一种青龙衣活性提取物及其制备方法和用途.pdf

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1、10申请公布号CN102370695A43申请公布日20120314CN102370695ACN102370695A21申请号201010257757022申请日20100819A61K36/52200601A61P35/00200601A61P29/00200601A61P37/04200601A61K131/0020060171申请人黑龙江省中医研究院地址150036黑龙江省哈尔滨市香坊区三辅街142号72发明人王伟明初东君段玉敏曹贵阳张洪娟74专利代理机构北京太兆天元知识产权代理有限责任公司11108代理人张韬54发明名称一种青龙衣活性提取物及其制备方法和用途57摘要本发明涉及一种中药活。

2、性提取物及其制备方法和用途，特别涉及一种从中药青龙衣中提取的有效部位及其制备方法和用途。本发明所述青龙衣活性提取物可以采用乙醇渗漉、回流、超声波提取或CO2超临界提取，再经过醇沉、洗脱、截留、回流、浓缩、干燥等步骤制得。本发明以青龙衣活性提取物的抗癌活性为指标，对青龙衣的有效部位进行了筛选，以不同含量提取物进行药效试验，结果证实本发明所述青龙衣活性提取物中治疗癌症的有效组分主要为总萘醌类；药效试验结果表明其消炎止痛的有效组分主要为总黄酮、总鞣质及极性小分子类；提高免疫功能作用的物质主要为多糖。51INTCL19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书2页说明书11页CN10237。

3、0695A1/2页21一种青龙衣活性提取物，其特征在于该青龙衣活性提取物为青龙衣CO2超临界萃取物A、青龙衣提取物A、青龙衣提取物B、青龙衣提取物C、青龙衣提取物C、青龙衣活性提取物1、2、3、4中的任意一种；其中，青龙衣活性提取物1、2、3、4中，总黄酮、总萘醌、总鞣质三者之和的含量不少于20，且多糖含量不少于30；该青龙衣活性提取物由如下方法制成1取适量青龙衣粉碎，加412重量倍3095的乙醇进行渗漉提取；提取液备用，提取后的药渣挥散溶剂备用；取提取液于60以下减压回收乙醇得清膏，即得青龙衣醇提粗提物；或取适量青龙衣粉碎，过20目筛，以052重量倍30100的乙醇为夹带剂，用CO2超临界提。

4、取，具体参数为萃取釜温度4055，萃取压力2035MPA，流速1545L/H，提取时间14小时，分离釜1温度3545，分离压力815MPA，分离釜2温度3035，分离压力57MPA；提取后的药渣挥散溶剂备用；提取液于60以下减压回收乙醇，制得青龙衣CO2超临界萃取物A；或取适量青龙衣粉碎，过20目筛，不加夹带剂，用CO2超临界提取，具体参数为萃取釜温度4055，萃取压力2035MPA，流速1545L/H，提取时间14小时，分离釜1温度3545，分离压力815MPA，分离釜2温度3035，分离压力57MPA；提取后的药渣挥散溶剂备用；将萃取液干燥，制得青龙衣CO2超临界萃取物A；2取1中挥散溶剂。

5、的备用药渣，加412倍水煎或超声波提取13次，每次053小时，合并水提液，浓缩成相对密度为106130的清膏，加乙醇使含醇量达5090，于48放置1248小时，取出滤过，滤液备用，沉淀物备用；同法可进行二次醇沉，得滤液合并备用，沉淀物备用；3将1中所得青龙衣醇提粗提物或青龙衣CO2超临界萃取物A水溶解或拌少量树脂并干燥，上样，过大孔吸附树脂柱，具体步骤为先用水和/或520的乙醇溶液洗脱，至洗脱液基本无色，将水或低浓度的乙醇弃去，再用5095的乙醇洗脱至洗脱液无色，收集该洗脱液，回收乙醇，将其干燥，即得青龙衣提取物A；4将2中备用滤液浓缩，干燥，即得青龙衣提取物B；5将2中备用沉淀物分别用适量的。

6、95的乙醇、丙酮、乙醚中的一种或几种洗脱，抽干得多糖粗提物，将其加水溶解，滤过，再将滤液超滤，截留5000200000分子量的化合物，加054活性炭脱色，回流0515小时，滤过，滤液浓缩，干燥，即得青龙衣提取物C；6将5中所述截留5000200000分子量的化合物替换为截留30000100000分子量的化合物，即得青龙衣提取物C；将上述步骤1、4、5制得的青龙衣CO2超临界萃取物A、青龙衣提取物B、青龙衣提取物C混合即得青龙衣活性提取物1；或将上述步骤3、4、5制得的青龙衣提取物A、青龙衣提取物B、青龙衣提取物C混合即得青龙衣活性提取物2；或将上述步骤1、4、6制得的青龙衣CO2超临界萃取物A。

