水痘、带状疱疹人免疫球蛋白及其制备方法.pdf

一种水痘、带状疱疹人免疫球蛋白，其的水痘带状疱疹病毒抗体效价不小于100IU/mL，蛋白质含量不大于175g/L，免疫球蛋白纯度不低于总蛋白含量的92％。其原料血浆的制备方法是选择供血浆者接种水痘疫苗，以获取水痘带状疱疹病毒抗体效价不低于5IU/mL的原料血浆，且应保证混合后原料血浆水痘带状疱疹病毒抗体效价不低于8IU/mL。本发明的免疫球蛋白可以用于预防易感人群水痘的发生、发展和进行带状疱疹及其后遗神经痛的治疗，是控制水痘、带状疱疹暴发及治疗的有效途径。

1、  水痘、带状疱疹人免疫球蛋白，含有高效价的水痘带状疱疹病毒抗体，其免疫球蛋白纯度不低于总蛋白的92％，水痘带状疱疹病毒抗体效价不小于100IU/mL，蛋白质含量不大于175g/L。

2、  根据权利要求1所述的水痘、带状疱疹人免疫球蛋白，其特征是所述免疫球蛋白仅与抗人血清产生沉淀线，与抗马、牛、猪、羊血清不产生沉淀线。

3、  根据权利要求1所述的水痘、带状疱疹人免疫球蛋白，其特征是所述免疫球蛋白与正常人血清比较，主要沉淀线为IgG。

4、  根据权利要求1所述的水痘、带状疱疹人免疫球蛋白，其特征是所述免疫球蛋白的IgG单体及二聚体含量之和不低于92％。

5、  根据权利要求1所述的水痘、带状疱疹人免疫球蛋白，其特征是所述免疫球蛋白的剂型为液体型或冻干剂型。

6、  权利要求1所述的水痘、带状疱疹人免疫球蛋白的制备方法，其特征是其原料血浆的制备方法是：
1)选择身体健康，符合血液制品原料血浆规定要求的供血浆者，接种国家批准的水痘疫苗，末次接种10～20天后检测被免疫接种者血清或血浆中的水痘带状疱疹病毒抗体效价；
2)定量检测供血浆者血浆或血清的水痘带状疱疹病毒抗体，抗体效价不低于5IU/mL，其它符合“血液制品原料血浆规程”要求，采集为水痘带状疱疹人免疫球蛋白原料血浆；
3)混合采集的水痘带状疱疹人免疫球蛋白原料血浆，混合后血浆的水痘带状疱疹病毒抗体效价不低于8IU/mL。

7、  根据权利要求6所述的水痘、带状疱疹人免疫球蛋白的制备方法，其特征是每批次的混合原料血浆由不少于100名供血浆者的原料血浆混合而成。

8、  权利要求1所述的水痘、带状疱疹人免疫球蛋白作为预防易感人群水痘发生、发展制剂的应用。

9、  根据权利要求8所述的水痘、带状疱疹人免疫球蛋白作为易感人群水痘发生、发展制剂的应用，其特征是其使用量以10～15IU/kg体重计算，且最大给药剂量625IU，最小给药剂量125IU。

