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被取代的N-(吲哚-2-羰基)-β-丙氨酰胺 与作为抗糖尿病药的衍生物
    本发明涉及糖原磷酸化酶抑制剂、含有该抑制剂的药物组合物以及该抑制剂在哺乳动物体内治疗糖尿病、高血糖、高胆甾醇血、高血压、高胰岛素血、高脂血症、粥样硬化与心肌局部缺血的用途。

    尽管胰岛素的早期发现及其随后在糖尿病治疗过程中的广泛应用，以及尽管后来磺酰脲类例如ChlorpropamideTM(pfizer)、TolbutamideTM(upjohn)、AcetohexamideTM(E.I.Lilly)、TolazamideTM(upjohn)与双胍如PhenforminTM(Ciba Geigy)、MetforminTM(G.D.Searle)的发现及其作为口服降糖药的应用，对糖尿病的治疗效果仍然不能令人满意。在约10％I型糖尿病、即依赖于胰岛素糖尿病患者(合成降血糖药在其体内已不产生效力)体内有必要每日多次通常通过自我注射的方式使用胰岛素。需要经过多次估评尿或血液中的糖来确定胰岛素的适宜剂量，施用过量的胰岛素会导致低血糖症，伴随有从轻度血糖不正常至昏迷甚至死亡的后果。对于不依赖胰岛素糖尿病(II型糖尿病，NIDDM)的治疗过程通常包括指定饮食、锻炼、口服药剂如磺酰脲类以及在更严格的情况下口服胰岛素。然而，临床使用的降糖药可以产生其它副作用，这就限制了其应用。在任何情况下，当这些药剂之一在一个单独病例中失败时，另一种便会成功。很显然，人们不断地需要一种副作用更少或在其它药剂失败的情况下能够产生功效的降糖药。

    作为一种动脉疾病的粥样硬化在美国与西欧被认为是主要的死亡病因。导致粥样硬化与梗阻性心脏病的病理次序是众所周知的。在这一次序中最初阶段是在颈动脉、心脏冠状动脉和脑动脉以及主动脉中形成“脂肪条纹”。由于主要在平滑肌细胞内和动脉与主动脉内层的巨噬细胞中发现的类脂沉积物的存在，这些损害呈黄色。此外，人们假设于这些脂肪条纹中被发现的大部分胆固醇反过来促使“纤维斑”形成，这种纤维斑包括充满了类脂物并且被细胞外类脂物、胶原、弹性硬蛋白和蛋白多糖包围地积累的内平滑肌细胞。细胞与基质形成纤维盖，它覆盖了由细胞屑形成的更深的沉积层与处于更外部的细胞外类脂物。类脂物主要是游离的并且被酯化的胆固醇。纤维斑缓慢地形成并且很可能及时被钙化和坏死，进而发现“并发性损害”，这种损害是其特征在于晚期粥样硬化的心肌梗死、在管壁上形成血栓的倾向与动脉肌痉挛的原因。

    流行病学研究结果明确指出高脂血是通过粥样硬化导致心血管疾病(CVD)的主要危险因素。近年来，医学界的泰斗们重新强调应该降低血浆胆固醇水平，尤其是低密度脂蛋白胆固醇，以此作为防治CVD的基本步骤。“正常”的上限现在被认为明显地低于到目前为止所理解的水准。因此，现在很大一部分西方人被认为处于高度危险之中。这类独立的危险因素包括葡萄糖不耐性、左心室肥大、高血压以及雄性性别。心血管疾病尤其常见于糖尿病患者之中，这至少部分地由于这类群体中存在的多重独立的危险因素。因此，成功地治疗一般群体尤其是糖尿病患者的高脂血症在医学上极为重要。

    高血压是一种作为许多其它疾病如肾动脉狭窄、心内分泌失调或嗜铬细胞瘤的副症状产生于人体的病症。然而，高血压同样出现在许多致病原因或失调未知的患者体内。这类“原发性”高血压常常与诸如肥胖症、糖尿病与高甘油三酯血症之类疾病有关，这些疾病之间的关系尚未阐明。此外，许多患者在完全不存在其它病症或失调迹象的情况下表现出高血压症状。

    业已发现，高血压可以直接导致心力衰竭、肾衰竭与中风(脑出血)。这些病症能够导致患者短时间死亡。高血压还会使动脉粥样硬化与冠心病加重。这些病症逐渐使患者身体变弱并且导致长期死亡。

    尽管原发性高血压的确切病因尚不知晓，不过有多种因素被认为对该病的发作有影响。其中有紧张、感情失控、无规律的激素释放(血管紧张肽原酶、血管紧张肽、醛甾酮系统)、由于肾功能失调造成的过量盐与水、血管壁增厚与脉管系统肥大导致血管收缩以及遗传因素。

    对原发性高血压的治疗考虑了上述因素，因此，已经开发出品种多样的β-阻断剂、血管收缩药、血管紧张肽转化酶抑制剂等并且将其作为抗高血压药在市场上出售。采用这些化合物进行的高血压治疗过程被证明在防止短时间死亡如心力衰竭、肾衰竭与脑出血方面是有利的。然而，由于长时间患高血压导致的粥样硬化或心脏病的加重仍然是悬而未决。这意味着尽管高血压正在被缓解，但是治疗方法尚未针对原发性高血压的根本原因。

    高血压与血液中胰岛素含量较高(一种被称为高胰岛素血症的症状)相联系。胰岛素是一种肽激素，其主要作用是促进葡萄糖的利用、蛋白质合成与中性脂的形成与贮存，同时还会促进脉管细胞生长并增加肾的钠保留。这些后面的功能在不影响葡萄糖含量的条件下实现并且被认为是高血压的原因。举例来说，末梢血管的生长会导致末梢毛细血管狭窄；而钠保留会增加血液体积。因此，降低高胰岛素血患者体内的胰岛素含量可以防止由于高胰岛素含量导致的不正常的脉管生长与肾钠保留从而缓解高血压。

    心脏肥大是造成突然死亡、心肌梗死与充血性心力衰竭的非常危险的因素。这些心脏突发性病症是至少部分地由于局部缺血与可能发生在门诊病人体内的再灌注以及周围手术沉积后对心肌损伤的敏感性增大而造成的。防止或最大限度地减小不利的心肌周围手术结果、尤其是周围手术心肌梗死是不适宜的医学需要。心脏与非心脏外科手术在很大程度上都会带有心肌梗死或死亡的危险性。大约7百万经历非心脏外科手术的患者被视为具有危险，周围手术性(perioperative)死亡与严重心脏并发症的发生率高达20～25％。此外，在每年经历冠状动脉分流外科手术的400,000患者中，周围手术心肌梗死估计发病率为5％，死亡率为1～2％。在这一领域尚无药物疗法，用以减少心脏组织受到周围手术性心肌缺血而造成的损害或增强心脏对局部缺血发作的抵抗力。这样一种疗法预期用于急救与减少住院治疗、提高生活质量和降低高危患者的总体保健支出。

    肝脏葡萄糖生产是NIDDM疗法的重要目标。肝是吸收后(禁食)状态血浆中葡萄糖水平的主要调节者。NIDDM患者体内肝的葡萄糖生产速度明显地高于正常人。同样，在饭后(吃饱)状态，肝在血浆葡萄糖供给总量中起着较小的作用，此时NIDDM患者体内肝葡萄糖生产处于不正常的高水平。

    糖原分解对于肝葡萄糖生产的中止来说是一个重要目标。肝脏通过糖原分解(葡萄糖聚合物糖原的分解)与葡糖异生(由2-和3-碳前体合成葡萄糖)生产葡萄糖。许多事实证明糖原分解对INDDM中肝葡萄糖生产起着重要作用。首先，在正常的吸收后人体内，多达75％肝葡萄糖产出被估计源于糖原分解。其次，患有包括Hers病(糖原磷酸化酶缺乏症)在内的肝糖原贮存疾病的病人表现出阵发性低血糖。这些观察结果表明糖原分解可以是肝葡萄糖生产的重要过程。

    糖原分解通过糖原磷酸化酶的组织一特定异构重整在肝、肌肉与脑中被催化。这种酶断裂糖原大分子以便释放出葡糖-1-磷酸和新的短糖原大分子。目前发现有两类糖原磷酸化酶抑制剂：葡萄糖与葡萄糖类似物〔Martin，I.L.等人，生物化学，1991，30，10101〕与咖啡碱和其它嘌呤类似物〔Kas vinsky，P.J.等人.J.生物化学，1978，253，3343-3351和9102-9106〕。这些化合物与通常意义上的糖原磷酸化酶抑制剂被假设具备潜在的通过减少肝葡糖生成量与降低糖血治疗NIDDM的用途。〔Blundell，T.B.等人，Diabetologia 1992，35，Suppl.2,569～579与Martin等人生物化学1991，30，10101〕。

    局部缺血与倒灌注后观察到的心肌损伤机理作尚未被充分了解。M.F.Allard等人(Am.J.Physiol.267.H66-H74，1994)指出局部缺血前糖原的减少与大鼠肥大心脏内局部缺血后左心室功能恢复得到改进相联系。

    因此，尽管有许多种高脂血、高血糖、高胆甾醇血、高血压、粥样硬化与心肌局部缺血治疗方法，但是仍然需要持续地在该领域寻找可供选择的替代方法。

    本发明涉及适用于治疗糖尿病、高血糖、高胆甾醇血、高血压、高胰岛素血症、高脂血症、粥样硬化与心肌局部缺血的式I所示糖原磷酸化酶抑制剂化合物，其药物可接受的盐及其前药。

    式中

    虚线为视需要存在的键；

    当虚线代表键存在时A为-CH＝、-C(C1-4烷基)＝或-C(卤素)＝，或当虚线不代表键时A为亚甲基或-CH(C1 -4烷基)-；

    R1、R10或R11各自独立地代表H，卤素，4-、6-、或7-硝基，氰基，C1-4烷基，C1-4烷氧基，氟甲基，二氟甲基或三氟甲基；

    R2为H；

    R3为H或C1-5烷基；

    R4为H，甲基、乙基、正丙基，羟基C1-3烷基，C1-3烷氧基  C1-3烷基，苯基C1-4烷基，苯基羟基C1-4烷基，苯基C1 -4烷氧基C1-4烷基，噻吩-2-或-3-基C1-4烷基或呋喃-2-或-3-基C1-4烷基，其中所述R4环上的碳被H、卤素、C1-4烷基、C1-4烷氧基、三氟甲基、羟基、氨基或氰基独立地单取代、二取代或三取代；或者

    R4为吡啶-2、-3-或-4-基C1-4烷基，噻唑-2-、-4-或-5-基C1-4烷基，咪唑-1-、-2-、-4-或-5-基C1-4烷基，吡咯-2-或-3-基C1-4烷基，恶唑-2-、-4-或-5-基C1-4烷基，吡唑-3-、-4-或-5-基C1-4烷基，异恶唑-3-、-4-或-5-基C1-4烷基，异噻唑-3-、-4-或-5-基C1-4烷基，哒嗪-3-或-4-基C1-4烷基、嘧啶-2-、-4-、-5-或-6-基C1-4烷基，吡嗪-2-或-3-基C1-4烷基或1，3，5-三嗪-2-基C1-4烷基，其中上述R4杂环可视需要被卤素、三氟甲基、C1 -4烷基、C1-4烷氧基、氨基或羟基独立地单取代或双取代，所述的单取代基或双取代基与碳连接；

    R5为H、羟基、氟、C1-5烷基、C1-5烷氧基、C1-6链烷酰基、氨基C1-4烷氧基、单-N-或双-N，N-C1-4烷基胺基C1-4烷氧基、羧基C1-4烷氧基、C1-5烷氧羰基C1-4烷氧基、苄氧羰基C1-4烷氧基或羧基，其中所述的羧基与苯基、噻唑基、咪唑基、1H-吲哚基、呋喃基、吡咯基、恶唑基、吡唑基、异恶唑基、异噻唑基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基或1，3，5-三嗪基形成碳-碳键，其中所述R5环可视需要被卤素、C1-4烷基、C1-4烷氧基、羟基、氨基或三氟甲基单取代，所述单取代基被连接在碳上；

    R7为H、氟或C1-5烷基；或

    R5与R7可以结合在一起形成氧基，

    R6为羧基、C1-8烷氧羰基、C(O)NR8R9或C(O)R12，其中

    R8为H，C1-3烷基，羟基或C1-3烷氧基；

    R9为H，C1-8烷基，羟基，C1-8烷氧基，亚甲基-全氟代C1-8烷基，苯基，吡啶基，噻吩基，呋喃基，吡咯基，吡咯烷基，恶唑基，噻唑基，咪唑基，吡唑基，吡唑啉基，吡唑烷基，异恶唑基，异噻唑基，吡喃基，哌啶基，吗啉基，哒嗪基，嘧啶基，吡嗪基，哌嗪基或1，3，5-三嗪基，其中上述R9环为碳-氮键合环；或者

    R9为单-、双-或三-取代C1-5烷基，其中所述取代基独立地为H、羟基、氨基、单-N-或二-N，N-C1-5烷基胺基，或者

    R9为单-或双-取代C1-5烷基，其中所述取代基独立地为苯基、吡啶基、呋喃基、吡咯基、吡咯烷基、恶唑基、噻唑基、咪唑基、吡唑基、吡唑啉基、吡唑烷基、异恶唑基、异噻唑基、吡喃基、吡啶基、哌啶基、吗啉基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、哌嗪基或1，3，5-三嗪基，

    其中非芳族含氮R9环上的氮可视需要被C1-6烷基、苄基、苯甲酰基或C1-6烷氧羰基单取代，并且其中R9环上的碳可视需要被卤素、C1-4烷基、C1-4烷氧基、羟基、氨基或单-N-与双-N，N-C1-5烷基胺基单取代，条件是不包括季氮并且不存在氮-氧、氮-氮或氮-卤键；

    R12为哌嗪-1-基、4-C1-4烷基哌嗪-1-基、4-甲酰哌嗪-1-基、吗啉代、硫代吗啉代、1-氧代硫代吗啉代、1，1-二氧代硫代吗啉代、噻唑烷-3-基、1-氧代-噻唑烷-3-基、1，1-二氧代-噻唑烷-3-基，2-C1-6烷氧羰基吡咯烷-1-基、恶唑烷-3-基或2(R)-羟甲基吡咯烷-1-基；或

    R12为3-和/或4-单-或双-取代氧氮杂环丁烷-2-基，2-4-和/或5-单-或双-取代恶唑烷-3-基，2-，4-，和/或5-单-或双-取代噻唑烷-3-基，2-，4-和/或5-单-或双-取代1-氧代噻唑烷-3-基，2-，4-和/或5-单-或双-取代1，1-二氧代噻唑烷-3-基，3-和/或4-单-或双-取代吡咯烷-1-基，3-，4-和/或5-单-，双-或三-取代哌啶-1-基，3-，4-和/或5-单-、双-或三-取代哌嗪-1-基，3-取代氮杂环丁烷-1-基，4-和/或5-单-或双-取代1，2-恶嗪烷(Oxazinan)-2-基，3-和/或4-单-或双-取代吡唑烷-1-基，4-和/或5-单-或双-取代异恶唑烷-2-基，4-和/或5-单-和/或双-取代异噻唑烷-2-基，其中R12取代基独立地为H、卤素、C1-5烷基、羟基、氨基、单-N-或双-N，N-C1-5烷基胺基、甲酰基、氧代、肟基、C1-5烷氧基、羧基、氨基甲酰基、单-N-或双-N，N-C1-4烷基胺基甲酰基、C1-4烷氧基亚胺基、C1-4烷氧甲氧基、C1-6烷氧羰基、羧基C1-5烷基或羟基C1-5烷基；

    条件是若R4为H、甲基、乙基或正丙基，R5为OH；

    条件是若R5与R7为H，则R4不得为H、甲基、乙基、正丙基、羟基C1-3烷基或C1-3烷氧基C1-3烷基，R6为C(O)NR8R9、C(O)R12或C1-4烷氧羰基。

    作为第一组优选的式I所示化合物，其中

    R1为5-H、5-卤素、5-甲基或5-氰基；

    R10与R11分别独立地为H或卤素；

    A为-C(H)＝；

    R2和R3为H；

    R4为苯基C1-2烷基，其中所述苯基独立地被H或卤素单-、双-或三取代或者独立地被H、卤素、C1-4烷基、C1-4烷氧基、三氟甲基、羟基、氨基或氰基单-或双-取代；或

    R4为噻吩-2-或-3-基C1-2烷基、吡啶-2-，-3-或-4-基C1-2烷基、噻唑-2-，-4-或-5-基C1-2烷基、咪唑-1-，-2-，-4-或-5-基C1-2烷基、呋喃-2-或-3-基C1-2烷基、吡咯-2-或-3-基C1-2烷基、恶唑-2-，-4-或-5-基C1-2烷基、吡唑-3-、-4-或-5-基C1-2烷基、异恶唑-3-，-4-或-5-基C1-2烷基，其中上述R4杂环视需要独立地被卤素、三氟甲基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、氨基或羟基单-或双取代，所述单-或双-取代基被连接在碳上；

    R5为羟基；

    R6为C(O)NR8R9或C(O)R12；以及

    R7为H。

    在上述第一组优选的式I化合物中的尤为优选的化合物中

    碳原子a具有(S)立体化学；

    碳原子b具有(R)立体化学；

    R4为苯基C1-2烷基、噻吩-2-基C1-2烷基、噻吩-3-基C1-2烷基、呋喃-2-基C1-2烷基或呋喃-3-基C1-2烷基，其中所述环被H或氟独立地单取代或双取代；

    R6为C(O)NR8R9；

    R8为C1-3烷基、羟基或C1-3烷氧基；以及

    R9为H、C1-8烷基、羟基、羟基C1-6烷基、C1-8烷氧基、吡啶基、吗啉基、哌嗪基、吡咯烷基、哌啶基、咪唑基或噻唑基或被吡啶基、吗啉基、哌嗪基、吡咯烷基、哌啶基、咪唑基或噻唑基单取代的C1-4烷基。

    在上述第一组尤为优选的化合物中，特别优选的化合物为

    5-氯-1H-吲哚-2-甲酸〔(1S)-((R)-羟基-二甲胺基甲酰基甲基)-2-苯乙基〕酰胺，

    5，6-二氯-1H-吲哚-2-甲酸{(1S)-〔(R)-羟基-(甲氧基甲基胺基甲酰基)甲基〕-2-苯乙基}酰胺，

    5-氯-1H-吲哚-2-甲酸{(1S)-〔(R)-羟基-(甲氧基甲基胺基甲酰)甲基〕-2-苯乙基}酰胺，

    5-氯-1H-吲哚-2-甲酸((1S)-{(R)-羟基-〔(2-羟乙基)甲胺基甲酰甲基}-2-苯乙基)酰胺，

    5-氯-1H-吲哚-2-甲酸{(1S)-〔(R)-羟基-(甲基吡啶-2-基胺基甲酰基)甲基〕-2-苯乙基}-酰胺或

    5-氯-1H-吲哚-2-羧酸((1S)-{(R)-羟基-〔甲基-(2-吡啶-2-基乙基)胺基甲酰〕甲基}-2-苯乙基)酰胺。

    在上述第一组尤其优选的化合物中，

    a.R1为5-氯；R10与R11为H；R4为苄基；R8为甲基；

    R9为甲基；

    b.R1为5-氯；R11为H；R10为6-氯，R4为苄基；R8为甲基，R9为甲氧基；

    c.R1为5-氯；R10与R11为H；R4为苄基；R8为甲基；R9为甲氧基；

    d.R1为5-氯；R10与R11为H；R4为苄基；R8为甲基；R9为2-羟基乙基；

    e.R1为5-氯；R10与R11为H；R4为苄基；R8为甲基；R9为吡啶-2-基；

    f.R1为5-氯；R10与R11为H；R4为苄基；R8为甲基；R9为2-(吡啶-2-基)乙基。

    在上述第一组优选化合物I中的尤为优选的化合物的第二组中

    碳原子a具有(S)立体化学；

    碳原子b具有(R)立体化学；

    R4为苯基C1-2烷基，噻吩-2-基C1-2烷基、噻吩-3-基C1-2烷基、呋喃-2-基C1-2烷基或呋喃-3-基C1-2烷基，其中所述环被H或氟独立地单取代或双取代；

    R6为C(O)R12；以及

    R12为吗啉代、4-C1-4烷基哌嗪-1-基、3-取代氮杂环丁烷-1-基、3-和/或4-单-或双-取代吡咯烷-1-基、4-和/或5-单取代或双取代异恶唑烷-2-基、4-和/或5-单或双-取代1，2-恶嗪烷-2-基，其中所述取代基分别独立地为H、卤素、羟基、氨基、单-N-或双-N，N-C1-6烷基胺基、氧代、肟基或烷氧基。

    在上述第二组尤其优选的化合物中，特别优选的化合物为

    5-氯-1H-吲哚-2-甲酸〔(1S)-苄基-(2R)-羟基-3-(4-甲基哌嗪-1-基)-3-氧丙基〕酰胺盐酸盐

    5-氯-1H-吲哚-2-甲酸((1S)-苄基-(2R)-羟基-3-(3-羟基氮杂环丁烷-1-基)-3-氧丙基〕酰胺，

    5-氯-1H-吲哚-2-甲酸((1S)-苄基-(2R)-羟基-3-异恶唑烷-2-基-3-氧丙基)酰胺，

    5-氯-1H-吲哚-2-甲酸〔(1S)-苄基-(2R)-羟基-3-〔1，2〕恶嗪烷-2-基-3-氧丙基)酰胺，

    5-氯-1H-吲哚-2-甲酸〔(1S)-苄基-(2R)-羟基-3-((3S)-羟基吡咯烷-1-基)-3-氧丙基〕酰胺，

    5-氯-1H-吲哚-2-甲酸〔(1S)-苄基-3-((3S，4S)-二羟基吡咯烷-1-基)-(2R)-羟基-3-氧丙基〕酰胺，

    5-氯-1H-吲哚-2-甲酸〔(1S)-苄基-3-((3R，4S)-二羟基吡咯烷-1-基)-(2R)-羟基-3-氧丙基〕酰胺，或

    5-氯-1H-吲哚-2-甲酸((1S)-苄基-(2R)-羟基-3-吗啉-4-基-3-氧丙基)酰胺。

    在上述第二组尤其优选的化合物中

    a.R1为5-氯；R10与R11为H；R4为苄基；R12为4-甲基哌嗪-1-基；

    b.R1为5-氯；R10与R11为H；R4为苄基；R12为3-羟基氮杂环丁烷-1-基；

    c.R1为5-氯；R10与R11为H；R4为苄基；R12为异恶唑烷-2-基；

    d.R1为5-氯；R10与R11为H；R4为苄基；R12为(1，2)-恶嗪烷-2-基；

    e.R1为5-氯；R10与R11为H；R4为苄基；R12为3(S)-羟基吡咯烷-1-基；

    f.R1为5-氯；R10与R11为H；R4为苄基；R12为(3S，4S)-二羟基吡咯烷-1-基；

    g.R1为5-氟；R10与R11为H；R4为苄基；R12为(3R，4S)-二羟基吡咯烷-1-基；

    h.R1为5-氯；R10与R11为H；R4为苄基；R12为吗啉代。

    作为第二组优选的式I所示化合物，其中

    R1为H、卤素、甲基或氰基；

    R10与R11分别独立地为H或卤素；

    A为-C(H)＝；

    R2和R3为H；

    R4为苯基C1-2烷基，其中所述苯基独立地被H或卤素单-、双-或三取代或者独立地被H、卤素、C1-4烷基、C1-4烷氧基、三氟甲基、羟基、氨基或氰基单-或双-取代；或

    R4为噻吩-2-或-3-基C1-2烷基、吡啶-2-，-3-或-4-基C1-2烷基、噻唑-2-，-4-或-5-基C1-2烷基、咪唑-1-，-2-，-4-或-5-基C1-2烷基、呋喃-2-或-3-基C1-2烷基、吡咯-2-或-3-基C1-2烷基、恶唑-2-，-4-或-5-基C1-2烷基、吡唑-3-、-4-或-5-基C1-2烷基、异恶唑-3-，-4-或-5-基C1-2烷基，其中上述R4杂环视需要独立地被卤素、三氟甲基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、氨基或羟基单-或双取代，所述单-或双-取代基被连接在碳上；

    R5为羟基；

    R6为羧基或C1-8烷氧羰基；以及

    R7为H、氟或C1-6烷基。

    在上述第二组优选的式I化合物中的尤为优选的化合物中

    碳原子a具有(S)立体化学；

    碳原子b具有(R)立体化学；

    R4为苯基C1-2烷基、噻吩-2-基C1-2烷基、噻吩-3-基C1-2烷基、呋喃-2-基C1-2烷基或呋喃-3-基C1-2烷基，其中所述环被H或氟独立地单取代或双取代；

    R10与R11为H；

    R6为羧基；以及

    R7为H。

    该化合物的优选种类中，R1为5-氯；R10与R11为H；R4为苄基。

    作为第三组优选的式I所示化合物，其中

    R1为H、卤素、甲基或氰基；

    R10与R11分别独立地为H或卤素；

    A为-C(H)＝；

    R2和R3为H；

    R4为苯基C1-2烷基，其中所述苯基独立地被H或卤素单-、双-或三-取代或者独立地被H、卤素、C1-4烷基、C1-4烷氧基、三氟甲基、羟基、氨基或氰基单-或双-取代；或

    R4为噻吩-2-或-3-基C1-2烷基、吡啶-2-，-3-或-4-基C1-2烷基、噻唑-2-，-4-或-5-基C1-2烷基、咪唑-1-，-2-，-4-或-5-基C1-2烷基、呋喃-2-或-3-基C1-2烷基、吡咯-2-或-3-基C1-2烷基、恶唑-2-，-4-或-5-基C1-2烷基、吡唑-3-、-4-或-5-基C1-2烷基、异恶唑-3-，-4-或-5-基C1-2烷基，其中上述R4杂环视需要独立地被卤素、三氟甲基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、氨基或羟基单-或双取代，所述单-或双-取代基被连接在碳上；

    R5为氟、C1-4烷基、C1-5烷氧基、氨基C1-4烷氧基、单-N-或双-N，N-C1-4烷基胺基C1-4烷氧基、羧基C1-4烷氧基、C1-5烷氧羰基C1-4烷氧基、苄氧羰基C1-4烷氧基；

