产源气单胞菌复合群的检测试剂盒。背景技术0002气单胞菌属于气单胞菌科,广泛分布在水环境,也常在人体、水产动物和食物中检出。水产动物源气单胞菌分成3个复合群,包括嗜水气单胞菌复合群、温和气单胞菌复合群、豚鼠气单胞菌复合群,主要有嗜水气单胞菌、温和气单胞菌、维氏气单胞菌、豚鼠气单胞菌等,同时也是常见的人鱼共患病原菌,能引起人的食物中毒、腹泻、败血症等。气单胞菌具有广泛的致病性,在高温季节,容易单独或者混合感染包括鱼虾类、贝类、爬行两栖类等多种水产动物,是水产养殖中一种危害性较高的病原菌,容易引起水生动物多种细菌病的暴发,且危害程度高于其它细菌性疾病,成为我国淡水水产养殖业发展的主要威胁唐江芳。

8、,气单胞菌及其在水产中的危害,2007。而临床上的盲目用药,使病原菌在大范围药物选择压力下,渐渐保留了气单胞菌耐药菌株,甚至是多重耐药菌株,致使抗生素疗效下降蔡丽娟,等,水产致病性嗜水气单胞菌耐药性比较与分析,水产科学,2011。这不仅导致药物对水生动物疾病的防控能力大大减弱,同时也严重影响水产动物源食品的质量安全,还存在将耐药性传播给人类致病菌的潜在风险。因此,监测养殖动物和养殖水体中不同气单胞菌复合群的存在及其耐药性是防治相关水产动物疾病和保证食品安全的重要措施,而如何高效简便的分辨出水产源气单胞菌复合群是目前最需解决的问题。0003目前分辨出水产源气单胞菌复合群的技术有1、通过普通培养基。

9、培养纯化单菌落后利用细菌快速自动鉴定系统进行鉴定分辨,该法需要昂贵的仪器设备和技术熟练的操作人员;2、通过普通培养基培养纯化单菌落后利用核酸的检测技术,包括DNA和PCR技术聚合酶链式反应技术,虽然具有快速、简洁和灵敏的特点,但该法需要昂贵的仪器设备和技术熟练的操作人员;3、经典的生理生化鉴定方法,该法不仅繁琐、耗时、且要求操作人员有良好的专业素质;4、目前也有些商品化的气单胞菌培养基,如RS培养基、AHM培养基和APM培养基等,但分离率和准确率不高凌红丽,等,嗜水气单胞菌选择性培养基鉴别效果的比较,1998。发明内容0004针对上述不足,本发明的目的是提供了一种同时筛选嗜水气单胞菌复合群、温。

10、和气单胞菌复合群、豚鼠气单胞菌复合群3种常见水产源气单胞菌复合群且成本低,准确率高的试剂盒。0005为此,本发明提供的技术方案是这样的该用于分辨3种水产源气单胞菌复合群的检测试剂盒,所述的试剂盒由下述鉴定瓶和试剂组成1试剂A无菌水;2鉴定瓶1无盐碱性蛋白胨水;3鉴定瓶2含氨苄西林的RS培养基;4鉴定瓶3胰蛋白胨大豆培养说明书CN104178416A2/15页4基;5鉴定瓶4阿拉伯糖培养基;6鉴定瓶5七叶苷培养基;7鉴定瓶6葡萄糖产气培养基;8鉴定瓶7氧化酶试纸。0006上述的用于分辨3种水产源气单胞菌复合群的检测试剂盒,所述的水产源气单胞菌复合群为嗜水气单胞菌复合群、温和气单胞菌复合群和豚鼠气。

11、单胞菌复合群。0007进一步的,上述的用于分辨3种水产源气单胞菌复合群的检测试剂盒,所述的无盐碱性蛋白胨水由下述质量百分比的组分构成蛋白胨1921,硝酸钾000950015,结晶碳酸钠00150025,余量为水;PH8285。0008进一步的,上述的用于分辨3种水产源气单胞菌复合群的检测试剂盒,所述的含氨苄西林的RS培养基由下述质量百分比的组分制成L盐酸鸟氨酸060070,L盐酸赖氨酸0406,L盐酸半胱氨酸002004,麦芽糖030040,硫代硫酸钠060075,枸橼酸铁胺007009,脱氧胆酸钠009011,酵母膏025035,氯化钠0406,溴麝香草酚蓝00020004,新生霉素0000。

