双黄连可溶性粉制备工艺与应用.pdf

本发明双黄连可溶性粉制备工艺，由下列重量份数的药物制成：金银花800-1000份、黄芩800-1000份、连翘1600-2000份；其特征在于：包括以下步骤：首先把金银花加水煎煮二次，第一次1小时，第二次45分钟，合并煎液，黄芩加水煎煮三次，合并煎液，滤过，滤液浓缩，减压干燥，备用；连翘粉碎，加水煎煮三次，沉淀，滤过，浓缩液喷雾干燥，与上述金银花、黄芩提取物粉碎成细粉，加葡萄糖适量，即得。本发明双黄连可溶性粉具有有效成分含量高、毒副作用小、无药残，可供大规模养殖混饲、混饮给药，贮存、运输方便，符合新兽药制剂特点。本发明适用于畜禽道感染性疾病，疗效确切。

1、  双黄连可溶性粉制备工艺，本发明由下列重量份数的药物制成：金银花800-1000份、黄芩800-1000份、连翘1600-2000份；其特征在于：包括以下步骤：首先把金银花加水煎煮二次，第一次1小时，第二次45分钟，合并煎液，减压浓缩到1∶2～2.5，冷至45～60℃，加20～40％石灰乳，使PH值达11.0～13.0，滤过，沉淀加2～3倍量95％乙醇，放置过60目筛，用50％硫酸调节PH至3～4，充分搅匀，滤过，滤液用40～50％的氢氧化钠溶液中和至PH值到6.5～7.5，滤过，滤液减压浓缩，干燥，备用；黄芩加水煎煮三次，第一次2小时，第二、三次各1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至适量，用盐酸调PH值至1.0～2.0，60～80℃保温，静置，滤过，沉淀加适量水，搅匀，用20～40％氢氧化钠溶液调PH值至7.0，加等量乙醇，搅拌使溶解，滤过，滤液用盐酸调PH值至1.0～2.0，60～80℃保温，静置，滤过，沉淀依次用适量水及不同浓度的乙醇洗至PH至7.0，挥尽乙醇，减压干燥，备用；连翘粉碎，加水煎煮三次，每次1.5小时，合并煎液，滤过，滤液于60℃以下减压浓缩至相对密度为1.10～1.20的清膏，放冷，加入4～6倍量乙醇，搅匀，静置2～4小时，沉淀，滤过，滤液减压回收乙醇，浓缩液喷雾干燥，与上述金银花、黄芩提取物粉碎成细粉，加葡萄糖适量，混匀，60℃以下干燥，即得。

2、  如权利要求1所述的双黄连可溶性粉制备工艺，其特征在于：包括以下步骤：首先把金银花加水煎煮二次，第一次1小时，第二次45分钟，合并煎液，减压浓缩1∶2，冷至45℃，加25％石灰乳，使PH值达12.0，滤过，沉淀加2倍量95％乙醇，放置过60目筛，用50％硫酸调节PH至3，充分搅匀，滤过，滤液用45％的氢氧化钠溶液中和至PH值到6.5，滤过，滤液减压浓缩，干燥，备用；黄芩加水煎煮三次，第一次2小时，第二、三次各1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至适量，用盐酸调PH值至1.2，60℃保温，静置，滤过，沉淀加适量水，搅匀，用25％氢氧化钠溶液调PH值至7.0，加等量乙醇，搅拌使溶解，滤过，滤液用盐酸调PH值至1.0，70℃保温，静置，滤过，沉淀依次用适量水及不同浓度的乙醇洗至PH至7.0，挥尽乙醇，减压干燥，备用；连翘粉碎，加水煎煮三次，每次1.5小时，合并煎液，滤过，滤液于60℃以下减压浓缩至相对密度为1.10的清膏，放冷，加入4倍量乙醇，搅匀，静置2小时，沉淀，滤过，滤液减压回收乙醇，浓缩液喷雾干燥，与上述金银花、黄芩提取物粉碎成细粉，加葡萄糖适量，混匀，60℃以下干燥，即得。

