本发明涉及取代的单-和双-吡啶基甲基吡啶酮类化合物、它们的制备方法以及它们在药物中的用途，特别是用作抗高血压剂和抗动脉粥样硬化剂。 已知在体内血管紧张肽原酶（一种蛋白水解酶）可以将血管紧张肽原转化为十肽血管紧张肽Ⅰ，而血管紧张肽Ⅰ本身又在肺、肾或其他组织中降解为升血压的八肽血管紧张肽Ⅱ。血管紧张肽Ⅱ的不同作用（例如血管收缩、在肾中潴留Na+、在肾上腺中释放醛甾酮以及增加交感神经系统的紧张性）协同地使得血压升高。
此外，血管紧张肽Ⅱ具有促进细胞（例如心肌细胞和平滑肌细胞）生长和增殖的作用，这些细胞在不同的疾病状态下（例如高血压、动脉粥样硬化和心机能不全）以高于正常速度生长并增殖。
除了抑制血管紧张肽原酶活性之外，对于干预血管紧张肽原酶-血管紧张肽系统（RAS）的一个可能的作用是抑制血管紧张肽转化酶（ACE）的活性和阻断血管紧张肽Ⅱ受体。
出版物EP 508 445、EP 503 393、EP 504 888和US 5 128 327中公开了作为AⅡ拮抗剂的芳基杂芳基烷基取代的三唑类化合物和咪唑类化合物。
本发明涉及通式（Ⅰ）的取代的单-和双-吡啶基甲基吡啶酮类化合物及其盐：
其中
A、D、G、L、M和T可相同或不同，且代表CH基团或代表氮原子，但是其中至少有一个基团代表氮原子，而在每一个环中至多只有一个基团代表氮原子;
R1代表具有至多10个碳原子的直链或支链烷基，该烷基可被下列基团任选取代：具有3-6个碳原子的环烷基、羟基、或各自具有至多6个碳原子的直链或支链烷氧基或烷硫基，或代表具有3-6个碳原子的环烷基;
R2、R3和R4可相同或不同，并且
代表氢、羟基、硝基、氰基、甲酰基或卤素，或者
代表各自具有至多8个碳原子的直链或支链烷基、链烯基、链炔基、烷氧基或烷硫基，它们可以相同或不同的方式被下列基团任选取代至多3次：羟基、氰基、卤素、羧基、各自具有至多6个碳原子的直链或支链烷氧基、酰基或烷氧羰基、或具有3-6个碳原子的环烷基、苄基、苯基、苯氧基、苯甲酰基、或具有至多3个选自S、N和O的杂原子地5-7元饱和或不饱和杂环基，所述环状基团本身又可以相同或不同方式被下列基团取代至多2次：三氟甲基、三氟甲氧基、卤素、硝基、氰基、羟基、羟甲基、或各自具有至多6个碳原子的直链或支链烷基或烷氧基，或者
代表各自具有至多8个碳原子的直链或支链酰基或烷氧羰基、苯氧羰基、苄氧羰基或羧基，或者
代表四唑基，它可被三苯基甲基或具有至多6个碳原子的直链或支链烷基任选取代，该烷基本身又可被下列基团取代：氰基、卤素、羧基、苯氧羰基、羟基、或各自具有至多6个碳原子的直链或支链烷氧基或烷氧羰基，或者
代表下列各式的基团：
＝N-OH，-NR9R10，-CO-NR11R12或-CH2-OR13
其中
R9、R10、R11和R12可相同或不同，且表示氢、具有3-8个碳原子的环烷基、或具有至多8个碳原子的直链或支链烷基，该烷基可被苯基任选取代，或者
R9和R10与它们相连的氮原子一起形成具有至多2个选自S、N和O的另外的杂原子的5-6元饱和杂环基，
R13表示具有至多6个碳原子的直链或支链酰基或苯甲酰基;
R5、R6和R8可相同或不同，并且
代表氢、卤素、氰基、硝基、羟基、三氟甲基或酰氨基，或者
代表具有至多6个碳原子的直链或支链烷基、烷氧基或烷氧羰基;
R7代表式-CO-R14、-SO2R15、-CO-NR16R17、-NH-SO2R18中的一个基团，或者代表-SO2NR19R20，
其中
R14表示羟基或具有至多6个碳原子的直链或支链烷氧基，
R15表示羟基、三氟甲基、各自具有至多6个碳原子的直链或支链烷氧基或烷基、苯基或苄基，所述苯基或苄基可以相同或不同方式被下列基团任选取代至多2次：卤素、三氟甲基或具有至多4个碳原子的直链或支链烷基，
R16和R17可相同或不同，并且具有上述R11和R12的定义，或者
R16表示氢，以及
R17表示-SO2R15基团，
其中
R15具有上述定义，
R18具有上述R15的定义，并与之相同或不同，
R19和R20具有上述R9和R10的定义，并与它们相同或不同，或者
R19表示氢、或具有至多4个碳原子的直链或支链烷基，并且
R20具有上述R15的定义，且与之相同或不同;
或者
R7代表下式基团
其中
R21表示氢或具有至多8个碳原子的直链或支链烷基，该烷基可被具有至多6个碳原子的直链或支链酰基任选取代，或
表示三苯基甲基。
本发明取代的单-和双-吡啶基甲基吡啶酮类化合物也可以以其盐的形式存在。通常，这里所提及的盐是与有机或无机碱或酸形成的盐。
在本发明内容中，优选生理上适用的盐。本发明化合物的生理学上适用的盐可以是本发明物质与无机酸、羧酸或磺酸生成的盐。特别优选的盐是例如与盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、甲磺酸、乙磺酸、甲苯磺酸、苯磺酸、萘二磺酸、乙酸、丙酸、乳酸、酒石酸、柠檬酸、富马酸、马来酸或苯甲酸生成的盐。
