那格列奈的药物组合物及其在生物医药中的应用技术领域
本发明属于生物医药领域，涉及那格列奈的新用途，具体涉及那格列奈的药物组
合物及其在生物医药中的应用。
背景技术
那格列奈是D-苯丙氨酸衍生物，属于非磺酰脲类降血糖药，其作用机理主要为通
过与胰岛B细胞上磺酰脲受体相结合，阻滞胰岛细胞ATP敏感钾通道开放，导致细胞膜去极
化，引起钙通道开放，促进胰岛素分泌；是一种新型的餐时血糖调节剂，能有效控制餐后血
糖水平，具有起效快、作用时间短，引起心血管副作用和低血糖发生率低等特点。
迄今为止，尚未见那格列奈及其药物组合物与甲状腺功能亢进症的相关性报道。
发明内容
本发明的目的在于提供一种那格列奈的药物组合物，该药物组合物中含有那格列
奈和一种结构新颖的天然产物，那格列奈和该天然产物可协同治疗甲状腺功能亢进症。
本发明的上述目的是通过下面的技术方案得以实现的：
一种那格列奈的药物组合物，包括那格列奈、化合物(Ⅰ)和药学上可以接受的载
体，制备成需要的剂型；所述化合物(Ⅰ)具有下述结构式：
进一步地，药学上可以接受的载体包括稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、
崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体或润滑剂。
进一步地，所述剂型包括片剂、胶囊剂、口服液、口含剂、颗粒剂、冲剂、丸剂、散剂、
膏剂、丹剂、混悬剂、粉剂、溶液剂、注射剂、栓剂、喷雾剂、滴剂或贴剂。
上述化合物(Ⅰ)的制备方法，包含以下操作步骤：(a)将青风藤粉碎，用60～70％乙
醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水饱和的正丁醇萃
取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；(b)步骤(a)中正丁醇萃取物
用大孔树脂除杂，先用10％乙醇洗脱12个柱体积，再用70％乙醇洗脱15个柱体积，收集70％
洗脱液，减压浓缩得70％乙醇洗脱浓缩物；(c)步骤(b)中70％乙醇洗脱浓缩物用正相硅胶
分离，依次用体积比为50:1、25:1、15:1和5:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到4个组分；(d)
步骤(c)中组分4用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为10:1、5:1和2:1的二氯甲烷-甲醇
梯度洗脱得到3个组分；(e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷键合的反相硅胶分离，用体积
百分浓度为70％的甲醇水溶液等度洗脱，收集7～13个柱体积洗脱液，洗脱液减压浓缩得到
化合物(Ⅰ)。
进一步地，化合物(Ⅰ)的制备方法中，所述大孔树脂为AB-8型大孔吸附树脂。
上述那格列奈的药物组合物在制备治疗甲状腺功能亢进症的药物中的应用。
本发明的优点：本发明提供的那格列奈的药物组合物中含有那格列奈和一种结构
新颖的天然产物，那格列奈、化合物(Ⅰ)单独作用时，对甲状腺功能亢进具有治疗效果；那格
列奈和化合物(Ⅰ)联合作用时，对甲状腺功能亢进的治疗效果进一步提高，可以开发成治疗
甲状腺功能亢进症的药物。
具体实施方式
下面结合实施例进一步说明本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明保护范
围。
实施例1：化合物(Ⅰ)分离制备及结构确证
试剂来源：乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、二氯甲烷为分析纯，购自上海凌峰化
学试剂有限公司，甲醇，分析纯，购自江苏汉邦化学试剂有限公司。
分离方法：(a)将青风藤(2kg)粉碎，用65％乙醇热回流提取(20L×3次)，合并提取
液，浓缩至无醇味(4L)，依次用石油醚(4L×3次)、乙酸乙酯(4L×3次)和水饱和的正丁醇
(4L×3次)萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；(b)步骤(a)中
正丁醇萃取物用AB-8型大孔树脂除杂，先用10％乙醇洗脱12个柱体积，再用70％乙醇洗脱
15个柱体积，收集70％洗脱液，减压浓缩得70％乙醇洗脱浓缩物；(c)步骤(b)中70％乙醇洗
脱浓缩物用正相硅胶分离，依次用体积比为50:1(8个柱体积)、25:1(8个柱体积)、15:1(8个
