具有改善特性的重建表面活性剂.pdf

本发明涉及一种重建表面活性剂，其含有脂质载体、天然表面活性剂蛋白SP-C的多肽类似物和包含重复单位序列的多肽，该重复单位由3至8个各种疏水性氨基酸残基和一个碱性氨基酸残基组成。本发明还涉及其药物组合物及其用于预防和/或治疗RDS和其他呼吸疾病的用途。

1.  一种重建表面活性剂，含有脂质载体，以及天然表面活性剂蛋白SP-C的类似物与包含重复单位序列的多肽的组合，该重复单位由3至8个各种疏水性氨基酸残基和一个碱性氨基酸残基组成，其中所述天然表面活性剂蛋白SP-C的类似物是至少20个氨基酸残基且不超过40个氨基酸残基的多肽，其具有通式(I)表示的序列，
F_eG_eI_fP_fS_gSPVHLKRX_aBX_bGALLΩ_pG_pL_p    (I)
其中：
X是独立地选自I、L和nL的氨基酸残基；
B是独立地选自K、R、H、W、F、Y和Orn的氨基酸残基；
S是任选地由酰基取代的，该酰基含有12-22个碳原子，优选16个碳原子，并通过酯键与侧链连接；
Ω是选自M或硫原子被氧化的M、I、L和nL的氨基酸残基；
a是具有1至8数值的整数；
b是具有1至19数值的整数；
e、f、g和p是具有0或1数值的整数；
附带条件是X_aBX_b是具有最大22个氨基酸的序列；并且
其中所述包含重复单位序列的多肽具有至少12个氨基酸残基且不超过60个氨基酸残基，并且由通式(II)来表示
B(U_aB)_x    (II)
其中
U是独立地选自L、I、nL、V、A、M和F的氨基酸残基；
B是独立地选自K、R、H和Orn的氨基酸残基；
a是具有3至8，优选4至5数值的整数；并且
x是具有2至6，优选3至4数值的整数。

2.  根据权利要求1的重建表面活性剂，其中通式(I)的多肽和通式(II)的多肽以固定的组合存在。

3.  根据权利要求1的重建表面活性剂，其中天然表面活性剂蛋白SP-C的类似物由通式(Ia)来表示
I_fP_fSSPVHLKRX_aBX_bGALLΩ_pG_pL_p    (Ia)
其中
a为1；
b为14；并且
f和p为0或1。

4.  根据权利要求3的重建表面活性剂，其中天然表面活性剂蛋白SP-C的类似物由通式(Ib)来表示
IPS SPVHLKRX_aBX_bGALLΩ_pG_pL_p    (Ib)
其中：
p为0或1。

5.  根据权利要求4的重建表面活性剂，其中天然表面活性剂蛋白SP-C的类似物由通式(Ic)来表示
IPSSPVHLKRLKLLLLLLLLILLLILGALLΩ_pG_pL_p    (Ic)
其中：
p为0或1。

6.  根据权利要求5的重建表面活性剂，其中天然表面活性剂蛋白SP-C的类似物选自：
IPSSPVHLKRLKLLLLLLLLILLLILGALLMGL  (Id)(SEQ ID NO：1)
IPSSPVHLKRLKLLLLLLLLILLLILGALLIGL   (Ie)(SEQ ID NO：2)
IPSSPVHLKRLKLLLLLLLLILLLILGALLLGL   (If)(SEQ ID NO：3)
IPSSPVHLKRLKLLLLLLLLILLLILGALLnLGL  (Ig)(SEQ ID NO：4)
IPSSPVHLKRLKLLLLLLLLILLLILGALL    (Ih)(SEQ ID NO：5)。

7.  根据权利要求1的重建表面活性剂，其中通式(II)的多肽包含或由通式(III)表示的序列组成
B(U₄B)_x  (III)
其中
U是独立地选自L和I的氨基酸残基；
B是独立地选自K和R的氨基酸残基；并且
X是具有3或4，优选4数值的整数。

