具有抗肿瘤转移和抗炎活性的新型吲哚类化合物，其合成和应用技术领域
本发明涉及20种5-(双(3-(2-羟乙基)-1H-吲哚-2)甲基)-2-羟基苯甲酰-AA-OBzl，涉及它
们的制备方法，涉及它们抑制肿瘤细胞侵袭和转移作用，涉及它们抑制荷S180瘤小鼠瘤体
增重的活性，涉及它们抗肿瘤肺转移活性和抗炎活性。本发明的化合物在制备抗肿瘤药物，
抗肿瘤转移药物和抗炎药物中具有良好的应用前景。本发明属于生物医药领域。
背景技术
恶性肿瘤严重威胁了人类的生命健康。其中肺癌是最具侵略性的人类癌症之一。对于
肺癌患者晚期的患者，通常10％-15％的人只能存活5年。在过去的30年里这种困难的局面
尚未显著有所改善。在很多临床病例中，肺癌在被诊断之前已经转移到周围组织。手术，
放疗，化疗可能会导致严重副作用，导致患者的生活质量低。因此，迫切需要寻找有效和
安全的药物，以提高肺癌的治疗中的这一缺点。
我们的前期发明(专利申请公布号CN 103539722 A，申请号201310278480.3)表明，芳
基取代甲基连接的双吲哚乙酸衍生物具有显著的抗肿瘤疗效，并且没有明显的细胞毒性或
毒副作用，可作为抗肿瘤药物的候选化合物。在更加深入的实验研究中，发明人发现将双吲
哚乙酸转变为双吲哚乙醇，向连接双吲哚乙醇的CH2引入水杨酰氨基酸苄酯，不仅能够增
强抗肿瘤活性，还能够获得抗肿瘤转移和抗炎症活性，即可以带来突出的技术效果。根据
这些发现，发明人提出了本发明的20种5-(双(3-(2-羟乙基)-1H-吲哚-2)甲基)-2-羟基苯甲酰
-AA-OBzl，及它们的制备和在制备抗肿瘤药物，抗肿瘤转移药物和抗炎症药物中的应用。
发明内容
本发明的第一个内容是提供通式I代表的20种5-(双(3-(2-羟乙基)-1H-吲哚-2)甲基)-2-羟
基苯甲酰-AA-OBzl(式中AA＝Gly，Ala，Leu，Ile，Val，Trp，Phe，Lys，Tyr，Pro，Met，Cys(Bzl)，
Ser，Thr，Gln，Asn，Asp(OBzl)，Glu(OBzl、)，NG-NO2-Arg和The残基)；
本发明的第二个内容是提供通式I的代表的20种5-(双(3-(2-羟乙基)-1H-吲哚-2)甲基)-2-
羟基苯甲酰-AA-OBzl(式中AA＝Gly，Ala，Leu，Ile，Val，Trp，Phe，Lys，Tyr，Pro，Met，
Cys(Bzl)，Ser，Thr，Gln，Asn，Asp(OBzl)，Glu(OBzl)，NG-NO2-Arg和The残基)的制备方法，
该方法由以下步骤构成：
1)在对甲苯磺酸催化和60℃吲哚乙醇与5-甲酰水杨酸甲酯在四氢呋喃中反应，生成为
5-(双(3-(2-羟乙基)-1H-吲哚-2)甲基)-2-羟基苯甲酸甲酯；
2)在4N NaOH溶液中将5-(双(3-(2-羟乙基)-1H-吲哚-2)甲基)-2-羟基苯甲酸甲酯皂化，得
到5-(双(3-(2-羟乙基)-1H-吲哚-2)甲基)-2-羟基苯甲酸；
3)在二环己基碳二亚胺(DCC)和N-羟基苯并三氮唑(HOBt)存在下5-甲酰水杨酸在无水四
氢呋喃中与L-氨基酸苄酯反应，生成5-甲酰-2-羟基-苯甲酰-AA-OBzl，式中AA＝Gly，Ala，
Leu，Ile，Val，Trp，Phe，Lys，Tyr，Pro，Met，Cys(Bzl)，Ser，Thr，Gln，Asn，Asp(OBzl)，
Glu(OBzl)，NG-NO2-Arg和The残基；
4)在对甲苯磺酸催化和60℃存在下吲哚乙醇与5-甲酰-2-羟基-苯甲酰-AA-OBzl在四氢呋
喃中反应，生成5-(双(3-(2-羟乙基)-1H-吲哚-2)甲基)-2-羟基苯甲酰-AA-OBzl，式中AA＝
Gly，Ala，Leu，Ile，Val，Trp，Phe，Lys，Tyr，Pro，Met，Cys(Bzl)，Ser，Thr，Gln，Asn，Asp(OBzl)，
Glu(OBzl)，NG-NO2-Arg和The残基。
本发明的第三个内容是评价通式I的代表的20种5-(双(3-(2-羟乙基)-1H-吲哚-2)甲
基)-2-羟基苯甲酰-AA-OBzl抑制肿瘤细胞增殖的作用；
本发明的第四个内容是评价通式I的代表的20种5-(双(3-(2-羟乙基)-1H-吲哚-2)甲
基)-2-羟基苯甲酰-AA-OBzl抑制荷S180肿瘤小鼠肿瘤生长的作用；
本发明的第五个内容是评价通式I的5-(双(3-(2-羟乙基)-1H-吲哚-2)甲基)-2-羟基苯甲
酰-Trp-OBzl抑制Lewis肺癌小鼠体内肿瘤转移活性；
本发明的第六个内容是评价通式I的5-(双(3-(2-羟乙基)-1H-吲哚-2)甲基)-2-羟基苯甲
酰-Trp-OBzl抑制肿瘤细胞迁移的能力；
本发明的第七个内容是评价评价通式I的5-(双(3-(2-羟乙基)-1H-吲哚-2)甲基)-2-羟基
苯甲酰-Trp-OBzl抑制肿瘤细胞侵袭的能力；
本发明的第八个内容是评价评价通式I的5-(双(3-(2-羟乙基)-1H-吲哚-2)甲基)-2-羟基
苯甲酰-Trp-OBzl抑制二甲苯诱导的小鼠耳肿胀活性；
本发明的第九个内容是阐明通式I的代表的20种5-(双(3-(2-羟乙基)-1H-吲哚-2)甲
基)-2-羟基苯甲酰-AA-OBzl(式中AA＝Gly，Ala，Leu，Ile，Val，Trp，Phe，Lys，Tyr，Pro，
Met，Cys(Bzl)，Ser，Thr，Gln，Asn，Asp(OBzl)，Glu(OBzl)，NG-NO2-Arg和The残基)在制备
抗肿瘤药物，抗肿瘤转移药物和抗炎药物中的应用。
附图说明
图1.化合物的合成路线i)DCC，HOBt，NMM；ii)对甲苯磺酸，60℃；iii)4N NaOH；
1a和2a中AA＝Gly，1b和2b中AA＝Ala，1c和2c中AA＝Leu，1d和2d中AA＝Ile，1e
和2e中AA＝Val，1f和2f中AA＝Trp，1g和2g中AA＝Phe，1h和2h中AA＝Lys，1i
和2i中AA＝Tyr，1j和2j中Pro，1k和2k中AA＝Met，11和21中AA＝Cys(Bzl)，1m和2m
中AA＝Ser，1n和2n中AA＝Thr，1o和2o中AA＝Gln，1p和2p中AA＝Asn，1q和2q中
AA＝Asp(OBzl)，1r和2r中AA＝Glu(OBzl)，1s和2s中AA＝NG-NO2-Arg，1t和2t中
AA＝The残基。
具体实施方式
为了进一步阐述本发明，下面给出一系列实施例。这些实施例完全是例证性的，它们
仅用来对本发明进行具体描述，不应当理解为对本发明的限制。
实施例1液相接肽反应通法
将羧端裸露的化合物用无水四氢呋喃(THF)溶解，得到的溶液加入N-羟基苯骈三氮唑
(HOBt)，冰浴下缓慢加入用无水THF溶解的N，N-二环己基碳二亚胺(DCC)，0℃搅拌15min
得到反应液(I)。羧端保护的氨基酸也用无水THF溶解，用N-甲基吗啉(NMM)调pH 9，然
后与反应液(I)混合，用N-甲基吗啉维持pH 9，室温搅拌10h，TLC监测反应进程。原料
点消失后，反应混合物过滤，滤液减压浓缩，得到粘稠状物质用乙酸乙酯或二氯甲烷溶解，
得到的溶液依次用5％NaHCO3水溶液洗，5％KHSO4水溶液洗，饱和NaCl水溶液洗，乙
酸乙酯或二氯甲烷相加入无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得目标化合物。
实施例2制备5-(双(3-(2-羟乙基)-1H-吲哚-2)甲基)-2-羟基苯甲酸甲酯(3)
1.66g(10mmol)5-甲酰水杨酸甲酯，3.22g(20mmol)吲哚乙醇和0.17g(1mmol)
对甲基苯磺酸用50mLTHF溶解，60℃反应10h后，TLC板监测(CH2Cl2∶CH3OH＝30∶1)
原料点消失，停止反应，冷却至室温，减压浓缩至干，残留物用二氯甲烷溶解，通过硅胶
柱柱层析得到浅黄色粉末3.8g(78％)。IR：3375，3055，1672，1487，1456，1208，1088，738cm-1；
FT-MS(m/e)：485.20627[M+H]+(calculated：484.19982)；1H NMR(800MHz，DMSO-d6)δ＝
10.52(s，2H)，10.47(s，1H)，7.58(s，1H)，7.50(d，J＝8.0Hz，2H)，7.30(d，J＝8.0Hz，2H)，7.25
(d，J＝8.8Hz，2H)，7.04(t，J＝7.2Hz，2H)，6.97(t，J＝7.2Hz，2H)，6.95(d，J＝8.8Hz，1H)，
6.08(s，1H)，3.80(s，3H)，3.53(m，2H)，3.49(m，2H)，2.86(m，4H)。
实施例3制备5-(双(3-(2-羟乙基)-1H-吲哚-2)甲基)-2-羟基苯甲酸(4)
冰浴下1.2g(2.4mmol)5-(双(3-(2-羟乙基)-1H-吲哚-2)甲基)-2-羟基苯甲酸甲酯(3)
用甲醇溶解，加入4N NaOH水溶液，调节pH值到12，反应48h，TLC板监测
(CH2Cl2∶CH3OH＝20∶1)原料点消失，反应完全。冰浴下用饱和KHSO4将反应液调至中性，
减压浓缩除去甲醇，残余物继续调节pH值到3，用乙酸乙酯萃取3次，合并乙酸乙酯相，
用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到1.08g(93％)目标化合物，为浅灰色固体。IR：3367，
1667，1457，1215，1038，740cm-1；FT-MS(m/e)：469.17775[M-H]-(calculated：470.18417)；1H
