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一种舒肝健脾，益气活血的中药组合物及其制备方法
技术领域
本发明涉及一种舒肝健脾，益气活血的中药组合物及其制备方法，属于中药技术领域。
背景技术
肝硬化(包括肝腹水，脾肿大，门静脉高压，食道静脉曲张)是内科常见的疑难性肝脏病，系由一种或多种致病因素长期或反复损害肝脏所致，目前以乙型病毒性肝炎为主要致病因素。国内外对该病的治疗药物的研究十分重视，但至今尚无疗效可靠的药物。
中医认为该病是由于长期肝郁，脾虚，血淤，最终导致肾阳肾阴亏虚，脾、肝、肾、胃、大小肠多脏器虚损引发的一种全身性免疫功能低下的疾病。
因此发明一舒肝健脾，益气活血的治疗肝硬化的中药组合物是可行的，同时可以获得较大的经济效益和社会效益。
发明内容
本发明的目的是提供一种舒肝健脾，益气活血的中药组合物及其制备方法。
上述目的，是通过以下技术方案实现的：
一种舒肝健脾，益气活血的中药组合物，该组合物是由下述重量份的原料药制成的：蜂皇浆冻干粉2-40重量份、茶花粉5-110重量份、香茶菜10-150重量份、鸡内金10-110重量份。
优选的，该组合物还可以是由下述重量份的原料药制成的：蜂皇浆冻干粉10-20重量份、茶花粉10-60重量份、香茶菜80-120重量份、鸡内金20-60重量份。
优选的，该组合物还可以是由下述重量份的原料药制成的：蜂皇浆冻干粉15重量份、茶花粉20重量份、香茶菜100重量份、鸡内金40重量份。
该组合物的制备方法包括以下步骤：
a.先将茶花粉、鸡内金干燥，粉碎，得细粉A待用；
b.将香茶菜粉碎，过24目筛，加水煎煮1-3小时，滤过，滤液浓缩至60℃时相对密度为1.25-1.30的稠膏，干燥，粉碎，过筛，得细粉B待用；
c.将蜂皇浆冻干粉细粉A、B混合均匀，按常规工艺加入辅料制成片剂、胶囊、口服液、软胶囊、颗粒剂等临床可接受的剂型；所述辅料包括溶剂、崩解剂、矫味剂、防腐剂、着色剂、粘合剂、润滑剂、基质等。
优选的，上述步骤a中的干燥温度为60℃，粉碎粒度为100目。
优选的，上述步骤b中煎煮加水量为8倍量，煎煮时间为2小时，稠膏干燥温度为60℃，粉碎粒度为100目。
具体实施方式
下述实验例和实施例进一步说明但不限于本发明。
实验例1本发明处方粉碎工艺的研究
因为本发明胶囊剂内容物含有较多的药粉，其流动性的好坏与胶囊装量的准确度有关，药剂学上常用流动率和休止角表示。休止角愈小，流动性愈好。
按下述处方分别取原料药3份：茶花粉200g、鸡内金400g，每份按下述方法操作：
表1处方中药材粉碎粒度的确定

处方号    处理方法    1先将茶花粉、鸡内金低温干燥，粉碎，过80目筛，收集通过80目筛的细粉    2先将茶花粉、鸡内金低温干燥，粉碎，过100目筛，收集通过100目筛的细粉    3先将茶花粉、鸡内金低温干燥，粉碎，过120目筛，收集通过120目筛的细粉
采用固定漏斗法，将3只漏斗串联并固定于水平放置的坐标纸上1cm的高度处，小心地将药粉沿漏斗壁倒入最上的漏斗中直到坐标纸上形成的药粉圆锥体尖端接触到漏斗口为止，由坐标纸测出圆锥底部的直径(2R)，计算出休止角tga＝H/R.做5次，计算平均值。结果见表2。
表2休止角的测定结果

通过以上测定结果得出，该处方所得药粉粉碎至100目，流动性最好，适于装胶囊。
实验例2本发明处方提取工艺的研究
选择提取时间、提取次数、提取加水量三个因素，每个因素设3个水平，因素水平见表3，试验设计结果见表4，方差分析见表5。
称取香茶菜300g，粉碎成粗粉，将粗粉投入多功能提取罐按表2的设计进行回流提取，趁热滤过，合并提取液，浓缩，测定浓缩液中熊果酸的含量，计算。
表3优选因素水平表
