金钱树植株组织培养方法.pdf

本发明公开了金钱树植株组织培养方法，包括外植体的选择消毒、外植体的接种、愈伤组织的分化培养和生根培养4个步骤。本发明利用金钱树顶尖叶片基部为外植体，使得外植体取材容易，数量大，并且操作简单，可形成稳定的小植株，成活率高，可批量进行生产。

权利要求书1.  金钱树植株组织培养方法，包括以下步骤：(1)外植体的选择消毒：选用金钱树幼嫩叶柄作为外植体，用蒸馏水冲洗干净，用75％的酒精消毒30秒，无菌水冲洗，用0.1％的升汞浸泡8min，无菌水冲洗8次，每次2min；(2)外植体的接种：将消毒后备用的外植体切成1平方厘米左右，接种在愈伤组织诱导培养基上，每培养瓶中接种5～6片，每片间隔相等距离；切口插入培养基中，放入培养箱，温度保持22～26℃，光照强度为1200～1500LX，光照时间为15天，形成愈伤组织；(3)愈伤组织的分化培养：待形成愈伤组织以后，将愈伤组织转接到分化培养基，30天后形成大量的分化苗；将长至2～3cm的分化苗接种到生根培养基中，愈伤组织继续接种在新配制的分化培养基上，30天转接一代，以保持高速度递增；(4)生根培养：将组培苗接种到生根培养基上进行生根培养。2.  根据权利要求1所述的金钱树植株组织培养方法，其特征在于，所述愈伤组织诱导培养基由MS+6-BA2mg/L+NAA0.1mg/L组成。3.  根据权利要求1所述的金钱树植株组织培养方法，其特征在于，所述分化培养基由MS+6-BA2mg/L+NAA0.5mg/L组成。4.  根据权利要求1所述的金钱树植株组织培养方法，其特征在于，所述生根培养基由1/2MS+NAA0.1mg/L组成。