10、  权利要求1所述的水痘、带状疱疹人免疫球蛋白作为治疗带状疱疹及其后遗神经痛制剂的应用。

11、  根据权利要求10所述的水痘、带状疱疹人免疫球蛋白作为治疗带状疱疹及其后遗神经痛制剂的应用，其特征是其参考剂量为1000～5000IU。

水痘、带状疱疹人免疫球蛋白及其制备方法
技术领域
本发明属于生物技术领域，涉及一种生物免疫制品，特别是涉及一种能同时预防水痘和治疗带状疱疹的特异免疫球蛋白及其制备方法。
背景技术
水痘-带状疱疹病毒(VZV)属于人类单纯疱疹病毒3型，其原发感染为水痘。水痘是儿童常见的一种急性、高传染性，可经呼吸道和接触传播的感染性疾病，一般预后良好，但某些人群(长期应用放、化疗病人，外科手术病人，器官移植病人等)及成人感染VZV后症状甚为严重，一旦在易感人群中出现水痘病人，就很难预防水痘在该群体中爆发。VZV潜伏后再激活则引起带状疱疹。近年来，带状疱疹(HZ)的发病率明显增高，且引起的后遗神经痛(PHN)用抗病毒药物治疗无明显疗效。水痘、带状疱疹及相关性后遗症逐渐成为重要的公共卫生问题而日益受到国家重视。
目前我国水痘的预防主要是应用水痘疫苗进行主动免疫，但个体水痘的预防接种不能改变水痘的爆发及流行病学特征。目前常用的抗病毒药物一般为化学合成药、中草药以及干扰素等生物制剂，但其特异性差，疗效也不能充分肯定。
特异性免疫球蛋白是由病毒等病原体感染机体或主动接种疫苗后，在机体内产生的具有特异性、高活性及中和作用的球蛋白。使用特异性免疫球蛋白以可针对性的预防病毒等病原体的感染及其感染后所发生疾病的治疗，这种方法称为被动免疫。被动免疫是控制感染性疾病暴发及治疗的有效途径。
发明内容
水痘、带状疱疹人免疫球蛋白(VZIg)是从含有高效价水痘带状疱疹病毒抗体的血浆中提取的具有特异性的高效价免疫球蛋白，可以用于预防水痘的发生和进行带状疱疹的治疗。
因此，本发明的目的就在于提供一种水痘、带状疱疹人免疫球蛋白及其制备方法。
本发明提供的水痘、带状疱疹人免疫球蛋白，含有高效价的水痘带状疱疹病毒抗体，其免疫球蛋白纯度不低于总蛋白的92％，水痘带状疱疹病毒抗体效价不小于100IU/mL，蛋白质含量不大于175g/L。
本发明提供的水痘、带状疱疹人免疫球蛋白仅与抗人血清产生沉淀线，与抗马、牛、猪、羊的血清均不产生沉淀线。
本发明提供的水痘、带状疱疹人免疫球蛋白与正常人血清比较，主要沉淀线应为IgG，且其IgG单体及二聚体的含量之和不低于92％。
本发明将水痘、带状疱疹人免疫球蛋白制成常规的液体型或冻干剂型使用。
本发明的水痘、带状疱疹人免疫球蛋白的制备方法是将原料血浆经常规的低温乙醇蛋白分离法分级沉淀，提取免疫球蛋白组分，经加压过滤、离心、病毒灭活处理等必要的工序制成免疫球蛋白液体或冻干剂型。其制备方法的关键在于原料血浆的制备，具体方法是：
1)选择身体健康，符合血液制品原料血浆规定要求的供血浆者，接种国家批准的水痘疫苗，末次接种10～20天后检测被免疫接种者血清或血浆中的水痘带状疱疹病毒抗体效价；
2)以固相酶联免疫法(ELISA)定量检测供血浆者血浆或血清的水痘带状疱疹病毒抗体，抗体效价不低于5IU/mL，其它符合“血液制品原料血浆规程”要求，采集为水痘带状疱疹人免疫球蛋白原料血浆；
3)混合采集的水痘带状疱疹人免疫球蛋白原料血浆，混合后血浆的水痘带状疱疹病毒抗体效价不低于8IU/mL。
本发明采集得到的原料血浆应低温冰冻储存，其保存期不超过2年。作为制备水痘、带状疱疹人免疫球蛋白原料的混合原料血浆，每批次需由不少于100名供血浆者的原料血浆混合而成。
本发明的水痘、带状疱疹人免疫球蛋白适用于预防易感人群水痘的发生、发展和带状疱疹及其后遗神经痛的治疗。具体是包括：无水痘感染史的易感人群、正在接受免疫抑制剂治疗的患者、住院早产儿及母亲在产前5d内或产后2d发生水痘感染的新生儿、带状疱疹及后遗神经痛患者。
