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西松烷型二萜及其制备方法和用途.pdf

上传人：Y94****206 文档编号：431181 上传时间：2018-02-15 格式：PDF 页数：16 大小：825.71KB
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摘要
申请专利号：

CN200610035912.8

 申请日：

2006.06.13
公开号：

CN1948302A

 公开日：

2007.04.18
当前法律状态：

终止

 有效性：

无权
法律详情：

未缴年费专利权终止 IPC(主分类):C07D 307/93申请日:20060613授权公告日:20081224终止日期:20160613|||授权|||实质审查的生效|||公开
IPC分类号：

C07D307/93(2006.01)

 主分类号：

C07D307/93
申请人：

中国科学院南海海洋研究所;
发明人：

漆淑华; 张偲
地址：

510301广东省广州市新港西路164号
优先权：

专利代理机构：

广州科粤专利代理有限责任公司

 代理人：

潘伟健
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内容摘要

本发明涉及由通式(1)表示的西松烷型二萜，还涉及该化合物的制备方法和用途。该化合物通过将灯心柳珊瑚(Junceella juncea)经过有机溶剂提取，多种常压柱层析，高效液相色谱分离得到。本发明的西松烷型二萜具有抗病毒性能，因此可以应用于制备抗病毒药物，以及对藤壶、多室草苔虫、华美盘管虫等海洋主要生物污染源幼虫的附着有不同程度的抑制作用，因而可以应用于海洋中抗害虫附着和污染。

权利要求书

1.  下述通式(1)的化合物：

                              式(1)
其中为1：C-3与C-4间为双键，C-11与C-20间为环氧键，R1，R5，R6＝OAc，R4＝CH2Cl，R7＝C4H9COO，或2：C-3与C-4间为双键，C-11与C-20间为环氧键，R1，R6，R7＝OAc，R4＝CH2Cl，R5＝C4H9COO，或3：C-3与C-4间为双键，C-11与C-20间为环氧键，R1＝(CH3)2CHCH2CH2COOCH2COO，R4＝CH2OH，R5，R6，R7＝OAc，或4：C-3与C-4间为双键，C-11与C-20间为环氧键，R1，R5，R7＝OAc，R4＝CH2OCH3，R6＝C4H9COO，或5：C-3与C-4间为双键，C-11与C-20间为环氧键，R1，R6＝OAc，R4＝CH2OCH3，R5，R7＝OH，或6：C-3与C-4间为双键，C-11与C-20间为环氧键，R1，R6＝OAc，R4＝CH2OAc，R5，R7＝OH，或7：C-11与C-20间为双键，R1，R3，R7＝OAc，R4＝CH2OAc，R2，R5，R6＝H，或8：C-11与C-20间为环氧键，R1，R3，R7＝OAc，R4＝CH2OAc，R2，R5，R6＝H，或9：C-11与C-20间为双键，R1，R3，R7＝OAc，R4＝COOMe，R2，R5，R6＝H。

2.  权利要求1的化合物的制备方法，其特征是包括以下的步骤：
(1)将灯心柳珊瑚(Junceella juncea)用有机溶剂提取，然后将提取液减压浓缩得到粗提取物；
(2)粗提取物悬浮于水，用氯仿或乙酸乙酯萃取，将氯仿层或乙酸乙酯层减压浓缩后进行常压硅胶柱层析，用两种有机溶剂的混合体系作为洗脱液，以体积比100∶0到0∶10变化进行梯度洗脱，用薄层层析追踪合并，其中分别收集在薄层层析中能用体积比10∶1氯仿-丙酮溶液系统展开，体积比9∶1氯仿-丙酮溶液系统展开、体积比8∶2氯仿-丙酮溶液系统展开，以及体积比7∶3氯仿-丙酮溶液系统展开的四个组分；
(3)步骤(2)收集的组分经下述处理：
在薄层层析中能用体积比10∶1氯仿-丙酮溶液系统展开的组分经常压硅胶柱层析，用体积比10∶1的氯仿-丙酮溶液体系洗脱，浓缩；或
在薄层层析中能用体积比9∶1氯仿-丙酮溶液系统展开的组分经高效液相色谱分离，用Waters 600控制器连有Waters 996光电二极管检测器，LunaTMC18(2)柱，250mm×10mm i.d.，以体积比64∶36的甲醇-水冲洗，流速5mL/min，从第8.33分钟到第9.15分钟收集洗脱液，浓缩；或经高效液相色谱分离，用Waters 600控制器连有Waters 996光电二极管检测器，LunaTMC18(2)柱，250mm×10mm i.d.，以体积比64∶36的甲醇-水冲洗，流速5mL/min，从第17.30分钟到第18.22分钟收集洗脱液，浓缩；或经高效液相色谱分离，用Waters 600控制器连有Waters 996光电二极管检测器，LunaTMC18(2)柱，250mm×10mm i.d.，以体积比64∶36的甲醇-水冲洗，流速5mL/min，从第20.32分钟到第21.76分钟收集洗脱液，浓缩；或
在薄层层析中能用体积比8∶2氯仿-丙酮溶液系统展开的组分经高效液相色谱分离，用Waters 600控制器连有Waters 996光电二极管检测器，LunaTMC18(2)柱，250mm×10mm i.d.，以体积比63∶37的甲醇-水冲洗，流速5mL/min，从第11.09分钟到第12.22分钟收集洗脱液，浓缩；或经高效液相色谱分离，用Waters 600控制器连有Waters 996光电二极管检测器，LunaTMC18(2)柱，250mm×10mm i.d.，以体积比63∶37的甲醇-水冲洗，流速5mL/min，从第12.32分钟到第13.14分钟收集洗脱液，浓缩；或经高效液相色谱分离，用Waters 600控制器连有Waters 996光电二极管检测器，LunaTMC18(2)柱，250mm×10mm i.d.，以体积比63∶37的甲醇-水冲洗，流速5mL/min，从第15.33分钟到第16.17分钟收集洗脱液，浓缩；或
在薄层层析中能用体积比7∶3氯仿-丙酮溶液系统展开的组分经高效液相色谱分离，用Waters 600控制器连有Waters 996光电二极管检测器，LunaTMC18(2)柱，250mm×10mm i.d.，以体积比48∶52的甲醇-水冲洗，流速5mL/min，从第14.42分钟到第15.26分钟收集洗脱液，浓缩；或经高效液相色谱分离，用Waters 600控制器连有Waters 996光电二极管检测器，LunaTMC18(2)柱，250mm×10mm i.d.，以体积比48∶52的甲醇-水冲洗，流速5mL/min，从第16.27分钟到第17.97分钟收集洗脱液，浓缩。