8.  根据权利要求7的重建表面活性剂，其中多肽具有通式
KLLLLKLLLLKLLLLKLLLLK    (KL₄)(SEQ ID NO：6)。

9.  根据权利要求1的重建表面活性剂，其中天然表面活性剂蛋白SP-C的类似物具有通式
IPSSPVHLKRLKLLLLLLLLILLLILGALLLGL；并且
多肽含有具有以下通式的重复单位的序列KLLLLKLLLLKLLLLKLLLLK。

10.  根据权利要求1至9任一项的重建表面活性剂，其中脂质载体含有磷脂混合物。

11.  根据权利要求10的重建表面活性剂，其中磷脂混合物由二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)和选自棕榈酰油酰磷脂酰甘油(POPG)的棕榈酰油酰磷脂或重量比为95∶5至50∶50的其与棕榈酰油酰脂酰胆碱(POPC)的混合物组成。

12.  根据权利要求11的重建表面活性剂，其中磷脂混合物由重量比为68∶31的DPPC和POPG组成。

13.  含有根据权利要求1至12任一项的重建表面活性剂的药物组合物。

14.  根据权利要求12的药物组合物，为溶液、分散体、悬浮液或干粉的形式。

15.  根据权利要求14的药物组合物，为水性悬浮液的形式。

16.  根据权利要求14的药物组合物，含有2至160mg/ml浓度的重建表面活性剂。

17.  根据权利要求16的药物组合物，其中重建表面活性剂的浓度为20至80mg/ml。

18.  根据权利要求1至12任一项的重建表面活性剂作为药物的用途。

19.  根据权利要求1至12任一项的重建表面活性剂用于预防和/或治疗早产儿的呼吸窘迫综合征(RDS)或治疗或预防其他与表面活性剂缺乏或功能障碍相关的疾病的用途。

20.  根据权利要求19的用途，其中与表面活性剂缺乏或功能障碍相关的疾病包括急性肺损伤(ALI)、成人RDS(ARDS)、胎便吸入综合征(MAS)和支气管肺发育不良(BPD)。

21.  根据权利要求1至12任一项的重建表面活性剂用于制造治疗和/或预防早产儿呼吸窘迫综合征(RDS)或治疗或预防其他与表面活性剂缺乏或功能障碍相关的疾病的药物的用途。