    R6为羧基或C1-8烷氧羰基；和

    R7为H、氟或C1-6烷基。

    作为第四组优选的式I所示化合物，其中

    R1为H、卤素、甲基或氰基；

    R10与R11分别独立地为H或卤素；

    A为-C(H)＝；

    R2和R3为H；

    R4为苯基C1-2烷基，其中所述苯基独立地被H或卤素单-、双-或三-取代或者独立地被H、卤素、C1-4烷基、C1-4烷氧基、三氟甲基、羟基、氨基或氰基单-或双-取代；或

    R4为噻吩-2-或-3-基C1-2烷基、吡啶-2-，-3-或-4-基C1-2烷基、噻唑-2-，-4-或-5-基C1-2烷基、咪唑-1-，-2-，-4-或-5-基C1-2烷基、呋喃-2-或-3-基C1-2烷基、吡咯-2-或-3-基C1-2烷基、恶唑-2-，-4-或-5-基C1-2烷基、吡唑-3-、-4-或-5-基C1-2烷基、异恶唑-3-，-4-或-5-基C1-2烷基，其中上述R4杂环视需要独立地被卤素、三氟甲基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、氨基或羟基单-或双取代，所述单-或双-取代基被连接在碳上；

    R5为氟、C1-4烷基、C1-5烷氧基、氨基C1-4烷氧基、单-N-或双-N，N-C1-4烷基胺基C1-4烷氧基、羧基C1-4烷氧基、C1-5烷氧羰基C1-4烷氧基、苄氧羰基C1-4烷氧基；

    R6为C(O)NR8R9或C(O)R12；和

    R7为H、氟或C1-6烷基。

    本发明的另一方面涉及通过向患有依赖糖原磷酸化酶疾病的哺乳动物施用治疗量化合物I来治疗这一病症的方法。

    本发明的另一方面涉及通过向患有高血糖的哺乳动物施用该病治疗量化合物I治疗高血糖的方法。

    本发明的另一方面涉及通过向患有高胆甾醇血的哺乳动物施用该病治疗量化合物I治疗高胆甾醇血的方法。

    本发明的另一方面涉及通过向患有糖尿病的哺乳动物施用该病治疗量化合物I治疗糖尿病的方法。

    该糖尿病治疗方法包括防止或缓解长期并发症如神经病、肾病、视网膜病或白内障。

    本发明的另一方面涉及通过向患有粥样硬化的哺乳动物施用该病治疗量化合物I治疗粥样硬化的方法。

    本发明的另一方面涉及通过向患有高胰岛素血的哺乳动物施用该病治疗量化合物I治疗高胰岛素血的方法。

    本发明的另一方面涉及通过向患有高血压的哺乳动物施用该病治疗量化合物I治疗高血压的方法。

    本发明的另一方面涉及通过向患有高血脂的哺乳动物施用该病治疗量化合物I治疗高血脂的方法。

    本发明的另一方面涉及向处于周围手术性心肌局部缺血损伤危险状态的哺乳动物施用防治数量的化合物I防止哺乳动物心肌局部缺血损伤的方法。

    本发明的另一方面涉及通过向处于周围手术性心肌局部缺血损伤危险状态的哺乳动物施用防治数量的糖原磷酸化酶抑制剂防止哺乳动物心肌局部缺血损伤的方法。

    本发明还涉及药物组合物，其中含有治疗有效量化合物I与药物可接受的载体。

    优选的组合物包括用于治疗哺乳动物体内的糖原磷酸化酶依赖性疾病或病症的药物组合物，其中包含糖原磷酸化酶依赖性疾病或症状治疗量的化合物I与药物可接受的载体。

    本发明的另一方面涉及用于治疗糖尿病的药物组合物，其中含有治疗有效量糖原磷酸化酶抑制剂；

    一种或多种抗糖尿病药剂如胰岛素与胰岛素类似物(例如LysPro(胰岛素)；GLP-1(7-37)(胰岛素调理剂)与GLP-1(7-36)-NH2；磺酰脲类与类似物：氯磺丙脲、优降糖、甲苯磺丁脲、乙酰苯磺酰环己脲、吡磺环己脲、妥拉磺尿、格列美脲、repagl I n I de、氯茴苯酸，缩二胍类；甲福明，苯乙福明，丁福明，α乙拮拉药与咪唑啉、咪格列唑、I sagl I dole、der I gl I dole。咪唑支生、efaroxan、flupa V oxan；其它胰岛素促分泌素：利诺格列、A-4166；格列酮：环格列酮、kpIo格列酮、en格列酮、tro格列酮、dar格列酮、BRL49653；脂肪酸氧化抑制剂、氯克舍、乙募克舍；α-葡萄糖甙酶抑制剂：阿卡波糖、米格列醇、乙格列酯、V ogl I bose、MDL-25637、MOL-73945、Cam I gl I bose；β-刺激剂：BRL5135，BRL37344，R016-8714，IC I D7114，CL316243；磷酸二酯酶抑制剂；L-386398；降脂剂：苯氟雷司；抗肥胖症药：芬氟拉明；钡酸盐与钡配合物(例如nagl I V dn R)与过氧化钡配合物；淀粉不溶素拮抗物；高血素拮抗物；葡糖异生抑制剂；生长激素释放抑制因子类似物；抗脂解剂：烟酸、阿西糖司、WAG994；和

    视需要存在的药物可接受的载体。

    上一组中优选的药物组合物中，糖原磷酸化酶抑制剂为化合物I。

    本发明的另一方面是用上述结合组合物治疗哺乳动物体内的糖尿病。

    糖原磷酸化酶依赖性疾病或病症是指通过借助糖原磷酸化酶断裂糖原大分子从而释放出葡糖-1-磷酸与新的短糖原分子全部或部分地调节、引发或保持的失调。这些疾病通过降低糖原磷酸化酶的活性而得到好转，或者说该病的特征在于糖原磷酸化酶活性上升。实例包括糖尿病、高血糖、高胆甾醇血、高血压、高胰岛素血、高脂血、粥样硬化与心肌局部缺血。

    糖原磷酸化酶抑制剂一词是指任何能够降低、阻抑或消除糖原磷酸化酶的酶催化作用的物质或试剂或这类物质和/或试剂的组合。目前已知的糖原磷酸化酶的酶催化作用是通过对糖原大分子与无机磷酸盐的可逆反应的催化作用使糖原降解为葡糖-1-磷酸酯与糖原大分子(一种比原来的糖原大分子短的葡糖残基，趋向糖原分解)。

    “治疗”一词包括防止(例如预防性的)与姑息疗法。

    卤代表示氯代、溴代、碘代或氟代。

    烷基是指直链或支链饱和烃。这类烷基(假设指定长度包括特定实例)有如甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、异戊基、己基和异己基。

    烷氧基代表直链或支链通过氧桥键合的饱和烷基。这类烷氧基(假设指定长度包括特定实例)有如甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、异丁氧基、叔丁氧基、戊氧基、异戊氧基、己氧基与异己氧基。

    “药物可接受的阴离子盐”是指含有诸如，(但不局限于)下列阴离子的非毒性阴离子盐：氯化物，溴化物、碘化物、硫酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、乙酸盐、马来酸盐、富马酸盐、草酸盐、乳酸盐、酒石酸盐、柠檬酸盐、葡糖酸盐、甲磺酸盐与4-甲苯磺酸盐。

    “药物可接受的阴离子盐”是指非毒性阳离子盐如(但不限于)钠、钾、钙、镁、铵或质子化苄星(N，N’-二苄基乙二胺)，胆碱、乙醇胺、二乙醇胺、乙二胺、葡甲胺(N-甲基葡糖胺)、苯乙苄胺(N-苄基苯乙胺)、哌嗪或氨基丁三醇(2-氨基-2-羟基甲基-1，3-丙二醇)。

    “前药”是指作为药前体的化合物，它们在被施用后通过某种化学或生理方法在体内释放出药物(例如，某种前药一旦被置于一定的生理pH条件下就会转化为所需的药物形式)。可供列举的前药一旦断裂便释放出相应的游离酸，这种可水解的成脂的本发明化合物的残基包括，但不限于羧酸取代基(例如，R6为羟基，或R8、R9或R12含有羧基)，其中游离氢被C1-4烷基、C2-12链烷酰氧甲基、含4～9个碳原子的1-(链烷酰氧)乙基、含有5-10个碳原子的1-甲基-(1-链烷酰氧)乙基、含有3-6个碳原子的烷氧羰基氧甲基、含有4-7个碳原子的1-(烷氧羰基氧)乙基、含5-8个碳原子的1-甲基-1-(烷氧羰基氧)乙基、含有3-9个碳原子的N-(烷氧羰基)氨基甲基、含有4-10个碳原子的1-(N-(烷氧羰基)胺基)乙基、3-苯并〔c〕呋喃酮基、4-丁烯基内酯基、γ-丁内酯-4-基、二-N，N-C1-2烷基胺基C2-3烷基(如β-二甲胺乙基)、氨基甲酰基C1-2烷基、N，N-二C1-2烷基胺基甲酰基-C1-2烷基与哌啶子基、吡咯烷基或吗啉代C2-3烷基。

    其它示例性前药释放出式I所示醇，其中羟基取代基(例如R5为羟基)的游离氢被C1-6链烷酰氧甲基、1-(C1-6链烷酰氧基)乙基、1-甲基-1-(C1-6链烷酰氧基)乙基、C1-6烷氧羰基氧甲基、N-(C1-6烷氧羰基氨基甲基、琥珀酰基、C1-6链烷酰基、α-氨基C1-4链烷酰基、芳酰基与α-氨基酰基或α-氨基酰基-α-氨基酰基，其中所述α-氨基酰基独立地为任何被发现于蛋白质中的天然存在的L-氨基酸P(O)(OH)2、-P(O)(OC1-6烷基)2或糖基(由碳水化合物的半缩醛的羟基拆解而成)。

    其它示范性前药包括，但不限于，式I所示衍生物，其中R2为被R-羰基、RO-羰基、NRR’-羰基取代的游离氢，其中R与R’各自独立地为C1-10烷基、C3-7环烷基、苄基，或者R-羰基为天然的α-氨基酰基或天然α-氨基酰基-天然α-氨基酰基，其中Y为H、C1-6烷基或苄基的-C(OH)C(O)OY，其中Y0为C1-4烷基而Y1为C1-6烷基、羧基C1-6烷基、氨基C1-4烷基或单-N-或二-N，N-C1-6烷基氨烷基的-C(OY0)Y1，其中Y2为H或甲基而Y3为单-N-或二-N，N-C1-6烷基氨基、吗啉代、哌啶-1-基或吡咯烷-1-基的-C(Y2)Y3。

    其它示范性前药包括、但不限于、在R3上带有可水解部分的式I的衍生物，它释放出其中R3为水解游离氢的式I所示化合物。这种R3上的可水解部分为/包括1-羟基C1-6烷基或1-羟基-1-苯甲基。

    其它示例性前药包括环状结构如其中R2与R3为普通碳原子、进而形成5员环的式I化合物。成键碳可以独立地被H、C1-6烷基、C3-6环烷基或苯基单或二取代。作为可供替代的选择方式，R3与R5可以共同形成恶唑烷环并且恶唑烷环上的第二个碳可以独立地被H、C1-6烷基、C3-6环烷基或苯基单或双取代。作为可供替代的选择方式，式I化合物的前药包括其中R5与R8或R9共同形成恶唑烷-4-酮环并且该环的第2个碳可以独立地被H、C1-6烷基、C3-6环烷基、苯基或氧单-或双-取代的化合物。

    本文此处的“反应惰性溶剂”与“惰性溶剂”是指不与原料、试剂、中间体或产物以对目的产物产率产生不利影响的方式相互作用的溶剂。

    普通化学家会认识到本发明的特定化合物会含有一个或多个呈特殊立体化学或几何构型的原子，这导致立体异构件与构型异构体的存在。所有这些异构体及其混合物均属于本发明范围。本发明化合物的水合物同样被包括在内。

    普通化学家会认识到本发明列举的含杂原子取代基的特定组合局限于在生理条件下稳定性较差的化合物(例如含有乙缩醛或氨键的化合物)。因此，这类化合物不甚优选。

    其中x为整数的“Rx”例如“R9环”、“R12环”或“R4环”在本文中被用于环上的取代，它是指其中环为Rx以及环被包含于Rx中的部分。

    本文所用的术语单-N-或二-N，N-C1-x烷基…是指当它为二-N，N-C1-x烷基时…被独立地视为C1-x烷基…，(x为整数)。

    其它特征与优点在本发明说明书与权利要求书中清晰可见。

    一般说来，式I化合物可以通过化学领域公知的方法制备，尤其是按照本说明书来制备。下面提出作为本发明其它特征的化合物I的制备方法，这些方法借助下列反应历程描述。

                                反应历程I

                                反应历程II

                                反应历程III

                                反应历程IV

                                 反应历程V

                                 反应历程VI

                                反应历程VII

                                反应历程VIII

                                反应历程IX

                                反应历程X

    按照反应历程I，其中R1、R10、R11、R2、A、R3、R4、R5、R6与R7如上定义的化合物I可以通过二种通用方法中的任何一种制备。在第一种方法中，目的化合物I可以通过使适宜的式I吲哚-2-甲酸或二氢吲哚-2-甲酸与适宜的式III胺偶联(即酰化胺)被制成。在第二种方法中，目的化合物I可以通过适宜的化合IV(即其中R6为羧基的化合物I)与适宜的醇或式R8R9NH或R12H所示其中R8、R9与R12如上限定的胺或醇偶联(即酰化胺或醇)而被制成。

    典型地，式II化合物与式III化合物(或化合物IV与适宜的胺如R12H或R8R9NH)或醇在适宜的偶联剂存在下结合。适宜的偶联剂将羧酸转化为在与氨或醇反应过程中分别形成酰胺或酯键的反应性物质。

    偶联剂是一种在与羧酸和胺或醇混合时会对一锅法缩合反应产生影响的试剂。若该酸有待与醇缩合，优选采用明显过量的醇作为反应溶剂，可以添加或不添加1.0～1.5当量二甲胺基吡啶。可供列举的偶联剂为1-(3-二甲胺基丙基)-3-乙基碳化二亚胺盐酸盐-羟基苯并三唑(DEC/HBT)、羰基二咪唑、二环己基碳化二亚胺/羟基苯并三唑(HBT)、2-乙氧基-1-乙氧羰基-1，2-二氢醌(EEDQ)、羰基二咪唑/HBT与二乙基膦酰基氰。偶联反应在约-20～50℃在惰性溶剂、优选非质子传递溶剂中进行约1～48小时，示范性溶剂包括乙腈、CH2Cl2、二甲基甲酰胺与氯仿。适宜的偶联步骤的实例为步骤A(位于实施例之前)。

    偶联剂还可以是能够将羧酸转化为在第一步被分离和/或形成并且在第二步与胺或醇反应的活化中间体。这类偶联剂和活化中间体的实例为用于形成酰氯的亚硫酰氯或草酰氯、用于(与叔胺碱)形成酰氟的氰尿酰氯或用于形成羧酸的混合酐的烷基氯甲酸酯如异丁基或异丙烯基氯甲酸酯。若偶联剂为草酰氯，有利的是采用少量作为共溶剂的二甲基甲酰胺与其它溶剂(如CH2Cl2)催化酰氯的生成，这些偶联剂的使用与适宜地选用溶剂和温度对本领域专业人员是公知内容或者可以容易地由文献中确定。适用于偶联羧酸的这些或其它示范性条件被描述于Houben-Weyl，XV卷，II部分，E.Wunsch，εd.，G.Theime Verlag，1974，Stuttqart，与M.bodansky，肽合成原理，Springer-Verlag Barlin 1984以及肽·分析，合成与生物学(ed.E.Gross与J.Meienhofer)，卷1～5(Academic Press NY 1979-1983)。

    其中R1、R10、R11、R2、A、R3、R4、R5与R7如上定义的化合物IV可以由相应的酯V(即其中R6为C1-5烷氧羰基或苄氧羰基的化合物I)通过借助含水碱在约-20～100℃、典型地约20℃水解约30分钟至约24小时来制得。

    作为可供选择的替代方式，通过用偶联剂(如上所述)在适宜的溶剂中在碱存在下活化式II吲哚羧酸来制备化合物IV，这些偶联剂给出活化中间体(如酰氯、酰氟或混合酐)，该中间体随后与其中R3、R4、R5和R7如上所述、R6为羧基的化合物III反应。适宜的溶剂包括水或甲醇或其混合物，同时存在有共溶剂如CH2Cl2、四氢呋喃或二恶烷。适宜的碱包括氢氧化钠、钾或锂，碳酸氢钠或钾、碳酸钠或钾或者与其数量足以消耗反应中被释放的酸的溴化四丁铵(1当量)共同存在的碳酸钾，该数量一般情况下足以将反应的pH保持在大于8。碱可以递增量与活化中间体一起加入以便适当地控制反应的pH值。该反应通常在-20～50℃下进行。本领域专业人员可以设计分离步骤以便脱除杂质，但是典型地，分离步骤由通过蒸发脱除水混溶性共溶剂、用有机溶剂在高pH值下萃取杂质、经过酸化降低pH(至1～2)以及过滤或用适宜溶剂如乙酸乙酯或CH2Cl2萃取所需产物组成。

    可以通过按照与上述(例如步骤A)相似的步骤偶联其中R6为烷氧羰基的适宜的化合物III与适宜的化合物II制备化合物V。

    作为可供选择的替代方式，含有呈亚砜或砜氧化态的硫原子的化合物I可以由具有呈非氧化态的硫原子的相应的化合物I通过用适宜的氧化剂如处于CH2Cl2中的间氯过苯甲酸于约0～25℃处理约1～48小时来制备，为了转化成亚砜氧化态需采用约1～1.3当量，为了转化成砜氧化态需采用约2当量以上氧化剂。

    作为可供选择的替代方式，其中R5氨基烷氧基被单或双烷基化的化合物I可以由其中R5为氨基烷氧基的相应的化合物I通过在R5胺上进行单烷基化或双烷基化而制成。这种单或双烷基化反应可以通过用1当量适宜的羰基化合物(用于单烷基化反应)或大于2当量的适宜的羰基化合物(用于双烷基化反应)与适宜的还原剂在适宜溶剂中处理R5氨基烷氧基化合物来进行。适宜的还原条件包括处于甲醇或乙醇中的氰基硼氢化钠或硼氢化钠，或者处于极性溶剂如水、甲醇或乙醇中的氢/加氢催化剂(如铂/碳)，还原在0～60℃进行1～48小时。

    作为可供选择的替代方式，其中R5为链烷酰氧基(RCOO-)的化合物I通过用适宜的酰氯或其它活化酸衍生物在，必要时，适宜的碱(例如叔胺碱如三烷基胺或吡啶)存在下、优选地在非质子传递溶剂如四氢呋喃或CH2Cl2中于约0～50℃下对适宜的化合物I进行邻位酰化处理约0.5～48小时来制备。

    作为可供选择的替代方式，其中R5与R7共同形成氧桥的化合物I可以通过用适宜的氧化剂氧化例如其中R5为羟基而R7为H的相应的化合物I而制成。示例性氧化剂包括处于CH2Cl2中的Dess-Martin试剂、碳化二亚胺和二甲亚砜以及酸催化剂(Pfitzner-Moffatt条件或其改进形式，如使用水溶性碳化二亚胺)或Swern型反应(例如，草酰氯/DMSO/三乙胺)。具有其它对氧化敏感性官能度的化合物I可以将这种官能团保护起来随后去除保护。

    本文所述的某些制备方法可以包括保护远端官能团(即式I前体中的伯胺、仲胺、羧基)的步骤。对这种保护的需要可以依据远端官能团的性质和制备方法的条件而变化，对这些保护步骤的需要容易由本领域专业人员确定。这类保护/去保护方法的使用同样属于本领域专业人员公知的内容。关于保护基及其用途的一般描述，参见T.W.Greene，《有机合成中的保护基》，John Wiley & Sons，New York，1991。

    例如，在反应历程1中，特定的化合物I在由R5或R6限定的分子部分含有伯胺、仲胺、羧酸官能团，它们在式III中间体，或R12H或R8R9NH胺未被保护的条件下会干扰反应历程1中预期的偶联反应。因此，伯胺或仲胺官能团可以被保护起来，此时它借助于适宜的保护基在反应历程I的偶联反应期间存在于式III中间体的R5或R6部分或胺(R8R9NH或R12H)中。这种偶联反应的产物为含有保护基的化合物I。该保护基在后续步骤中被除去。胺与羧酸的适宜保护基包括常用于肽合成的保护基如适用于胺的N-叔丁氧羰基、N-苄氧羰和9-芴基亚甲基氧羰基以及适用于羧酸的低级烷基或苄基酯，它们在上述偶联条件(以及实施例前面的、步骤A)不具备化学反应性并且可以在不改变化合物I中其它官能团化学性质的条件下被除去。

    在无法由商业途径得到或者可以在先有技术中属公知内容(该技术已被广泛公开)的被用于反应历程1的原料吲哚-2-羧酸与二氢吲哚-2-羧酸可以通过传统合成法制得。举例来说，按照反应历程II，式VII吲哚酯可以由化合物VI(其中Q被选用来实现上述所需的A)通过Fischer吲哚合成(见Fisther Indole systhesis，Robinson，B.(Wiley，New York，1982)来制备。随后通过皂化所得到的式VII吲哚酯产生相应的酸VIII。原料芳基腙可以通过用适宜的羰基衍生物缩合易得的肼或者通过Japp-Klingeman反应来制备(有机反应，phillips，R.R.1959，10，143)。

    作为可供选择的替代方式，式VIII A所示吲哚2-甲酸可以通过式IX所示邻甲基硝基化合物与草酸酯缩合成吲哚酯(x)、随后通过还原硝基与水解来制成。

    该三步法被称作Reissent吲哚合成法(Reissert，chemischeBerichte 1897，30，1030)，其操作条件与参考资料在文献中有所描述(Kermack，等人，J.Chem.Soc.1921，119，1602；Cannon等人，J.Med.Chem.1981，24，238；Julian等人《杂环化合物》第3卷，Wiley，New York，NY，1962，R.C.Elderfield.ed.)p18)。其具体实施方案见本文实施例10A-10C。

    通过5-氯-1H-吲哚-2-羧酸的卤化反应同样可以制备3-卤代-5-氯-1H-吲哚-2-甲酸。

    作为(反应历程II的)可供选择的替代方式，式XIV所示被取代的二氢吲哚可以通过用还原剂如甲醇中的镁在约25℃～65℃还原相应的吲哚(XV)来制备，历时约1～48小时(反应历程III)。

    通过皂化式XVII所示的酯制备相应的二氢吲哚甲酸XVI(反应历程III)。通过用还原剂如甲醇中的镁按照上述将化合物XV转化为化合物XIV的方式还原相应的吲哚酯VII来制备化合物XVII。

    下面描述如何制备用于上述反应历程的各种胺。

    按照反应历程IV，以N-保护(用PT表示)醛XX为原料制备化合物XXVI(R6为C(O)NR8R9或C(O)R12)或化合物XX II(反应历程I中的胺III，其中R5为OH、R7为H、R6为酯)。醛XX或其硫亚酸氢钠加合物在约0～50℃经过处在含有诸如二恶烷或乙酸乙酯之类共溶剂的水溶液中的氰化钾或钠处理形成氰醇XXI。必要时，氰醇XXI在约0～50℃经过醇(例如C1-6链烷醇如甲醇)与强酸催化剂如HCl的处理，随后加入水。如果保护基仍然存在的话，通过适宜的去除保护的方法脱除保护基(PT)，得到化合物XX II。举例来说，若式XX中的N-保护基PT为叔丁氧羰基(t-Boc)，则化合物XX III直接形成于化合物XX I，不必添加水。可以用适宜的保护基在氮上保护化合物XX II从而形成化合物XX III，继而用含水碱在约0～50℃于反应惰性溶剂中水解该酯，形成相应的羟基酸XX IV。借助适宜的R8R9NH或HR12胺偶联化合物XXIV(按照与反应历程I所述偶联法类似的步骤)得到化合物XX V，去除保护后得到化合物XXVI(即化合物III，其中R5为OH，R7为H，R6为C(O)R12或C(O)NR8R9)。PCT公开WO/9325574中的实施例1a中提供了氰醇XXI转化为相应的其中t-Boc保护基已被脱除的甲酯XX II的实例。其它有关氰醇被转化为低级烷基酯XX III的实例参见US4814342与EPO公开0438233。

    特定的化合物I通过在标记为a和b的碳原子上的立体化学构型而呈现立体异构。本领域专业人员可以借助反应历程IV制备具备所需立体化学特性的中间体XX II与XXVI。举例来说，醛XX可以通过下面提到的步骤(见反应历程V)以对映体(在a上呈现立体化学性质)形式存在。氰醇XX I可以由化合物XX通过用上述氰化钠或钾在碳a上保持立体化学构型的同时进行处理来制备，导致碳b立体异构体混合物形成。

    本领域专业人员可以利用结晶方法在此阶段分离异构体或提纯某一种异构体。

    举例来说，《生物化学》1992，31，8125～8141描述了化合物XX I的制备方法，其中PT为Boc，R3为H，R4为苄基而碳a与b的立体化学分别为(S)与(R)，随后进行重结晶提纯。

    作为可供选择的替代方式，可以在按照本文所述的步骤和/式程序将化合物XX I(异构体混合物)转化为化合物XX II、XXIII、XX IV、XX V、XX VI、V、IV或I后通过色谱或重结晶技术进行异构体分离。在碳a和b具有特定立体化学构型的中间体XX I通过用醇与强酸催化剂，必要时随后添加水如上所述在保留其立体化学特性的条件将其转化为中间体XX II。

    作为可供选择的替代方式，化合物XX I的所需异构体同样可以通过中间体XX I的衍生及其非对映体衍生物(例如借助三甲基硅烷基氯(TMS)或叔丁基二甲基硅烷基氯(TBDMS)得到O-TMS或O-TBDMS衍生物)的色谱分离得到。举例来说，实施例24D描述了非对映体衍生物XX I的分离，在碳a和b上具备单一立体异构形式的中间体XX I的硅烷基衍生物借助上述将化合物XX I转化为化合物XX II(见实施例24C，其中化合物XX I的甲硅烷基衍生物在丧失甲硅烷基后被转化为式XX II的单一异构体)的方法在保留立体化学的条件下被转化为中间体XX II(若在此步骤中未除去甲硅烷基，随后通过适宜的方法如用处于四氢呋喃中的氟化四丁铵处理将其除去)。

