一种从油茶饼粕减压沸腾提取高纯度茶皂素的方法.pdf

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1、(10)申请公布号 CN 102276679 A (43)申请公布日 2011.12.14 C N 1 0 2 2 7 6 6 7 9 A *CN102276679A* (21)申请号 201110174573.2 (22)申请日 2011.06.27 C07J 63/00(2006.01) C07H 15/256(2006.01) C07H 1/08(2006.01) (71)申请人中国林业科学研究院林产化学工业 研究所 地址 210042 江苏省南京市玄武区锁金五村 16号 (72)发明人王成章 周昊 (54) 发明名称 一种从油茶饼粕减压沸腾提取高纯度茶皂素 的方法 (57) 摘要 本发。

2、明涉及一种从油茶饼粕减压沸腾提取高 纯度茶皂素的方法，以脱脂后的油茶饼粕为原料， 用含水乙醇为提取溶剂，采用减压沸腾提取，提取 液过滤后，过陶瓷膜，将过陶瓷膜的茶皂素溶液回 收乙醇浓缩，浓缩液再经过大孔树脂吸附和中低 压柱色谱分离，制备得到高纯度的油茶皂苷。采 用该技术制得的茶皂素颜色淡，纯度高，可达到 95以上，可以成为工业上生产茶皂素产品的一 种新技术。 (51)Int.Cl. (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书 1 页 说明书 11 页 附图 4 页 CN 102276682 A 1/1页 2 1.一种从油茶饼粕减压沸腾提取高纯度茶皂素的方法，其特征在。

3、于，其步骤如下： (1)减压提取 将脱脂后的油茶饼粕，用6090乙醇为提取溶剂，减压沸腾提取530min，提取溶 剂与油茶饼粕的比例为1301，提取温度为2070，提取压力为0.010.08MPa， 提取14次，提取液过滤后，配制成浓度为14的料液； (2)膜纯化 将上述料液用0.05m0.2m孔径的陶瓷膜过滤，操作压力为0.150.3MPa，将过 陶瓷膜的茶皂素溶液减压回收乙醇浓缩至含原料13g/ml的溶液； (3)树脂吸附 浓缩液上树脂吸附，先以水洗至无色，再以0.050.3NaOH溶液洗脱除去杂质，水 洗至中性，再以4090乙醇洗脱，收集乙醇洗脱部分，乙醇洗脱液减压回收乙醇浓缩、 干燥，。

4、得到茶皂素粗品； (4)中低压柱色谱分离 将茶皂素粗品用少量水溶解，通过中低压柱色谱分离，先用040的稀醇洗去杂质， 再用6095的醇液洗脱，洗脱液减压回收溶剂浓缩，经HPLC分析，制备得到纯度为95 以上的油茶皂素。 2.如权利要求1所述的一种从油茶饼粕减压沸腾提取高纯度茶皂素的方法，其特征在 于：步骤(1)中所述油茶饼粕油脂含量低于3，水份低于6。 3.如权利要求1所述的一种从油茶饼粕减压沸腾提取高纯度茶皂素的方法，其特征在 于：步骤(1)中所述减压沸腾提取为热回热、微波提取或超声波提取中的一种。 4.如权利要求1所述的一种从油茶饼粕减压沸腾提取高纯度茶皂素的方法，其特征在 于：步骤(2)。

5、、(3)、(4)中所述减压浓缩的温度为6070，浓缩压力为0.060.10MPa。 5.如权利要求1所述的一种从油茶饼粕减压沸腾提取高纯度茶皂素的方法，其特征在 于：步骤(3)中所述的树脂类型为大孔树脂AB-8、D101、DM130或HB60中的一种。 6.如权利要求1所述的一种从油茶饼粕减压沸腾提取高纯度茶皂素的方法，其特征在 于：步骤(3)中所述的洗脱用NaOH溶液和乙醇溶液的用量都为36倍的柱体积。 7.如权利要求1所述的一种从油茶饼粕减压沸腾提取高纯度茶皂素的方法，其特征在 于：步骤(3)中所述的干燥为真空干燥、喷雾干燥或冷冻干燥中的一种。 8.如权利要求1所述的一种从油茶饼粕中制备高。

6、纯度茶皂素的方法，其特征在于：步 骤(4)中所述HPLC分析，色谱条件为：色谱柱C 18 ODS(4.6mm200mm，5m)，流动相：甲 醇-水(含0.05的冰醋酸)体积比64，紫外(190220nm)或示差检测器检测，流速 1ml/min。 9.如权利要求1所述的一种从油茶饼粕中制备高纯度茶皂素的方法，其特征在于：步 骤(4)中所述中低压色谱分离是将茶皂素粗品与中低压柱填料按质量比11550吸 附，色谱柱填料为C 30 、C 18 或C 8 中的一种，洗脱用的醇为甲醇或乙醇中的一种，中压柱柱长为 20300cm，柱直径为230cm，柱压为320MPa，紫外(190220nm)或示差检测器检。