7、、青龙衣提取物B、青龙衣提取物C混合即得青龙衣活性提取物3；权利要求书CN102370695A2/2页3或将上述步骤3、4、6制得的青龙衣提取物A、青龙衣提取物B、青龙衣提取物C混合即得青龙衣活性提取物4。2如权利要求1所述的青龙衣活性提取物，其特征在于其制备方法步骤1中所述加412重量倍3095的乙醇进行渗漉提取替换为加412重量倍3095的乙醇进行回流提取或超声波提取13次，每次053小时。3如权利要求1所述的青龙衣活性提取物，其特征在于其制备方法步骤3中所述大孔吸附树脂为中、低极性树脂，包括D101、D201、南开大学生产的非极性系列D1、D2、D4、D6、D8、DM2、DS2、X5、A。

8、B8、沧州宝恩化工HPD100、HPD400、DM130、ADS17、上试101、102、401、日本三菱化成DIAIONHP10、DIAIONHP20、美国AMBERLITEXAD1、XAD2。4如权利要求1所述的青龙衣活性提取物，其特征在于其制备方法步骤1、3、4、5中所述的干燥方法为烘干、减压干燥、喷雾干燥或冷冻干燥。5如权利要求1所述的青龙衣活性提取物，其特征在于青龙衣提取物A中主要含总萘醌类、总黄酮及总鞣质类物质；青龙衣提取物B主要为小分子极性物质；青龙衣提取物C与C主要为多糖类物质。6如权利要求1或2所述的青龙衣活性提取物，其特征在于青龙衣活性提取物4中，总黄酮、总萘醌、总鞣质三者。

9、之和的含量不少于30，且总多糖含量不少于30。7如权利要求1或2所述的青龙衣活性提取物，其特征在于青龙衣活性提取物1、2、3、4中，总黄酮、总萘醌、总鞣质三者之和的含量为2040，且总多糖含量为3040。8如权利要求6所述的青龙衣活性提取物，其特征在于青龙衣活性提取物4中，总黄酮、总萘醌、总鞣质三者之和的含量为3040，且总多糖含量为3040。9如权利要求1、2或8所述的青龙衣活性提取物，其特征在于青龙衣活性提取物加入常规辅料，按照常规工艺，制成药学上接受的胶囊剂、丸剂、散剂、片剂、颗粒剂、注射剂、口服液。10如权利要求6所述的青龙衣活性提取物，其特征在于青龙衣活性提取物加入常规辅料，按照常规。

10、工艺，制成药学上接受的胶囊剂、丸剂、散剂、片剂、颗粒剂、注射剂、口服液。11如权利要求7所述的青龙衣活性提取物，其特征在于青龙衣活性提取物加入常规辅料，按照常规工艺，制成药学上接受的胶囊剂、丸剂、散剂、片剂、颗粒剂、注射剂、口服液。12如权利要求1、2或8所述的青龙衣活性提取物在制备抗癌、消炎、止痛、提高免疫功能的药物中的应用，其特征在于日服用制剂量的该药物中的青龙衣活性提取物应当含相当生药量30G以上。13如权利要求6所述的青龙衣活性提取物在制备抗癌、消炎、止痛、提高免疫功能的药物中的应用，其特征在于日服用制剂量的该药物中的青龙衣活性提取物应当含相当生药量30G以上。14如权利要求7所述的青。

11、龙衣活性提取物在制备抗癌、消炎、止痛、提高免疫功能的药物中的应用，其特征在于日服用制剂量的该药物中的青龙衣活性提取物应当含相当生药量30G以上。权利要求书CN102370695A1/11页4一种青龙衣活性提取物及其制备方法和用途技术领域0001本发明涉及一种中药活性提取物及其制备方法和用途，特别涉及一种从中药青龙衣中提取的有效部位及其制备方法和用途。背景技术0002根据世界卫生组织报告，2000年全球新发癌症病人1010万人，死亡620万人，现患癌症病例2240万。全球癌症仍呈上升趋势，据世界卫生组织WHO专家预测，2020年全球总人口将达80亿，癌症新发病例将达2000万，将有1200万人死。

12、于癌症。中国每年癌症新发病例为220万人，因癌症死亡人数为160万人。近20年来，中国每45个死亡者中就有一个死于癌症，居死亡原因之首。0003癌症是瞩世关注的重大难题，现今治疗癌症的药物主要为化学药，在杀伤癌细胞同时，机体内正常细胞亦被破坏，其引发的毒副作用是不可逆的。目前公开上市的中药抗癌药，以提取有效部位作为治疗癌症的药物并不多见。关于青龙衣提取物抗癌活性虽有报道，仅为单一某部位的疗效，但整体疗效并不显著，众所周知，癌症给患者带来不仅是肿瘤增大、转移、扩散，而伴随着是一种全身机体的消耗，难以忍受的疼痛，免疫力的低下，放、化疗的毒副作用等都可引发死亡，亟待发明一种抗癌疗效显著、毒副作用低、。