3.  根据权利要求2所述的化合物的制备方法，其特征是步骤(1)所述的有机溶剂是甲醇、乙醇、二氯甲烷、甲醇和二氯甲烷的混合溶剂或乙醇和二氯甲烷的混合溶剂，步骤(2)所述的两种有机溶剂的混合体系是氯仿-丙酮、氯仿-乙酸乙酯、石油醚-丙酮或石油醚-乙酸乙酯。

4.  权利要求1的化合物在制备抗病毒药物的应用。

5.  权利要求1的化合物在水中抗害虫附着和污染方面的应用。

说明书

西松烷型二萜及其制备方法和用途
技术领域
本发明涉及新的西松烷型二萜，具体来说是涉及从灯心柳珊瑚(Junceella juncea)提取的西松烷型二萜，另外还涉及该化合物的制备方法和用途。
背景技术
西松烷型二萜是一类3，8-环化的cembranoid型化合物，具有高取代且高度氧化的双环[8，4，0]十四烷骨架。目前已从海洋生物中发现300多个西松烷型二萜，而且数量仍在递增，其中有很多具有有利用价值的生物活性，如细胞毒性、抗炎、抗病毒、杀虫、免疫性等。据文献报道Junceella属灯心柳珊瑚(Junceella juncea)中富含西松烷型二萜(briaranediterpenoids)。
发明内容
本发明的目的在于从灯心柳珊瑚提取出新的具有药用价值的西松烷型二萜；另一个目的是提供这种西松烷型二萜的制备方法；再有一个目的是开发它的用途。
我们通过有机溶剂提取，常压柱层析，高效液相色谱分离，从灯心柳珊瑚中分离得到由通式(1)表示的新的西松烷型二萜，这些西松烷型二萜不但能抗病毒，而且对藤壶(Balanusamphitrite)、多室草苔虫(Bugula neritina)、华美盘管虫(Hydroides elegans)等水中主要生物污染源的幼虫的附着有不同程度的抑制作用，因而可以应用于水中抗害虫附着和污染，以及可以用于制备抗病毒药物，从而实现了本发明的目的。
本发明的西松烷型二萜，特征是其结构由通式(1)表示：

                             式(1)
其中为1：C-3与C-4间为双键，C-11与C-20间为环氧键，R1，R5，R6＝OAc，R4＝CH2Cl，R7＝C4H9COO，或2：C-3与C-4间为双键，C-11与C-20间为环氧键，R1，R6，R7＝OAc，R4＝CH2Cl，R5＝C4H9COO，或3：C-3与C-4间为双键，C-11与C-20间为环氧键，R1＝(CH3)2CHCH2CH2COOCH2COO，R4＝CH2OH，R5，R6，R7＝OAc，或4：C-3与C-4间为双键，C-11与C-20间为环氧键，R1，R5，R7＝OAc，R4＝CH2OCH3，R6＝C4H9COO，或5：C-3与C-4间为双键，C-11与C-20间为环氧键，R1，R6＝OAc，R4＝CH2OCH3，R5，R7＝OH，或6：C-3与C-4间为双键，C-11与C-20间为环氧键，R1，R6＝OAc，R4＝CH2OAc，R5，R7＝OH，或7：C-11与C-20间为双键，R1，R3，R7＝OAc，R4＝CH2OAc，R2，R5，R6＝H，或8：C-11与C-20间为环氧键，R1，R3，R7＝OAc，R4＝CH2OAc，R2，R5，R6＝H，或9：C-11与C-20间为双键，R1，R3，R7＝OAc，R4＝COOMe，R2，R5，R6＝H。
上述通式(1)中R1，R5，R6＝OAc，R4＝CH2CL，R7＝C4H9COO，C-3与C-4间为双键，C-11与C-20间为环氧键所构成的化合物下面简称化合物1，结构见式(1)-1：

                              式(1)-1
上述通式(1)中R1，R6，R7＝OAc，R4＝CH2CL，R5＝C4H9COO，C-3与C-4间为双键，C-11与C-20间为环氧键所构成的化合物下面简称化合物2，结构见式(1)-2：

                              式(1)-2
上述通式(1)中R1＝(CH3)2CHCH2CH2COOCH2COO，R4＝CH2OH，R5，R6，R7＝OAc，C-3与C-4间为双键，C-11与C-20间为环氧键所构成的化合物下面简称化合物3，结构见式(1)-3：