7、 测，流速为2200ml/min。 权 利 要 求 书CN 102276679 A CN 102276682 A 1/11页 3 一种从油茶饼粕减压沸腾提取高纯度茶皂素的方法 技术领域 0001 本发明涉及植物提取物技术领域，特别是涉及一种从油茶饼粕减压沸腾提取高纯 度茶皂素的方法。 背景技术 0002 油茶(Camellia Oleiferal Abel.)为山茶科(Theacea)山茶属(Camellia)植物。 我国的油茶资源丰富，主要分布于中国的湖南、湖北、江西、安徽等省。油茶籽榨除脂肪油的 渣滓称油茶饼粕，茶皂素主要存在于油茶饼粕中，我国每年至少有100万吨左右的油茶饼 粕资源，利用。

8、起来每年至少可以生产出20万吨的茶皂素。如能充分提取分离出高纯度的茶 皂素，综合利用油茶饼粕，就可以将其变废为宝，增加农民收入，也有益于环境保护，产生可 观的社会效益和经济效益。 0003 茶皂素是一类结构复杂的糖苷化合物，是齐墩果烷型五环三萜类皂苷的混合物， 其基本结构包括皂苷元、糖体、有机酸3部分。茶皂素为乳白色或淡黄色固体无定形粉末， 具有吸湿性。茶皂素结晶易溶于含水的甲醇、乙醇、正丁醇及冰醋酸中；难溶于冷水、无水 乙醇，无水甲醇，但溶于热的乙醇，甲醇中；不溶于乙醚、氯仿、石油醚、丙酮及苯等溶剂。茶 皂素是一种优良的非离子型表面活性剂，在乳化、分散、湿润、发泡稳泡、去污以及O/W型乳 化。

9、等方面具有良好的活性。另外还具有多种生理活性，如抗渗、消炎、镇痛、抗氧化、杀菌、杀 虫、溶血、鱼毒、抗高血压、抑制酒精吸收和保护胃肠等药理作用。随着茶皂素药理活性研究 和天然表面活性的性质研究进展，目前对茶皂素的提取纯化尤为重要，以便开辟其广阔的 应用前景。 0004 茶皂素的分析方法主要有重量法，紫外法和HPLC法，其中重量法和紫外法容易受 其它成分的干扰，造成分析结果的不准确，HPLC法分析结果可靠准确，但是茶皂素的紫外吸 收比较弱，目前大多采用紫外检测器分析，也有用示差检测器，但是方法都不是很完善，因 此有必要建立准确可靠的茶皂素的HPLC分析方法。 0005 目前国内外专利报道的茶皂素。

10、提取方法主要是采用水或含水醇液常压下热提取， 存在提取所消耗的溶剂量大，溶剂回收浓缩困难，提取效率低，提取时间长，能耗高等缺点； 分离纯化方法主要有溶剂萃取法、沉淀法、微生物法，以及采用单一的膜分离或大孔树脂吸 附。这些方法存在操作复杂、成本高、使用的试剂毒性大，污染环境，易燃易爆，具有生产安 全隐患等缺点，且所得的茶皂素产品色泽深、纯度低，严重影响茶皂素资源的利用和开发。 0006 CN200710042332.6公开了一种用正丁醇萃取纯化茶皂素的方法，以茶油耙为原 料，先以低沸点的醇提取，回收溶剂得浸膏，浸膏用无水正丁醇热提茶皂素，回收正丁醇得 到茶皂素固体，纯度在90左右，得率为12.5。

11、。该方法所得的茶皂素纯度相对较高，但是 得率偏低，且正丁醇有一定的毒性，其沸点很高，回收不仅费时，对成分也有影响。 0007 CN200610050406.6提出一种以乙醚为沉淀剂制取茶皂素提取物的方法，该方法以 茶籽饼粕为原料，以甲醇提取，然后用乙醚沉淀得到絮状的茶皂素。该方法所用的甲醇对人 体伤害大，乙醚属于易燃易爆品，安全性低，不适合工业化生产。 说 明 书CN 102276679 A CN 102276682 A 2/11页 4 0008 CN200510018694.2公开一种以微生物提取分离茶皂素的方法，先用外源添加的高 淀粉类物质与复合酶、酒精酵母混合发酵5天产生酒精，形成醪液，。