NMR(800MHz，DMSO-d6)δ＝10.53(s，2H)，7.53(s，1H)，7.50(d，J＝8.0Hz，2H)，7.30(d，J
＝8.0Hz，2H)，7.26(d，J＝8.8Hz，2H)，7.03(t，J＝7.2Hz，2H)，6.97(t，J＝7.2Hz，2H)，6.92(d，
J＝8.8Hz，1H)，6.07(s，1H)，3.53(m，2H)，3.49(m，2H)，2.85(t，J＝7.2Hz，4H)。
实施例4制备5-甲酰-2-羟基苯甲酰-甘氨酸苄酯(1a)
冰浴下将1.66g(10mmol)5-甲酰水杨酸用无水THF溶解，先加入1.35g(10mmol)
HOBt，然后加入2.26g(11mmol)DCC，搅拌0.5h后加入4.05g(12mmol)甘氨酸苄酯
盐酸盐，用NMM调节pH到9，反应8h，TLC板监测(CH2Cl2∶CH3OH＝30∶1)原料点消
失，反应完全。滤除DCU，反应混合液减压浓缩至干，残留物用150mL乙酸乙酯溶解，
滤除不溶物，得到的溶液依次用5％NaHCO3水溶液、饱和NaCl水溶液、5％KHSO4水溶
液和饱和NaCl水溶液洗涤3次，乙酸乙酯层用无水Na2SO4干燥12h，过滤，滤液减压浓
缩至干，得到的淡黄色油状物通过硅胶柱柱层析(CH2Cl2∶CH3OH＝60∶1)纯化，得到2.4g
(72.8％)标题化合物，为淡黄色粉末。ESI-MS(m/e)：314[M+H]+。
实施例5制备5-(双(3-(2-羟乙基)-1H-吲哚-2)甲基)-2-羟基苯甲酰-甘氨酸苄酯(2a)
3.13g(10mmol)5-甲酰-2-羟基-苯甲酰-甘氨酸苄酯(1a)，3.22g(20mmol)吲哚乙
醇和0.17g(1mmol)对甲基苯磺酸用50mLTHF溶解，60℃反应10h，TLC板监测
(CH2Cl2∶CH3OH＝25∶1)原料点消失，显示反应完全。停止反应，冷却至室温，反应混合物
减压浓缩至干，残留物用二氯甲烷溶解，柱层析硅胶拌样，通过硅胶柱柱层析
(CH2Cl2∶CH3OH＝50∶1)纯化，得到4.8g(78％)目标化合物，为浅灰色粉末。IR：3329，3031，
1736，1642，1456，1192，1038，1008，695cm-1；FT-MS(m/e)：618.26100[M+H]+(calculated：
617.25259)；1H NMR(800MHz，DMSO-d6)δ＝11.75(s，1H)，10.53(s，2H)，9.02(s，1H)，7.74
(d，J＝2.4Hz，1H)，7.50(d，J＝8.0Hz，2H)，7.38(m，4H)，7.33(m，3H)，7.17(m，1H)，7.04(t，J
＝7.2Hz，2H)，6.97(t，J＝7.2Hz，2H)，6.91(d，J＝8.0Hz，1H)，6.04(s，1H)，5.15(s，2H)，4.73
(t，J＝4.8Hz，2H)，3.51(m，4H)，2.97(m，4H)。
实施例6制备 5-甲酰-2-羟基-苯甲酰-丙氨酸苄酯(1b)
冰浴下将1.66g(10mmol)5-甲酰水杨酸用无水THF溶解，先加入1.35g(10mmol)
HOBt，然后加入2.26g(11mmol)DCC，搅拌0.5h后，加入4.25g(12mmol)丙氨酸苄
酯盐酸盐，用NMM调节pH到9，反应8h，TLC板监测(CH2Cl2∶CH3OH＝30∶1)原料点
消失，显示反应完全。滤除DCU，反应混合液减压浓缩至干，残留物用150mL乙酸乙酯
溶解，滤除不溶物，得到的溶液依次用5％NaHCO3水溶液、饱和NaCl水溶液、5％KHSO4
水溶液和饱和NaCl水溶液洗涤3次，乙酸乙酯层用无水Na2SO4干燥2h，过滤，滤液减
压浓缩至干。残留物通过硅胶柱柱层析(CH2Cl2∶CH3OH＝60∶1)纯化，得到2.7g(82％)目标
化合物，为浅黄色粉末。ESI-MS(m/e)：328[M+H]+。
实施例7制备 5-(双(3-(2-羟乙基)-1H-吲哚-2)甲基)-2-羟基苯甲酰-丙氨酸苄酯(2b)
0.98g(3mmol)5-甲酰-2-羟基-苯甲酰-丙氨酸苄酯(1b)，0.75g(4.5mmol)吲哚乙醇
和0.16g(0.3mmol)对甲基苯磺酸用50mL THF溶解，60℃反应10h，TLC板监测
(CH2Cl2∶CH3OH＝25∶1)原料点消失。停止反应，冷却至室温，反应混合物减压浓缩至干，
残留物用二氯甲烷溶解，通过硅胶柱柱层析(CH2Cl2∶CH3OH＝50∶1)纯化，得到0.6g(79％)
目标化合物，为浅灰色粉末。IR：3330，1735，1641，1537，1456，
1215，1040，803cm-1；FT-MS(m/e)：632.27346[M+H]+(calculated：631.26824)；1H NMR
(800MHz，DMSO-d6)δ＝10.49(s，2H)，7.78(s，1H)，7.48(d，J＝7.2Hz，2H)，7.36(m，4H)，
7.28(m，3H)，7.11(dd，J1＝8.0Hz，J2＝8.8Hz，1H)，7.02(t，J＝7.2Hz，2H)，6.96(t，J＝7.2Hz，
2H)，6.90(d，J＝8.8Hz，1H)，6.02(s，1H)，5.14(q，J＝4.8Hz，2H)，4.53(q，J＝7.2Hz，1H)，
3.49(m，4H)，3.34(m，4H)，1.40(d，J＝7.2Hz，3H)。
实施例8制备 5-甲酰-2-羟基-苯甲酰-亮氨酸苄酯(1c)
冰浴下将1.66g(10mmol)5-甲酰水杨酸用无水THF溶解，先加入1.35g(10mmol)
HOBt，然后加入2.26g(11mmol)DCC，搅拌0.5h后加入4.70g(12mmol)亮氨酸苄酯
盐酸盐，用NMM调节pH到9，反应8h，TLC板监测(CH2Cl2∶CH3OH＝30∶1)原料点消
失，反应完全。滤除DCU，反应混合液减压浓缩至干，残留物用150mL乙酸乙酯溶解，
滤除不溶物，得到的溶液依次用5％NaHCO3水溶液、饱和NaCl水溶液、5％KHSO4水溶
液和饱和NaCl水溶液洗涤3次，乙酸乙酯层用无水Na2SO4干燥2h，过滤，滤液减压浓
缩至干，得到的淡黄色油状物通过硅胶柱柱层析(CH2Cl2∶CH3OH＝60∶1)纯化，得到3.0g
(81.8％)标题化合物，为淡黄色粉末。ESI-MS(m/e)：370[M+H]+。
实施例9制备(5-(双(3-(2-羟乙基)-1H-吲哚-2)甲基)-2-羟基苯甲酰-亮氨酸苄酯(2c)
1.1g(3mmol)5-甲酰-2-羟基-苯甲酰-亮氨酸苄酯(1c)，0.75g(4.5mmol)吲哚乙
醇和0.16g(0.3mmol)对甲基苯磺酸用50mL THF溶解，60℃反应10h，TLC板监测
(CH2Cl2∶CH3OH＝25∶1)原料点消失。停止反应，冷却至室温，反应混合物减压浓缩至干，
残留物用二氯甲烷溶解，通过硅胶柱柱层析(CH2Cl2∶CH3OH＝60∶1)纯化，得到0.52g
(80.8％)目标化合物，为浅灰色粉末。IR：3349，2952，1735，1643，
1457，1216，738cm-1；FT-MS(m/e)：674.31798[M+H]+(calculated：673.31519)；1H NMR
(800MHz，DMSO-d6)δ＝11.69(s，1H)，10.51(d，J＝6.4Hz，2H)，8.86(d，J＝7.2Hz，2H)，
7.79(d，J＝2.4Hz，1H)，7.49(d，J＝8.0Hz，2H)，7.35(m，4H)，7.27(m，3H)，7.13(dd，J1＝8.0
Hz，J2＝2.4Hz，2H)，7.03(t，J＝7.2Hz，2H)，6.98(t，J＝7.2Hz，2H)，6.91(d，J＝8.0Hz，1H)，
6.03(s，1H)，5.76(s，1H)，5.21(m，2H)，4.55(m，1H)，3.57(m，4H)，2.95(m，4H)，1.72(m，1H)，
1.62(m，2H)，0.87(d，J＝6.4Hz，3H)，0.85(d，J＝6.4Hz，3H)。
实施例10制备 5-甲酰-2-羟基-苯甲酰-异亮氨酸苄酯(1d)
冰浴下将1.66g(10mmol)5-甲酰水杨酸用无水THF溶解，先加入1.35g(10mmol)
HOBt，然后加入2.26g(11mmol)DCC，搅拌0.5h后加入4.70g(12mmol)异亮氨酸苄
酯盐酸盐，用NMM调节pH到9，反应8h，TLC板监测(CH2Cl2∶CH3OH＝30∶1)原料点
消失，反应完全。滤除DCU，反应混合液减压浓缩至干，残留物用150mL乙酸乙酯溶解，
滤除不溶物，得到的溶液依次用5％NaHCO3水溶液、饱和NaCl水溶液、5％KHSO4水溶
液和饱和NaCl水溶液洗涤3次，乙酸乙酯层用无水Na2SO4干燥2h，过滤，滤液减压浓
缩至干，得到的淡黄色油状物通过硅胶柱柱层析(CH2Cl2∶CH3OH＝60∶1)纯化，得到3g
(81.7％)标题化合物，为淡黄色粉末。ESI-MS(m/e)：370[M+H]+。
实施例11制备(5-(双(3-(2-羟乙基)-1H-吲哚-2)甲基)-2-羟基苯甲酰-异亮氨酸苄酯(2d)
1.1g(3mmol)5-甲酰-2-羟基-苯甲酰-异亮氨酸苄酯(1d)，0.75g(4.5mmol)吲哚乙
醇和0.16g(0.3mmol)对甲基苯磺酸用50mLTHF溶解，60℃反应10h，TLC板监测
(CH2Cl2∶CH3OH＝25∶1)原料点消失，显示反应完全。停止反应，冷却至室温，反应混合物