3、  如权利要求1所述的双黄连可溶性粉制备工艺所获得的双黄连可溶性粉在畜禽呼吸道感染性疾病中的应用。

双黄连可溶性粉制备工艺与应用
技术领域
本发明涉及一种具有抑菌、解热、镇咳之功效的中兽药制剂及其制备工艺与应用，特别是双黄连可溶性粉制备工艺与应用，本发明属于中药领域。
背景技术
呼吸系统感染性疾病是影响畜禽养殖业的最常见病之一，特别是近年来混合感染、继发感染、耐药菌感染的出现，呈现发病率高、病源复杂化、常规药物难以控制等特点，给养殖业带来严重的损失。
目前，治疗此类疾病常用化学合成的非甾体类抗炎镇痛药，药物残留较为严重。中兽药上，2005年版《中国兽药典》收载了“双黄连口服液”，但其有效成分相对较低，临床用药需要大剂量才会产生疗效。双黄连可溶性粉为纯中药提取的浸膏粉，有效成分含量较高，水溶性较好，适用于大规模养殖中的混饲、混饮给药，且不易产生耐药性，是畜禽呼吸道感染性疾病的必备良药。
畜禽呼吸系统感染在临床上主要表现为体温升高，可伴发疼痛，引起生理功能紊乱，产生各种炎症反应等。畜禽呼吸系统疾病主要是由于畜禽感染多种病原微生物导致，通过药效试验证明，双黄连可溶性粉具有抑菌、解热、镇咳作用，临床治疗畜禽呼吸系统疾病具有良好疗效。
发明内容
本发明目的是提供一种具有抑菌、解热、镇咳之功效的中兽药双黄连可溶性粉制备工艺与应用。
本发明双黄连可溶性粉由下列重量份数的药物组成：金银花800-1000份、黄芩800-1000份、连翘1600-2000份。
本发明双黄连可溶性粉制备方法如下：
将上述金银花加水煎煮二次，第一次1小时，第二次45分钟，合并煎液，减压浓缩(1∶2～2.5)，冷至45～60℃，加20～40％石灰乳，使PH值达11.0～13.0，滤过，沉淀加2～3倍量95％乙醇，放置过60目筛，用50％硫酸调节PH至3.0～4.0，充分搅匀，滤过，滤液用40～50％的氢氧化钠溶液中和至PH值到6.5～7.5，滤过，滤液减压浓缩，干燥，备用；黄芩加水煎煮三次，第一次2小时，第二、三次各1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至适量，用盐酸调PH值至1.0～2.0，60～80℃保温，静置，滤过，沉淀加适量水，搅匀，用20～40％氢氧化钠溶液调PH值至7.0，加等量乙醇，搅拌使溶解，滤过，滤液用盐酸调PH值至1.0～2.0，60～80℃保温，静置，滤过，沉淀依次用适量水及不同浓度的乙醇洗至PH至7.0，挥尽乙醇，减压干燥，备用；连翘粉碎，加水煎煮三次，每次1.5小时，合并煎液，滤过，滤液于60℃以下减压浓缩至相对密度为1.10～1.20(室温)的清膏，放冷，加入4～6倍量乙醇，搅匀，静置2～4小时，沉淀，滤过，滤液减压回收乙醇，浓缩液喷雾干燥，与上述金银花、黄芩提取物粉碎成细粉，加葡萄糖适量，混匀，60℃以下干燥，即得。
应说明的以下几点：鉴于大规模养殖时的需要，养殖户可以选择混饲、混饮给药。
双黄连可溶性粉在兽药临床的具有抑菌、解热、镇咳作用，对畜禽呼吸系统疾病具有良好疗效。
金银花对伤寒杆菌、副伤寒杆菌、大肠杆菌、变形杆菌、绿脓杆菌、百日咳杆菌、霍乱弧菌、葡萄球菌、链球菌、肺炎双球菌、脑膜炎球菌等均有抑制作用；对上呼吸道感染有关的不同病毒株有抑制或延缓细胞病变作用。
黄芩对多种球菌、杆菌和耐药的金黄色葡萄球菌有抑制作用，对流感病毒及皮肤真菌也有抑杀效果，体外试验有抑制阿米巴原虫生长和杀灭钩端螺旋体的作用。连翘对多种革兰阳性及阴性细菌均有抑制作用，在体外可抑制伤寒杆菌、副伤寒杆菌、大肠杆菌、痢疾杆菌、白喉杆菌及霍乱弧菌、葡萄球菌、链球菌等。
双黄连可溶性粉能明显抑制伤寒副伤寒疫苗导致的家兔发热；能明显延长小白鼠咳嗽潜伏期和减少咳嗽次数；对临床自然发病的上呼吸道感染病猪能明显起到解热、止咳作用。双黄连可溶性粉也能明显抑制由角叉菜胶引发的足肿胀炎症症状，能拮抗由组织胺引起的毛细血管通透性增加；降低由酵母菌或大肠杆菌引起的体温升高；降低由0.7％醋酸所致的扭体反应。
本发明临床应用效果见如下实验：
实验1
双黄连可溶性粉抑菌作用效果试验如下：
用琼脂平板二倍稀释法进行。双黄连可溶性粉原液最高、最低浓度分别为864mg/ml、6.75mg/ml。将浓度为1.2×107cfu/ml菌液5ul点种于系列浓度含药平板上，并以不含药的血平板点种作空白对照。37℃培养18h，观察并记录结果，平板有菌落生长用“+”，无菌落生长用“-”表示。
结果显示，双黄连可溶性粉对金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、溶血性链球菌、肺炎链球菌、大肠杆菌、伤寒杆菌6株细菌均有不同程度的体外抑菌作用。其中对肺炎链球菌、溶血性链球菌的作用最强，最低抑菌浓度为13.5mg/ml和54mg/ml；对金黄色葡萄球菌抑菌作用稍弱，MIC为108mg/ml，对表皮葡萄球菌的MIC为216mg/ml，对大肠杆菌、伤寒杆菌的MIC为432mg/ml。
实验2
双黄连可溶性粉对伤寒副伤寒疫苗致热家兔解热作用试验效果如下：
伤寒副伤寒疫苗致家兔发热模型
将伤寒副伤寒疫苗稀释后耳静脉注射，1ml/kg.bw，1h后测其升温程度，以＞0.8℃视为合格。
实验动物随机分成为5组，即：
(1)对照组：试验兔称取体重，实验前一天下午和当天上午，分别用电子测温计，测肛温(超过39℃或一日体温波动＞0.5℃者剔除)，实验动物15只，体温在38.6～39.2℃范围，体温波动在0.3℃，为适用试验兔，取其平均值做为基础体温。
(2)高剂量组：发热实验动物14只，每1升水添加本品4g，于给药后0.5、1、1.5、2、3、4、5h测肛温，与基础体温比较，计算温差。
(3)中剂量组：发热实验动物15只，每1升水添加本品2g，于给药后0.5、1、1.5、2、3、4、5h测肛温，与基础体温比较，计算温差。
(4)低剂量组：发热实验动物15只，每1升水添加本品1g，于给药后0.5、1、1.5、2、3、4、5h测肛温，与基础体温比较，计算温差。
(5)阿司匹林组：发热实验动物14只，于给药后0.5、1、1.5、2、3、4、5h测肛温，与基础体温比较，计算温差。
实验结果见下表1：
表1双黄连可溶性粉对伤寒副伤寒疫苗致热家兔解热作用试验效果

