CN200880019184.9
2008.05.27
CN101680008A
2010.03.24
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授权|||实质审查的生效IPC(主分类):C12P 7/62申请日:20080527|||公开
C12P7/62; C12P17/06; A61K31/351; A61P17/00; C07C69/76; C07D309/38
C12P7/62
伊士曼化工公司
S·K·克伦登宁; N·W·博亚斯; J·M·克劳森
美国田纳西州
2007.6.8 US 11/811,055
中国专利代理(香港)有限公司
李 进;黄可峻
本发明提供制备用作亮肤剂的酯化合物的方法和用于亮肤的含有该酯化合物的组合物。
1. 一种制备式1代表的酯化合物的方法：包括使式2代表的醇：与式3的酸衍生物：在酶的存在下反应；其中R选自C6-C20碳环羟基芳基；取代的羟基-4H-吡喃-4-酮-2-基，其中取代基选自C1-C6-烷基、取代的C1-C6-烷基、C6-C10芳基、取代的C6-C10芳基、C1-C6-烷氧基、卤素、羧基、氰基、C1-C6-烷酰氧基、C1-C6-烷硫基、C1-C6-烷基磺酰基、三氟甲基、羟基、C2-C6-烷氧羰基、C2-C6-烷酰基氨基、-O-R2、S-R2、-SO2-R2、-NHSO2R2和-NHCO2R2，其中R2是苯基、萘基，或者被1-3个选自C1-C6-烷基、C6-C10芳基、C1-C6-烷氧基和卤素的基团取代的苯基或萘基；和C4-C20羟基杂芳基，其中杂原子选自硫、氮和氧；R1选自C1-C22烷基、C2-C22链烯基、C4-C22二烯基、C6-C22三烯基、C8-C22四烯基及其混合物；和R4选自氢、C1-C4烷基和C2-C4链烯基。2. 权利要求1的方法，其中醇和衍生物在酶和有机溶剂的存在下反应。3. 权利要求1的方法，其中R的芳基是被羟基和1-3个选自C1-C6-烷基、取代的C1-C6-烷基、C6-C10芳基、取代的C6-C10芳基、C1-C6-烷氧基、卤素、羧基、氰基、C1-C6-烷酰氧基、C1-C6-烷硫基、C1-C6-烷基磺酰基、三氟甲基、羟基、C2-C6-烷氧羰基、C2-C6-烷酰基氨基、-O-R2、S-R2、-SO2-R2、-NHSO2R2和-NHCO2R2的其它取代基取代的苯基、萘基或蒽基，其中R2是苯基、萘基，或被1-3个选自C1-C6-烷基、C6-C10芳基、C1-C6-烷氧基和卤素的基团取代的苯基或萘基。4. 权利要求1的方法，其中R的杂芳基部分是含有1-3个选自氧、硫和氮的杂原子的5-或6-元羟基-取代的芳环。5. 权利要求3的方法，其中杂芳基部分选自羟基噻吩基、羟基呋喃基、羟基吡咯基、羟基咪唑基、羟基吡唑基、羟基噻唑基、羟基异噻唑基、羟基噁唑基、羟基异噁唑基、羟基三唑基、羟基噻二唑基、羟基噁二唑基、羟基四唑基、羟基吡啶基、羟基嘧啶基、羟基苯并噁唑基、羟基苯并噻唑基、羟基苯并咪唑基和羟基吲哚基。6. 权利要求4的方法，其中杂芳基部分被至多3个选自C1-C6-烷基、C1-C6-烷氧基、取代的C1-C6-烷基、卤素、C1-C6-烷硫基、芳基、芳硫基、芳氧基、C2-C6-烷氧羰基和C2-C6-烷酰基氨基的其它基团取代。7. 权利要求4的方法，其中杂芳基部分被苯并残基或萘并残基取代，所述残基被至多3个选自C1-C6-烷基、C1-C6-烷氧基、取代的C1-C6-烷基、卤素、C1-C6-烷硫基、芳基、芳硫基、芳氧基、C2-C6-烷氧羰基和C2-C6-烷酰基氨基的基团任选取代。8. 权利要求1的方法，其中R1是被1-3个选自C1-C6-烷氧基、氰基、C2-C6-烷氧羰基、C2-C6-烷酰氧基、羟基、芳基、杂芳基、巯基、硫醚、二硫戊环和卤素的基团任选取代的含有至多约22个碳原子的脂族烃。9. 权利要求1的方法，其中R是苯酚或取代的羟基-4H-吡喃-4-酮-2-基。10. 权利要求1的方法，其中R是4-羟基苯基且R1是至少一个C1-C16直链烷基。11. 一种制备式1代表的酯化合物的方法：包括使式4代表的酯：与式3的酸衍生物：在酶的存在下反应；其中R选自C6-C20碳环羟基芳基、羟基-4H-吡喃-4-酮-2-基和C4-C20羟基杂芳基，其中杂原子选自硫、氮和氧；R1选自C1-C22烷基、C2-C22链烯基、C4-C22二烯基、C6-C22三烯基、C8-C22四烯基及其混合物；R4选自氢、C1-C4烷基和C2-C4链烯基；和R5是氢或C1-C4烷基。12. 权利要求11的方法，其中酯与衍生物在酶和有机溶剂的存在下反应。13. 权利要求11的方法，其中R的芳基是被羟基和1-3个选自C1-C6-烷基、取代的C1-C6-烷基、C6-C10芳基、取代的C6-C10芳基、C1-C6-烷氧基、卤素、羧基、氰基、C1-C6-烷酰氧基、C1-C6-烷硫基、C1-C6-烷基磺酰基、三氟甲基、羟基、C2-C6-烷氧羰基、C2-C6-烷酰基氨基、-O-R2、S-R2、-SO2-R2、-NHSO2R2和-NHCO2R2的其它取代基取代的苯基、萘基或蒽基，其中R2是苯基、萘基，或被1-3个选自C1-C6-烷基、C6-C10芳基、C1-C6-烷氧基和卤素的基团取代的苯基或萘基。14. 权利要求11的方法，其中R的杂芳基部分是含有1-3个选自氧、硫和氮的杂原子的5-或6-元羟基-取代的芳环。15. 权利要求14的方法，其中杂芳基部分选自羟基噻吩基、羟基呋喃基、羟基吡咯基、羟基咪唑基、羟基吡唑基、羟基噻唑基、羟基异噻唑基、羟基噁唑基、羟基异噁唑基、羟基三唑基、羟基噻二唑基、羟基噁二唑基、羟基四唑基、羟基吡啶基、羟基嘧啶基、羟基苯并噁唑基、羟基苯并噻唑基、羟基苯并咪唑基和羟基吲哚基。16. 权利要求14的方法，其中杂芳基部分被至多3个选自C1-C6-烷基、C1-C6-烷氧基、取代的C1-C6-烷基、卤素、C1-C6-烷硫基、芳基、芳硫基、芳氧基、C2-C6-烷氧羰基和C2-C6-烷酰基氨基的其它基团取代。17. 权利要求14的方法，其中杂芳基部分被苯并残基或萘并残基取代，所述残基被至多3个选自C1-C6-烷基、C1-C6-烷氧基、取代的C1-C6-烷基、卤素、C1-C6-烷硫基、芳基、芳硫基、芳氧基、C2-C6-烷氧羰基和C2-C6-烷酰基氨基的基团任选取代。18. 权利要求11的方法，其中羟基-4H-吡喃-4-酮-2-基具有1或2个选自C1-C6-烷基、取代的C1-C6-烷基、C6-C10芳基、取代的C6-C10芳基、C1-C6-烷氧基、卤素、羧基、氰基、C1-C6-烷酰氧基、C1-C6-烷硫基、C1-C6-烷基磺酰基、三氟甲基、羟基、C2-C6-烷氧羰基、C2-C6-烷酰基氨基、-O-R2、S-R2、-SO2-R2、-NHSO2R2和-NHCO2R2的取代基，其中R2是苯基、萘基，或被1-3个选自C1-C6-烷基、C6-C10芳基、C1-C6-烷氧基和卤素的基团取代的苯基或萘基，C4-C20羟基杂芳基中杂原子选自硫、氮和氧。