减压浓缩至干，残留物用二氯甲烷溶解，柱层析硅胶拌样，通过硅胶柱柱层析
(CH2Cl2∶CH3OH＝50∶1)纯化，得到0.6g(82.7％)目标化合物，为浅灰色粉末。
(c＝0.6，CH3OH)；IR：3321，2928，1729，1641，1456，1191，738cm-1；FT-MS(m/e)：674.31936
[M+H]+(calculated：673.31519)；1H NMR(800MHz，DMSO-d6)δ＝11.47(s，1H)，10.52(s，
2H)，8.85(d，J＝8.0Hz，1H)，7.73(s，1H)，7.50(d，J＝8.0Hz，2H)，7.35(m，4H)，7.33(m，1H)，
7.30(d，J＝8.0Hz，2H)，7.13(dd，J1＝8.8Hz，J2＝2.4Hz，1H)，7.06(t，J＝7.2Hz，2H)，6.97(t，
J＝7.2Hz，2H)，6.92(d，J＝8.8Hz，1H)，6.04(s，1H)，5.16(q，J＝4.0Hz，2H)，4.74(s，1H)，4.50
(dd，J1＝8.0Hz，J2＝5.6Hz，1H)，3.56(m，4H)，2.85(m，4H)，1.96(m，1H)，1.40(m，1H)，1.16
(m，1H)，0.87(d，J＝7.2Hz，3H)，0.84(t，J＝7.2Hz，3H)。
实施例12制备5-甲酰-2-羟基-苯甲酰-缬氨酸苄酯(1e)
冰浴下将1.66g(10mmol)5-甲酰水杨酸用无水THF溶解，先加入1.35g(10mmol)
HOBt，然后加入2.26g(11mmol)DCC，搅拌0.5h后加入4.50g(12mmol)缬氨酸苄酯
盐酸盐，用NMM调节pH到9，反应8h，TLC板监测(CH2Cl2∶CH3OH＝30∶1)原料点消
失，反应完全。滤除DCU，反应混合液减压浓缩至干，残留物用150mL乙酸乙酯溶解，
滤除不溶物，得到的溶液依次用5％NaHCO3水溶液、饱和NaCl水溶液、5％KHSO4水溶
液和饱和NaCl水溶液洗涤3次，乙酸乙酯层用无水Na2SO4干燥2h，过滤，滤液减压浓
缩至干，得到的淡黄色油状物通过硅胶柱柱层析(CH2Cl2∶CH3OH＝60∶1)纯化，得到3.1g
(87.3％)标题化合物，为淡黄色粉末。ESI-MS(m/e)：355[M+H]+。
实施例13制备(5-(双(3-(2-羟乙基)-1H-吲哚-2)甲基)-2-羟基苯甲酰-缬氨酸苄酯(2e)
1.06g(3mmol)5-甲酰-2-羟基-苯甲酰-缬氨酸苄酯(1e)，0.75g(4.5mmol)吲哚乙
醇和0.16g(0.3mmol)对甲基苯磺酸用50mLTHF溶解，60℃反应10h，TLC板监测
(CH2Cl2∶CH3OH＝25∶1)原料点消失，显示反应完全。停止反应，冷却至室温，反应混合物
减压浓缩至干，残留物用二氯甲烷溶解，柱层析硅胶拌样，通过硅胶柱柱层析
(CH2Cl2∶CH3OH＝50∶1)纯化，得到0.48g(80.3％)目标化合物，为浅灰色粉末。
(c＝0.5，CH3OH)；IR：3324，2932，1735，1640，1456，1038，738，696cm-1；FT-MS(m/e)：
660.3026[M+H]+(calculated：659.29954)；1H NMR(800MHz，DMSO-d6)δ＝11.48(s，1H)，
10.52(s，2H)，8.84(s，1H)，7.74(s，1H)，7.50(d，J＝8.0Hz，2H)，7.36(m，4H)，7.39(m，3H)，
7.13(dd，J1＝8.8Hz，J2＝2.4Hz，1H)，7.03(t，J＝7.2Hz，2H)，6.97(t，J＝7.2Hz，2H)，6.93(d，
J＝8.8Hz，1H)，6.04(s，1H)，5.16(dd，J＝37.6，12Hz，2H)，4.62(s，2H)，4.44(d，J＝7.2Hz，1H)，
3.61(m，4H)，2.85(m，4H)，2.18(m，1H)，0.90(d，J＝7.2Hz，3H)，0.88(d，J＝7.2Hz，3H)。
实施例14制备5-甲酰-2-羟基-苯甲酰-色氨酸苄酯(1f)
冰浴下将1.66g(10mmol)5-甲酰水杨酸用无水THF溶解，先加入1.35g(10mmol)
HOBt，然后加入2.26g(11mmol)DCC，搅拌0.5h后加入3.97g(12mmol)色氨酸苄酯
盐酸盐，用NMM调节pH到9，反应8h，TLC板监测(CH2Cl2∶CH3OH＝30∶1)原料点消
失，反应完全。滤除DCU，反应混合液减压浓缩至干，残留物用150mL乙酸乙酯溶解，
滤除不溶物，得到的溶液依次用5％NaHCO3水溶液、饱和NaCl水溶液、5％KHSO4水溶
液和饱和NaCl水溶液洗涤3次，乙酸乙酯层用无水Na2SO4干燥2h，过滤，滤液减压浓
缩至干，得到的淡黄色油状物通过硅胶柱柱层析(CH2Cl2∶CH3OH＝60∶1)纯化，得到3.5g
(79.1％)标题化合物，为淡黄色粉末。ESI-MS(m/e)：443[M+H]+。
实施例15制备(5-(双(3-(2-羟乙基)-1H-吲哚-2)甲基)-2-羟基苯甲酰-色氨酸苄酯(2f)
1.33g(3mmol)5-甲酰-2-羟基-苯甲酰-色氨酸苄酯(1f)，0.75g(4.5mmol)吲哚乙
醇和0.16g(0.3mmol)对甲基苯磺酸用50mLTHF溶解，60℃反应10h，TLC板监测
(CH2Cl2∶CH3OH＝25∶1)原料点消失，显示反应完全。停止反应，冷却至室温，反应混合物
减压浓缩至干，残留物用二氯甲烷溶解，柱层析硅胶拌样，通过硅胶柱柱层析
(CH2Cl2∶CH3OH＝50∶1)纯化，得到1.82g(81.3％)目标化合物，为浅灰色粉末。
(c＝0.8，CH3OH)；IR：3396，3056，1736，1642，1456，1215，737，696cm-1；FT-MS(m/e)：
747.31278[M+H]+(calculated：746.31044)；1H NMR(800MHz，DMSO-d6)δ＝10.81(s，1H)，
10.49(s，2H)，7.75(s，1H)，7.49(d，J＝12Hz，2H)，7.47(d，J＝9.6Hz，1H)，7.34(d，J＝8.0Hz，
1H)，7.29(m，5H)，7.20(m，2H)，7.09(m，2H)，7.06(m，3H)，6.99(t，J＝7.2Hz，2H)，6.94(t，J＝
7.2Hz，1H)，6.87(d，J＝8.0Hz，1H)，6.01(s，1H)，5.09(q，J＝12Hz，2H)，4.74(t，J＝7.2Hz，
1H)，3.54(m，4H)，3.28(m，2H)，2.83(m，4H)。
实施例16制备5-甲酰-2-羟基-苯甲酰-苯丙氨酸苄酯(1g)
冰浴下将1.66g(10mmol)5-甲酰水杨酸用无水THF溶解，先加入1.35g(10mmol)
HOBt，然后加入2.26g(11mmol)DCC，搅拌0.5h后加入4.27g(12mmol)苯丙氨酸苄
酯盐酸盐，用NMM调节pH到9，反应8h，TLC板监测(CH2Cl2∶CH3OH＝30∶1)原料点
消失，反应完全。滤除DCU，反应混合液减压浓缩至干，残留物用150mL乙酸乙酯溶解，
滤除不溶物，得到的溶液依次用5％NaHCO3水溶液、饱和NaCl水溶液、5％KHSO4水溶
液和饱和NaCl水溶液洗涤3次，乙酸乙酯层用无水Na2SO4干燥2h，过滤，滤液减压浓
缩至干，得到的淡黄色油状物通过硅胶柱柱层析(CH2Cl2∶CH3OH＝60∶1)纯化，得到2.4g
(67.9％)标题化合物，为淡黄色粉末。ESI-MS(m/e)：404[M+H]+。
实施例17制备(5-(双(3-(2-羟乙基)-1H-吲哚-2)甲基)-2-羟基苯甲酰-苯丙氨酸苄酯(2g)
1.2g(3mmol)5-甲酰-2-羟基-苯甲酰-苯丙氨酸苄酯(1g)，0.75g(4.5mmol)吲哚乙
醇和0.16g(0.3mmol)对甲基苯磺酸用50mLTHF溶解，60℃反应10h，TLC板监测
(CH2Cl2∶CH3OH＝25∶1)原料点消失，显示反应完全。停止反应，冷却至室温，反应混合物
减压浓缩至干，残留物用二氯甲烷溶解，柱层析硅胶拌样，通过硅胶柱柱层析
(CH2Cl2∶CH3OH＝50∶1)纯化，得到1.69g(79.5％)目标化合物，为浅灰色粉末。
(c＝0.6，CH3OH)；IR：3331，3032，1740，1678，1455，1215，738，694cm-1；FT-MS(m/e)：
708.30314[M+H]+(calculated：707.29954)；1H NMR(800MHz，DMSO-d6)δ＝11.48(s，1H)，
10.49(s，2H)，8.90(d，J＝7.2Hz，1H)，7.75(s，1H)，7.49(d，J＝8.0Hz，2H)，7.33(m，7H)，7.17
(m，5H)，7.09(dd，J1＝8.0Hz，J2＝2.4Hz，2H)，7.05((t，J＝8Hz，2H)，6.97(t，J＝8.0Hz，2H)，
6.88(d，J＝8.8Hz，1H)，6.02(s，1H)，5.75(s，2H)，4.74(m，1H)，3.54(m，4H)，3.16(dd，J1＝13.6
Hz，J2＝5.6Hz，1H)，3.10(dd，J1＝8Hz，J2＝5.6Hz，1H)，2.83(m，4H)。
实施例18 制备5-甲酰-2-羟基-苯甲酰-赖氨酸苄酯(1h)