13、服用剂量小、并能有效调节全身症状的抗癌药物。本发明所述中药活性提取物是从胡桃科植物核桃楸JUGLANSMANDSHURICAMAXIM和胡桃JUGLANSREGIAL的未成熟果实的外果皮称为青龙衣中经过提取、分离、精制，于青龙衣不同部位分别得到具有抗癌、消炎、止痛、提高免疫功能作用的总活性提取物。发明内容0004本发明的目的是提供一种青龙衣活性提取物，本发明的另一个目的是提供该青龙衣活性提取物的制备方法，本发明还有一个目的是提供该青龙衣活性提取物在制备抗癌、消炎、止痛、提高免疫功能药物中的应用。0005本发明目的是通过如下技术方案实现的0006本发明所述的青龙衣活性提取物由如下方法制成0007。

14、1取适量青龙衣粉碎，加412重量倍3095的乙醇进行渗漉提取；提取液备用，提取后的药渣挥散溶剂备用；取提取液于60以下减压回收乙醇得清膏，即得青龙衣醇提粗提物；00082取1中挥散溶剂的备用药渣，加412倍水煎或超声波提取13次，每次053小时，合并水提液，浓缩成相对密度为106130的清膏，加乙醇使含醇量达5090，于48放置1248小时，取出滤过，滤液备用，沉淀物备用；同法可进行二次醇沉，得滤液合并备用，沉淀物备用；00093将1中所得青龙衣醇提粗提物水溶解或拌少量树脂并干燥，上样，过大孔吸附树脂柱，具体步骤为先用水和/或520的乙醇溶液洗脱，至洗脱液基本无色，将水说明书CN1023706。

15、95A2/11页5或低浓度的乙醇弃去，再用5095的乙醇洗脱至洗脱液无色，收集该洗脱液，回收乙醇，将其干燥，即得青龙衣提取物A；00104将2中备用滤液浓缩，干燥，即得青龙衣提取物B；00115将2中备用沉淀物分别用适量的95的乙醇、丙酮、乙醚中的一种或几种洗脱，抽干得多糖粗提物，将其加水溶解，滤过，再将滤液超滤，截留5000200000分子量的化合物，加054活性炭脱色，回流0515小时，滤过，滤液浓缩，干燥，即得青龙衣提取物C；00126将5中所述截留5000200000分子量的化合物替换为截留30000100000分子量的化合物，即得青龙衣提取物C。0013上述步骤1中所述加412重量倍。

16、3095的乙醇进行渗漉提取还可采用加412重量倍3095的乙醇进行回流提取或超声波提取13次，每次053小时替代，制得青龙衣醇提粗提物；0014或取适量青龙衣粉碎，过20目筛，再以052重量倍30100的乙醇为夹带剂或不加夹带剂，用CO2超临界提取替代，制得青龙衣CO2超临界萃取物A；具体参数为萃取釜温度4055，萃取压力2035MPA，流速1545L/H，提取时间14小时，分离釜1温度3545，分离压力815MPA；分离釜2温度3035，分离压力57MPA。0015若步骤1采用不加夹带剂的CO2超临界提取法制得青龙衣CO2超临界萃取物A时，则不用将萃取液于60以下减压回收乙醇，而直接将萃取液。

17、干燥即可；0016上述步骤3中所述大孔吸附树脂为中、低极性树脂，包括D101、D201、南开大学生产的非极性系列D1、D2、D4、D6、D8、DM2、DS2、X5、AB8等、沧州宝恩化工HPD100、HPD400、DM130、ADS17等、上试101、102、401等、日本三菱化成DIAIONHP10、DIAIONHP20、美国AMBERLITEXAD1、XAD2等。0017上述步骤1、3、4、5中所述的干燥方法可以为烘干或减压干燥或喷雾干燥或冷冻干燥等。0018将上述步骤1、4、5制得的青龙衣CO2超临界萃取物A、青龙衣提取物B、青龙衣提取物C混合即得青龙衣活性提取物1；0019或将上述步骤。

18、3、4、5制得的青龙衣提取物A、青龙衣提取物B、青龙衣提取物C混合即得青龙衣活性提取物2；0020或将上述步骤1、4、6制得的青龙衣CO2超临界萃取物A、青龙衣提取物B、青龙衣提取物C混合即得青龙衣活性提取物3；0021或将上述步骤3、4、6制得的青龙衣提取物A、青龙衣提取物B、青龙衣提取物C混合即得青龙衣活性提取物4。0022本发明所述青龙衣活性提取物为青龙衣CO2超临界萃取物A、青龙衣提取物A、青龙衣提取物B、青龙衣提取物C、青龙衣提取物C、青龙衣活性提取物1、2、3、4中的任意一种；0023其中，青龙衣提取物A中主要含总萘醌类、总黄酮及总鞣质类物质；青龙衣提取物B主要为小分子极性物质；青。