    按照反应历程V，醛XX(反应历程IV的起始材料)由相应的氨基酸XXX制备。借助保护基(PT)(如Boc)在氮上保护氮基酸XXX。被保护的化合物经醇酯化并且被转化为化合物XXXI的酯、优选为其甲酯或乙酯。这可以通过用甲基碘或乙基碘在适宜的碱存在下(例如K2CO3)于极性溶剂如二甲基甲酰胺中处理化合物XXX来实现。举例来说，用处在已烷或甲苯中的氢化二异丁基铝或其混合物在约-78～-50℃还原化合物XXX I，随后用-78℃甲醇将其急冷(J.Med.Chem.1985，28，1779-1790)以便形成醛XX。可供选择的替代方式(反应历程V未加以描述)是由化合物XXX.N，O-二甲羟基胺与适宜的偶联剂(例如1-(3-二甲胺基丙基)-3-乙基碳化二亚胺盐酸盐(DEC)按照步骤A形成对应于化合物XXX I的类似N-甲氧基甲酰胺，其中该酯的醇取代基被NC(OMe)Me取代。举例来说，用处于反应惰性溶剂如乙醚或四氢呋喃中的氢化铝锂在约0～25℃还原所形成的化合物，得到醛XX。该两步法是将N-保护α-氨基酸转化为醛XX的通用方法(Fehrentz与Castro，合成1983，676～678)。

    作为可供选择的替代方式，可以通过例如用吡啶-SO3在约-10～40℃于反应惰性溶剂以二甲基亚砜为佳之中氧化保护氨基醇XX III来制备醛XX。若无法从市场上买到，可以通过保护氨基醇XXX II来制备被保护氨基醇XX III。氨基醇XXX II通过氨基酸XXX还原而成。该还原反应通过用氢化铝锂按照Dickman等人在“有机合成”，Wiley；New York，1990；Collect.Vol.VII，p530所述步骤或用硫酸/硼氢化钠通过Abiko与Masamune，Tetrahedron Lett.1992 333，5517-5518或者用硼氢化钠/碘按照Mukennon和Meyers在J.Org.Chem.1993，58，3568-3571中所述步骤以及其它适用于将氨基酸XXX转化为氨基醇XXX II的步骤处理化合物XXX来实现。

    按照反应历程VI，用于反应历程V的化合物XXX的制备过程如下所示。氨基酸XL1通过用适用的碱与烷基化剂处理使保护(PT)氨基酸XL发生N-烷基化反应来制备。该烷基化步骤被具体地描述于Benoiton，Can.J.Chem.1977，55，906-910，与Hansen，J.Org Chen.1985，50 945-950。举例来说，当R3为甲基时，采用处于四氢呋喃中的NaH与Mei。去除化合物XL1的保护形成预期化合物XXX。

    作为可供选择的替代方式，氨基酸XL II可以通过包括还原性苄化(如采用苯甲醛、Pd/C催化加氢)以便得到单-N-苄基衍生物与借助适宜的酰基化合物(例如甲醛与氰基硼氢化钠以便引入作为甲基的R3)进行以便得到N-苄基、N-R3-取代的氨基酸在内的三步程序而被N-烷基化。该N-苄基保护基适宜被除去(例如通过用适宜的催化剂氢化)以便得到化合物XXX。这一三步烷基化步骤的具体条件被描述于Reinhold等人，J.Med.Chem.1968，11，258-260。

    上述制备方法还可以被用来将R3部分导入中间体XL IV以便形成中间体XL V(其中R7为OH的中间体III)。该法还可以用于将R3部分导入中间体IIIa(其中R3为H的中间体III)。

    如果被用于反应历程中的氨基酸(例如XL、XL II)无法购得或未在文献中被报道过，可以借助许多本领域专业人员公知的方法制备。举例来说，可以使用strecker合成法或其变通方式。因此，醛(R4CHO)、氰化钠或钾与氯化铵反应形成相应的氨基腈。该氨基腈借助无机酸被水解成所需的氨基酸R4C(NH2)COOH(XL II)。作为可供选择的替代方式，可以采用Bucherer-Berg法，其中通过加热醛(R4CHO)、碳酸铵与氰化钾形成乙内酰脲，随后用酸或碱水解(例如用氢氧化钡，于回流二恶烷中)形成所需的氨基酸R4C(NH2)COOH(XL II)。

    α-氨基酸的其它合成方法在文献中同样有所报道，这使得本领域专业人员能够制备合成化合物I所需的中间体R4C(NH2)COOH XL II。

    适宜的合成化合物XL II的方法有如Duthaler(Tetrahedron1994，50，1539-1650)，或Williams(R.M.Williams，旋光氨基酸的合成法，Pergamon：Oxford，U.K.，1989)。

    由相应的R4X(X＝Cl、Br或I)中间体合成的以对映体形式存在的中间体XL II的具体方法有如Pinrung与Krishnamurthy(J.Org.Chem.1993，58，957-958)或O’Donnell等人的方法(J.Am.Chem.soc.1989，111，2353～2355)。所需要的R4X中间体易于通过许多本领域化学家们熟知的方法制备。举例来说，当R4X为ArCH2X时，那些化合物可以通过化合物ArCH3的自由基卤化或者通过芳烃酰化与醇被转化为溴化物而被制得。

    另一种合成以对映体形式存在的中间体XL II的具体方法是Corey与Link的方法(J.Am.Chem.Soc.1992，114，1906～1908)。因此，中间体R4COCCl3被对映定向地还原为中间体R4CH(OH)CCl3，它经过叠氮化物和碱处理后被转化为中间体R4CH(N3)COOH，后者经催化加氢被转化为所需的化合物XL II。所需的三氯甲基酮R4COCCl3通过醛R4CHO与三氯甲基化物阴离子反应随后经过氧化来获得(Gallina与Giordano，合成1989，466-468)。

    其中R5与R7为H的中间体胺III(被用于反应历程I)可以按照反应历程VII制备。氨基酸L(适宜地带有保护基PT)通过被转化为酰氯、酰氟或混合酐而被活化(例如借助处于惰性溶剂如四氢呋喃或二恶烷中的氯甲酸叔丁酯与三乙胺在约0～-40℃)，该活化中间体经重氮甲烷处理形成重氮甲酮L1。该酮经醇(ROH)(例如C1-6链烷醇如甲醇)以及适宜催化剂如热量、氧化银或苯甲酸银处理，得到酯L II。该酯去保护形成化合物III A(经过Wolff重排)。作为可供选择的替代方式，如上所述用例如碱水解以及用适宜的R12H或HNR8R9胺偶联形成化合物III B。

    按照反应历程VIII，其中R5为氧键合的取代基(例如烷氧基)(被用于反应历程I)的中间体胺III按下述方法制备。通过用适宜的烷基化剂(例如烷基碘、烷基溴、烷基氯或烷基甲苯磺酸酯)和充足的碱处理以便在约0～150℃于适宜极性非质子传递溶剂(例如二甲基甲酰胺或四氢呋喃)中形成醇盐(氢化钠或钾)，于氧上将化合物LX I烷基化，形成化合物LX II，它经过去除保护形成所需的胺中间体。

    其中R5为C1-6烷氧羰基烷氧基的被用于反应历程I的中间体胺III可以按照下述方法制备。化合物LX I被卤代链烷酸酯烷基化成为化合物LX III，该化合物被去保护成为所需胺。通过使用处于适宜溶剂中的含水碱水解该酯得到相应的酸。其中R6含有酯和R5含有羧基的胺III可以由胺LX III制得，其中R5含有通过用无水酸处理而作为叔丁酯被保护的羧酸官能团，从而无须水解R6位上的酯便可以在R5上得到相应的酸。

    化合物LX VI(其中R5为被保护氨基烷氧基的中间体胺III)可以由化合物LX I制备。用卤代-烷-腈烷基化处理化合物LXI以便形成化合物LX IV。通过用氢与适宜催化剂(例如铑/碳)在处于优选地极性、质子传递溶剂如水、甲醇或乙醇中的氨存在下处理将化合物LX IV还原为伯胺LX V。化合物LXV在氮上被处于其它保护基(PT)邻位上的保护基(PT1)保护起来，随后经过去除PT保护基得到化合物III。被保护的化合物III与适宜的化合物II偶联，形成的被保护化合物I被去除保护。

    其中n＝2的化合物LX III与LX IV优选地通过用过量丙烯酸酯或丙烯腈在适宜的碱如KOH或NaOH存在下于适宜的溶剂、优选地为极性质子传递溶剂中处理化合物LX I来制备。

    按照反应历程1X，化合物LX VII与LX IX(其中R5为F或者R5与R7均为F的化合物III)可以由化合物LX I制备。用适宜的氟化剂如处于反应惰性溶剂如非质子传递溶剂、优选地为CH2Cl2中的三氟化二乙胺基硫处理化合物LX I以便形成化合物LX VII。该化合物易于被去除保护。

    化合物LX I在上述用于制备其中R5与R7共同形成氧桥的化合物I的条件下被氧化为化合物LX VIII。在适宜的条件下(例如处于CH2Cl2中的三氟化三乙胺基硫)，化合物LX VIII被二氟化。

    根据反应历程X，其中R7为烷基的化合物LXX III或LX IV(即其中R7为烷基的化合物III)是由化合物LXX制备的(同样参见适用于类似胺制备过程的反应历程V)。用有机金属试剂R7M处理化合物LXX。按照上一段所述氧化所得到的仲醇，形成化合物LXX I。化合物LXX I利用与将化合物XX I转化为化合物XX II(反应历程IV)相同的条件经过氰醇LXX II被转化为化合物LXX III。

    作为可供选择的替代方式，化合物LXX II按照将氰基中间体转化为酰胺(反应历程V)的方式被转化为化合物LX IV。

    化合物R8NH2或R9NH2借助分别对应于R8或R9的羰基化合物在适宜的还原性胺化条件下被单烷基化，得到胺R8R9NH。为了避免二烷基化反应发生，优选用适宜的保护基PT保护胺(R8NH2或R9NH2)，例如通过与苯甲醛和还原剂反应来制备R8(PT)NH或R9(PT)NH。在适宜的还原性胺化条件下借助分别对应于R9或R8的羰基化合物单烷基化被保护的胺成为R9R8N(PT)。除去保护基(PT)(例如在PT为苄基时通过完全催经加氢)得到化合物R8R9NH。本领域专业人员可以由文献得到适宜的还原性胺化条件，其中包括Borch等人(J.AM.Chem.Soc.1971，2897-2904)，(Organic Reactions，Wiley：New York，1948(14)，174)，Hutchins等人(Org.prep.Proced.Int.1979(11)，20，)与Lane等人(Synthesis 1975.135)所报道的方法。适合于N-单烷基化进行的还原性胺化条件包括Morales等人(Synthetic Communications1984，1213-1220)与Verardo等人(Synthesis 1992 121-125)的方法。R8NH2或R9NH2胺同样可以分别被其中X为氯、溴、甲苯磺酸根或甲磺酸根的R8X或R9X单烷基化。作为可供选择的替代方式，中间体R8(PT)NH或R9(PT)NH可以借助R9X或R8X被烷基化，保护基被脱除后形成化合物R8R9NH。

    可以采用其它方法制备其中R8NH或R9-NH为氧-氮键合的胺R8R9NH。因此，易于获得的化合物C1-4烷氧羰基-NHO或NH2CONHOH通过用碱与过量适宜烷基化剂(R-X)处理在氮和氧上被二烷基化，得到相应的C1-4烷氧羰基-N(R)OR，后者水解成为化合物R8R9NH(R8＝R9＝R)。适宜的条件、碱与烷基化剂如Goel与Krolls(Org.Prep.Proced.Int.1987，19，75～78)和Major与Fleck(J.Am.Chem.Sot.1928，50，1479)所述。作为可供选择的替代方式，NH2CONH(OH)胺可以在适宜的碱存在下分别用烷基化剂R’X与R”X依次处理被连续地烷基化，首先在氧上，形成NH2CONHC(OR’)，随后在氮上，形成NH2CON(R”)(OR’)。适宜的碱与烷基化剂包括Kreutzhamp与Messinger(Chem.Ber.100 3463-3465(1967))与Danen等人( J.Am.chem.Soc.1973，95，5716-5724)所述种类。水解这些烷基化羟基脲衍生物产生对应于某些R8R9NH胺的胺R’ONH2与R’ONHR”。本领域化学家能够使本段落描述的步骤适用于其它烷基化剂R、R’和R”-X以便制备其中R8N或R9N为氧-氮键合的其它胺R8R9NH。Uno等人(Synlett 1991，559-560)描述了用BF3催化加成有机金属试剂R-Li与式R’CH＝N-OR”所示0-烷基肟，形成化合物R’RCH-NH(OR”)。该路径还可被用于制备其中R8NH或R9NH为氧-氮键合的化合物R8R9NH。

    其中式I的羧酸中的羧基被酯置换的本发明的前药可以通过在碱如K2CO3存在下在惰性溶剂如二甲基甲酰胺中在约0～100℃下使该羧酸与适宜的烷基卤结合约1～24小时来制备。作为可供选择的替代方式，该酸与作为溶剂的适宜的醇在催化量酸如浓硫酸存在下在约20～120℃，优选回流温度下结合约1～24小时。另一方法是在催化量酸存在下在惰性溶剂如四氢呋喃中在随时脱除由机械装置(如迪安-斯达克分水器)或化学装置(如分子筛)产生的水的条件下使该酸与化学计量醇反应。

    其中醇官能团已被衍生为醚的本发明的前药可以通过在碱如K2CO3存在下在惰性溶剂如二甲基甲酰胺中在约0～100℃使醇与适宜的烷基溴或碘反应约1～24小时来制备。链烷酰胺基甲醚可以通过在催化量酸存在下在惰性溶剂如四氢呋喃中按照US4997984所述方法使醇与双-(链烷酰胺基)甲烷反应来获得。作为可供选择的替代方式，这些化合物可以通过Hoffman等人于J.Drg.Chem.1994，59，3530所述方法制备。

    二烷基磷酸酯可以通过醇与氯代磷酸二烷基酯在碱存在下在惰性溶剂如四氢呋喃中反应来制备。二氢磷酸酯可以通过醇与二芳基或二苄基氯代磷酸酯如上所述进行反应，随后通过在贵金属催化剂存在下分别进行水解或加氢来制备。

    苷通过醇与碳水化合物在惰性溶剂如甲苯中在酸存在下反应来制备。典型情况下，上述反应生成的水应被除去。可供选择的替代步骤是醇与适度保护的糖基卤在碱存在下反应，随后去除保护。

    N-(1-羟基烷基)酰胺、N-(1-羟基-1-(烷氧羰基)甲基)酰胺或其中R2已被C(OH)C(O)OY取代的化合物可以通过母体酰胺或吲哚与适宜的醛在中性或碱性条件(例如处于乙醇中的乙醇钠)在25～70℃反应来制备。N-烷氧甲基吲哚或N-1-(烷氧基)烷基吲哚可以通过N-未取代吲哚与必要的烷基卤在碱存在下于惰性溶剂中反应来制备。1-(N，N-二烷基胺基甲基)吲哚、1-(1-N，N-二烷基胺基)乙基)吲哚和N，N-二烷基胺基甲基酰胺(例如R3＝CH2N(CH3)2)可以通过母体N-H化合物与适宜的醛和胺在醇溶剂中于25～70℃下反应来制备。

    上述环状前药(例如，本发明的前药，其中R2与R3为普通碳)可以通过母体化合物(药)与醛或酮或其二甲基乙缩醛于惰性溶剂中在催化量酸存在下在随时脱除刚刚形成的水或甲醇的条件下反应来制备。作为可供选择的替代方式，这些化合物可以通过氨基醇或羟基酰胺与树胶-二溴链烷在碱存在下(例如K2CO3)于惰性溶剂(如二甲基甲酰胺)中反应来制备。

    尽管已经介绍了大多数用于上述反应历程的原料与试剂(例如胺、被取代吲哚羧酸、被取代二氢吲哚羧酸、氨基酸)的制备方法，但是它们同样易于得到或便利地由本领域专业人员采用传统的有机合成法合成。举例来说，本文用于制备化合物I的许多中间体都关系到或衍生自天然氨基酸，这些氨基酸有着重要的科学与商业价值，因此，许多这些中间体是可以购得的或者在文献有所报道或者易于通过文献报道的方法由其它市售商品制得。举例来说，这类中间体包括化合物XX、XXX、XXX I、XXX II。

    化合物I具有不对称碳原子，因此为对映体或非对映体。非对映体混合物可以依据其物理化学性质上差别借助已知方法例如通过色谱和/或分级结晶被分离为单独的非对映体。(例如式III、VIII或IX的)对映体可以通过借助与适宜的旋光化合物(例如醇)反应将对映体混合物转化为非对映体混合物、分离非对映体与转化(例如水解)单独非对映体为相应的纯对映体来得到分离。包括非对映体、对映体及其混合物在内的所有这类异构体均被视为本发明一部分。

    尽管本发明的许多化合物都不能被电离，但是仍有一部本发明化合物在生理条件下是可以被电离的。因此，举例来说，本发明的某些化合物呈酸性并且与药物可接受的阳离子形成盐。所有这些盐均属于本发明范围并且可以按照传统方法制备。举例来说，它们可以简单地通过使酸与碱通常以化学计量比值，在水、非水或部分含水介质中以适宜方式接触来制备。通过过滤、通过非溶剂沉淀后进行过滤、通过蒸除溶剂或者通过在水溶液情况下冻干以适宜方式回收盐。

    此外，本发明的某些化合物呈碱性，它们与药物可接受的阴离子形成盐。所有这些盐均属于本发明范围并且可以由传统方法制备。举例来说，可以简单地通过使酸与碱通常以化学计量比在水、非水或部分含水介质中以适宜方式接触来制备。通过过滤、通过非溶剂沉淀后进行过滤、通过蒸除溶剂或者通过在水溶液情况下冻干以适宜方式回收盐。此外，当本发明化合物形成水合物或溶剂化物时，同样属于本发明范围。

    本发明化合物作为治疗哺乳动物(例如人类)体内代谢疾病(如本文详述)的药剂的应用通过其在常规试验与下述体外和体内试验中的活性得到表现。这种试验同时提供一种将本发明化合物的活性与其它已知化合物的活性进行对比的途径。对比结果适用于确定治疗包括人类在内的哺乳动物体内这类疾病的药物剂量。

    通过下列步骤获得经过纯化的人体酐脏糖原磷酸化酶a(HLGPa)。

    表达与发酵

    HLGP互补DNA由质粒中KK233-2(Pharmacia BiotechInc.，Piscataway，New Jersey)被表达(于大肠杆菌菌株XL-1blue(Stratageme Cloning systems，LaJolla.CA))中。该菌株被接种在LB介质(由10克胰化蛋白胨、5克酵母提取物、5克NaCl和1毫升1NNaOH/升组成)与100毫克/升氨苄青霉素、100毫克/升吡哆醇和600毫克/升MnCl2并且在37℃生长至细胞密度达OD550＝1.0。此时，用1mM异丙基-1-硫代-β-D-半乳苷(IPTG)诱导细胞。诱导3小时后，通过离心分离收获细胞并将细胞片在-70℃下冷冻直至需要提纯时为止。

    提纯糖原磷酸化酶

    将上述片状细胞重新悬浮于25mMβ-甘油磷酸盐(pH＝7.0)，其中带有0.2mMDTT，1mM MgCl2与下列蛋白酶抑制剂；

    0.7微克/毫升                胃酶抑制剂A

    0.5微克/毫升                亮抑蛋白酶肽

    0.2mM                       苯甲基磺酰氟(PMSF)

    0.5mM                       EDTA通过用200微克/毫升溶菌酶与3微克/毫升DNA酶进行预处理，随后Branson 450型超声细胞破碎器(Branson Sonic Power Co.Danbury CT)在冰上于250毫升批量中进行超声处理5×1.5分钟将细胞裂解。经过35,000×g离心分离1小时，随后用0.45微米滤器过滤清亮裂解液。通过在下述一系列色谱步骤中监测酶活性(如下面的HLGPa活性试验所述)提纯裂解液(估计少于全部蛋白质的1％)的可溶部分中的HLGP。

    固定化金属亲和层析(IMAC)：

    此步骤基于Luong等人的方法(Luong等人，Journal ofChromatography(1992)584，77-84)。将500毫升细胞裂解液(由约160克原始细胞片制得)的经过滤的可溶部分放入130毫升IMAC螯合一琼脂糖凝胶柱(Pharmacia LKB Bcotechnology，Piscataway，New Jersey)，该柱中装有50mM CuCl2与25mMβ-甘油磷酸盐、250mM NaCl和1mM咪唑(在pH＝7平衡缓冲液中)。该柱用平衡缓冲液洗涤直至A280返回至基线为止。随后用含有100mM咪唑的相同缓冲液由该柱中洗脱样品以便脱除被结合的HLGP与其它被结合的蛋白质。合并含有HLGP活性的馏份(约600毫升)并且加入乙二胺四乙酸(EDTA)、DL-二硫苏糖醇(DTT)、苯甲基磺酰氟(DMSF)、亮抑蛋白酶肽和胃酶抑制剂A以便分别获得0.3mM、0.2mM、0.2mM、0.5μg/ml和0.7μg/ml不同浓度。在葡聚糖凝胶G-25柱(Sigma Chemical Co.，St.Louis，Missouri，被25mM三羟甲基氨基甲烷-HCl(pA7.3)平衡)上对合并的HLGP进行脱盐处理，用3mM DTT缓冲液(缓冲液A)除去咪唑，将其贮存在冰上直至第二次层析步骤开始为止。

    5’-腺苷酸琼脂糖凝胶层析：

    经过脱盐处理的合并的HLGP样品(约600毫升)与70毫升5’-腺苷酸-琼脂糖凝胶(Pharmacia LKB Biotechnology，Piscataway，New Iersey，被缓冲液A平衡)混合。在22℃轻轻搅拌1小时，随后装填入柱中并且用缓冲液A洗涤直至A280返回至基线为止。HLGP与其它蛋白质自具有25mM三羟甲基氨基甲烷-HCl、0.2mM DTT与10mM腺苷-5’-一磷酸(AMP)(pH＝7.3，缓冲液B)的柱中洗脱。确定酶(如下所述)活性并且借助十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)显示M，约97Kdal HLGP蛋白质条带，随后进行银染(2D-银染II“Daiichi Rit”，Daiichi Pure Chemicals Co.LTD.Tokyo.Japan)，合并含HLGP的馏分。合并的HCGP被渗析进入25mMβ-甘油磷酸盐，0.2mM DTT、0.3mM EDTA、200mMNaCl、pH7.0缓冲液(缓冲液C)并且被贮存在冰上直至被使用为止。

    确定HLGP酶活性：

    A)活化HLGP：将HLGPb转化为HLGPa

    在确定HLGP酶活性之前，将酶由以大肠杆菌菌株XL-1Blue(Stragene Cloning systems，La Jolla，California)表达的非活性形式(指定为HLGPb)通过采用磷酸化酶激酶将HLGP磷酸化而转化为活性形式(指定为HLGPa)：

    HLGPb与固定化磷酸化酶激酶反应

    磷酸化酶激酶(Sigma，chemical Co.，ST.Louis，MO)根据生产厂家的指示被固定在亲和胶-10(Bio Rad Corp.，Melvile，NY)上。简言之，磷酸化酶激酶(10毫克)与洗涤过的亲和胶颗粒(1毫升)一起于2.5毫升100mMN-2-羟乙基哌嗪-N’-2-乙磺酸(HEPES)和80mM CaCl2中在pH＝7.4和4℃下4培养小时。随后在用50mM HEPES和1M甘氨酸甲酯在pH＝8.0和室温下进行阻断1小时之前，用相同的缓冲液洗涤亲和胶颗粒一次。撤除阻断缓冲液，为了贮存用50mM HEPES(pH＝7.4)、1mM β-巯基乙醇和0.2％NaN3替换该缓冲液。在被用于将HLGPb转化为HLGPa之前，通过在由25mMβ-甘油磷酸盐、0.3mM DTT和0.3mM EDTA(pH＝7.8)组成的用于激酶反应的缓冲液(激酶试验缓冲液)中洗涤来平衡亲和胶固定化磷酸化酶激酶颗粒。

    经过部分提纯，由上述5’-腺苷酸琼脂糖凝胶层析得到的非活性HLGPb被激酶试验缓冲液稀释1∶10，随后与被固定在亲和胶颗粒上的上述磷酸化酶激酶混合。加入NaATP(腺苷三磷酸钠)至5mM，加入MgCl2至6mM。在25℃缓慢地混合30～60分钟，脱除颗粒中的样品，通过在存在与不存在3.3mMAMP的条件下确定HLGP酶活性估评HLGPb被转化为HLGPa的活化百分率。按照下式计算总的HLGP酶活性百分率(基于HLGPa酶活性，独立于AMP)：

    (B)HLGPa活性试验：

    本发明化合物的降血糖活性(以及治疗/防止其它病症的活性)可以通过借助两种方法之一估评本发明化合物对糖原磷酸化酶(GPa)的活化形式的活性所产生的影响来间接地确定，通过正向监测由糖原产生的葡糖-1-磷酸或者通过跟踪逆反应、由释放的无机磷酸盐测定源于葡糖-1-磷酸的糖原合成量来确定糖原磷酸化酶a活性。所有反应均在96孔微量滴定板中进行三次，用与Titertech Microplate Stacker(ICN Biomedical Co.Huntsville，alabama)连接的MCC/340 MKII Elisa Reader(Lab.systems，Findand)在下面特定波长测定由于反应产物形成而在吸收上产生的变化。

    为了测定正向HLGPa酶活性，借助Pesce等人的多酶偶联通用方法(Pesce，M.A.Bodourian，S.H.，Harris，R.C.与Nicholson，J.F.(1977)临床化学23，1711-1717)监测由糖原生成的葡糖-1-磷酸，该方法被改进如下，1～100微克磷酸化酶a，10单元葡糖磷酸变位酶和15单位葡糖-6-磷酸脱氢酶(Boehringer Mannhein biochemicals.Indianapolis，IN)在缓冲液A中被稀释至1毫升。缓冲液A的pH＝7.2，其中含有50mMHEPES、100mM KCl、2.5mM乙二醇四乙酸(EGTA)、2.5mM MgCl2、3.5mM KH2PO4和0.5mM二硫苏糖醇。将其中20微升加至含有0.47毫克/毫升糖原、9.4mM葡萄糖。0.63mM烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸的氧化形式(NADP+)的80微升缓冲液A。将待测试的化合物在加入酶之前以5微升处于14％二甲亚砜(DMSO)的溶液形式加入。通过加入5微升14％DMSO测定在不存在抑制剂时HLGPa酶活性的基础速率，通过添加20微升50mM阳性对照试验物质咖啡因来确定HLGPa酶活性的充分抑制速率。室温下通过测定被氧化的NADP+在340纳米处转化为被还原NADPH的转化率来监测反应的进行。