19. 权利要求11的方法，其中R1是被1-3个选自C1-C6-烷氧基、氰基、C2-C6-烷氧羰基、C2-C6-烷酰氧基、羟基、芳基、杂芳基、巯基、硫醚、二硫戊环和卤素的基团任选取代的含有至多约22个碳原子的脂族烃。20. 权利要求11的方法，其中R是苯酚或羟基-4H-吡喃-4-酮-2-基。21. 权利要求11的方法，其中R是4-羟基苯基且R1是至少一个C1-C16直链烷基，或者其中R是5-羟基-4H-吡喃-4-酮-2-基且R1是至少一个C1-C16直链烷基和4-(1，2-二硫戊环-3-基)-1-丁基。22. 一种制备式1代表的酯化合物的方法：包括使式2代表的醇：与式5代表的酸酐：在酶的存在下反应；其中R选自C6-C20碳环羟基芳基、羟基-4H-吡喃-4-酮-2-基和C4-C20羟基杂芳基，其中杂原子选自硫、氮和氧；R1选自C1-C22烷基、C2-C22链烯基、C4-C22二烯基、C6-C22三烯基、C8-C22四烯基及其混合物；和R6选自C1-C22烷基、C2-C22链烯基、C4-C22二烯基、C6-C22三烯基、C8-C22四烯基及其混合物。23. 权利要求22的方法，其中醇与酸酐在酶和有机溶剂的存在下反应。24. 权利要求22的方法，其中R的芳基是被羟基和1-3个选自C1-C6-烷基、取代的C1-C6-烷基、C6-C10芳基、取代的C6-C10芳基、C1-C6-烷氧基、卤素、羧基、氰基、C1-C6-烷酰氧基、C1-C6-烷硫基、C1-C6-烷基磺酰基、三氟甲基、羟基、C2-C6-烷氧羰基、C2-C6-烷酰基氨基、-O-R2、S-R2、-SO2-R2、-NHSO2R2和-NHCO2R2的其它取代基取代的苯基、萘基或蒽基，其中R2是苯基、萘基，或被1-3个选自C1-C6-烷基、C6-C10芳基、C1-C6-烷氧基和卤素的基团取代的苯基或萘基。25. 权利要求22的方法，其中R的杂芳基部分是含有1-3个选自氧、硫和氮的杂原子的5-或6-元羟基-取代的芳环。26. 权利要求25的方法，其中杂芳基部分选自羟基噻吩基、羟基呋喃基、羟基吡咯基、羟基咪唑基、羟基吡唑基、羟基噻唑基、羟基异噻唑基、羟基噁唑基、羟基异噁唑基、羟基三唑基、羟基噻二唑基、羟基噁二唑基、羟基四唑基、羟基吡啶基、羟基嘧啶基、羟基苯并噁唑基、羟基苯并噻唑基、羟基苯并咪唑基和羟基吲哚基。27. 权利要求25的方法，其中杂芳基部分被至多3个选自C1-C6-烷基、C1-C6-烷氧基、取代的C1-C6-烷基、卤素、C1-C6-烷硫基、芳基、芳硫基、芳氧基、C2-C6-烷氧羰基和C2-C6-烷酰基氨基的其它基团取代。28. 权利要求25的方法，其中杂芳基部分被苯并残基或萘并残基取代，所述残基被至多3个选自C1-C6-烷基、C1-C6-烷氧基、取代的C1-C6-烷基、卤素、C1-C6-烷硫基、芳基、芳硫基、芳氧基、C2-C6-烷氧羰基和C2-C6-烷酰基氨基的基团任选取代。29. 权利要求22的方法，其中羟基-4H-吡喃-4-酮-2-基具有1或2个选自C1-C6-烷基、取代的C1-C6-烷基、C6-C10芳基、取代的C6-C10芳基、C1-C6-烷氧基、卤素、羧基、氰基、C1-C6-烷酰氧基、C1-C6-烷硫基、C1-C6-烷基磺酰基、三氟甲基、羟基、C2-C6-烷氧羰基、C2-C6-烷酰基氨基、-O-R2、S-R2、-SO2-R2、-NHSO2R2和-NHCO2R2的取代基，其中R2是苯基、萘基，或被1-3个选自C1-C6-烷基、C6-C10芳基、C1-C6-烷氧基和卤素的基团取代的苯基或萘基，C4-C20羟基杂芳基中杂原子选自硫、氮和氧。30. 权利要求22的方法，其中R1是被1-3个选自C1-C6-烷氧基、氰基、C2-C6-烷氧羰基、C2-C6-烷酰氧基、羟基、芳基、杂芳基、巯基、硫醚、二硫戊环和卤素的基团任选取代的含有至多约20个碳原子的脂族烃。31. 权利要求22的方法，其中R是苯酚或羟基-4H-吡喃-4-酮-2-基。32. 权利要求22的方法，其中R是4-羟基苯基且R1是至少一个C1-C16直链烷基，或其中R是5-羟基-4H-吡喃-4-酮-2-基且R1是至少一个C1-C16直链烷基和4-(1，2-二硫戊环-3-基)-1-丁基。33. 一种亮肤组合物，其包含由式1代表的酯化合物：美容学上可接受的载体，其中R选自C6-C20碳环羟基芳基、羟基-4H-吡喃-4-酮-2-基和C4-C20羟基杂芳基，其中杂原子选自硫、氮和氧；和R1选自C1-C22烷基、C2-C22链烯基、C4-C22二烯基、C6-C22三烯基、C8-C22四烯基及其混合物。
作为酪氨酸酶抑制剂的羟基苯甲基或羟基吡喃酮甲基酯 发明领域 本发明涉及以取代的羟基芳基或羟基吡喃酮甲醇的酯为基础的组合物，其减少黑色素形成。本发明另一方面涉及制备该组合物和酯的方法以及使用该组合物的方法。 发明背景 皮肤的过度色素沉着直接涉及黑色素形成，黑色素是酪氨酸形成的一种黑色色素。酪氨酸转化为黑色素的第一步由酪氨酸酶介导。有效的酪氨酸酶抑制剂可抑制黑色素形成，有助于减少不良的皮肤色素沉着(如提亮肤色、使肤色均匀或减少老年斑出现)。目前市场上有几种酪氨酸酶抑制剂，包括氢醌、曲酸和熊果苷。但是，这些产品每一种都有缺点。例如，曲酸的生物利用度低，所以功效差。又例如，氢醌被空气、光和酪氨酸酶本身氧化。氢醌的这些氧化产物涉及皮肤刺激，可能具有细胞毒性。 曲酸通常用作提亮肤色的成分。它是真菌代谢产物，已显示对于局部使用是安全和有效的(综述于Burdock等，2001，RegulatoryToxicology and Pharmacology 33：80-101)。也已描述曲酸的单酯和二酯(Nagai，S.；Izumi，T.，美国专利4,369,174)，具有优良的酪氨酸酶抑制活性以便抑制皮肤中黑色素形成。这种抑制对于提亮肤色可产生良好作用。 可用曲酸或4-羟基苯甲醇制备两种不同的单酯，因为母体分子具有烯醇(或酚)和伯醇。在高温条件下用化学方法制备报道于美国专利4,369,174的曲酸单酯，得到伯醇的酯。所用剧烈条件不适合对热不稳定的反应成分。已报道曲酸被酶酰化，特别是在烯醇氧上(Liu，K.-J.；Shaw，J.-F.J.Am.Oil Chem.Soc.1998，75，1507-1511)。在相反的报道中，日本专利申请(申请号2002-257704)指出在用酸或乙烯基酯作为酰化剂时曲酸在羟甲基氧上被酶酰化。 生物利用度和功效更高的抑制剂更有可能提供显著的亮肤优点且不刺激皮肤。其它可能的优点包括使用容易、存放期改善和使用频率降低。