生理学上适用的盐也可以是具有游离羧基或四唑基的本发明化合物的金属盐或铵盐。它们特别优选的是例如钠盐、钾盐、镁盐或钙盐，以及与氨或有机胺（如乙胺、二-或三乙胺、二-或三乙醇胺、二环己基胺、二甲基氨基乙醇、精氨酸、赖氨酸、1，2-乙二胺或2-苯基乙基胺）衍生而得到的铵盐。
本发明化合物可以以立体异构体形式存在，所述立体异构体形式或者互为镜像（对映体），或者互不为镜像（非对映体）。本发明既涉及对映体和非对映体，也涉及它们的各种混合物。与非对映体一样，外消旋体形式可以按已知的方法分离成立体异构体的单一组分。
杂环基一般代表可含有至多2个氧、硫和/或氮原子作为杂原子的5-7元（优选5-6元）饱和或不饱和杂环基。优选具有一个氧、硫和/或至多2个氮原子的5元和6元杂环基。可以提及的优选的杂环基有：噻吩基、呋喃基、吡咯基、吡唑基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、噻唑基、噁唑基、咪唑基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基或四唑基。
另外，可含有至多2个氧、硫和/或氮原子作为杂原子的5-6元饱和杂环基一般代表氮杂环丁烷基、哌啶基、吗啉基、哌嗪基或吡咯烷基。优选吗啉基。
优选的通式（Ⅰ）化合物是如下定义的化合物及其盐：
其中
A、D、G、L、M和T可相同或不同，且代表CH基团或代表氮原子，但是其中至少有一个基团代表氮原子，而在每一个环中至多只有一个基团代表氮原子;
R1代表各自具有至多8个碳原子的直链或支链烷基，该烷基可被下列基团任选取代：环丙基、环戊基、环己基、羟基、或各自具有至多4个碳原子的直链或支链烷氧基或烷硫基，或者
代表环丙基、环戊基或环己基;
R2、R3和R4可相同或不同，并且
代表氢、羟基、硝基、氰基、甲酰基、氟、氯、溴或碘，或者
代表各自具有至多6个碳原子的直链或支链烷基、链烯基、链炔基、烷氧基或烷硫基，它们可被下列基团任选取代：羟基、氰基、氟、氯、溴、羧基、各自具有至多4个碳原子的直链或支链烷氧基、酰基或烷氧羰基、苄基、苯基、苯氧基、苯甲酰基、或噻吩基，所述环状基团本身又可以被下列基团取代：三氟甲氧基、三氟甲基、羟甲基、氟、氯、溴、碘、或各自具有至多6个碳原子的直链或支链烷基或烷氧基、或者代表各自具有至多6个碳原子的直链或支链酰基或烷氧羰基、苯氧羰基、苄氧羰基或羧基，或者
代表四唑基，它可被三苯基甲基或具有至多5个碳原子的直链或支链烷基任选取代，该烷基本身又可被下列基团取代：氰基、氟、氯、溴、羧基、羟基、或各自具有至多4个碳原子的直链或支链烷氧基或烷氧羰基，或者
代表下列各式的基团：
＝N-OH，-NR9R10，-CO-NR11R12或-CH2-OR13
其中
R9、R10、R11和R12可相同或不同，并且表示氢、环丙基、环戊基、环己基、或具有至多6个碳原子的直链或支链烷基，该烷基可被苯基任选取代，或者
R9和R10与它们相连的氮原子一起形成吗啉环，
R13表示具有至多6个碳原子的直链或支链酰基，或苯甲酰基;
R5、R6和R8可相同或不同，并且
代表氢、氟、氯、溴、三氟甲基或羟基，或代表各自具有至多4个碳原子的直链或支链烷基或烷氧基;
R7代表式-CO-R14、-SO2R15、-CO-NR16R17、-NH-SO2R18或-SO2-NR19R20中的一个基团，
其中
R14表示羟基、或具有至多4个碳原子的直链或支链烷氧基，
R15表示具有至多4个碳原子的直链或支链烷基、苄基、三氟甲基或对甲苯基，
R16和R17可相同或不同，并具有上述R11和R12的定义，或者
R16表示氢，以及
R17表示-SO2R15基团，
其中
R15具有上述定义，
R18具有上述R15的定义，并与之相同或不同
R19和R20具有上述R9和R10的定义，并与它们相同或不同，或者
R19表示氢或甲基，
R20具有上述R15的定义，并与之相同或不同;
或者
R7代表下式基团
其中
R21表示氢或具有至多6个碳原子的直链或支链烷基，该烷基可被具有至多4个碳原子的直链或支链酰基任选取代，或表示三苯基甲基。
特别优选的通式（Ⅰ）化合物是下述定义的化合物及其盐：
其中
A、D、G、L、M和T可相同或不同，并且代表CH基团或代表氮原子，但是其中至少有一个基团代表氮原子，而在每一个环中至多只有一个基团代表氮原子;
R1代表具有至多6个碳原子的直链或支链烷基，或者代表环丙基、环戊基或环己基;
R2、R3和R4可相同或不同，并且
代表氢、羟基、氰基、甲酰基、氟、氯、溴或碘，或者
代表各自具有至多4个碳原子的直链或支链烷基或烷氧基，或者