                              式(1)-3
上述通式(1)中R1，R5，R7＝OAc，R4＝CH2OCH3，R6＝C4H9COO，C-3与C-4间为双键，C-11与C-20间为环氧键所构成的化合物下面简称化合物4，结构见式(1)-4：

                               式(1)-4
上述通式(1)中R1，R6＝OAc，R4＝CH2OCH3，R5，R7＝OH，C-3与C-4间为双键，C-11与C-20间为环氧键所构成的化合物下面简称化合物5，结构见式(1)-5：

                              式(1)-5
上述通式(1)中R1，R6＝OAc，R4＝CH2OAc，R5，R7＝OH，C-3与C-4间为双键，C-11与C-20间为环氧键所构成的化合物下面简称化合物6，结构见式(1)-6：

                              式(1)-6
上述通式(1)中R1，R3，R7＝OAc，R4＝CH2OAc，R2，R5，R6＝H，C-11与C-20间为双键所构成的化合物下面简称化合物7，结构见式(1)_7：

                              式(1)-7
上述通式(1)中R1，R3，R7＝OAc，R4＝CH2OAc，R2，R5，R6＝H，C-11与C-20间为双键所构成的化合物下面简称化合物8，结构见式(1)-8：

                             式(1)-8
上述通式(1)中当R1，R3，R7＝OAc，R4＝COOMe，R2，R5，R6＝H，C-11与C-20间为双键所构成的化合物下面简称化合物9，结构见式(1)-9：