19、龙衣提取物C与C主要为多糖类物质。0024本发明所述的青龙衣活性提取物1、2、3、4中，总黄酮、总萘醌、总鞣质三者之和的含量不少于20优选为2040，且多糖含量不少于30优选为3040；说明书CN102370695A3/11页6优选的青龙衣活性提取物4中总黄酮、总萘醌、总鞣质三者之和的含量不少于30优选为3040，且多糖含量不少于30优选为3040；0025本发明所述青龙衣活性提取物加入常规辅料，按照常规工艺，制成药学上可接受的胶囊剂、丸剂、散剂、片剂、颗粒剂、注射剂、口服液等。0026上述药物用于治疗癌症时，日服用制剂量应当含相当生药量30G以上的青龙衣活性提取物；所述日服用制剂量是指每日服。

20、用的总片数、总粒数或总丸数等。0027本发明以青龙衣活性提取物的抗癌活性为指标，对青龙衣的有效部位进行了筛选，以不同含量提取物进行药效试验，结果证实提取物中治疗癌症的有效组分主要为总萘醌类；药效试验结果表明消炎止痛作用主要为总黄酮、总鞣质及极性小分子类；提高免疫功能作用的物质主要为多糖。本发明符合中医多靶点作用的整体治疗理论，对青龙衣药材进行合理地综合利用，进而使其抗癌、消炎止痛、提高免疫功能有效地结合。经药效学及毒理学试验证明，本发明所述青龙衣活性提取物具有较好的抗癌作用，有效组分明确，毒副作用小，有利于保证药物的安全性和有效性。0028下述实验例用于进一步说明但不限于本发明。0029下述实。

21、验例15均采用以下实验材料及仪器00301药物0031青龙衣活性提取物1，由黑龙江省中医研究院中药所按本发明实施例7的方法制备。0032青龙衣活性提取物2，由黑龙江省中医研究院中药所按本发明实施例1的方法制备。0033青龙衣活性提取物3，由黑龙江省中医研究院中药所按本发明实施例4的方法制备。0034青龙衣活性提取物4由黑龙江省中医研究院中药所按本发明实施例5的方法制备。0035青龙衣CO2超临界萃取物A由黑龙江省中医研究院中药所按本发明实施例4中的方法制备。0036青龙衣提取物B由黑龙江省中医研究院中药所按本发明实施例6中的方法制备。0037青龙衣提取物C由黑龙江省中医研究院中药所按本发明实施。

22、例1中的方法制备。0038青龙衣提取物A由黑龙江省中医研究院中药所按本发明实施例3中的方法制备。0039青龙衣提取物C由黑龙江省中医研究院中药所按本发明实施例5中的方法制备。0040环磷酰胺片，天津金世制药有限公司生产。批准文号国药准字H12021006。0041阿司匹林片，由桂林南药股份有限公司生产。批准文号国药准字H45021385。0042盐酸曲马多片，深圳海王药业有限公司生产。批准文号国药准字H20033331。00432动物0044SPF级BALB/C裸鼠，由中国医学科学研究院实验动物研究所提供。0045清洁级昆明种小鼠由黑龙江中医药大学实验动物中心提供。00463瘤株0047人胃腺。

23、癌BGC823，肉瘤S180，由黑龙江省肿瘤研究所提供。00484主要仪器与试剂0049超净工作台苏州净化有限公司；BASIC半自动生化分析仪美生公司；OLYMPUS显微镜日本；二氧化碳培养箱日本YAMATO公司。0050实验例1青龙衣活性提取物对肉瘤S180小鼠体内抑瘤实验研究0051实验用清洁级小鼠165只，雄性，均按常规方法接种S180肿瘤细胞。分别从传代说明书CN102370695A4/11页77天的小鼠腹中取出生长良好的S180乳白色腹水，以12无菌生理盐水稀释至细胞数为58107个/ML，以02ML/只接种于小鼠腋下。接种次日，随机分为11组，每组15只，均为IG给药，每天1次，连。