代表具有至多4个碳原子的直链或支链烷氧羰基、苯氧羰基、苄氧羰基或羧基;
R5、R6和R8可相同或不同，并且
代表氢、羟基、氟、氯、溴或甲基;
R7代表式-CO-R14基团，
其中
R14表示羟基、或具有至多4个碳原子的直链或支链烷氧基，或者
R7代表下式的四唑基
其中
R21表示氢或具有至多4个碳原子的直链或支链烷基，该烷基可被具有至多4个碳原子的直链或支链酰基任选取代，或表示三苯基甲基。
极特别优选的通式（Ⅰ）化合物为下述定义的化合物及其盐：
其中
A或D代表氮原子，而其它取代基代表CH基团;
R1代表具有至多4个碳原子的直链或支链烷基;
R2、R3和R4可相同或不同，并且
代表氢、羧基或苄氧羰基，或者
代表具有至多4个碳原子的直链或支链烷氧羰基;
R5、R6和R8可相同或不同，并且
代表氢、氟、氯、溴或甲基;
R7代表式-CO-R14基团，
其中
R14表示羟基或具有至多4个碳原子的直链或支链烷氧基，或者
R7代表下式的四唑基
其中
R21表示氢或三苯基甲基。
此外，还发现了制备本发明通式（Ⅰ）化合物的方法，其特征在于：
[A]在惰性溶剂中在碱存在下，并且如果必要可加入催化剂，使通式（Ⅱ）的吡啶酮化合物
其中
R1、R2、R3和R4具有上述定义，
与通式（Ⅲ）化合物反应，
其中
A、D、R5和R6具有上述定义，
V代表卤素，优选溴，以及
W代表下式基团
其中
G、L、M、T和R8具有上述定义，
R7′代表C1-C4-烷氧羰基，或者优选代表下式基团
其中
X表示三苯基甲基或氢;
或者
[B]在惰性溶剂中在碱存在下并在金属催化的条件下，使通式（Ⅳ）化合物
其中
R1、R2、R3、R4、R5、R6、A和D具有上述定义，
并且
Z代表典型的离去基团，例如溴、碘、甲磺酰氧基、甲苯磺酰氧基、氟-或三氟甲磺酰氧基，优选溴，
与通式（Ⅴ）或（Ⅴa）化合物反应，
其中
G、L、M、T、R8和X具有上述定义，和
R7″具有上述R7的定义，但不代表四唑基;
以及，当X为三苯基甲基时，然后在常规条件下于有机溶剂和/或水中用酸将其消除;和
在取代基R7和/或R7′为羰基的情况下，如果必要，在将具体的酯类水解后，通过常规方法例如通过酰胺化反应或磺酰胺化反应进行衍生反应;和
在制备盐的情况下，使产物与酸或碱反应，优选用游离的四唑（R21/X＝H）作为起始原料;和
在游离酸（R7＝CO2H）和游离四唑（R21＝H）的情况下，使产物与酸反应，由所述盐作为起始原料;以及
如果必要，也可通过已知方法进行其它取代基的转换。
本发明方法可以举例方式由下列反应式加以说明：
对于方法[A]和[B]适宜的溶剂为在反应条件下不发生变化的常规有机溶剂。这些溶剂优选包括醚类例如乙醚、二噁烷、四氢呋喃或乙二醇二甲醚;或烃类例如苯、甲苯、二甲苯、己烷、环己烷或石油馏分;或卤代烃类例如二氯甲烷、三氯甲烷、四氯化碳、二氯乙烯、三氯乙烯或氯苯;或乙酸乙酯、二甲亚砜、二甲基甲酰胺、二甲氧基乙烷、六甲基磷酰三胺、乙腈、丙酮或硝基甲烷。也同样可能使用上述溶剂的混合物。
对于方法[A]优选使用四氢呋喃、丙酮、二甲基甲酰胺和二甲氧基乙烷。此外，醇类例如甲醇、乙醇或丙醇和/或水也适用于方法[B]。对于方法[B]优选甲苯/甲醇/水。
可用于本发明方法的碱一般为无机或有机碱。所述碱优选包括碱金属氢氧化物，例如氢氧化钠或氢氧化钾;碱土金属氢氧化物，例如氢氧化钡;碱金属碳酸盐，例如碳酸钠或碳酸钾;碱土金属碳酸盐，例如碳酸钙或碳酸铯;碱金属或碱土金属醇化物或氨化物，例如甲醇钠或甲醇钾、乙醇钠或乙醇钾或叔丁醇钾;碳酸铊或氢氧化铊;或二异丙基氨基化锂（LDA）;或有机胺类（三烷基（C1-C5）胺类），例如三乙胺;或杂环化合物，例如1，4-二氮杂双环[2，2，2]辛烷（DABCO）、1，8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯（DBU）、吡啶、二氨基吡啶、甲基哌啶或吗啉。也可能使用碱金属例如钠、或其氢化物例如氢化钠作为碱。对方法[A]优选的碱为碳酸钾、氢化钠、叔丁醇钾或碳酸铯。对于方法[B]优选的碱为碳酸钠。
在每一情况下，对于每摩尔式（Ⅲ）或（Ⅴ）化合物，一般所用碱的量为0.05mol至10mol，优选1mol至2mol。
本发明方法一般在-100℃至+100℃，优选0℃至80℃温度范围内进行。本发明方法[B]一般在惰性气体气氛下进行。
本发明方法一般在常压下进行。然而也可能在升压或减压（例如在0.5至5巴范围内）下进行。
三苯基甲基的消除是用乙酸或三氟乙酸和水或上述醇之一进行的，或在丙醇的存在下用盐酸水溶液或同样用醇进行。
消除反应一般在0℃至150℃，优选20℃至100℃的温度范围内，在常压下进行。
对于方法[A]适宜的催化剂是碘化钾或碘化钠，优选碘化钠。
