一种治疗病毒性乙型肝炎、防治肝细胞纤维化的中药脂质体及制备方法.pdf

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摘要
申请专利号:

CN02155056.5

申请日:

2002.12.20

公开号:

CN1507896A

公开日:

2004.06.30

当前法律状态:

授权

有效性:

有权

法律详情:

授权|||实质审查的生效|||公开

IPC分类号:

A61K35/78; A61K9/127; A61P1/16; A61P31/12

主分类号:

A61K35/78; A61K9/127; A61P1/16; A61P31/12

申请人:

朱建中; 曹祖培

发明人:

朱建中; 曹祖培

地址:

200126上海市浦东新区上钢七村18号503室

优先权:

专利代理机构:

上海新天专利代理有限公司

代理人:

孙跃虹

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内容摘要

本发明涉及一种治疗病毒性乙型肝炎,防治肝纤维化的中药脂质体及制备方法。该中药脂质体是由重量百分比为34-48%中药活性成份提取物和66-52%卵磷脂及药用辅料组成的多相脂质体,其中中药活性成分包括郁金、五味子、白芍和甘草。本发明用脂质体包埋某些具有护肝及免疫调节作用的中药治疗病毒性乙型慢性肝炎和防止肝细胞纤维化,把脂质体的优点和中药的特点结合在一起。为治疗病毒性乙型慢性肝炎和防治肝细胞纤维化提供了一种疗效确切、使用方便的新颖药物。