24、续10天。停药次日，颈椎脱臼处死小鼠，剥取皮下实体瘤瘤块，分别称重，计算出瘤重及抑瘤率，结果见表1。00520053表1青龙衣活性提取物对S180小鼠体内抑瘤实验结果N15005400551与模型组比较P0010056表1结果表明，青龙衣活性提取物1、2、3、4组、青龙衣CO2超临界萃取物A组、青龙衣提取物A、C、C组和阳性对照组均能抑制荷瘤小鼠肿瘤细胞的生长。其中青龙衣活性提取物1、2、3、4抑瘤率明显优于其它各实验组，从抑瘤实验结果得出活性提取物4为优选组，青龙衣提取物A组抑瘤率高于青龙衣CO2超临界萃取物A组、青龙衣提取物C、C组，从而可以得出青龙衣活性提取物4中抑瘤活性成分为青龙衣提取。

25、物A。与模型组相比青龙衣活性提取物1、2、3、4组、青龙衣CO2超临界萃取物A组、青龙衣提取物A组和阳性对照组具有显著性差异P001。0057实验例2青龙衣活性提取物对人胃腺癌BGC823荷瘤裸鼠体内抑瘤作用0058细胞株BGC823，培养于RPM1640培养液中，于375二氧化碳饱和湿度培养箱内培养，细胞处于对数生长期时，用025的胰蛋白酶002的EDTA消化传代，每34天传代1次。裸鼠适应环境5天，将对数生长期的BGC823细胞消化后制成31107/ML细胞悬液，在BALB/C裸鼠背部皮下各注射02ML。瘤块长到直径长为36MM时将裸鼠随机分为11组，每组10只，均为IG给药，每天1次，连。

26、续24天，每周监测瘤体积，停药次日，剥取皮下实体瘤瘤块，分别称重，计算出瘤重及抑瘤率。实验结果见表2。0059表2青龙衣活性提取物对BGC823荷瘤裸鼠瘤体监测及体内抑瘤实验结果说明书CN102370695A5/11页8N100060006100621与模型组比较P0010063表2结果表明，青龙衣活性提取物1、2、3、4组、青龙衣CO2超临界萃取物A组、青龙衣提取物A、C、C组和阳性对照组均能抑制人胃腺癌荷瘤小鼠肿瘤细胞的生长，从瘤体监测结果表明药物作用后期对肿瘤生长抑制明显。其中青龙衣活性提取物1、2、3、4抑瘤率明显优于其它各实验组，从瘤体监测结果和抑瘤实验结果得出活性提取物4为优选组，。

27、青龙衣提取物A组抑瘤率高于青龙衣CO2超临界萃取物A组、青龙衣提取物C、C组，从而可以得出青龙衣活性提取物中抑瘤活性成分为青龙衣提取物A。与模型组相比青龙衣活性提取物1、2、3、4组、青龙衣CO2超临界萃取物A组、青龙衣提取物A组和阳性对照组具有显著性差异P001。0064实验例3青龙衣活性提取物对S180小鼠免疫功能的影响0065实验用清洁级小鼠110只，雄性，均按常规方法接种S180肿瘤细胞。分别从传代6天的小鼠腹中取出生长良好的S180乳白色腹水，以13无菌生理盐水稀释至细胞数为32107个/ML，以02ML/只接种于小鼠腋下。接种次日，随机分为11组，均为IG给药，每天1次，连续10天。

28、，小鼠停药次日，尾静脉注射14稀释的印度墨汁，01ML/10G体重；在注入印度墨汁后1分钟和11分钟分别用毛细管从小鼠眼内静脉丛取血25UL，用01NA2CO3溶液2ML稀释；用01NA2CO3溶液2ML调零点后，将待测样品倒入石英杯中，放入紫外分光光度计中，于650NM波长处测出OD值；颈椎脱臼处死小鼠，取肝、脾称重，并计算吞说明书CN102370695A6/11页9噬指数和矫正吞噬指数。结果见表3。0066吞噬指数矫正吞噬指数0067表3青龙衣活性提取物对S180荷瘤小鼠巨噬细胞吞噬功能的影响N10006800692与模型组比较P0050070表3实验结果表明，青龙衣活性提取物1、2、3、。

29、4组、青龙衣提取物C及C组小鼠巨噬细胞吞噬功能较其它各组明显增强，且与模型组、青龙衣CO2超临界萃取物A、青龙衣提取物A、青龙衣提取物B组相比具有显著性差异P005，其中青龙衣提取物C组小鼠吞噬指数与青龙衣活性提取物各组接近，从而得出青龙衣活性提取物中具有增强免疫功能的物质为青龙衣提取物C。0071实验例4青龙衣活性提取物镇痛实验研究0072取清洁级昆明种小鼠150只，体重1822克，雌雄各半，每只鼠均腹腔注射06醋酸02ML/只，在15MIN内低于5次和高于50次扭体反应的小鼠舍弃，取110只合格的小鼠，称重后随机分11组，每组10只，均为IG给药，每天1次，连续10天，末次药后1小时，每只。