对于方法[B]适宜的催化剂一般为镍、钯或铂的金属配合物，优选钯（O）配合物，例如四（三苯膦）钯。也可使用相转移催化剂，例如溴化四正丁基铵或冠醚类。
对于每摩尔通式（Ⅴ）化合物，催化剂的用量为0.0001mol至0.15mol，优选0.01mol至0.05mol。
烷基化反应一般用烷基化剂进行，例如（C1-C8）-烷基卤类化合物、磺酸酯类或取代的或未取代的（C1-C8）-二烷基-或二芳基磺酸酯类，优选碘化钾或硫酸二甲酯。
烷基化反应一般在一种上述溶剂中，优选在二甲基甲酰胺中，并在0℃至+70℃的温度范围内优选0℃至+30℃，在常压下进行。
用于水解反应的适宜的碱是常规无机碱。所述碱优选包括碱金属氢氧化物或碱土金属氢氧化物，例如氢氧化钠、氢氧化钾或氢氧化钡;或碱金属碳酸盐，例如碳酸钠或碳酸钾或碳酸氢钠;或碱金属醇化物，例如甲醇钠、乙醇钠、甲醇钾、乙醇钾或叔丁醇钾。特别优选使用氢氧化钠或氢氧化钾。
用于水解反应的适宜溶剂为水或用于水解反应的常规有机溶剂。所述溶剂优选包括醇类，例如甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇或丁醇;或醚类，例如四氢呋喃或二噁烷;或二甲基甲酰胺或二甲亚砜。特别优选使用的醇类为例如甲醇、乙醇、丙醇或异丙醇。也可使用上述溶剂的混合物。
如果必要，水解反应也可以用酸进行，例如三氟乙酸、乙酸、盐酸、氢溴酸、甲磺酸、硫酸或高氯酸，优选三氟乙酸。
水解反应一般在常压下进行。然而，也可能在减压或升压（例如0.5至5巴）下进行。
在进行水解反应时，对于每摩尔酯，碱的用量一般为1-3mol，优选1-1.5mol。特别优选使用等摩尔量的各反应物。
叔丁酯的水解反应一般用酸例如盐酸或三氟乙酸，在一种上述的溶剂和/或水或其混合物（优选用二噁烷或四氢呋喃）存在下进行。
酰胺化反应和磺酰胺化反应一般在一种上述的溶剂（优选四氢呋喃或二氯甲烷）中进行。
如果必要，酰胺化反应和磺酰胺化反应的实施可以通过酰卤的活化阶段，所述酰卤的制备是通过使相应的酸与亚硫酰氯、三氯化磷、五氯化磷、三溴化磷或草酰氯反应而得到的。
酰胺化反应和磺酰胺化反应一般在-20℃至+80℃，优选-10℃至+30℃的温度范围内在常压下进行。
除上述碱外，对于上述反应适宜的碱优选三乙胺和/或二甲基氨基吡啶、DBU或ABCO。
对于每摩尔相应的酸或酯，所用碱的量为0.5mol至10mol，优选1mol至2mol。
可用于磺酰胺化反应的酸结合剂为碱金属或碱土金属碳酸盐，例如碳酸钠或碳酸钾;碱金属或碱土金属氢氧化物，例如氢氧化钠或氢氧化钾;或有机碱，例如吡啶、三乙胺、N-甲基哌啶;或双环脒类，例如1，5-二氮杂双环[3.4.0]壬-5-烯（DBN）或1，5-二氮杂双环[3.4.0]十一碳-5-烯（DBU）。优选碳酸钾。
适宜的脱水剂是：碳化二亚胺类，如二异丙基碳化二亚胺、二环己基碳化二亚胺或N-（3-二甲基氨基丙基）-N′-乙基碳化二亚胺盐酸盐;或羰基化合物，如羰基二咪唑;或1，2-噁唑鎓化合物，如2-乙基-5-苯基-1，2-噁唑鎓-3-磺酸盐;或丙烷膦酸酐;或氯甲酸异丁基酯;或苯并三唑基氧基-三（二甲基氨基）鏻六氟磷酸盐;或二苯基酯膦酰胺;或甲磺酰氯。如果必要，可以有碱如三乙胺或N-乙基吗啉或N-甲基哌啶或二环己基碳化二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺存在。
相对于1摩尔相应的羧酸，酸结合剂和脱水剂的用量通常为0.5至3摩尔，优选为1至1.5摩尔。
部分通式（Ⅱ）化合物是己知化合物;而部分是新化合物，在此情况下，它们可用类似于已知的方法加以制备。
通式（Ⅲ）化合物本身是已知的。
绝大多数通式（Ⅳ）化合物是新的，并可用（例如）下述方法制备：
在一种上述的溶剂中和在一种上述的碱存在下，优选在二甲氧基乙烷中和用碳酸铯，在室温下使通式（Ⅱ）化合物与通式（Ⅳ）化合物反应，
其中
A、D、R5和R6具有上述定义，和
Z和Z′可相同或不同，并具有上述Z的定义。
对于每摩尔通式（Ⅵ）化合物，一般所用碱的量为1mol至5mol，优选2mol至3mol。
绝大多数通式（Ⅵ）化合物是已知的。
通式（Ⅵ）化合物一般在-100℃至+100℃，优选-20℃至+30℃下，于常压下进行制备。
当X＝H的情况下，通式（Ⅴ）化合物是新化合物，并可通过（例如）下述方法制备：在非质子传递溶剂中在碱存在下并于惰性气氛中，首先使苯基四唑发生反应，然后加入硼酸三甲酯，并在最后一步中用酸水解所得的产物。
对于所述方法适宜的溶剂为非质子传递溶剂，例如醚类，例如四氢呋喃、乙醚;甲苯;己烷或苯。优选四氢呋喃。
适宜的碱为伯-、仲-和叔-丁基锂和苯基锂。优选正丁基锂。
对于每摩尔苯基四唑，所用碱的量为2mol至5mol，优选2mol至3mol。