    为了测定逆反应中HLGPa酶的活性，借助Engers等人所述的通用方法〔Sngters，H.D.Shechosky，S.与Madser，N.B.(1970)Can.J.Biochem.48，764-754〕测量葡糖-1-磷酸转化为糖原与无机磷酸盐的转化率，该方法被改进如下：1～100微克HLGPa在缓冲液B中被稀释至1毫升。缓冲液B的pH＝7.2，其中含50mMHEPES、100mM KCl、2.5mM EGTA、2.5mM Mgcl2和0.5mM二硫苏糖醇。将其中20微升加至含有1.25毫克/毫升糖原、9.4mM葡萄糖、0.63mM葡糖-1-磷酸的80微升缓冲液B。将待测试的化合物在加入酶之前以5微升处于14％DMSO的溶液形式加入。通过加入5微升14％DMSO测定在不存在抑制剂时HLGPa酶活性的基础速率，通过添加20微升50mM咖啡因确定HLGPa酶活性的充分抑制速率。在室温下将该混合物培养1小时，借助Lanzetta等人的通用方法测定由葡糖-1-磷酸释放的无机磷酸盐〔Lanzetta，P.A.，Alvarez，L.J.，reinach，P.S.与Candia，O.A.(1979(Anal.biochem，100，95～97〕，该法经过如下改进：150微升10毫克/毫升钼酸铵、0.38毫克/毫升处于1NHCl中的孔雀绿被加入100微升酶混合物。于室温下培养20分钟后，在620纳米处测量吸收。

    本发明化合物适于作为降血糖药用于临床。可以借助在雄性ob/ob小鼠体内不存在试验化合物的条件下相对于赋形剂用量可以减少葡糖的试验化合物的数量来确定本发明化合物的降血糖活性。该试验同样可以确定用于在该鼠体内降低血浆葡糖浓度的这类试验化合物的近似最小有效剂量(MED)。

    由于血液中葡糖浓度与糖尿病的状况密切相关，所以这些化合物通过其降血糖作用来防止、阻抑糖尿病和/或使病情好转。

    将5只5～8周龄的雄性C57BL/6J-ob/ob小鼠(由Jackson实验室，Bar Harbor，ME获得)在标准动物管理操作条件下放在一个笼子内。经过一周的驯化周期之后，称量动物并且在进行任何处理之前由眶后窦处采集25微升血样。立即用含0.025％肝素钠的盐水稀释至1∶5并且将其放在冰上进行代谢物分析。将动物分为处理组以便使每一组都具有类似的平均血浆葡糖浓度。分组后，在4天内每日口服给药赋形剂，其中含有1)0.25％w/v甲基纤维素/水(未进行pH调节)；或2)处于0.1％盐水中的0.1％PluronicR P105嵌段共聚物表面活性剂(BASF公司，Parsippany，NJ)(未作pH调节)。于第5天，再次称重动物，口服试验化合物或单独口服赋形剂。所有药物均以赋形剂的形式给药，其中含有：1)0.25％w/v处于水中的甲基纤维素(未作pH调节)；或2)处于0.1％盐水中的10％DMSO/0.1％ PluronicR P105(BASF公司，Parsippany，NJ)(未调节pH)。此后由动物的眶后窦放血3小时以便确定血液代谢物含量。在室温下离心分离(10,000×g)2分钟新采集的样品。举例来说，借助Abbott VPTM(Abbott实验室，诊断部，Irving，TX)与Vp Super system自动分析仪(Abbott实验室，Irving，TX)，采用A-GentTM葡糖-紫外试验试剂体系(Abbott实验室，Irving，TX)(Richlerich与Dauvvalder方法的改进，Schvveizerische Medizinische wochenschrift，101，860(1971))(己糖激酶法)采用100毫克/分升标准物分析上清液中的葡糖。按照下式计算血浆葡糖：血浆葡糖(mg/dl)＝样本值×5×1.784＝8.92×样本值。其中5为稀释因子，1.784的血浆血细胞比容修改(假设血细胞比容＝44％)。被施用赋形剂的患高血糖症的动物的葡糖水平基本上保持不变(例如，大于或等于250毫克/分升)，被施用适宜剂量试验化合物的动物体内的葡萄糖水平则明显下降。通过在第5天统计分析试验化合物组与赋形剂处理组之间平均血浆葡糖浓度(非成对的t试验)来确定试验化合物的降血糖活性。上述试验以一定范围的试验化合物剂量进行以便确定用于降低体内血浆葡糖浓度的近似最低有效剂量(MED)值。

    本发明化合物易于作为高胰岛素血反转剂、甘油三酯降低剂与降低胆固醇剂用于临床。这类活性通过在ob/ob小鼠体内不存在试验化合物的条件下相对于对照赋形剂的能够降低胰岛素、甘油三酯或胆固醇含量的试验化合物数量来确定。

    由于血液中胆固醇浓度与心血管、脑血管或外周血管疾病密切相关，所以本发明的化合物借助其降低胆固醇的作用防止、阻抑动脉粥样硬化和/或使其病情好转。

    由于血液中胰岛素浓度能够促进脉管细胞生长与增加肾钠保留(此外还有其它作用如促进葡糖的利用)，而这些功能又是公知的造成高血压发病的原因，所以，本发明化合物通过其降胰岛素作用来防止、阻抑高血压和/或使其病情好转。

    由于血液中甘油三酯的浓度对血脂总水平产生影响，所以本发明化合物通过其降低甘油三酯的活性防止、阻抑高血脂症和/或使其病情好转。

    在标准动物管理条件下将5只5～8周龄雄性C57BL/6J ob/ob小鼠(来自Jackson实验室，Bar Harbor，ME)关在一只笼子内并且喂给标准啮齿动物食物(ad libitum)。经过一周驯化期后，称重并且在进行任何处理之前由动物的眶后窦采集25微升血样，随后立即将血样用含0.025％肝素钠的盐水稀释至1∶5。将其置于冰上以便进行血浆葡糖分析。将动物分为处理组以便每组具有相似的平均血浆葡糖浓度。待测试化合物通过口服管饲法以约0.02～2.0％溶液(重量/体积)的形式给药，该溶液处在1)10％DMSO/0.1％PluronicR P105嵌段共聚物表面活性剂(BASF公司，Parsippany，NJ)，于0.1％盐水中(未调节pH)或2)0.25％w/v甲基缝纤维素水溶液(未调节pH)。持续每日一剂(s.i.d.)或每日二剂(b.i.d.)，共计15天。对照组小鼠仅接受于0.1％盐水中的10％DMSO/0.1％PluronicR P105(未调节pH)或0.25％(w/w)甲基纤维素水溶液(未调节pH)。

    3小时后，施用最后一剂，切下鼠头，将鼠体内血液收集在含有3.6毫克1∶1(w/w)氟化钠/草酸钾混合物的0.5毫升血清分离试管内。在室温和10,000×g离心分离2分钟。移出血清上清液并且用1TIU/ml抑蛋白酶肽溶液(于0.1％盐水中，未调节pH)稀释至1∶1 v/v。稀释后的血清样品在-80℃下贮存直至分析。分析融化的被稀释的血清样品中的胰岛素、甘油三酯与胆固醇含量。采用购自Binax，South Portland，ME的EquateR RIA INSULIN kits(双抗体法)测定血清胰岛素含量。试验之间的变化系数≤10％。采用Abbott VPTM与VP Super SystemR自动分析仪(Abbott实验室，Irving，TX)，借助A-GentTM甘油三酯试验试剂系统(Abbott实验室，诊断部Irving，TX)(脂肪酶偶联酶方法，Sampson等人，临床化学21，1983(1975)的方法的改进)测量血清甘油三酯。采用Abbott VPTM与VP super-SystemR自动分析仪(Abbott实验室，Irving，TX)与A-GentTM胆固醇试剂系统(胆固醇酯酶偶联的酶方法；Attain等人临床化学20，470(1974)的方法的改进)借助100和300mg/dl标准物确定血清胆固醇总含量。利用下式计算血清胰岛素、甘油三酯与胆固醇总水平，

    血清胰岛素(μU/ml)＝样本数×2

    血清甘油三酯(mg/dl)＝样本数×2

    血清胆固醇总含量(mg/dl)＝样本数×2其中2为稀释因子。

    被施用赋形剂的动物基本上保持不变，即高血清胰岛素含量(例如225μU/ml)、高血清甘油三酯含量(例如225mg/dl)和高血清总胆固醇水平(例如160mg/dl)，而经过本发明试验化合物处理的动物一般具有降低的血清胰岛素、甘油三酯和总胆固醇水平。试验化合物的血清胰岛素、甘油三酯和总胆固醇降低活性通过统计分析(不成对t-试验)试验化合物组与赋形剂处理对照组之间血清胰岛素、甘油三酯或总胆固醇平均浓度来确定。

    本发明化合物提供的保护心脏组织免受损伤的活性在体外通过Butwell等人(Am.J.Physiol.264，H 1884-H1889，1993与Allard等人(Am.J.Physiol，1994，267，H66～H74)提供的方法得到说明。采用等容隔离大鼠心脏制剂、尤其是上述文献提及的制剂进行实验。正常雄性Sprague-Dawley大鼠、经过主动脉banding手术处理后变得心脏肥大的雄性Sprague-dawley大鼠、患有急性糖尿病的雄性BB/W大鼠或周龄相同的非糖尿病BB/W对照鼠经过肝素(1000u，i.p.)和戊巴比妥(65毫克/千克，i.p.)预处理。待通过检测表明无足部反射从而证实已实现深度麻醉后，心脏被迅速切除并被放入冰冻盐水中。在2分钟内通过主动脉心脏被退行性地灌注。心率与心室压采用在具有与压力置换器连接的高压管的左心室中的胶乳气球测定。用由NaCl 118、KCl 4.7、CaCl2 1.2、MgCl2 1.2、NaHCO3 25、葡糖11(mM)组成的灌注溶液灌注心脏。用被用于灌注液和水夹套的处于灌注管周围的热浴紧密控制灌注设备温度以便将心脏温度保持在37℃。借助儿科中空纤维充氧器(Capiax，terumo.Corp.tokyo，Japan)在紧靠心脏处进行灌注液的充氧过程。心脏与灌注溶液±试验化合物接触约10分钟或更多，随后是20分钟整体缺血和60分钟在无试验化合物存在下的倒灌。在局部缺血后的一段时间内对比对照组与试验化合物处理的心脏的跳动，对比两组心脏的左心室压力。实验结束时，还要灌注与染色心脏以便如下所述确定梗阻面积与有危险的面积的比值(％IA/AAR)。

    同样可以按照Liu等人(Circulation，vol.84，No.1)1991年7月))的方法体内确立本发明化合物对于由局部缺血以外原因造成的心脏组织损伤所产生的防治效果，在体内试验中测试了试验化合物相对于接受盐水赋形剂的对照组的心脏保护作用。作为背景资料引人注意的是短暂的心肌局部缺血与其后发生的冠状动脉灌注可以保护心脏免受后续的严重心肌局部缺血(Murry等人，Criculation 74：1124～1136，1986)。以被梗阻心肌层的减少为标志的心脏保护作用可以通过采用向作为心肌局部缺血预处理现场模型而被研究的未经处理和被麻醉了兔子静脉内施用腺嘌呤核苷受体刺激物从药理上被引发(Liu等人Circulation 84：350～356，1991)。体内试验测试当向未经处理和被麻醉的兔子非肠道给药时化合物是否能从药理上引发心脏保护作用即减小心肌梗阻尺寸。将本发明化合物产生的功效与采用业已表明在现场研究的未经处理和被麻醉的兔子体内从药理上引发心脏保护作用的A1腺嘌呤核苷刺激物，N6-1-(苯基-2R-异丙基)腺嘌呤核苷(PIA)进行的局部缺血预处理相比。具体方法如下所述。手术：用戊巴比妥钠(30毫克/千克，静脉注射)麻醉新西兰白色雄兔(3～4千克)。通过腹部中线颈切割进行气管造口术，采用正压送气机用100％氧气使兔子的血液吸收氧气。在左颈静脉中放入导管便于给药，在左颈动脉中放入导管以便测量血压。随后进行胸廓切开术并且在左冠状动脉的隆凸分支周围放置一勒除器(00丝)。通过拉紧勒除器与夹紧固定来引发缺部缺血。放松勒除器以便使受作用部位重新灌注。局部发绀表明心肌局部缺血；反应性充血证实出现重新灌注。

    记录：一旦动脉压力与心率稳定至少30分钟，便开始进行实验。通过2次闭塞冠状动脉5分钟以及随后重新灌注10分钟引发局部缺血预处理。通过两次历时例如5分钟灌注试验化合物、两次间隔10分钟或者通过灌注腺嘌呤核苷刺激物PIA(0.25毫克/千克)引发药理性预处理。于局部缺血预处理、药理预处理或非处理(未处理，赋形剂对照)之后，闭塞动脉30分钟，随后重新灌注2小时以便引发心肌梗死。将试验化合物与PIA溶于盐水或其它适宜的赋形剂并且分别以1～5毫升/千克的剂量施用。

    染色(Liu等人Circulation 84：350～356，1991)：重新灌注2小时后，心脏被迅速摘除，被挂在Langendorff设备上，用被加热至体温(38℃)的普通盐水冲洗1分钟。被用作勒除器的丝线被束紧以便重新闭塞动脉，用灌注液灌注0.5％荧光颗粒(1～10微米)悬浮液以便染色除了有危险的部位(非荧光心室)以外所有的心肌层。随后快速冷冻心脏。在-20℃贮存过夜。次日，将心脏切成2毫米的薄片并且用1％氯化三苯基四唑(TTC)染色。由于TTC与活组织反应，这种染色在活(红染色)组织与死组织(未染色梗死组织)之间存在差异。采用经过预校正图象分析仪对每一片左心室的已经梗死面积(非染色)与有危险面积(非荧光颗粒)进行计算。为了正常化由于心脏之间在有危险面积上的差异而造成的局部缺血损伤，该数值被表示为梗死面积与危险面积的比值(％IA/AAR)。所有数据均被表示为平均值±SEM并且采用单一因子ANOVA或未成对t-试验进行统计对比。统计显著性被认为p＜0.05。

    可以采用任何能够优选地将本发明化合物送往肝和/或心脏组织的方法施用本发明化合物。这些方法包括口服、非肠道、十二指肠内等途径给药。一般地，本发明化合物以单一(例如一日一次)或多重剂给药。

    然而，化合物的用量与施用时间当然取决于被治疗的具体疾病/症状、被治疗的客体、病情严重程度、给药方式与处方医生的判断力。因此，由于患者之间的差异，下列给出的剂量具有指导意义，医生可以滴定药物剂量以便达到对患者适宜的药性(例如降低葡糖活性)。对于所需的活性程度，医生必须平衡各种因素如初始含量、其它危险(心血管)因素、预先存在的疾病、患者年龄与促动因素。

    一般情况下，对于本发明的活性，例如降低血糖、甘油三酯与胆固醇以及高胰岛素血反转活性，本发明化合物的有效剂量范围为0.005～50、以0.01～25毫克/千克/日为佳，以0.1～15毫克/千克/日为最佳。

    一般地，本发明化合物口服给药，不过可以采用非肠道(例如，静脉内、肌内、皮下或髓内)给药，例如，在口服给药对于即时目标不适宜的情况下或当患者无法摄入药物时。举例来说，当患者患有胃肠疾病或者当护理医生认为药物最好被施用于组织或器官表面时，还可以采用局部给药方式。

    本发明化合物通常以药物组合物的形式被施用，该组合物含有至少一种与药物可接受的赋形剂或稀释剂在一起的本发明化合物。因此，本发明化合物可以单独地或混合地以任何传统的口服、非肠道或经皮肤的剂量形式给药。

    对于口服给药来说，药物组合物可以呈溶液、悬浮液、片剂、丸剂、胶囊、粉剂等形式。含各种赋形剂如柠檬酸钠、碳酸钙与磷酸钙的片剂与各种崩解剂如淀粉并且优选为马铃薯或木薯淀粉以及特定的配合硅酸盐、粘合剂如聚乙烯基吡咯烷酮、蔗糖、明胶与阿拉伯树胶一起被使用。此外，润滑剂如硬脂酸镁，十二烷基硫酸钠与滑石对于片剂来说通常是非常适用的。类似的固体组合物还可以被用作软与硬填充的明胶胶囊的填料；此类的优选材料还包括乳糖或奶糖以及高分子量聚乙二醇。在希望使用水悬浮液和/或酏剂进行口服给药时，本发明化合物可以与各种增香剂、增甜剂、着色剂、乳化剂和/或悬浮剂以及稀释剂如水、乙醇、丙二醇、甘油及其各种组合形式相结合。

    对于非肠道给药来说，可以采用处于芝麻油或花生油或含水丙二醇中的溶液以及相应的水溶性盐的无菌水溶液，必要时，这种水溶液可以被适宜地缓冲，借助充分的盐水或葡糖使液体稀释剂首先呈等渗性。这些水溶液特别适用于静脉内、肌内、皮下和腹膜内注射。另外，所有的无菌水介质易于通过本领域专业人员公知的标准技术得到。

    对于经过皮肤(例如局部)给药来说，可以制备稀释无菌水或部分含水溶液(常见浓度为约0.1～5％)，其它类似于上述非肠道溶液。

    用特定量活性组分制备各种药物组合物属于公知方法或者在本文指导下对于本领域专业人员来说是显而易见的。举例来说，参见Remington的《药学》Mack出版公司，Easter，Pa.15版(1975)  。

    本发明药物组合物含0.1～95％，优选1～70％本发明化合物。无论如何，待施用的组合物或配方将含有其数量能够有效地治疗待治疗客体的疾病/病症即糖原磷酸化酶依赖性疾病/病症。

    在Varian XL-300(Varian Co.，Palo Alto，加利福尼亚)或Bruker AM-300光谱仪(Bruker Co.，billerica，Massachusetts)上、于约23℃和300M赫记录质子NMR光谱和在75.4mHz记录碳核的NMR光谱。化学位移以ppm(三甲基硅烷低磁场)表示。被指定为可交换的共振不出现在其中样品与处于同种溶剂中的数滴D2O一起振动的实验中。FAB-MS光谱采用由3∶1二硫苏糖醇/二硫赤藓糖醇组成的液体基质在VG70-2505光谱仪(V4分析有限公司，Wythanshaw Manchester，U.K.)上获得。采用氨离子化法在Fisons Trio-1000光谱仪(Fisons Co.Valeneia，加利福尼亚)上获得热喷MS(TSPMS)。化学离子化质谱在Hewlett-Packard 5989仪器(Hewlett-Packard Co.，Palo Alto，加利福尼亚)(氨离子化，PBMS)上获得。在含氯或含溴离子的强度被描述的情况下，可以观察到预期的强度比(对于含35Cl/37Cl离子来说约为3∶1，对于含79Br/81Br离子来说为1∶1)并且只给出低质量离子的强度。

    HPLC借助214nM检测在被双泵/混合器系统洗脱的250×4.6毫米Rainin Microsorb C-18柱(Rainin Co.，Woburn，Massachusetts)上进行，上述系统分别以1.5毫升/分钟的流速提供乙腈与pH＝2.1(借助H3PO4调节)的含水0.1MKH2PO4的指定混合物。样品以乙腈与pH＝7.0磷酸盐缓冲液(0.025M Na2HPO4和KH2PO4)的1∶1混合物形式被注入。通常在10～15分钟试验中，纯度百分数对应于总积分面积百分数。熔点未被校正并且在Buchi 510熔点设备(Buchi-Laboratorums-Technik Ag.flawil，switzerdland)确定，苯甲酸的熔点为120.5～122℃，对氯苯甲酸(Aldrich 99+％品级)为237.5～240.5℃。

    柱色谱在玻璃柱中在低氮气压力下借助Amicon硅胶(30mM，60A孔径)(Amicon D Vision，W.R.Grace & Co.，beverly.Mass.)进行。除非另有具体说明，所用试剂均来自市售途径。被用作反应溶剂的二甲基甲酰胺、2-丙醇、四氢呋喃与CH2Cl2为由Aldrich化学公司(Milwaukee，wisconsin)提供的无水品级。微量分析由Schwargkopf微量分析实验室，Woodside NY进行。术语“浓缩”与共蒸发是指用浴温低于45℃的旋转蒸发器在水吸气器压力下脱除溶剂。

    步骤A(采用DEC进行多肽偶联)

    由伯胺(相对于每当量HCl10当量，或伯胺盐酸盐与1.0～1.3当量三乙胺)于CH2Cl2(除非具体说明其它溶剂)中的0.1～0.7M溶液在25℃依次用0.95～1.2当量特定羧酸、1.2～1.8当量羟基苯并三唑水合物(相对于羧酸通常为1.5当量)和0.95～1.2当量(对应于相当于羧酸的摩尔比)1-(3-二甲胺基丙基)-3-乙基碳化二亚胺盐酸盐(DEC)处理。该混合物被搅拌14-20小时。(参见下文注释1)。用乙酸乙酯稀释该混合物，用1或2N NaOH洗涤2～3次，用1或2N HCl(注释2)洗涤2～3次，用MgSO4干燥有机层，浓缩后得到的粗产物根据所使用的溶剂的特定需要通过在硅胶上色谱法、研制或重结晶而被提纯。纯化后的产物经RR-HPLC分析可知除非另有注释，纯度大于95％。下文在适宜的情况下将单独注明利用步骤A时的例外情况。在0～25℃下进行的反应在开始时要在一个绝缘冰浴中冷却容器，该浴被允许在数小时内升至室温。

    注释1：在大规模进行偶联(＞50毫升溶剂)时，该混合物于此时被浓缩，残余物被溶解于乙酸乙酯。注释2：若产物含有可离子化的胺官能团，酸洗被省略。

    实施例1(3S)-〔(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-(2R)-羟基-4-苯基丁酸异丙酯

    1-(3-二甲胺基丙基)-3-乙基碳化二亚胺盐酸化物(DEC，1.03克，5.38毫摩尔)于25℃一次性被加入(3S)-氨基-4-苯基-(2R)-羟基丁酸异丙酯(1.35克，4.93毫摩尔)、5-氯-1H-吲哚-2-羧酸(1.06克，5.4毫摩尔)与1-羟基苯并三唑水合物(1.15克，7.5毫摩尔)于CH2Cl2(15毫升)中的溶液。于25℃搅拌18小时，用乙酸乙酯稀释，用2NNaOH洗涤所得到的溶液2次，用HCl(2N)洗涤2次，用MgSO4干燥，浓缩。在硅胶(112克)上用1∶4乙酸乙酯/己烷(1.5升)，随后用1∶3乙酸乙酯/己烷洗脱完成残余物的色谱提纯，得到标题物质：产率91％；HPLC(70/30)5.69分钟(78％)，21.5分钟(19％)。TSPMS415/417(MH+，100％)；

    1H NMR(CDCl3)δ9.7(s，1H)，7.57(d，1H，J＝2Hz)，7.38-7.18(m，7-8H)，6.73(d，1H，J＝ca.2Hz)，6.57(d，1H，J＝9.7Hz)，5.04(septet，1H，J＝6.3Hz)，4.83(m，1H)，4.19(dd，1H，J＝2Hz)，3.51(d，1H，J＝3.6Hz)，3.05(m，2H)，1.17(d，3H，J＝6.3Hz)，1.11(d，3H，J＝6.3Hz)

    其中存在约15％其它物质，估计为N，O-双(5-氯-1H-吲哚-2-羰基衍生物)d(部分)9.80(S，1H)，5.28(dd，1H，吲哚-CO2CH)。

    实施例1A  3(S)，2(R)-3-氨基-2-羟基-4-苯基丁酸异丙酯

    在5～17℃下用无水HCl(374克)处理3(S)，2(R)-N-〔(1，1-二甲基乙氧基)羰基〕-3-氨基-2-羟基-4-苯基丁腈(Parris等人，生物化学1992，31，8125-8141)(252克，0.912摩尔)于无水2-丙醇(6升)中的溶液并且在25℃搅拌20小时(用含有燥石膏的管使其与大气隔离)。在低于10℃下另外加入348克无水HCl并在25℃将混合物搅拌72小时。浓缩后，将残余物溶于0.1N HCl。在25℃放置1小时后，用醚(3×1升)萃取并用6N NaOH(约450毫升)使水层的pH值达到12。用乙酸乙酯(4×1升)萃取所得到的悬浮液，用水(500毫升)、盐水(500毫升)洗涤萃取液，干燥与浓缩得到177克黄色固体。该固体被溶于沸腾的异丙醚(2升)、热过滤并且沸腾浓缩至1.4升体积。通过过滤冷却的混合物来收集因冷却形成的固体。用冷异丙醚洗涤并干燥(107克)。由母液得到第二次收获(12.2克)。通过在2-丙醇/CH2Cl2比值为1～4％的硅胶上色谱提纯浓母液以及使提纯产物自异丙醚中重结晶得到第三次收获(4.4克，总产率123.6克，57％)：

                                          mp 106-109℃；1H NMR(CDCl3)d 7.35-7.2(m，5H)，5.11(septet，1H，J＝6.2Hz)，4.01(d，1H，J＝2.2Hz)，3.30(ddd，1H)，2.91(A of AB，1H，J＝6.3，13.3Hz)，2.71(B of AB，1H，J＝8.5，13.3Hz)，1.8(br，2-3H)，1.25(d，6H，J＝6.2Hz)；TSP-MS238(MH+).