柱体积)和5:1(10个柱体积)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到4个组分；(d)步骤(c)中组分4
用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为10:1(8个柱体积)、5:1(10个柱体积)和2:1(5个柱
体积)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；(e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷键合的
反相硅胶分离，用体积百分浓度为70％的甲醇水溶液等度洗脱，收集7～13个柱体积洗脱
液，洗脱液减压浓缩得到化合物(Ⅰ)(纯度大于98％)。
结构确证：HR-ESI-MS显示[M+Na]+为m/z 285.1201，结合核磁特征可得分子式为
C15H18O4，不饱和度为7。核磁共振氢谱数据δH(ppm，CD3OD，500MHz)：H-1α(1.49，m)，H-1β
(1.23，m)，H-2α(2.78，m)，H-2β(2.91，m)，H-5(2.11，m)，H-6α(2.30，m)，H-6β(2.52，m)，H-9
(5.24，s)，H-13(1.84，s)，H-14(1.12，s)，H-15a(5.46，s)，H-15b(5.31，s)；核磁共振碳谱数
据δC(ppm，CD3OD，125MHz)：36.7(CH2，1-C)，33.5(CH2，2-C)，198.1(C，3-C)，145.4(C，4-C)，
47.1(CH，5-C)，26.2(CH2，6-C)，142.7(C，7-C)，143.0(C，8-C)，138.3(CH，9-C)，39.1(C，10-
C)，120.0(C，11-C)，173.1(C，12-C)，8.4(CH3，13-C)，16.1(CH3，14-C)，113.2(CH2，15-C)。红
外光谱表明该化合物含有内酯羰基(1736cm-1)结构。1H和13C-NMR显示该化合物含有一个α,
β-不饱和γ-内酯结构[δC142.7(C-7)，143.0(C-8)，120.0(C-11)，173.1(C-12)]，一个乙烯
基甲基[δH1.84(3H，s，H-13)；δC8.4(C-13)]，一个甲基质子信号[δH1.12(3H，s，H-14)；δ
C16.1(C-14)]，一个环外亚甲基质子信号[δH5.46(1H，s，H-15a)和5.31(1H，s，H-15b)；δ
C113.2(C-15)和145.4(C-4)]以及一个烯属次甲基质子信号[δH5.24(1H，s，H-9)；δC143.0
(C-8)和138.3(C-9)]。结合核磁数据信息以及高分辨质谱信息可以看出这个化合物是典型
的桉烷型倍半萜内酯类化合物。查阅文献发现，该化合物和已知化合物ent-3-
hydroxyatractylenolide III具有相似的结构，通过和该化合物进行比较发现，新化合物
中多了一个酮羰基碳信号以及一组双键信号。对该化合物的HMBC谱的解析中发现，H-1/C-
3，H-2/C-3，H-5/C-3之间的相关性说明在新化合物中多出来的酮羰基是位于C-3位的。同
时，H-9/C-8，H-14/C-9之间的相关信号说明C-8和C-9之间存在一个双键。综合氢谱、碳谱、
HMBC谱和ROESY谱，以及文献关于相关类型核磁数据，可基本确定该化合物如下所示，立体
构型进一步通过ECD试验确定，理论值与实验值基本一致。
该化合物化学式及碳原子编号如下：
实施例2：药理作用
本实施例使用甲状腺素片大鼠造模法制备甲状腺功能亢进大鼠模型，测定大鼠心
率、体温、体重及血清T3、T4水平的变化。观察药物对大鼠甲状腺功能亢进症的治疗作用。
1、材料与方法
1.1动物
SD大鼠60只，体重200±20g，雌雄各半，由广西医科大学实验动物中心提供。
1.2试剂与样品
那格列奈购自中国药品生物制品检定所。化合物(Ⅰ)自制，制备方法见实施例1。他
巴唑(上海中西制药有限公司)；甲状腺素片(天津君安生物制药公司)生产。125Ⅰ-三碘甲状
腺原氨酸(T3)放射免疫分析试剂盒、125Ⅰ-四碘甲状腺素(T4)放射免疫分析试剂盒。
1.3仪器
实验动物电子秤(上海医疗器械厂)；肛表、TN型托盘式扭动天平(上海第二天秤仪
器厂)；心电图仪(日本产)；5417R低温高速离心机(德国EPPENDORF公司生产)。
1.4大鼠分组及模型制备
甲亢动物模型制作方法：参照文献(林兰等，甲亢宁对甲亢大鼠甲状腺激素及心钠