  水平A提取时间(min)    B    提取次数    C    提取加水量    1    60    2    6    2    120    1    8    3    180    3    10
表4.因素筛选正交试验数据表

表5方差分析表
  方差来源  离差平方  自由度  均方和  F比  显著性
和    A    1.68    2  4.749733    82.70    *    B    7.07    2  4.822533    83.97    *    C    19.48    2  12.883900    224.33    **    D(误差)    0.62    2  0.057433
F_1-0.1(2，2)＝9.00  F_1-0.05(2，2)＝19.00 F_1-0.01(2，2)＝99.00
以熊果酸含量为考察指标的正交试验直观分析及方差分析的结果表明，因素C对试验结果影响最大，以后依次为B、A。其中C2提取效果最好，宜选择C2；最佳提取浓缩工艺条件为A3B2C2。即加水提取1次，每次3小时，加水量为8倍量。
根据该结果和工艺执行中的实际情况，优选方法如下：取原料药加8倍量水煎煮1次，提取2小时。
实验例3药效学试验研究
1实验材料
1.1药品
据实施例5所述方法制得的药品；
阳性对照药：养肝胶囊，杭州灵丹王药业有限公司生产，批准文号：国药准字B20040002。
1.2动物Wistar大鼠，昆明种小鼠，♀♂均用。
2对肝损伤小鼠血清中ALT、ET、NO含量的影响
2.1分组：取60只昆明小鼠随机分为4组，每组15只，A组为正常对照组；B组为模型对照组；C组为阳性对照组；D4组为据实施例5所述方法制得的本发明中药组合物；
2.2造模方法：采用卡介苗和脂多糖联合的方法建立免疫性肝损伤小鼠模型。各组动物适应性喂养3d后，除正常对照组外，每只小鼠1次尾静脉注射卡介苗5×10⁷个活菌，于注射BCG后第12d静脉注射脂多糖7.5μg/鼠，于16h后处死取材，正常对照组2次都以相同方法注射等量生理盐水。
2.3给药与处理：静脉注射卡介苗的第一天起开始灌胃给药，1次/d。正常对照组与模型对照组：生理盐水灌胃，灌胃量同药物治疗组的用药容量；阳性对照药物治疗组：清肝扶正胶囊，3.9g/kg剂量给药；本发明药物治疗组，3.9g/kg剂量给药。正常对照组于第12d注射生理盐水后16h，眼球后静脉丛取血，并处死动物取肝组织送检；其余组于静脉注射脂多糖后1 6h，眼球后静脉丛取血，并处死动物取肝组织送检。
2.4观察指标及检测方法：①检测谷-丙转氨酶(ALT)：采用化学比色法测定。②内源性一氧化氮(NO)测定：采用放射免疫法，剖取0.5g肝脏制成10％肝组织匀浆，在4℃条件下，3000转/min，离心10min，取上清液。③内皮素(ET)检测：采用放射免法直接测定血浆ET浓度。④病理观察：持续灌胃12d后，全部小鼠眼球采血处死，立即剖取肝组织，大体观察肝脏质地、色泽、有无结节、出血等，并取肝脏组织同一部位作病理切片，用10％的甲醛溶液固定，常规脱水，石蜡包埋切片，HE染色，光镜下观察肝脏病理形态学变化。结果见下表
表6.各组小鼠病理积分的变化情况
    组别n    剂量病理积分    A  15  \  0    B  15  \  10.34±5.28    C  15  2.2g/kg  3.57±2.67    D  15  2.2g/kg  2.78±2.87
表7各组血清ALT、ET、NO的变化情况比较