                             式(1)-9
本发明的西松烷型二萜的制备方法，其特征是包括以下的步骤：
(1)将灯心柳珊瑚用有机溶剂提取，然后将提取液减压浓缩得到粗提取物；
(2)粗提取物悬浮于水，用氯仿或乙酸乙酯萃取，将氯仿层或乙酸乙酯层减压浓缩后进行常压硅胶柱层析，用两种有机溶剂的混合体系作为洗脱液，以体积比100∶0到0∶10变化进行梯度洗脱，用薄层层析追踪合并，其中分别收集在薄层层析中能用体积比10∶1氯仿-丙酮溶液系统展开，体积比9∶1氯仿-丙酮溶液系统展开，体积比8∶2氯仿-丙酮溶液系统展开，以及体积比7∶3氯仿-丙酮溶液系统展开的四个组分；
(3)步骤(2)收集的组分经下述处理：
在薄层层析中能用体积比10∶1氯仿-丙酮溶液系统展开的组分经常压硅胶柱层析，用体积比10∶1的氯仿-丙酮溶液体系洗脱，得到化合物3；或
在薄层层析中能用体积比9∶1氯仿-丙酮溶液系统展开的组分经高效液相色谱分离，用Waters600控制器连有Waters996光电二极管检测器，.LunaTMC18(2)柱，250mm×10mm i.d，，体积比64∶36的甲醇-水冲洗，流速5mL/min，从第8.33分钟到第9.15分钟收集洗脱液得到化合物7；或
经高效液相色谱分离，用Waters600控制器连有Waters996光电二极管检测器，.LunaTMC18(2)柱，250mm×10mm i.d.，以体积比64∶36的甲醇-水冲洗，流速5mL/min，从第17.30分钟到第18.22分钟收集洗脱液得到化合物2；或
经高效液相色谱分离，用Waters600控制器连有Waters996光电二极管检测器，.LunaTMC18(2)柱，250mm×10mm i.d.，以体积比64∶36的甲醇-水冲洗，流速5mL/min，从第20.32分钟到第21.76分钟收集洗脱液得到化合物1；或
在薄层层析中能用体积比8∶2氯仿-丙酮溶液系统展开的组分经高效液相色谱分离，用Waters600控制器连有Waters996光电二极管检测器，LunaTMC18(2)柱，250mm×10mmi.d.，以体积比63∶37的甲醇-水冲洗，流速5mL/min，从第11.09分钟到第12.22分钟收集洗脱液得到化合物8；或
经高效液相色谱分离，用Waters600控制器连有Waters996光电二极管检测器，.LunaTMC18(2)柱，250mm×10mm i.d.，以体积比63∶37的甲醇-水冲洗，流速5mL/min，从第12.32分钟到第13.14分钟收集洗脱液得到化合物9；或
经高效液相色谱分离，用Waters600控制器连有Waters996光电二极管检测器，.LunaTMC18(2)柱，250mm×10mm i.d.，以体积比63∶37的甲醇-水冲洗，流速5mL/min，从第15.33分钟到第16.17分钟收集洗脱液得到化合物4；或
在薄层层析中能用体积比7∶3氯仿-丙酮溶液系统展开的组分经高效液相色谱分离，用Waters600控制器连有Waters996光电二极管检测器，.LunaTMC18(2)柱，250mm×10mm i.d.，以体积比48∶52的甲醇-水冲洗，流速5mL/min，从第14.42分钟到第15.26分钟收集洗脱液得到化合物5；或
经高效液相色谱分离，用Waters600控制器连有Waters996光电二极管检测器，.LunaTMC18(2)柱，250mm×10mm i.d.，以体积比48∶52的甲醇-水冲洗，流速5mL/min，从第16.27分钟到第17.97分钟收集洗脱液得到化合物6。
步骤(1)所述的有机溶剂可以是甲醇、乙醇、二氯甲烷、甲醇和二氯甲烷的混合溶剂或乙醇和二氯甲烷的混合溶剂等。
步骤(2)所述的两种有机溶剂的混合体系可以是氯仿-丙酮、氯仿-乙酸乙酯、石油醚-丙酮或石油醚-乙酸乙酯等溶剂系统。
通过抗乙型肝炎病毒(HBV)实验和抗附着活性筛选实验，证明本发明的西松烷型二萜具有抗病毒性能，因此可以应用于制备抗病毒药物，以及对藤壶(Balanus amphitrite)、多室草苔虫(Bugula neritina)、华美盘管虫(Hydroides elegans)等幼虫的附着有不同程度的抑制作用，因而可以应用于水中抗害虫附着和污染。
具体实施方式
以下的实施例是对本发明的进一步说明，但本发明不限于下述实施例。
实施例1：西松烷型二萜的制备
以湿重12Kg的灯心柳珊瑚为原料，冷冻干燥切碎后用乙醇和二氯甲烷(体积比2∶1)的混合有机溶剂(约20L)提取3次，将提取液减压浓缩得粗提取物，将粗提取物悬溶于水，依次用氯仿萃取3次(每次2400mL)，减压浓缩得氯仿层85g。用氯仿和甲醇的混合溶剂将氯仿层溶解拌硅胶，用约2500mL氯仿拌约1000g硅胶进行湿法装柱，以氯仿-丙酮(2000mL，体积比从100∶0到0∶100变化)溶剂系统梯度洗脱，薄层层析TLC(GF254)追踪合并。
其中收集到的在薄层层析中能用氯仿-丙酮溶液系统(体积比10∶1)展开、氯仿-丙酮溶液系统(体积比9∶1)展开、氯仿-丙酮溶液系统(体积比8∶2)展开以及氯仿-丙酮溶液系统体积比(7∶3)展开的四组分用于下面进一步制备9个目标化合物。上述收集到的在薄层层析中能用氯仿-丙酮溶液系统(体积比10∶1)展开的组分经过常压硅胶柱层析(3.5克浓缩物，用250毫升溶剂拌100克硅胶装柱)，以氯仿-丙酮溶剂系统(体积比10∶1)洗脱，收集洗脱液，减压浓缩，得到产物，经结构鉴定证明是化合物3。数据如下：通过高分辨HRESIMS和13C NMR(DEPT)谱，推出其分子式为C36H48O17，1H和13C NMR谱与juncin Q的很相似(见表1和表2)，区别在于在本化合物中多出四个乙酰基信号和其它一些信号。根据其HMBC谱推测多出的四个乙酰基分别位于C-9、C-12、C-13和C-14上。另外HMBC谱也显示以下相关点：δH4.44，4.54(each d，J＝15.7Hz，H-2’)和δC171.1(s，C-1’)，172.4(s，C-3’)相关，δH2.29(2H，m，H-4’)，1.26(2H，m，H-5’)和δC172.4(s，C-3’)，25.6(t，C-6’)相关；1H-1H COSY谱显示以下相关点：δH1.26(2H，m，H-5’)和δH2.29(2H，m，H-4’)，2.14(1H，m，H-6’)相关，δH2.14(1H，m，H-6’)和δH0.98(6H，d，J＝6.5Hz，H-7’and 8’)相关；据上可推测多出的其它一些信号应是一个(CH3)2CHCH2CH2COOCH2COO-基团。结合NOESY谱推导出其结构由式(1)-3表示。
上述收集到的在薄层层析中能用氯仿-丙酮溶液系统(体积比9∶1)展开的组分经半制备高效液相色谱HPLC(Waters600控制器连有Waters996光电二极管检测器，LunaTMC18(2)，250×10mm i.d.，5ml min-1)分离，以体积比64∶36的甲醇-水冲洗，从第8.33分钟到第9.15分钟收集得到产物，经结构鉴定证明是化合物7。数据如下：通过高分辨HRESIMS和13C NMR(DEPT)谱，推出其分子式为C30H40O13。其1H和13C(DEPT)NMR谱(见表1和表3)显示以下信号：五个乙酰基、两个甲基[δH1.11(s)，δH1.12(d，J＝7.0Hz)]、一个γ-内酯(δC176.4)、一个三取代烯键[δH5.78(d，J＝10.2Hz)，δC122.5(d)，141.9(s)]、一个环外双键[δC151.0(s)，113.0(t)，δH4.87，4.98(each 1H，s)]、一个环外亚甲基[δH5.32，4.78(each br d，J＝17.3Hz)，δC65.9(t)]、一个被氧化的季碳和5个被氧化的次甲基。这些数据表明产物是一个西松烷型二萜，结构类似于junceellolide D和(+)-11α，20α，-epoxy-junceellolide D(参考文献：1.J.Shin，M.Park，W.Fenical.Tetrahedron 1989，45，1633；2.M.García，J.Rodriguez，C.Jiménez.J.Nat.Prod.1999，62，257.)。将产物的H和13C NMR谱与junceellolide D相比较，发现产物多了一个乙酰基，并且一个环外甲基被取代为一个环外亚甲基。根据其HMBC谱中δH5.32，4.78(each br d，J＝17.3Hz，H-16)和δC122.5(d，C-6)，141.9(s，C-5)，170.7(s)相关推测C-16被酯化；另外根据HMBC谱推测出其它四个乙酰基分别位于C-2、C-4、C-9、C-14上。在NOESY谱中，Me-15和H-14/17相关表明H-14、H-17、Me-15都为β-构型，而H-2和H-10/4相关、H-9和H-10/OH-8相关、Me-18和H-9/10相关说明H-2、H-9、H-10、OH-8、Me-18都为α-构型。综上所述，产物的结构由式(1)-7表示。
上述收集到的在薄层层析中能用氯仿-丙酮溶液系统(体积比9∶1)展开的组分，经半制备高效液相色谱HPLC(Waters600控制器连有Waters996光电二极管检测器，LunaTMC18(2)，250×10mm i.d.，5ml min-1)分离，以体积比64∶36的甲醇-水冲洗，从第17.30分钟到第18.22分钟收集得到产物，经结构鉴定证明是化合物2。数据如下：通过高分辨HRESIMS和13CNMR(DEPT)谱，推出其分子式为C33H43ClO14。它的1H and 13CNMR谱与化合物1几乎没区别(见表1和表2)。通过HMBC谱发现，化合物1和本产物的区别在于两者中异戊酰基的取代位置不同，在本产物中，异戊酰基取代在C-12上。结合NOESY谱推导出本产物的结构由式(1)-2表示。
上述收集到的在薄层层析中能用氯仿-丙酮溶液系统(体积比9∶1)展开的组分，经半制备高效液相色谱HPLC(Waters600控制器连有Waters996光电二极管检测器，LunaTMC18(2)，250×10mm i.d.，5ml min-1)分离，以体积比64∶36的甲醇-水冲洗，从第20.32分钟到第21.76分钟收集得到产物，经结构鉴定证明是化合物1。数据如下：ESIMS谱在699[M+H]+处显示准分子离子峰，结合高分辨HRESIMS和13C NMR(DEPT)谱，推出其分子式为C33H43ClO14。其1H和13C(DEPT)NMR谱(表2and1)显示以下信号：四个乙酰基和一个异戊酰基[δC172.3(s)，43.2(t)，25.0(d)，22.4(2q)]、两个甲基[δH1.13(s)，δH1.13(d，J＝7.0Hz)]、一个γ-内酯(δC175.0)、一个碳11(20)-环外氧化物[δH2.93，3.60(each br s)，δC49.1(t)，58.4(s)]、一个共轭双键[δC131.8(d)，128.2(d)，140.1(s)，125.9(d)，δH5.61(t，9.8)，6.36(d，10.5)，6.03(d，8.6)]、一个环外亚甲基[δC44.2(t)，δH4.58，4.64(each d，J＝13.6Hz)]、一个被氧化的季碳和6个被氧化的次甲基。这些数据表明本产物是一个西松烷型二萜，其结构类似于gemmacolide F，juncins I-K and juncin Q(参考文献：1.A.S.R.，Anjaneyulu，et al.J.J.Nat.Prod.2003，66，507-510；2.S.H.Qi，et al.J.Nat.Prod.2004，67，907-51910；3.H.Y.He，et al.Tetrahedron 1991，47，3271-3280.)。将本产物的1H和13C NMR谱与juncin Q相比较，发现本产物中多了一个乙酰基和一个异戊酰基，并且C-16被取代为CH2Cl基团。根据其HMBC谱中H-12和δC170.1相关、H-14/2’/3’和C-1’(δC172.3)相关，推测多出的乙酰基和异戊酰基分别位于C-12和C-14上。在NOESY谱中，Me-15和H-13/14/20相关、H-13和H-12相关，这表明H-20、H-13、H-12、H-14、Me-15都为β-构型，而H-2和H-10相关、H-9和H-10相关、Me-18和H-9/10相关说明H-2、H-9、H-10、Me-18都为α-构型。综上所述，本产物的结构由式(1)-1表示。
上述收集到的在薄层层析中能用氯仿-丙酮溶液系统(体积比8∶2)展开的组分，经半制备高效液相色谱HPLC(Waters600控制器连有Waters996光电二极管检测器，LunaTMC18(2)，250×10mm i.d.，5ml min-1)分离，以体积比63∶37的甲醇-水冲洗，从第11.09分钟到第12.22分钟收集得到产物，经结构鉴定证明是化合物8。数据如下：高分辨HRESIMS和13C NMR(DEPT)谱，推出其分子式为C30H40O14。产物的1H和13C NMR谱与化合物7的很相似(见表1和表3)，区别在于本产物中一个环外双键被转化为一个环外11(20)-环氧化物[δC62.3(s)and 58.9(t)，δH2.46(1H，d，J＝3.5Hz)，2.80(1H，d，J＝4.0Hz)]。这个推测通过HMBC谱中δH2.46(1H，d，J＝3.5Hz)，2.80(1H，d，J＝4.0Hz)和δC62.3(s，C-11)and 39.6(d，C-10)相关得到证明。结合NOESY谱推导出本产物的结构由式(1)-8表示。
上述收集到的在薄层层析中能用氯仿-丙酮溶液系统体积比(8∶2)展开的组分，经半制备高效液相色谱HPLC(Waters600控制器连有Waters996光电二极管检测器，LunaTMC18(2)，250×10mm i.d.，5ml min-1)分离，以体积比63∶37的甲醇-水冲洗，从第12.32分钟到第13.14分钟收集得到产物，经结构鉴定证明是化合物9。数据如下：高分辨HRESIMS和13C NMR(DEPT)谱，推出其分子式为C29H38O13。本产物的1H和13C NMR谱与化合物7的很相似(见表1和表3)，区别在于本产物中C-16转化为了-个被酯化的羧基。这个推测通过HMBC谱中δH7.06(d，J＝10.0Hz，H-6)，3.83(3H，s)和δC166.6(s，C-16)相关得到证明。结合NOESY谱推导出本产物的结构由式(1)-9表示。
上述收集到的在薄层层析中能用氯仿-丙酮溶液系统(体积比8∶2)展开的组分，经半制备高效液相色谱HPLC(Waters600控制器连有Waters996光电二极管检测器，LunaTMC18(2)，250×10mm i.d.，5ml min-1)分离，以体积比63∶37的甲醇-水冲洗，从第15.33分钟到第16.17分钟收集得到产物，经结构鉴定证明是化合物4。数据如下：高分辨HRESIMS和13C NMR(DEPT)谱，推出其分子式为C34H46O15。本产物的1H和13C NMR谱与juncin Q的很相似(见表1和表2)，区别在于本产物中多出一个乙酰基、一个异戊酰基和一个甲氧基(δC53.0，q)。根据其HMBC谱推测在本产物中四个乙酰基和一个异戊酰基分别位于C-2、C-9、C-12、C-14、C-13上；另外HMBC谱中δH3.80(3H，s)和δC72.2(t，C-16)相关表明多出的甲氧基应位于C-16上。结合NOESY谱推导出本产物的结构由式(1)-4表示。
上述收集到的在薄层层析中能用氯仿-丙酮溶液系统(体积比7∶3)展开的组分，经半制备高效液相色谱HPLC(Waters600控制器连有Waters996光电二极管检测器，LunaTMC18(2)，250×10mm i.d.，5ml min-1)分离，以体积比48∶52的甲醇-水冲洗，从第14.42分钟到第15.26分钟收集得到产物，经结构鉴定证明是化合物5。数据如下：通式(1)中化合物(5)，结合高分辨HRESIMS和13C NMR(DEPT)谱，推出其分子式为C27H36O13。本产物的1H和13C NMR谱与juncin Q的很相似(见表1和表2)，区别在于本产物的一个甲氧基(δC53.0，q)。根据HMBC谱中δH3.81(3H，s)和δC73.1(t，C-16)相关表明多出的甲氧基应位于C-16上。结合NOESY谱推导本产物的结构由式(1)-5表示。
上述收集到的在薄层层析中能用氯仿-丙酮溶液系统(体积比7∶3)展开的组分，经半制备高效液相色谱HPLC(Waters600控制器连有Waters996光电二极管检测器，LunaTMC18(2)，250×10mm i.d.，5ml min-1)分离，以体积比48∶52的甲醇-水冲洗，从第16.27分钟到第17.97分钟收集得到产物，经结构鉴定证明是化合物6。数据如下：高分辨HRESIMS和13C NMR(DEPT)谱，推出其分子式为C28H37O14。本产物的1H和13C NMR谱与juncin Q的很相似(见表1和表2)，区别在于本产物中多出一个乙酰基。根据HMBC谱中δH4.75，5.04(each d，J＝15.6Hz，H-16)，2.12(3H，s)和δC170.5(s)相关表明多出的乙酰基应位于C-16上。结合NOESY谱推导出本产物的结构由式(1)-6表示。
化合物1～9的碳谱见表1，并且碳谱都是以四甲基硅烷(TMS)为内标在125MHz的核磁共振仪上测定，都溶于氘代氯仿，化学位移以ppm为单位。
化合物1～5的氢谱见表2，化合物6～9的氢谱见表3，并且氢谱都是以四甲基硅烷(TMS)为内标在500MHz的核磁共振仪上测定，都溶于氘代氯仿，化学位移以ppm为单位，偶合常数J以Hz为单位。
表1.九种西松烷型二萜的碳谱数据