具有改善特性的重建表面活性剂
本发明涉及一种重建表面活性剂，其含有脂质载体，以及天然表面活性剂蛋白SP-C的特定多肽类似物与包含重复单位序列的多肽的组合，该重复单位由3至8个各种疏水性氨基酸残基和一个碱性氨基酸残基组成。
本发明还涉及相应的药物组合物及其用于预防和/或治疗RDS和其他呼吸道疾病的用途。
发明背景
人肺由称为肺泡的大量小气囊组成，其中，气体在血液和肺的气室之间交换。在健康个体中，这种交换通过含有蛋白质的表面活性剂复合物的存在来介导，这种复合物防止肺在呼气末期塌陷。
肺表面活性剂复合物主要由脂质组成，并含有少量各种蛋白质。缺少足够水平的这种复合物导致肺功能失常。这种症状称为呼吸窘迫综合征RDS，它经常侵袭早产儿。
用提取自动物肺的修饰的天然表面活性剂制剂能有效地治疗所述综合征。
可购得的修饰的表面活性剂制剂是，例如，源自猪肺的固尔苏、提取自小牛肺灌洗液的Infasurf和化学修饰的天然牛肺提取物Survanta。
这些表面活性剂制剂的主要成分是磷脂，如1，2-二棕榈酰-sn-甘油基-3-磷脂酰胆碱，通常称为二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)，磷脂酰甘油酯(PG)和表面活性剂疏水性蛋白B和C(SP-B和SP-C)。
由于来自动物组织的表面活性剂制剂的缺点，如复杂的生产和灭菌过程以及可能诱导免疫反应，因此已经研发了模拟修饰的天然表面活性剂组成的合成表面活性剂。
所述合成表面活性剂称为重建表面活性剂。
然而，已经证实了研发临床有效的重建表面活性剂非常复杂，因为天然疏水性蛋白太大而不易合成，结构复杂并且纯化形式下不稳定。
为了替代所述的天然疏水性蛋白，现有技术中已经提出了部分对应于它们的序列及其类似物的一些合成多肽，并且例如，公开于WO89/06657、WO92/22315、WO95/32992、US 6,660,833、EP 413,957、WO91/18015和WO00/47623。
然而，根据可获得的文献，在动物研究中，用重建表面活性剂治疗引起差的肺气体容积和呼气末期肺泡开放程度，并且为了获得用修饰的天然表面活性剂获得的相当的体内活性，换气需要呼气末期正压(PEEP)(Johansson J等，J Appl Physiol 2003，95，2055-1063；Davis AJ等，Am J Respir Crit Care Med 1998；157，553-559)。
可获得的重建表面活性剂制剂实际上不能在呼气末期在肺泡中形成稳定的磷脂膜。
因此，在肺顺应性方面对于具有改善特性的重建表面活性剂始终还有未能满足的需求。
特别地，对于能够确保肺泡稳定性，并且因此能够保持呼气末期肺泡稳定性而不需要用PEEP换气的重建表面活性剂制剂存在需求。
已经发现，并且本发明的目的在于，就肺顺应性而言，特别就有效维持呼气末期肺泡开放性而不需要通过PEEP换气的能力而言，为了提供具有改善特性的重组表面活性剂制剂，天然SP-C蛋白的特定多肽类似物可以有利地与特定的多肽结合，该多肽含有交替的3至8个各种疏水性氨基酸残基和一个碱性氨基酸残基的序列。
在其中用外源性表面活性剂制剂而没有使用PEEP治疗未成熟的新生儿的RDS的模型中，所述多肽的组合对肺气体容积起作用，肺气体容积是呼气末期肺泡开放程度的指标。
发明概述
本发明涉及一种重建表面活性剂，其含有脂质载体，以及天然表面活性剂蛋白SP-C的特定多肽类似物与包含重复单位序列的多肽的组合，该重复单位由3至8个，优选4至5个各种疏水性氨基酸残基和一个碱性氨基酸残基组成。
特别地，本发明涉及一种重建表面活性剂，其包含：
a)脂质载体；
b)至少20个氨基酸残基并且不超过40个氨基酸残基的多肽，具有通式(I)表示的序列
F_eG_eI_fP_fS_gSPVHLKRX_aBX_bGALLΩ_pG_pL_p    (I)
其中：
X是独立地选自I、L和nL的氨基酸残基；
B是独立地选自K、R、H、W、F、Y和Orn的氨基酸残基；
S是任选地由酰基取代的，该酰基含有12-22个碳原子，优选16个碳原子，并通过酯键与侧链连接；
Ω是选自M或硫原子被氧化的M、I、L和nL的氨基酸残基；
a是具有1至8数值的整数；
b是具有1至19数值的整数；
e、f、g和p是具有0或1数值的整数；
附带条件是X_aBX_b是具有最大22个氨基酸的序列；