    实施例2  5-氯-1H-吲哚-2-羧酸〔(1S)-苄基-(2R)-羟基-3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-3-氧代丙基〕酰胺盐酸盐。

    按照步骤A偶联(3S)-氨基-(2R)-羟基-1-(4-甲基哌嗪-1-基)-4-苯基丁-1-酮二盐酸盐(0.25毫摩尔)与5-氯-1H-吲哚-2-羧酸(0.30毫摩尔)。在硅胶上通过色谱提纯的产物用0.5～8％乙醇/CH2Cl2洗脱后得到产率为42％的标题化合物，同时得到13％极性较弱的物质，经1HNMR表征为相应的N，O-双(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)衍生物。将极性较强的目的产物(48毫克)溶于甲醇与0.25毫升1NHCl的混合物中，浓缩所得到的溶液，用乙醚研磨所得到的固体，得到标题物质(42毫克)：HPLC(70/30)80％，2.53分钟与13％，4.04分钟，后者在停留时间上对应于上面分离得到的N，O-双邻-酰化衍生物

     1H NMR(D2O)δ7.70(s，1H)，7.5-7.2(m，7H)，7.05(s，1H)，4.57(m，1H)，4.47(m，1H)，4.04(m，1H)，3.58(m 4H)，3.34(m，4-5H)，2.97(s，1.5H)，2.91(s，1.5H).PBMS 455/457(MH+，100％)

    实施例2A  (3S)-氨基-(2R)-羟基-1-(4-甲基哌嗪-1-基)-4-苯基丁-1-酮二盐酸化物

    在25℃将〔(1S)-苄基-(2R)-羟基-3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-3-氧代丙基〕氨基甲酸叔丁酯(0.190克，0.5毫摩尔)溶于4M HCl-二恶烷，历时0.5小时。浓缩该混合物并且用乙醚研磨残余物，干燥，得到212毫克，HPLC(15/85)2.85分钟；PBMS278(MH+，100％)。

    实施例2B  〔(1S)-苄基-(2R)-羟基-3-(4-甲基哌嗪-1-基)-3-氧代-丙基〕氨基甲酸叔丁酯

    按照步骤A偶联N-甲基哌嗪(75毫克，0.75毫摩尔)和(2R，3S)-3-叔丁氧羰基胺基-2-羟基-4-苯基丁酸(0.200克，0.68毫摩尔)，得到无须提纯便可以使用的无色泡沫，产率225毫克，88％；PBMS378(MH+，100％)。

    实施例3  5-氯-1H-吲哚-2-羧酸〔(1S)-((R)-羟基甲胺基甲酰基甲基)-2-苯基乙基〕酰胺

    按照步骤A偶联甲胺盐酸盐(0.38毫摩尔)与(3S)-〔(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-(2R)-羟基-4-苯基丁酸(0.35毫摩尔)，不同的是在DMF中于0～25℃下进行。粗产物在硅胶上于1～8％乙醇中，于含0.5％NH4OH的CH2Cl2中进行色谱提纯，得到标题物质：产率82％；

         HPLC(70/30)98％ 3.09min；PBMS 386/388(MH+，100％)；分析计算C20H20ClN3O3+0.25H2O：C，61.54；H，5.29；N，10.76.实测值：C，61.17；H，5.63；N，10.83.

    实施例4  (3S)-〔(5-氟-1H-吲哚-2-羰基)氨基〕-(2R)-羟基-4-苯基丁酸甲酯

    按照步骤A偶联(3S)-氨基-(2R)-羟基-4-苯基丁酸甲酯(0.8毫摩尔，WO 9325574实施例1A)与5-氟-1H-吲哚-2-羧酸(0.8毫摩尔)，不同的是在0～25℃进行并且用酸随后用碱萃取，通过用乙醚研磨提纯粗产物：产率71％；

    HPLC(60/40)4.51min(98％)；mp219.5-210℃；PBMS 371(MH+，100％)；分析计算C20H19FN2O4+0.25H2O：C，64.08；H，5.27；N，7.44.实测值：C，64.14；H，5.30；N，7.48.

    实施例5  (3S)-〔(5-溴-1H-吲哚-2-羰基)氨基〕-(2R)-羟基-4-苯基丁酸甲酯

    按照步骤A偶联(3S)-氨基-(2R)-羟基-4-苯基丁酸甲酯(WO 93/25574，实施例1A)(0.7毫摩尔)和5-溴-1H-吲哚-2-羧酸(0.7毫摩尔)，不同的是在0～25℃下进行。粗产物含25％N，O-双-酰化材料(HPLC)并且无须进一步提纯被用于后续转化：产率97％，HPLC(70/30)4.03分钟(73％)，11.8分钟(25％)。为了表述特征与生物试验用乙醚-己烷研磨样品：HPLC(70/30)4.03分钟(94％)11.7分钟(4％)。

    FABMS 431/433(MH+，35％)，307(100％)；1H NMR(CDCl3)δ9.31(br，1H)，7.75(d，1H，J＝ca.2Hz)，7.35-7.20(m，7H)，6.73(d，1H，J＝1.6Hz)，6.47(d，1H，J＝9.6Hz)，4.80(m，1H)，4.21(dd，1H，J＝2，5Hz)，3.72(s，3H)，3.33(d，1H，J＝4Hz)，3.06(m，2H).分析计算C20H19BrN2O4：C，55.70；H，4.44；N，6.50.实测值：C，56.12；H，4.62；N，6.16.

    实施例6  5-氟-1H-吲哚-2-羧酸〔(1S)-((R)-二甲胺基甲酰基羟基甲基)-2-苯乙基〕酰胺二甲胺盐酸盐(0.52毫摩尔)与(3R)-〔(5-氟-1H-吲哚-2-羰基)氨基〕-(2S)-羟基-4-苯基丁酸(0.43毫摩尔)按照步骤A被偶联，不同的是在25℃下进行。粗产物被溶于CH2Cl2，得到的溶液与约200毫克二甲胺基吡啶-聚苯乙烯树脂(Aldrich化学公司，Milwaukee，Wl)一起被搅拌1小时，过滤、浓缩，得到无色固体产物：产率62％，HPLC(60/40)4.15分钟(97％)；

                          mp 213-214℃；TSPMS 384(MH+，100％)；分析计算C21H22FN3O3：C，65.78；H，5.78；N，10.96.实测值：C，65.89；H，6.16；N，11.00.

    实施例7  5-溴-1H-吲哚-2-羧酸{(1S)-〔(R)-羟基-(甲氧甲胺基甲酰基)甲基〕-2-苯乙基}酰胺

    (3S)-氨基-(2R)-羟基-N-甲氧基-N-甲基-4-苯基丁酰胺盐酸盐(0.36毫摩尔)与3-〔(5-溴-1H-吲哚-2-羰基)氨基〕-2-羟基-4-苯基丁酸(0.36毫摩尔)按照步骤A偶联，在硅胶上通过色谱提纯粗产物(用30％与40％乙酸乙酯/己烷洗脱)，随后用1∶1乙醚/己烷研磨：产率65％；

     HPLC(60/40)5.77 minutes(100％)；PBMS4 60/462(MH+，90％)；分析计算C21H22BrN3O4：C，54.79；H，4.82；N，9.13.实测值：C，54.88；H，5.22；N，8.83.

    实施例8  5-氯-3-甲基-1H-吲哚-2-羧酸{(1S)-〔(R)-羟基-(甲氧甲胺基甲酰)甲基〕-2-苯乙基}酰胺(3S)-氨基-(2R)-羟基-N-甲氧基-N-甲基-4-苯基丁酰胺盐酸盐(0.3毫摩尔)与5-氯-3-甲基-1H-吲哚-2-羧酸(0.3毫摩尔)按照步骤A偶联，通过用乙醚研磨提纯粗产物：产率59％，HPLC(60/40)7.45分钟(100％)，PBMS430/432(MH+，100/40％)；1H NMR(CDCl3)δ8.98(br，1H)，7.56(d，1H，J＝2Hz)，7.4-7.15(m，7H)，6.35(d，1H，J＝9Hz)，4.95(m，1H)，4.32(d，1H，J＝5.1Hz)，3.81(d，1H，J＝5Hz)，3.36(s，3H)，3.15(s，3H)，3.15(dd，1H)，3.03(dd，1H，J＝13，16Hz)，2.51(s，3H).分析计算C22H24ClN3O4：C，61.46；H，5.63；N，9.77.实测值：C，61.13；H，5.53；N，9.74.

    实施例8A  5-氯-3-甲基-1H-吲哚-2-羧酸

    将2N NaOH(20毫升)加入5-氯-3-甲基-1H-吲哚-2-甲酸乙酯(7.0克，29.4毫摩尔)于甲醇(50毫升)中的悬浮液并且在25℃搅拌18小时。加入四氢呋喃(100毫升)，回流加热30分钟并且浓缩。将残余物溶于水并且用乙酸乙酯萃取2次。酸化水层并且过滤收集沉淀，用水(5.24克)洗涤。

    实施例8B  5-氯-3-甲基-1H-吲哚-2-甲酸乙酯

    如Lions与Hughes(J.Prot.Roy.Soc.N.S.Wales 1939，71：445)所述通过对氯苯胺与2-乙基乙酰乙酸乙酯进行Japp-Klinglmann反应制备2-氧代丁酸乙酯的对氯苯腙。按照应用于相应的溴苯腙的Lions-hughes方法用HCl-乙醇处理苯腙。将浓缩残余物悬浮于水后，过滤收集橙色固状标题化合物。

    实施例8C  (3S)-氨基-(2R)-羟基-N-甲氧基-N-甲基-4-苯基丁酰胺盐酸盐31055-274-231055-85-1

    于25℃将{(1S)-〔(R)-羟基-(甲氧基-甲基氨基甲酰基)甲基〕-2-苯乙基}-胺基甲酸叔丁酯(791毫克，2.3毫摩尔)溶于4M HCl-二恶烷，历时45分钟，浓缩，残余物与乙醚共蒸发，被悬浮于乙醚，经过滤得到583毫克(91％)标题化合物。

    实施例8D  {(1S)-〔(R)-羟基-(甲氧基甲胺基甲酰基)甲基〕-2-苯基乙基}胺基甲酸叔丁酯

    (3S)-叔丁氧羰基胺基-(2R)-羟基-4-苯基丁酸(10.06克，34.1毫摩尔，Schweizerhall公司；S.Plainfield.NJ)与N，O-二甲基羟基胺盐酸盐(3.49克，35.7毫摩尔)按照步骤A被偶联，硅胶色谱提纯粗产物(10.7克)，洗脱剂：25～50％乙酸乙酯/己烷，得到泡沫状标题化合物(9.5克，83％)：MS339(MH+，100％)。

    实施例9  (3S)-〔(5，6-二氯-1H-吲哚-2-羰基)氨基〕-(2R)-羟基-4-苯基丁酸甲酯

    (3S)-氨基-(2R)-羟基-4-苯基丁酸甲酯(1.2毫摩尔)与5，6-二氯-1H-吲哚-2-羧酸(1.2毫摩尔)按照步骤A被偶联，反应时间为72小时，采用20-40％乙酸乙酯-己烷在硅胶上进行色谱提纯；产率52％；198～202℃；TSPMS 421/423(MH+，100％)；分析计算C20H18Cl2N2O4+0.25H2O：C，56.42；H，4.38；N，6.58.实测值：C，56.25；H，4.17；N，6.58.

    实施例9A  5，6-二氯-1H-吲哚-2-羧酸

    将锌粉(3.52克，54毫摩尔)缓慢地加入3，4-二氯-5-硝基苯丙酮酸(1.5克，5.4毫摩尔)于乙酸(15毫升)中的温热溶液中。剧烈反应(放热)数分钟后，被加热至80℃，反应完全(TLC)。过滤，用乙酸洗涤过滤的固体并且浓缩滤液。将残余物溶于2N NaOH，用乙醚(3X)、CH2Cl2(2X)洗涤，用6NHCl酸化至pH＝1，用乙酸乙酯萃取。干燥萃取液，浓缩后得到浅棕色固体(458毫克，34％)：HPLC(60/40)5.31(93％)。

    实施例9B  3，4-二氯-5-硝基苯基丙酮酸钾盐

    将无水乙醇(25毫升)在3～15％加入钾金属(2.67克，68毫摩尔)于乙醚(100毫升)中的被搅拌的混合物中。在3℃用草酸二乙酯(10.0克，62毫摩尔)与2-甲基-3，4-二氯-1-硝基苯(10.0克，62毫摩尔)的溶液处理上述溶液5-10分钟，在3℃搅拌30分钟，在25℃搅拌18小时。过滤并用乙醚洗涤生成的固体，干燥(13.7克)。将该材料(12.7克)溶于400毫升热水，冷却该溶液并且用乙醚萃取。将水层用浓HCl酸化至pH＝2，醚层经分离、干燥与浓缩后，得到7.5克固体，用己烷研磨得到黄色固体状标题物质(7.01克，41％)。

    实施例10  5-氰基-1H-吲哚-2-甲酸{(1S)-〔(R)-羟基-(甲氧甲胺基甲酰)甲基〕-2-苯乙基}酰胺

    (3S)-氨基-(2R)-羟基-N-甲氧基-N-甲基-4-苯基丁酰胺盐酸盐(0.3毫摩尔)与5-氰基-1H-吲哚-2-甲酸(0.3毫摩尔)按照步骤A被偶联，反应历时5天。在25℃将粗产物溶于含1.0当量1N NaOH的甲醇，历时45分钟。浓缩后将残余物溶于乙酸乙酯，用2×2NHCl、2×2N NaOH洗涤，干燥，浓缩，在硅胶上(洗脱剂：20～50％乙酸乙酯/己烷)色谱提残余物。用1∶1乙醚-己烷研磨纯化产物，得到标题物质：产率为66％；

              HPLC(60/40)3.9 minutes(100％)；210-211℃；PBMS 407(MH+，100％)；1H NMR(CDCl3)δ9.83(br，1H)，7.97(s，1H)，7.46(m，2H)，7.36(m，4H)，6.88(d，1H，J＝2Hz)，6.56(d，1H，J＝10Hz)，4.95(m，1H)，4.32(d，1H，J＝5.5Hz)，3.83(d，1H，J＝5.4Hz)，3.36(s，3H)，3.13(s，3H)，3.10(m，2H).分析计算C22H22N4O4：C，65.01；H，5.46；N，13.78.实测值：C，64.92；H，5.60；N，13.78.

    实施例10A  5-氰基-1H-吲哚-2-羧酸

    将5-氰基-1H-吲哚-2-甲酸乙醇(1.71克，8.0毫摩尔)加至乙醇(10毫升)与KOH(2克)的溶液中并且回流加热1小时。加水以便溶解沉淀。加入6N HCl，使pH＝1。形成沉淀，在冰浴中冷却混合物。过滤，用冷水洗涤所形成的无色固体并且干燥(1.51克)。将一部分(1.4克)悬浮于热乙酸(40毫升)中，冷却后得到的固体经过滤、用冷乙酸乙酯洗涤与干燥，得到980毫克，产率70％；HPLC(60/40)3.09分钟(97％)。

    实施例10B  5-氰基-1H-吲哚-2-羧酸乙酯

    将锌粉(57.8克，887毫摩尔)以保持回流的速度加至3-氰基-5-硝基苯丙酮酸乙酯(23.2克，88毫摩尔)于乙酸(225毫升)中的热悬浮液和水(225毫升)中(注意，开始时剧烈放热)，反应保持回流0.5小时。过滤混合物，用热乙酸(150毫升)洗涤被滤出的盐，冷却滤液过夜，过滤晶体，用冷1∶1乙酸/水和水洗涤，干燥(10.11克，53％)。浓缩滤液，将残余物溶于乙酸乙酯，用饱和NaHCO3水溶液、盐水洗涤，干燥与浓缩，得到第二批产物(5.05克)。

    主要部分被用于后续转化。

    实施例10C  3-氰基-5-硝基苯丙酮酸乙酯

    于0℃将乙醇钠的乙醇溶液(来自2.2克、400毫摩尔钠金属，于400毫升乙醇中)加至被蒸馏的草酸二乙酯(120克，821毫摩尔)与3-甲基-4-硝基苄腈(32克，197毫摩尔)的混合物中。所得到的红色溶液在40℃被加热18小时。用水(600毫升)稀释该被冷却的混合物并且用浓HCl酸化至pH＝2.1。过滤13℃混合物，收集所形成的沉淀，干燥，硅胶(洗脱剂：15、30与50％丙酮/己烷)色谱提纯，得到无须提纯便可以使用的橙色固体(23.6克，31％)。

    实施例11  5-甲基-1H-吲哚-2-羧酸{(1S)-〔(R)-羟基-(甲氧甲胺基甲酰)甲基〕-2-苯乙基}酰胺

    (3S)-氨基-(2R)-羟基-N-甲氧基-N-甲基-4-苯基丁酰胺盐酸盐(0.5毫摩尔)与5-甲基-1H-吲哚-2-甲酸(0.5毫摩尔)按照步骤A被偶联，反应温度为0～25℃，首先用酸、随后用碱萃取，在硅胶上用色谱(20～50％乙酸乙酯/己烷)提纯：产率75％；HPLC(60/40)5.06分钟(99％)；PBMS396(MH+，100％)；1H NMR(CDCl3)δ9.14(br，1H)，7.4-7.2(m，6H)，7.07(dd，1H，J＝2，ca.8Hz)，6.76(d，1H，J＝2Hz)，6.45(d，1H，J＝9.7Hz)，4.90(m，1H)，4.29(d，1H，J＝5.5Hz)，3.83(d，1H，J＝5.5Hz)，3.35(s，3H)，3.13(s，3H)，3.09(dd，1H，J＝6，13Hz)，3.00(dd，1H，J＝9，13Hz)，2.42(s，3H).分析计算C22H25N3O4：C，66.82；H，6.37；N，10.18.实测值：C，66.97；H，6.48；N，10.33.

    实施例12  5-氟-1H-吲哚-2-羧酸{(1S)-〔(R)-羟基(甲氧甲基胺基甲酰基)甲基〕-2-苯乙基}酰胺

    (3S)-氨基-(2R)-羟基-N-甲氧基-N-甲基-4-苯基丁酰胺盐酸盐(0.5毫摩尔)与5-氟-1H-吲哚-2-甲酸(0.5毫摩尔)按照步骤A偶联，首先用酸随后用碱洗涤，在硅胶上进行色谱提纯(洗脱剂：20～50％乙酸乙酯/己烷)：产率，69％

                           HPLC(60/40)4.55 minutes(95％)；PBMS 400(MH+，100％)；1H NMR(CDCl3)δ9.34(br，1H)，7.4-7 2(m，7H)，7.00(dt，1H，J＝2.5，9.1Hz)，6.80(d，1H，J＝1.6Hz)，6.48(d，1H，J＝9.5Hz)，4.93(m，1H)，4.30(d，1H，J＝5.3Hz)，3.83(d，1H，J＝5.3Hz)，3.35(s，3H)，3.14(s，3H)，3.08(dd，1H，A，AB)，3.02(dd，1H，J＝5，11Hz，B，AB).分析计算C21H22FN3O4：C，63.15；H，5.55；N，10.52实测值：C，64.19；H，6.07；N，10.91.

    实施例13  1H-吲哚-2-甲酸{(1S)-〔(R)-羟基-(甲氧基甲基胺基甲酰基)甲基〕-2-苯乙基}酰胺

    (3S)-氨基-(2R)-羟基-N-甲氧基-N-甲基-4-苯基丁酰胺盐酸盐(0.26毫摩尔)与1H-吲哚-2-羧酸(0.28毫摩尔)按照步骤A偶联，反应温度为0～25℃，在硅胶上色谱提纯(洗脱剂：20～50％乙酸乙酯/乙烷)：产率，87％；HPLC(60/40)4.26分钟(96％)；PBMS382(MH+，100％)；1H NMR(CDCl3)δ9.24(br，1H)，7.63(d，1H，J＝8.0Hz)，7.4-7.15(m，8H)，7.11(dt，1H，J＝8.0，1.5Hz)，6.85(d，1H，J＝1.5Hz)，6.48(d，1H，J＝9.8Hz)，4.94(m，1H)，4.30(d，1H，J＝5.5Hz)，3.84(d，1H，J＝5.4Hz)，3.36(s，3H)，3.14(s，3H)，3.09(dd，1H，J＝6，13Hz，A，AB)，3.03(dd，1H，J＝10，13Hz，B，AB).分析计算C21H23N3O4；C，66.13；H6.08；N，11.02实测值：C，66.19；H，6.08；N，11.02。

    实施例14  5-氯-1H-吲哚-2-甲酸{(1S)-〔(甲氧甲胺基甲酰基)甲基〕-2-苯乙基}酰胺

    (3S)-〔(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)氨基〕-4-苯基丁酸(357毫克，1.0毫摩尔)与N，O-二甲羟基胺盐酸盐，98％(98毫克，1.0毫摩尔)按照步骤A偶联，以二甲基甲酰胺为溶剂。用乙醚研磨所形成的泡沫，将粘稠固体溶于CH2Cl2，浓缩并用己烷研磨；产率215毫克，54％；HPLC(60/40)6.38分钟(98％)；PBMS400/402(MH+，100％)；分析计算C21H22ClN3O3：C.63.08；H，5.55；N，10.51。实测值：C，62.91；H，5.79；N，10.21。

    实施例14A  (3S)-〔(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-4-苯基丁酸

    将2N NaOH(3.0毫升)于25℃加至(3S)-〔(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-4-苯基丁酸甲酸(1.28克，3.45毫摩尔)于甲醇(10毫升)中的悬浮液中。18小时后，用四氢呋喃(10毫升)稀释，回流加热10分钟，浓缩。所形成的固体与6NHCl在一起被搅拌15分钟。过滤悬浮液，用2NHCl洗涤所产生的固体，干燥；产率1.15克，93％；HPLC(60/40)5，18分钟(100％)。

    实施例15  (3S)-〔(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-(2R)-羟基-4-苯基丁酸甲酯

    将1-(3-二甲胺基丙基)-3-乙基碳化二亚胺盐酸盐(DEC，71克，370毫摩尔)于25℃加至由(3S)-氨基-(2R)-羟基-4-苯基丁酸甲酯(WO93/25574，实施例1A，77.5克，370毫摩尔)、5-氯-1H-吲哚-2-甲酸(72.45克，370毫摩尔)与1-羟基苯并三唑水合物于CH2Cl2(640毫升)中组成的混合物中。搅拌18小时后，浓缩、残余物被溶于乙酸乙酯，用2N NaOH洗涤2次，用1NHCl洗涤2次，用盐水洗涤，干燥，浓缩，得到无须提纯便可用于后续水解过程的黄色泡沫状标题物质(140.7克，98％)(HPLC(70/30)3.61分钟(82％)，9.57分钟(13％))。在硅胶上(乙酸乙酯/己烷)色谱提纯得到纯样品，mp180～183℃。1H NMR(CDCl3)δ9.52(br，1H)，7.55(d，1H，J＝2Hz)，7.35-7.15(m，7H)，6.70(d，1H，J＝2Hz)，6.50(d，1H，J＝10Hz)，4.82(m，1H)，4.22(s，1H)，3.72(s，3H)，3.4(br，1H)，3.05(m，2H).13CNMR(CDCl3，75.5mHz)δ174.2，164.4，137.1，135.0，131.1，129.8，128.8，128.3，127.0，126.2，125.0，121.0，113.2，102.3，70.4，43.3，43.1，38.1.TSPMS 387/389(MH+，100/30％)分析计算C20H19ClN2O4+0.5H2O：C，60.69；H，5.09；N，7.08.实测值：C，60.38；H，4.98；N，6.86.

    实施例6  3-〔(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕(2RS)-羟基丙酸

    (RS)-3-氨基-2-羟基丙酸甲酯盐酸盐(6.6毫摩尔)与5-氯-1H-吲哚-2-甲酸(6.6毫摩尔)按照步骤A被偶联。不同的是先用酸、后用碱萃取，在第一次用酸洗涤过程中出现沉淀，所以按照步骤A的通常方式过滤混合物。将粗产物920毫克溶于甲醇并且于25℃用1N NaOH(6.6毫升)处理2小时，加入1N NaOH(6.6毫升)，浓缩混合物，将残余物溶于乙酸乙酯，用2NHCl、盐水洗涤，干燥，浓缩。在氯仿中搅拌所产生的无色固体，过滤得到标题化合物：产率763毫克，40％；HPLC(60/40)2.86分钟(89％)；mp214-215℃；PBMS 283/285(MH+，100％)；1H NMR(DMSO-d6)δ11.78(s，1H)，8.62(t，1H)，7.70(d，1H，J＝2Hz)，7.42(d，1H，J＝8.7Hz)，7.17(dd，1H，J＝2，8.7Hz)，7.14(d，1H，J＝2Hz)，4.18(dd，1H，J＝5.8Hz)，3.58(m，2H).分析计算C12H11ClN2O4+0.1H2O；C，50.66；H，3.97；N，9.85.实测值：C，50.80；H，4.06；N，9.48.

