一种生产栝楼组培苗的方法.pdf

本发明公开了一种生产栝楼组培苗的方法，包括以下步骤：(1)从健壮栝楼植株采集带腋芽的单节茎段并进行常规消毒灭菌；(2)将所述茎段扦插于添加有灵发素-LFS的MS改良固体培养基中进行栝楼组培苗生产，所述MS改良固体培养基的配方为MS+LFS 0.1～0.5mg·L-1。该MS改良固体培养基可以诱导外植体直接建成根、苗齐全的栝楼组培苗。本发明方法具有生产程序简单，组培苗质量高，成本低的优点。

权利要求书1.  一种生产栝楼组培苗的方法，其特征在于，包括以下步骤： (1)从健壮栝楼植株采集带腋芽的单节茎段并进行常规消毒灭菌； (2)将所述茎段扦插于添加有灵发素-LFS的MS改良固体培养基中进行栝楼组培苗生产， 所述MS改良固体培养基的配方为MS+LFS 0.1～0.5mg·L-1。 2.  根据权利要求1所述的一种生产栝楼组培苗的方法，其特征在于，所述MS改良固体 培养基的配方为MS+LFS 0.3mg·L-1。

说明书一种生产栝楼组培苗的方法
技术领域
本发明属植物生物技术组织培养领域，具体涉及一种生产栝楼组培苗的方法。
技术背景
栝楼(Trichosanthes kirilowii Maxim.)别名天瓜、吊瓜、老鸦瓜，葫芦科栝楼属。是我 国重要的传统中药材之一，在医疗与保健方面有很高的应用价值和广泛的开发前景。但是， 在其组培苗商品化生产中，至今几乎无一例外地都选用细胞分裂素(CTKs)中的6-BA (N6-BA，N6-苄基腺嘌呤)和生长素(Auxin)中的IAA(吲哚乙酸)、NAA(萘乙酸)或 IBA(吲哚丁酸)等生长调节剂，按照不同的配比，分别复配成“外植体启动”、“无根苗继 代扩繁”和“继代苗生根”等三个生产步骤所需三种不相同的培养基，依次逐步完成组培 苗的生产。生产程序麻烦，成苗率低，成本高。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种生产程序简单，成苗率高，成本低的生产栝楼组 培苗的方法。
本发明以如下技术方案解决上述技术问题：
一种生产栝楼组培苗的方法，包括以下步骤：
(1)从健壮栝楼植株采集带腋芽的单节茎段并进行常规消毒灭菌；
(2)将所述茎段扦插于添加有灵发素-LFS的MS改良固体培养基中进行栝楼组培苗生产， 所述MS改良固体培养基的配方为MS+LFS 0.1～0.5mg·L-1。
所述MS改良固体培养基的配方为MS+LFS 0.3mg·L-1。
本发明的显著优点在于：
使用由LFS配制成的单一激素培养基可以完成传统上需要用“外植体启动培养基”、“无 根苗继代培养基”和“继代苗生根培养基”三种培养基才能完成的组培苗生产，从而大大 简化栝楼组培苗生产程序，提高成苗效率，降低生产成本。
具体实施方式
以下实施实例仅用于说明本发明，而不是用来限制本发明的范围。在未背离本发明精 神和实质的情况下，对本发明的方法、步骤或条件所作的修改或替换，均属于本发明的范 围。
实施例1：
从健壮栝楼植株采集带腋芽的单节茎段并进行常规消毒灭菌；将上述茎段扦插于用MS +LFS 0.1mg·L-1配制的固体培养基，无需再添加任何其他植物激素和调节剂，培养30d就 能直接诱导60％栝楼腋芽外植体正常萌发生长，继而建成根、苗齐全的再生植株，即组培 苗。这些再生植株茎叶形态正常，平均株高达3.8㎝，不定根平均2.5条/株，可以作为继代 材料，继续在同样的培养基中扩繁，无需另外再配制“继代培养基”。也可以出瓶移栽，销 售，无需再设“生根程序”和配制“生根培养基”。因此，用MS+LFS 0.1mg·L-1这种单一 激素的固体培养基就能替代常规用的三种培养基才能完成的栝楼组培苗生产全过程。