  碳                                                      化合物  1  2  3  4  5  6  7  8  9  1  2  3  4  5  6  7  8  9  10  11  12  13  14  15  16  17  46.5  74.0  131.8  128.2  140.1  125.9  78.5  81.2  63.7  32.6  58.4  73.3  66.5  73.3  14.2  44.5  44.0  46.5  74.0  131.8  128.2  140.1  125.9  78.5  81.0  63.7  32.7  58.3  72.8  66.4  73.6  14.4  44.5  44.0  46.4  75.5  131.4  128.5  139.6  122.7  78.8  81.2  63.8  32.7  58.3  73.3  66.6  73.8  14.4  63.0  44.1  46.5  74.1  131.2  128.6  141.6  122.8  78.9  81.1  63.9  32.7  58.4  73.3  66.3  73.9  14.4  72.2  44.2  47.5  75.5  131.7  128.0  141.2  123.4  79.1  81.2  64.2  30.7  60.4  76.0  68.1  76.5  13.7  73.1  44.3  47.4  75.1  132.5  127.1  139.3  123.4  79.2  81.3  64.2  30.6  60.3  75.9  68.2  77.0  13.6  63.9  44.3  47.5  72.0  38.2  69.3  141.9  122.5  76.4  83.2  73.3  42.4  151.0  25.6  27.6  70.9  15.2  65.9  42.4  47.5  72.8  38.1  69.2  140.1  123.7  76.4  80.3  71.4  39.6  62.3  23.5  24.5  73.2  15.1  65.6  42.2  47.9  72.9  37.4  67.6  136.8  139.1  76.7  82.9  72.2  43.3  150.7  29.3  27.6  74.1  14.4  166.6  42.7