本发明的目的是提供此类化合物和组合物。 发明概述 本发明一个实施方案涉及制备式1代表的酯化合物的方法： 包括使式2代表的醇： 与式3代表的酸衍生物： 在酶的存在下和存在或不存在有机溶剂的情况下反应。R选自C6-C20碳环羟基芳基；取代的羟基-4H-吡喃-4-酮-2-基，其中取代基选自C1-C6-烷基、取代的C1-C6-烷基、C6-C10芳基、取代的C6-C10芳基、C1-C6-烷氧基、卤素、羧基、氰基、C1-C6-烷酰氧基、C1-C6-烷硫基、C1-C6-烷基磺酰基、三氟甲基、羟基、C2-C6-烷氧羰基、C2-C6-烷酰基氨基、-O-R2、S-R2、-SO2-R2、-NHSO2R2和-NHCO2R2，其中R2是苯基、萘基，或被1-3个选自C1-C6-烷基、C6-C10芳基、C1-C6-烷氧基和卤素的基团取代的苯基或萘基；和C4-C20羟基杂芳基，其中杂原子选自硫、氮和氧。R1选自C1-C22烷基、C2-C22链烯基、C4-C22二烯基、C6-C22三烯基、C8-C22四烯基及其混合物。而且，R4选自氢、C1-C4烷基和C2-C4链烯基。 另一个实施方案涉及制备式1代表的酯化合物的方法： 包括使式4代表的酯： 与式3的酸衍生物： 在酶的存在下和存在或不存在有机溶剂的情况下反应。R选自C6-C20碳环羟基芳基、羟基-4H-吡喃-4-酮-2-基和C4-C20羟基杂芳基，其中杂原子选自硫、氮和氧。R1选自C1-C22烷基、C2-C22链烯基、C4-C22二烯基、C6-C22三烯基、C8-C22四烯基及其混合物。而且，R4选自氢、C1-C4烷基和C2-C4链烯基，R5是氢或C1-C4烷基。 还有另一个实施方案涉及制备式1代表的酯化合物的方法： 包括使式2代表的醇： 与式5代表的酸酐： 在酶的存在下和存在或不存在有机溶剂的情况下反应。R选自C6-C20碳环羟基芳基、羟基-4H-吡喃-4-酮-2-基和C4-C20羟基杂芳基，其中杂原子选自硫、氮和氧；R1选自C1-C22烷基、C2-C22链烯基、C4-C22二烯基、C6-C22三烯基、C8-C22四烯基及其混合物。而且，R6选自C1-C22烷基、C2-C22链烯基、C4-C22二烯基、C6-C22三烯基、C8-C22四烯基及其混合物。 还有另一个实施方案涉及一种亮肤组合物，所述组合物包含式1代表的酯化合物： 美容学上可接受的载体。R选自C6-C20碳环羟基芳基、羟基-4H-吡喃-4-酮-2-基和C4-C20羟基杂芳基，其中杂原子选自硫、氮和氧，R1选自C1-C22烷基、C2-C22链烯基、C4-C22二烯基、C6-C22三烯基、C8-C22四烯基及其混合物。 详述 本发明一方面涉及制备曲酸和羟基苯甲醇单酯和相关材料的温和、简单和新的生物催化方法，其中在原氧(primary oxygen)而不是在烯醇氧处形成酯。这些化合物发挥非常有效的酪氨酸酶抑制剂的作用。 本发明一个实施方案涉及制备通式1代表的酯化合物的方法： 其中 R选自取代或未被取代的C6-C22碳环羟基芳基、取代的羟基-4H-吡喃-4-酮-2-基和取代或未被取代的C4-C20羟基杂芳基，其中杂原子选自硫、氮和氧；和 R1选自取代和未被取代、支链和直链饱和C1-C22烷基，取代和未被取代、支链和直链C2-C22链烯基，取代和未被取代、支链和直链C4-C22二烯基，取代和未被取代、支链和直链C6-C22三烯基，和取代和未被取代、支链和直链C8-C22四烯基或其混合物。 R可代表的芳基可包括苯基、萘基或蒽基以及被羟基和1-3个其它取代基取代的苯基、萘基或蒽基，所述其它取代基选自C1-C6-烷基、取代的C1-C6-烷基、C6-C10芳基、取代的C6-C10芳基、C1-C6-烷氧基、羟基、卤素、羧基、氰基、C1-C6-烷酰氧基、C1-C6-烷硫基、C1-C6-烷基磺酰基、三氟甲基、羟基、C2-C6-烷氧羰基、C2-C6-烷酰基氨基和-O-R2、S-R2、-SO2-R2、-NHSO2R2和-NHCO2R2，其中R2是苯基、萘基或被1-3个选自C1-C6-烷基、C6-C10芳基、C1-C6-烷氧基和卤素的基团取代的苯基或萘基。 R可代表的杂芳基包括含有1-3个选自氧、硫和氮的杂原子的5-或6-元羟基取代的芳环。此类杂芳基实例是羟基噻吩基、羟基呋喃基、羟基吡咯基、羟基咪唑基、羟基吡唑基、羟基噻唑基、羟基异噻唑基、羟基噁唑基、羟基异噁唑基、羟基三唑基、羟基噻二唑基、羟基噁二唑基、羟基四唑基、羟基吡啶基、羟基嘧啶基、羟基苯并噁唑基、羟基苯并噻唑基、羟基苯并咪唑基、羟基吲哚基等。杂芳基可被例如至多3个其它基团如C1-C6-烷基、C1-C6-烷氧基、取代的C1-C6-烷基、羟基、卤素、C1-C6-烷硫基、芳基、芳硫基、芳氧基、C2-C6-烷氧羰基和C2-C6-烷酰基氨基取代。杂芳基还可以被稠环系统如苯并或萘并残基取代，所述稠环系统可以未被取代或被例如至多3个前一句列出的基团取代。 术语“卤素”用于包括氟、氯、溴和碘。 R1可代表的烷基、链烯基、二烯基、三烯基和四烯基可以是直链或支链脂族烃基，含有至多约20个碳原子，可被例如1-3个选自C1-C6-烷氧基、氰基、C2-C6-烷氧羰基、C2-C6-烷酰氧基、羟基、芳基、杂芳基、巯基、硫醚、二硫戊环和卤素的基团取代。术语“C1-C6-烷氧基”、“C2-C6-烷氧羰基”和“C2-C6-烷酰氧基”分别用于指对应于结构-OR3、-CO2R3和-OCOR3的基团，其中R3是C1-C6-烷基或取代的C1-C6-烷基。 目前优选式1的本发明化合物，其中R选自苯酚和取代的羟基-4H-吡喃-4-酮-2-基。特别优选其中R是4-羟基苯基且R1选自C1-C16直链烷基的结构1化合物，和其中R是5-羟基-4H-吡喃-4-酮-2-基且R1选自C1-C16直链烷基和4-(1，2-二硫戊环-3-基)-1-丁基的结构1化合物。 该过程包括醇2： 与式3的酸衍生物： 在酶的存在下和存在或不存在有机溶剂的情况下反应以形成所需酯1，其中醇2的取代基R和酸衍生物3的R1如上文限定，酸衍生物的取代基R2选自氢、C1-C4取代或未被取代的烷基和C2-C4链烯基。C1-C4烷基实例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基等。C2-C4链烯基实例包括乙烯基、1-丙烯基、1-异丙烯基、1-丁烯基等。优选取代基R4包括氢、甲基、乙基和乙烯基，最优选氢和乙烯基。 该过程可在无其它溶剂情况下或任选在惰性溶剂中进行，所述惰性溶剂选自环状或非环状醚溶剂如乙醚、二异丙醚、叔丁基甲基醚或四氢呋喃，芳族烃如苯、甲苯或二甲苯，脂族或脂环族饱和或不饱和烃如己烷、庚烷、环己烷或柠檬烯，卤化烃如二氯甲烷、二氯乙烷、二溴乙烷、四氯乙烯或氯苯，极性疏质子溶剂如乙腈、二甲基甲酰胺或二甲基亚砜，或其混合物。