适宜的酸一般为无机酸，例如盐酸;或C1-C4-羧酸，例如乙酸;或磷酸。优选盐酸。
酸的用量一般为1mol至10mol，优选1mol至3mol。
所述方法一般在-70℃至+25℃，优选-10℃至0℃的温度范围内进行。
本发明方法一般在常压下进行。然而，也可在升压或减压（例如0.5巴至5巴）下进行。
某些通式（Ⅴa）化合物是已知的，或可通过常规方法制备。
上述制备方法仅用于说明。本发明通式（Ⅰ）化合物的制备并不限于这些方法，这些方法的任何改良均可以同样的方式用于制备本发明化合物。
本发明取代的单-和双-吡啶基甲基吡啶酮化合物具有不可预知的有价值的药理作用。
由于本发明化合物可以竞争性地抑制血管紧张肽Ⅱ与其受体的结合，因此它们具有专一的血管紧张肽Ⅱ的拮抗作用。本发明化合物可抑制血管紧张肽Ⅱ引起的血管收缩作用和抑制血管紧张肽Ⅱ刺激醛甾酮的分泌作用。此外，本发明化合物还可以抑制平滑肌细胞的增殖作用。
因此，本发明化合物在医药上可用于治疗动脉高血压和动脉粥样硬化。还可以用于治疗冠心病、心机能不全、大脑活动紊乱、大脑局部缺血、外周循环紊乱、肾和肾上腺机能障碍、支气管痉挛和与血管有关的呼吸道疾病、钠潴留和水肿。
本发明化合物还可用于防治青光眼、糖尿病源性视网膜病，并且增加眼内视网膜液的可动性。
本发明化合物也适于防治疗中枢神经系统疾病，例如抑郁症、偏头痛、精神分裂症或焦虑状态;脑机能不良;中风;糖尿病源性肾病;心律失调;或用于预防冠心病或血管成形术和血管外科手术之后的再狭窄。
抑制激动剂诱发的血管收缩作用的研究
用家兔（雌雄两种），猛击颈部使其昏厥后放血，或者用另一种方式用戊巴比妥钠麻醉（静脉注射，约60-80mg/kg），开胸活杀。取出胸主动脉，清除粘附的结缔组织，剪成若干段1.5mm宽的血管环，然后分别移入容积为10ml的器官浴内，每段血管环起始的负荷重量约为3.5g，器官浴内含有通入了卡波金的Krebs-Henseleit营养液，温度控制在37℃。所述营养液由下列成分组成：119mmol/L NaCl、2.5mmol/L CaCl2×2H2O、1.2mmol/L KH2PO4、10mmol/L 葡萄糖、4.8mmol/L KCl、1.4mmol/L MgSO4×7H2O以及25mmol/L NaHCO3。
用Statham UC2传感测压器，并通过桥式放大器（Mülheim或DSM Aalen），比等比例收缩法记录血管环的收缩，并用A/D转换器（System 570，Keithley Munich）使血管环的收缩数字化后进行评价。每小时作一次激动剂的剂量-效应曲线（DEC）。对于每条剂量-效应曲线（DEC），需分别将3或4个不同浓度的激动剂加至器官浴内，每次加药间隔4分钟。在每次DEC测定结束后用上述营养液冲洗一段时间（在每一情况下均冲洗16次，约5次/分钟），随之休息或保温28分钟，在这段时间内血管环的收缩通常可以恢复，再次达到起始时的张力值。
在正常情况下，通常把第三条DEC的顶点值作为参比参数，用于评价要检测的待测物质，在随后的DEC测定中，在保温期的起始点均将待测物质以每次逐渐递增的剂量加入浴中。每段主动脉环都被刺激一整天，并且总是用同一种激动剂。
几种激动剂及其标准浓度（每单个
给药剂量的施用体积为100μl）：
KCl 22.7; 32.7; 42.7; 52.7 mmol/l
去甲肾上腺素 3×10-9;3×10-8;3×10-7;3×10-6g/ml
5-羟色胺 10-8;10-7;10-6;10-5g/ml
B-HT 920 10-7;10-6;10-5g/ml
甲氧胺 10-7;10-6;10-5g/ml
血管紧张肽Ⅱ 3×10-9;10-8;3×10-8;10-7g/ml
为了计算IC50（待测物质引起50%抑制时的浓度），在每种情况下该抑制作用均是以给予的第三个激动剂浓度（等于次最大激动剂浓度）为基准。
本发明化合物作为剂量的函数可抑制血管紧张肽Ⅱ诱发的离体兔主动脉的收缩。而由钾离子去极化作用或其它激动剂诱发的主动脉收缩则不能被这些化合物抑制，或者仅在高浓度时被微弱地抑制。
对用血管紧张肽Ⅱ输注的大白鼠的血压测定
雄性Wistar大白鼠（Moellegaard，Copenhagen，Denmark），体重300～350g，用硫喷妥麻醉（腹腔内注射，100mg/kg）。在进行气管切开术之后插入一个股动脉导管用于血压测定，并插入二个股静脉导管，一个用于血管紧张肽Ⅱ输注，另一个用于给予待测物质。在给予神经节阻断剂安血定（静脉注射，5mg/kg）之后，大白鼠开始用血管紧张肽Ⅱ输注（0.3μg/kg/分），当血压值达到稳定状态时立即给予待测物质，待测物质通过静脉内给药，或者口服，剂型为悬浮液剂或为0.5%Tylose溶液剂。
对清醒的高血压大白鼠的抗高血压活性的测定