12、然后将油茶饼粕浸泡到 醪液中混匀培养3天，上清液浓缩干燥得茶皂素。所得茶皂素纯度为60。该方法耗时比 较长，操作繁琐，且所得的产品纯度太低。 0009 CN1058971C发明了一种用超滤膜法提取精制茶皂素的方法，将脱脂后的油茶饼粕 用热水浸提，然后将提取液过超滤膜纯化，浓缩透过液，干燥得茶皂素。该方法以水为提取 溶剂，会将淀粉、多糖、蛋白质等杂质一并提取出来，使得产品的纯度不高，且颜色比较深， 水溶液浓缩困难，会增加生产的成本。 0010 CN200710168737.4发明了一种以大孔树脂纯化茶皂素的方法，以脱脂后的油茶饼 粕为原料，以高浓度的醇溶液提取后上大孔树脂吸附，然后直接用醇溶液洗。

13、脱，洗脱液回收 醇浓缩干燥得茶皂素产品。该方法所得的茶皂素产品纯度较高，达到90以上，但产品的色 泽太深。 0011 针对以上发明的不足，本发明提出采用减压沸腾法提取油茶饼粕中茶皂素，然后 再通过陶瓷膜、大孔树脂和中低压色谱柱纯化得到高纯度油茶皂素。该方法提取效率高，使 用溶剂少，安全无毒，工艺操作简单，所使用的溶剂和大孔树脂均可重复利用，生产成本低， 生产的茶皂素纯度高，达到95以上，且颜色很淡，为白颜色。可以成为工业上生产茶皂素 产品的一种新技术。 发明内容 0012 本发明的目的在于提供一种从油茶饼粕减压沸腾提取高纯度茶皂素的方法，该方 法操作简单，生产成本低，所得的茶皂素产品纯度高，颜。

14、色淡，适合工业化生产。 0013 本发明是通过以下技术方案实现的。 0014 一种从油茶饼粕减压沸腾提取高纯度茶皂素的方法，具体步骤如下： 0015 1.一种从油茶饼粕减压沸腾提取高纯度茶皂素的方法，其特征在于，其步骤如 下： 0016 (1)减压提取 0017 将脱脂后的油茶饼粕，用6090乙醇为提取溶剂，减压沸腾提取530min， 提取溶剂与油茶饼粕的比例为1301，提取温度为2070，提取压力为0.01 0.08MPa，提取14次，提取液过滤后，配制成浓度为14的料液； 0018 (2)膜纯化 0019 将上述料液用0.05m0.2m孔径的陶瓷膜过滤，操作压力为0.150.3MPa， 将。

15、过陶瓷膜的茶皂素溶液减压回收乙醇浓缩至含原料13g/ml的溶液； 0020 (3)树脂吸附 0021 浓缩液上树脂吸附，先以水洗至无色，再以0.050.3NaOH溶液洗脱除去杂 质，水洗至中性，再以4090乙醇洗脱，收集乙醇洗脱部分，乙醇洗脱液减压回收乙醇 浓缩、干燥，得到茶皂素粗品； 0022 (4)中低压柱色谱分离 0023 将茶皂素粗品用少量水溶解，通过中低压柱色谱分离，先用040的稀醇洗去 杂质，再用6095的醇液洗脱，洗脱液减压回收溶剂浓缩，经HPLC分析，制备得到纯度为 说 明 书CN 102276679 A CN 102276682 A 3/11页 5 95以上的油茶皂素。 00。

16、24 本专利以脱脂后的油茶饼粕为原料，采用减压沸腾法提取茶皂素，减压沸腾提取 为热回热、微波提取或超声波提取中一种，用6090乙醇为提取溶剂，提取溶剂与油茶 饼粕的比例为1301，优选5151，提取时间为430min，优选815min，提取 温度为2070，优选4060，提取压力为0.010.08MPa，优选0.030.06MPa，提 取14次，优选23次，油茶皂素的提取率大于90。 0025 本专利采用膜分离纯化提取液，选择0.05m0.2m孔径的陶瓷膜过滤，膜孔 径优选0.05m，操作压力为0.150.3MPa，优选压力为0.15MPa，结果表明，0.05m孔径 的膜通量、茶皂素转移率和除。

17、杂率都相对较高。操作压力在0.15MPa时有最大的膜通量，随 着压力的增大，膜通量迅速降低。当压力超过0.3MPa时，几乎没有膜通量，当出样口压力一 定时，进样口压力越大，膜通量也越大，但过大的进样口压力会对膜材料有很大的磨损。故 优选操作压力为0.15MPa。将陶瓷膜透过液减压回收乙醇浓缩至含原料13g/ml的溶液 进行树脂吸附分离。 0026 本专利采用大孔树脂吸附，先以水洗至无色，再以0.050.3NaOH溶液洗脱 除去杂质，水洗至中性，再以4090乙醇洗脱，优选为4060乙醇，收集乙醇洗脱 部分，乙醇洗脱液减压回收乙醇浓缩、干燥，得到茶皂素粗品。洗脱用NaOH溶液和乙醇溶液 的用量都为。