优选溶剂是甲苯和乙腈。该过程可在约-100℃至溶剂沸点的温度下进行，优选约0-70℃，最优选20-60℃。基于2计，酸衍生物3的量可为0.85-20当量，优选1-10当量。用于该过程的酶选自蛋白酶、脂酶或酯酶。优选酶是脂酶。这些脂酶可呈完整细胞、分离的天然酶或固定在支持物上的形式。这些脂酶的实例包括但不限于Lipase PS(来自假单胞菌属)、Lipase PS-C(来自固定在陶瓷上的假单胞菌属)、Lipase PS-D(来自固定在硅藻土上的假单胞菌属)、Lipoprime 50T、Lipozyme TL IM或Novozym 435(来自固定在丙烯酸树脂上的南极假丝酵母(candida antarctica))。 该过程可任选在选自分子筛或离子交换树脂的各种附加物的存在下进行。特别优选分子筛，因为存在这些材料可汽提副产物如反应时产生的水或低级链醇。这些实例包括3A、4A和5A分子筛。 可用本领域技术人员已知的方法如提取、过滤或结晶分离该过程的产物。如果需要，可用本领域技术人员已知的方法如提取、层析、蒸馏或结晶纯化产物1。 本发明另一个实施方案涉及将酯4： 用式3的酸衍生物： 在酶的存在下和存在或不存在有机溶剂的情况下进行酯交换以形成所需酯1，其中酯4的取代基R和酸衍生物3的R1和R4如上文限定，酯4的取代基R5选自氢和C1-C4取代或未被取代的烷基。C1-C4烷基实例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基等。优选取代基R5包括氢、甲基和乙基。 该过程可在无其它溶剂情况下或任选在惰性溶剂中进行，所述惰性溶剂选自环状或非环状醚溶剂如乙醚、二异丙醚、叔丁基甲基醚或四氢呋喃，芳族烃如苯、甲苯或二甲苯，脂族或脂环族饱和或不饱和烃如己烷、庚烷、环己烷或柠檬烯，卤化烃如二氯甲烷、二氯乙烷、二溴乙烷、四氯乙烯或氯苯，极性疏质子溶剂如乙腈、二甲基甲酰胺或二甲基亚砜，或其混合物。优选溶剂是甲苯和乙腈。该过程可在约-100℃至溶剂沸点的温度下进行，优选约0-70℃，最优选20-60℃。基于4计，酸衍生物3的量可为0.85-20当量，优选1-10当量。用于该过程的酶选自蛋白酶、脂酶或酯酶。优选酶是脂酶。这些脂酶可呈完整细胞、分离的天然酶或固定在支持物上的形式。这些脂酶的实例包括但不限于Lipase PS(来自假单胞菌属)、Lipase PS-C(来自固定在陶瓷上的假单胞菌属)、Lipase PS-D(来自固定在硅藻土上的假单胞菌属)、Lipoprime 50T、Lipozyme TL IM或Novozym 435(来自固定在丙烯酸树脂上的南极假丝酵母)。 该过程可任选在选自分子筛或离子交换树脂的各种附加物的存在下进行。特别优选离子交换树脂。这些树脂的实例是AmberliteR或AmberlystR弱碱性树脂，如Amberlite IRA-95、Amberlite IRA-94和Amberlyst A-21，但任何弱碱性树脂都可被接受。 可用本领域技术人员已知的方法如提取、过滤或结晶分离该过程的产物。如果需要，可用本领域技术人员已知的方法如提取、层析、蒸馏或结晶纯化产物1。 本发明另一个实施方案涉及醇2： 与式5的酸酐： 在酶的存在下和存在或不存在有机溶剂的情况下反应以形成所需酯1，其中醇2的取代基R和酸酐5的R1如上文限定，酸酐的取代基R6选自取代和未被取代、支链和直链饱和C1-C22烷基，取代和未被取代、支链和直链C2-C22链烯基，取代和未被取代、支链和直链C4-C22二烯基，取代和未被取代、支链和直链C6-C22三烯基，以及取代和未被取代、支链和直链C8-C22四烯基或其混合物。优选酸酐包括其中R1和R6相同的酸酐。 该过程可在无其它溶剂情况下或任选在惰性溶剂中进行，所述惰性溶剂选自环状或非环状醚溶剂如乙醚、二异丙醚、叔丁基甲基醚或四氢呋喃，芳族烃如苯、甲苯或二甲苯，脂族或脂环族饱和或不饱和烃如己烷、庚烷、环己烷或柠檬烯，卤化烃如二氯甲烷、二氯乙烷、二溴乙烷、四氯乙烯或氯苯，极性疏质子溶剂如乙腈、二甲基甲酰胺或其混合物。优选溶剂是甲苯和乙腈。该过程可在约-100℃至溶剂沸点的温度下进行，优选约0-70℃，最优选20-60℃。基于2计，酸酐的量可为0.85-20当量，优选1-5当量。用于该过程的酶选自蛋白酶、脂酶或酯酶。优选酶是脂酶。这些脂酶可呈完整细胞、分离的天然酶或固定在支持物上的形式。这些脂酶的实例包括但不限于Lipase PS(来自假单胞菌属)、Lipase PS-C(来自固定在陶瓷上的假单胞菌属)、Lipase PS-D(来自固定在硅藻土上的假单胞菌属)、Lipoprime 50T、Lipozyme TL IM或Novozym 435(来自固定在丙烯酸树脂上的南极假丝酵母)。 可用本领域技术人员已知的方法如提取、过滤或结晶分离该过程的产物。如果需要，可用本领域技术人员已知的方法如提取、层析、蒸馏或结晶纯化产物1。 在哺乳动物皮肤中酪氨酸生物合成为黑色素的早期步骤由酪氨酸酶催化。抑制酪氨酸酶的化合物有效减少皮肤色素沉着。通过在体外测定中测量抑制酪氨酸酶的活性可以非常有效地预测化合物减少皮肤色素沉着的能力。将纯化的酪氨酸酶(通常来自蘑菇)在酪氨酸酶底物(L-DOPA)和各种浓度待测化合物的存在下培养。将测试化合物的浓度依赖活性测量为L-DOPA的酪氨酸酶催化氧化(一种比色反应)的抑制程度。测试亮肤化合物活性的其它方法包括：使培养的初级或无限增殖化黑素细胞培养物(通常源自鼠或人)暴露于化合物，测量黑色素生成；暴露含有共培养的黑素细胞、角化细胞和/或成纤维细胞的重建皮肤模型；或将化合物涂在哺乳动物受试者的皮肤上，同时监测随着时间推移表面颜色或反射的改变(如Virador等，AnalyticalBiochemistry 1999，270，207；Boissy等，Experimental Dematology 2005，14，601)。 酪氨酸酶抑制测定是被广泛接受用于测量测试化合物潜在亮肤活性的方法(如Um等，Bioorganic & Medicinal Chemistr 2003，11，5345)。本发明的酯显示抑制酪氨酸酶的强大能力。 本发明的代表性亮肤组合物包含至少0.0001％重量的本发明的酯。例如，组合物可包含约0.0001％-约10.0％重量或约0.001％-约2.0％重量的本发明的酯。对于不很明显的色素沉着过度情况和在亮肤处理后所用的遮光剂和防晒剂中可使用较低浓度，更严重的色素沉着情况可使用较高浓度。推荐范围还取决于用于组合物中的任何附加成分和使用者的肤色和皮肤类型以及色素沉着过度问题的严重程度。 除了酯以外，本发明的亮肤组合物还可包含其它亮肤成分。本领域技术人员已知此类其它成分。 通常，用载体辅助完成对皮肤部位的局部用药。