对清醒的大白鼠测定本发明化合物的口服抗高血压活性，用于试验的大白鼠已用外科手术造成一单侧肾动脉狭窄。即用一内径为0.18mm的银制小钳夹住右侧肾动脉，致使血管狭窄。用该方法造成的高血压动物，在手术后头六周内血浆中血管紧张肽原酶的活性增高。动物给予待测物质后，每隔一定时间应用“尾部环套法”以无血方式测定这些动物的动脉血压。待测物质置于Tylose悬浮液中制成各种剂量的悬浮液，用胃管经胃内给药（口服）。在临床上相关剂量下，本发明化合物可降低高血压大白鼠的动脉血压。
本发明化合物还能作为浓度的函数抑制放射性的血管紧张肽Ⅱ与受体的特异性结合。
本发明化合物与牛肾上腺皮质膜组分中的血管紧张肽Ⅱ受体的相互作用
将新鲜取得的牛肾上腺皮质（AC）仔细地除去荚膜髓质，在蔗糖液（0.32M）中，用Ultra-Turrax（Janke&Kunkel，Staufen，Bavaria）粉碎，制得粗的膜匀浆，再经二次离心步骤作部分纯化处理，得到肾上腺皮质膜组分。
用该牛AC部分纯化的膜组分和放射性血管紧张肽Ⅱ在0.25ml试验体积内作受体结合试验，0.25ml试验体积内特定地含有下列组分：部分纯化的AC膜组分（50～80μg）;3H标记的血管紧张肽Ⅱ（3～5nM）;试验缓冲液（50mM Tris，pH7.2，5mM MgCl2）以及待测物质。在室温下保温60分钟后，样品中未被结合的放射性样品用浸湿的玻璃纤维过滤器（Whatman GF/C）分离出，被结合的放射性物质用冰冷却的缓冲液（50mM Tris/HCl，pH7.4，5% PEG 6000）洗涤该蛋白质后，于闪烁液中用分光光度法测定，原始数据用计算机程序进行分析，给出Ki和IC50值（Ki：按使用的放射性加以修正的IC50值;IC50值：待测物质引起放射性配体特异性结合的50%抑制的浓度）。
本发明化合物对平滑肌细胞增殖的抑制作用的研究
为了测定本发明化合物抑制平滑肌细胞增殖的作用，以膜移植技术，用从大白鼠主动脉得到的平滑肌细胞进行试验（R.Ross，J.Cell.Biol.50，172，1971）。将此细胞接种在适当的培养皿内，通常用96孔培养板，在培养基199和5%CO2中于37℃培养2～3天，培养基199含有下列成分：7.5%FCS和7.5%NCS;2mM L-谷氨酰胺以及15mM HEPES，pH7.4。然后用抽出血清的方法使细胞同步化生长2～3天，接着再用血清或其它因子刺激生长。同时加入试验化合物。16～20小时后加入1μ Ci3H标记的胸苷，再过4小时后，测定上述化合物在细胞内的TCA可沉淀的DNA中的结合。为测定其IC50值，需计算该活性化合物的浓度，将该活性化合物作系列稀释，化合物抑制由10%FCS所产生的胸苷结合的半数最大抑制浓度为IC50值。
按已知的方法，用惰性的、无毒的、药学上适用的赋形剂或溶剂，可以将本发明新的活性化合物制成常用的制剂，例如片剂、包衣片剂、丸剂、颗粒剂、气雾剂、糖浆剂、乳剂、悬浮液剂和溶液剂。在上述的每一种情况下，制剂中存在的治疗活性化合物的浓度为约0.5至90%（以占总混合物的重量计），即其量足以达到所要求的剂量范围。
按下法可配制上述制剂，例如将溶剂和/或赋形剂加到活性化合物中并混合，如果需要，可以应用乳化剂和/或分散剂，如果是例如用水作为稀释剂的情况，如果必要可以应用有机溶剂作为辅助溶剂。
可以按常用的方式给药，优选口服或非肠道给药，尤其优选的是经舌给药和静脉内给药。
在非肠道给药的情况下可以应用活性化合物的溶液剂，该溶液剂可用合适的液体赋形剂进行配制。
通常，已经证明，为了获得有效的结果，当静脉内给药时，给药剂量约为0.001至1mg/kg、优选约0.01至0.5mg/kg体重;而当口服给药时，给药剂量为约0.01至20mg/kg，优选0.1至10mg/kg体重。
尽管如此，所用剂量也可能与上面提到的剂量有所不同，这具体取决于患者体重、给药途径、对药物的个体行为差异，药物制剂的性质及给药的时间或间隔。因此，在一些情况下给药比上述最小量还要少的剂量就足够了，而在另一些情况下则需给药比所述上限还要大的剂量。在给药相对大剂量的情况下，将其分成许多单次剂量在一天内给药是合适的。
起始化合物
实施例Ⅰ
2-甲基-5-[（三氟甲基）磺酰氧基]吡啶
在250ml二氯甲烷中，将4.63g（42.4mmol）3-羟基-6-甲基吡啶、15.08g（42.4mmol）N，N-双-（三氟甲磺酰基）苯胺和6.15ml（44.53mmol）三乙胺搅拌过夜。反应混合物用1N氢氧化钠溶液洗涤2次、用碳酸钾水溶液洗涤2次，并用水洗涤2次，有机相用硫酸钠干燥，在旋转蒸发仪上浓缩，得到10.47g油状物。
产率：100%
1H-NMR（CDCl3）：δ＝2.6（3H，s）;7.2（1H，m）;7.5（1H，dd）;8.47（1H，d）ppm.