30、鼠均腹腔注射06醋酸02ML/只，观察记录注射致痛剂后15分内各鼠扭体反应次数。结果见表4。0073表4青龙衣活性提取物对小鼠扭体痛的影响N10说明书CN102370695A7/11页100074007500761与模型组比较P0010077表4实验结果表明，青龙衣活性提取物1、2、3、4组、青龙衣提取物B组小鼠在15分钟内的扭体次数明显少于模型组而略高于阳性对照组，且与模型组相比具有显著性差异P001，其中青龙衣提取物B组小鼠扭体次数与青龙衣活性提取物1、2、3、4组接近，从而得出青龙衣活性提取物组中具有镇痛作用的物质为青龙衣提取物B。0078实验例5青龙衣活性提取物对二甲苯所致小鼠耳肿的影。

31、响0079实验用清洁级小鼠110只，雌雄各半。称重后随机分为11组，每组10只，均为IG给药，每天1次，连续5天，末次给药后1H，用二甲苯01ML涂于小鼠右耳，左耳对照，半小时后处死小鼠，将两耳剪掉，对称打片后称其片重，并计算片重差，结果见表5。0080表5青龙衣活性提取物对二甲苯所致小鼠耳肿的影响N10008100821与模型组比较P0012与模型组比较P0050083表5实验结果表明，各组小鼠均具有对抗二甲苯所致的耳肿胀的作用，其中青龙衣活性提取物1、2、3、4组抗炎作用明显，与模型组相比具有极显著性差异P001，青龙衣CO2超临界萃取物A组、青龙衣提取物B、A组小鼠与模型组相比具有显著性。

32、差异P005。0084下述实施例均能实现上述实验例的效果。说明书CN102370695A8/11页11具体实施方式0085实施例1青龙衣活性提取物口服液的制备0086步骤1青龙衣活性提取物的制备00871取青龙衣3000G，酌予粉碎，加10倍量50的乙醇，进行渗漉提取，提取后的药渣备用；在60将提取液减压回收乙醇得清膏，即得青龙衣醇提粗提物；00882将1中备用药渣先后加7、5、4倍水煎提取3次，各次分别为2、1、05小时，合并水煎液，浓缩成相对密度为108的清膏，加乙醇使含醇量达80，于6放置48小时，取出滤过，滤液备用，沉淀物备用；同法进行二次醇沉，得滤液合并备用，沉淀物备用；00893将。

33、1中所得青龙衣醇提粗提物加水溶解，上样，过D2大孔吸附树脂，具体步骤为加水洗脱至洗脱液基本无色，将水弃去，再用80乙醇洗脱至洗脱液无色，收集该洗脱液，60减压回收乙醇，60减压干燥，即得青龙衣提取物A；00904将2中备用滤液浓缩，干燥，得青龙衣提取物B；00915将2中备用沉淀物分别用95乙醇1500ML、丙酮1500ML洗脱，抽干得多糖粗提物，将其加水适量溶解，滤过，将滤液超滤，截留5000200000分子量的化合物，加4活性炭脱色，回流1小时，滤过，取滤液干燥，得青龙衣提取物C；00926将上述提取物A、B、C合并即得青龙衣活性提取物2，收率7，其中，总黄酮、总萘醌、总鞣质三者之和的含量。

34、为30，且多糖含量为32；0093步骤2青龙衣活性提取物口服液的制备0094取210G上述青龙衣活性提取物2，加入常规辅料，按照常规工艺制备成口服液；每日服用口服液的量应当含相当生药量不低于30G。0095实施例2青龙衣活性提取物颗粒剂的制备0096步骤1青龙衣活性提取物的制备00971取青龙衣3000G粉碎，分别加6、5、5倍量95的乙醇回流提取3次，每次3、2、1小时，合并提取液，提取后的药渣备用；在40将提取液减压回收乙醇得清膏，即得青龙衣醇提粗提物；00982将1中备用药渣先后加10、8倍水煎提取2次，各次为3、15小时，合并水煎液，浓缩成相对密度为125的清膏，加乙醇使含醇量达60，。

35、于4放置12小时，取出滤过，滤液备用，沉淀物备用；同法进行二次醇沉，得滤液合并备用，沉淀物备用；00993将1中所得青龙衣醇提粗提物拌少量树脂并干燥，上样于大孔吸附树脂HP20柱，具体步骤为先用少量水洗脱，后用15乙醇洗脱至洗脱液基本无色，将水及乙醇弃去，再用95的乙醇洗脱至洗脱液无色，收集该洗脱液，60减压回收乙醇，60减压干燥，即得青龙衣提取物A；01004将2中备用滤液浓缩，干燥，得青龙衣提取物B；01015将2中备用沉淀物分别用95的乙醇1500ML、丙酮1500ML洗脱，抽干得多糖粗提物，将其加水适量溶解，滤过，将滤液超滤，截留30000100000分子量的化合物，加05活性炭脱色，。