权利要求书

1: 1、一种中药脂质体,其特征在于该脂质体是由重量百分比为34-48% 中药活性成份提取物和66-52%卵磷脂或其他脂质辅料和常规的药 用辅料组成的多相脂质体,其中中药活性成份包括郁金、五味子、白 芍和甘草。 2、根据权利要求1所述的中药脂质体,其特征在于其中所述的中药 活性成份提取物是由重量百分比配方为郁金12-16%,白芍16- 22%,五味子10-14%提取获得的活性成分与48-62%甘草提取物 组成,其中甘草提取物由比例是1∶1的甘草甜素单铵盐和单钾盐组 成。 3、根据权利要求1所述的中药脂质体,其特征在于其中所述的卵磷 脂选自卵黄和大豆提取的卵磷脂。 4、根据权利要求1所述的中药脂质体,其特征在于其中所述的其他 脂质辅料选自脂肪酸甘油脂、蔗糖脂肪酸、失水山梨醇脂肪酸酯、聚 氧乙烯失水山梨醇脂肪酸酯、十二烷基硫酸钠(SLS)、聚氧乙烯蓖 麻油、聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物(Poloxamer Pluronics),以及阿拉 伯胶、西黄蓍胶、果糖脂胶、单硬脂酸甘油脂、聚氧乙烯硬脂酸酯、 聚氧乙烯40硬脂酸酯、聚氧乙烯400单月桂酸酯、聚氧乙烯400单 硬脂酸酯、聚氧乙烯月桂醇醚、苄泽30,以及司盘20-司盘85或吐 温20-吐温85等。 5、根据权利要求1所述的中药脂质体的制备方法,其特征在于该中 药脂质体的制备包括下列步骤: 一、活性成份提取物制备 (1)按配比将五味子置78℃-85℃烘箱内密闭干燥冷却,轧粗末, 过10目筛,备用; (2)将郁金置62℃-75℃烘箱内,密闭干燥冷却,加入白芍混合, 轧粗末,粉过5目筛,备用; (3)将步骤(1)和(2)的粗末,置一级萃取釜,压力M pa 8-18; 温度54℃-70℃;65%-85%乙醇循环量100ml/h-150ml/h;CO 2 流量 900ml/h-1500ml/h;经2.5h-4h萃取后,减压8M pa -15M pa ;湿度 48℃-52℃,流入分离柱,再进入解析釜,减压至常压后,取出萃取 物,另置干净器皿,密闭;收集药渣,待用; (4)将步骤(3)药渣,置装有冷凝器的反应锅内,加入4倍量 水,2倍量水,煎二次。收集冷凝器挥发性油水混合物,备用;弃渣, 和匀二次煎液,过滤,滤液内加入油水混合物,搅和,减压浓缩至
2: 0-1.18稠膏,加入步骤(3)萃取物,混合,真空干燥至干膏体,粉 碎成380目-450目极细粉,备用; 二、脂质体制剂制备 (1)将上述极细粉放置容器内,加入蒸馏水至刻度,水浴 65℃-80℃保持温度,搅拌至溶解;再放入甘草甜素单铵盐和单钾盐, 搅拌至溶解,将溶液置具有超声波长的容器内,输出超声波长;将卵 磷脂或其他脂质辅料和常规的药用辅料,置65℃-100℃水浴中,搅和, 融化,呈透明即移分液器;乘热以30-45滴/min,滴注入置超声波容 器的药液内,适度搅和;滴注完毕,保留超声波长发生12-25min,关 闭发生器,将脂质体吸入无菌罐装机,灌装; (2)将罐装后的脂质体瓶放入超低温干燥箱内,于-45℃- -60℃中干冻10-15h,35℃-45℃低温箱内稳定干燥4-6h。即得。 6、根据权利要求1所述的中药脂质体在制备治疗病毒性乙型肝炎、 防治肝细胞纤维化的药物中的应用。 7、根据权利要求1所述的中药脂质体的应用,其特征在于其中所述 的药物可用于病毒性乙型慢性肝炎、慢性活动性肝炎、急性肝炎、脂 肪肝炎、酒精性肝炎、中毒性肝炎、初期肝硬化的治疗。
3: 5h-4h萃取后,减压8M pa -15M pa ;湿度 48℃-52℃,流入分离柱,再进入解析釜,减压至常压后,取出萃取 物,另置干净器皿,密闭;收集药渣,待用; (4)将步骤(3)药渣,置装有冷凝器的反应锅内,加入4倍量 水,2倍量水,煎二次。收集冷凝器挥发性油水混合物,备用;弃渣, 和匀二次煎液,过滤,滤液内加入油水混合物,搅和,减压浓缩至 1.0-1.18稠膏,加入步骤(3)萃取物,混合,真空干燥至干膏体,粉 碎成380目-450目极细粉,备用; 二、脂质体制剂制备 (1)将上述极细粉放置容器内,加入蒸馏水至刻度,水浴 65℃-80℃保持温度,搅拌至溶解;再放入甘草甜素单铵盐和单钾盐, 搅拌至溶解,将溶液置具有超声波长的容器内,输出超声波长;将卵 磷脂或其他脂质辅料和常规的药用辅料,置65℃-100℃水浴中,搅和, 融化,呈透明即移分液器;乘热以30-45滴/min,滴注入置超声波容 器的药液内,适度搅和;滴注完毕,保留超声波长发生12-25min,关 闭发生器,将脂质体吸入无菌罐装机,灌装; (2)将罐装后的脂质体瓶放入超低温干燥箱内,于-45℃- -60℃中干冻10-15h,35℃-45℃低温箱内稳定干燥4-6h。即得。 6、根据权利要求1所述的中药脂质体在制备治疗病毒性乙型肝炎、 防治肝细胞纤维化的药物中的应用。 7、根据权利要求1所述的中药脂质体的应用,其特征在于其中所述 的药物可用于病毒性乙型慢性肝炎、慢性活动性肝炎、急性肝炎、脂 肪肝炎、酒精性肝炎、中毒性肝炎、初期肝硬化的治疗。

说明书


一种治疗病毒性乙型肝炎、 防治肝细胞纤维化的中药脂质体及制备方法

    技术领域:

    本发明涉及中药制剂及制备方法,具体涉及一种治疗病毒性乙型肝炎,防治肝纤维化的中药脂质体及制备方法。

    背景技术:

    病毒性乙型慢性肝炎、脂肪性肝炎和肝细胞纤维化等疾病,是目前常见多发病,人群中肝炎病毒携带者比例接近5%。由病毒性乙型慢性肝炎引起的肝细胞损伤和肝细胞纤维化变性的产生,对人类健康构成威胁。

    现代医学认为肝炎源于肝炎病毒对人体的侵袭,一旦机体免疫力低下,则患肝脏疾病。长期迁移性慢性乙型肝炎,造成对肝细胞的严重损伤,肝细胞纤维化变性并发展到肝细胞坏死变性。治疗的手段也以抗肝炎病毒和支持疗法为主。治疗药品品种不少,临床需同时使用几种药品。由于这些药品的理化特性、生物利用度及在人体内产生的代谢物不同,易相互干扰治疗效果和产生副作用。因此,开发研究一种具有治疗特异性集中、疗效确切、使用方便、副作用低或无副作用的经济型药品十分有意义。