当使用载体时，载体对活性或辅助成分不产生灭活或氧化作用，对用药皮肤区域不产生任何不良反应，因而是惰性的。例如，将本发明化合物与皮肤病学上可接受的载体或溶媒混合物(如作为洗剂、霜剂、软膏剂、皂、棒等)用药，以促进局部用药，在一些情况下提供可能产生的其它有利作用，如增加受累皮肤区域的水分。本领域已知许多制剂，包括洗剂，所述洗剂含有油和/或醇和软化剂如橄榄油、烃油和蜡、硅酮油、其它植物、动物或海产品脂肪或油、甘油酯衍生物、脂肪酸或脂肪酸酯或醇或醇醚、卵磷脂、羊毛脂和衍生物、多元醇或酯、蜡酯、甾醇、磷脂等，通常还包含乳化剂(非离子、阳离子或阴离子)，而一些软化剂内在固有乳化特性。通过使用不同比例的成分和/或通过加入增稠剂如胶或其它形式的亲水胶体，可将这些相同的通用成分配制成霜剂而非洗剂，或配制成凝胶剂或配制成固体棒。 实施例 通过下列实施例进一步解释本发明提供的方法。 实施例1 制备5-羟基-4H-吡喃-4-酮-2-甲基乙酸酯(1a) 使2-羟基甲基-5-羟基-4H-吡喃-4-酮(2a；500mg；3.52mmol)在10mL乙腈中浆化。加入乙酸乙烯酯(324uL；3.52mmol；1.0equiv)，接着加入120mg Novozyme 435。将混合物加热至50℃6小时，此时tlc分析提示明显转化为1a。加入另外0.2当量乙酸乙烯酯，将混合物加热过夜以得到小量残留物2a。加入另外0.2当量乙酸乙烯酯，将混合物在50℃加热12小时直至tlc分析显示完全消耗2a。将混合物过滤，同时加温以除去酶，汽提(strip)滤液以得到0.64g(99％)1a。该化合物是有效的酪氨酸酶抑制剂(EC50 0.0049mM)，明显优于2a(EC50 0.015mM)(见表1)。 1H NMR(DMSO-d6)δ9.24(br s，1H)；8.08(s，1H)；6.47(s，1H)；4.93(s，2H)；2.10(s，3H). 比较实施例1 制备2-羟基甲基-4H-吡喃-4-酮-5-基乙酸酯(6a) 使2-羟基甲基-5-羟基-4H-吡喃-4-酮(2a；1.00g；7.04mmol)在30mL二氯甲烷中浆化。加入三乙胺(1.47mL；10.6mmol；1.5equiv)，然后滴加乙酸酐(0.69mL；7.04mmol；1.0equiv)。30分钟后不均匀混合物变均匀，将其搅拌过夜以便tlc分析(乙酸乙酯洗脱剂)得到中间极性的主斑点和非极性斑点。将反应混合物浓缩，用快速硅胶垫过滤，用4∶1乙酸乙酯∶庚烷至100％乙酸乙酯的溶剂梯度洗脱。收集中间斑点的中间部分(center cut)，得到415mg(32％)6a。该化合物是功效明显低于2a(EC50 0.015mM)的酪氨酸酶抑制剂(EC50 0.084mM)(见表1)。 1H NMR(DMSO-d6)δ8.46(s，1H)；6.42(s，1H)；5.77(br s，1H)；4.34(br s，2H)；2.25(s，3H). 实施例2 制备5-羟基-4H-吡喃-4-酮-2-甲基丙酸酯(1b) 将Novozyme 435(120mg)和干燥的4A分子筛(1g)加入50-mL烧瓶内。加入2-羟基甲基-5-羟基-4H-吡喃-4-酮(2a；500mg；3.52mmol)，用10mL乙腈洗入。加入丙酸(525uL；7.04mmol；2equiv)，将混合物加热至50℃过夜，此时tlc分析(乙酸乙酯洗脱剂)提示转化为1b。过滤反应混合物，减压浓缩滤液。将粗产物用快速硅胶垫过滤，用4∶1乙酸乙酯∶庚烷洗脱得到285mg(41％)1b。该化合物是有效的酪氨酸酶抑制剂(EC50 0.0046mM)，明显优于2a(EC50 0.015mM)(见表1)。 1H NMR(DMSO-d6)δ9.25(br s，1H)；8.09(s，1H)；6.46(s，1H)；4.95(s，2H)；2.42(q，2H，J＝7.42Hz)；1.04(t，3H，J＝7.42Hz). 实施例3 用丙酸酐通过酶促酯化制备5-羟基-4H-吡喃-4-酮-2-甲基丙酸酯(1b) 使2-羟基甲基-5-羟基-4H-吡喃-4-酮(2a；500mg；3.52mmol)在10mL乙腈中浆化，加入丙酸酐(0.54mL；4.2mmol；1.2equiv)。加入Novozyme 435(120mg)，将混合物在环境温度下搅拌5.5小时，直至HPLC和tlc分析(乙酸乙酯洗脱剂)显示将2a几乎全部转化为1b。过滤反应混合物，减压浓缩滤液。使粗产物溶于乙酸乙酯中，用庚烷稀释得到沉淀物，将其收集，用庚烷洗涤，干燥。将该滤液浓缩至干，将所得固体用庚烷研磨，过滤，用庚烷洗涤，干燥。1H NMR分析显示合并的固体(576mg；83％)是纯的1b。 比较实施例2 制备2-羟基甲基-4H-吡喃-4-酮-5-基丙酸酯(6b) 使2-羟基甲基-5-羟基-4H-吡喃-4-酮(2a；852mg；6.00mmol)在30mL二氯甲烷中浆化。加入三乙胺(1.25mL；9.0mmol；1.5equiv)，然后在环境温度下滴加丙酸酐(0.77mL；6.0mmol；1.0equiv)。1分钟内反应混合物变均匀，搅拌过夜以得到tlc(乙酸乙酯洗脱剂)显示的一个主斑点。汽提挥发物，将残留物用乙酸乙酯稀释，用1M HCl(15mL)和饱和碳酸氢钠(15mL)洗涤。将有机溶液用硫酸镁干燥并浓缩以得到0.92g粗产物。粗产物的1H NMR分析提示小量2a、小量2a的二丙酸酯(7b)和90∶10的6b∶1b。将混合物用快速硅胶垫过滤，用1∶1乙酸乙酯∶庚烷至4∶1乙酸乙酯∶庚烷洗脱以得到476mg(40％)6b。该化合物是功效明显不如2a(EC50 0.015mM)的酪氨酸酶抑制剂(EC50 0.10mM)(参阅表1)。 1H NMR(DMSO-d6)δ8.46(s，1H)；6.42(t，1H，J＝0.82Hz)；5.76(t，1H，J＝6.05Hz)；4.34(dd，2H；J＝0.82，6.05Hz)；2.58(q，2H，J＝7.42Hz)；1.11(t，3H，J＝7.42Hz). 比较实施例3 制备2-丙酰氧基甲基-4H-吡喃-4-酮-5-基丙酸酯(7b) 使2-羟基甲基-5-羟基-4H-吡喃-4-酮(2a；852mg；6.00mmol)在30mL二氯甲烷中浆化。加入三乙胺(2.51mL；18.0mmol；3equiv)，然后在环境温度下滴加丙酸酐(1.69mL；13.2mmol；2.2equiv)。1分钟内反应混合物变均匀，将其搅拌过夜以得到tlc(乙酸乙酯洗脱剂)的一个主斑点。汽提挥发物，将残留物用乙酸乙酯稀释，用1M HCl(15mL)和饱和碳酸氢钠(15mL)洗涤。将有机溶液用硫酸镁干燥并浓缩以得到2.30g粗产物，将其用快速硅胶垫过滤，用1∶1乙酸乙酯∶庚烷洗脱以得到1.39g(97％)7b。