其中，预防水痘的使用量以10～15IU/kg体重计算，且最大给药剂量为625IU，最小给药剂量为125IU。治疗带状疱疹及其后遗神经痛的参考剂量为1000～5000IU，可多点肌肉或局部注射，并在尽可能短的时间内注射完毕。
本发明提供的水痘、带状疱疹人免疫球蛋白可以针对性的对水痘、带状疱疹病原体的感染及其感染后所发生的疾病进行治疗，是控制水痘、带状疱疹暴发及治疗的有效途径，具有较大的社会效益和经济效益。同时，本发明免疫球蛋白的原料血浆制备方法简单，免疫球蛋白制备成本低。
具体实施方式
实施例1
1、供血浆者的免疫：
选择身体健康，符合血液制品原料血浆规定要求的供血浆者，在0、28天分别接种国家批准的水痘疫苗1～2，并建立详细的免疫记录。
2、供血浆者的血浆筛选采集：
选择固相酶联免疫法(ELISA)分别定量检测供血浆者血清或血浆中的水痘带状疱疹病毒抗体，其效价应不低于5IU/mL，蛋白质含量(双缩脲法)不低于55g/L，丙氨酸氨基转移酶(赖氏法)不高于25单位，乙型肝炎表面抗原阴性，梅毒阴性，HIV-1/HIV-2抗体阴性，HCV抗体阴性等符合国家要求的血浆为特免血浆，按血液制品原料血浆规程要求采集为水痘、带状疱疹人免疫球蛋白原料血浆，低温冰冻储存，保存期不超过2年。
3、水痘、带状疱疹人免疫球蛋白的制备：
(1)将100名以上供血浆者的血浆融化混合，混合后血浆水痘带状疱疹病毒抗体效价不低于8IU/mL为合格原料血浆；
(2)分离后的无菌血浆，在0～4℃下离心去除冷沉淀；
(3)去除冷沉淀后的血浆用醋酸缓冲液调节pH值至6.8～7.2，加95％乙醇至反应液最终浓度为8～10％，反应液温度至-1～-3℃，离心得沉淀；
(4)在上清液中加95％乙醇至反应液最终浓度为19～21％，以醋酸缓冲液调节pH值至6.5～6.8，反应液温度至-4～-5℃，分离得沉淀；
(5)将步骤(4)的沉淀以15～20倍沉淀量的溶解液搅拌溶解；
(6)在上清液中加95％乙醇至反应液最终浓度为14～17％，以醋酸缓冲液调节pH值至5.0～5.2，反应液温度至-4～-5℃，分离得沉淀；
(7)在上清液中加95％乙醇至反应液最终浓度为24～26％，以碳酸氢纳缓冲液调节pH值至7.0～7.2，反应液温度至-5～-7℃，分离得沉淀；
(8)将步骤(7)的沉淀用10倍沉淀量的溶解液搅拌溶解，调节pH值为7.0～7.2，温度至0～2℃，蛋白浓度在1.5～2.5％，离心得沉淀；
(9)将步骤(8)的沉淀用溶解液搅拌至溶解，经超滤、脱醇、脱盐、浓缩，得到含有高效价的水痘、带状疱疹人免疫球蛋白原液；
(10)调整上述原液的pH值为3.8～4.2，蛋白浓度5％，经24～25℃孵放21天和纳米膜过滤的双病毒灭活处理；
(11)调整灭活的原液，使蛋白浓度不超过17.5％，水痘带状疱疹病毒抗体效价不低于100IU/mL，pH值为6.6～7.2，并加入一定比例的甘氨酸及适量麦芽糖作为保护剂制成半成品；
(12)分装为成品，检定合格。
4、检定：
(1)活性
以酶联免疫法或中和抑制蚀斑法检测，水痘带状疱疹病毒抗体效价不低于100IU/ml。
(2)鉴别
免疫双扩散法：仅与抗人的血清产生沉淀线，与抗马、抗牛、抗猪、抗羊的血清不产生沉淀线。
免疫电泳法：与正常人血清比较，主要沉淀线应为IgG。
(3)蛋白质含量
不高于175g/L。
(4)纯度
免疫球蛋白含量不低于蛋白质总量的92％。
(5)分子大小分布
IgG单体与二聚体含量之和不低于92％。
(6)外观
应为无色或淡黄色澄清液体，可带乳光，不应出现浑浊。
(7)热稳定性
57℃±0.5℃水浴中保温4小时后，用可见异物检查装置，肉眼观察无凝胶化或絮状物。
(8)pH值
用生理氯化钠溶液将供试品蛋白质含量稀释成10g/L，pH值为6.6～7.2。
(9)其它符合人免疫球蛋白要求。