c)至少12个氨基酸残基且不超过60个氨基酸残基的多肽，包含由通式(II)表示的序列
B(U_aB)_x    (II)
其中
U是独立地选自L、I、nL、V、A、M和F的氨基酸残基；
B是独立地选自K、R、H和Orn的氨基酸残基；
a是具有3至8，优选4至5数值的整数；并且
x是具有2至6，优选3至4数值的整数。
本发明还包括所述多肽的药物学上可接受的盐及其例如通过乙酰化和酰胺化的N-和/或C-末端阻断的衍生物。
本发明还提供了含有本发明的重建表面活性剂的药物组合物。
本发明进一步涉及之前所述的重建表面活性剂作为药物的用途。
根据另一个方面，本发明涉及之前所述的重建表面活性剂用于预防和/或治疗早产儿中的呼吸窘迫综合征(RDS)、涉及表面活性剂缺乏或机能障碍的疾病和其他呼吸疾病。
本发明的再一个方面涉及预防和/或治疗早产儿中呼吸窘迫综合征(RDS)、涉及表面活性剂缺乏或机能障碍的其他疾病和其他呼吸疾病的方法，所述方法包括给予有效量的之前所述的重建表面活性剂。
附图
图1显示了人蛋白SP-C的氨基酸序列。天然SP-C中的Cys残基被棕榈酰化。
图2显示了多肽KL4的螺旋轮表示。将碱性氨基酸残基圈出来。
图3显示了就肺气体容量(ml/kg)而言的结果。
图4显示了就潮气量(ml/kg)作为时间/压力的函数而言的结果。
定义
通过测量两个参数来进行用外源性表面活性剂制剂体内进行治疗后的呼吸功能：
i)潮气量，是肺顺应性的指标，和
ii)肺气体容量，是呼气末期肺泡空气扩张或开放程度的指标，并且因此是呼气末期在肺泡中形成稳定卵磷脂膜的能力的指标。
如在此所用的，用于治疗特定疾病的有效量是足以缓解，或以某种方式减轻与疾病相关症状的量。所述量将取决于疾病的种类和严重程度以及患者的状况(体重、性别、年龄)。
如在此所用的，术语“重建表面活性剂”意指一种脂质载体，其中加入了通过重组技术或合成方法制备的表面活性剂蛋白的多肽类似物。
如在此所用的，术语“脂质载体”意指磷脂和任选的其他脂质组分的混合物，其他脂质成分例如为中性脂质，如三酰基甘油、游离脂肪酸和/或胆固醇。
如在此所用的，术语“天然表面活性蛋白SP-C的多肽类似物”包括含有如下氨基酸序列的多肽，该氨基酸序列与天然蛋白相比，一个或多个氨基酸已经丢失或由其他氨基酸置换，只要多肽，在与脂质载体的混合物中，显示出肺表面活性剂活性。
根据三字母代码来显示氨基酸序列，其中带有游离氨基的氨基酸在左侧(氨基末端)，而带有游离羧基的氨基酸在右侧(羧基末端)。
在此鉴定的所有氨基酸残基都呈天然的L-构型，并且在此鉴定的序列根据以下对照表中所示的氨基酸残基的标准缩写来记录。
对照表
氨基酸                        符号
                    一个字母         三个字母
甘氨酸              G                Gly
L-脯氨酸            P                Pro
L-异亮氨酸          I                Ile
L-亮氨              L                Leu
L-酪氨酸            Y                Tyr
L-半胱氨酸          C                Cys
L-色氨酸            W                Trp
L-丙氨酸            A                Ala
L-赖氨酸            K                Lys
L-精氨酸            R                Arg
L-谷氨酰胺          Q                Glu
L-蛋氨酸            M                Met
L-丝氨酸            S                Ser
L-缬氨酸            V                Val
L-天冬酰胺          N                Asn
L-天冬氨酸          D                Asp
L-谷氨酸            E                Glu