36、回流2小时，滤过，干燥，得青龙衣提取物C；01026将上述提取物A、B、C合并即得青龙衣活性提取物4，收率60，其中，总黄酮、总萘醌、总鞣质三者之和的含量为36，且多糖含量为36；说明书CN102370695A9/11页120103步骤2青龙衣活性提取物颗粒剂的制备0104取180G上述青龙衣活性提取物4，加入常规辅料，按照常规工艺制备成颗粒剂；每日服用颗粒剂的量应当含相当生药量不得少于30G。0105实施例3青龙衣活性提取物丸剂的制备0106步骤1青龙衣活性提取物的制备01071取青龙衣3000G粉碎，加12倍量65的乙醇，进行超声波循环提取3小时，滤过，提取后的药渣备用；在55将提取液减压。

37、回收乙醇得清膏，即得青龙衣醇提粗提物；01082将1中备用药渣加8倍水，60超声波提取2次，各次15、1小时，合并提取液，浓缩成相对密度为118的清膏，加乙醇使含醇量达75，于5放置24小时，取出滤过，滤液备用，沉淀物备用；01093将1中所得青龙衣醇粗提物加水溶解，上样，过DM130大孔吸附树脂，具体步骤为先用少量水洗脱，后用10的乙醇洗脱至洗脱液基本无色，将水及乙醇弃去，再用75的乙醇洗脱至洗脱液无色，收集该洗脱液，60减压回收乙醇，60减压干燥，即得青龙衣提取物A；01104将2中备用滤液浓缩，干燥，得青龙衣提取物B；01115将2中备用沉淀物分别用95的乙醇1500ML、丙酮1500M。

38、L、乙醚1000ML洗脱，抽干得多糖粗提物，将其加水适量溶解，滤过，将滤液超滤，截留30000100000分子量的化合物，加2活性炭脱色，回流30分钟，滤过，滤液浓缩，干燥，得青龙衣提取物C；01126将上述提取物A、B、C合并即得青龙衣活性提取物4，收率61，其中，总黄酮、总萘醌、总鞣质三者之和的含量为32，且多糖含量为38；0113步骤2青龙衣活性提取物丸剂的制备0114取183G上述青龙衣活性提取物4，加入常规辅料，按照常规工艺制备成丸剂；每日服用丸剂的量应当含相当生药量不得少于30G。0115实施例4青龙衣活性提取物片剂的制备0116步骤1青龙衣活性提取物的制备01171取青龙衣500。

39、0G粉碎，过20目筛，用CO2进行超临界提取，萃取釜温度50，压力32MPA，流速40L/H，提取时间3小时，分离釜1温度44，压力12MPA，釜2温度34，压力7MPA；提取后的药渣备用；合并萃取液并将其干燥，即得青龙衣CO2超临界萃取物A；01182将1中备用药渣加6倍水煎提取3次，每次1小时，合并水煎液，浓缩成相对密度为122的清膏，加乙醇使含醇量达68，于7放置40小时，取出滤过，滤液备用，沉淀物备用；01193将2中备用滤液浓缩，干燥，得青龙衣提取物B；01204将2中备用沉淀物分别用95乙醇2500ML、丙酮2500ML洗涤，抽干得多糖粗提物，将其加水适量溶解，滤过，将滤液超滤，截。

40、留30000100000分子量的化合物，加3活性炭脱色，回流15小时，滤过，滤液浓缩，干燥，得青龙衣提取物C；01215将上述提取物A、B、C合并即得青龙衣活性提取物3，收率50，其中，总黄酮、总萘醌、总鞣质三者之和的含量为22，且多糖含量为35；0122步骤2青龙衣活性提取物片剂的制备0123取250G上述青龙衣活性提取物3，加入常规辅料，按照常规工艺制备成片剂；每日说明书CN102370695A10/11页13服用片剂的量应当含相当生药量不低于30G。0124实施例5青龙衣活性提取物胶囊剂的制备0125步骤1青龙衣活性提取物的制备01261取青龙衣5000G粉碎，加8倍量60的乙醇，进行渗。

41、漉提取；提取液备用，提取后的药渣挥散溶剂备用；取提取液于58减压回收乙醇得清膏，即得青龙衣醇提粗提物；01272将1中备用药渣先后加8、7倍水煎提取2次，分别提取2、15小时，合并水煎液，浓缩成相对密度为120的清膏，加95乙醇使含醇量达75，于4放置24小时，取出滤过，滤液浓缩，同上法进行二次醇沉，得滤液合并备用，沉淀物备用；01283将1中所得青龙衣醇提粗提物加水溶解，上样，过大孔吸附树脂AB8，具体步骤为用少量水洗脱，再用10的乙醇洗脱至洗脱液基本无色，将水及乙醇弃去，再用95的乙醇洗脱，收集该洗脱液，回收乙醇，将其干燥，即得青龙衣提取物A；01294将2中备用滤液浓缩，干燥，得青龙衣提。