12、400006,琼脂1218,氨苄西林00001,余量为水;PH6872。0009进一步的,上述的用于分辨3种水产源气单胞菌复合群的检测试剂盒,所述的胰蛋白胨大豆培养基由下述质量百分比的组分构成胰蛋白胨1317,大豆蛋白胨0406,氯化钠0406,琼脂1217,余量为水;PH7276。0010进一步的,上述的用于分辨3种水产源气单胞菌复合群的检测试剂盒,所述的阿拉伯糖培养基由下述质量百分比的组分构成牛肉膏粉0406,蛋白胨0812,氯化钠0204,磷酸氢二钾015025,阿拉伯糖0812,溴百里酚蓝00020004,余量为水;PH7276。0011进一步的,上述的用于分辨3种水产源气单胞菌复合群。

13、的检测试剂盒,所述的七叶苷培养基由下述质量百分比的组分构成蛋白胨0406,牛肉浸膏0204,七叶苷009011,枸橼酸铁004006,琼脂1218,余量为水;PH7276。0012进一步的,上述的用于分辨3种水产源气单胞菌复合群的检测试剂盒,所述的葡萄糖产气培养基由下述质量百分比的组分构成多价胨1525,酵母膏0406,氯化钠0406,葡萄糖2535,吐温8046,溴百里酚蓝00020004,余量为水;PH6872。0013与现有技术相比,本发明提供的技术方案具有如下技术优点0014本发明提供的技术方案是在研究分析现有选择性培养基特性和气单胞菌不同生理生化特性的基础上建立的。通过用3种培养基筛。

14、选分离和4个生化反应结果进行归纳判断,能简便分离嗜水气单胞菌复合群、温和气单胞菌复合群、豚鼠气单胞菌复合群3种常见水产源气单胞菌复合群。0015本发明的试剂盒试剂构成、配制方法、使用方法简单,成本低,与细菌自动或半自动快速鉴定系统和基于核酸的检测技术相比,不需要昂贵的仪器设备和技术熟练的操作人员,为筛选分离水产源气单胞菌复合群提供了极大的方便。具体实施方式0016为了更好的理解、实施本发明的权利要求,下面结合具体实施例对本发明的权利要求做进一步的详细说明,但本发明并不限于下述实施例,而是以权利要求为限。说明书CN104178416A3/15页50017实施例10018本发明提供的一种用于分辨嗜。

15、水气单胞菌复合群、温和气单胞菌复合群、豚鼠气单胞菌复合群3种常见水产源气单胞菌复合群的检测试剂盒,具体由下列鉴定瓶和试剂组成00191用于稀释池塘底泥试剂A无菌水;00202用于除去需盐并在酸性和中性环境中均能生长的细菌,特别是弧菌科细菌的鉴定瓶1无盐碱性蛋白胨水,该鉴定瓶所含组分按质量分数100计为蛋白胨2,硝酸钾001,结晶碳酸钠002,余量为水,PH84;00213用于筛选对氨苄西林不敏感的疑似气单胞菌的鉴定瓶2含氨苄西林RS培养基,该鉴定瓶所含组分按质量分数100计为L盐酸鸟氨酸065,L盐酸赖氨酸05,L盐酸半胱氨酸003,麦芽糖035,硫代硫酸钠068,枸橼酸铁胺008,脱氧胆酸钠。

16、01,酵母膏03,氯化钠05,溴麝香草酚蓝0003,新生霉素00005,琼脂15,氨苄西林00001,余量为水,PH70;0022需要说明的是,本培养基现配现用,首先把RS培养基煮沸溶解12分钟,待培养基冷却至4050后把氨苄西林加入培养基摇均匀,然后倒制琼脂平板。00234用于细菌的培养的鉴定瓶3胰蛋白胨大豆培养基,该鉴定瓶所含组分按质量分数100计为胰蛋白胨15,大豆蛋白胨05,氯化钠05,琼脂15,余量为水,PH74;00245用于检查细菌对阿拉伯糖类发酵的特性,观察被检细菌的产酸能力的鉴定瓶4阿拉伯糖培养基,该鉴定瓶所含组分按质量分数100计为牛肉膏粉05,蛋白胨1,氯化钠03,磷酸氢。