L-组氨酸            H                His
L-苏氨酸            T                Thr
L-苯丙氨酸          F                Phe
L-正亮氨酸          -                nLeu
L-鸟氨酸            -                Orn
发明详述
本发明涉及一种重建表面活性剂，其含有脂质载体和通式(I)的多肽与包含重复单位序列的多肽的组合，该重复单位由3至8个(优选4或5个)各种疏水性氨基酸残基和一个碱性氨基酸残基组成。
我们已经肯定地发现，在其中使用外源性表面活性剂制剂而不使用PEEP治疗未成熟的新生儿的RDS模型中，通式(I)的多肽，与通式(II)的多肽结合，有利地作用于肺气体容量，而肺气体容量是呼气末期肺泡开放程度的指标。
所要求的重建表面活性剂制剂能改善呼吸功能，如通过潮气量来表示，至与给予修饰的天然表面活性剂后取得的相当的程度。
有利地，天然蛋白SP-C的类似物是具有至少20个氨基酸残基且不超过40个氨基酸残基的多肽，并且具有通式(I)表示的序列
F_eG_eI_fP_fS_gSPVHLKRX_aBX_bGALLΩ_pG_pL_p    (I)
其中：
X是独立地选自I、L和nL的氨基酸残基；
B是独立地选自K、R、H、W、F、Y和Orn的氨基酸残基；
S是任选地由酰基取代的，该酰基含有12-22个碳原子，优选16个碳原子，并通过酯键与侧链连接；
Ω是选自M或硫原子被氧化的M、I、L和nL的氨基酸残基；
a是具有1至8数值的整数；
b是具有1至19数值的整数；
e、f、g和p是具有0或1数值的整数；
附带条件是X_aBX_b是具有最大22个氨基酸的序列。
优选，通式(I)的多肽由至少30个且不超过35个氨基酸，更优选不超过33个氨基酸组成。
在特定的实施方案中，通式(I)的多肽由30或33或35个氨基酸组成。
优选，SP-C蛋白的多肽类似物由通式(Ia)来表示，其中e和n为0，而g为1
I_fP_fSSPVHLKRX_aBX_bGALLΩ_pG_pL_p    (Ia)
其中
X、B和Ω如上所述；
a为1；
b为14；
f和p为0或1。
更优选，SP-C蛋白的多肽类似物由通式(Ib)来表示，其中f为1
IPSSPVHLKRX_aBX_bGALLΩ_pG_pL_p    (Ib)
其中：
X、B、Ω、a和b如上所述；
p为0或1。
甚至更优选，SP-C蛋白的多肽类似物由通式(Ic)来表示
IPSSPVHLKRLKLLLLLLLLILLLILGALLΩ_pG_pL_p    (Ic)
其中：
Ω如上所述
p为0或1。
以下记载了通式(Ic)多肽的实例：
IPSSPVHLKRLKLLLLLLLLILLLILGALLMGL    (Id)  (SEQ ID NO：1)
IPSSPVHLKRLKLLLLLLLLILLLILGALLIGL    (Ie)  (SEQ ID NO：2)
IPSSPVHLKRLKLLLLLLLLILLLILGALLLGL    (If)  (SEQ ID NO：3)
IPSSPVHLKRLKLLLLLLLLILLLILGALLnLGL   (Ig)  (SEQ ID NO：4)
IPSSPVHLKRLKLLLLLLLLILLLILGALL    (Ih)  (SEQ ID NO：5)
多肽(Id)在现有技术中还称为SP-C33。
最优选，SP-C类似物是选自具有通式(Ie)、(Ig)和(Ih)的多肽组的多肽。
最优选的多肽具有通式(If)。
有利地，多肽包括交替该序列的3至8个各种疏水性氨基酸残基和一个碱性氨基酸残基的序列的多肽由至少12个氨基酸残基且不超过60个氨基酸残基，优选由至少20个且不超过35个组成，并且由通式(II)来表示
B(U_aB)_x    (II)
其中
U是独立地选自选自L、I、nL、V、A、M和F的氨基酸残基；
B是独立地选自K、R、H和Orn的氨基酸残基；
a是具有4至5数值的整数，优选4；和
x是具有3至4数值的整数，优选4。
一组优选的多肽包括以下序列或由以下序列组成，其中U是L或I，B是K或R，a是4或5，优选4，并且x是3或4，优选4。
特别优选的多肽是现有技术中称为KL₄并且具有以下记载的序列的多肽