    实施例16A  (RS)-3-氨基-2-羟基丙酸甲酯盐酸盐

    将D，L-异丝氨酸(2.06克，19.6毫摩尔)、甲醇(20毫升)与氯三甲基硅烷(9.5克，88毫摩尔)的混合物回流加热5小时，冷却、浓缩得到标题化合物(3.20克)。

    实施例17  5-氯-1H-吲哚-2-羧酸〔(1S)-((R)-甲氧甲胺基甲酰基甲基)-2-苯乙基〕酰胺

    (3S)-氨基-(2R)-甲氧基-N，N-二甲基-4-苯基丁酰胺盐酸盐(0.84毫摩尔)与5-氯-1H-吲哚-2-甲酸(0.80毫摩尔)按照步骤A被偶联，反应温度为0～25℃，溶剂为2∶1 CH2Cl2二甲基甲酰胺，在硅胶上(1∶1乙酸乙酯/己烷)进行色谱提纯：产率，81％；HPLC(60/40)5.44分钟(100％)；TSPMS 414/416(MH+，100/30％)；1H NMR(CDCl3)δ9.38(br，1H)，7.60(d，1H，J＝2Hz)，7.4-7.2(m，6H)，7.20(dd，1H，J＝2，9Hz)，7.03(d，1H，J＝8Hz)，6.92(d，1H，J＝2Hz)，4.50(m，1H)，4.00(d，1H，J＝2Hz)，3.40(s，3H)，3.22(dd，A of AB，1H，J＝5，13Hz)，3.00(dd，B ofAB，1H，J＝10，13Hz)，2.86(s，3H)，2.65(s，3H).分析计算C22H24ClN3O3：C，63.48；H，5.84；N，10.15.实测值：C，63.48；H，5.97；N，9.97

    实施例17A  (3S)-氨基-(2R)-甲氧基-N，N-二甲基-4-苯基丁酰胺盐酸盐

    (1S，2R)-(1-苄基-2-二甲基胺基甲酰基-2-甲氧乙基)胺基甲酸叔丁酯(283毫克，0.84毫摩尔)在25℃被溶于4N HCl-二恶烷(1毫升)，历时1.5小时，浓缩，残余物与乙醚共蒸发，干燥。

    实施例17B  (1S，2R)-(1-苄基-2-二甲胺基甲酰-2-甲氧乙基)胺基甲酸叔丁酯

    氢化钠/油分散液(53毫克，50％)于0℃被加入由(1S，2R)-(1-苄基-2-二甲胺基甲酰-2-羟乙基)胺基甲酸叔丁酯(322毫克，1.0毫摩尔)与四氢呋喃(4毫升)组成的溶液。待泡腾(数分钟)停止后，加入甲基碘(155毫克)，15分钟后，另外加入NaH分散液11毫克和23毫克甲基碘。又过了15分钟，加入NH4Cl水溶液和乙酸乙酯，分离有机相，用水、2NNaOH洗涤，干燥与浓缩，得到无须进一步提纯就可以使用的粘油状物：产率283毫克，84％。

    实施例17C  (1S，2R)-(1-苄基-2-二甲胺基甲酰-2-羟乙基)胺基甲酸叔丁酯

    (3S)-叔丁氧羰基胺基-(2R)-羟基-4-苯基丁酸(Schueizerhall公司，S.Plainfield，NJ.1.02克，3.4毫摩尔)与二甲胺盐酸盐(338毫克，4.1毫摩尔)按照步骤A被偶联(0～25℃，溶剂：二甲基甲酰胺/CH2Cl2。先用酸、后用碱萃取)，得到的粗产物在硅胶上(1～8％乙醇/CH2Cl2洗脱剂)进行色谱提纯：泡沫，产率995毫克，91％。

    实施例18  5-氯-1H-吲哚-2-甲酸(3-氮杂环丁烷-1-基-(1S)-苄基-(2R)-羟基-3-氧代丙基)酰胺

    氮杂环丁烷(0.44毫摩尔)与(3S)-〔(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-(2R)-羟基-4-苯基丁酸(0.4毫摩尔)按照步骤A被偶联，溶剂为1∶1二甲基甲酰胺-CH2Cl2，得到标题物质，产率94％；HPLC(60/40)4.55分钟(＞98％)；PBMS 412/414(MH+，100％)；分析计算C22H22ClN3O3+0.25H2O；C，63.46；H，5.45；N，10.09。

    实测值：C，63.61；H，5.66；N，10.27。

    实施例19  5-氯-1H-吲哚-2-羧酸〔(1S)-苄基-(2R)-甲氧基-2-(甲氧甲胺基甲酰)乙基〕酰胺

    (3S，2R)-3-氨基-(2R)-N-二甲氧基-N-甲基-4-苯基丁酰胺(0.31毫摩尔)与5-氯-1H-吲哚-2-甲酸(0.31毫摩尔)按照步骤A被偶联，在硅胶上(20～40％乙酸乙酯/己烷)进行色谱提纯，产率81％，HPLC、(60/40)7.39分钟(98％)；PBMS 430/432(MH+，100％)；1H NMR(CDCl3)δ9.44(s，1H)，7.58(d，1H，J＝ca.2Hz)，7.4-7.22(m，6H)，7.19(dd，1H，J＝2.0，8.8Hz)，6.89(d，1H，J＝ca.2Hz)，6.80(d，1H，J＝8Hz)，4.72(m，1H)，3.93(s，1H)，3.39(s，3H)，3.24(s，3H)，3.19(dd，1H，J＝5.1，13Hz，A ofAB)，3.06(s，3H)，2.95(dd，1H，J＝10.9，13Hz，B of AB).分析计算C22H24ClN3O4+0.33C6H14：C，62.85；H.6.30；N，9.16.实测值C，62.91；H，6.29；N，8.95.

    实施例19A  (3S，2R)-3-氨基-2R，N-二甲氧基-N-甲基-4-苯基丁酰胺

    (1S，2R)-(1-苄基-2-甲氧甲胺基甲酰-2-甲氧乙基)胺基甲酸叔丁酯(113毫克，0.32毫摩尔)于25℃被溶于4N HCl-二恶烷(4毫升)，历时1小时。浓缩，用乙醚研磨残余物，得到标题化合物(93毫克，100％)。

    实施例19B  (1S，2R)-(1-苄基-2-甲氧甲胺基甲酰基-2-甲氧乙基)胺基甲酸叔丁酯

    NaH分散液(30毫克，50％，于油中)被加至(1S，2R)-(1-苄基-2-甲氧基甲胺基甲酰基-2-羟乙基)胺基甲酸叔丁酯于四氢呋喃(2毫升)的0℃溶液中。5分钟后，加入甲基碘(175毫克)，在250℃静置18小时。加入乙酸乙酯与饱和NH4Cl水溶液，分离有机层，水洗，干燥，浓缩，用硅胶进行色谱提纯，用10～20％乙酸乙酯/己烷洗脱：产率113毫克，52％；HPLC(60/40)6.45分钟(＞96％)。

    实施例20  〔(2S)-〔(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-(1R)-(甲氧甲胺基甲酰)-3-苯丙氧基〕乙酸苄酯

    (1R，2S)-〔2-氨基-1-(甲氧甲基胺基甲酰)-3-苯丙氧基〕乙酸苄酯盐酸盐(162毫克，0.38毫摩尔)与5-氯-1H-吲哚-2-羧酸(71毫克，0.36毫摩尔)按照步骤A偶联，反应温度为0～25℃，在硅胶上进行色谱提纯，用20～75％乙酸乙酯/己烷洗脱，得到玻璃状固体标题物质：产率61％；TSPMS 564/566(MH+，90/60％)，581/583(MH+NH3，100/50％)。

    实施例20A  (1R，2S)-〔2-氨基-1-(甲氧甲基胺基甲酰)-3-苯丙氧基〕乙酸苄酯盐酸盐

    于25℃在1.5小时内将(1R，2S)-〔2-叔丁氧羰基胺基-1-(甲氧甲基胺基甲酰)-3-苯丙氧基乙酸苄酯(170毫克，0.35毫摩尔)溶于4N HCl-二恶烷，浓缩，残余物与乙醚共蒸发，干燥后得到油(163毫克)。MS387(MH+，100％)。

    实施例20B  (1R，2S)-〔2-叔丁氧羰基胺基-1-(甲氧甲基胺基甲酰)-3-苯丙氧基乙酸苄酯

    NaH分散液(120毫克，50％于油中，2.8毫摩尔)被加入(1S，2R)-(1-苄基-2-甲氧甲胺基甲酰-2-羟乙基)-胺基甲酸叔丁酯(858毫克，2.5毫摩尔)于四氢呋喃(8毫升)中的0℃溶液。待泡腾现象停止后，加入溴乙酸苄酯(0.56克，2.5毫摩尔)，使其温度达25℃。2小时后，加入更多的NaH分散体(12毫克)，搅拌1小时，用乙酸乙酯和饱和NH4Cl稀释，分离有机层，水洗，干燥与浓缩，得到的油状物在硅胶上进行色谱提纯，用20～75％乙酸乙酯/己烷洗脱，合并最纯的馏分，得到油状物(175毫克，15％)；MS 487(MH+)，387(100％)。

    实施例21  〔(2S)-〔(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-(1R)-(甲氧甲胺基甲酰)-3-苯丙氧基〕-乙酸

    在40psi氢气压力和25℃下，将〔(2S)-〔(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-(1R)-(甲氧甲基胺基甲酰)-3-苯丙氧基〕乙酸苄酯(120毫克，0.2毫摩尔)与湿含量为50％的Pd(OH)2/碳催化剂于甲醇(50毫升)中的混合物摇动1小时。静置30分钟，通过助滤剂过滤，浓缩滤液，得到121毫克固体，于硅胶上进行色谱提纯，用25～100％乙酸乙酯/己烷洗脱，得到84毫克固体，HPLC(60/40)4.81分钟(37％)与6.24分钟(63％)。1HNMR与MS分析表明这些分别为5-des-Cl和标题产物的甲酯。这些固体被溶于THF并且在25℃用1NNaOH(170微升)处理30分钟，浓缩溶液，将残余物分配在乙酸乙酯与1N HCl之间。分离有机层，水洗、干燥，浓缩得到标题化合物与des-5-Cl类似物的混合物：产率85毫克，71％；HPLC(60/40)3.49分钟(37％)，4.23分钟(61％)；MS338(MH+，100％)；TSPMS 474/476(MH+，对于标题物质而言，40％)，440(MH+，对于des-Cl类似物而言，95％)。

    实施例22  (3S)-〔(1H-吲哚-2-羰基)氨基〕-(2R)-羟基-4-苯基丁酰胺

    (2R，3S)-3-氨基-2-羟基-4-苯基丁酰胺(0.59毫摩尔，US 4599198，实施例1D)与吲哚-2-甲酸(0.71毫摩尔)按照步骤A被偶联，先用酸、随后用碱洗涤)，得到的产物在硅胶上进行色谱提纯，用66～100％乙酸乙酯/己烷洗脱，产率89％；HPLC(60/40，Dupont zorbax C-8柱)99％；MS338(MH+，100％)。1H 1HNMR(DMSO-d6)δ11.53(s，1H)，7.95(d，1H，J＝9Hz)，7.63(d，1H，J＝8Hz)，7.5-7.15(m，7-8Hz)，7.12(d，1H，J＝ca.7Hz)，7.09(d，1H，J＝ca.8Hz)，5.95(d，1H，J＝6Hz)，4.55(m，1H)，3.93(m，1H)，2.98(dd，1H，A of AB，J＝6，13Hz)，2.88(dd，1H，B of AB，J＝8，13Hz).

    实施例23  (3S-〔(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-(2S)-羟基-4-苯基丁酰胺

    将5-氯-1H-吲哚-2-碳酰氟(0.30克，1.29毫摩尔)加入(2S，3S)-3-氨基-2-羟基-4-苯基丁酰胺盐酸盐(0.319克，1.61毫摩尔)与三乙胺(145毫克，1.42毫摩尔)于CH2Cl2(2毫升)中的25℃溶液中。18小时后，用乙酸乙酯稀释，用1NHCl两次、饱和NaHCO3水溶液2次、盐水1次洗涤，干燥与浓缩，在硅胶上色谱提纯残余物，用50～100％乙酸乙酯-己烷洗脱，得到的固体(0.31克)自异丙醇中重结晶：得到0.020克；FABMS 372/374(MH+，21％)，217(100％)。1HNMR(DMSO-d6.部分)δ8.5(d，1H，J＝9Hz)，7.48(d，1H，J＝2Hz)，7.4-7.1(m，9H)，5.95(d，1H，J＝7Hz)，4.56(m，1H)，4.08(m，1H)，2.92(dd，1H，J＝11，13Hz)，2.68(dd，J＝3，13Hz).

    实施例23A  5-氯-1H-吲哚-2-碳酰氟

    将5-氯-1H-吲哚-2-甲酸(10.0克，51.1毫摩尔)与吡啶(33.1毫摩尔)于乙腈中的溶液加至氰尿酰氟(2.76克，20.4毫摩尔)于乙腈(共计340毫升)中的25℃溶液中。反应完成后在被丁胺急冷的等分试样上进行TLC，1小时后反应看似完全。将混合物倾入冰中，用乙醚萃取，干燥(Na2SO4)浓缩得到固体无须提纯便可使用(10.0克，99％)。急冷的丁胺等分试样的TLC表明存在某些5-氯吲哚-2-甲酸与极性较弱的N-丁胺。在硅胶上进行色谱提纯，用乙酸乙酯/己烷(50～100％)洗脱，以便表述其特征(163 68-130-1)。

    实施例23B  (2S，3S)-3-氨基-2-羟基-4-苯基丁酰胺盐酸盐

    〔(1S)-((S)-氨基甲酰羟甲基)-2-苯乙基〕胺基甲酸叔丁酯(0.50克，1.7毫摩尔)在25℃被溶于4M HCl-二恶烷，历时1小时。该混合物被浓缩后，用乙醚研磨残余物，干燥得到无色固体(430毫克)∶HPLC(60/40)2.68分钟，100％。

    实施例23C  〔(1S)-((S)-氨基甲酰羟甲基)-2-苯乙基〕胺基甲酸叔丁酯

    将氟化叔丁铵(23毫升，1M于四氢呋喃中)加入{(1S)-〔(1S)-(叔丁基二甲基硅烷氧)胺基甲酰甲基〕-2-苯乙基}胺基甲酸叔丁酯于四氢呋喃(6毫升)中的0℃溶液中。30分钟后，用乙酸乙酯和水稀释，分离有机相，用水、2X 1 NHCl、2X 1N NaHCO3、和盐水洗涤。通过助滤剂过滤所形成的乳液，干燥滤液，浓缩，得到无色固体(0.5克，20％)。一部分过滤的固体(3.3克)自热乙酸乙酯中重结晶，热滤后得到无色固体(1.33克)。

    实施例23D  {(1S)-〔(S)-(叔丁基二甲硅烷氧)胺基甲酰甲基〕-2-苯乙基}胺基甲酸叔丁酯

    在15分钟内将30％过氢化氢(7.2毫升，64毫摩尔)加入〔(1S)-苄基-(2S)-(叔丁基二甲硅烷氧)-2-氰基乙基〕胺基甲酸叔丁酯(实施例24D，5.0克，12.8毫摩尔)与1NNaOH(22毫升)于乙醇(110毫升)的0℃溶液中。搅拌1.5小时，用10％硫代硫酸钠水溶液(175毫升)处理后，浓缩，用乙酸乙酯萃取。用Na2SO4干燥萃取液并且浓缩。在硅胶上进行色谱提纯，用20～30％乙酸乙酯/己烷洗脱，得到无色固态标题化合物(3.17克，61％)。

    实施例24  5-氯-1H-吲哚-2-甲酸{(1S)-〔(S)-羟基-(甲氧甲基胺基甲酰)甲基〕-2-苯乙基}酰胺

    N，O-二甲基羟基胺盐酸盐(0.4毫摩尔)与(3S)-〔(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-(2S)-羟基-4-苯基丁酸(0.38毫摩尔)按照步骤A被偶联并且在硅胶上进行色谱提纯，用20～50％乙酸乙酯/己烷洗脱：产率72％；HPLC(60/40)5.05分钟；98％；PBMS 416/418(MH+，100％)；1H NMR(CDCl3)δ9.30(br，1H)，7.60(d，1H，J＝2Hz)，7.33(d，1H，J＝8Hz)，7.3-7.15(m，6-7H)，6.75(m，2H)，5.00(m，1H)，4.65(d，1H，J＝4Hz)，3.71(s，3H)，3.06(s，3H)，2.87(m，2H)，1.6(br).分析计算C21H22ClN3O4+0.35H2O：C，59.74；H，5.42；N，9.95.实测值：C，60.14；H，5.65；N，9.55.

    实施例24A  (3S)-〔(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)氨基〕-(2S)-羟基-4-苯基丁酸

    将1N NaOH(2.6毫升)水溶液加至(3S)-〔(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-(2S)-羟基-4-苯基丁酸甲酯(500毫克，1.29毫摩尔)于甲醇中的25℃溶液中。18小时后，浓缩，将残余物溶于乙酸乙酯与水，将其用6NHCl酸化至pH＝1。分离水层，用乙酸乙酯萃取3次，合并有机层，干燥与浓缩，得到固体417毫克(87％)：HPLC(60/40)4.23(＞98％)。

    实施例24B  ((3S)-〔(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-(2S)-羟基-4-苯基丁酸甲酯

    (3S)-胺基-(2S)-羟基-4-苯基丁酸甲酯(1.4毫摩尔)和5-氯-1H-吲哚-2-羧酸(1.37毫摩尔)按照步骤A被偶联，反应温度为0～25℃，反应时间为40小时，溶剂为1∶1 CH2Cl2/二甲基甲酰胺，标题产物产率为94％；HPLC(60/40)5.38分钟(97％)；mp214～221℃；PBMS 387/389(MH+，100％)；分析计算C20H19ClN2O4：C，62.10；H，4.95；N，7.24。实测值：C，62.16；H，5.07；N，7.11。

    实施例24C  (3S)-氨基-(2S)-羟基-4-苯基丁酸甲酯

    将〔(1S)-苄基-(2S)-(叔丁基二甲基硅烷氧)-2-氰基乙基〕胺基甲酸叔丁酯(417毫克)加至无水HCl(3.2克)于甲醇(20毫升)中的溶液中，将该溶液封闭，在25℃保持5天。浓缩后得到308毫克无色固体通过1HNMR(D2O)表明呈均相。将其与采用同样方式由400毫克同种前体制得的光谱等同物料合并，将其溶于NaHCO3饱和水溶液，用氯仿萃取10次，合并萃取液，干燥与浓缩，得到标题物质(328毫克，25％)。

    实施例24D  〔(1S)-苄基-(2S)-(叔丁基二甲基硅烷氧)-2-氰基乙基〕胺基甲酸叔丁酯

    借助US 4599198实施例1B所述步骤将N-叔丁氧羰基-(3S)-氨基-(2RS)羟基-4-苯基丁腈转化为相应的O-叔丁基二甲基甲硅烷基醚。借助硅胶色谱分离异构体(7～8％乙醚/己烷)。这样便将标题物质与其极性略弱的2R异构件(US4599198实施例1B)相分离。

    实施例24E  N-叔丁氧羰基-(3S)-胺基-(2RS)-羟基-4-苯基丁腈

    将亚硫酸氢钠(4.38克)于水(100毫升)中的5℃溶液加入N-叔丁氧羰基-L-苯基丙氨酸醛(J.Med.Chem 1985，卷28，1779-1790，10.0克，40.1毫摩尔)于二甲氧乙烷(100毫升)中的0～5℃溶液。混合物在0℃被搅拌2小时，随后在25℃搅拌过夜。浓缩至80毫升，用乙酸乙酯(250毫升)稀释，用氰化钾(2.61克，40.1毫摩尔)处理。在25℃下经过4小时后，分离有机层，水洗2次，用盐水洗涤1次。干燥与浓缩后，所形成的油自乙醚/己烷中结晶，形成无色固体(3.53克)：mp95～98℃。通过母液(5.0克)自乙醚/己烷中重结晶(无色固体，2.44克)得到第二批产物：mp88～92℃。该低熔点物料被用于后续甲硅烷基化转化过程。

    实施例25  (3S)-〔(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-(2R)-羟基-4-苯基丁酸

    2N NaOH(375毫升)水溶液于10～22℃被加至粗(3S)-〔(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)-胺基〕-(2R)-羟基-4-苯基丁酸甲酯(含13％N，O-双-5-氯-1H-吲哚-2-羰基杂质，140.7克，363毫摩尔)于甲醇(1900毫升)中的溶液，在25℃被搅拌。2小时后，浓缩并将残余物溶于乙酸乙酯(2升)与2NHCl(500毫升)。分离水相，用2NHCl洗涤2次，合并有机相，用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩。残余物(137.6克)在100毫升热乙酸乙酯(悬浮液)中固结，加入氯仿(1300毫升)，回流加热形成的悬浮液，同时机械搅拌5分钟，热滤，用接近沸腾的氯仿-乙酸乙酯(3∶1，400毫升)洗涤过滤的固体。所形成的固体被真空干燥至恒定重量(101克，75％)。浓缩滤液并且通过在热四氢呋喃(70毫升)中溶解被重结晶，加入热己烷(200毫升)，冷却过夜，过滤，用THF-己烷(1∶5)洗涤形成的固体，得到7.03克(5％)。后一操作的母液被浓缩，按照相同步骤重结晶，得到11.07克(8％)。所有这三份的HPLC(60/40)均表明4.2分钟(＞98％)。借助HPLC(C8 Zorbax 15厘米柱，600∶400∶2∶1水-乙腈-三乙胺-乙酸)对5-氯-1H-吲哚-2-甲酸含量进行分析表明在这三份中分别为0.4％、0.7％、和21％。主要份额mp209～212℃；TSPMS 373/375(MH+100％)；1H NMR(DMSO-d6)δ12.6(br，1H)，11.7(s，1H)，8.17(d，1H，J＝9.1Hz)，7.71(d，1H，J＝2Hz)，7.39(d，1H，J＝8.7Hz)，7.28(m，4H)，7.17(m，3H)，5.55(br，1H)，4.57(m，1H)，4.05(d，1H，J＝3.6Hz)，2.97(dd，1H，A of AB，J＝6.5，13.5Hz)，2.87(dd，1H，B of AB，J＝8.5，13.5Hz).分析计算C19H17ClN2O4：C，61.21；H，4.60；N，7.51.实测值：C，61.09；H，4.63；N，7.59.

    实施例26(3R)-〔(5-氟-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-(2R)-羟基-4-苯基丁酸

    在25℃将(3S)-〔(5-氟-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-(2R)-羟基-4-苯基丁酸甲酯(190毫克，0.5毫摩尔)、1N NaOH(1毫升)与甲醇(5毫升)搅拌18小时。用1NHCl将pH值调至1～2，浓缩，在25℃水中研磨固体并过滤。用乙醚洗涤所形成的固体并且干燥，得到无色玻璃；(160mg，87％)：HPLC(60/40)3.49 minutes(99％)；1H NMR(partial，DMSO-d6)δ8.15(d，1H，J＝8Hz)，7.42(m，2H)，7.3(m，4H)，7.15(m，2H)，7.03(dt，1H)，4.60(m，1H)，4.03(d，1H)，3.00(dd，1H，J＝8，13Hz)，2.90(dd，1H，J＝8，13Hz.

    实施例27  (3S)-〔(5-溴-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-(2R)-羟基-4-苯基丁酸

    将1N NaOH(60毫升)水溶液加入(3S)-〔(5-溴-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-(2R)-羟基-4-苯基丁酸甲酯(2.45克，5.7毫摩尔)于甲醇(60毫升)中的25℃溶液中。2小时后，浓缩并且将其分配在乙酸乙酯与2NHCl之间。分离水层，用乙酸乙酯萃取，用1NHCl、盐水洗涤合并的有机层。干燥与浓缩后，在25℃用氯仿研磨所形成的固体：产率85％，

    HPLC(60/40)4.24 minutes(100％)；mp213-216℃；TSPMS417/419(MH+，98％)；1H NMR(部分，DMSO-d6)δ11.72(br，1H)，8.20(d，1H，J＝10Hz)，7.86(d，1H，J＝2Hz)，7.4-7.1(m，8H)，4.60(m，1H)，4.04(d，1H，J＝3.5Hz)，3.00(dd，1H，A ofAB，J＝7，13Hz)，2.88(dd，1H，B of AB，J＝8.5，13Hz).分析计算C19H17BrN2O4+0.25H2O：C，54.11；H，4.18；N，6.64.实测值：C，54.15；H，4.15；N，6.64.

    实施例28  (3S)-〔(5，6-二氯-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-(2R)-羟基-4-苯基丁酸将含水1N NaOH(1.18毫升)加至(3S)-〔(5，6-二氯-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-(2R)-羟基-4-苯基丁酸甲酯(249毫克，0.6毫摩尔)于甲醇(5毫升)中的25℃悬浮液中。18小时后，浓缩，将残余物分配于过量2NHCl与乙酸乙酯之间，分离水层并用乙酸乙酯洗涤，用盐水洗涤合并的有机层，干燥浓缩后得到黄色固体，产率259毫克，

    HPLC(60/40)4.96 minutes(100％)；TSPMS 407/409(MH+，100/40％)；1H NMR(partial，DMSO-d6)δ11.8(br，1H)，8.28(d，1H，J＝9Hz)，7.98(s，1H)，7.58(s，1H)，7.3-7.15(m，6H)，4.60(m，1H)，4.07(d，1H，J＝3-4Hz)，2.98(dd，1H，A of AB，J＝6，13Hz)，2.88(dd，1H，J＝9，13Hz).分析计算C19H16Cl2N2O4+0.5H2O：C，54.82；H，4.12；N，6.73.实测值：C，54.86；H，4.08；N，6.76.

    实施例29  (3R)-〔(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-(2R)-羟基-4-苯基丁酸

    将1N NaOH(1.69毫升)水溶液加至(3R)-〔(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-(2R)-羟基-4-苯基丁酸甲酯(326毫克，0.8克摩尔)于甲醇中的25℃悬浮液中。2.5小时后，浓缩(发现原料)并且重新将其溶解于甲醇与含水1NNaOH(0.5毫升)。1小时后，浓缩，并且将其分配于过量2N HCl与乙酸乙酯之间，分离有机层，干燥与浓缩：产率288毫克，92％；HPLC(60/40)3.89分钟(93％)；mp215～223℃；TSPMS 373/375(MH+，100％)；1H NMR(DMSO-d6)δ12.7(br，1H)，11.65(s，1H)，8.50(d，1H，J＝8.8Hz)，7.70(d，1H，J＝2Hz)，7.37(d，1H，J＝8.7Hz)，7.4-7.1(m，7H)，5.7(br，1H)，4.50(m，1H)，4.17(d，1H，J＝4.8Hz)，2.94(dd，1H，A of AB，J＝10，14Hz)，2.78(dd，1H，B ofAB，J＝3，14Hz).分析计算C19H17ClN2O4+0.1H2O：C，60.92；H，4.63；N，7.48.实测值：C，60.72；H，4.78；N，7.53.

    实施例29A  (3R)-〔(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-(2R)-羟基-4-苯基丁酸甲酯

    (2R，3R)-3-氨基-2-羟基-4-苯基丁酸甲酯盐酸盐(239毫克，1.0毫摩尔)与5-氯-1H-吲哚-2-甲酸(200毫克，1.05毫摩尔)按照步骤A被偶联，反应温度为0～25℃，先用酸后用碱洗涤，得到的粗产物无须提纯便可使用：产率328毫克，87％。

    实施例29B  (2R，3R)-3-氨基-2-羟基-4-苯基丁酸甲酯盐酸盐

    (2R，3R)-3-氨基-2-羟基-4-苯基丁酸(200毫克，1.0毫摩尔，Sigma化学公司，St.Louis，MO)、氯三甲基硅烷(500毫克，4.6毫摩尔)与甲醇(2毫升)被回流加热5.5小时，浓缩成泡沫体：产率244毫克，100％。

    实施例30  5-氯-1H-吲哚-2-甲酸〔(2RS)-羟基-2-(甲氧甲基胺基甲酰)乙基〕酰胺

    N，O-二甲羟基胺盐酸盐(1.0毫摩尔)与3-〔(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-(2RS)-羟基丙酸(0.95毫摩尔)按照步骤A被偶联，反应温度0～25℃，用酸再用碱洗涤，用乙醚研磨粗产物，得到无色固体，产率69％，HPLC(60/40)3.18分钟。

    (96％)；mp192-192.5℃；FBMS 326/328(MH+，100％)；1H NMR(DMSO-d6)δ11.80(s，1H)，8.62(t，1H)，7.70(d，1H，J＝2Hz)，7.41(d，1H，J＝8.8Hz)，7.17(dd，1H，J＝2，8.7Hz)，7.13(s，1H)，5.35(m，1H)，4.65(m，1H)，3.69(s，3H)，3.47(m，2H)，3.34(s，3H).分析计算C14H16ClN3O4：C，51.62；H，4.95；N，12.90.实测值：C，51.78；H，5.07；N，12.75.