该化合物是功效明显不如2a(EC50 0.015mM)的酪氨酸酶抑制剂(EC50 0.097mM)(参阅表1)。 1H NMR(DMSO-d6)δ8.52(s，1H)；6.59(s，1H)；5.01(s，1H)；2.59(q，2H；J＝7.42Hz)；2.44(q，2H，J＝7.42Hz)；1.11(t，3H，J＝7.42Hz)；1.05(t，3H，J＝7.42Hz). 实施例4 用己酸酐通过酶促酯化制备5-羟基-4H-吡喃-4-酮-2-甲基己酸酯(1c) 使2-羟基甲基-5-羟基-4H-吡喃-4-酮(2a；500mg；3.52mmol)在10mL乙腈中浆化，加入己酸酐(0.81mL；3.52mmol；1.0equiv)。加入Novozyme 435(120mg)，将混合物在环境温度下搅拌过夜以便HPLC分析显示85％2a转化为1c。加入另外的己酸酐(0.12mL；0.53mmol；0.15equiv)，将混合物搅拌过夜以便98％2a转化为1c。过滤反应混合物，在环境温度下减压浓缩滤液。使残留物溶于乙酸乙酯中，用水(10mL)和饱和碳酸氢钠水溶液(3×10mL)洗涤。将有机溶液用硫酸镁干燥并浓缩以得到1c(761mg；90％)，为灰白色固体。该化合物是非常有效的酪氨酸酶抑制剂(EC50 0.00098mM)，明显优于2a(EC50 0.015mM)(见表1)。 1H NMR(DMSO-d6)δ9.25(br s，1H)；8.08(s，1H)；6.45(s，1H)；4.95(s，2H)；2.39(t，2H，J＝7.42Hz)；1.59-1.49(m，2H)；1.31-1.20(m，4H)；0.85(m，3H). 实施例5 制备5-羟基-4H-吡喃-4-酮-2-甲基辛酸酯(1d) 将Novozyme 435(500mg；50wt％)和干燥的4A分子筛(2g；2wtequiv)加入烧瓶内。加入2-羟基甲基-5-羟基-4H-吡喃-4-酮(2a；1.00g；7.04mmol)，用20mL乙腈洗入。加入辛酸(2.23mL；14.07mmol；2equiv)，将混合物加热至50℃过夜，此时tlc分析(乙酸乙酯洗脱剂)提示转化为1d。过滤反应混合物，减压浓缩滤液。使粗产物溶于乙酸乙酯中，用水(10mL)、饱和碳酸氢钠(2×10mL)洗涤，用硫酸镁干燥，浓缩得到1.81g无色油状物。使该油状物溶于庚烷中，浓缩得到蜡状固体。将固体用庚烷研磨，过滤，用庚烷洗涤，干燥得到0.79g(42％)1d。该化合物是非常有效的酪氨酸酶抑制剂(EC50 0.00039mM)，明显优于2a(EC50 0.015mM)(见表1)。 1H NMR(DMSO-d6)δ9.24(br s，1H)；8.07(s，1H)；6.45(s，1H)；4.95(s，2H)；2.390(t，2H，J＝7.15Hz)；1.53(m，2H)；1.24(m，8H)；0.85(m，3H). 实施例6 用辛酸酐通过酶促酯化制备5-羟基-4H-吡喃-4-酮-2-甲基辛酸酯(1d) 使2-羟基甲基-5-羟基-4H-吡喃-4-酮(2a；1.04g；7.32mmol)在20mL乙腈中浆化，加入辛酸酐(2.90g；8.05mmol；1.1equiv)。加入Novozyme 435(0.33g)，将混合物在环境温度下搅拌12小时直至HPLC分析显示完全消耗2a。过滤反应混合物，在环境温度下减压浓缩滤液。使残留物溶于庚烷中，用水∶饱和碳酸氢钠水溶液∶甲醇的1∶1∶1混合物(3×30mL)洗涤。将有机溶液用硫酸镁干燥，浓缩，用快速硅胶垫过滤，用2∶1乙酸乙酯∶庚烷洗脱以得到1.91g 1d和辛酸的混合物。通过冷却至环境温度使该材料从最小体积的热庚烷中再结晶，得到1.38g(70％)1d。 比较实施例4 制备2-羟基甲基-4H-吡喃-4-酮-5-基辛酸酯(6d) 使2-氯代-1-甲基碘化吡啶鎓(1.84g；7.19mmol；1.2equiv)和辛酸(0.95mL；6.00mmol；1.0equiv)在10mL二氯甲烷中浆化。加入三乙胺(2.01mL；14.39mmol；2.4equiv)，将混合物在环境温度下搅拌15分钟。加入2-羟基甲基-5-羟基-4H-吡喃-4-酮(2a；852mg；6.00mmol)，用5mL二氯甲烷洗入。大约30分钟后混合物从黄色褪色为黄褐色浆状物。将反应混合物在环境温度下搅拌过夜以便tlc(3∶2乙酸乙酯∶庚烷)显示一个主斑点和一个次斑点。过滤该混合物，用二氯甲烷洗涤沉淀物。浓缩合并的滤液，将残留物用快速硅胶垫过滤，用3∶2至4∶1乙酸乙酯∶庚烷的溶剂梯度洗脱以得到864mg(54％)6d。该化合物是功效明显不如2a(EC50 0.015mM)的酪氨酸酶抑制剂(EC50 0.18mM)(见表1)。 1H NMR(DMSO-d6)δ8.45(s，1H)；6.42(s，1H)；5.76(t，1H，J＝6.05Hz)；4.34(d，2H，J＝5.50Hz)；2.54(t，2H，J＝7.15Hz)；1.65-1.55(m，2H)；1.38-1.25(m，8H)；0.86(t，3H，J＝6.60Hz). 比较实施例5 制备2-辛酰氧基甲基-4H-吡喃-4-酮-5-基辛酸酯(7d) 使2-氯代-1-甲基碘化吡啶鎓(2.16g；8.44mmol；2.4equiv)和辛酸(1.28mL；8.44mmol；2.4equiv)在10mL二氯甲烷中浆化。加入三乙胺(2.35mL；16.9mmol；4.8equiv)，将混合物在环境温度下搅拌15分钟。加入2-羟基甲基-5-羟基-4H-吡喃-4-酮(2a；500mg；3.52mmol)，用5mL二氯甲烷洗入。混合物最初变成几乎均匀的黄色溶液，然后用约30分钟变成黄褐色浆状物。将反应混合物在环境温度下搅拌过夜以便tlc(3∶2乙酸乙酯∶庚烷)显示单斑点。过滤该混合物，将沉淀物用二氯甲烷洗涤。浓缩合并的滤液，将残留物用快速硅胶垫过滤，用2∶1乙酸乙酯∶庚烷洗脱以得到1.07g(83％)7d。该化合物是微弱的酪氨酸酶抑制剂(EC50＞1.0mM)(见表1)。 1H NMR(DMSO-d6)δ8.51(s，1H)；6.57(s，1H)；5.00(s，2H)；2.55(t，2H，J＝7.42Hz)；2.41(t，2H，J＝7.42Hz)；1.62-1.49(m，4H)；1.30-1.25(m，16H)；0.88-0.83(m，6H). 实施例7 制备5-羟基-4H-吡喃-4-酮-2-甲基硫辛酸酯(1e) 将Novozyme 435(400mg；80wt％)和干燥的4A分子筛(1g；2wtequiv)加入烧瓶内。加入2-羟基甲基-5-羟基-4H-吡喃-4-酮(2a；500mg；3.52mmol)，用10mL乙腈洗入。