对伤寒副伤寒疫苗致热家兔的解热作用(x±s，n＝10)
注：经t检验，与对照组相比^*p＜0.05，^**p＜0.01
由上表说明，本发明双黄连可溶性粉解热作用起效快，32min起效，60min较好，其中高、中两个剂量组也可明显拮抗发热高峰，低剂量组拮抗发热高峰也显示了一定的优势，显示本药有较前的解热作用。
实验3
双黄连可溶性粉镇咳作用试验效果如下：
小鼠60只按体重随机分为4组，灌胃给药1次(0.2ml/10g)后1h，每鼠分别放入500ml的广口瓶内，瓶口悬一片滴有25％氨水0.3ml的滤纸，30秒后取出，观察并记录小鼠2分钟内的咳嗽次数和咳嗽潜伏期，实验结果见表2。
表2本发明双黄连可溶性粉对氨水引咳的小鼠咳嗽潜伏期和咳嗽次数的影响

与对照组比较，^*p＜0.05，^**p＜0.01
从表2看出，本发明双黄连可溶性粉高、中剂量组对氨水所致的小鼠咳嗽均有明显的抑制作用，并能延长其咳嗽潜伏期。
实验4
双黄连可溶性粉对自然发病治疗试验结果如下：
(1)病例的选择：按临床诊断观察和实验室检查进行诊断确定为非传染性发热性病猪，体温40.0℃～41.3℃，频发咳嗽，呼吸加快，拱腰颤栗。另选健康猪只20头作为健康对照组，试验前观察猪群的采食、体温等情况，临床观察正常方准许参与试验。
表3临床自然病例分组及处理

(2)人工发热病例观察指标观察：试验兔正常体温、造模体温、给药后0.5、1、1.5、2、3、4、5h体温，试验结果以体温降幅均值和标准偏差表示，组间均值比较比较进行t检验分析。
(3)临床自然病例观察指标：主要观察发热、咳嗽、食欲、呼吸、精神等指标综合评定疗效。
①治愈：试验5日内，病猪体温、咳嗽、食欲、呼吸及精神等症状均恢复正常者；
②显效：试验5日内，病猪体温、呼吸正常，咳嗽、食欲、精神明显好转；
③有效：试验5日内，病猪体温、咳嗽、呼吸、食欲、精神等症状有改善或缓解；
④无效：试验5日内，病猪体温、食欲、呼吸等临床症状无减轻甚至加重或死亡者为无效。
(4)自然发病治疗试验结果见表4：
表4双黄连可溶性粉对自然发病治疗试验结果