  组别n剂量ATL(nmol*s^-1/L)ET(ng/L)NO(μmol/L)    A  15  \  837.58±384.45  49.65±16.75  37.14±8.25    B  15  \  3621.56±874.64  97.24±42.65  69.31±20.48    C  15  2.2g/kg  1884.64±643.74**  58.91±22.32*  45.54±10.32*    D  15  2.2g/kg  1322.31±488.88**△  52.57±21.82*  39.54±9.39*△
*与模型组比较，*P＜0.05、**P＜0.01；△与阳性对照组比较，△P＜0.05。
从以上结果可以看出，检测合格的本发明药物对肝损伤小鼠血清中ALT、ET、NO含量有显著性改善，与阳性对照药物比较有显著性差异。
3、对慢性肝损伤的保护作用
大鼠皮下注射10％5ml/kg四氯化碳油溶液，每周2次，连续注射3个月，造成四氯化碳慢性肝损伤动物模型，观察本发明药物对损伤肝的保护作用。
正常对照组与模型对照组：生理盐水灌胃，灌胃量同药物治疗组的用药容量；阳性对照药物治疗组：养肝胶囊，1.8g/kg剂量给药；本发明药物治疗组，1.8g/kg剂量给药。正常对照组于第12d注射生理盐水后16h，眼球后静脉丛取血，并处死动物取肝组织送检；其余组于静脉注射脂多糖后16h，眼球后静脉丛取血，并处死动物取肝组织送检。
表8本发明药物对慢性肝损伤大鼠的保护作用(X±SD)
  组别n剂量SGPT(卡门氏单位)SGOT(卡门氏单位)羟脯氨酸含量    A  10  \  42.36±20.12  108.12±14.07  1.62±0.24    B  10  \  277.75±99.38  364.14±72.47  2.08±0.28    C  10  1.8g/kg  48.52±29.25**  119.53±19.18**  1.85±0.68    D  10  1.8g/kg  37.32±14.87**  67.17±16.26**△  1.53±0.26
*与模型组比较，*P＜0.05、**P＜0.01；△与阳性对照组比较，△P＜0.05。
从以上结果可以看出，检测合格的本发明药物对肝损伤小鼠血清中ALT、ET、NO含量有显著性改善，并且对慢性肝损伤有明显的的保护作用，与阳性对照药物比较有显著性差异。
试验例4临床试验与结果
1材料和方法
1.1一般情况：选择近5年来在门诊确认为慢性乙型活动性肝炎、旱期肝硬化的病人155例。观察组79例.，男55例，女24例，年龄24～69岁，平均38.5岁，疗程3～28年，平均5.4年。对照组76例，男54例.，女22例，年龄27～71岁，平均32.6岁，病程2～26年，平均5.6年。
1.2病例选择：凡符合下列几条的患者，作为观察病例。①根据1990年上海第六次全国病毒性肝炎会议修订的《病毒性肝炎防治方案》符合临床诊断为慢活肝且HBSAg阳性者；②血小板计数＜8万/mm³；③蛋白电泳r＞23％；④脾肿大，B超显示脾厚＞4.0cm或肋下触及脾脏。
1.3治疗方法：两组患者同时给子西药治疗，乙肝疫苗30μg肌注一月一次，维生素C 0.2％一日3次.潘生丁25mg，一日3次，左旋咪唑25mg一日3次。观察组给予本发明药物组合物(按照实施例5制备的胶囊剂)一日3次，一次5粒。对照组给予市售清肝扶正胶囊，一日3次，一次5粒。服用3个月。
1.4检测指标：生化检测(包括ALT、AST、血小板、蛋白电泳)，肝纤维化检测(包括HA、PIIIP，LN)。
1.5疗效判定标准：参照中华全国中医学会内科肝病专业委员会1991年天津会议制定的《病毒性肝炎疗效判定标准(试行)》慢活肝疗效判定标准。
2疗效结果
2.1药物对生化检测指标的影响：见表9
表9生化指标治疗前后变动情况(x±s)

注：与对照组相比：*P＜0.05  **P＜0.01
从上表可以看出，临床中对生化指标的影响本发明药物与阳性对照药物比较有显著性差异，本发明药物优于阳性对照药物。