冰浴下将1.66g(10mmol)5-甲酰水杨酸用无水THF溶解，先加入1.35g(10mmol)
HOBt，然后加入2.26g(11mmol)DCC，搅拌0.5h后加入4.5g(12mmol)Lys(Boc)-OBzl，
用NMM调节pH到9，反应8h，TLC板监测(CH2Cl2∶CH3OH＝30∶1)原料点消失，反应
完全。滤除DCU，反应混合液减压浓缩至干，残留物用150mL乙酸乙酯溶解，滤除不溶
物，得到的溶液依次用5％NaHCO3水溶液、饱和NaCl水溶液、5％KHSO4水溶液和饱和
NaCl水溶液洗涤3次，乙酸乙酯层用无水Na2SO4干燥2h，过滤，滤液减压浓缩至干，得
到的淡黄色油状物通过硅胶柱柱层析(CH2Cl2∶CH3OH＝60∶1)纯化，得到3.4g(70.8％)标
题化合物，为淡黄色粉末。ESI-MS(m/e)：485[M+H]+。
实施例19 制备(5-(双(3-(2-羟乙基)-1H-吲哚-2)甲基)-2-羟基苯甲酰-赖氨酸苄酯(2h)
1.5g(3mmol)5-甲酰-2-羟基-苯甲酰-赖氨酸苄酯(1h)，0.75g(4.5mmol)吲哚乙
醇和0.16g(0.3mmol)对甲基苯磺酸用50mLTHF溶解，60℃反应10h，TLC板监测
(CH2Cl2∶CH3OH＝25∶1)原料点消失，显示反应完全。停止反应，冷却至室温，反应混合物
减压浓缩至干，残留物用二氯甲烷溶解，柱层析硅胶拌样，通过硅胶柱柱层析
(CH2Cl2∶CH3OH＝50∶1)纯化，得到2.01g(85％)目标化合物，为浅灰色粉末。(c
＝0.8，CH3OH)；IR：3323，2930，1736，1643，1456，1365，738，696cm-1；FT-MS(m/e)：
789.38138[M+H]+(calculated：788.32609)；1H NMR(800MHz，DMSO-d6)δ＝11.65(s，1H)，
10.53(s，2H)，8.87(d，J＝7.2Hz，1H)，7.77(s，1H)，7.49(d，J＝8.0Hz，2H)，7.36(m，4H)，7.32
(m，3H)，7.12(d，J＝1.6Hz，1H)，7.01(t，J＝7.2Hz，2H)，6.95(t，J＝7.2Hz，2H)，6.88(d，J＝8.0
Hz，1H)，6.61(t，J＝7.2Hz，1H)，6.03(s，1H)，5.15(q，J＝12Hz，2H)，4.72(m，2H)，4.48(m，
1H)，3.53(m，4H)，2.95(m，6H)，1.82(m，1H)，1.75(m，1H)，1.34(s，10H)，1.24(m，2H)。
实施例20 制备5-甲酰-2-羟基-苯甲酰-酪氨酸苄酯(1i)
冰浴下将1.66g(10mmol)5-甲酰水杨酸用无水THF溶解，先加入1.35g(10mmol)
HOBt，然后加入2.26g(11mmol)DCC，搅拌0.5h后加入5.3g(12mmol)酪氨酸苄酯盐
酸盐，用NMM调节pH到9，反应8h，TLC板监测(CH2Cl2∶CH3OH＝30∶1)原料点消失，
反应完全。滤除DCU，反应混合液减压浓缩至干，残留物用150mL乙酸乙酯溶解，滤除
不溶物，得到的溶液依次用5％NaHCO3水溶液、饱和NaCl水溶液、5％KHSO4水溶液和
饱和NaCl水溶液洗涤3次，乙酸乙酯层用无水Na2SO4干燥2h，过滤，滤液减压浓缩至
干，得到的淡黄色油状物通过硅胶柱柱层析(CH2Cl2∶CH3OH＝60∶1)纯化，得到3.6g
(85.7％)标题化合物，为淡黄色粉末。ESI-MS(m/e)：420[M+H]+。
实施例21 制备(5-(双(3-(2-羟乙基)-1H-吲哚-2)甲基)-2-羟基苯甲酰-酪氨酸苄酯(2i)
1.2g(3mmol)5-甲酰-2-羟基-苯甲酰-酪氨酸苄酯(1i)，0.75g(4.5mmol)吲哚乙醇
和0.16g(0.3mmol)对甲基苯磺酸用50mLTHF溶解，60℃反应10h，TLC板监测
(CH2Cl2∶CH3OH＝25∶1)原料点消失，显示反应完全。停止反应，冷却至室温，反应混合物
减压浓缩至干，残留物用二氯甲烷溶解，柱层析硅胶拌样，通过硅胶柱柱层析
(CH2Cl2∶CH3OH＝50∶1)纯化，得到1.76g(81.0％)目标化合物，为浅灰色粉末。(c
＝0.6，CH3OH)；IR：3324，2969，1735，1641，1456，1358，1215，738，696cm-1；FT-MS(m/e)：
724.30316[M+H]+(calculated：723.29445)；1H NMR(800MHz，DMSO-d6)δ＝11.47(s，1H)，
10.53(s，2H)，9.25(s，1H)，8.85(s，1H)，7.73(s，1H)，7.49(m，2H)，7.34(m，4H)，7.28(m，3H)，
7.14(m，1H)，7.03(t，J＝7.2Hz，2H)，6.96(m，2H)，6.92(m，2H)，6.88(d，J＝7.2Hz，1H)，6.61
(d，J＝8.0Hz，1H)，6.03(s，1H)，5.76(s，2H)，5.11(m，2H)，4.69(m，2H)，3.53(m，4H)，3.05(m，
2H)，2.91(m，4H)。
实施例22 制备5-甲酰-2-羟基-苯甲酰-脯氨酸苄酯(1j)
冰浴下将1.66g(10mmol)5-甲酰水杨酸用无水THF溶解，先加入1.35g(10mmol)
HOBt，然后加入2.26g(11mmol)DCC，搅拌0.5h后加入2.9g(12mmol)脯氨酸苄酯盐
酸盐，用NMM调节pH到9，反应8h，TLC板监测(CH2Cl2∶CH3OH＝30∶1)原料点消失，
反应完全。滤除DCU，反应混合液减压浓缩至干，残留物用150mL乙酸乙酯溶解，滤除
不溶物，得到的溶液依次用5％NaHCO3水溶液、饱和NaCl水溶液、5％KHSO4水溶液和
饱和NaCl水溶液洗涤3次，乙酸乙酯层用无水Na2SO4干燥2h，过滤，滤液减压浓缩至
干，得到的淡黄色油状物通过硅胶柱柱层析(CH2Cl2∶CH3OH＝60∶1)纯化，得到3.1g
(84.2％)标题化合物，为淡黄色粉末。ESI-MS(m/e)：354[M+H]+。
实施例23 制备(5-(双(3-(2-羟乙基)-1H-吲哚-2)甲基)-2-羟基苯甲酰-脯氨酸苄酯(2j)
1.1g(3mmol)5-甲酰-2-羟基-苯甲酰-脯氨酸苄酯(1j)，0.75g(4.5mmol)吲哚乙醇
和0.16g(0.3mmol)对甲基苯磺酸用50mLTHF溶解，60℃反应10h，TLC板监测
(CH2Cl2∶CH3OH＝25∶1)原料点消失，显示反应完全。停止反应，冷却至室温，反应混合物
减压浓缩至干，残留物用二氯甲烷溶解，柱层析硅胶拌样，通过硅胶柱柱层析
(CH2Cl2∶CH3OH＝50∶1)纯化，得到1.63g(81.5％)目标化合物，为浅灰色粉末。
(c＝0.5，CH3OH)；IR：3297，3030，1736，1574，1455，1365，1216，737，696cm-1；FT-MS(m/e)：
658.28914[M+H]+(calculated：657.28389)；1H NMR(800MHz，DMSO-d6)δ＝10.58(s，2H)，
10.00(s，1H)，7.50(d，J＝7.2Hz，2H)，7.38-7.21(m，8H)，7.03(t，J＝7.2Hz，3H)，6.94(t，J＝
7.2Hz，4H)，6.92(s，1H)，6.85(d，J＝8.0Hz，1H)，6.02(s，1H)，5.08(q，J＝12.0Hz，2H)，4.64
(s，2H)，4.45(t，J＝4.8Hz，1H)，3.55(m，4H)，2.86(m，4H)，2.28(m，1H)，1.86(m，4H)。
实施例24制备5-甲酰-2-羟基-苯甲酰-蛋氨酸苄酯(1k)
冰浴下将1.66g(10mmol)5-甲酰水杨酸用无水THF溶解，先加入1.35g(10mmol)
HOBt，然后加入2.26g(11mmol)DCC，搅拌0.5h后加入4.9g(12mmol)蛋氨酸苄酯盐
酸盐，用NMM调节pH到9，反应8h，TLC板监测(CH2Cl2∶CH3OH＝30∶1)原料点消失，
反应完全。滤除DCU，反应混合液减压浓缩至干，残留物用150mL乙酸乙酯溶解，滤除
不溶物，得到的溶液依次用5％NaHCO3水溶液、饱和NaCl水溶液、5％KHSO4水溶液和
饱和NaCl水溶液洗涤3次，乙酸乙酯层用无水Na2SO4干燥2h，过滤，滤液减压浓缩至
干，得到的淡黄色油状物通过硅胶柱柱层析(CH2Cl2∶CH3OH＝60∶1)纯化，得到3.0g
(83.7％)标题化合物，为淡黄色粉末。ESI-MS(m/e)：358[M+H]+。
实施例25制备(5-(双(3-(2-羟乙基)-1H-吲哚-2)甲基)-2-羟基苯甲酰-蛋氨酸苄酯(2k)
1.1g(3mmol)5-甲酰-2-羟基-苯甲酰-蛋氨酸苄酯(1k)，0.75g(4.5mmol)吲哚乙醇
和0.16g(0.3mmol)对甲基苯磺酸用50mL THF溶解，60℃反应10h，TLC板监测
(CH2Cl2∶CH3OH＝25∶1)原料点消失，显示反应完全。停止反应，冷却至室温，反应混合物
减压浓缩至干，残留物用二氯甲烷溶解，柱层析硅胶拌样，通过硅胶柱柱层析
(CH2Cl2∶CH3OH＝50∶1)纯化，得到1.71g(82.3％)目标化合物，为浅灰色粉末。
(c＝1.0，CH3OH)；IR：3321，3031，1735，1641，1457，1216，739，696cm-1；FT-MS(m/e)：