加入硫辛酸(1.0g；4.85mmol；1.38equiv)，将混合物加热至50℃过夜，此时tlc分析(乙酸乙酯洗脱剂)提示转化为1e。过滤反应混合物，减压浓缩滤液。使粗产物溶于乙酸乙酯中，用饱和碳酸氢钠(2×10mL)洗涤，用硫酸镁干燥，浓缩。将粗产物用快速硅胶垫过滤，用4∶1乙酸乙酯∶庚烷洗脱以得到350mg(30％)1e。该化合物是非常有效的酪氨酸酶抑制剂(EC50 0.00093mM)，明显优于2a(EC50 0.015mM)(见表1)。 1H NMR(DMSO-d6)δ9.20(br s，1H)；8.08(s，1H)；6.46(s，1H)；4.95(s，2H)；3.65-3.56(m，1H)；3.23-3.06(m，2H)；2.46-2.35(m，1H)；2.21(t，2H，J＝7.15Hz)；1.92-1.80(m，1H)；1.68-1.46(m，4H)；1.42-1.32(m，2H). 实施例8 制备4-羟基苯甲基乙酸酯(1f) 使4-羟基苯甲醇(2b)(3.5g；28.2mmol)在20mL乙腈中浆化。先后加入乙酸乙烯酯(3.64mL；39.5mmol；1.4equiv)和Novozyme 435(500mg；14wt％)。将反应混合物在环境温度下搅拌6小时，此时tlc分析(1∶1乙酸乙酯∶庚烷洗脱剂)提示没有2b，有大的单个非极性斑点。过滤反应混合物，减压浓缩滤液以得到4.67g(99％)1f。该化合物是酪氨酸酶抑制剂(EC50 0.038mM)，比2b(EC50 0.19mM)更有效(见表1)。 1H NMR(DMSO-d6)δ9.6(br s，1H)；7.17(m，2H)；6.74(m，2H)；4.93(s，2H)；2.01(s，3H). 比较实施例6 制备4-乙酰氧基苯甲醇(6f) 使4-羟基苯甲醇(2b)(500mg；4.03mmol)在15mL二氯甲烷中浆化。加入三乙胺(0.84mL；6.04mmol；1.5equiv)，然后滴加乙酸酐(0.39mL；4.03mmol；1.0equiv)。30分钟后不均匀的混合物变均匀，将其在环境温度下搅拌过夜以便tlc分析(1∶1乙酸乙酯∶庚烷)显示部分转化为6f。浓缩反应混合物，将残留物用快速硅胶垫过滤，用3∶2庚烷∶乙酸乙酯洗脱以得到390mg(58％)6f。该化合物是功效不如2b(EC50 0.19mM)的酪氨酸酶抑制剂(EC50 0.92mM)(见表1)。 1H NMR(DMSO-d6)δ7.34(d，2H，J＝7.97Hz)；7.06(m，2H)；5.215(t，1H，J＝5.77Hz)；4.49(d，2H，J＝5.77Hz)；2.26(s，3H). 实施例9 制备4-羟基苯甲基丙酸酯(1g) 使4-羟基苯甲醇(2b)(530mg；4.27mmol)溶于14mL乙腈中。加入丙酸(2.0mL；26.8mmol；6.3equiv)，加入Novozyme 435(625mg；1.17wt equiv)和干燥的4A分子筛(900mg；1.7wt equiv)。将反应混合物搅拌和加热至50℃过夜，此时HPLC分析提示约30％转化为1g。过滤反应混合物，将沉淀物用乙腈和甲苯洗涤。浓缩合并的滤液/洗涤液，使残留物溶于乙酸乙酯中，用饱和碳酸氢钠(10mL)洗涤。将有机溶液用硫酸镁干燥并浓缩，将残留物用快速硅胶垫过滤，用1∶4乙酸乙酯∶庚烷洗脱以得到185mg(24％)1g，为无色油状物。该化合物是有效的酪氨酸酶抑制剂(EC50 0.017mM)，明显优于2b(EC50 0.19mM)(见表1)。 1H NMR(DMSO-d6)δ9.50(s，1H)；7.17(d，2H，J＝8.25Hz)；6.74(d，2H，J＝7.97Hz)；4.94(s，2H)；2.31(2H，q，J＝7.42Hz)；1.02(t，3H，J＝7.42Hz). 实施例10 用丙酸酐通过酶促酯化制备4-羟基苯甲基丙酸酯(1g) 使4-羟基苯甲醇(2b)(5.00g；40.3mmol)溶于100mL乙腈中。先后加入丙酸酐(6.20mL；48.3mmol；1.2equiv)和Novozyme 435(0.25g)。将混合物在环境温度下搅拌18小时直至HPLC分析显示2b几乎全部转化为1g。过滤混合物，在环境温度下减压浓缩滤液。使残留物溶于乙酸乙酯中，用饱和碳酸氢钠水溶液(2×25mL)洗涤。将有机溶液用硫酸镁干燥并浓缩，用快速硅胶垫过滤粗产物以得到1h(5.84g；80％)，为无色油状物。 比较实施例7 制备4-丙酰氧基苯甲醇(6g) 使4-羟基苯甲醇(2b)(500mg；4.03mmol)在15mL二氯甲烷中浆化。加入三乙胺(0.84mL；6.04mmol；1.5equiv)，然后滴加丙酸酐(0.52mL；4.03mmol；1.0equiv)，在1分钟内不均匀的混合物变均匀。将反应混合物在室温下搅拌过夜，以便tlc分析(1∶1乙酸乙酯∶庚烷)显示一个主斑点和一个次斑点。浓缩混合物，将残留物用快速硅胶垫过滤，用3∶2庚烷∶乙酸乙酯洗脱以得到442mg(61％)6g。该化合物是功效不如2b(EC50 0.19mM)的酪氨酸酶抑制剂(EC50 1.01mM)(见表1)。 1H NMR(DMSO-d6)δ7.34(m，2H)；7.06(m，2H)；5.22(br t，1H)；4.49(d，2H，J＝4.94Hz)；2.59(2H，q，J＝7.42Hz)；1.13(t，3H，J＝7.42Hz). 比较实施例8 制备4-丙酰氧基苯甲基丙酸酯(7g) 使4-羟基苯甲醇(2b)(500mg；4.03mmol)在15mL二氯甲烷中浆化。加入三乙胺(1.40mL；10.1mmol；2.5equiv)，然后滴加丙酸酐(1.14mL；8.9mmol；2.2equiv)。15分钟后不均匀的混合物变均匀，将其在环境温度下搅拌过夜以便tlc分析(1∶1乙酸乙酯∶庚烷)显示单个非极性斑点。浓缩反应混合物，使残留物溶于乙酸乙酯中。将有机溶液用1.5M HCl(20mL)和饱和碳酸氢钠(10mL)洗涤，用硫酸镁干燥。浓缩该有机溶液得到923mg(97％)7g。该化合物是微弱的酪氨酸酶抑制剂(EC50＞10mM)(见表1)。 1H NMR(DMSO-d6)δ7.40(m，2H)；7.12(m，2H)；5.08(s，2H)；2.60(q，2H，J＝7.42Hz)；2.37(q，2H，J＝7.42Hz)；1.13(t，3H，J＝7.42Hz)；1.04(t，3H，J＝7.42Hz). 实施例11 用己酸酐通过酶促酯化制备4-羟基苯甲基己酸酯(1h) 使4-羟基苯甲醇(2b)(500mg；4.03mmol)溶于10mL乙腈中。先后加入己酸酐(1.12mL；4.83mmol；1.2equiv)和Novozyme 435(120mg)。将混合物在环境温度下搅拌7.5小时直至HPLC分析显示2b几乎全部转化为1h。