17、二钾02,阿拉伯糖1,溴百里酚蓝0003,余量为水,PH74;00256用于检测细菌对七叶苷的水解能力的鉴定瓶5七叶苷培养基,该鉴定瓶所含组分按质量分数100计为含蛋白胨05,牛肉浸膏03,七叶苷01,枸橼酸铁005,琼脂15,余量为水,PH74;00267用于检测细菌产酸产气的能力的鉴定瓶6葡萄糖产气培养基,该鉴定瓶所含组分按质量分数100计为多价胨2,酵母膏05,氯化钠05,葡萄糖3,吐温805,溴百里酚蓝0003,余量为水,将所有组分倒置放入直径23毫米发酵小管;PH70。00278用于检查细菌中是否含有细胞色素氧化酶鉴定瓶7氧化酶试纸。0028上述各个鉴定瓶中的培养基以及试剂A中试剂组。

18、份都可以从现有产品中购买到,并可按照公知常规的方法进行配制。0029实施例20030本发明提供的一种用于分辨嗜水气单胞菌复合群、温和气单胞菌复合群、豚鼠气单胞菌复合群3种常见水产源气单胞菌复合群的检测试剂盒,具体由下列鉴定瓶和试剂组成00311用于稀释池塘底泥试剂A无菌水;00322用于除去需盐并在酸性和中性环境中均能生长的细菌,特别是弧菌科细菌的鉴定瓶1无盐碱性蛋白胨水,该鉴定瓶所含组分按质量分数100计为蛋白胨21,硝酸说明书CN104178416A4/15页6钾0015,结晶碳酸钠0015,余量为水;PH82;00333用于筛选对氨苄西林不敏感的疑似气单胞菌的鉴定瓶2含氨苄西林RS培养基。

19、,该鉴定瓶所含组分按质量分数100计为L盐酸鸟氨酸060,L盐酸赖氨酸06,L盐酸半胱氨酸002,麦芽糖040,硫代硫酸钠060,枸橼酸铁胺009,脱氧胆酸钠009,酵母膏035,氯化钠04,溴麝香草酚蓝0004,新生霉素00004,琼脂18,氨苄西林00001,余量为水;PH72。0034需要说明的是本培养基现配现用,首先把RS培养基煮沸溶解12分钟,待培养基冷却至4050后把氨苄西林加入培养基摇均匀,然后倒制琼脂平板。00354用于细菌的培养的鉴定瓶3胰蛋白胨大豆培养基,该鉴定瓶所含组分按质量分数100计为胰蛋白胨13,大豆蛋白胨06,氯化钠04,琼脂17,余量为水;PH72。00365用。

20、于检查细菌对阿拉伯糖类发酵的特性,观察被检细菌的产酸能力的鉴定瓶4阿拉伯糖培养基,该鉴定瓶所含组分按质量分数100计为牛肉膏粉04,蛋白胨12,氯化钠02,磷酸氢二钾025,阿拉伯糖08,溴百里酚蓝0004,余量为水;PH72。00376用于检测细菌对七叶苷的水解能力的鉴定瓶5七叶苷培养基按质量分数100计,蛋白胨06,牛肉浸膏04,七叶苷009,枸橼酸铁006,琼脂12,余量为水;PH76。00387用于检测细菌产酸产气的能力的鉴定瓶6葡萄糖产气培养基,该鉴定瓶所含组分按质量分数100计为多价胨25,酵母膏04,氯化钠06,葡萄糖25,吐温806,溴百里酚蓝0002,余量为水;PH72。00。