    祖国中医中药学认为,肝病的主要病理机因是肝“郁”和“湿热滞蕴”肝脾,治疗采取“疏”肝、“行”气、“柔”肝,使肝郁得柔,湿热得利,而滞结得疏。由此,病情得以缓解,患者得以康复。长期来,中医中药学科技工作者,在治疗肝病临床工作中创立和积累的经典处方和中成药十分繁多,由于服药后,被胃肠分解吸收,对治疗影响仍很大。乙型病毒性慢性肝炎、脂肪性肝炎、酒精性肝损伤和肝细胞纤维化等肝脏病,病程长,易于复发,需长期服药治疗,除了传统的舒肝丸、逍遥散、鳖甲煎丸等常用中成药品种外,目前,医疗单位和药品商店供应的甘草甜素制剂强力宁注射剂需静脉注射用药,使用不方便,并易产生医源感染,不易被接受。而甘草甜素片口服后,大部分在胃内分解和变性,血药浓度甚低,疗效不佳。因此需要探索发明生物利用度好,疗效显著的新颖制剂十分迫切。

    脂质体制剂是当前科技前沿项目之一。由于它的天然靶向性,使网状内皮系统的器官和细胞成为包封药物脂质体的靶向区,定向地将治疗药物有效地运送到达内皮系统患病细胞中释放药物。脂质体能够停留在肝和脾、肺等网状内皮系统丰富的组织细胞内,是网状内皮(细胞)组织系统疾病治疗药物的良好载体,当药物进入细胞组织将被巨噬细胞吞噬,巨噬细胞地摄取量明显增加并被有效地活化,有效地增强人体免疫力。脂质体是目前极少数应用于人类的无毒性免疫激活剂之一。其类脂成分在体内易生物降解,且无免疫原性和毒性。

    发明内容:

    本发明所要解决的技术问题是根据中医中药学和现代医学理论,利用脂质体的特点,提供一种配伍科学合理,疗效显著的抗乙型肝炎病毒和防治肝细胞纤维化的中药脂质体药物。

    本发明公开的治疗病毒性乙型肝炎和防治肝细胞纤维化的中药脂质体是由重量百分比为34-48%中药活性成份提取物和66-52%卵磷脂或其他脂质辅料和常规的药用辅料组成的多相脂质体,其中中药活性成份包括郁金、五味子、白芍和甘草。

    本发明所述中药活性成份提取物是由重量百分比配方为郁金12-16%,白芍16-22%,五味子10-14%提取获得的活性成分与48-62%甘草提取物组成,其中甘草提取物由比例是1∶1的甘草甜素单铵盐和单钾盐组成。

    本发明所述的卵磷脂选自卵黄和大豆提取的卵磷脂。

    本发明所述的其他脂质辅料选自脂肪酸甘油脂、蔗糖脂肪酸、失水山梨醇脂肪酸酯、聚氧乙烯失水山梨醇脂肪酸酯、十二烷基硫酸钠(SLS)、聚氧乙烯蓖麻油、聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物(PoloxamerPluronics),以及阿拉伯胶、西黄蓍胶、果糖脂胶、单硬脂酸甘油脂、聚氧乙烯硬脂酸酯、聚氧乙烯40硬脂酸酯、聚氧乙烯400单月桂酸酯、聚氧乙烯400单硬脂酸酯、聚氧乙烯月桂醇醚、苄泽30,以及司盘20-司盘85或吐温20-吐温85等。

    本发明所要解决的另一技术问题是公开上述中药脂质体的制备方法。

    本发明公开的治疗病毒性乙型肝炎、防治肝细胞纤维化的中药脂质体的制备包括下列步骤:

    一、活性成份提取物制备

    (1)按配比将五味子置78℃-85℃烘箱内密闭干燥,冷却;轧粗末,过10目筛,另置,备用;

    (2)按配比将郁金置62℃-75℃烘箱内,密闭干燥,冷却;按配比加入白芍混合,轧粗末,粉过5目筛,另置,备用;