过滤混合物，在环境温度下减压浓缩滤液。使残留物溶于乙酸乙酯中，用饱和碳酸氢钠水溶液(3×10mL)洗涤。将有机溶液用硫酸镁干燥并浓缩以得到1h(832mg；93％)，为无色油状物。该化合物是有效的酪氨酸酶抑制剂(EC50 0.049mM)，是优于2b(EC500.19mM)的抑制剂(见表1)。 1H NMR(DMSO-d6)δ9.49(s，1H)；7.17-7.14(m，2H)；6.76-6.71(m，2H)；4.94(s，2H)；2.28(t，2H，J＝7.42Hz)；1.56-1.46(m，2H)；1.31-1.21(m，4H)；0.83(m，3H). 实施例12 制备4-羟基苯甲基辛酸酯(1i) 使4-羟基苯甲醇(2b)(250mg；2.02mmol)溶于5mL乙腈中。加入辛酸(500uL；3.3mmol；1.63equiv)，接着加入Novozyme 435(200mg；80wt％)和4A分子筛(500mg；2wt equiv)。将混合物搅拌和加热至50℃过夜。使混合物冷却至环境温度，过滤，用乙腈洗涤沉淀物。浓缩合并的滤液，使残留物溶于乙酸乙酯中，用饱和碳酸氢钠(2×10mL)洗涤。将有机溶液干燥(硫酸镁)和浓缩，将粗产物用快速硅胶垫过滤，用1∶4乙酸乙酯∶庚烷洗脱以得到包含一些残留辛酸的960mg 1i。 1H NMR(DMSO-d6)δ9.48(br s，1H)；7.18-7.13(m，2H)；6.75-6.71(m，2H)；4.94(s，2H)；2.28(t，2H，J＝7.42Hz)；1.51(m，2H)；1.22(m，8H)；0.84(m，3H). 实施例13 通过酯交换制备4-羟基苯甲基辛酸酯(1i) 使4-羟基苯甲基乙酸酯(1f)(83mg；0.50mmol)溶于1.5mL甲苯中。先后加入辛酸(158uL；1.0mmol；2.0equiv)和Novozyme 435(60mg)。将混合物在环境温度下搅拌过夜，此时HPLC分析提示58.1％转化为1i(还检测到40.4％1f和1.4％4-羟基苯甲醇)。 实施例14 在Amberlyst A-21的存在下通过酯交换制备4-羟基苯甲基辛酸酯(1i) 将4-羟基苯甲基乙酸酯(1f)(83mg；0.50mmol)和干燥的Amberlyst A-21(83mg；1wt equiv)合并在1.5mL甲苯中。先后加入辛酸(158uL；1.0mmol；2.0equiv)和Novozyme 435(60mg)。将混合物在环境温度下搅拌过夜，此时HPLC分析提示88.2％转化为1i(还检测到11.1％1f和0.8％4-羟基苯甲醇)。 实施例15 制备4-羟基苯甲基硫辛酸酯(1j) 使4-羟基苯甲醇(2b)(520mg；4.19mmol；1.24equiv)溶于10mL乙腈中。加入硫辛酸(0.70g；3.39mmol)，接着加入Novozyme 435(150mg)和4A分子筛(1g)。将混合物在环境温度下搅拌过夜。使混合物冷却至环境温度，过滤，将沉淀物用乙腈洗涤。浓缩合并的滤液，使残留物溶于乙酸乙酯中，用饱和碳酸氢钠(2×10mL)洗涤。将有机溶液干燥(MgSO4)和浓缩，将粗产物用快速硅胶垫过滤，用1∶4乙酸乙酯∶庚烷洗脱以得到184mg(16％)1j。 1H NMR(DMSO-d6)δ9.50(s，1H)；7.18-7.14(m，2H)；6.75-6.70(m，2H)；4.94(s，2H)；3.62-3.52(m，1H)；3.27-3.06(m，2H)；2.43-2.35(m，1H)；2.31(t，2H，J＝7.15Hz)；1.89-1.78(m，1H)；1.68-1.46(m，4H)；1.39-1.23(m，2H). 实施例16 在不含溶剂的情况下用混合脂肪酸酯制备2-酰氧基甲基-5-羟基-4H-吡喃-4-酮(1k) 将Novozyme 435(100mg)和2-羟基甲基-5-羟基-4H-吡喃-4-酮(2a；100mg；0.7770mmol)加入小瓶内，加入2mL来自西番莲果油的混合乙基酯。将混合物加热至60℃过夜，此时tlc分析(乙酸乙酯洗脱剂)提示明显转化为1k。 酪氨酸酶在引起酪氨酸转化为黑色素的生物合成途径中负责催化前两个步骤。它使酪氨酸羟化为二羟基苯丙氨酸(L-DOPA)，接着将L-DOPA氧化为多巴醌。我们测定各种化合物抑制酪氨酸酶活性的方法集中在L-DOPA氧化为多巴醌的步骤，用分光光度计在475nm测量出现的多巴醌。酶测定方法主要依据描述于Zhang，JP.，Chen，QX.，Song，KK.，& Xie，JJ.Food Chemistry 2006，95，579-584的方法。 评估本发明化合物在含水环境和在水或二甲基亚砜中制备的合适稀释液中的溶解度。用原液制备多种稀释液，测量终抑制剂浓度通常为10nM-10mM。 测定混合物由50mM Na2HPO4/NaH2PO4 pH 7.0和0.5mML-DOPA组成。通过添加18单位蘑菇酪氨酸酶(Sigma T3824)启动酶反应。在30℃以1ml反应模式用Beckman Coulter DU 800 UV/VisSpectrophotometer在475nm测量酪氨酸酶活性的基线初始速率，然后加入/混合25ul等份试样的抑制剂溶液，记录速率的改变。速率的改变与因存在抑制剂引起酪氨酸酶抑制的百分数相关。通过将终浓度限制在2.5％并且每次测定都用DMSO空白消除任何背景抑制，将存在的任何DMSO的抑制作用降至最低。 根据抑制50％酪氨酸酶需要的抑制剂浓度EC50值衡量酪氨酸酶抑制的程度。通过绘制抑制剂浓度的log相对于速率效应(抑制％)的图，在Graphpad PrizmVersion 4中产生S形剂量-效应曲线，确定EC50值。本发明的各种实施例及其它比较实施例的数据在以下表1显示。 表1：酪氨酸酶抑制值 化合物 EC50(毫摩尔) 化合物 EC50(毫摩尔) 2a 0.015 2b 0.19 1a 0.0049 1f 0.038 6a 0.084 6f 0.92 1b 0.0046 1g 0.017 6b 0.10 6g 1.01 7b 0.097 7g ＞10 1c 0.00098 1h 0.049 1d 0.00039 6d 0.18 7d ＞1.0 1e 0.00093虽然已经通过具体参考优选实施方案详细地描述本发明，但应理解可在本发明主题和范围内进行变更和修饰。
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本发明提供制备用作亮肤剂的酯化合物的方法和用于亮肤的含有该酯化合物的组合物。。
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