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1、10申请公布号CN102349891A43申请公布日20120215CN102349891ACN102349891A21申请号201110231470522申请日20110812A61K31/37200601A61P9/12200601A61P9/0020060171申请人西安交通大学地址710049陕西省西安市咸宁路28号72发明人贺浪冲张燕曹艳君卢闻王嗣岑杨广德李西玲贺怀贞张杰74专利代理机构西安智大知识产权代理事务所61215代理人弋才富54发明名称欧前胡素用于高血压合并心肌肥厚及心脏保护的药物用途57摘要一种欧前胡素用于高血压合并心肌肥厚及心脏保护的药物用途，所述的欧前胡素为呋喃香豆素。
2、化合物欧前胡素，该呋喃香豆素化合物欧前胡素来自于中药白芷蛇床子的提取物，该呋喃香豆素化合物欧前胡素用于高血压并发心肌肥厚的治疗和NO途径相关的心脏保护；避免了毒副作用，并发现欧前胡素对高血压并发心肌肥厚有治疗作用，并且通过NO途径对心脏有保护作用。51INTCL19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书1页说明书8页CN102349894A1/1页21一种欧前胡素用于高血压合并心肌肥厚及心脏保护的药物用途。2根据权利要求1所述的欧前胡素用于高血压合并心肌肥厚及心脏保护的药物用途，其特征在于所述的欧前胡素为呋喃香豆素化合物欧前胡素，该呋喃香豆素化合物欧前胡素来自于中药白芷蛇床子的。
3、提取物，该呋喃香豆素化合物欧前胡素用于高血压并发心肌肥厚的治疗和NO途径相关的心脏保护。权利要求书CN102349891ACN102349894A1/8页3欧前胡素用于高血压合并心肌肥厚及心脏保护的药物用途技术领域0001本发明属于中药提取物技术领域，具体涉及一种欧前胡素用于高血压合并心肌肥厚及心脏保护的药物用途。背景技术0002高血压是最常见的心脑血管疾病之一，流行病学调查表明我国高血压具有患病率高、致残率高、死亡率高等特点。同时，高血压病程长，后期又伴随有并发症的发生，也是冠心病、脑卒中、肾功能衰竭的最主要危险因素。其中左心肥大作为高血压的最主要并发症，越发引起人们的重视。0003高血压的。
4、治疗包括药物治疗和非药物治疗，其中药物降低血压可有效地降低心血管并发症发生率和死亡率。并对脑卒中、冠脉事件、心衰、肾脏疾病的进展、高血压恶化和所有不明原因死亡有防护作用。对于老年人，高血压治疗更能显著地降低冠心病的发生。所以在高血压的治疗和控制过程中，药物治疗居于主导的决定性地位。虽然目前用于治疗高血压疾病的药物有很多种类，但基于对高血压治疗同时要求降低并发症的发生的目的，多靶点、多用途的抗高血压的药物的研究和应用进展迅速，特别是受体阻滞剂、钙拮抗剂和血管紧张素转换酶抑制剂等新型降压药的问世，在很大程度上改善了高血压药物治疗的现状。0004但是目前常用的钙拮抗剂都是通过化学合成得到的，都有一定。
5、的毒副作用。发明内容0005为了克服上述现有技术存在的不足，本发明的目的在于提供一种欧前胡素用于高血压合并心肌肥厚及心脏保护的药物用途，避免了毒副作用，并发现欧前胡素对高血压并发心肌肥厚有治疗作用，并且通过NO途径对心脏有保护作用。0006为了达到上述目的，本发明所采用的技术方案是0007一种欧前胡素用于高血压合并心肌肥厚及心脏保护的药物用途。0008所述的欧前胡素为呋喃香豆素化合物欧前胡素，该呋喃香豆素化合物欧前胡素来自于中药白芷蛇床子的提取物，该呋喃香豆素化合物欧前胡素用于高血压并发心肌肥厚的治疗和NO途径相关的心脏保护。0009通过药效学研究，证明本发明的欧前胡素可用于高血压并发心肌肥厚。