KLLLLKLLLLKLLLLKLLLLK    (KL₄)  (SEQ ID NO：6)
特别优选的多肽的另一个实例是具有以下所记载的序列，在此称为KL₅的多肽：
KLLLLLKLLLLLKLLLLLKLLLLLK  (KL₅)  (SEQ ID NO：7)
的确已经发现了KL₅显示出带电荷的残基围绕肽的整个螺旋圆周分布，与KL₄相似。
优选多肽的更多实例是具有序列(III)的那些：
FGIPSSPVHLKBX4BX4BX4BLGALLMGL(III)
通式(IIIIa)多肽的实例是现有技术中称为SP-C的多肽(LKS)
FGIPSSPVHLKRLLILKLLLLKILLLKLGALLMGL[SP-C(LKS)](SEQ IDNO：8)
可以通过任何已知的技术来制备通式(I)和(II)的多肽，如以下文献中所述的那些，J.M.Steward和J.D.Young，“Solid PhasePeptide Synthesis”(固相肽合成)，W.H.Freeman Co.，SanFrancisco，1969，和J.Meienhofer，Hormonal Proteins and Peptides(激素蛋白质和肽)，Vol.2，p.46，Academic Press(纽约)，1983，用于固相肽合成，和E.Schroder和K.Kubke，“The Peptides”(肽)，Vol.1，Academic Press(纽约)，1965，用于传统的溶液合成。多肽合成技术的概述可以在以下文献中找到，J.Stuart和J.D.Young，Solid Phase Peptide Synthesis(固相肽合成)，Pierce ChemicalCompany，Rockford，IL，第3版，Neurath，H.等编辑，p.104-237，Academic Press，纽约，NY(1976)。
用于这些合成中的合适保护基团将在以上的文献以及J.F.W.McOmie，Protecitve Grouts in Organic Chemistry，Plenum Press，纽约，NY(1973)中找到。
一般而言，这些方法包括将一种或多种氨基酸残基或适当保护的氨基酸残基按序加入到生长的肽链中。通常，第一个氨基酸残基的氨基或羧基由合适的、可选择除去的保护基团来保护。
使用固相合成作为例子，将被保护的或衍生化的氨基酸通过其未受保护的羧基或氨基连接到惰性固体支持物上。然后选择性地除去氨基-或羧基-保护基团，并在适于与已经连接到固体支持物上的残基形成酰胺键的条件下，使序列中具有适当保护的互补基团(氨基或羧基)的下一个氨基酸混合并反应。然后从这个新添加的氨基酸残基上除去氨基-或羧基-保护基团，然后添加下一个(适当保护的)氨基酸，依此类推。
将所有所需的氨基酸以正确顺序连接后，按序或同时除去任何剩余的末端和侧基保护基团(和固体支持物)，以获得最终的多肽。
特别地，根据WO00/47623中公开的方法，可以制备通式(I)和(III)的多肽，而根据WO92/22315所述的方法可以制备由通式(II)的序列组成的多肽。
可以通过将通式(I)和(II)的多肽的溶液或悬浮液和脂质混合，随后将该混合物干燥来制备本发明的重建表面活性剂，另外，可以通过冻干或喷雾干燥来制备它们。
优选地，通式(I)的多肽和通式(II)的多肽以固定的量和定量比例作为固定的组合存在于本发明的重建表面活性剂中。
通式(I)和(II)的多肽相对于重建表面活性剂的比例可以改变。有利地，每种多肽可以以0.5至10％(w/w)的含量存在，基于表面活性剂的重量，优选1至5％，最优选1至3％。
有利地，脂质载体包括天然肺表面活性剂制剂中含有的磷脂，例如磷脂酰胆碱(PC)，如二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)和棕榈酰油酰脂酰胆碱(POPC)，以及磷脂酰甘油(PG)，如棕榈酰油酰磷脂酰甘油(POPG)和二棕榈酰磷脂酰甘油(DPPG)。
可以有利地使用的其他磷脂是磷脂酰肌醇(PI)、磷脂酰乙醇胺(PE)、磷脂酰丝氨酸和鞘磷脂(SM)。
在特定的实施方案中，脂质载体可以包括更多的成分，例如中性脂质，如三酰甘油、游离脂肪酸和/或胆固醇。
有利地，根据本发明的重建表面活性剂含有90至99％重量的脂质载体，优选92至98％，更优选94至96％，和1至10％重量的两种肽的总和，优选2至8％，更优选4至6％。