    实施例31  (3S)-〔(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-(2R)-羟基-4-苯基丁酰胺将明显过量无水氨导入(3S)-〔(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-(2R)-羟基-4-苯基丁酸甲酯(100毫克，0.27毫摩尔)于甲醇(10毫升)中的溶液并且在不锈钢Parr反应器(＜50psi)中在70℃加热48小时。冷却浓缩，用乙醚研磨形成的固体：产率约60％；HPLC 3.52 minutes(95％)；PBMS 372/374(MH+，100％)；；1H NMR(partial，DMSO-d6)δ11.75(s，1H)，8.04(d，1H)，7.70(d，1H，J＝2Hz)，7.5-7.1(m，9H)，5.90(br，1H)，4.52(br，1H)，3.93(br，1H)，2.95(dd，1H)，2.88(dd，1H).分析计算C19H18ClN3O3+0.5H2O：C，59.92；H，5.03；N，11.03.实测值：C，59.66；H，5.10；N，11.40.

    实施例32  5，6-二氯-1H-吲哚-2-甲酸{(1S)-〔(R)-羟基-(甲氧甲胺基甲酰)甲基〕-2-苯乙基}酰胺

    N，O-二甲羟基胺盐酸盐(0.24毫摩尔)与(3S)-〔(5，6-二氯-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-(2R)-羟基-4-苯基丁酸(0.22毫摩尔)按照步骤A被偶联(反应时间96小时，用酸、随后用碱洗涤)，在硅胶上(洗脱剂：20～40％乙酸乙酯/己烷)色谱提纯：产率72％；HPLC(60/40)7.2分钟(99％)；mp 210-211.5℃；PBMS 450/452(MH+，100％)；1H NMR(CDCl3)δ10.41(br，1H)，7.73(s，1H)，7.68(s，1H)，7.4-7.2(m，6H)，6.78(d，1H，J＝ca.1Hz)，6.58(d，1H，J＝10Hz)，5.03(m，1H)，4.34(d，1H，J＝5Hz)，3.85(d，1H，J＝5Hz)，3.37(s，3H)，3.2-3.0(m，2H)，3.10(s，3H).分析计算C21H21Cl2N3O4：C，56.01；H，4.70；N，9.33.实测值：C，55.61；H，4.68；N，9.22.

    实施例33  5-氯-1H-吲哚-2-甲酸〔(1S)-((R)-羟基-二甲胺基甲酰甲基)-2-苯乙基〕酰胺

    二甲胺盐酸盐(262毫克，3.22毫摩尔)与(3S)-〔(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-(2R)-羟基-4-苯基丁酸(1.0克，2.68毫摩尔)在25℃于DMF(4毫升)中通过采用三乙胺(530毫克，3.22毫摩尔)、1-羟基苯并三唑水合物(612毫克，4毫摩尔)和1-(3-二甲胺基丙基)-3-乙基碳化二亚胺盐酸盐而被偶联18小时。用氯仿(80毫升)和乙酸乙酯(10毫升)稀释该混合物并且用2NNaOH、2N HCl洗涤，干燥浓缩得到1.2克无色泡沫。将其溶于乙酸乙酯并且用2N NaOH洗涤2次，干燥与浓缩后得到1.02克无色固体。在10毫升冷乙醚中被研磨与过滤，用5毫升冷乙醚洗涤，干燥后得到无色固体：产率715毫克，67％；mp190～192℃；HPLC(60/40)4.53分钟(100％)；FABMS 400/402(MH+，80％)，178(100％)；1H NMR(CDCl3)δ9.40(s，1H)，7.55(s，1H)，7.4-7.1(m，7H)，6.86(d，1H，J＝2Hz)，6.62(d，1H，J＝9.6Hz)，4.65(m，1H)，4.40(m，2H)，3.10(m，2H)，2.88(s，3H)，2.72(s，3H).分析计算C21H22ClN3O3：C，63.08；H，5.55；N，10.51.实测值：C，63.03；H，5.68；N，10.25.

    实施例34  5-氯-1H-吲哚-2-甲酸{(1S)-〔(R)-羟基-(羟甲基胺基甲酰)甲基〕-2-苯乙基}酰胺

    N-甲羟基胺盐酸化物(167毫克，2.0毫摩尔)与(3S)-〔(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-(2R)-羟基-4-苯基丁酸(373毫克，1.0毫摩尔)按照步骤A被偶联，溶剂为DMF，省略碱洗步骤。在硅胶上进行色谱提纯(洗脱剂：0.5～4％乙醇/CH2Cl2，含0.5％乙酸)，用乙醚/己烷研磨纯化产物：产率13％，HPLC(60/40)4.26分钟(97％)；mp182～184.5℃；TSPMS 402/404(MH+，100％)；1H NMR(DMSO-d6，partial)δ11.67(br，1H)，9.89(br，1H)，8.08(d，1H，J＝10Hz)，7.71(d，1H，J＝1.9Hz)，7.39(d，1H，J＝8.8Hz)，7.35-7.1(m，7H)，4.73(m，2H)，4.51(m，1H)，3.05(s，3H)，2.93(m，2H).

    实施例35  5-氯-1H-吲哚-2-甲酸〔(1S)-((R)-羟基甲氧胺基甲酰甲基)-2-苯乙基〕酰胺

    N-甲氧基胺盐酸盐(0.77毫摩尔)与(3S)-〔(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-(2R)-羟基-4-苯基丁酸(0.70毫摩尔)按照步骤A被偶联，溶剂为DMF，在硅胶上进行色谱提纯(洗脱剂：1～10％乙醇/CH2Cl2)，随后用乙醚/己烷研制；产率72％；HPLC(60/40)。3.35分钟(＞99％)；mp215～216.5℃(分解)；FABMS 402/404(MH+，100％)；分析计算C20H20ClN3O4+0.7H2O：C，57.96；H，5.20；N，10.14.实测值：C，57.90；H，5.15；N，10.10.

    实施例36  5-氯-1H-吲哚-2-甲酸{(1S)-〔(R)-羟基(甲氧甲基胺基甲酰)甲基〕-2-苯乙基}酰胺

    N，O-二甲基羟基胺盐酸盐(7.4毫摩尔)与(3S)-〔(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-(2R)-羟基-4-苯基丁酸(6.7毫摩尔)按照步骤A被偶联，溶剂为二甲基甲酰胺，在硅胶上进行色谱提纯，洗脱剂先用40％、后用50％乙酸乙酯/己烷，用1∶1乙醚/己烷搅拌过夜，过滤收集固体并且干燥：产70％；HPLC(60/40)5.36分钟

            (99％)；mp 189-190℃；1H NMR：(CDCl3)δ9.52(br，1H)，7.56(d，1H，J＝2.0Hz)，7.4-7.3(m，5H)，7.38(m，1H)，7.18(dd，1H，J＝2.0，8.8Hz)，6.76(d，1H，J＝1.4Hz)，6.53(d，1H，J＝9Hz)，4.94(m，1H)，4.31(d，1H，J＝5.2Hz，collapses to s with D2O)，3.86(d，1H，J＝5.6Hz，与D2O交换)，3.35(s，3H)，3.13(s，3H)，3.13-2.98(m，2H).PBMS593/595(MH+，65％)，200(100％).

    自1；3乙酸乙酯/己烷中重结晶后(于150℃收缩，mp189～190℃)，分析：C21H22ClN3O4计算值：C，60.65；H，5.33；N，10.10。实测值：C，60.52；H，5.34；N，10.32。

    实施例37  5-氯-1H-吲哚-2-羧酸(2S)-〔(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-(1R)-(甲氧甲胺基甲酰基)-3-苯基丙酯

    (3S)-氨基-(2R)-羟基-N-甲氧基-N-甲基-4-苯基丁酰胺盐酸盐(4.2毫摩尔)与5-氯-1H-吲哚-2-羧酸(4.2毫摩尔)按照步骤A被偶联。在硅胶上进行色谱提纯，用33～50％乙酸乙酯/己烷洗脱，得到标题物质(100毫克)与极性更强的主要物质5-氯-1H-吲哚-2-羧酸{(1S)-〔(R)-羟基-(甲氧甲基胺基甲酰)甲基〕-2-苯乙基}酰胺(970毫克)以及这两种物质的混合物(159毫克，绝大部分为极性较强的物质)。对于标题物质而言：PBMS593/595(MH+，60％)，400(100％)；1H NMR(CDCl3)δ9.62(br，2H)，7.69(d，1H，J＝2Hz)，7.56(d，1H，J＝2Hz)，7.4-7.2(m，10H)，7.04(d，1H，J＝8.8Hz)，6.91(d，1H，J＝1.2Hz)，5.50(d，1H，J＝2Hz)，5.09(m，1H)，3.47(s，3H)，3.26(dd，1H，J＝6，13Hz)，3.14(s，3H)，2.99(dd，1H，J＝10，13Hz).

    实施例38  5-氯-1H-吲哚-2-甲酸((1S)-苄基-(2R)-羟基-3-氧代-3-吡咯烷-1-基丙基)酰胺

    吡咯烷(0.5毫摩尔)与(3S)-〔(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-(2R)-羟基-4-苯基丁酸(0.5毫摩尔)按照步骤A被偶联，溶剂为二甲基甲酰胺，用乙醚研制粗产物：产率65％；

       HPLC(60/40)6.3 minutes(98％)；PBMS 426/428(MH+，100％)；；分析计算C23H24ClN3O3+0.25H2O：C，64.18；H，5.74；N，9.76.实测值：C，64.02；H，5.71；N，9.61.

    实施例39  5-氯-1H-吲哚-2-甲酸〔(1S)-苄基-(2R)-羟基-3-(3-羟基-氮杂环丁烷-1-基)-3-氧代丙基〕酰胺

    3-羟基氮杂环丁烷盐酸盐(0.56毫摩尔)与(3S)-〔(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)氨基〕-(2R)-羟基-4-苯基丁酸(0.5毫摩尔)按照步骤A被偶联，反应温度为0～25℃，溶剂为1∶1二甲基甲酰胺/CH2Cl2。使用2～10％乙醇/CH2Cl2进行硅胶色谱提纯，产率69％；HPLC(60/40)3.38分钟(96％)；PBMS 428/430(MH+，100％)；分析计算C22H22ClN3O4+0.125H2O：C，61.43；H，5.21；N，9.77.实测值：C，61.09；H，5.57；N，9.68.

    实施例40  5-氯-1H-吲哚-2-甲酸((1S)-苄基-(2R)-羟基-3-异恶唑烷-2-基-3-氧代丙基)酰胺

    异恶唑烷盐酸盐(Cupps，T.L.等人，J，Org，Chem 1985，50，3972～3979，0.83毫摩尔)与(3S)-〔(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-(2R)-羟基-4-苯基丁酸(0.79毫摩尔)按照步骤A被偶联，利用硅胶色谱提纯，用50％与75％乙酸乙酯/己烷洗脱：产率75％，HPLC(60/40)4.94分钟(95％)；TSPMS 428/430(MH+，100％)。1H NMR(DMSO-d6)δ11.70(s，1H)，8.17(d，1H，J＝9.3Hz)，7.71(s，1H，J＝2Hz)，7.38(d，1H，J＝8.7Hz)，7.27(m，4H)，7.15(m，3H)，5.02(d，1H)，4.61(m，1H)，4.42(dd，1H)，4.10(m，1H)，3.93(m，1H)，3.55(m，1H)，2.95(m，2H)，2.26(m，2H).分析计算C22H22ClN3O4：C，61.75；H，5.18；N，9.82.实测值：C，61.59；H，5.35；N，9.44.

    实施例41  5-氯-1H-吲哚-2-甲酸〔(1S)-((R)-二乙胺基甲酰基羟基甲基)-2-苯乙基〕酰胺

    二乙胺(0.45毫摩尔)与(3S)-〔(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-(2R)-羟基-4-苯基丁酸(0.4毫摩尔)按照步骤A被偶联，硅胶色谱提纯，用10～25％乙酸乙酯/己烷洗脱：产率35％HPLC(60/40)7.06分钟(96％)；mp218～222℃；PBMS 428/430(MH+，100％)；1H NMR(CDCl3)δ9.14(s，1H)，7.61(s，1H)，7.4-7.15(m，7H)，6.81(d，1.3H)，6.55(d，1H，J＝10Hz)，4.55(m，1H)，4.37(d，1H，J＝5.2Hz)，4.29(d，1H，J＝5.3Hz)，3.43(m，1H)，3.2-3.0(m，3H)，2.88(q，2H，J＝7Hz)，1.05(t，3H，J＝7.1Hz)，0.98(t，3H，J＝7.1Hz).

    实施例42  5-氯-1H-吲哚-2-甲酸((1S)-{(R)-羟基-〔(2-羟乙基)甲胺基甲酰〕甲基}-2-苯乙基)酰胺

    N-(2-羟乙基)甲胺盐酸盐(0.77毫摩尔)与(3S)-〔(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-(2R)-羟基-4-苯基丁酸(0.70毫摩尔)按照步骤A被偶联(溶剂：二甲基甲酰胺，先用酸后用碱萃取)硅胶色谱提纯，用0.5～8％乙醇/CH2Cl2洗脱，用乙醚/己烷研制：产率65％；HPLC(60/40)3.67 minutes(93％)；mp192.5-195℃；TSPMS 430/432(MH+100％)；1H NMR(CDCl3)δ9.18(br，1H)，7.60(d，1H，J＝2Hz)，7.4-7.25(m，6H)，7.24(dd，1H，J＝2，9Hz)，6.85(d，1H，J＝2Hz)，6.63(d，1H，J＝9Hz)，4.85(m，1H)，4.47(m，1H)，4.06(m，1H)，3.63(m，2H)，3.12(m，2H)，2.95(s，3H)，2.85(m，1H)，2.5(br，_2H).分析计算C22H24ClN3O4：C，61.46；H，5.63，N，9.77.实测值：C，61.45；H，5.95；N，9.85.

    实施例43  5-氯-1H-吲哚-2-甲酸〔(1S)-苄基-(2R)-羟基-3-氧代-3-哌啶-1-基丙基〕酰胺

    哌啶盐酸盐(0.42毫摩尔)与(3S)-〔(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-(2R)-羟基-4-苯基丁酸(0.4毫摩尔)按照步骤A被偶联，溶剂为1∶1CH2Cl2/二甲基甲酰胺。硅胶色谱提纯，用20～25％乙酸乙酯/己烷洗脱，产率97％；HPLC(60/40)6.92分钟(100％)，PBMS 440/442(MH+，100％)；分析计算C24H26ClN3O3：C，65.52；H，5.96；N，9.55.实测值：C，65.27；H，6.12；N，9.29.

    实施例44  5-氯-1H-吲哚-2-甲酸((1S)-苄基-(2R)-羟基-3-吗啉-4-基-3-氧代丙基)酰胺吗啉(0.55毫摩尔)与(3S)-〔(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-(2R)-羟基-4-苯基丁酸(0.5毫摩尔)按照步骤A偶联(溶剂：二甲基甲酰胺)，用乙醚研制提纯：产率50％；

                HPLC(60/40)5.37 minutes(＞98％)；TSPMS 442/444(MH+，100％)；1H NMR(CDCl3)δ9.13(br，1H)，7.59(d，1H，J＝2Hz)，7.35-7.1(m，7H)，6.79(d，1H，J＝2Hz)，6.51(d，1H，J＝9Hz)，4.55(m，1H)，4.30(m，1H)，4.27(m，1H)，3.77(m，1H)，3.62(m，2H)，3.50(m，3H)，3.05(m.3H)，2.94(m，1H).分析计算C23H24ClN3O4：C，62.51；H，5.47；N，9.51.实测值：C，62.11；H，5.39；N，9.19.

    实施例45  5-氯-1H-吲哚-2-甲酸((1S)-苄基-(2R)-羟基-3-〔1，2〕恶嗪烷-2-基-3-氧代丙基)酰胺

    〔1，2〕恶嗪烷盐酸盐(0.42毫摩尔)与(3S)-〔(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-(2R)-羟基-4-苯基丁酸(0.4毫摩尔)按照步骤A被偶联(溶剂为1∶1CH2Cl2/二甲基甲酰胺)，硅胶色谱提纯，用25％乙酸乙酯/己烷洗脱；产率76％；HPLC(60/40)6.07分钟(99％)；PBMS 442/444(MH+，100％)；1H NMR(CDCl3)δ9.41(br，1H)，7.58(d，1H，J＝2Hz)，7.38-7.18(m，7H)，6.78(d，1H，J＝2Hz)，6.55(d，1H，J＝9Hz)，4.89(m，1H)，4.58(s，1H)，4.00(m，1H)，3.67(m，3H)，3.10(m，2H)，1.9(br)，1.7(m，4H).分析计算C23H24ClN3O4：C，62.51；H，5.47；N，9.51.实测值：C，62.18；H，5.59；N，9.29.

    实施例46  5-氯-1H-吲哚-2-甲酸〔(1S)-苄基-(2R)-羟基-3-((3S)-羟基-吡咯烷-1-基)-3-氧代丙基〕酰胺

    (R)-3-羟基-吡咯烷(0.58毫摩尔)与(3S)-〔(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-(2R)-羟基-4-苯基丁酸(0.56毫摩尔)按照步骤A偶联，硅胶色谱提纯2次，用25～100％乙酸乙酯/己烷洗脱：产率9％：HPLC(60/40)3.87分钟(96％)；PBMS 442/444(MH+，100％)。

    实施例47  5-氯-1H-吲哚-2-甲酸〔(1S)-((R)-叔丁氧胺基甲酰基羟甲基)-2-苯乙基〕酰胺

    邻叔丁基羟基胺盐酸盐(2.0毫摩尔)与(3S)-〔(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-(2R)-羟基-4-苯基丁酸(1.0毫摩尔)按照步骤A偶联(溶剂为二甲基甲酰胺，省略酸洗)，硅胶色谱提纯，用30～50％乙酸乙酯/己烷洗脱：产率77％，HPLC(60/40)4.96分钟(98％)；FABMS 444(MH+，90％)，511(100％)；1H NMR(CDCl3)δ9.38(br，1H)，9.18(br，1H)，7.85(br，1H)，7.53(s，1H)，7.3-7.0(m，7H)，6.87(s，1H)，4.40(d，1H，J＝4Hz)，4.30(m，1H)，3.20(m，2H)，1.12(s，9H).

    实施例48  5-氯-1H-吲哚-2-甲酸((1S)-苄基-(2R)-羟基-3-氧代-3-噻唑烷-3-基丙基)酰胺

    噻唑烷(0.70毫摩尔)与(3S)-〔(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-(2R)-羟基-4-苯基丁酸(0.67毫摩尔)按照步骤A偶联(溶剂为1∶1 CH2Cl2/二甲基甲酰胺)，无须提纯便可以使用所形成的产物：产率93％；HPLC(60/40)5.78分钟(96％)；PBMS 444/446(MH+，100％)；分析计算C22H22ClN3O3S：C，59.52；H，5.00；N，9.47.实测值：C，59.29；H，5.22；N，9.22.

    实施例49  5-溴-1H-吲哚-2-甲酸〔(1S)-((R)-二甲胺基甲酰基羟基甲基)-2-苯乙基〕酰胺

    二甲胺盐酸盐(0.39毫摩尔)与(3S)-〔(5-溴-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-(2R)-羟基-4-苯基丁酸(0.32毫摩尔)按照步骤A被偶联(0～25℃)，在25℃159毫克粗产物与处于CH2Cl2的200毫克聚苯乙烯-DMAP树脂(AldrichChemical Co.Milwaukee.Wl)一起被搅拌1小时。过滤并浓缩滤液：产率68％；HPLC(60/40)5.4分钟(＞98％)；mp171-176℃；TSPMS 444/446(MH+，85％)；分析计算C21H22N3O3Br：C，56.77；H，4.99；N，9.46.实测值：C，5642；H，5.33；N，9.08.

    实施例50  5-氯-1H-吲哚-2-甲酸{(1S)-〔(R)-羟基(吡啶-3-基胺基甲酰基)甲基〕-2-苯乙基}酰胺

    3-氨基吡啶(0.7毫摩尔)与(3S)-〔(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-(2R)-羟基-4-苯基丁酸(0.70毫摩尔)按照步骤A被偶联(溶剂为二甲基甲酰胺)，硅胶色谱提纯，用含有0.5％NH4OH的0.5％～8％乙醇/CH2Cl2洗提，随后用乙醚研制：产率45％，HPLC(60/40)3.08分钟(＞99％)；TSPMS 449/451(MH+，100％)；分析计算C24H23ClN4O3+0.3H2O：C，63.45；H，4.79；N，12.33.实测值：C，63.35；H，5.03；N，12.37.

    实施例51  5-氯-1H-吲哚-2-甲酸{(1S)-〔(1R)-羟基-(2，2，2-三氟乙胺基甲酰)甲基〕-2-苯乙基}-酰胺

    2，2，2-三氟乙胺(0.28毫摩尔)与(3S)-〔(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-(2R)-羟基-4-苯基丁酸(0.28毫摩尔)按照步骤A被偶联(溶剂为二甲基甲酰胺)，用乙醚研制经过提纯的产物：mp228～229.5℃；产率81％；PBMS 454/456(100％，MH+)；471/473(MH+NH3，80％)；分析计算C21H19ClF3N3O3：C，55.58；H，4.22；N，9.26.实测值：C，55.29；H，4.25；N，9.04.

    实施例52  (S)-5-氯-1H-吲哚-2-甲酸〔(1-(甲氧甲基胺基羰基)-2-苯乙基〕酰胺

    1-(3-二甲胺基丙基)-3-乙基碳化二亚胺盐酸盐(DEC，790毫克，4.12毫摩尔)、二氯乙酸(136毫克，1.06毫摩尔)与5-氯-1H-吲哚-2-甲酸{(1S)-〔(R)-羟基-(甲氧甲基胺基甲酰)甲基〕-2-苯乙基}酰胺(287毫克，0.69毫摩尔)依次被加入无水二甲基亚砜(4毫升)与无水甲苯(4毫升)的0℃溶液中。在25℃经过18小时后，用乙酸乙酯稀释反应混合物，用2NHCl和饱和NaHCO3水溶液洗涤。干燥、浓缩有机相，所形成的泡沫体自乙醚中重结晶。产率100毫克，35％；HPLC(60/40)10.72分钟(87％)，在该试验中在6.68分钟洗脱原料，其含量少于0.5％；PBMS 414/416(MH+，70％)，384/386(100％)；

    1H NMR(CDCl3 containing 10-20％DMSO-d6)δ9.90(br，1H)，7.54(d，1H，J＝1.7Hz)，7.3-7.1(m，ca.7H)，7.04(m，1H)，6.77(s，1H)，5.40(m，1H)，3.58(s，3H)，3.2(m，2H)，3.08(s，3H).

    实施例53  5-氯-1H-吲哚-2-甲酸〔(1S)-苄基-(2R)-羟基-3-(4-羟基-哌啶-1-基)-3-氧代-丙基〕酰胺

    4-羟基哌啶盐酸盐(0.51毫摩尔)与(3S)-〔(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-(2R)-羟基-4-苯基丁酸(0.48毫摩尔)按照步骤A(0～25℃)偶联，用乙醚研制经过提纯的产物，随后在沸腾的乙酸乙酯中进行研制，硅胶色谱提纯，用50～100％乙酸乙酯/己烷洗脱；产率57％，HPLC(60/40)3.92分钟(96％)；mp.230～232℃，TSPMS 456/458(MH+，100％)。1H NMR(DMSO.d6)δ11.65(br，0.5H)11.60(br，0.5H)，8.24(m，1H)，7.70(d，1H，J＝2Hz)，7.38(d，0.5H，J＝9Hz)，7.37(d，0.5H，J＝9Hz)，7.3-7.1(m，7H)，4.3-4.7(m，2H)，4.5(m，2H)，3.8-3.65(m，3H)，3.2(m，1H)，3.1(dd，1H)，3.0(dd，1H)，1.95(m，0.5H)，1.7-1.65(m，2H)，1.4-1.25(m，1.5H).

    实施例54  5-氯-1H-吲哚-2-甲酸〔(1S)-苄基-(2R)-羟基-3-((3R，S)-羟基-哌啶-1-基)-3-氧代丙基〕酰胺

    3-羟基哌啶(0.56毫摩尔)与(3S)-〔(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-(2R)-羟基-4-苯基丁酸(0.54毫摩尔)按照步骤A偶联，硅胶色谱提纯，用20～40％乙酸乙酯/己烷洗脱，用1∶1乙醚/己烷研制：产率47％；HPLC(60/40)4.44分钟(92％)；PBMS 456/458(MH+，100％)；分析计算C24H26ClN3O4：C，63.22；H，5.75；N，9.22.实测值：C，62.93；H，5.90；N，8.92.

    实施例55  5-氯-1H-吲哚-2-甲酸〔(1S)-苄基-(2R)-羟基-3-((2R)-羟甲基吡咯烷-1-基)-3-氧代丙基〕酰胺R-2-吡咯烷甲醇(1.1毫摩尔)与(3S)-〔(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-(2R)-羟基-4-苯基丁酸(1.1毫摩尔)按照步骤A被偶联，硅胶色谱提纯，用1～8％乙醇/CH2Cl2洗脱，随后用50％乙酸乙酯/己烷洗脱：产率9％；HPLC(60/40)5.17分钟(84％)；mp236～239℃；TSPMS456/458(MH+，100％)；分析计算C24H26ClN3O4：C，63.22；H，5.75；N，9.22.实测值：C，63.23；H，6.11；N，8.52.