6、的治疗和NO途径相关的心脏保护。为验证本发明欧前胡素的药用效果，除了成分检测外，本发明人还对该成分进行了进一步的细胞膜色谱分析CELLMEMBRANECHROMATOGRAPHY，CMC。CMC是一种仿生学的生物亲和色谱方法，可以测定药物和化合物分子与细胞膜及膜受体间的特异性相互作用。本发明的实验中用SD大鼠的心肌细胞膜色谱模型，以维拉帕米为对照，对欧前胡素有效成分进行了有效成分保留验证。实验结果显示，在CMC保留条件下，本发明的白芷和蛇床子中的有效成分欧前胡素与维拉帕米保留色谱行为相似。对心肌细胞膜及膜受体有作用。总之，本发明人在对白芷和蛇床子有效成分要用研究中，发现欧前胡素对高血压并说明书。
7、CN102349891ACN102349894A2/8页4发心肌肥厚有治疗作用，并且通过NO途径对心脏有保护作用。进一步药效试验验证，欧前胡素对正常心肌细胞没有影响，对ANGII所致心肌细胞肥大有抑制作用。通过SHR大鼠和2K1C小鼠两种模型验证了欧前胡素可以抑制左心肥厚、保护心脏，并且该机制可能与NO途径有关。具体实施方式0010下面结合实施例对本发明作更详细的说明。0011实施例10012实验针对欧前胡素对诱导后肥大心肌细胞的作用，首先产生ANGII所致的心肌细胞肥大，即用酶消化法获得SD大鼠的原代心肌细胞，实验采用410代的细胞，用0125胰蛋白酶消化心肌细胞，计数，配成单细胞悬液，以每。
8、孔104个细胞接种于24孔培养板中，每孔1ML，移入37的CO2培养箱中，当细胞生长至80融合时，进行加药。采用10、1和01MOL/L的ANGII诱导心肌细胞，每孔1ML。在37、5CO2及饱和湿度条件下，同时每孔掺入3H亮氨酸继续培养48H。采用10、1和01MOL/L的ANGII诱导心肌细胞48H后。发现1MOL/L的ANGII可明显诱导心肌细胞蛋白质合成，效果优于ANGII的另外两个浓度，1MOL/L的ANGII可使心肌细胞蛋白质合成率高达1285。然后实验欧前胡素对肥大心肌细胞的干预作用，即采用10、1和01MOL/L的欧前胡素和1MOL/L的ANGII在37、5CO2饱和湿度条件下。
9、，共同培养心肌细胞48H后，发现欧前胡素对ANGII诱导所致的心肌细胞肥大呈浓度依赖性地抑制，同时肥大心肌细胞蛋白质合成也被浓度依赖性地抑制。其中，10MOL/L的欧前胡素几乎可以完全抑制由1MOL/L的ANGII所致的心肌细胞肥大和蛋白质合成增加；实验PE所致的心肌细胞肥大及LNAME存在下欧前胡素的干预，即采用10、1和01MOL/L的欧前胡素、100MOL/LPE和1MOL/LLNAME，在37以及浓度为5CO2饱和湿度条件下，培养48H后，欧前胡素可以浓度依赖性的抑制PE诱导所致的心肌细胞肥大及心肌细胞蛋白质合成增加。但加入1MOL/LLNAME可明显抑制欧前胡素的上述作用。0013这。
10、样在心肌细胞水平上，证明欧前胡素具有抑制PE或ANGII所致心肌细胞肥大的作用。其可能与NO途径有关。0014实施例2欧前胡素对SHR大鼠左心肥厚及心肌纤维化的作用0015实验欧前胡素对SHR大鼠左心肥厚及心肌纤维化的作用，首先考察其对肥厚指数的影响，即欧前胡素呈剂量依赖性的对左心肥厚指数LVW/BW有下调作用，并且优于卡托普利。欧前胡素大剂量组的左室重量LVW降低较之SHR对照组具有显著性意义P001，欧前胡素中剂量组可逆转左心肥厚，但与WKY对照组相比仍然有显著差异P0001；欧前胡素各剂量组的右室重量RVW并没有因为左室重量LVW的降低而降低，见表1。欧前胡素大剂量组甚至有一定程度的上调。