在本发明特定的实施方案中，重建表面活性剂含有96％重量的脂质载体，2％重量的通式(I)的多肽和2％重量的通式(II)的多肽。
脂质载体中包含的磷脂优选地是由DPPC和选自POPG的棕榈酰油酰磷脂或其与POPC的混合物组成，重量比为95∶5至50∶50，优选80∶20至60∶40。DPPC与POPG的重量比范围优选为75∶25至65∶35，更优选为68∶31。在DPPC∶POPG∶POPC混合物的情况下，优选以60∶20∶20或68∶15∶16的重量比来使用磷脂。
在优选的实施方案中，重建表面活性剂含有1至5％重量的通式(Ia)的多肽，1至5％重量的通式(II)的多肽以及重量比为68∶31的DPPC和POPG的混合物。
在更优选的实施方案中，重建表面活性剂含有1.5至3％重量的选自(Ie)、(If)、(Ig)和(Ih)的多肽，更优选多肽(If)，1.5至3％重量的通式(II)的肽以及重量比为68∶31的DPPC和POPG的混合物。
按常规进行本发明的重建表面活性剂的给药，优选通过气管内滴注(灌输或推注)或通过喷雾。
重建表面活性剂的有效量将根据许多不同因素而改变，包括给药方式、疾病的类型和严重程度以及治疗是预防性的还是治疗性的。通常，剂量为0.01mg至10g/kg体重，优选10至500mg/kg，更优选40至200mg/kg。本领域技术人员可以容易地确定最佳剂量和给药频率。
本发明还涉及含有本发明重建表面活性剂的药物组合物。所述组合物有利地通过溶液、分散液、悬浮液或干粉的形式给药。优选，所述组合物包括溶解或悬浮于合适溶剂或重悬浮介质中的重建表面活性剂。
优选地，所述药物组合物以在一次性使用的玻璃小瓶中的缓冲生理盐水溶液中的悬浮液形式供给使用。有利的是，重组表面活性剂的浓度(以磷脂含量表示)在约2至约160mg活性剂/ml，优选在10至100mg/ml，更优选20至80mg/ml的范围。
为了获得较低的粘度，所述组合物可以进一步含有电解质，如，钙、镁和/或钠盐(例如，氯化钙或氯化钠)。
根据本发明的药物组合物适用于预防和/或治疗早产儿的呼吸窘迫综合征(RDS)或其他与表面活性剂缺乏或机能障碍相关的疾病，包括急性肺损伤(ALI)、成人RDS(ARDS)、胎便吸入综合征(MAS)和支气管肺发育不良(BPD)。
它们也可用于预防和/或治疗其他呼吸疾病，如肺炎、支气管炎、COPD(慢性梗阻性肺病)、哮喘和囊性纤维化病以及用于治疗浆液性中耳炎(胶耳)。
以下实施例更详细地说明了本发明。
实施例
使用基于多肽SP-C33和KL₄的重建表面活性剂的体内实验。
在早产的新生兔子中测定表面活性剂制剂，这些兔子通过在27天妊娠期的子宫切除术获得。进行实验，不使用呼气末期正压(PEEP)。
作为SP-C的类似物，使用按照WO00/47623中所述制备的称为SP-C33的多肽。
作为蛋白SP-B的类似物，使用称为KL₄的多肽，其是根据WO92/22315的教导制备的。
动物在出生时用200mg/kg(80mg/kg)的重建表面活性剂制剂来治疗，该重组表面活性剂制剂含有2％SP-C33或2％SP-C33+2％KL₄，与由68∶31w/w比例的DPPC∶POPG组成的磷脂混合物结合。
用(80mg/ml)治疗的动物作为阳性对照，而没有治疗的同窝仔作为阴性对照。
与峰值吹入压力的标准化序列平行给未成熟的新生兔子通气。为了打开肺，先将压力设定为35cm H₂O，持续1分钟。该恢复操作后，将压力降至25cm H₂O，持续15分钟，并且进一步降至20和15cm H₂O。最后，将压力再次升到25cm H₂O，持续5分钟，此后，用氮气将肺再通气5分钟，然后切除进行气体容量测量。
测量均以ml/kg表示的肺气体容量和潮气量，并且将作为中值给出的结果分别记载于图4和5中。
图3显示了用含有2％w/w SP-C33与2％KL₄结合的重建表面活性剂制剂治疗的动物比接受2％w/w SP-C33的动物具有更高的肺气体容量，表明将2％w/w KL₄加入到SP-C33表面活性剂中产生了肺气体容量的增加。
所述结果证明本发明的重建表面活性剂比只含有蛋白SP-C类似物的重建表面活性剂制剂在呼气末期的肺泡中提供磷脂膜的更好的稳定。
此外，图4表明所要求的重建表面活性剂制剂可显著改善用潮气量表示的呼吸功能。