续表1  碳                                              化合物  1  2  3  4  5  6  7  8  9  18  19  20  CH3COO      CH3COO      1’    2’    3’    4’    5’    6’    7’，  8’    OCH3  6.3  175.0  49.1  169.7  169.8  170.1  172.3   20.5  21.0  21.3  215   172.3  43.2  25.0  22.4  22.4      6.3  175.0  49.1  169.7  169.8  170.1  171.8   20.5  20.9  21.1  21.5   171.8  43.6  25.7  22.3  22.3      6.3  176.9  48.7  169.7  170.0  170.1  170.1   20.5  20.6  20.7  21.5   171.1  60.8  172.4  42.7  29.7  25.6  22.3    6.3  175.3  48.9  169.6  169.6  169.9  170.2   20.8  20.9  21.3  21.5   171.7  42.6  25.0  22.4  22.4     53.0  6.3  175.6  48.5  170.2  170.4  170.5    21.1  21.4  21.5            53.2  6.3  175.7  48.3  169.9  170.1  170.4  170.5   20.8  21.1  21.3  21.4              6.6  176.4  113.0  169.3  169.9  170.1  170.7  170.9  20.7  20.8  20.9  21.0  21.8           6.6  176.4  58.9  169.5  170.1  170.2  170.7  170.8  20.8  20.9  20.9  21.0  21.1             6.4  175.4  112.4  169.2  169.6  169.8  170.5   20.8  21.1  21.2  21.7           53.0