692.27857[M+H]+(calculated：691.27161)；1H NMR(800MHz，DMSO-d6)δ＝11.67(s，1H)，
10.51(s，2H)，8.93(d，J＝8.0Hz，1H)，7.77(s，1H)，7.49(d，J＝8.0Hz，2H)，7.37(m，4H)，7.30
(m，3H)，7.13(dd，J1＝8.8Hz，J2＝2.4Hz，1H)，7.02(t，J＝7.2Hz，2H)，6.97(t，J＝7.2Hz，2H)，
6.91(d，J＝8.8Hz，1H)，6.03(s，1H)，5.16(dd，J1＝29.6Hz，J2＝12.8Hz，2H)，4.72(s，2H)，4.66
(m，1H)，3.53(m，4H)，2.83(m，4H)，2.47(m，2H)，2.13(m，2H)，1.96(s，3H)。
实施例26制备5-甲酰-2-羟基-苯甲酰-半胱氨酸苄醚苄酯(1l)
冰浴下将1.66g(10mmol)5-甲酰水杨酸用无水THF溶解，先加入1.35g(10mmol)
HOBt，然后加入2.26g(11mmol)DCC，搅拌0.5h后加入1.7g(4.9mmol)半胱氨酸苄
醚苄酯盐酸盐，用NMM调节pH到9，反应8h，TLC板监测(CH2Cl2∶CH3OH＝30∶1)原
料点消失，反应完全。滤除DCU，反应混合液减压浓缩至干，残留物用150mL乙酸乙酯
溶解，滤除不溶物，得到的溶液依次用5％NaHCO3水溶液、饱和NaCl水溶液、5％KHSO4
水溶液和饱和NaCl水溶液洗涤3次，乙酸乙酯层用无水Na2SO4干燥2h，过滤，滤液减
压浓缩至干，得到的淡黄色油状物通过硅胶柱柱层析(CH2Cl2∶CH3OH＝60∶1)纯化，得到
2.1g(65.8％)标题化合物，为淡黄色粉末。ESI-MS(m/e)：450[M+H]+。
实施例27制备(5-(双(3-(2-羟乙基)-1H-吲哚-2)甲基)-2-羟基苯甲酰-半胱氨酸苄醚苄酯(21)
1.3g(3mmol)5-甲酰-2-羟基-苯甲酰-半胱氨酸苄醚苄酯(1l)，0.75g(4.5mmol)
吲哚乙醇和0.16g(0.3mmol)对甲基苯磺酸用50mL THF溶解，60℃反应10h，TLC
板监测(CH2Cl2∶CH3OH＝25∶1)原料点消失，显示反应完全。停止反应，冷却至室温，反
应混合物减压浓缩至干，残留物用二氯甲烷溶解，柱层析硅胶拌样，通过硅胶柱柱层析
(CH2Cl2∶CH3OH＝50∶1)纯化，得到1.76g(78.0％)目标化合物，为浅灰色粉末。
(c＝0.7，CH3OH)；IR：3322，3030，1737，1642，1455，1216，738，696cm-1；FT-MS(m/e)：
754.29240[M+H]+(calculated：753.28726)；1H NMR(800MHz，DMSO-d6)δ＝11.58(s，1H)，
10.77(s，2H)，9.11(s，1H)，7.75(s，1H)，7.50(dd，J1＝12.0Hz，J2＝8.0Hz，3H)，7.35(m，4H)，
7.28(m，3H)，7.24(m，2H)，7.22(m，1H)，7.16(m，2H)，7.08(m，2H)，6.97(t，J＝7.2Hz，2H)，
6.92(d，J＝8.0Hz，1H)，6.04(s，1H)，5.15(q，J＝4.8Hz，2H)，4.78(td，J1＝7.2Hz，J2＝5.6Hz，
1H)，4.73(s，2H)，4.60(s，1H)，3.73(s，2H)，3.65(t，J＝7.2Hz，2H)，3.56(m，4H)，2.84(m，4H)。
实施例28制备5-甲酰-2-羟基-苯甲酰-丝氨酸苄酯(1m)
冰浴下将1.66g(10mmol)5-甲酰水杨酸用无水THF溶解，先加入1.35g(10mmol)
HOBt，然后加入2.26g(11mmol)DCC，搅拌0.5h后加入2.8g(12mmol)丝氨酸苄酯盐
酸盐，用NMM调节pH到9，反应8h，TLC板监测(CH2Cl2∶CH3OH＝30∶1)原料点消失，
反应完全。滤除DCU，反应混合液减压浓缩至干，残留物用150mL乙酸乙酯溶解，滤除
不溶物，得到的溶液依次用5％NaHCO3水溶液、饱和NaCl水溶液、5％KHSO4水溶液和
饱和NaCl水溶液洗涤3次，乙酸乙酯层用无水Na2SO4干燥2h，过滤，滤液减压浓缩至
干，得到的淡黄色油状物通过硅胶柱柱层析(CH2Cl2∶CH3OH＝60∶1)纯化，得到2.8g
(81.4％)标题化合物，为淡黄色粉末。ESI-MS(m/e)：344[M+H]+。
实施例29制备(5-(双(3-(2-羟乙基)-1H-吲哚-2)甲基)-2-羟基苯甲酰-丝氨酸苄酯(2m)
1.3g(3mmol)5-甲酰-2-羟基-苯甲酰-丝氨酸苄酯(1m)，0.75g(4.5mmol)吲哚乙
醇和0.16g(0.3mmol)对甲基苯磺酸用50mL THF溶解，60℃反应10h，TLC板监测
(CH2Cl2∶CH3OH＝25∶1)原料点消失，显示反应完全。停止反应，冷却至室温，反应混合物
减压浓缩至干，残留物用二氯甲烷溶解，柱层析硅胶拌样，通过硅胶柱柱层析
(CH2Cl2∶CH3OH＝50∶1)纯化，得到1.56g(81.3％)目标化合物，为浅灰色粉末。
(c＝0.9，CH3OH)；IR：3335，2940，1737，1642，1456，1259，738，695cm-1；FT-MS(m/e)：
648.26903[M+H]+(calculated：647.26315)；1H NMR(800MHz，DMSO-d6)δ＝11.42(s，1H)，
10.53(s，2H)，9.05(s，1H)，7.76(s，1H)，7.49(d，J＝7.2Hz，2H)，7.38(m，4H)，7.28(m，3H)，
7.21(m，2H)，7.15(dd，J＝8.8，2.4Hz，1H)，7.05(t，J＝7.2Hz，2H)，6.97(t，J＝7.2Hz，2H)，
6.90(d，J＝8.0Hz，1H)，6.04(s，1H)，5.16(s，2H)，4.65(m，1H)，3.88(d，J＝7.2Hz，1H)，3.75
(d，J＝7.2Hz，1H)，3.58(m，4H)，2.84(m，4H)。
实施例30 制备5-甲酰-2-羟基-苯甲酰-苏氨酸苄酯(1n)
冰浴下将1.66g(10mmol)5-甲酰水杨酸用无水THF溶解，先加入1.35g(10mmol)
HOBt，然后加入2.26g(11mmol)DCC，搅拌0.5h后加入2.9g(12mmol)苏氨酸苄酯盐
酸盐，用NMM调节pH到9，反应8h，TLC板监测(CH2Cl2∶CH3OH＝30∶1)原料点消失，
反应完全。滤除DCU，反应混合液减压浓缩至干，残留物用150mL乙酸乙酯溶解，滤除
不溶物，得到的溶液依次用5％NaHCO3水溶液、饱和NaCl水溶液、5％KHSO4水溶液和
饱和NaCl水溶液洗涤3次，乙酸乙酯层用无水Na2SO4干燥2h，过滤，滤液减压浓缩至
干，得到的淡黄色油状物通过硅胶柱柱层析(CH2Cl2∶CH3OH＝60∶1)纯化，得到3.0g
(83.7％)标题化合物，为淡黄色粉末。ESI-MS(m/e)：358[M+H]+。
实施例31 制备(5-(双(3-(2-羟乙基)-1H-吲哚-2)甲基)-2-羟基苯甲酰-苏氨酸苄酯(2n)
1.1g(3mmol)5-甲酰-2-羟基-苯甲酰-苏氨酸苄酯(1n)，0.75g(4.5mmol)吲哚乙醇
和0.16g(0.3mmol)对甲基苯磺酸用50mL THF溶解，60℃反应10h，TLC板监测
(CH2Cl2∶CH3OH＝25∶1)原料点消失，显示反应完全。停止反应，冷却至室温，反应混合物
减压浓缩至干，残留物用二氯甲烷溶解，柱层析硅胶拌样，通过硅胶柱柱层析
(CH2Cl2∶CH30H＝50∶1)纯化，得到1.65g(83.1％)目标化合物，为浅灰色粉末。
(c＝0.6，CH3OH)；IR：3322，2969，1736，1641，1456，1228，738，696cm-1；FT-MS(m/e)：
662.28382[M+H]+(calculated：661.27880)；1H NMR(800MHz，DMSO-d6)δ＝11.27(s，1H)，
10.54(s，2H)，8.96(s，1H)，7.73(s，1H)，7.50(d，J＝8.0Hz，2H)，7.37(m，4H)，7.29(m，3H)，
7.11(dd，J1＝8.8Hz，J2＝2.4Hz，1H)，7.05(t，J＝7.2Hz，2H)，6.97(t，J＝7.2Hz，2H)，6.93(d，
J＝8.0Hz，1H)，6.05(s，1H)，5.15(dd，J1＝16.8Hz，J2＝12.8Hz，2H)，4.74(s，2H)，4.49(dd，J1
＝8.0Hz，J2＝2.4Hz，1H)，3.58(m，4H)，2.86(t，J＝7.2Hz，4H)，1.11(d，J＝7.2Hz，3H)。
实施例32 制备5-甲酰-2-羟基-苯甲酰-谷氨酰胺苄酯(1o)
冰浴下将1.66g(10mmol)5-甲酰水杨酸用无水THF溶解，先加入1.35g(10mmol)
HOBt，然后加入2.26g(11mmol)DCC，搅拌0.5h后加入5.0g(12mmol)谷氨酰胺苄酯
盐酸盐，用NMM调节pH到9，反应8h，TLC板监测(CH2Cl2∶CH3OH＝30∶1)原料点消
失，反应完全。滤除DCU，反应混合液减压浓缩至干，残留物用150mL乙酸乙酯溶解，
滤除不溶物，得到的溶液依次用5％NaHCO3水溶液、饱和NaCl水溶液、5％KHSO4水溶