18、36倍的柱体积，优选为34倍的柱体积。所述的大孔树脂类型为AB-8、 D101、DM130或HB60中的一种，本发明考察了不同大孔树脂对茶皂素的静态吸附容量试验 和静态吸附-洗脱性能试验。结果表明AB-8和DM130均有较大的吸附容量，并且在解吸附 试验中，AB-8树脂的解吸量和洗脱液中茶皂素的纯度均高于DM130树脂，故优选使用AB-8 树脂分离纯化茶皂素。 0027 茶皂素是一种非离子型极性物质，混杂的杂质单宁，黄酮及糖类物质也是非离子 型化合物，其极性和分子量与茶皂素接近。在使用大孔吸附树脂对其分离时，若只采用醇溶 液洗脱，很难将它们与茶皂素彻底分离，致使所得产品颜色很深。考虑到黄酮和单。

19、宁属酚类 物质，在碱性环境中容易以离子化状态存在，吸附力减弱、容易被洗脱，在洗脱过程中增加 碱液洗脱这一步骤，可除去部分单宁与黄酮类物质，提高分离效果。 0028 本发明考察不同碱液浓度对除杂的影响，分别选取0.05、0.1、0.2、0.3、 0.5NaOH溶液洗脱，洗至流出液颜色较淡，收集洗脱液，测A 550 。结果表明，当碱液浓度高 于0.2时，茶皂素也被部分洗脱下来，损失随碱液浓度的增高而增大，故优选0.2碱溶 液除杂。 0029 本发明对大孔树脂的洗脱溶剂进行了考察，取已充分吸附茶皂素的AB-8树脂 100ml装柱，分别以蒸馏水及20、40、60、80、95乙醇各400ml恒速洗脱，每。

20、个浓度 收集为1个流份，分别测定各洗脱液流份中皂苷的质量，结果表明，60乙醇可将95以上 的茶皂素洗脱下来。故优选60乙醇为洗脱溶媒。 0030 大孔树脂纯化后的茶皂素粗品纯度为7585，且颜色较深，呈褐色，需要对 茶皂素进行进一步精制纯化，为了得到颜色淡且纯度在95以上的茶皂素，本发明采用中 低压柱色谱进行纯化，将茶皂素粗品与中低压柱填料按质量比11550吸附，色谱柱填 料为C 30 、C 18 或C 8 中的一种，洗脱用的醇为甲醇或乙醇中的一种，中压柱柱长为20300cm， 柱直径为230cm，柱压为320MPa，紫外(190220nm)或示差检测器检测，流速为2 说 明 书CN 1022。

21、76679 A CN 102276682 A 4/11页 6 200ml/min。先用040的稀醇洗去杂质，再用6095的醇液洗脱，洗脱液减压回收 溶剂浓缩，经HPLC分析，制备得到纯度为95以上的油茶皂素。 0031 本发明茶皂素的干燥方式为真空干燥、喷雾干燥或冷冻干燥中的一种；真空干 燥为普通真空干燥或微波真空干燥，普通真空干燥条件为温度6090，真空度90 100KPa，微波真空干燥条件为温度3060，真空度80100KPa，微波功率8001600w； 喷雾干燥条件为进风温度160200，进料流量200400ml/h，出风温度60100； 冷冻干燥条件为温度-30-50，时间1224h。。

22、 0032 本发明采用HPLC测定茶皂素的纯度，色谱条件为：色谱柱 C 18 ODS(4.6mm200mm，5m)，流动相：甲醇-水(含0.05的冰醋酸)体积比64，紫 外(190220nm)或示差检测器检测，流速为1ml/min。 0033 本发明的有益效果： 0034 (1)首次采用减压沸腾法提取油茶中茶皂素，该方法提取效率高，提取温度低，提 取时间短，可减少杂质的含量，且大大降低了能耗；提取的茶皂素醇溶液不需要脱醇直接过 陶瓷膜，不仅可以简化工艺，而且可以降低能耗。 0035 (2)首次采用膜分离、大孔树脂分离和中低压柱色谱纯化集成技术，分离纯化效果 比一般传统方法要好，纯度可达到95以。

23、上，颜色淡，为白色。 0036 (3)本发明采用碱水除杂后再用醇溶液洗脱树脂，可除去大量与茶皂素极性相似 的单宁和黄酮类物质，有效提高茶皂素的纯度；建立了茶皂素的HPLC分析方法，可更好地 控制茶皂素的质量。 0037 (4)本发明工艺操作简单，生产成本低，安全性高，适合工业化生产。 附图说明 0038 图1油茶皂素的制备方法流程图 0039 图2不同膜孔径下膜通量随时间的变化 0040 图3不同膜孔径对总油茶皂苷转移率及除杂率的影响 0041 图4不同操作压差下膜通量的变化 0042 图5NaOH溶液浓度对除杂的影响 0043 图6茶皂素粗品的HPLC(紫外检测器)图谱 0044 图7茶皂素。