    (3)将步骤(1)和(2)的粗末,置一级萃取釜,压力Mpa8-18;温度54℃-70℃;65%-85%乙醇循环量100ml/h-150ml/h;CO2流量900ml/h-1500ml/h;经2.5h-4h萃取后,减压8Mpa-15Mpa;温度48℃-52℃,流入分离柱,再进入解析釜,减压至常压后,取出萃取物,另置干净器皿,密闭;收集药渣,待用;

    (4)将步骤(3)药渣,置装有冷凝器的反应锅内,加入4倍量水,2倍量水,煎二次。收集冷凝器挥发性油水混合物,备用;弃渣,和匀二次煎液,过滤,滤液内加入油水混合物,搅和,减压浓缩至1.0-1.18稠膏,加入步骤(3)萃取物,混合,真空干燥至干膏体,粉碎成380目-450目极细粉,备用;

    二、脂质体制剂制备

    (1)将上述极细粉放置容器内,加入蒸馏水至刻度,水浴65℃-80℃保持温度,搅拌至溶解;再放入甘草甜素单铵盐和单钾盐,搅拌至溶解,将溶液置具有超声波长的容器内,输出超声波长;将卵磷脂或其他脂质辅料和相应的药用辅料,置65℃-100℃水浴中,搅和,融化,呈透明即移分液器;乘热以30-45滴/min,滴注入置超声波容器的药液内,适度搅和;滴注完毕,保留超声波长发生12-25min,关闭发生器,将脂质体吸入无菌罐装机,灌装;

    (2)将罐装后的脂质体瓶放入超低温干燥箱内,于-45℃--60℃中干冻10-15h,35℃-45℃低温箱内稳定干燥4-6h。即得。

    上述制各方法只是为制备本发明的中药脂质体制剂提供了一种较佳的实施方案。本领域技术人员可以根据本发明的描述对其中所采用的各个参数,条件和辅料进行适当地变化和改进,这些变化也都包括在本发明范围内。

    本发明所要解决的再一技术问题是公开上述中药脂质体在制备治疗病毒性乙型肝炎、防治肝细胞纤维化的药物中的应用。

    本发明中药脂质体可用于病毒性乙型慢性肝炎、慢性活动性肝炎、急性肝炎、脂肪肝炎、酒精性肝炎、中毒性肝炎、初期肝硬化的治疗。

    本发明制剂处方中:

    五味子(Fructus Sehisandiae):敛肺滋肾、生津敛汗、涩精止泻、宁心安神、热伤气阴。专收敛肺气而滋水,肝木得肾水滋养,则肝湿热邪火得以祛除。

    郁金(Radix curcumae):活血止痛、行气解郁、凉血清心、利胆退黄。能疏肝行气以解郁。

    白芍(Radix Paeomiae alba):养血敛阴、柔肝止痛、平抑肝阳、养血柔肝、缓急止痛。遇甘草,治肝脾失和、腕腹挛急作痛。

    此三味药,在配伍中阴阳平衡,在治疗功效中各得益彰,发挥了中药协同疗效的优势。

    药材甘草,有“解毒、倍气力、缓正气、养阴血、补脾胃、久服延年”的功能。甘草甜素(Glycyrrhizin GL)是甘草主要成分之一,含有甘草酸单钾盐,单铵盐及二钾盐,二铵盐,有保护肝细胞膜,减轻肝细胞脂肪变性,减轻肝细胞坏死及间质炎症反应,抑制肝细胞纤维化;并且有类固醇激素样作用,而无激素样副作用。经临床验证有中和肝炎病毒,抗炎,抗变态反应,消退黄疸,改善脂质代谢,增强免疫能力。

    脂质体是理想的靶向载体,能将药物载入靶器官或作用部位滞留释药,提高靶区药物有效浓度,并维持较长时间,同时全身其他部位则摄取很少的药物。不仅要使药物达到靶器官,靶细胞,甚至细胞内结构。生物处理后的甘草甜素脂质体,能明显对肝脏的导向作用,提高肝脏内血药浓度,从而增加了药物对肝脏的特异性集中治疗,达到了其他口服甘草甜素制剂所难以获得的治疗效果。是传统的中医中药与现代生物医学技术相结合的新成果。