实施例Ⅱ
2-甲基-5-[2-（2-三苯基甲基-四唑-5-基）苯基]吡啶
在氩气氛中在90℃下将由下述成分组成的悬浮液搅拌4小时：6.8g（28.2mmol）实施例1的化合物、20g（46.3mmol）3-（2′-三苯基甲基-2′H-四唑-5′-基）苯基硼酸、3g（28.3mmol）碳酸钠、1.31g（1.13mmol）四（三苯膦）钯、17.5ml水、17.5ml甲醇和140ml甲苯。将反应混合物用水稀释，用乙酸乙酯洗涤3次。有机相用水洗涤，并用氯化钠溶液洗涤，用硫酸钠干燥，将其吸附到150g硅胶上，用1.61乙酸乙酯/石油醚混合物（1∶10-＞1∶1）洗脱，在200g硅胶上进行色谱法纯化。
产量：9.15g泡沫体（理论产量的67%）
Rf＝0.23（乙酸乙酯/石油醚1∶2，硅胶Si60）
实施例Ⅲ
2-溴甲基-5-[2-（2-三苯基甲基-四唑-5-基）苯基]吡啶
将4.73g（10mmol）实施例Ⅱ的化合物、2g（11.2mmol）N-溴琥珀酰亚胺和一刮勺尖2，2′-偶氮-双-（2-甲基丙腈）在170ml四氯化碳中加热回流过夜。抽滤除掉不溶物质，浓缩溶液，残余物用硅胶色谱法纯化，用石油醚/乙酸乙酯5∶1洗脱得到1.2g标题化合物。
产率：理论产量的21.5%
Rf（乙酸乙酯/石油醚1∶5，硅胶）＝0.34
实施例Ⅳ
2-溴甲基-3-溴-5-[2-（2-三苯基甲基-四唑-5-基）苯基]吡啶
将实施例Ⅲ的残余物进一步洗脱得到0.8g标题化合物。
产率：理论产量的14%
Rf（乙酸乙酯/石油醚1∶5，硅胶）＝0.56
实施例Ⅴ
6-丁基-4-甲氧羰基-2-氧代-1-[（6-溴吡啶-3-基甲基]-1，2-二氢吡啶
用类似于实施例1的方法，由30g（0.143mol）6-丁基-4-甲氧羰基-2-氧代-1，2-二氢吡啶、45.5g（0.17mol）2-溴-5-溴甲基吡啶和55.9g（0.17mol）碳酸铯在0.61二甲氧基乙烷中制得17.3g标题化合物。
产率：理论产量的33.3%
Rf（乙酸乙酯/石油醚1∶2）＝0.14
实施例Ⅵ
6-丁基-4-甲氧羰基-2-氧代-1-[6-溴吡啶-3-基甲基]-1，2-二氢吡啶
用类似于实施例13的方法由实施例Ⅴ的化合物制得标题化合物。
产率：100%
Rf（乙腈/水5∶1，硅胶）＝0.47
实施例Ⅶ
4-苄氧羰基-6-丁基-2-氧代-1-[6-溴吡啶-3-基甲基]-1，2-二氢吡啶
将3.3g（9mmol）实施例Ⅵ的化合物、0.1g二甲基氨基吡啶、4.7ml（45mmol）苄基醇和2.05g（9.9mmol）二环己基碳化二亚胺在50ml二氯甲烷中在0℃下搅拌过夜。抽滤出所分离出来的沉淀，浓缩滤液，所得残余物在200g硅胶上用色谱法纯化，用乙酸乙酯/石油醚混合物1∶5-1∶1洗脱得到3.4g标题化合物。
产率：理论产量的82.3%
Rf（乙酸乙酯/石油醚1∶2，硅胶）＝0.25
实施例Ⅷ
2-（四唑-5′-基）苯基硼酸
在-5℃在氩气氛中向2.9g（20mmol）5-苯基四唑在50ml四氢呋喃中的溶液中加入17.6ml（44mmol）2.5M正丁基锂的正己烷溶液。将混合物在-5℃至0℃搅拌30分钟，并在此温度下加入10ml（88mmol）硼酸三甲酯。然后移去冷却浴，在室温下向该溶液中加入10ml稀释了一倍的浓盐酸。1小时后，将混合物用100ml乙酸乙酯萃取，分出有机相，水相用乙酸乙酯萃取2次，每次用20ml。合并的有机相用硫酸钠干燥并浓缩，残余物用硅胶色谱法纯化，用甲苯/冰醋酸/甲醇（38∶0.1∶2）洗脱。
产量：2.65g（理论产量的70%）
Rf＝0.26（甲苯/甲醇/冰醋酸＝32∶8∶1）
13C-NMR：δ＝156.7;137.9;133.5;129.8;128.9;127.7;126.9ppm.