说明书金钱树植株组织培养方法
技术领域
本发明涉及培养基技术领域，具体讲是以植物细胞工程技术为手段，通过在一定培养基上离体培养金钱树叶柄等幼嫩组织作为外植体，通过愈伤组织诱导、分化、继代、生根等环节，获得大量再生金钱树的方法。本发明属于生物农业技术领域。
背景技术
金钱树，拉丁文名为Zamioculcas zamiifolia，属天南星科观叶植物，原产热带非洲，常绿多年生，具地下块茎。地上部无主茎，不定芽从块茎萌发形成大型复叶，小叶肉质量具短小叶柄、坚挺浓绿，明亮光泽，观赏价值高。金钱树适宜在不同光强下生长，耐阴性强，有″耐阴王″之称，为新引入的高档室内观赏植物。金钱树有硕大的块茎，其萌发众多的芽和形成群多的小块茎，复叶具2～3年以上寿命，并被新叶不断更新。金钱树苗生长不快，可作小、中盆培栽观赏，也宜作大型拼盆，具有较高的观赏价值。
现有的金钱树的培养方法都是采用金钱树靠分出母块茎上产生的带小球的小株来繁殖，大株每年仅能产生2～5株，繁殖系数较低，速度慢。也采用金钱树的叶插用于繁殖，目前市场上的做法是剪取不同成熟度的小叶或双叶带总叶柄或单叶带总叶柄插于清洁河沙床中，或直接扦插于泥炭等基质中。
目前所采用的分棵和扦插方法的缺点是：需要固体基质，该固体基质不易灭菌，容易污染叶柄上的切割口；操作步骤繁琐，操作人员的工作量大，成活率也非常低，因此大规模的生产受到限制。同时，长期的扦插繁殖和球茎分割还会造成植物生长衰退，植物品质也会下降。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种金钱树植株组织培养方法。
为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：金钱树植株组织培养方法，包括以下步骤：
(1)外植体的选择消毒：选用金钱树幼嫩叶柄作为外植体，用蒸馏水冲洗干净，用75％的酒精消毒30秒，无菌水冲洗，用0.1％的升汞浸泡8min，无菌水冲洗8次，每次2min；
(2)外植体的接种：将消毒后备用的外植体切成1平方厘米左右，接种在愈伤组织诱导培养基上，每培养瓶中接种5～6片，每片间距相等；切口插入培养基中，放入培养箱，温度保持22～26℃，光照强度为1200～1500LX，光照时间为15天，形成愈伤组织；
(3)愈伤组织的分化培养：待形成愈伤组织以后，将愈伤组织转接到分化培养基，30天后形成大量的分化苗；
将长至2～3cm的分化苗接种到生根培养基中，愈伤组织继续接种在新配制的分化培养基上，30天转接一代，以保持高速度递增；
(4)生根培养：将组培苗接种到生根培养基上进行生根培养。
作为优选，愈伤组织诱导培养基由MS+6-BA2mg/L+NAA0.1mg/L组成。
作为优选，分化培养基由MS+6-BA2mg/L+NAA0.5mg/L组成。
作为优选，生根培养基由1/2MS+NAA0.1mg/L组成。
本发明的有益效果是：
利用金钱树顶尖叶片基部为外植体，使得外植体取材容易，数量大，并且操作简单，可形成稳定的小植株，成活率高，可批量进行生产。
具体实施方式
下面结合实例对本发明进一步的进行阐述，我们利用金钱树的叶片基部为外植体，是因为消毒方便，数量上也有保证，也不会影响本身植物的生长。选用金钱树嫩叶的叶柄等幼嫩组织为外植体，用自来水冲洗干净，用75％的酒精 消毒30秒，无菌水冲洗，用0.1％的升汞浸泡8min，再用无菌水冲洗8-10次备用。
将消毒后的外植体切成1厘米大小，接种在MS+6-BA2mg/L+NAA0.1mg/L愈伤组织诱导培养基上，每瓶内放置5片左右，将切片口插入培养基中，在培养箱中培养，保持温度在22℃～26℃之间，约15天左右形成愈伤组织。当愈伤组织达到一定的大小后，接种到MS+6-BA2mg/L+NAA0.5mg/L分化培养基上，约30天后，形成分化苗，如果要得到大量的分化苗，大约在15天接种一次分化苗。待苗高在4CM左右时，将其转入1/2MS+NAA0.1mg/L生根培养基中，对组培苗进行生根培养。待生根苗在半个月之后，打开培养瓶瓶盖，炼苗7天左右将其转入基质培养。基质要透气性、排水性外第一要素。故以木屑，珍珠岩和泥炭土按1∶0.5∶2配方为介质。
实例一：剪取金钱树新叶柄，先用自来水冲洗干净，然后用无菌水浸泡，放入无菌操作台备用。
将洗净的叶柄放入无菌瓶，用75％的酒精消毒30秒，无菌水冲洗5次，用0.1％的升汞浸泡8min，无菌水冲洗8次，每次2min。将洗净的叶柄放入消毒过的培养皿中，用消毒过的纱布将其表面的水分吸干。然后用消毒过的镊子，刀子将消毒过的叶柄切成1厘米左右的正方形小块。接种50瓶，放入培养箱进行培养。5天后观察污染情况，污染共5瓶，污染率为10％。45瓶继续进行培养，15天后检查愈伤组织发生情况，45瓶终形成愈伤组织。愈伤组织成功率为100％。将愈伤组织转到分化培养基上，30天后，形成大量的分化苗。(如需要再次形成大量的分化苗，请继续继代分化培养。)将分化苗转入生根培养基。10天后分化苗全部生根，形成工厂化生产。
实例二：剪取金钱树新叶柄，先用自来水冲洗干净，然后用无菌水浸泡，放入无菌操作台备用。
将洗净的叶柄放入无菌瓶，用75％的酒精消毒30秒，无菌水冲洗5次，用5％次氯酸钠浸泡并不断震荡8min后，将次氯酸钠倒出。用无菌水冲洗8次，每次2min。将洗净的叶柄放入消毒过的培养皿中，用消毒过的纱布将其表面 的水分吸干。然后用消毒过的镊子，刀子将消毒过的叶柄切成1厘米左右的正方形小块。接种50瓶，放入培养箱进行培养。5天后观察污染情况，污染共10瓶，污染率为20％。40瓶继续进行培养，15天后检查愈伤组织发生情况，28瓶终形成愈伤组织。愈伤组织成功率为70％。将愈伤组织转到分化培养基上，30天后，形成大量的分化苗。(如需要再次形成大量的分化苗，请继续继代分化培养。)将分化苗转入生根培养基。10天后分化苗全部生根，形成工厂化生产。
本实施例目的在于提供组织培养金钱树，提高生产率，使其达到产业化水平。本项实验经一年多研究，根据植物再生原理，以叶柄为外植体，建立高频稳定再生体系。
以上所述的本发明实施方式，并不构成对本发明保护范围的限定。任何在本发明的精神和原则之内所作的修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的权利要求保护范围之内。