24、精制品的HPLC(紫外检测器)图谱 0045 图8茶皂素粗品的HPLC(示差检测器)图谱 0046 图9茶皂素精制品的HPLC(示差检测器)图谱 具体实施方式 0047 以下实施例对本发明作进一步详细的描述，本发明不受此限制。 0048 实施例1 0049 油茶中茶皂素的HPLC分析方法 0050 方法一：采用紫外检测方法 0051 (1)色谱条件：色谱柱C 18 ODS(4.6mm200mm，5m)，流动相：甲醇-水(含 0.05的冰醋酸)体积比64，检测波长210nm，流速为1ml/min。 说 明 书CN 102276679 A CN 102276682 A 5/11页 7 0052 (。

25、2)标准曲线绘制：取茶皂素标准品0.1g，用80乙醇溶于100ml容量瓶中，制成 茶皂素标准品溶液浓度为1mg/ml。分别取标准溶液1，2，3，4，5ml于10ml容量瓶中，配制成 0.1，0.2，0.3，0.4，0.5mg/ml的标准液。以80乙醇溶液为空白，绘制标准曲线，标准曲线 方程为y1.6658x-0.7123，r0.9995。 0053 (3)样品纯度测定：分别取茶皂素粗品和精制品0.5g，用80乙醇溶于50ml容 量瓶中，照上述方法HPLC测定，结果茶皂素粗品的纯度为7585，茶皂素精制品纯度为 9599。 0054 方法二：采用示差检测方法 0055 (1)色谱条件：色谱柱C 。

26、18 ODS(4.6mm200mm，5m)，流动相：甲醇-水(含 0.05的冰醋酸)体积比64，示差检测，流速为1ml/min。 0056 (2)标准曲线绘制：取茶皂素标准品0.1g，用80乙醇溶于100ml容量瓶中，制成 茶皂素标准品溶液浓度为1mg/ml。分别取标准溶液1，2，3，4，5ml于10ml容量瓶中，配制成 0.1，0.2，0.3，0.4，0.5mg/ml的标准液。以80乙醇溶液为空白，绘制标准曲线，标准曲线 方程为y1.8734x-0.9667，r0.9998。 0057 (3)样品纯度测定：分别取茶皂素粗品和精制品0.5g，用80乙醇溶于50ml容 量瓶中，照上述方法HPLC。

27、测定，结果茶皂素粗品的纯度为7585，茶皂素精制品纯度为 9599。 0058 实施例2 0059 减压提取 0060 以脱脂后的油茶饼粕为原料，采用减压沸腾法提取茶皂素，用6090乙醇为提 取溶剂，提取溶剂与油茶饼粕的比例为1301，优选5151，提取时间为430min， 优选815min，提取温度为2070，优选4060，提取压力为0.010.08MPa，优 选0.030.06MPa，提取14次，优选23次，油茶皂素的提取率大于90。 0061 本发明研究了提取压力、醇浓度、料液比和提取时间对茶皂素提取率的影响，设计 了4因素4水平L 16 (4 4 )正交试验，以茶皂素的提取率为指标考察。

28、减压沸腾提取工艺，试 验结果见表1，表2。 0062 表1正交试验数据及其计算分析结果 说 明 书CN 102276679 A CN 102276682 A 6/11页 8 0063 0064 表2方差分析 0065 0066 由方差分析表可以看出，四因素对茶皂素提取的影响依次为提取压力醇浓度 提取时间料液比。优选提取工艺为原料用80乙醇提取，料液比为18，提取压力为 0.05MPa，提取时间为10min，提取2次。 0067 实施例3 0068 膜纯化工艺 0069 将提取液配制成浓度为14的料液，将上述料液用0.05m0.2m孔径 的陶瓷膜过滤，优选膜孔径为0.05m，操作压力为0.150。

29、.3MPa，优选压力为0.15MPa，将 过陶瓷膜的茶皂素溶液减压回收乙醇浓缩至含原料13g/ml的溶液。 0070 本发明选取0.2m，0.1m，0.05m膜孔径，考察膜孔径对膜通量、茶皂素转移 说 明 书CN 102276679 A CN 102276682 A 7/11页 9 率和除杂率的影响，结果如图3、图4所示。从图中可以看出随着膜过滤时间的延长膜通量 都有不同程度的下降。结果表明，0.05m孔径的膜通量、茶皂素转移率和除杂率都相对较 高，故优选0.05m孔径的陶瓷膜进行纯化。 0071 本发明采用不同操作压力对0.05m孔径膜通量的变化进行研究，结果见图5。 结果表明，操作压力在0。