液和饱和NaCl水溶液洗涤3次，乙酸乙酯层用无水Na2SO4干燥2h，过滤，滤液减压浓
缩至干，得到的淡黄色油状物通过硅胶柱柱层析(CH2Cl2∶CH3OH＝60∶1)纯化，得到3.0g
(77.9％)标题化合物，为淡黄色粉末。ESI-MS(m/e)：385[M+H]+。
实施例33 制备(5-(双(3-(2-羟乙基)-1H-吲哚-2)甲基)-2-羟基苯甲酰-谷氨酰胺苄酯(2o)
1.4g(3mmol)5-甲酰-2-羟基-苯甲酰-谷氨酰胺苄酯(1o)，0.75g(4.5mmol)吲哚乙
醇和0.16g(0.3mmol)对甲基苯磺酸用50mLTHF溶解，60℃反应10h，TLC板监测
(CH2Cl2∶CH3OH＝25∶1)原料点消失，显示反应完全。停止反应，冷却至室温，反应混合物
减压浓缩至干，残留物用二氯甲烷溶解，柱层析硅胶拌样，通过硅胶柱柱层析
(CH2Cl2∶CH3OH＝50∶1)纯化，得到1.74g(83.8％)目标化合物，为浅灰色粉末。
(c＝0.7，CH3OH)；IR：3291，1736，1643，1456，1358，1262，739，696cm-1；FT-MS(m/e)：
689.29622[M+H]+(calculated：688.28970)；-1H NMR(800MHz，DMSO-d6)δ＝11.75(s，1H)，
10.51(s，2H)，8.99(s，1H)，7.80(s，1H)，7.49(d，J＝8.0Hz，2H)，7.38(m，4H)，7.29(m，3H)，
7.13(dd，J1＝8.0Hz，J2＝5.6Hz，1H)，7.06(t，J＝7.2Hz，2H)，6.99(t，J＝7.2Hz，2H)，6.91(d，
J＝8.8Hz，1H)，6.73(s，1H)，6.03(s，1H)，5.15(s，2H)，4.73(s，2H)，4.52(ddd，J1＝8.8Hz，J2＝
7.2Hz，J3＝5.6Hz，2H)，3.50(m，4H)，2.83(t，J＝7.2Hz，4H)，2.17(t，J＝7.2Hz，2H)，2.10(m，
1H)，1.92(m，1H)。
实施例34 制备5-甲酰-2-羟基-苯甲酰-天冬酰胺苄酯(1p)
冰浴下将1.66g(10mmol)5-甲酰水杨酸用无水THF溶解，先加入1.35g(10mmol)
HOBt，然后加入2.26g(11mmol)DCC，搅拌0.5h后加入3.5g(12mmol)天冬酰胺苄酯
盐酸盐，用NMM调节pH到9，反应8h，TLC板监测(CH2Cl2∶CH3OH＝30∶1)原料点消
失，反应完全。滤除DCU，反应混合液减压浓缩至干，残留物用150mL乙酸乙酯溶解，
滤除不溶物，得到的溶液依次用5％NaHCO3水溶液、饱和NaCl水溶液、5％KHSO4水溶
液和饱和NaCl水溶液洗涤3次，乙酸乙酯层用无水Na2SO4干燥2h，过滤，滤液减压浓
缩至干，得到的淡黄色油状物通过硅胶柱柱层析(CH2Cl2∶CH3OH＝60∶1)纯化，得到3.1g
(74.1％)标题化合物，为淡黄色粉末。ESI-MS(m/e)：371[M+H]+。
实施例35 制备(5-(双(3-(2-羟乙基)-1H-吲哚-2)甲基)-2-羟基苯甲酰-天冬酰胺苄酯(2p)
1.1g(3mmol)5-甲酰-2-羟基-苯甲酰-天冬酰胺苄酯(1p)，0.75g(4.5mmol)吲哚乙
醇和0.16g(0.3mmol)对甲基苯磺酸用50mLTHF溶解，60℃反应10h，TLC板监测
(CH2Cl2∶CH3OH＝25∶1)原料点消失，显示反应完全。停止反应，冷却至室温，反应混合物
减压浓缩至干，残留物用二氯甲烷溶解，柱层析硅胶拌样，通过硅胶柱柱层析
(CH2Cl2∶CH3OH＝50∶1)纯化，得到1.59g(79.3％)目标化合物，为浅灰色粉末。
(c＝0.7，CH3OH)；IR：3323，2939，1736，1643，1456，1213，739，696cm-1；FT-MS(m/e)：
675.28117[M+H]+(calculated：674.27405)；1H NMR(800MHz，DMSO-d6)δ＝11.74(s，1H)，
10.51(s，2H)，8.99(s，1H)，7.80(s，1H)，7.49(d，J＝8.0Hz，2H)，7.38(m，4H)，7.29(m，3H)，
7.13(dd，J1＝8.0Hz，J2＝5.6Hz，1H)，7.06(t，J＝7.2Hz，2H)，6.99(t，J＝7.2Hz，2H)，6.91(d，
J＝8.8Hz，1H)，6.72(s，1H)，6.03(s，1H)，5.14(s，2H)，4.73(s，2H)，4.52(m，1H)，3.50(m，4H)，
2.83(t，J＝7.2Hz，4H)，2.10(m，1H)，1.92(m，1H)。
实施例36 制备5-甲酰-2-羟基-苯甲酰-天冬氨酸双苄酯(1q)
冰浴下将1.66g(10mmol)5-甲酰水杨酸用无水THF溶解，先加入1.35g(10mmol)
HOBt，然后加入2.26g(11mmol)DCC，搅拌0.5h后加入4.2g(12mmol)天冬氨酸双苄
酯盐酸盐，用NMM调节pH到9，反应8h，TLC板监测(CH2Cl2∶CH3OH＝30∶1)原料点
消失，反应完全。滤除DCU，反应混合液减压浓缩至干，残留物用150mL乙酸乙酯溶解，
滤除不溶物，得到的溶液依次用5％NaHCO3水溶液、饱和NaCl水溶液、5％KHSO4水溶
液和饱和NaCl水溶液洗涤3次，乙酸乙酯层用无水Na2SO4干燥2h，过滤，滤液减压浓
缩至干，得到的淡黄色油状物通过硅胶柱柱层析(CH2Cl2∶CH3OH＝60∶1)纯化，得到4g
(86.9％)标题化合物，为淡黄色粉末。ESI-MS(m/e)：462[M+H]+。
实施例37 制备((5-(双(3-(2-羟乙基)-1H-吲哚-2)甲基)-2-羟基苯甲酰-天冬氨酸双苄酯(2q)
1.4g(3mmol)5-甲酰-2-羟基-苯甲酰-天冬氨酸双苄酯(1q)，0.75g(4.5mmol)吲哚
乙醇和0.16g(0.3mmol)对甲基苯磺酸用50mLTHF溶解，60℃反应10h，TLC板监
测(CH2Cl2∶CH3OH＝25∶1)原料点消失，显示反应完全。停止反应，冷却至室温，反应混
合物减压浓缩至干，残留物用二氯甲烷溶解，柱层析硅胶拌样，通过硅胶柱柱层析
(CH2Cl2∶CH3OH＝50∶1)纯化，得到1.82g(79.4％)目标化合物，为浅灰色粉末。
(c＝0.7，CH3OH)；IR：3348，2936，1735，1642，1456，1215，738，695cm-1；FT-MS(m/e)：
766.30833[M+H]+(calculated：765.30502)；1H NMR(800MHz，DMSO-d6)δ＝11.52(s，1H)，
10.54(s，2H)，9.24(d，J＝7.2Hz，1H)，7.74(s，1H)，7.51(d，J＝8.0Hz，2H)，7.32(m，12H)，7.17
(m，1H)，7.08(m，2H)，6.97(t，J＝7.2Hz，2H)，6.92(d，J＝8.8Hz，1H)，6.04(s，1H)，5.12(s，
2H)，5.06(q，J＝2.4Hz，2H)，4.98(dd，J1＝7.2Hz，J2＝5.6Hz，1H)，4.72(s，2H)，3.58(m，4H)，
3.02(qd，J1＝16.8Hz，J2＝5.6Hz，2H)，2.89(m，4H)。
实施例38 制备5-甲酰-2-羟基-苯甲酰-谷氨酸双苄酯(1r)
冰浴下将1.66g(10mmol)5-甲酰水杨酸用无水THF溶解，先加入1.35g(10mmol)
HOBt，然后加入2.26g(11mmol)DCC，搅拌0.5h后加入4.4g(12mmol)谷氨酸双苄酯
盐酸盐，用NMM调节pH到9，反应8h，TLC板监测(CH2Cl2∶CH3OH＝30∶1)原料点消
失，反应完全。滤除DCU，反应混合液减压浓缩至干，残留物用150mL乙酸乙酯溶解，
滤除不溶物，得到的溶液依次用5％NaHCO3水溶液、饱和NaCl水溶液、5％KHSO4水溶
液和饱和NaCl水溶液洗涤3次，乙酸乙酯层用无水Na2SO4干燥2h，过滤，滤液减压浓
缩至干，得到的淡黄色油状物通过硅胶柱柱层析(CH2Cl2∶CH3OH＝60∶1)纯化，得到4.1g
(88.4％)标题化合物，为淡黄色粉末。ESI-MS(m/e)：476[M+H]+。
实施例39 制备((5-(双(3-(2-羟乙基)-1H-吲哚-2)甲基)-2-羟基苯甲酰-谷氨酸双苄酯(2r)
1.4g(3mmol)5-甲酰-2-羟基-苯甲酰-谷氨酸双苄酯(1r)，0.75g(4.5mmol)吲哚乙
醇和0.16g(0.3mmol)对甲基苯磺酸用50mLTHF溶解，60℃反应10h，TLC板监测
(CH2Cl2∶CH3OH＝25∶1)原料点消失，显示反应完全。停止反应，冷却至室温，反应混合物
减压浓缩至干，残留物用二氯甲烷溶解，柱层析硅胶拌样，通过硅胶柱柱层析(CH2Cl2∶
CH3OH＝50∶1)纯化，得到1.94g(83.3％)目标化合物，为浅灰色粉末。(c＝0.5，
CH3OH)；IR：3348，3059，1727，1643，1456，1214，738，696cm-1；FT-MS(m/e)：780.32448[M+
H]+(calculated：779.32607)；1H NMR(800MHz，DMSO-d6)δ＝11.67(s，1H)，10.52(s，2H)，
8.93(s，1H)，7.79(s，1H)，7.49(dd，J1＝8.0Hz，J2＝4.8Hz，2H)，7.32(m，12H)，7.12(dd，J1＝