素的影响，中国中医基础医学杂志，2005)，选用甲状腺素片大鼠造模法，甲状腺素片以蒸馏
水溶解，按600mg/kg剂量灌胃。造模后的动物表现为兴奋、好斗、易惊、体重减轻、饮水及饮
食量增加、心率加快等为造模成功，与阴虚型甲亢患者临床表现相近似。
取SD大鼠60只，雌雄各半，造模前常规适应性饲养3d。随机取10只作为正常对照
组，其余50只按上述方法进行造模。模型制作成功后随机分为5组：模型对照组、阳性对照组
(他巴唑组，50mg·kg-1)和那格列奈组(80mg·kg-1)、化合物(Ⅰ)组(80mg·kg-1)、那格列奈
与化合物(Ⅰ)组合物组【40mg·kg-1那格列奈+40mg·kg-1化合物(Ⅰ)】。造模成功后，按照上
述剂量给药，每日一次，连续7天。正常对照组与模型对照组小鼠灌胃给予纯化水。
1.5心率测定实验
分别于治疗前、治疗后第7d，在大鼠安静状况下，用心电图仪测定心率。
1.6体温测定实验
分别于治疗前、治疗后第7d，于上午8时测定大鼠的肛门温度。
1.7体重测定实验
分别于治疗前、治疗后第7d，大鼠禁食12h后测量其体重。
1.8血清T3、T4的测定实验
造模大鼠末次给药后1d，尾静脉采血，分离血清，采用放射免疫分析法(RIA)测定，
具体操作按照药盒说明书进行。
1.9统计学方法
实验数据用均数±标准差(x±s)表示，应用SPSS18.0版统计软件进行单因素方差
分析和t检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。
2、实验结果
2.1对甲状腺功能亢进模型大鼠心率、体温的影响
与正常对照组比较，模型对照组心率明显加快(P＜0.01)，体温明显升高(P<
0.01)；与模型对照组比较，那格列奈与化合物(Ⅰ)组合物组和阳性对照组心率明显减慢(P
＜0.01)，体温明显降低(P＜0.01)；与模型对照组比较，那格列奈组、化合物(Ⅰ)组心率减慢
(P＜0.05)体温降低(P＜0.05)。
试验结果见表1。
2.2对甲状腺功能亢进模型大鼠血清T3、T4水平的影响
与正常对照组比较，模型对照组血清T3、T4值明显升高(P＜0.01)。与模型对照组
比较，那格列奈与化合物(Ⅰ)组合物组和阳性对照组血清T3、T4值明显降低(P＜0.01)；与模
型对照组比较，那格列奈组、化合物(Ⅰ)组血清T3、T4值降低(P＜0.05)。
试验结果见表2。
表1对甲状腺功能亢进模型大鼠心率、体温、体重的影响
组别
用药前后心率差值(次/分)
用药前后体温差值(℃)
正常对照组
13.5±2.1
0.3±0.06
模型对照组
209.3±19.5
1.9±0.21
阳性对照组
84.7±20.5
0.7±0.21
那格列奈组
103.8±19.9
1.1±0.23
化合物(Ⅰ)组
101.6±19.1
1.1±0.22
那格列奈与化合物(Ⅰ)组合物组
83.4±10.2
0.7±0.11
表2对甲状腺功能亢进模型大鼠血清T3、T4水平的影响
组别
T3(ng/ml)
T4(ng/ml)
正常对照组
0.98±0.18
35.4±6.81
模型对照组
15.83±2.70
345.8±25.94
阳性对照组
3.32±1.10
39.6±7.91
那格列奈组
8.51±1.52
109.7±9.63
化合物(Ⅰ)组
8.92±1.31
108.6±10.22
那格列奈与化合物(Ⅰ)组合物组
3.69±1.02
45.4±6.93
甲状腺功能亢进症又称甲状腺毒症，是由于甲状腺内或甲状腺外的多种原因引起
血中甲状腺激素过量，作用于全身的组织和器官，造成机体的神经、循环、消化等各系统兴
奋性增高和代谢亢进为主要表现的疾病总称。甲亢是危害人类健康的一种常见内分泌疾
病，患病率约为0.5％～1％，可发生于任何年龄，以中青年女性多见。中医药在治疗甲状腺
功能亢进症、改善临床症状方面疗效明显，但临床和实验研究仅在深度和广度上有所进展，
并无重大突破，并缺乏以动物模型开展的药理研究报告和高水平研究。
上述结果表明，那格列奈、化合物(Ⅰ)单独作用时，对甲状腺功能亢进具有治疗效
果；那格列奈和化合物(Ⅰ)联合作用时，对甲状腺功能亢进的治疗效果进一步提高，可以开
发成治疗甲状腺功能亢进症的药物。
上述实施例的作用在于说明本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明的保护
范围。本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，
而不脱离本发明技术方案的实质和保护范围。