30、.15MPa时有最大的膜通量，随着压力的增大，膜通量迅速降低。当 压力超过0.3MPa时，几乎没有膜通量，当出样口压力一定时，进样口压力越大，膜通量也越 大，但过大的进样口压力会对膜材料有很大的磨损。故优选操作压力为0.15MPa。 0072 实施例4 0073 树脂吸附工艺 0074 上述过陶瓷膜浓缩液上大孔树脂吸附，先以水洗至无色，再以0.050.3 NaOH溶液洗脱除去杂质，水洗至中性，再以4090乙醇洗脱，优选为4060乙醇， 收集乙醇洗脱部分，乙醇洗脱液减压回收乙醇浓缩、干燥，得到茶皂素粗品。 0075 所述的洗脱用NaOH溶液和乙醇溶液的用量都为36倍的柱体积，优选为34 倍的柱体。

31、积。 0076 所述的大孔树脂类型为AB-8、D101、DM130或HB60中的一种，本发明考察了不同大 孔树脂对茶皂素的静态吸附容量试验和静态吸附-洗脱性能试验，结果见表3。结果表明 AB-8和DM130均有较大的吸附容量，并且在解吸附试验中，AB-8树脂的解吸量和洗脱液中 茶皂素的纯度均高于DM130树脂，故优选使用AB-8树脂分离纯化茶皂素。 0077 表3不同树脂对茶皂素的静态吸附-洗脱性能试验 0078 0079 茶皂素是一种非离子型极性物质，混杂的杂质单宁，黄酮及糖类物质也是非离子 型化合物，其极性和分子量与茶皂素接近。在使用大孔吸附树脂对其分离时，若只采用醇溶 液洗脱，很难将它们。

32、与茶皂素彻底分离，致使所得产品颜色很深。考虑到黄酮和单宁属酚类 物质，在碱性环境中容易以离子化状态存在，吸附力减弱、容易被洗脱，在洗脱过程中增加 碱液洗脱这一步骤，可除去部分单宁与黄酮类物质，提高分离效果。 0080 本发明考察不同碱液浓度对除杂的影响，分别选取0.05、0.1、0.2、0.3、 0.5NaOH溶液洗脱，洗至流出液颜色较淡，收集洗脱液，测A 550 。结果见图6，当碱液浓度 高于0.2时，茶皂素也被部分洗脱下来，损失随碱液浓度的增高而增大，故优选0.2碱 溶液除杂。 0081 本发明对大孔树脂的洗脱溶剂进行了考察，取已充分吸附茶皂素的AB-8树脂 100ml装柱，分别以蒸馏水及。

33、20、40、60、80、95乙醇各400ml恒速洗脱，每个浓度 收集为1个流份，分别测定各洗脱液流份中皂苷的质量，结果见表4。结果表明，60乙醇可 将95以上的茶皂素洗脱下来。故优选60乙醇为洗脱溶媒。 0082 表4大孔树脂洗脱溶剂的选择 说 明 书CN 102276679 A CN 102276682 A 8/11页 10 0083 0084 实施例5 0085 中低压柱色谱分离纯化 0086 通过大孔树脂纯化后的茶皂素粗品纯度为7585，且颜色较深，呈褐色，需 要对茶皂素进行进一步精制纯化，为了得到颜色淡且纯度在95以上的茶皂素，本发明采 用中低压柱色谱进行纯化，将茶皂素粗品与中低压柱填。

34、料按质量比11550吸附，色谱 柱填料为C 30 、C 18 或C 8 中的一种，洗脱用的醇为甲醇或乙醇中的一种，中压柱柱长为20 300cm，柱直径为230cm，柱压为320MPa，紫外(190220nm)或示差检测器检测，流 速为2200ml/min。先用040的稀醇洗去杂质，再用6095的醇液洗脱，洗脱液 减压回收溶剂浓缩，经HPLC分析，制备得到纯度为95以上的油茶皂素。茶皂素粗品和精 制品的HPLC纯度检测见图6、图7、图8、图9。 0087 实施例6： 0088 高纯度茶皂素的制备 0089 (1)减压提取 0090 将脱脂后的油茶饼粕1000g，用60乙醇溶液为提取溶剂，减压沸腾。

35、提取8min，提 取溶剂与油茶饼粕的比例为61，提取温度为40，提取压力为0.03MPa，提取2次，提取 液过滤后，配制成浓度为1浓度的料液； 0091 (2)膜纯化 0092 将上述料液用0.05m孔径的陶瓷膜过滤，操作压力为0.15MPa，将过陶瓷膜的 茶皂素溶液减压回收乙醇浓缩至含原料1g/ml的溶液(浓缩温度为60，浓缩压力为 0.07MPa)。 0093 (3)树脂吸附 0094 a.湿法装柱，柱直径6cm，高80cm，AB-8树脂装量为2kg。 0095 b.上述过陶瓷膜浓缩液上大孔树脂吸附，先以4倍柱体积的水洗至无色，再以3倍 柱体积的0.2NaOH溶液洗脱除去杂质，水洗至中性，。