8.0Hz，J2＝2.4Hz，1H)，7.03(t，J＝7.2Hz，2H)，6.98(dt，J1＝8.8Hz，J2＝7.2Hz，2H)，6.91(d，
J＝8.8Hz，2H)，6.04(s，1H)，5.14(q，J＝4.8Hz，2H)，5.06(s，2H)，4.59(dd，J1＝8.8Hz，J2＝
5.6Hz，1H)，3.58(m，4H)，2.83(m，4H)，2.48(m，2H)，2.18(m，1H)，1.97(m，1H)。
实施例40 制备5-甲酰-2-羟基-苯甲酰-硝基精氨酸苄酯(1s)
冰浴下将1.66g(10mmol)5-甲酰水杨酸用无水THF溶解，先加入1.35g(10mmol)
HOBt，然后加入2.26g(11mmol)DCC，搅拌0.5h后加入5.8g(12mmol)硝基精氨酸苄
酯盐酸盐，用NMM调节pH到9，反应8h，TLC板监测(CH2Cl2∶CH3OH＝30∶1)原料点
消失，反应完全。滤除DCU，反应混合液减压浓缩至干，残留物用150mL乙酸乙酯溶解，
滤除不溶物，得到的溶液依次用5％NaHCO3水溶液、饱和NaCl水溶液、5％KHSO4水溶
液和饱和NaCl水溶液洗涤3次，乙酸乙酯层用无水Na2SO4干燥2h，过滤，滤液减压浓
缩至干，得到的淡黄色油状物通过硅胶柱柱层析(CH2Cl2∶CH3OH＝60∶1)纯化，得到3.2g
(71.1％)标题化合物，为淡黄色粉末。ESI-MS(m/e)：458[M+H]+。
实施例41 制备(((5-(双(3-(2-羟乙基)-1H-吲哚-2)甲基)-2-羟基苯甲酰-硝基精氨酸苄酯(2s)
1.3g(3mmol)5-甲酰-2-羟基-苯甲酰-硝基精氨酸苄酯(1s)，0.75g(4.5mmol)吲
哚乙醇和0.16g(0.3mmol)对甲基苯磺酸用50mLTHF溶解，60℃反应10h，TLC板
监测(CH2Cl2∶CH3OH＝25∶1)原料点消失，显示反应完全。停止反应，冷却至室温，反应
混合物减压浓缩至干，残留物用二氯甲烷溶解，柱层析砖胶拌样，通过硅胶柱柱层析
(CH2Cl2∶CH3OH＝50∶1)纯化，得到1.85g(81.3％)目标化合物，为浅灰色粉末。
(c＝0.9，CH3OH)；IR：3320，3058，1980，1728，1633，1456，1372，740，696cm-1；FT-MS(m/e)：
762.32238[M+H]+(calculated：761.31731)；1H NMR(800MHz，DMSO-d6)δ＝11.66(s，1H)，
10.52(s，2H)，7.78(s，2H)，7.49(d，J＝8.0Hz，2H)，7.36(m，4H)，7.31(m，3H)，7.12(dd，J1＝
8.8Hz，J2＝2.4Hz，1H)，7.03(t，J＝7.2Hz，2H)，6.97(t，J＝7.2Hz，2H)，6.91(d，J＝7.2Hz，
1H)，6.03(s，1H)，5.15(q，J＝4.8Hz，2H)，4.58(m，1H)，3.62(m，4H)，3.17(m，2H)，2.83(m，
2H)，1.79(m，1H)，1.76(m，1H)。
实施例42制备5-甲酰-2-羟基-苯甲酰-茶氨酸苄酯(1t)
冰浴下将1.66g(10mmol)5-甲酰水杨酸用无水THF溶解，先加入1.35g(10mmol)
HOBt，然后加入2.26g(11mmol)DCC，搅拌0.5h后加入3.1g(12mmol)茶氨酸苄酯盐
酸盐，用NMM调节pH到9，反应8h，TLC板监测(CH2Cl2∶CH3OH＝30∶1)原料点消失，
反应完全。滤除DCU，反应混合液减压浓缩至干，残留物用150mL乙酸乙酯溶解，滤除
不溶物，得到的溶液依次用5％NaHCO3水溶液、饱和NaCl水溶液、5％KHSO4水溶液和
饱和NaCl水溶液洗涤3次，乙酸乙酯层用无水Na2SO4干燥2h，过滤，滤液减压浓缩至
干，得到的淡黄色油状物通过硅胶柱柱层析(CH2Cl2∶CH3OH＝60∶1)纯化，得到2.5g
(46.3％)标题化合物，为淡黄色粉末。ESl-MS(m/e)：413[M+H]+。
实施例43制备(((5-(双(3-(2-羟乙基)-1H-吲哚-2)甲基)-2-羟基苯甲酰-茶氨酸苄酯(2t)
1.3g(3mmol)5-甲酰-2-羟基-苯甲酰-茶氨酸苄酯(1t)，0.75g(4.5mmol)吲哚乙醇
和0.16g(0.3mmol)对甲基苯磺酸用50mLTHF溶解，60℃反应10h，TLC板监测
(CH2Cl2∶CH3OH＝25∶1)原料点消失，显示反应完全。停止反应，冷却至室温，反应混合物
减压浓缩至干，残留物用二氯甲烷溶解，柱层析硅胶拌样，通过硅胶柱柱层析
(CH2Cl2∶CH3OH＝50∶1)纯化，得到1.76g(82.3％)目标化合物，为浅灰色粉末。
(c＝0.9，CH3OH)；IR：3299，2969，1736，1640，1456，1216，738，696cm-1；FT-MS(m/e)：
717.32977[M+H]+(calculated：716.32100)；1H NMR(800MHz，DMSO-d6)δ＝11.76(s，1H)，
10.51(s，2H)，9.01(s，1H)，7.80(dd，J1＝8.0Hz，J2＝2.4Hz，2H)，7.49(d，J＝8.0Hz，2H)，7.34
(m，4H)，7.28(m，3H)，7.13(dd，J1＝8.8Hz，J2＝2.4Hz，1H)，7.03(t，J＝7.2Hz，2H)，6.96(t，J
＝7.2Hz，2H)，6.91(d，J＝8.0Hz，1H)，6.03(s，1H)，5.14(s，2H)，4.73(q，J＝7.2Hz，2H)，4.52
(ddd，J1＝8.8Hz，J2＝7.2Hz，J3＝5.6Hz，1H)，3.59(m，4H)，2.83(m，4H)，2.23(m，2H)，2.11
(m，1H)，1.99(m，1H)，0.95(t，J＝7.2Hz，3H)。
分别将生长状态良好，处于对数生长期的A549(人肺癌细胞)，K562(人白血病细胞)，
MCF-7(人乳腺癌细胞)，Bel-7402(人肝癌细胞)和HeLa(人宫颈癌细胞)。按照5×104个细
胞/mL的密度接种于96孔板，每孔100μL。在37℃，5％CO2培养箱中培养4h，按浓度
梯度100μM，50μM，25μM，10μM和1μM加入经灭菌处理的2a-t，用阿霉素作对照。继
续培养48h后，每孔加25μL浓度为5mg/mL的MTT溶液，置于37℃孵育4h，小心除
去上清液(悬浮细胞经离心后除去上清液)后每孔加入100μL DMSO(二甲基亚砜)，振荡约
15min溶解沉淀。立即于酶标仪上570nm波长下测定OD(吸光度)值。以下式求出每一
个浓度下的样品对肿瘤细胞的抑制率：
生长抑制率＝[(对照组平均OD值一样品组平均OD值)/空白组平均OD值]×100％，
实验重复3次，抑制率对药物浓度作图，求IC50(半数有效抑制浓度)值。实验结果见表1。
数据表明，化合物4没有明显的抑制肿瘤细胞增殖的活性，化合物2a-t均表现了一定的抑
制肿瘤细胞增殖的活性。其中化合物2b-f，i的抑制活性较好。
表1 2a-t抗肿瘤细胞增殖活性
n＝3；
实验例2评价2a-t的抗肿瘤活性
无菌条件下取接种于ICR小鼠10天的S180肉瘤，加入适量生理盐水配制成瘤细胞悬液，
使细胞数为2×107/mL，接种于健康雄性ICR小鼠前肢腋皮下，每只小鼠注射0.2mL。接种
24h后，治疗组小鼠每日口服0.2mL化合物4(剂量为8.9μmol/kg)或2a-t(剂量为2
μmol/kg)的水溶液。空白组小鼠每日口服0.2mL生理盐水。以阿霉素(腹腔注射剂量为2
μmol/kg)作阳性对照。实验进行至第10天，称小鼠体重，并剖取各组小鼠的肿瘤称重，最
后统计各组动物的抑瘤率。实体瘤的疗效以瘤重抑制百分率表示，计算如下：瘤重抑制率
％＝(1-给药组瘤重/空白组瘤重)×100％。以瘤重或百分抑瘤率表示化合物的活性，数据列
入表2。数据表明，化合物4和2a-t均表现了良好的抗肿瘤活性。其中化合物2f的活性最好。
由于化合物4的剂量为8.9μmol/kg，而2a-t的剂量为2μmol/kg，所以结构修饰使得有效
剂量降低了4.4倍。化合物2f在口服给2μmol/kg时的抗肿瘤活性与阿霉素在腹腔注射2
μmol/kg的抗肿瘤活性相当(P＞0.05)。数据表明本发明获得了意想不到的技术效果。
表2 2a-t对荷S180小鼠肿瘤重量的影响
n＝12；a)与NS相比P＜0.01；b)与Dox相比P＞0.05。
实验例3评价化合物2f抗肿瘤活性与剂量的关系
按照实验例2的方法口服给药。空白对照为生理盐水，2f选取2μmol/kg(高)，0.2μmol/kg
(中)和0.02μmol/kg(低)三个剂量。结果列入表3。数据表明2f表现出明显的量效关系。
表3化合物2f抗肿瘤活性与剂量的关系
n＝12；a)与生理盐水及0.2μmol/kg 2f比P＜0.01；b)与生理盐水比P＜0.01，与
0.02μmol/kg 2f比P＜0.05；c)与生理盐水比p＞0.05。
实验例4评价化合物2f的急性毒性
1)评价方法
单次给药，观察小鼠的状态，连续观察14天，并记录小鼠体重的变化；于第15天称
重后摘眼球取血，并取心、肝、脾、肾、脑称重，统计给药组和溶媒对照组的差异。采用
相应的试剂盒测定血清中肌酐(creatinine)，谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)这三个血