表2.化合物1～5的氢谱数据*  H                                                         化合物  1  2  3  4  5  2  3  4  6  7  9  10  12  13  14  15  16   17  18  5.44(d，9.5)  5.61(t，9.8)  6.36(d，10.5)  6.03(d，8.6)  4.95(d，8.6)  4.73(d，4.6)  3.57(d，4.6)  4.88(d，2.6)  5.09(t，3.4)  5.24(d，3.0)  1.13(s)  4.58.4.64  (each d，13.6)  2.30(q，7.0)  1.13(d，7.0)  5.51(d，9.5)  5.61(t，9.8)  6.36(d，10.5)  6.04(d，8.6)  4.96(d，8.6)  4.73(d，4.6)  3.56(d，4.6)  4.91(d，2.6)  5.08(t，3.4)  5.20(d，2.5)  1.14(s)  4.55.4.66  (each d，13.6)  2.30(q，7.0)  1.13(d，7.0)  5.67(d，9.2)  5.63(t，9.5)  6.33(d，9.7)  5.70(d，8.4)  4.97(d，8.4)  4.74(d，4.1)  3.63(d，4.7)  4.86(br s)  5.07(br s)  5.20(br s)  1.13(s)  4.62，5.41  (each d，15.6)  2.30(q，7.0)  1.15(d，7.0)  5.57(d，9.0)  5.56(t，8.9)  6.28(d，8.1)  5.88(d，8.6)  5.00(d，8.6)  4.74(d，4.6)  3.61(br s)  4.88(d，2.2)  5.09(t，3.7)  5.20(t，2.1)  1.13(s)  4.23，4.50  (each d，14.9)  2.31(q，7.1)  1.16(d，7.1)  5.96(d，9.6)  5.69(t，10.2)  6.28(d，10.9)  5.84(d，8.0)  5.00(d，8.4)  4.80(d，4.3)  3.58(d，4.1)  3.59(br s)  5.00(t，4.0)  3.74(br s)  0.99(s)  4.20.4.30  (each d，14.3)  2.33(q，7.0)  1.17(d，7.0)

续表2  H                                                化合物  1  2  3  4  5  2-OAc  9-OAc  12-OAc  13-OAc  14-OAc  16-OAc  2’     3’    4’     5’     6’    7’and 8’    OCH3  1.96(s)  2.22(s)  2.16(s)  1.95(s)    2.10(2H，m)   1.99(1H，m)  0.97(3H，d，  6.5)  1.01(3H，d，  6.5)     1.97(s)  2.20(s)   1.94(s)  2.07(s)   2.11(2H，m)   1.99(1H，m)  0.97(3H，d，  6.5)  1.01(3H，d，  6.5)      2.26(s)  2.13(s)  1.96(s)  2.10(s)   4.44.4.54  (each d，15.7)   2.29(2H，m)   1.26(2H，m)   2.14(1H，m)  0.98(6H，6.5)   1.94(s)  2.14(s)  2.22(s)   2.06(s)   2.09(2H，m)   1.98(1H，m)  0.92(6H，d，6.5)       3.80(3H，s)  2.08(s)  2.19(s)   2.17(s)             3.81(3H，s)

表3.化合物6～9的氢谱数据*  H                                                    化合物  6  7  8  9  2  3   4  6  7  9  10  12  13  14  15  16   17  18  20   2-OAc  4-OAc  5.91(d，10.0)  5.75(t，10.5)   6.27(d，10.5)  5.69(d，8.6)  4.98(d，8.5)  4.82(d，4.5)  3.58(d，4.1)  3.61(br s)  4.98(t，3.7)  3.80(br s)  1.00(s)  4.75，5.04  (each d，15.6)  2.35(q，7.0)  1.18(d，7.0)  2.76.3.42  (each br s)  2.03(s)   5.24(d，7.2)  1.81(m)，  2.80(dd，4.2，14.5)  5.14(dd，5.6，12.6)  5.78(d，10.2)  5.61(d，10.5)  4.82(d，4.8)  3.22(d，5.3)  2.20(m)  1.73(m)  4.73(d，4.6)  1.11(s)  5.32，4.78  (each br d，17.3)  2.48(q，7.0)  1.12(d，7.0)  4.87，4.98(each s)   1.90(s)  1.98(s)  4.92(d，5.5)  1.90(m)，  2.75(brd 14.0)  5.01(dd，5.4，12.2)  5.76(d，9.9)  5.53(d，10.0)  4.83(d，4.8)  3.29(d，2.9)  2.14，2.21(each m)  1.93，2.00(each m)  4.73(d，4.2)  1.11(1H，s)  4.62，5.36  (each br d，16.3)  2.35(q，7.0)  1.15(d，7.0)  2.46(d，3.5)，  2.80(d，4.0)  2.01(s)  2.03(s)  4.88(d，7.5)  1.84(m)，  2.72(brt，14.5)  5.91(dd，5.9，12.2)  7.06(d，10.0)  5.63(d，10.0)  5.60(d，2.8)  3.29(d，2.4)  2.15(m)  1.80(m)  4.70(br s)  1.03(s)    2.65(q，7.0)  1.20(d，7.0)  4.96，5.0(each s)   1.90(s)  1.97(s)