制备实施例
实施例1
6-丁基-4-甲氧羰基-2-氧代-1-｛5-[2-（2-三苯基甲基-四唑-5-基）苯基]吡啶-2-基甲基｝-1，2-二氢吡啶
将1.1g（1.97mmol）实施例Ⅲ的化合物、374mg（1.79mmol）6-丁基-4-甲氧羰基-2-氧代-1，2-二氢吡啶和642mg（1.97mmol）碳酸铯在15ml二甲氧基乙烷中的悬浮液搅拌过夜。反应混合物用水稀释，用乙酸乙酯洗涤3次。有机相用水和氯化钠溶液洗涤，用硫酸钠干燥，用70g硅胶进行色谱法纯化，用乙酸乙酯/石油醚（1∶2）洗脱得到45mg油状物。
产率：理论产量的3.3%
Rf（硅胶，乙酸乙酯/石油醚1∶1）＝0.40
实施例2
6-丁基-2-氧代-1-｛6-[2-（2-三苯基甲基-四唑-5-基）苯基]吡啶-3-基甲基｝-1，2-二氢吡啶-4-甲酸甲酯
用类似于实施例1的方法，由1.98g（5.55mmol）实施例Ⅴ的化合物和2.59g（6mmol）3-（2′-三苯基甲基-2′H-四唑-5′-基）苯基硼酸制得2.15g标题化合物。
产率：理论产量的56%
Rf（硅胶，乙酸乙酯）＝0.64
实施例3
6-丁基-2-氧代-1-｛5-[2-（1H-四唑-5-基）苯基]吡啶-2-基甲基｝-1，2-二氢吡啶-4-甲酸甲酯
向在2ml甲醇中的40mg（0.06mmol）实施例1化合物中加入1滴浓盐酸，并将该混合物在室温下搅拌2小时。然后在30g硅胶上将反应混合物进行色谱法纯化，用二氯甲烷/甲醇混合物（10∶1，5∶1，0∶1）洗脱得到18.6mg标题化合物。
产率：理论产量的72.4%
MS（FAB）：444（M+），445（M++1）
实施例4
6-丁基-2-氧代-1-｛5-[2-（1H-四唑-5-基）苯基]吡啶-2-基甲基｝-1，2-二氢吡啶-4-甲酸二钾盐
将13.5mg（0.03mmol）实施例3的化合物在2ml四氢呋喃和0.6ml 0.1N氢氧化钾水溶液中在20℃下搅拌2小时。蒸掉溶剂，剩下的残余物进行冷冻干燥，产物经五氧化二磷在真空中干燥，得到19.8g标题化合物。
产率：理论产量的100%
MS（FAB）：429（M+），507（M++1+2K）
用类似的方法制备了列于表1中的化合物：
表1
实施例 A D R22R21R5MS(FAB) 起始化合物
编号
5 N CH CH3H Br 523/525(M*+1) 实施例 IV
6 N CH K K Br 实施例 5
7 CH N CH3H H 445(M*+1) 实施例 2
467(M*+Na)
8 CH N K K H 429(M*+1) 实施例7
507(M*+1+2K)
实施例9
6-丁基-2-氧代-1-｛6-[2-（1H-四唑-5-基）苯基]吡啶-3-基甲基｝-1，2-二氢吡啶-4-甲酸盐酸盐
向28.5mg（0.056mmol）实施例8的化合物在5ml水中的溶液中加入1.69ml 0.1N盐酸，将产物冷冻干燥得到21.8mg标题化合物。
产率：理论产量的82.9%
MS（FAB）：431
实施例10
6-丁基-2-氧代-1-｛6-[2-（1H-四唑-5-基）苯基]吡啶-3-基甲基｝-1，2-二氢吡啶-4-甲酸甲酯盐酸盐
向150mg（0.34mmol）实施例7的化合物的溶液中通入氯化氢气体。蒸掉溶剂，残余物经氢氧化钾干燥，得到144mg标题化合物。
产率：理论产量的88.7%
MS（FAB）：445
实施例11
6-丁基-2-氧代-1-｛6-[2-（1H-四唑-5-基）苯基]吡啶-3-基甲基｝-1，2-二氢吡啶-4-甲酸甲酯钾盐
向79.3mg（0.16mmol）实施例7的化合物在6ml甲醇/3ml四氢呋喃中的溶液中加入16mg（0.16mmol）碳酸氢钾在2ml水中的溶液。在20℃真空蒸掉溶剂，将残余物冷冻干燥得到84.4mg标题化合物。
产率：理论产量的51.8%
MS（FAB）：483
实施例12
6-丁基-2-氧代-1-｛5-[2-（1H-四唑-5-基）苯基]吡啶-2-基甲基｝-1，2-二氢吡啶-4-甲酸甲酯钾盐
用类似于实施例11的方法由实施例3的化合物制得标题化合物。
产率：理论产量的79%
MS（FAB）：445（M+1），467（M+Na），483（M+K）
实施例13
6-丁基-2-氧代-1-｛5-[2-（1H-四唑-5-基）苯基]吡啶-2-基甲基｝-1，2-二氢吡啶-4-甲酸
用1N盐酸将5.9mg（0.1mmol）实施例4的化合物在10ml水中的溶液调至pH为2，并用乙酸乙酯洗涤3次。合并的有机相用水和饱和氯化钠溶液洗涤，用硫酸钠干燥，浓缩得到38.3mg标题化合物。
产率：理论产量的76%
MS（FAB）：431（M+1）
实施例14
6-丁基-2-氧代-1-｛6-[2-（2-三苯基甲基-四唑-5-基）苯基]吡啶-3-基甲基｝-1，2-二氢吡啶-4-甲酸苄酯
用类似于实施例1的方法由3.34g（7.3mmol）实施例Ⅶ的化合物和4.1g（8mmol）3-（2′-三苯基甲基-2′H-四唑-5′-基）苯基硼酸制得1.7g标题化合物。
产率：理论产量的31%
Rf（乙酸乙酯/石油醚 1∶1，硅胶）＝0.30
实施例15
6-丁基-2-氧代-1-｛6-[2-（1H-四唑-5-基）苯基]吡啶-3-基甲基｝-1，2-二氢吡啶-4-甲酸苄酯
用类似于实施例3的方法由1.6g（2mmol）实施例14的化合物制得1.0g标题化合物。
产率：理论产量的94%
MS（FAB）：521（M+H）
实施例16
6-丁基-2-氧代-1-｛6-[2-（1H-四唑-5-基）苯基]吡啶-3-基甲基｝-1，2-二氢吡啶-4-甲酸苄酯钾盐
用类似于实施例11的方法由948mg（1.8mmol）实施例15的化合物制得1.0g标题化合物。
产率：理论产量的98.3%
MS（FAB）：521（M+K），559（M+K）