11、了右室指数RVW/BW，使心脏构成比更合理。0016表10017说明书CN102349891ACN102349894A3/8页500180019注P001，P005VSSHR组。0020实验对肥大的SHR心肌细胞的作用，即欧前胡素对肥大的SHR心肌细胞同样有剂量依赖性的抑制作用，又见表1，心肌细胞短直径30M的心肌细胞属正常细胞；30M并且45M的心肌细胞属轻度肥大；45M的心肌细胞属严重肥大。可以从表1中看到欧前胡素中剂量和大剂量都将SHR的心肌细胞调整到了轻度肥大区域。其中欧前胡素中剂量的效果就已经和卡托普利的效果相当。实验对心肌中胶原的沉积的影响，即心肌中胶原沉积往往与心肌细胞肥大伴行。。
12、SHR左心肥厚，心肌细胞肥大，同时其心肌细胞中胶原沉积很严重。从表1可见，欧前胡素对胶原沉积同样有抑制作用。并且欧前胡素大剂量对胶原沉积的改善作用具有统计学意义P005。实验对血清心肌纤维化指标水平的调整，即血清中的PCIII、CIV、HA和LN均可作为SHR大鼠左室肥厚引起心肌纤维化的指标，欧前胡说明书CN102349891ACN102349894A4/8页6素在降压的同时可使上述心肌纤维化指标水平下降，见表2。测得数值更接近正常的WKY。部分指标的下降具有统计学意义，其中HA下降最为显著P001，其它指标的下降也不同程度的具有统计学意义。0021表2002200230024注P001，P0。
13、05VSSHR组。0025实验对血浆中相关指标的作用，即血浆中ANGII和ALD由于SHR和WKY种属的不同在动物体内的含量本身就存在很大差异，见表3。欧前胡素和阳性药卡托普利都可相应的降低血浆中ANGII和ALD的含量，见表3，但并不是向着WKY血浆中ANGII和ALD的含量接近。不过，欧前胡素对上述两个指标的作用与竞争性血管紧张素转换酶抑制剂卡托普利具有相同的趋势，并且欧前胡素中剂量和大剂量组对于ANGII水平下调与模型对照SHR组相比差异具有统计学意义P005，表23，同时对于ALD水平下调与模型对照SHR组相比也具有显著的统计学意义P001，见表3。欧前胡素同时又提高了血浆中总NOS和。
14、INOS的含量，更接近WKY大鼠所拥有的水平，并对上述两个指标的上调呈剂量依赖性，见表23。欧前胡素中剂量组和大剂量组对于NOS和INOS水平的上调与模型对照SHR组相比具有显著性意义P001，P005，见表3，欧前胡素大剂量组处理后的SHR的血浆中总NOS和INOS的含量甚至达到了与阴性对照WKY组同样的水平。卡托普利阳性对照组对说明书CN102349891ACN102349894A5/8页7总NOS和INOS的含量的调节仅仅略优于欧前胡素小剂量组，见表3。0026表300270028注P001，P005VSSHR组。0029实验对胶原沉积及纤维分布的影响，即构造SHR对照组，先在整体的左心。
15、室切片中平均心室壁最厚，心室腔最小，同时心肌细胞包裹着的血管壁最厚；从1010照片中可肉眼分辨心肌细胞，由本应是梭状或是长条状变为圆形或椭圆形；并且心肌细胞间胶原纤维呈发射状分布，将心肌细胞单个分割。0030欧前胡素大剂量组心肌细胞和心肌中的血管周围也分布有胶原纤维，但血管周围胶原纤维层较SHR组薄；同时心肌细胞间的胶原纤维呈条状分布，尚未形成发射状；心肌细胞变形得较少，大多数仍然是条状或梭状。0031WKY对照组心室壁薄，心室腔较大，明显心肌细胞中分布的血管壁薄；心肌细胞几乎没有变形的，其间也几乎没有胶原纤维分布；胶原纤维也仅是血管外膜本应具有的薄说明书CN102349891ACN10234。