    实施例56  5-氯-1H-吲哚-2-甲酸((1S)-{(R)-〔(2-二甲胺基乙基)甲胺基甲酰〕羟甲基}-2-苯乙基)酰胺N-(2-二甲胺乙基)甲胺(0.77毫摩尔)与(3S)-〔(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-(2R)-羟基-4-苯基丁酸(0.70毫摩尔)按照步骤A偶联(溶剂为二甲基甲酰胺)，硅胶色谱提纯，用含有0.5％NH4OH的1～8％乙醇/CH2Cl2洗脱，用乙醚/己烷研制：产率87％：HPLC(60/40)2.89分钟(96％)；TSPMS 457/459(MH+，100％)；分析计算C24H29ClN4O3+0.2H2O：C，62.59；H，6.43；N，12.16.实测值：C，62.85；H，6.82；N，12.06

    实施例57  5-氯-1H-吲哚-2-甲酸〔(1S)-苄基-3-((3R，4R)-二羟基吡咯烷-1-基)-2-羟基-3-氧代丙基〕酰胺

    (3R，4R)-3，4-二羟基吡咯烷(来自2S，3S-(-)-酒石酸(非天然异构体，通过US4634775所述步骤制备)(1.0毫摩尔)与(3S)-〔(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-(2R)-羟基-4-苯基丁酸(1.0毫摩尔)按照步骤A被偶联(溶剂为二甲基甲酰胺)，硅胶色谱提纯，用乙酸乙酯洗脱，用乙醚研制：产率72％；HPLC(60/40)3.21分钟(97％)；TSPMS 458/460(MH+，100％)；分析计算C23H24ClN3O5：C，60.33；H，5.28；N，9.18.实测值：C，60.09；H，5.21；N，9.08.

    实施例58  5-氯-1H-吲哚-2-甲酸〔(1S)-苄基-3-(3S，4S)-二羟基-吡咯烷-1-基)-2R-羟基3-氧代-丙基〕酰胺

    (3S，4S)-二羟基吡咯烷(来自2R，3R-(+)-酒石酸，US 4634775，1.0毫摩尔)与(3S)-〔(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-(2R)-羟基-4-苯基丁酸(1.0毫厚尔)按照步骤A被偶联(溶剂：二甲基甲酰胺)，硅胶色谱提纯，用乙酸乙酯洗脱，用乙醚研制：产率60％；HPLC(60/40)3.02分钟(98％)；TSPMS 458/460(MH+，100％)；1H NMR(DMSO-d6)δ11.7(br，1H)，8.18(d，1H，J＝9Hz)，7.70(d，1H，J＝2Hz)，7.38(d，1H，J＝8.6Hz)，7.26(m，4H)，7.15(m，3H)，5.18(d，1H，J＝4.0Hz，exchanges)，5.11(d，1H)，5.08(d，1H)，4.47(m，1H)，4.27(dd，1H，J＝5，9Hz，collapses to d in D2O，3.95(m，1H)，3.89(m，1H)，3.64(dd，1H，J＝4，9Hz)，3.34(m，3H)，2.92(m，2H).分析计算C23H24ClN3O5+0.5H2O：C，59.16；H，5.40；N，9.00.

         C，59.44；H，5.29；N，8.95.实测值：

    实施例59  5-氯-1H-吲哚-2-甲酸〔(1S)-苄基-3-((3R，4S)-二羟基吡咯烷-1-基)-(2R)-羟基-3-氧代-丙基〕酰胺(3R，4S)-二羟基吡咯烷盐酸盐(顺式或内消旋异构体，0.86毫摩尔)与(3S)-〔(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-(2R)-羟基-4-苯基丁酸(0.82毫摩尔)按照步骤A被偶联(溶剂为二甲基甲酰胺)，硅胶色谱提纯，用1～10％乙醇/CH2Cl2洗脱：产率39％；HPLC(60/40)2.92分钟(96％)；PBMS 458/460(MH+，100％)；分析计算C23H24ClN3O6+0.75H2O：C，58.60；H，5.45；N，8.91.实测值：C，59.22；H，5.52；N，8.59.

    实施例59A  顺式-3，4-二羟基吡咯烷盐酸盐(顺式或内消旋异构体)

    顺式-3，4-二羟基吡咯烷-2，5-二氢吡咯-1-甲酸叔丁酯(1.99克，9.8毫摩尔)于5℃被溶于4M HCl-二恶烷，于25℃将其搅拌1小时。浓缩后用乙醚研制残余物，得到浅紫色粉末(1.30克，95％)。

    实施例59B  顺式-3，4-二羟基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯

    依次用四氧化锇(2.5％，于叔丁醇中，6毫升)和N-甲基吗啉-N-氧化物在25℃处理2，5-二氢-吡咯-1-甲酸叔丁酯粗品溶液。48小时后，加入10％硫代硫酸钠水溶液，搅拌30分钟，部分浓缩以便脱除四氢呋喃，用乙醚萃取2次。用10％硫代硫酸钠、0.1M HCl洗涤乙醚萃取液，干燥浓缩后得到的深橙色油经过硅胶色谱提纯，用1％、2％、4％、8％和10％乙醇-CH2Cl2洗提，得到琥珀色浆(4.09克)。

    实施例59C  2，5-二氢-吡咯-1-甲酸叔丁酯

    将二叔丁基二碳酸酯(83克，380毫摩尔)加入3-吡咯啉(含35％吡咯啉，25克，362毫摩尔)于四氢呋喃(500毫升)中的0℃溶液中，在25℃搅拌1小时，浓缩得到76.2克无须提纯就可以使用的黄色油状物。

    实施例60  5-氯-1H-吲哚-2-甲酸((1S)-苄基-(2R)-羟基-3-氧代-3-硫代吗啉-4-基丙基)酰胺

    硫代吗啉(0.52毫摩尔)与(3S)-〔(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-(2R)-羟基-4-苯基丁酸(0.49毫摩尔)按照步骤A在0～25℃偶联，硅胶色谱提纯，用乙酸乙酯/己烷洗脱：产率75％，HPLC(60/40)7.12分钟(97％)；PBMS458/460(MH+，100％).1H NMR(CDCl3，partial)δ9.15(br，1H)，7.60(d，1H，J＝2Hz)，7.4-7.2(m，7H)，6.80(d，1H，J＝2Hz)，6.52(d，1H，J＝9Hz)，4.55(m，1H)，4.29(s，1H)，4.10(m，1H)，3.48(m，1H)，3.30(m，1H)，3.2-2.85(m，4H)，2.62(m，1H)，2.5(m，1H)，2.4(m，1H).

    实施例61  5-氯-1H-吲哚-2-甲酸{(1S)〔(R)-羟基-(甲基吡啶-2-基胺基甲酰)甲基〕-2-苯乙基}酰胺

    2-甲胺基吡啶(3.4毫摩尔)与(3S)-〔(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-(2R)-羟基-4-苯基丁酸(3.4毫摩尔)按照步骤A进行偶联，溶剂：二甲基甲酰胺，用1-羟基-7-氮杂苯并三唑代替1-羟基苯并三唑，反应时间为18小时，未经酸洗，硅胶色谱提纯，用0.5～4％乙醇/CH2Cl2洗脱，用乙醚研制4次，产率5％，HPLC(60/40)5.57分钟(95％)；TSPMS 463/465(MH+，100％)；1H NMR(DMSO-d6)δ11.73(br，1H)，8.24(m，1H)，8.18(d，1H，J＝9Hz)，7.78 (dt，1H，J＝2，9Hz)，7.72(d，1H，J＝2Hz)，7.43(s，1H)，7.41(s，1H)，7.28(m，1H)，7.25-7.1(m，5H)，7.02(m，2H)，5.05(d，1H，J＝9Hz)，4.60(m，1H)，4.35(m，1H)，3.22(s，3H)，2.70(m，2H).分析计算C25H23ClN4O3+1.3H2O：C，61.74；H，5.31；N，11.52.实测值：C，61.84；H，5.00；N，11.52.

    实施例62  5-氯-1H-吲哚-2-甲酸〔(1S)-苄基-3-(4-甲酰哌嗪-1-基)-(2R)-羟基-3-氧代丙基〕酰胺

    1-甲酰基哌嗪(0.77毫摩尔)与(3S)-〔(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-(2R)-羟基-4-苯基丁酸(0.70毫摩尔)按照步骤A被偶联，溶剂：二甲基甲酰胺，酸洗后碱洗。硅胶色谱提纯，用0.5～8％乙醇-CH2Cl2洗脱后，用乙醚/己烷研制：产率78％，HPLC(60/40)3.45分钟(96％)；PBMS469/471(MH+，100％)；分析计算C24H25ClN4O4+0.3H2O：C，60.77；H，5.44；N，11.81.实测值：C，60.65；H，5.70；N，11.85.

    实施例63  5-氯-1H-吲哚-2-甲酸〔(1S)-苄基-(2R)-羟基-3-(4-羟甲基哌啶-1-基)-3-氧代丙基〕酰胺

    4-(羟甲基)哌啶(1.5毫摩尔)(J.Med.Chem 1991，34，1073)与(3S)-〔(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-(2R)-羟基-4-苯基丁酸(1.4毫摩尔)按照步骤A被偶联，硅胶色谱提纯，用50～100％乙酸乙酯-己烷洗脱：产率76％；HPLC(60/40)4.09分钟(97％)；TSPMS 470/472(MH+，100％)；分析计算C25H28ClN3O4+0.25H2O：C，63.29；H，6.05；N，8.86.实测值：C，63.39；H，6.00；N，8.63.

    实施例64  5-氯-1H-吲哚-2-甲酸((1S)-{(R)-羟基-〔甲基-(2-吡啶-2-基乙基)胺基甲酰〕甲基}-2-苯乙基)酰胺

    甲基-(2-吡啶-2-基乙基)胺(0.77毫摩尔)与(3S)-〔(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-(2R)-羟基-4-苯基丁酸(0.70毫摩尔)按照步骤A偶联(溶剂：二甲基甲酰胺)，硅胶色谱提纯，用0.5～8％乙醇-CH2Cl2洗脱：产率82％；HPLC(60/40)3.33分钟(97％)；TSPMS 491/493(MH+，100)；

    1H NMR(CDCl3)δ9.84(br，0.7H)，9.35(br，0.3H)，8.49(m，1H)，7.7-7.5(m，2H)，7.4-7.1(m，9H)，6.92(d，0.3H，J＝8Hz)，6.8(m，1.4H)，6.65(d，0.3H，J＝9Hz)，4.62(m，1.5H)4.5(m，0.5H)，4.34(s，0.7H)，4.29(s，0.3H)，3.82(m，1H)，3.48(m，2H)，3.05(m，3H)，2.86(s，1H)，2.70(s，2H).分析计算C27H27ClN4O3+0.2H2O：C，65.57；H，5.58；N，11.33.实测值：C，65.56；H，5.84；N，11.36.

    实施例65  1-{(3S)-〔(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-(2R)-羟基-4-苯基丁酰基}-哌啶-4-甲酸乙酯

    将4-哌啶甲酸乙酯与(3S)-〔(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-(2R)-羟基-4-苯基丁酸(0.75毫摩尔)按照步骤A进行偶联，硅胶色谱提纯，用20～40％乙酸乙酯-己烷洗脱，产率95％；HPLC(60/40)7.96分钟(95％)；PBMS512/514(MH+，100％)。

    实施例66  1-{(3S)-〔(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-(2R)-羟基-4-苯基丁酰}-吡咯烷-2(S)-甲酸叔丁酯

    (S)-吡咯烷-2-甲酸叔丁酯与(3S)-〔(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-(2R)-羟基-4-苯基丁酸(2.1毫摩尔)按照步骤A被偶联(反应时间为60小时)，硅胶色谱提纯，用25～50％乙酸乙酯/己烷洗脱：产率74％，HPLC(60/40)8.27分钟(99％)；TSPMS 526/528(MH+，100％)；分析计算C28H32ClN3O5：C，63.93；H，6.13；N，7.99.实测值：C，64.05；H，6.32；N，7.79.

    实施例67  5-氯-1H-吲哚-2-甲酸{(1R)-〔(1S)-羟基-(甲氧甲胺基甲酰)甲基〕-2-苯乙基}酰胺

    5-氯-1H-吲哚-2-甲酸(0.25毫摩尔)与(2S，3R)-3-氨基-2-羟基-N-甲氧基-N-甲基-4-苯基丁酰胺盐酸盐(0.25毫摩尔)按照步骤A偶联(0～25℃，酸洗后用碱洗)。将粗产物在25℃溶于含有0.25当量1N NaOH的甲醇中，历时2小时，另外，用0.25当量1N NaOH处理1小时(以便水解极性较弱的N，O-双-5-氯-1H-吲哚羰基衍生物)，浓缩溶液，将残余物溶于乙酸乙酯，用2NHCl、盐水洗涤，干燥与浓缩。硅胶色谱提纯，用30～50％乙酸乙酯-己烷洗脱。将经过色谱提纯的材料(含极性杂质)溶于乙酸乙酯，用2N NaOH洗涤2次，干燥与浓缩：产率57％；HPLC(60/40)5.36分钟(98％)；mp165～167℃，PBMS 416/418(MH+，100％)；  1H NMR(CDCl3)δ9.45(br，1H)，7.58(d，1H，J＝2Hz)，7.4-7.1(m，7H)，6.77(d，1H，J＝2Hz)，6.51(d，1H，J＝10Hz)，4.91(m，1H)，4.30(d，1H，J＝5Hz)，3.83(d，1H，J＝5Hz)，3.35(s，3H)，3.13(s，3H)，3.09(m，2H).分析计算C21H22ClN3O4+1.0H2O：C，58.13；H，5.58；N，9.68；实测值：C，58.05；H，5.24；N，9.54.

    实施例67A  (2S，3R)-3-氨基-2-羟基-N-甲氧基-N-甲基-4-苯基丁酰胺盐酸盐

    将{1(R)-〔羟基-((S)-甲氧甲胺基甲酰)甲基〕-2-苯乙基}胺基甲酸(285毫克，0.8毫摩尔)溶于冷4NHCl-二恶烷并且在0℃搅拌1小时。浓缩后用乙醚研制，干燥得到207毫克(90％)固体。

    实施例67B  {(1S)-〔羟基-((R)-甲氧甲胺基甲酰)甲基〕-2-苯乙基}胺基甲酸

    (2S，3R)-3-(叔丁氧羰基胺基)-2-羟基-4-苯基丁酸(300毫克，1.0毫摩尔，Sigma Chemical Co.St.Louis，MO)与N，O-二甲基羟基胺盐酸盐(104毫克，1.1毫摩尔)按照步骤A偶联(反应温度为0～25℃)：产率88％，HPLC(60/40)4.90分钟(95％)。

    实施例68  5-氯-1H-吲哚-2-甲酸{(1R)-〔羟基-((R)-甲氧基甲胺基甲酰)甲基〕-2-苯乙基}酰胺

    N，O-二甲基羟基胺盐酸盐(0.32毫摩尔)与(3R)-〔(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-(2R)-羟基-4-苯基丁酸(0.3毫摩尔)按照步骤A偶联(0～25℃，酸洗后用碱洗)，硅胶色谱提纯，用20～50％乙酸乙酯/己烷洗脱：产率73％，HPLC(60/40)4.86分钟(95％)；PBMS 416/418(MH+，100％)；

     1H NMR(CDCl3)δ9.47(br，1H)，7.58(d，1H，J＝1.7Hz)，7.31(d.1H，J＝8.7Hz)，7.30-7.10(m，6H)，6.78(d，1H，J＝10Hz)，6.74(s，1H)，5.00(m，1H)，4.63(m，1H)，3.80(br，ca.1H)，3.70(s，3H)，3.04(s，3H)，2.87(m，2H).分析计算C21H22ClN3O4+0.1H2O：C，60.39；H，5.36；N，10.06.实测值：C，60.76；H，5.74；N，9.78.

    实施例69  5-氯-1H-吲哚-2-甲酸〔(1S)-苄基-(2R)-羟基-3-氧代-3-(1-氧代-1-噻唑烷-3-基)丙基〕酰胺

    间氯过苯甲酸(62毫克，50％，0.18毫摩尔)在25℃被加入5-氯-1H-吲哚-2-甲酸((1S)-苄基-(2R)-羟基-3-氧代-3-噻唑烷-3-基丙基)酰胺(80毫克，0.18毫摩尔)的CH2Cl2(2毫升)溶液中。1小时后，倾入NaHCO3饱和水溶液(12毫升)、10％硫代硫酸钠水溶液(12毫升)与乙酸乙酯的混合物中。分离水层并且用乙酸乙酯萃取2次。合并有机层，用饱和NaHCO3水溶液洗涤，干燥与浓缩，得到黄色固体(80毫克，96％)；HPLC(60/40)3.37分钟(97％)；PBMS460/462(MH+，100％)。

    实施例70与71  5-氯-1H-吲哚-2-甲酸〔(1S)-苄基-(2R)-羟基-3-氧代-3-(1-氧代-1-硫代吗啉-4-基)丙基〕酰胺(实施例20)与5-氯-1H-吲哚-2-甲酸〔(1S)-苄基-3-(1，1-二氧代-1-硫代吗啉-4-基)-(2R)-羟基-3-氧代丙基〕酰胺(实施例71)

    间氯过苯甲酸(45毫克，50％，0.13毫摩尔)在25℃被加入5-氯-1H-吲哚-2-甲酸((1S)-苄基-(2R)-羟基-3-氧代-3-硫代吗啉-4-基丙基)酰胺(60毫克，0.13毫摩尔)的CH2Cl2(1.5毫升)溶液中。1小时后，倾入NaHCO3饱和水溶液(12毫升)、10％硫代硫酸钠水溶液(12毫升)与乙酸乙酯的混合物中。分离水层并且用乙酸乙酯萃取2次。合并有机层，用饱和NaHCO3水溶液洗涤，干燥与浓缩，得到黄色固态标题亚砜(实施例70)，硅胶色谱提纯，用1％乙醇-CH2Cl2洗脱，产率44毫克，72％；HPLC(60/40)6.14分钟(98％)。PBMS 474/476(MH+，100％)。同时分离出被证实为标题砜(实施例71)的极性较弱产物(8毫克)：HPLC(60/40)6.44分钟(96％)。PBMS 490/492(MH+，100％)。

    实施例72  1-{(3S)-〔(5-氯-1 H-吲哚-2-羰基)胺基〕-(2R)-羟基-4-苯基丁酰}-哌啶-4-甲酸

    将LiOH水溶液(0.2毫升，1N)加入1-(3S)-〔(5-氯-1H-吲哚-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-(2R)-羟基-4-苯基丁酰}哌啶-4-甲酸乙酯(111毫克，0.22毫摩尔)于四氢呋喃(2毫升)中的25℃溶液。18小时后，浓缩并且用乙醚研制。所得到的固体被分配于水与乙酸乙酯之间，加入6NHCl，使pH＝1。分离有机层、干燥并浓缩，得到109毫克(100％)固体：HPLC(60/40)3.79分钟(99％)；TSPMS 484/486(MH+，100％)；1H NMR(DMSO-d6)δ12.25(br，1H)，11.65(br，1H)，8.17(d，0.5H，J＝9Hz)，8.14(d，0.5H，J＝9Hz)，7.70(d，1H，J＝2Hz)，7.38(d，1H，J＝8.8Hz)，7.35-7.1(m，7H)，4.78(m，1H，exchanges with D2O)，4.5(m，2H)，4.1(m，1H)，3.8(m，0.5H)，3.7(m，0.5H)，3.15(m，0.5H)，3.0(m，2-2.5H)，2.75(m，1H)，1.5(possible m，1H)，1.8(m，2-2.5H)，1.5(m，ca.1.5H).分析计算C25H26ClN3O5+0.55H2O：C，60.80；H，5.53；N，8.51.实测值：C，61.15；H，5.68；N，8.11.

    实施例73  5-氯-1H-吲哚-2-甲酸〔(1S)-((R)-羟基胺基甲酰甲基)-2-苯乙基〕酰胺

    三氟乙酸(2毫升)被加至5-氯-1H-吲哚-2-甲酸〔(1S)-((R)-叔丁氧胺基甲酰羟基甲基)-2-苯乙基〕酰胺(256毫克，0.58毫摩尔)于CH2Cl2(2毫升)中的溶液，在25℃搅拌18小时。再次加入三氟乙酸(2毫升)，混合物被静置72小时，浓缩后，硅胶色谱提纯，用2.5％、5％、10％乙醇/CH2Cl2(含1％乙酸)洗脱。用乙醚/己烷研制经过纯化的产物，干燥后，产率70毫克，31％，HPLC(60/40)3.11分钟(96％)；分析计算C19H18ClN3O4+1.0H2O：C，56.23；H，4.97；N，10.35.实测值：C，56.63；H，4.94；N，9.95.

    实施例74  5-氯-1H-吲哚-2-甲酸〔(1S)-{〔苄基哌啶-4-基)甲基胺基甲酰〕-(R)-羟甲基}-2-苯乙基)酰胺

    (3S)-〔(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-(2R)-羟基-4-苯基丁酸(310毫克，0.8毫摩尔)与(1-苄基-哌啶-4-基)甲胺盐酸盐(EPO公开0457686，实施例1A，200毫克，0.8毫摩尔)按照步骤A偶联(溶剂：二甲基甲酰胺)。硅胶色谱提纯粗产物，用0.5～4％乙醇/CH2Cl2(含0.5％NH4OH)洗脱，得到无色泡沫：产率140毫克，30％；HPLC(60/40)4.15分钟(95％)；TSPMS 559/562(MH+，100％)；分析计算C32H35ClN4O3+HCL+1.5H2O：C，61.73；H，6.31；N，9.00.实测值：C，61.61；H，6.29；N，8.71.

    实施例75  4({(3S)-〔(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-(2R)-羟基-4-苯基丁酰}甲胺基)哌啶-1-甲酸叔丁酯

    (3S)-〔(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-(2R)-羟基-4-苯基丁酸(1.0，2.6毫摩尔)与4-甲胺基哌啶-1-甲酸叔丁酯(575毫克，2.6毫摩尔)按照步骤A偶联(溶剂为二甲基甲酰胺)。硅胶色谱提纯粗产物，用20、30、40、50和70％乙酸乙酯/己烷洗脱：产率319毫克，21％；HPLC(60/40)10.31分钟(94％)；569/571(MH+，100％)。

    实施例75A  4-甲胺基哌啶-1-甲酸叔丁酯

    将粉状分子筛(3A，5.2克)，盐酸甲胺(16.96克，251毫摩尔)、无水乙酸钠(41.21克，502毫摩尔)和95％氰基硼氢化钠(3.99克，60毫摩尔)依次加入4-氧代-哌啶-1-甲酸叔丁酯的甲醇(400毫升，0℃)溶液中。在数小时内升温至25℃。18小时后，在25℃用硅藻土过滤，用甲醇与乙酸乙酯洗涤固体。浓缩滤液。将残余物溶于乙酸乙酯，用2N NaOH洗涤2次，用盐水洗一次，干燥浓缩后得到油状物(12.79克，119％)。

    实施例76  5-氯-1H-吲哚-2-甲酸{(1S)-〔(R)-羟基(甲基哌啶-4-基胺基甲酰)甲基〕-2-苯乙基}酰胺盐酸盐

    4-({(3S)-〔(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-(2R)-羟基-4-苯基丁酰}甲胺基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(292毫克，0.5毫摩尔)被溶于0℃ 4M HCl-二恶烷，在室温下搅拌1小时。浓缩混合物，用乙醚研制残余物，干燥：产率249毫克，96％HPLC(60/40)2.59分钟(96％)，PBMS 467/471(MH+，100％)；

    1H NMR(DMSO-d6)δ11.7(s，0.3H)，11.6(s，0.7H)，8.75(br，2H，exchanges withD2O)，7.70(d，1H，J＝Hz)，7.4-7.1(m，8H)，4.94(d，0.3H，J＝7.8Hz，exchangeswith D2O)，4.77(d，0.7H，J＝7.7Hz，exchanges with D2O)，4.6(m，1H)，4.47(dd，1H，J＝3，8Hz)，4.4(m，0.7H)，3.9(m，0.3H)，3.4-3.2(m，ca.1.5H)，2.95(m，2H)，2.15-1.8(m，ca.2.5H)，1.75-1.50(m，2H).分析计算C25H29ClN4O3+HCl+0.7H2O：C，57.96；H，6.11；N，10.82.实测值C，58.22；H，6.23；N，10.46.

    实施例77  5-氯-1H-吲哚-2-甲酸((1S)-{(R)-羟基-〔甲基-(1-甲基哌啶-4-基)胺基甲酰〕甲基}-2-苯乙基)酰胺盐酸盐

    依次将分子筛(3A粉末，100毫克)、三乙胺(22毫克，0.2毫摩尔)、冰醋酸(64毫克，1.1毫摩尔)、氰基硼氢化钠(95％，18毫克，0.3毫摩尔)与含水甲醛(37％(重)，于水中，22毫克，0.3毫摩尔)加入5-氯-1H-吲哚-2-甲酸{(1S)-((R)-羟基(甲基哌啶-4-基胺基甲酰)甲基〕-2-苯乙基}酰胺盐酸盐(100毫克，0.2毫摩尔)于甲醇(2毫升)中的25℃溶液中。18小时后，用硅藻土过滤，用甲醇洗涤固体并浓缩。将残余物溶于乙酸乙酯，用2N NaOH洗涤2次，用盐水洗一次。干燥并浓缩。硅胶色谱提纯无色固体残余物，用1～8％乙醇/CH2Cl2洗脱得到无色固体(93毫克，91％)。将其溶于0℃甲醇，用1.01NHCl(0.21毫升)处理形成的溶液并且立即浓缩。用乙醚研制残余物并且干燥：产率87毫克，79％；HPLC(60/40)2.86分钟(95％)；TSPMS 483/485(MH+，100％)。

    实施例78  (3S)-〔(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-4-苯基丁酸甲酯

    (3S)-3-胺基-4-苯基丁酸甲酯盐酸盐(1.15克，5毫摩尔)与5-氯-1H-吲哚-2-甲酸按照步骤A偶联，用乙醚研制纯化产物；产率1.46克(79％)；HPLC(60/40)8.85分钟(100％)；PBMS 371/373(MH+，100/35％)；

    分析计算

    实测值：

    实施例78A  (3S)-胺基-4-苯基丁酸甲酯盐酸盐

    (3S)-叔丁氧羰基胺基-4-苯基-丁酸甲酯(参见“杂环化合物”，P.1835(1989)与J.Med.Chem.1975，P.761，349克，12.1毫摩尔)在0℃被溶于4M HCl-二恶烷并且在225℃搅拌0.5小时，浓缩后，用乙醚研制残余物并且干燥：产率2.56克(92％)。

    应该理解的是本发明并不局限于本文所述的特定实施方案，在不违背下述权利要求限定的新概念的实质与范围条件下可以完成各种变化与改进。