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银杏叶提取物环糊精包合物及制剂的制备方法
技术领域
本发明涉及一种银杏叶提取物制备的制剂，具体为一种银杏叶提取物环糊精包合物及制剂的制备方法。
背景技术
银杏叶中含有大量的银杏黄酮、银杏萜内脂等有效成分，能改善人体呼吸，提高睡眠质量，长期使用可以预防与治疗心血管疾病.防止成年人因血管老化引起的高血压、脑中风、糖尿病等，可使成年人尤其在中老年时期维持正常的心脏输出量以及正常的神经系统功能的天然物质，使人尽可能保持正常的细胞生命周期。
现代研究发现，银杏叶提取物中黄酮类化合物对于改善心、脑血液循环，降低血清胆固醇，松弛支气管平滑肌有很好的疗效，对治疗冠状动脉粥样硬化性心脏病、心肌梗塞、扩张脑血管、增加脑血流量、治疗缺血性脑病有很好的作用。银杏萜内酯类化合物是从天然药物中提取出的活性最强的PAF(血小板活化因子)拮抗剂，对中枢神经系统可以阻止脑缺血后引起的损伤，能明显改善脑缺血状态。银杏内酯可以抑制血小板聚集，降低血液粘度，改善缺血病人的微循环，减少血栓形成，同时还有抗过敏、抗炎、抗休克作用，对缺血损伤及器官移植的排斥反应有保护作用。
目前含有银杏叶提取物的制剂主要有片剂、胶囊剂、小容量注射剂，在众多剂型中普遍存在水溶性不好，和存贮过程中有沉淀产生、颜色变深等问题，对于片剂和胶囊剂还存在溶出度低的问题。本发明采用2-羟丙基-β-环糊精对银杏叶提取物进行包合，再配合各剂型加入相应的辅料制成制剂，从而大大提高了含有银杏叶提取物的制剂在水中的溶解度，使产物中有效成分的生理活性和理化性质稳定可靠。
发明内容
本发明为了解决现有技术中存在的银杏叶提取物各种制剂中存在的溶解度差、溶出度低、贮存性能差等问题而提供了一种银杏叶提取物环糊精包合物及其制剂的制备方法。
本发明是由以下技术方案实现的，一种银杏叶提取物环糊精包合物是由以下方法制备的，将2-羟丙基-β-环糊精加水并加热到50-60℃使其全部溶解，制成2-羟丙基-β-环糊精溶液，质量浓度为5-10％；再将银杏叶提取物用95％乙醇溶解，在搅拌状态下将银杏叶提取物乙醇溶液滴加到2-羟丙基-β-环糊精溶液中，过程持续1小时，加完后停止加热，继续搅拌维持1-3小时；停止搅拌将反应液静置、过滤即得。搅拌采用电动搅拌装置，转速为40-80转/分钟，银杏叶提取物与2-羟丙基-β-环糊精的投料质量比为1：2-4。
上述方法制备得到银杏叶提取物环糊精包合物溶液制剂，该溶液制剂与不同的药用辅料配制，采用相应的工艺可制备成多种剂型，如固体制剂(包括片剂、胶囊剂、颗粒剂等)，注射剂(包括小容量注射剂、大容量注射剂，无菌粉针、冻干粉针等)。
本发明在研究环糊精与银杏叶提取物的包合方法、影响因素、稳定性、安全性进行了大量试验，现将研究情况总结如下：
环糊精的确定：我们从众多的环糊精产品中，经过分析、筛选、试验，选择了α-环糊精、β-环糊精、γ-环糊精、2-羟丙基-β-环糊精作为主要研究对像。其溶解度如下表所示：
表1 α-环糊精、β-环糊精、γ-环糊精、2-羟丙基-β-环糊精溶解度
 