36、再以3倍柱体积60乙醇洗脱，收集 乙醇洗脱部分，乙醇洗脱液减压回收乙醇浓缩(浓缩温度为60，浓缩压力为0.07MPa)、真 空干燥，得到茶皂素粗品162.4g，茶皂素得率为16.24，纯度为83.28。 0096 (4)中低压柱色谱分离 0097 a.湿法装柱，柱直径3cm，高40cm，色谱柱填料为C 18 (300目)，填料装样量为200g。 0098 b.将茶皂素粗品10g用少量水溶解，通过中低压柱色谱分离，柱压为3MPa，流速为 10ml/min，先用5倍柱体积20的甲醇洗去杂质，再用5倍柱体积60的甲醇溶液洗脱，洗 脱液减压回收溶剂浓缩，经HPLC分析(紫外检测，波长为210nm)，制。

37、备得到茶皂素9.25g， 纯度为97.56，颜色为白色。 说 明 书CN 102276679 A CN 102276682 A 9/11页 11 0099 实施例7： 0100 (1)减压提取 0101 将脱脂后的油茶饼粕1000g，用70乙醇溶液为提取溶剂，减压沸腾提取10min， 提取溶剂与油茶饼粕的比例为81，提取温度为50，提取压力为0.04MPa，提取2次，提 取液过滤后，配制成浓度为2浓度的料液； 0102 (2)膜纯化 0103 将上述料液用0.1m孔径的陶瓷膜过滤，操作压力为0.20MPa，将过陶瓷膜的 茶皂素溶液减压回收乙醇浓缩至含原料2g/ml的溶液(浓缩温度为70，浓缩压。

38、力为 0.08MPa)。 0104 (3)树脂吸附 0105 a.湿法装柱，柱直径6cm，高80cm，D101树脂装量为2kg。 0106 b.上述过陶瓷膜浓缩液上大孔树脂吸附，先以4倍柱体积的水洗至无色，再以4倍 柱体积的0.1NaOH溶液洗脱除去杂质，水洗至中性，再以4倍柱体积70乙醇洗脱，收集 乙醇洗脱部分，乙醇洗脱液减压回收乙醇浓缩(浓缩温度为70，浓缩压力为0.08MPa)、喷 雾干燥，得到茶皂素粗品158.1g，茶皂素得率为15.81，纯度为81.45。 0107 (4)中低压柱色谱分离 0108 a.湿法装柱，柱直径3cm，高40cm，色谱柱填料为C 8 (300目)，填料装样量。

39、为200g。 0109 b.将茶皂素粗品10g用少量水溶解，通过中低压柱色谱分离，柱压为4MPa，流速为 12ml/min，先用5倍柱体积30的甲醇洗去杂质，再用5倍柱体积70的甲醇溶液洗脱，洗 脱液减压回收溶剂浓缩，经HPLC分析(紫外检测，波长为210nm)，制备得到茶皂素9.03g， 纯度为96.54，颜色为白色。 0110 实施例8： 0111 (1)减压提取 0112 将脱脂后的油茶饼粕1000g，用80乙醇溶液为提取溶剂，减压沸腾提取12min， 提取溶剂与油茶饼粕的比例为101，提取温度为60，提取压力为0.05MPa，提取2次，提 取液过滤后，配制成浓度为3浓度的料液； 011。

40、3 (2)膜纯化 0114 将上述料液用0.2m孔径的陶瓷膜过滤，操作压力为0.25MPa，将过陶瓷膜的 茶皂素溶液减压回收乙醇浓缩至含原料2g/ml的溶液(浓缩温度为60，浓缩压力为 0.08MPa)。 0115 (3)树脂吸附 0116 a.湿法装柱，柱直径6cm，高80cm，DM130树脂装量为2kg。 0117 b.上述过陶瓷膜浓缩液上大孔树脂吸附，先以4倍柱体积的水洗至无色，再以5倍 柱体积的0.2NaOH溶液洗脱除去杂质，水洗至中性，再以5倍柱体积60乙醇洗脱，收集 乙醇洗脱部分，乙醇洗脱液减压回收乙醇浓缩(浓缩温度为60，浓缩压力为0.08MPa)、冷 冻干燥，得到茶皂素粗品16。