21、398用于检查细菌中是否含有细胞色素氧化酶鉴定瓶7氧化酶试纸。0040上述各个鉴定瓶中的培养基以及试剂A中试剂组份都可以从现有产品中购买到,并可按照公知常规的方法进行配制。0041实施例30042本发明提供的一种用于分辨嗜水气单胞菌复合群、温和气单胞菌复合群、豚鼠气单胞菌复合群3种常见水产源气单胞菌复合群的检测试剂盒,具体由下列鉴定瓶和试剂组成00431用于稀释池塘底泥试剂A无菌水;00442用于除去需盐并在酸性和中性环境中均能生长的细菌,特别是弧菌科细菌的鉴定瓶1无盐碱性蛋白胨水,该鉴定瓶所含组分按质量分数100计为蛋白胨19,硝酸钾0015,结晶碳酸钠0015,余量为水;PH85;0045。

22、3用于筛选对氨苄西林不敏感的疑似气单胞菌的鉴定瓶2含氨苄西林RS培养基,该鉴定瓶所含组分按质量分数100计为L盐酸鸟氨酸070,L盐酸赖氨酸04,L盐酸半胱氨酸004,麦芽糖030,硫代硫酸钠075,枸橼酸铁胺007,脱氧胆酸钠011,酵母膏025,氯化钠06,溴麝香草酚蓝0002,新生霉素00006,琼脂12,氨苄西林00001,余量为水;PH68。0046需要说明的是,本培养基现配现用,首先把RS培养基煮沸溶解12分钟,待培养基冷却至4050后把氨苄西林加入培养基摇均匀,然后倒制琼脂平板。说明书CN104178416A5/15页700474用于细菌的培养的鉴定瓶3胰蛋白胨大豆培养基,该鉴定。

23、瓶所含组分按质量分数100计为胰蛋白胨17,大豆蛋白胨04,氯化钠06,琼脂12,余量为水;PH76;00485用于检查细菌对阿拉伯糖类发酵的特性,观察被检细菌的产酸能力的鉴定瓶4阿拉伯糖培养基,该鉴定瓶所含组分按质量分数100计为牛肉膏粉06,蛋白胨08,氯化钠04,磷酸氢二钾015,阿拉伯糖12,溴百里酚蓝0002,余量为水;PH76;00496用于检测细菌对七叶苷的水解能力的鉴定瓶5七叶苷培养基按质量分数100计,蛋白胨04,牛肉浸膏04,七叶苷009,枸橼酸铁006,琼脂12,余量为水;PH76。00507用于检测细菌产酸产气的能力的鉴定瓶6葡萄糖产气培养基,该鉴定瓶所含组分按质量分数。

24、100计为多价胨15,酵母膏06,氯化钠04,葡萄糖35,吐温804,溴百里酚蓝0004,余量为水;PH68。00518用于检查细菌中是否含有细胞色素氧化酶鉴定瓶7氧化酶试纸。0052上述各个鉴定瓶中的培养基以及试剂A中试剂组份都可以从现有产品中购买到,并可按照公知常规的方法进行配制。0053具体检测方法为00541样品采集0055样品要求0056A底泥取约3G加入2ML无菌水混匀并静止10MIN后取100L上层液体;0057B环境水样池塘表面下2030CM100L;0058C用镊子或剪子取绿豆大小的动物组织样品鳃、肝脏、病灶;0059样品处理0060将以上三类样品分别接种于3ML无盐碱性蛋白。

25、胨水中增菌,28振荡培养1820H。剩余样品置4保存备用。0061样品编号。006223种常见水产源气单胞菌复合群分离与鉴定在无菌条件下进行操作0063筛选培养0064用接种环蘸取各个样品增菌液,分别接种于含氨苄西林RS平板,28静置培养1820H。若菌落在含氨苄西林RS平板上呈黄色且光滑,则初步判断为气单胞菌疑似菌;0065分离纯化0066每个平板挑取同1个优势黄色单菌落,分别接种于含氨苄西林RS平板和胰蛋白胨大豆培养基平板进行纯化,28静置培养1820H;0067用接种环取在胰蛋白胨大豆培养基平板上纯化培养的疑似菌,划于氧化酶试纸条,1MIN内观察,若划线处呈紫色或者紫红色,为氧化酶阳性;。