2.2对肝纤维化检测指标的影响：见表10
表10肝纤维化检测指标变动情况(x±s)

注：与对照组相比：*P＜0.05  **P＜0.01
从上表可以看出，本发明药物对肝纤维化指标的的影响显著高于阳性对照药物组，本发明药物在对肝纤维化的改善效果更好。
2.3病状体征变化情况：
表11  症状体征治疗前后比较


2.4疗效综合判定：
表12  临床疗效综合判定
临床治愈显效好转无效总有效率观察组n＝79 6(7.6)32(41.5)32(40.5)9(11.4)88.6*对照组n＝76 5(6.6)27(35.5)27(35.5)17(23.4)76.6
注：与对照组相比：*P＜0.05
从表11和表12结果可以看出，本发明药物组合物对治疗慢性活动性肝炎、早期肝硬化与阳性对照药物清肝扶正胶囊比较疗效有显著性提高，本发明药物具有明显改善肝病症状，恢复肝功能、促进蛋白合成、抑制肝纤维化指标的作用，对治疗慢性乙型活动性肝炎早期肝硬化有较好疗效。
下述实施例均能够实现上述实验例所述的效果
实施例1
称取下列重量份(kg)的原料药：
蜂皇浆冻干粉0.2、茶花粉11、香茶菜1、鸡内金11
该制剂的制备方法为：
a.先将茶花粉、鸡内金60℃干燥，粉碎，过100目筛，得细粉A待用；
b.将香茶菜粉碎，过24目筛，加8倍量水煎煮1小时，滤过，滤液浓缩至60℃时相对密度为1.25的稠膏，60℃干燥，粉碎，过100目筛，得细粉B待用；
c.将蜂皇浆冻干粉与细粉A、B混合均匀，加入糊精5kg，甜菊糖0.2kg，制粒得颗粒25kg。
实施例2.
称取下列重量份(kg)的原料药：
蜂皇浆冻干粉4、茶花粉0.5、香茶菜15、鸡内金1
该制剂的制备方法为：
a.先将茶花粉、鸡内金60℃干燥，粉碎，过100目筛，得细粉A待用；
b.将香茶菜粉碎，过24目筛，加8倍量水煎煮3小时，滤过，滤液浓缩至60℃时相对密度为1.25的稠膏，60℃干燥，粉碎，过100目筛，得细粉B待用；
c.将蜂皇浆冻干粉细粉A、B混合均匀，按药粉∶PEG600∶甘油(6∶6∶1)的重量比混合均匀，压制成软胶囊，即得。软胶囊囊壳以明胶∶甘油∶水(3∶1∶2)比例制备。
实施例3
称取下列重量份(kg)的原料药：
蜂皇浆冻干粉2、茶花粉1、香茶菜12、鸡内金2
该制剂的制备方法为：
a.先将茶花粉、鸡内金60℃干燥，粉碎，过100目筛，得细粉A待用；
b.将香茶菜粉碎，过24目筛，加8倍量水煎煮1小时，滤过，滤液浓缩至60℃时相对密度为1.30的稠膏，60℃干燥，粉碎，过100目筛，得细粉B待用；
c.将蜂皇浆冻干粉细粉A、B混合均匀，加入0.01倍量的硬脂酸镁混匀，制粒，干燥，整粒，压片，得10000片，即得。
实施例4
称取下列重量份(kg)的原料药：
蜂皇浆冻干粉1、茶花粉6、香茶菜8、鸡内金6
该制剂的制备方法为：
a.先将茶花粉、鸡内金60℃干燥，粉碎，过100目筛，得细粉A待用；
b.将香茶菜粉碎，过24目筛，加8倍量水煎煮2小时，滤过，滤液浓缩至60℃时相对密度为1.28的稠膏，60℃干燥，粉碎，过100目筛，得细粉B待用；
c.将蜂皇浆冻干粉细粉A、B混合均匀，加入蔗糖3kg、山梨酸钾0.1kg，加水调整总量至10L，搅匀，灌装，即得。
实施例5
称取下列重量份(kg)的原料药：
蜂皇浆冻干粉1.5、茶花粉2、香茶菜10、鸡内金4
该制剂的制备方法为：
a.先将茶花粉、鸡内金60℃干燥，粉碎，过100目筛，得细粉A待用；
b.将香茶菜粉碎，过24目筛，加8倍量水煎煮2小时，滤过，滤液浓缩至60℃时相对密度为1.252的稠膏，60℃干燥，粉碎，过100目筛，得细粉B待用；
c.将蜂皇浆冻干粉细粉A、B混合均匀，装胶囊，得胶囊1000粒，即得。