    用本发明制剂进行临床试验,采用多中心,随机对照方法。以甘草甜素片剂(湖北黄石飞云有限公司生产)每片含甘草酸单钾盐75mg作对照组。

    剂量:150mg(2片)一次,每日二次。

    本发明脂质体:每日二次,每次15ml。

    二组分别连续给药8周为一疗程。患者年龄最低18岁,最高65岁,男性28例,女性12例。观察病种:病毒性乙型慢性肝炎,伴有血清ALT和AST,血清胆红素大于正常上限值。治疗前45天内,已用过降酶药物的患者,不予观察。治疗前及给药二周后,作尿常规ALT、AST、SB、GGT、ALP、A/G、BuN、检测,记录临床症状和体征变化。

    疗效判断标准:

    分显效、有效、无效三级

    显效:1、自觉症状消失或明显好转。

          2、肝脾肿大,缩小或稳定不变。

          3、肝功能检查ALT、AST及SB恢复正常。

    有效:1、自觉症状好转或稳定不变。

          2、肝脾肿大稳定不变。

          3、肝功能检查ALT、AST及SB较前降低≥50%以上。

    无效:无改变,达不到以上标准或病情进展者。

    结果,脂质体组降ALT有效率81.4%;降SB有效率73.3%;升白蛋白有效率62.7%;降球蛋白48.8%;HBeAg阴转率58.8%;对照组降ALT有效率63.2%;降SB有效率57.4%;升白蛋白有效率28.4%;降球蛋白3.8%;HBeAg阴转率27.3%;脂质体组平均显效率65.0%;对照组为36.0%;

    脂质体组:自觉症状明显好转76.1%;症状消失20.1%;有效3.8%;肝脾缩小68.1%;稳定不变31.9%;

    对照组:自觉症状明显好转37.8%;症状消失1.8%;有效43.7%;无效16.7%。

    二组患者均未发生不良副反应。

    上述结果表明:本发明用脂质体包埋某些具有护肝及免疫调节作用的中药治疗病毒性乙型慢性肝炎和防止肝细胞纤维化,把脂质体的优点(免疫佐剂、药物载体、减少被包埋药物的剂量、延长药物在靶器官作用时效)和中药的特点(疗效确切、资源丰富、价廉、毒副作用少或无毒副反应)结合在一起。为治疗病毒性乙型慢性肝炎和防治肝细胞纤维化提供了一种疗效确切、使用方便的新颖药物。

    具体实施方式:

    实施例1、

    配方:五味子                     11.2Kg

          郁  金                     12.5Kg

          白  芍                     19.8Kg

          甘草甜素单铵盐             28.25Kg

          甘草甜素单钾盐             28.25Kg

          卵磷脂(大豆)               80kg

          甘  油                     150kg

          蒸馏水                     750kg

    制备:

    1、将五味子置80℃烘箱内密闭干燥至用手重握不结团为度,取出摊在洁净不锈钢盘内,在清洁环境中放至室温,轧粗末,过10目筛,另置,备用;

    2、将郁金置70℃烘箱内,密闭干燥至手感干燥即取出,摊放在清洁不锈钢盘内,密闭至室温,加入白芍混合,轧粗末,粉过5目筛;

    3、将步骤1和2的粗末,置一级萃取釜,压力25Mpa;温度55℃;75%乙醇循环量120ml/h;CO2流量1000ml/h;经3.5h萃取后,减压10Mpa;温度40℃,流入分离柱,再进入解析釜,减压至常压后,取出萃取物,另置干净器皿,密闭;收集药渣,待用;

    4、将步骤3药渣,置装有冷凝器的反应锅内,加入4倍量水,2倍量水,煎二次。收集冷凝器挥发性油水混合物,备用;弃渣,和匀二次煎液,过滤,滤液内加入油水混合物,搅和。减压浓缩至1.12稠膏,加入步骤3萃取物,混合。真空干燥至干膏体,粉碎成400目极细粉,备用;