26、同时挑取适量氧化酶阳性的菌落分别接种于阿拉伯糖培养基、七叶苷培养基、葡萄糖产气培养基,35静置培养1824H,观察培养基颜色的变化和葡萄糖产气培养基小管气体的产生。00683结果判定0069若菌株在无盐碱性蛋白胨水生长良好,记为“”,不生长记为“”;菌落在含氨苄西说明书CN104178416A6/15页8林RS平板上呈黄色且光滑记为“”,不生长或菌落为绿色或绿黄色记为“”;菌落在胰蛋白胨大豆培养基上生长良好、呈米白色且光滑记为“”,不生长或菌落为其他颜色记为“”;阿拉伯糖培养基呈黄色记为“”,紫色记为“”;七叶苷培养基呈黄色记为“”,紫色记为“”;葡萄糖产气培养基中的发酵管有气泡记为“”,无气。

27、泡记为“”;氧化酶实验结果阳性记为“”,阴性记为“”;。把待检菌各反应结果与细菌鉴定表表1对照,如果与鉴定表中的细菌结果一致,则可判断待测菌为相应的复合群菌,因此可确定待检菌的分类位置。0070表1细菌鉴定表00710072实验例10073对本实验室分离保存的已鉴定的细菌进行筛选鉴定。0074实验步骤00751、开菌株冻干保存管,用无盐碱性蛋白胨水增菌,28振荡培养1820H。00762、用接种环蘸取增菌液,分别接种于含氨苄西林RS平板和胰蛋白胨大豆培养基平板进行纯化,28静置培养1820H。00773、用接种环取在胰蛋白胨大豆培养基平板上纯化培养的疑似菌,划于氧化酶试纸条,1MIN内观察。0。

28、0784、结果记录0079试验所使用的90株细菌中,有77株为水产源气单胞菌,其中嗜水气单胞菌复合群43株嗜水气单胞菌43株,温和气单胞菌复合群21株温和气单胞菌5株,维氏气单胞菌10株,脆弱气单胞菌3株,简达气单胞菌3株,豚鼠气单胞菌复合群7株豚鼠气单胞菌6株,中间气单胞菌1株,AAQUARIORUM气单胞菌属的国内暂无译文的菌株5株,其他未定种的气单胞菌属菌株1株;金黄色葡萄球菌等非水产源气单胞菌14株。实验结果显示,除了5株AAQUARIORUM和1株未定种的气单胞菌属菌株外,其他71株已分类的常见水说明书CN104178416A7/15页9产源气单胞菌复合群中,除1株脆弱气单胞菌、1株。

29、维氏气单胞菌在无盐碱性蛋白胨水不生长外,其他69株水产源气单胞菌均能确定复合群的种类,准确率为9718;其他13株非水产源气单胞菌的实验结果均不符合本发明所判定的常见水产源气单胞菌复合群。结果见表20080表2实验室分离保存的已鉴定的细菌筛选鉴定结果00810082说明书CN104178416A8/15页100083说明书CN104178416A109/15页110084说明书CN104178416A1110/15页120085说明书CN104178416A1211/15页130086注“/”表示不能确定的复合群,“”表示使用本试剂盒鉴定结果与原鉴定结果不符,不能确定复合群。0087其中“A”。

30、代表嗜水气单胞菌复合群;“B”代表温和气单胞菌复合群;“C”代表豚鼠气单胞菌复合群。0088实施例20089采用本发明随机取三水、珠海、顺德养殖池塘的底泥、水和鱼组织分离水产源气单胞菌,结果显示,经细菌半自动鉴定仪和分子生物学技术分析,所采集的69份样品中,分离出68株水产源气单胞菌,其中A11株嗜水气单胞菌11株,B44株温和气单胞菌6株,维氏气单胞菌31株,简达气单胞菌7株,C6株豚鼠气单胞菌6株,斑点气单胞菌7株;希瓦氏菌属1株。实验结果显示,除了7株斑点气单胞菌外,其他71株待测菌均能确定复合群的种类,准确率为100。结果见表30090表3常见水产源气单胞菌复合群筛选分离结果0091说明书CN104178416A1312/15页140092说明书CN104178416A1413/15页150093说明书CN104178416A1514/15页160094说明书CN104178416A1615/15页170095注“/”表示不能确定的复合群。0096其中“A”代表嗜水气单胞菌复合群;“B”代表温和气单胞菌复合群;“C”代表豚鼠气单胞菌复合群。说明书CN104178416A17。

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