结果见表4，高剂量、中剂量本发明双黄连可溶性粉在症候、体温、咳嗽、食欲、精神等方面均有显著疗效，明显优于对照组药安乃近注射液，总显效率分别为90％、85％，(P＜0.01)；小剂量双黄连可溶性粉和安乃近对仔猪感冒发热均有较好的疗效。
由上述实验1、2、3、4可以看出，本发明双黄连可溶性粉对6株细菌均有不同程度的体外抑菌作用；对伤寒副伤寒疫苗致热家兔的解热作用，高、中两个剂量组也可明显拮抗发热高峰，低剂量组拮抗发热高峰也显示了一定的优势，显示本药有较强的解热作用对氨水所致的小鼠咳嗽均有明显的抑制作用，并能延长其咳嗽潜伏期。对自然感染的病例高剂量、中剂量双黄连可溶性粉在症候、体温、咳嗽、食欲、精神等方面均有显著疗效，明显优于对照组药安乃近注射液，总显效率分别为90％、85％，(P＜0.01)。这些实验疗效结果表明，双黄连可溶性粉对畜禽呼吸道疾病引起的体温升高，咳嗽、伴发疼痛，生理功能紊乱等症状疗效确切。
具体实施例
实施例1
本发明由下列重量份数的药物制成：金银花800份、黄芩800份、连翘1600份。
本发明的双黄连可溶性粉的制法为：
首先把金银花加水煎煮二次，第一次1小时，第二次45分钟，合并煎液，减压浓缩1∶2，冷至45℃，加25％石灰乳，使PH值达12.0，滤过，沉淀加2倍量95％乙醇，放置过60目筛，用50％硫酸调节PH至3，充分搅匀，滤过，滤液用45％的氢氧化钠溶液中和至PH值到6.5，滤过，滤液减压浓缩，干燥，备用；黄芩加水煎煮三次，第一次2小时，第二、三次各1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至适量，用盐酸调PH值至1.2，60℃保温，静置，滤过，沉淀加适量水，搅匀，用25％氢氧化钠溶液调PH值至7.0，加等量乙醇，搅拌使溶解，滤过，滤液用盐酸调PH值至1.0，70℃保温，静置，滤过，沉淀依次用适量水及不同浓度的乙醇洗至PH至7.0，挥尽乙醇，减压干燥，备用；连翘粉碎，加水煎煮三次，每次1.5小时，合并煎液，滤过，滤液于60℃以下减压浓缩至相对密度为1.10的清膏，放冷，加入4倍量乙醇，搅匀，静置2小时，沉淀，滤过，滤液减压回收乙醇，浓缩液喷雾干燥，与上述金银花、黄芩提取物粉碎成细粉，加葡萄糖适量，混匀，60℃以下干燥，即得。
实施例2
本发明由下列重量份数的药物制成：金银花900份、黄芩900份、连翘1800份。
本发明的双黄连可溶性粉的制法为
将上述金银花加水煎煮二次，第一次1小时，第二次45分钟，合并煎液，减压浓缩2.2，冷至50℃，加30％石灰乳，使PH值达13，滤过，沉淀加3倍量95％乙醇，放置过60目筛，用50％硫酸调节PH至4，充分搅匀，滤过，滤液用50％的氢氧化钠溶液中和至PH值到7，滤过，滤液减压浓缩，干燥，备用；黄芩加水煎煮三次，第一次2小时，第二、三次各1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至适量，用盐酸调PH值至2.0，80℃保温，静置，滤过，沉淀加适量水，搅匀，用40％氢氧化钠溶液调PH值至7.0，加等量乙醇，搅拌使溶解，滤过，滤液用盐酸调PH值至2.0，80℃保温，静置，滤过，沉淀依次用适量水及不同浓度的乙醇洗至PH至7.0，挥尽乙醇，减压干燥，备用；连翘粉碎，加水煎煮三次，每次1.5小时，合并煎液，滤过，滤液于60℃以下减压浓缩至相对密度为1.20(室温)的清膏，放冷，加入6倍量乙醇，搅匀，静置4小时，沉淀，滤过，滤液减压回收乙醇，浓缩液喷雾干燥，与上述金银花、黄芩提取物粉碎成细粉，加葡萄糖适量，混匀，60℃以下干燥，即得。