续表3  H                                化合物  6  7  8  9  12-OAc  13-OAc  14-OAc  16-OAc  OCH3  OH   2.16(s)   2.12(s)      2.05(s)  2.13(s)      2.04(s)  2.13(s)      2.07(s)   3.83(s) 

实施例2：9种西松烷型二萜药物抗乙型肝炎病毒(HBV)实验。
用0.06％胰蛋白酶将2.2.15细胞分散成单个细胞悬液，用含10％胎牛血清的DMEM培养配成浓度为3×105个/mL的细胞悬液，按0.1mL/孔分种于96孔板，置37℃、饱和湿度、5％CO2培养箱内培养，2d后换含药培养液0.1mL/孔，每个浓度四孔。将药物原液作系列倍比稀释成八个浓度。置37℃、饱和湿度、5％CO2培养箱内继续培养，并设不加药物的对照；12d后收集上清，备作ELISA法测定乙型肝炎表面抗原HBsAg、乙型肝炎e抗原HBeAg。所余细胞用MTT法测药物细胞毒性。
测定药物对细胞生长的半数毒性浓度：按Mosmann建立的MTT法检测。向吸去上清的细胞孔中加入0.4g/LMTT的无血清培养液0.1ml/孔，37℃培养4h，去上清，用二甲基亚砜溶解甲瓒颗粒，测570nm波长下的吸光下的吸光度A值。细胞破坏百分率ηdistroy＝(A细胞组-A实验组)/(A细胞组-A空白组)×100，50％毒性浓度(TC50)为细胞半数毒性浓度。
细胞上清中HBsAg、HBeAg的检测：用所留取第12天的细胞上清液，做ELISA法测定，采用华美生物工程公司生产的酶联检测试剂盒检测。药物对抗原的抑制百分率ηinhibitory＝(A细胞组-A实验组)/(A细胞组-A空白组)×100，50％抑制浓度(IC50)为HBsAg或HBeAg以抑制率为50％时的药物浓度。TI为毒性指数。
9种西松烷型二萜药物抗乙型肝炎病毒(HBV)的治疗指数见表4。
表4  9个西松烷型二萜药物抗乙型肝炎病毒(HBV)的治疗指数  化合物  TC50        HBsAg         HBeAg  IC50  TI  IC50  TI  1  2  3  4  5  6  7  8  9  ＞2.06  ＞1  ＞1  0.11  ＞1  ＞1  0.11  0.0625  ＞1  0.72  0.089  ＞1  0.078  ＞1  0.15  0.088  0.068  ＞1  ＞2.86  ＞11.24  1.00  1.41  1.00  6.67  1.25  0.92  1.00  0.69  ＞1  ＞1  0.10  ＞1  ＞1  0.12  0.15  ＞1  ＞2.99  1.00  1.00  1.1  1.00  1.00  0.92  0.42  1.00

实施例3：9个西松烷型二萜化合物对藤壶(Balanus amphitrite)幼虫的抗附着活性筛选实验
该实验用的是聚苯乙烯24孔径板，将实施例1得到的9个西松烷型二萜化合物作为测试样品溶解于二甲亚砜(DMSO)，然后加入经高压灭菌器过滤(0.22μm)的海水(FSW)配成不同的浓度(0.05μg/mL，0.2μg/mL，1μg/mL，10μg/mL and 50μg/mL)。在每个孔板中加入20个游动的幼虫和1mL配制好的测试样品，每个样品做4个平行孔，用加有DMSO的FSW海水作为阴性对照物。将配有测试样品的24孔径板放于28℃的培养箱中放置24小时后，观察实验结果。通过显微镜计算：1)已附着在板壁上的幼虫个数，2)没有附着在板壁上的幼虫个数，3)已死了的幼虫个数。计算已附着在板壁上的幼虫个数占实验用的总幼虫个数的百分比，再通过EPA PROBIT ANALYSIS PROGRAM Version 1.5软件计算其抑制幼虫附着的半数有效抑制浓度EC5，结果1～9化合物其半数抑制率EC50对应着分别为0.004，0.34，2.65，1.61，3.77，21.06，0.14，0.004，1.47μg/mL。
实施例4：9个西松烷型二萜化合物对多室草苔虫(Bugula neritina)、华美盘管虫(Hydroides elegans)幼虫的抗附着活性筛选实验
实验方法同实施例3，结果是实施例1得到的9个化合物在50μg/mL浓度时对多室草苔虫和华美盘管虫幼虫的附着抑制率都为100％，即此时没有幼虫附着。

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本发明涉及由通式(1)表示的西松烷型二萜，还涉及该化合物的制备方法和用途。该化合物通过将灯心柳珊瑚(Junceella juncea)经过有机溶剂提取，多种常压柱层析，高效液相色谱分离得到。本发明的西松烷型二萜具有抗病毒性能，因此可以应用于制备抗病毒药物，以及对藤壶、多室草苔虫、华美盘管虫等海洋主要生物污染源幼虫的附着有不同程度的抑制作用，因而可以应用于海洋中抗害虫附着和污染。 。

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