实施例2：
从健壮栝楼植株采集带腋芽的单节茎段并进行常规消毒灭菌；将上述茎段扦插于用MS +LFS 0.5mg·L-1配制的固体培养基，无需再添加任何其他植物激素和调节剂，培养25d就 能直接诱导100％栝楼腋芽外植体正常萌发生长，继而建成根、苗齐全的再生植株，即组培 苗。这些再生植株茎叶形态正常，平均株高达5.2㎝，不定根平均3.5条/株。这些再生植株 可以作为继代材料，在同样的培养基中扩繁，无需另外再配制“继代培养基”。也可以出瓶 移栽，销售，无需再设“生根程序”和配制“生根培养基”。因此，用MS+LFS 0.5mg·L-1这种单一激素的固体培养基就能替代常规用的三种培养基才能完成的栝楼组培苗生产全过 程。
实施例3：
以下是用本发明方法，经过优选的配方MS+LFS 0.3mg·L-1配制的单一激素固体培养基 和常规所用含不同激素的三种培养基进行栝楼组培苗生产时，在“启动”、“继代”和“生 根”三个关键阶段的比较：
1.“腋芽外植体启动”阶段：
外植体：从健壮植株采集带腋芽的单节茎段并进行常规消毒灭菌。每组培养基30瓶， 每瓶接种1个外植体。培养7d后淘汰污染瓶，每组随机取5瓶，观察统计：成苗率＝成苗 外植体数/接种外植体数×100％、平均株高(顶芽至生根节)、平均不定根数(条/株)。
A-1组：本发明固体培养基：MS+LFS 0.3mg·L-1；
B-1组：传统启动培养基MS+6-BA 0.3mg·L-1+NAA0.06mg·L-1；
结果：
A-1组：培养20d，成苗率达80％，25d达100％，茎叶形态正常，平均株高达5.4㎝。
培养至15d，开始有不定根发生，25d不定根平均3.2条/株，建成完整再生植株。
B-1组：培养20d，成苗率仅20％，25d将近30％，平均株高2.2㎝，完全没有不定根 发生，叶片明显较小。
2.“继代扩繁”阶段：
继代材料：将上述A-1组获得的正常无菌苗在净化工作台上切去两端，取+2～+4节， 分切成单节带芽茎段，同时切除叶片，保留部分叶柄保护腋芽。分别扦插于下述两组培养 基，每组12瓶，每瓶5个茎段。培养7d后淘汰污染瓶，每组随机取5瓶，统计形态学指 标同上。
A-2组：本发明固体培养基：MS+LFS 0.3mg·L-1；
B-2组：传统继代扩繁培养基：MS+6-BA 0.2mg·L-1+NAA0.1mg·L-1；
结果：
A-2组：培养15d发根率平均达50％，25d达100％。平均每株有根3.5条，平均 根长4.3㎝，平均株高4.8㎝。茎叶生长正常，建成完整健壮的再生植株。这些再生植株可 以直接出瓶移栽到营养杯进行育苗出售，亦可继续继代增殖。解剖证明，这些再生植株的 不定根发生自髓部分生组织，洗苗时不易脱落，移栽成活率≥95％。
B-2组：培养25d仍无不定根发生，平均株高3.2cm。茎叶形态正常。
3.“增殖苗生根”阶段：
生根材料：用上述B-2组所得无根苗，分别扦插于下述2组培养基。每组10瓶，每瓶 5个茎段。统计：发根率＝发根株数/接种株数×100％；平均不定根数(条)；平均不定根长 (cm)。
A-3组：本发明固体培养基：MS+LFS 0.3mg·L-1；
B-3组：传统生根培养基MS+NAA 0.3mg·L-1；
结果：
A-3组：培养15d发根率30％，20d达80％，25d达100％。平均根数3.6条/株， 平均根长4.5㎝。常规移栽成活率≥95％。
B-3组：培养15d发根率15％，25d 70％，延长培养至35d才能达到80％。苗的长势 良好。但是解剖证明，该组植株不定根2/3以上发生自愈伤组织，洗苗时极容易脱落，移栽 成活率仅80％左右，明显低于A-3组。