清酶学指标，以评价化合物2f对小鼠的毒性。
2)给药方法和剂量
化合物2f的口服剂量为200μmol/kg，按照小鼠体重每10g给0.1mL药液或者生理盐
水，n＝12。
3)结果列入表4和表5
数据表明，小鼠口服200μmol/kg(有效剂量的100倍)化合物2f，14天无死亡和行为异常
等毒性反应，脏器和体重和生理盐水对照组没有差异，显示小鼠口服200μmol/kg化合物
2f没有明显毒性。血清酶学检测显示，给药组血清ALT，AST和肌酐含量与生理盐水组相
比无差异，说明化合物2f对小鼠肝脏和肾脏功能无不良影响。
表4口服200μmol/kg化合物2f对体重和脏器重的影响
表5口服200μmol/kg化合物2f对血清酶的影响
实验例5评价化合物2f抗小鼠Lewis肺癌转移活性
1)给药剂量及给药方式
口服剂量为2μmol/kg，按照小鼠体重每10g给0.1mL药液或者生理盐水，n＝10。
2)小鼠Lewis肺癌模型的建立
Lewis小鼠肺癌细胞(LLC)，购自ATCC。选用DMEM培养基，其中含10％经
灭活的胎牛血清、1×105U/L青霉素和100mg/L链霉素。按照贴壁细胞培养方法，每两
天传代一次，富集细胞。待细胞生长状态良好、处于对数生长期时，消化细胞。用生理盐
水调整细胞浓度至1×107个/mL，胎盘蓝(Tryanblue)染色计数，活细胞数＞95％。取近交系
C57BL/6雄性小鼠，左手固定小鼠，用75％乙醇消毒小鼠右前肢腋窝皮肤，右手持1mL
无菌注射器于小鼠腋部皮下注射LLC肿瘤细胞悬液0.2mL/只。小鼠接种后10天可以长出
直径约4-5mm的肿瘤，作为瘤源备用。
3)Lewis肺癌转移模型的建立
取接种8-10天生长良好的Lewis肺癌荷瘤小鼠，乙醚麻醉，脱颈椎处死，用75％的
乙醇浸泡消毒10min，在超净工作台上剥离瘤体，选择生长良好的肿瘤组织，在无菌平皿
中剪碎，放置于玻璃组织匀浆器内，按瘤块重(g)：生理盐水体积(mL)为1∶3的比例加入
4℃预冷的生理盐水轻轻研磨，制成细胞悬液，过200目细胞筛制成单细胞悬液，用生理
盐水调整细胞浓度至1.5×107个/mL，胎盘蓝(Tryanblue)染色计数，活细胞数＞95％。
取近交系C57BL/6雄性小鼠，左手固定小鼠，用75％的乙醇消毒小鼠右前肢腋窝皮肤，
右手持1mL无菌注射器于小鼠腋部皮下注射瘤细胞悬液0.2mL。接种后10天长出直径约
4-5mm的肿瘤，测量肿瘤体积，按肿瘤平均体积随机分组。
从接种肿瘤第11天开始给药，共给药11次，每隔两天测量并记录肿瘤体积。第22天
测量瘤体积后，乙醚麻醉，脱颈椎处死，取出肿瘤称重，并记录肿瘤的肺部转移率和转移
瘤节数。
4)结果列入表6和表7
表6的数据表明，化合物2f对移植瘤有良好的抑制作用。表7的数据表明，化合物2f
对荷瘤小鼠肺转移率和肺表面转移瘤结节数有良好的抑制作用。按照表2的结果，可以演
绎其它化合物也有相应的技术效果。
表6化合物2f对移植瘤重量的影响
n＝10；a)与生理盐水比P＜0.01。
表7化合物2f对荷瘤小鼠肺表面转移瘤结节数的影响
n＝10；a)与生理盐水相比P＜0.01。
实验例6用Transwell小室实验评价化合物2f抗肿瘤细胞迁移的活性
1)实验方法
取生长状态良好处于对数生长期的A549细胞，0.25％胰酶消化，镜下观察，加入血清
终止消化并3000rpm离心3min，计数，配成单细胞悬液，密度为5×105个/mL。Transwell
小室上室每孔加入100μL细胞悬液，同时加入化合物2f的溶液，使终浓度为10μM，5μM
和1μM。下室加入600μL的含10％FBS的1640培养基，在37℃和5％CO2培养箱中培
养6小时。用棉签擦去基质胶和上室内的细胞，用4％的多聚甲醛固定细胞30min，吸除
固定液，用PBS洗3次；用0.1％的结晶紫染液染色15min，吸除染色液，用PBS洗3次。
在每个小室选取6个视野拍照并计数，细胞数以(个)表示。
2)实验结果
表8的结果表明，与空白对照组相比，1μM，5μM和10μM化合物2f作用于上室细胞6h，
浓度依赖性地抑制A549细胞迁移。按照表2的结果，可以演绎其它化合物也有相应的技术
效果。
表8化合物2f抗肿瘤细胞迁移活性
n＝3；a)与空白对照及5μM化合物2f比P＜0.01；b)与空白对照及1μM化合物2f
比P＜0.01；c)a)与空白对照比P＜0.01。
实验例7用Transwell小室实验评价化合物2f抗肿瘤细胞侵袭的活性
1)实验方法
将冻存于-20℃冰箱的matrigel 4℃过夜，变成液态。取720μL无血清1640培养基，
加入180μL Matrigel，混匀，加入至Transwell小室的聚碳酸酯膜上室(100μL/个)，放
入37℃和5％CO2培养箱中孵育5h。吸除小室中残留液体，每孔加入50μL 1640培养基，
37℃和5％CO2培养箱中孵育30min。取生长状态良好处于对数生长期的A549细胞，0.25％
胰酶消化，镜下观察，加入血清终止消化，并3000rpm离心3min，计数，配成单细胞悬
液，密度为2×105个/mL。小室上室每孔加入100μL细胞悬液，同时加入化合物2f的溶
液，使终浓度为10μM，5μM，1μM。下室加入600μL的含10％FBS的1640养基，在37
℃、5％CO2培养箱中培养24小时。用棉签擦去基质胶和上室内的细胞，用4％的多聚甲
醛固定细胞30min，吸除固定液，用PBS洗3次，用0.1％的结晶紫染液染色15min，吸
除染色液，用PBS洗3次。在每个小室选取6个视野拍照，计数，细胞数以(个)表
示。
2)实验结果
表9的结果表明，与空白对照组相比，1μM，5μM和10μM化合物2f作用于上室细
胞6h，浓度依赖性地抑制A549细胞侵袭。按照表2的结果，可以演绎其它化合物也有相
应的技术效果。
表9化合物2f抗肿瘤细胞侵袭活性
n＝3；a)与空白对照及5μM化合物2f比P＜0.01；b)与空白对照及1μM化合物2f
比P＜0.01；c)a)与空白对照比P＜0.01。
实验例8评价化合物2f抑制二甲苯诱导小鼠耳肿胀活性
1)动物模型
ICR雄性小鼠30只，体重18-22g，随机分为空白对照组，阿司匹林组和化合物2f组，
每组10只。各组按剂量口服给药。给药30min后，在小鼠左耳朵耳廓内侧均匀涂抹30μL
二甲苯，2h后乙醚麻醉，颈椎脱臼处死，将左右两耳外耳廓剪下并重合叠放在一起，用
直径7mm的打孔器在同一位置打圆形耳片，称重，计算两耳重量差作为耳肿胀度，即鼠
耳肿胀度＝左耳圆形片重-右耳圆形片重，以(mg)表示。
2)给药剂量
阿司匹林剂量为1.11mmol/kg，化合物2f剂量为2μmol/kg，生理盐水剂量为每10g
小鼠给0.1mL。
3)实验结果
表10的结果表明，生理盐水治疗小鼠的耳肿胀度显著大于化合物2f治疗小鼠的耳肿胀
度。按照表2的结果，可以演绎其它化合物也有相应的技术效果。
表10化合物2f抑制二甲苯诱导小鼠耳肿胀活性
n＝10；a)与生理盐水比P＜0.05。
实验例9评价化合物2f对二甲苯诱导炎症小鼠血浆中TNF-α和IL-8含量
1)给药剂量及给药方式
阿司匹林的口服剂量为1.11mmol/kg，化合物2f的口服剂量为为2μmol/kg，n＝6。
2)动物模型
ICR雄性小鼠24只，体重18-22g，随机分为4组，每组6只。各组小鼠按剂量灌胃。
给药30分钟后，在小鼠耳朵内侧均匀涂抹30μL二甲苯，2小时后，摘眼球取血(0.45mL
加0.05mL 3.8％枸橼酸钠)，立即于4℃ 3000rpm离心10分钟，取上清即为血浆样品。
3)检测小鼠血浆中TNF-α和IL-8含量
小鼠血浆中TNF-α含量的测定：设置标准孔、化合物2f孔和空白孔。标准孔加50μL
标准品溶液，空白孔什么都不加。化合物2f孔加10μL和40μL化合物2f稀释液。除空白
孔外，向各孔中分别加入50μL HPR试剂，加完后贴上板贴，于37℃孵育60分钟。小心
揭掉封板膜，弃去液体，用洗涤液洗板5次。每孔先加入50μL显色液A，再加入50μL
显色液B，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟。每孔加50μL终止液，终止反应(此时
蓝色立转黄色)。以空白孔调零，用酶标仪在450nm波长下测量各孔的光密度(O.D.值)。
将测得光密度值代入线性方程，计算TNF-α浓度，进行t检验。
小鼠血浆中IL-8含量的测定：设置标准孔、化合物2f孔和空白孔。空白孔加100μL样
品稀释液，标准品孔加50μL标准品溶液和Streptavidin-HRP 50μL，化合物2f孔加40μL
化合物2f溶液，10μL抗IL-8抗体，贴上板贴37℃孵育60分钟。将30倍洗液用蒸馏水
稀释30倍，小心揭掉封板膜，弃去液体，每孔加入洗涤液后静置30秒后弃去，重复洗板
5次，拍干。每孔先加入50μ显色液A L，再加入50μL显色液B，轻轻震荡混匀，37℃
避光显色10分钟。每孔加50μL终止液终止反应(此时蓝色立转黄色)。以空白孔调零，用
酶标仪在450nm波长下测量各孔的光密度(O.D.值)。将测得光密度值代入线性方程，计
算IL-8浓度，进行t检验。
4)实验结果
表11的结果表明，口服2μmol/kg化合物2f下调二甲苯致炎小鼠血浆的TNF-α。按照
表2的结果，可以演绎其它化合物也有相应的技术效果。
表11化合物2f对二甲苯诱导急性炎症小鼠血浆中TNF-α和IL-8的影响
n＝6；a)与生理盐水比P＜0.05。