42、取物B；01305将2中备用沉淀物分别用95乙醇2500ML、丙酮2500ML洗脱，抽干得多糖粗提物，将其加水适量溶解，滤过，取滤液超滤，截留30000100000分子量的化合物，加2活性炭脱色，加热回流1小时，滤过，滤液浓缩，干燥，得青龙衣提取物C；01316将上述提取物A、B、C合并即得青龙衣活性提取物4，收率52，其中，总黄酮、总萘醌、总鞣质三者之和的含量为38，且多糖含量为38；0132步骤2青龙衣活性提取物胶囊剂的制备0133取260G上述青龙衣活性提取物4，加入常规辅料，按照常规工艺制备成胶囊剂；每日服用胶囊剂的量应当含相当生药量不少于30G。0134实施例6青龙衣活性提取物散剂的。

43、制备0135步骤1青龙衣活性提取物的制备01361取青龙衣3000G粉碎，过20目筛，加2重量倍70的乙醇为夹带剂，用CO2进行超临界提取，萃取釜温度48，压力28MPA，流速30L/H，提取时间2小时，分离釜1温度42，压力10MPA，釜2温度32，压力6MPA；提取液备用，提取后的药渣备用；在50将提取液减压回收乙醇得清膏，即得青龙衣CO2超临界萃取物A；01372将1中备用药渣先后加9、8倍水煎提取2次，分别煎3、2小时，合并水煎液，浓缩成相对密度为110的清膏，加95乙醇使含醇量达60，于6放置30小时，取出滤过，滤液备用，沉淀物备用；同法可进行二次醇沉，得滤液合并备用，沉淀物备用；0。

44、1383将1中所得青龙衣CO2超临界萃取物A拌少量树脂并干燥，上样于大孔吸附树脂D101柱上，先用少量水洗脱，再用20的乙醇洗脱至洗脱液基本无色，将水及乙醇弃去，再用75的乙醇洗脱至洗脱液无色，收集该洗脱液，回收乙醇，将其干燥，即得青龙衣提取物A；01394将2中备用滤液浓缩，干燥，得青龙衣提取物B；01405将2中备用沉淀物分别用95乙醇1000ML、丙酮1000ML洗脱，乙醚500ML洗脱，抽干得多糖粗提物，将其加水溶解，滤过，将滤液超滤，截留30000100000分子量的化合物，加1活性炭脱色，加热回流1小时，滤过，滤液浓缩，干燥，得青龙衣提取物C；01416将上述提取物A、B、C合并即。

45、得青龙衣活性提取物4，收率53，其中，总黄酮、总萘醌、总鞣质三者之和的含量为37，且多糖含量为37；说明书CN102370695A11/11页140142步骤2青龙衣活性提取物散剂的制备0143取159G上述青龙衣活性提取物4，加入常规辅料，按照常规工艺制备成散剂；每日服用散剂的量应当含相当生药量不低于30G。0144实施例7青龙衣活性提取物微丸的制备0145步骤1青龙衣活性提取物的制备01461取青龙衣3000G粉碎，过20目筛，加05重量倍85的乙醇为夹带剂，用CO2进行超临界提取，萃取釜温度45，压力30MPA，流速25L/H，提取时间25小时，分离釜1温度40，压力9MPA，釜2温度3。

46、0，压力5MPA；提取后的药渣备用；将萃取液减压回收乙醇，干燥，即得青龙衣CO2超临界萃取物A；01472将1中备用药渣先后加10、7倍水煎提取2次，分别煎2、1小时，合并水煎液，浓缩成相对密度为112的清膏，加95乙醇使含醇量达65，于7放置40小时，取出滤过，滤液备用，沉淀物备用；同法可进行二次醇沉，得滤液合并备用，沉淀物备用；01483将2中备用滤液浓缩，干燥，得青龙衣提取物B；01494将2中备用沉淀物分别用95乙醇1000ML、丙酮1000ML洗脱，乙醚500ML洗脱，抽干，加水溶解，滤过，将滤液超滤，截留5000200000分子量的化合物，加15活性炭脱色，加热回流50分钟，滤过，滤液浓缩，干燥，得青龙衣提取物C；01505将上述提取物A、B、C合并即得青龙衣活性提取物1，收率68，其中，总黄酮、总萘醌、总鞣质三者之和的含量为25，且多糖含量为32；0151步骤2青龙衣活性提取物微丸的制备0152取204G上述青龙衣活性提取物1，加入常规辅料，按照常规工艺制备成微丸；每日服用微丸的量应当含相当生药量不少于30G。说明书。