16、9894A6/8页8薄的一层。0032欧前胡素对左心肥厚有抑制作用，同时对相关血液水平非正常变化有调节。欧前胡素可作为抗高血压临床前筛选药物。0033实施例30034实验欧前胡素抑制心肌肥厚作用与NO途经的关系，首先采用单侧肾动脉狭窄术建立动物模型，即手术前小鼠禁食12H，自由饮水。次日早晨采用20的乌来糖5ML/KG腹腔注射麻醉小鼠，待小鼠无眨眼反应后将其仰卧固定于手术台上，左腹部备皮，手术区域大约11CM2，分别用1碘酒和75乙醇消毒皮肤，于左侧肋骨下约05CM，平行于肋中线1CM处开口，开口大小约为12CM，暴露腹内器官。用镊子夹取小块消毒纱布，自小鼠左侧腹腔边缘进入，将左侧肾脏上方的肠。
17、胃等脏器拨向腹腔右侧，使左侧肾脏及主要血管暴露。再用镊子和玻璃分针将左侧肾动脉和肾静脉钝性分离，并小心剥离动脉血管上的脂肪组织等，使左侧肾动脉主干完全游离；用镊子穿线，小心将左侧肾主动脉距肾蒂约03CM处用手术线扎死，并观察左肾无明显的坏死，苍白，淤血现象，固定好后，将左侧腹腔内器官复位，并取出纱布，缝合，消毒。肌肉注射新鲜配制的青霉素混悬液1万U/20G，术后连续一周每日注射青霉素预防感染。手术过程中不触及右肾，脏器不移出腹腔。术后禁食一天。手术组游离左肾动脉后不扎死，其余操作同模型组。建模后小鼠体重持续稳定的增长，各组无显著性差异。15MGKG1D1欧前胡素可以显著地降低血压和心率，见表4。
18、。同时欧前胡素处理后的小鼠左心室壁较模型组也变薄了。0035表400360037注P005VS模型组。0038实验对2K1C模型小鼠心肌肥厚的抑制作用，即计算所得心脏质量指数HW/BW，可以发现欧前胡素小剂量在干预四周之后相比模型组小鼠的心脏指数减小具有统计学意义欧前胡素小剂量454029MG/G，模型组660035MG/G，P001，见表5。同时心肌的横截面也有相同趋势的变化，见表5第二列。对心脏中心肌细胞间隙纤维化程度及心脏中小血管周围的纤维化程度进行定量，发现欧前胡素小剂量就已经对上述纤维化程度说明书CN102349891ACN102349894A7/8页9都有不同程度的抑制作用，见表5。
19、第三和第四列数据。结果显示欧前胡素在一定程度上对LNAME对NO的抑制作用有反阻断作用。即使LNAME存在的情况下，欧前胡素仍然可以对左心肥厚有抑制作用。0039表5004000410042注P001，P005VS模型组。0043实验对ENOS及相关指标表达的影响，即在我们检测的NOS的三种亚型总只有ENOS可以检测到，同时对于其磷酸化PENOS也进行了检测。发现ENOS本身在各个组中蛋白含量差别不大，但是其磷酸化后的蛋白差别却很大，假手术组与欧前胡素干预的模型组的PENOS蛋白表达是一致的，但是模型安慰剂组却显著性的减少了PENOS的蛋白含量，见表6。在半定量PCR中发现欧前胡素对于心肌肥大的分子标记有不尽相同的调节，下调了BNP，PIN和ANP；上调了SERCA和ENOS；对于INOS无明显作用。其中欧前胡素对于ENOS和说明书CN102349891ACN102349894A8/8页10BNPMRNA的调节作用与欧前胡素在血浆中对ENOS和BNP见表6的调节作用是一致的。0044表600450046注P001VS模型组。0047在建立了肾性高血压小鼠模型后，验证了欧前胡素保护心脏、逆转左心肥厚的同时对NO途径也有保护作用，并且欧前胡素逆转左心肥厚经由NO途径。说明书CN102349891A。