41、2.1g，茶皂素得率为16.21，纯度为84.06。 0118 (4)中低压柱色谱分离 0119 a.湿法装柱，柱直径3cm，高40cm，色谱柱填料为C 18 (300目)，填料装样量为200g。 0120 b.将茶皂素粗品10g用少量水溶解，通过中低压柱色谱分离，柱压为5MPa，流速 说 明 书CN 102276679 A CN 102276682 A 10/11页 12 为10ml/min，先用5倍柱体积20的甲醇洗去杂质，再用5倍柱体积70的甲醇溶液洗 脱，洗脱液减压回收溶剂浓缩，经HPLC分析(示差检测)，制备得到茶皂素9.37g，纯度为 97.61，颜色为白色。 0121 实施例9：。

42、 0122 (1)减压提取 0123 将脱脂后的油茶饼粕1000g，用90乙醇溶液为提取溶剂，减压沸腾提取15min， 提取溶剂与油茶饼粕的比例为121，提取温度为50，提取压力为0.06MPa，提取2次，提 取液过滤后，配制成浓度为1浓度的料液； 0124 (2)膜纯化 0125 将上述料液用0.05m孔径的陶瓷膜过滤，操作压力为0.15MPa，将过陶瓷膜的 茶皂素溶液减压回收乙醇浓缩至含原料3g/ml的溶液(浓缩温度为70，浓缩压力为 0.08MPa)。 0126 (3)树脂吸附 0127 a.湿法装柱，柱直径6cm，高80cm，HB60树脂装量为2kg。 0128 b.上述过陶瓷膜浓缩液。

43、上大孔树脂吸附，先以4倍柱体积的水洗至无色，再以3倍 柱体积的0.1NaOH溶液洗脱除去杂质，水洗至中性，再以3倍柱体积70乙醇洗脱，收集 乙醇洗脱部分，乙醇洗脱液减压回收乙醇浓缩(浓缩温度为70，浓缩压力为0.08MPa)、真 空干燥，得到茶皂素粗品159.0.1g，茶皂素得率为15.90，纯度为82.07。 0129 (4)中低压柱色谱分离 0130 a.湿法装柱，柱直径3cm，高40cm，色谱柱填料为C 8 (300目)，填料装样量为200g。 0131 b.将茶皂素粗品10g用少量水溶解，通过中低压柱色谱分离，柱压为3MPa，流速 为12ml/min，先用5倍柱体积30的甲醇洗去杂质，。

44、再用5倍柱体积60的甲醇溶液洗 脱，洗脱液减压回收溶剂浓缩，经HPLC分析(示差检测)，制备得到茶皂素9.03g，纯度为 95.89，颜色为白色。 0132 实施例10： 0133 (1)减压提取 0134 将脱脂后的油茶饼粕1000g，用80乙醇溶液为提取溶剂，减压沸腾提取10min， 提取溶剂与油茶饼粕的比例为101，提取温度为60，提取压力为0.05MPa，提取2次，提 取液过滤后，配制成浓度为1浓度的料液； 0135 (2)膜纯化 0136 将上述料液用0.1m孔径的陶瓷膜过滤，操作压力为0.20MPa，将过陶瓷膜的 茶皂素溶液减压回收乙醇浓缩至含原料3g/ml的溶液(浓缩温度为70，。

45、浓缩压力为 0.07MPa)。 0137 (3)树脂吸附 0138 a.湿法装柱，柱直径6cm，高80cm，AB-8树脂装量为2kg。 0139 b.上述过陶瓷膜浓缩液上大孔树脂吸附，先以4倍柱体积的水洗至无色，再以4倍 柱体积的0.2NaOH溶液洗脱除去杂质，水洗至中性，再以4倍柱体积60乙醇洗脱，收集 乙醇洗脱部分，乙醇洗脱液减压回收乙醇浓缩(浓缩温度为70，浓缩压力为0.07MPa)、真 空干燥，得到茶皂素粗品160.5g，茶皂素得率为16.05，纯度为83.09。 说 明 书CN 102276679 A CN 102276682 A 11/11页 13 0140 (4)中低压柱色谱分离。

46、 0141 a.湿法装柱，柱直径3cm，高40cm，色谱柱填料为C 30 (300目)，填料装样量为200g。 0142 b.将茶皂素粗品10g用少量水溶解，通过中低压柱色谱分离，柱压为5MPa，流速 为14ml/min，先用5倍柱体积30的甲醇洗去杂质，再用5倍柱体积70的甲醇溶液洗 脱，洗脱液减压回收溶剂浓缩，经HPLC分析(示差检测)，制备得到茶皂素9.18g，纯度为 96.82，颜色为白色。 说 明 书CN 102276679 A CN 102276682 A 1/4页 14 图1 图2 说 明 书 附 图CN 102276679 A CN 102276682 A 2/4页 15 图3 图4 图5 说 明 书 附 图CN 102276679 A CN 102276682 A 3/4页 16 图6 图7 图8 说 明 书 附 图CN 102276679 A CN 102276682 A 4/4页 17 图9 说 明 书 附 图CN 102276679 A 。