    5、脂质体制剂制备。

    将步骤4极细粉放置容器内,加入蒸馏净水至刻度,水浴保持65℃-80℃温度,搅拌至溶解,再放入甘草甜素单铵盐和单钾盐,搅拌至溶解。将溶液置具有超声波长的容器内,输出超声波长;将卵磷脂(大豆类)及其他相应的医用辅料,置器皿中放入90℃水浴中,搅和,融化,呈透明即移分液器,乘热以85滴/min,滴注入置超声波容器药液内,适度搅和,滴注完毕,保留超声波长发生25min,关闭发生器,将脂质体吸入无菌罐装机,每瓶装:15ml,用制有槽条的药用丁胶盖,略压在瓶口上;

    6、将装有15ml的脂质体瓶放入洁净不锈钢盘内,放入超低温干燥箱内,于-60℃中干冻12h,关机,将已将丁胶盖自动紧密盖上的冷冻瓶置40℃低温箱内稳定干燥4-6h。此时,15ml脂质体制剂已成玻璃液晶体。取出装箱。患者服用前5min,加入小于40℃洁净无菌水至15ml刻度,上盖,晃摇2-3min,即恢复成与原浓度一致的脂质体,倒入小杯中,口服,即可。

    实施例2、

    配方:五味子                          14Kg

          郁  金                          16Kg

          白  芍                          22Kg

          甘草甜素单铵盐                  24Kg

          甘草甜素单钾盐                  24Kg

          单硬脂酸甘油脂                  65kg

          油  酸                          135kg

          蒸馏水                          800kg

    1、将五味子置80℃烘箱内密闭干燥至用手重握不结团为度,取出摊在洁净不锈钢盘内,在清洁环境中放至室温,轧粗末,过10目筛,另置,备用;

    2、将郁金置65℃烘箱内,密闭干燥至手感干燥即取出,摊放在清洁不锈钢盘内,密闭至室温,加入白芍混合,轧粗末,粉过5目筛;

    3、将步骤1和2的粗末,置一级萃取釜,压力26Mpa;温度58℃;72%乙醇循环量110ml/h;CO2流量1100ml/h;经4h萃取后,减压12Mpa;温度44℃,流入分离柱,再进入解析釜,减压至常压后,取出萃取物,另置干净器皿,密闭;收集药渣,待用;

    4、将步骤3药渣,置装有冷凝器的反应锅内,加入4倍量水,2倍量水,煎二次。收集冷凝器挥发性油水混合物,备用;弃渣,和匀二次煎液,过滤,滤液内加入油水混合物,搅和。减压浓缩至1.12稠膏,加入步骤3萃取物,混合。真空干燥至干膏体,粉碎成400目极细粉,备用;

    5、将步骤四极细粉放置容器内,加入蒸馏净水至刻度,水浴保持90℃温度,搅拌至溶解,再放入甘草甜素单铵盐和单钾盐,搅拌至溶解。将溶液置具有超声波长的容器内,输出超声波长;将单硬脂酸甘油脂及其他相应的医用辅料,置器皿中放入92℃水浴中,搅和,融化,呈透明即移分液器,乘热以85滴/min,滴注入置超声波容器药液内,适度搅和,滴注完毕,保留超声波长发生25min,关闭发生器;将脂质体吸入无菌罐装机,每瓶装:15ml,用制有槽条的药用丁胶盖,略压在瓶口上;

    6、将装有15ml的脂质体瓶放入洁净不锈钢盘内,放入超低温干燥箱内,于-60℃中干冻12h,关机,将已将丁胶盖自动紧密盖上的冷冻瓶置40℃低温箱内稳定干燥6h。此时,15ml脂质体制剂已成玻璃液晶体。取出装箱。患者服用前5min,加入小于40℃洁净无菌水至15ml刻度,上盖,晃摇2-3min,即恢复成与原浓度一致的脂质体,倒入小杯中,口服,即可。

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本发明涉及一种治疗病毒性乙型肝炎,防治肝纤维化的中药脂质体及制备方法。该中药脂质体是由重量百分比为3448中药活性成份提取物和6652卵磷脂及药用辅料组成的多相脂质体,其中中药活性成分包括郁金、五味子、白芍和甘草。本发明用脂质体包埋某些具有护肝及免疫调节作用的中药治疗病毒性乙型慢性肝炎和防止肝细胞纤维化,把脂质体的优点和中药的特点结合在一起。为治疗病毒性乙型慢性肝炎和防治肝细胞纤维化提供了一种疗效。

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