名称α-环糊精β-环糊精γ-环糊精2-羟丙基-β-环糊精溶解度(g/L，25℃)14518.5232750
从α-环糊精、β-环糊精、γ-环糊精、2-羟丙基-β-环糊精的溶解度中可以看出，β-环糊精溶解度最低，而α-环糊精供应较少，不易得到，γ-环糊精较为理想，但是价格较贵，实际生产应用较少。因此我们选择了2-羟丙基-β-环糊精做为与银杏叶提取物进行包合的原料进行了包合方法等研究。
包合方法研究：环糊精包合的方法很多，我们从生产实际出发，采用搅拌法、超声波法、研磨法，并对三种包合方法进行了优劣比较。
搅拌法是用电动搅拌装置，将2-羟丙基-β-环糊精加水并加热到50-60℃使全部溶解，将银杏叶提取物用95％乙醇溶解，缓慢滴入2-羟丙基-β-环糊精溶液中搅拌1小时，停止加热，继续搅拌维持4小时，反应液静置、过滤、干燥即得。
超声波法是先将2-羟丙基-β-环糊精加水加热使全部溶解，将银杏叶提取物用95％乙醇溶解，将二者混合在一起得到混合液体，然后用超声波破碎仪超声5分钟，强度14，代替搅拌力，停止超声将反应液静置、过滤、干燥即得。
研磨法是将2-羟丙基-β-环糊精置于研钵中，加入适量水湿润后，加入银杏叶提取物醇溶液，充分混合研磨成糊状，并不断向研钵中加水使溶解，将反应液静置、过滤、干燥即得。
试验结果，测定不同方法制得的包合物中银杏黄酮和内酯含量，搅拌法>超声法>研磨法。产率比较，研磨法>超声法>搅拌法。研磨法产量最高，但主药含量最低，检查有的2-羟丙基-β-环糊精未形成包合物，搅拌法制得的包合物含主药量最高，权衡之后，我们选择了用搅拌法。
最佳投料比选择：以不同投料比，采用搅拌法进行包合，以银杏叶提取物：2-羟丙基-β-环糊精为1：1、1：2、1：4、1：8、1：10、1：20进行包合，测包合物中银杏黄酮和内酯含量，结果以1：2、1：4的投料比较适宜，1：1投料，测得含量较低，说明包合不完全，1：8、1：10、1：20投料与1：2、1：4比较，含量相差不是很明显，说明1：2-1：4之间投料即可达到最佳的包合效果，随着投料比例的增加而含量变化不明显，说明部分2-羟丙基-β-环糊精为投料过量，未参与包合，属无效成分，因此我们确定了银杏叶提取物与2-羟丙基-β-环糊精的最佳投料比为1：2-4。不同投料比包合物中银杏黄酮和内酯量及包合率如下表所示。
表2 不同投料比包合物中银杏黄酮和内酯含量及包合率

搅拌时间的选择：搅拌法还与搅拌时间有很大关系，我们按银杏叶提取物与2-羟丙基-β-环糊精为1：2进行投料，采用搅拌方法制备包合物，分别搅拌1、2、4、5、10小时，制得包合物测银杏黄酮和内酯含量，结果表明以搅拌2-4小时为好，1小时银杏内酯含量低，说明没有充分包合，5、10小时的含量与2、4小时的含量相差很小，说明银杏叶提取物用搅拌方法制备包合物在搅拌2-4小时即可完成包合。
制备工艺的确定：因此我们确定了银杏叶提取物与2-羟丙基-β-环糊精制备包合物的制备工艺：将2-羟丙基-β-环糊精加水并加热到50-60℃使其全部溶解，制成2-羟丙基-β-环糊精溶液，质量浓度为5-10％；再将银杏叶提取物用95％乙醇溶解，在搅拌状态下将银杏叶提取物乙醇溶液滴加到2-羟丙基-β-环糊精溶液中，过程持续1小时，加完后停止加热，继续搅拌维持1-3小时；停止搅拌将反应液静置、过滤即得。搅拌采用电动搅拌装置，转速为40-80转/分钟，银杏叶提取物与2-羟丙基-β-环糊精的投料质量比为1：2-4。
制备工艺重现性研究：我们采用上述确定的制备工艺，以银杏叶提取物与2-羟丙基-β-环糊精为1：2投料，电动搅拌4小时，转速60转/分钟，制备了6批包合物，对包合物的产率、有效成分含量进行了分析，结果显示该工艺重现性良好，说明制备条件合适、可靠。包合物中银杏黄酮和银杏内酯量及包合率测定结果如下。
表3 包合物中银杏黄酮和内酯含量及包合率

本发明采用上述制备方法得到的包合物与药用辅料配制，并采用一定的方法可制备成多种剂型，如固体制剂(包括片剂、胶囊剂、颗粒剂等)，注射剂(包括小容量注射剂、大容量注射剂，无菌粉针、冻干粉针等)。用于制备小容量注射剂、大容量注射剂及冻干粉针剂时，可以过滤后直接进行配制无需干燥，过滤可以采用抽滤、超滤或用0.22μm的滤器进行过滤。用于制备固体制剂、粉针剂时要进行干燥，干燥采用真空减压干燥或冷冻干燥。
本发明制备小容量注射剂的方法：首先将2-4份2-羟丙基-β-环糊精加水加热使全部溶解，制成2-羟丙基-β-环糊精溶液；其次将1份银杏叶提取物用95％乙醇溶解，缓慢滴入2-羟丙基-β-环糊精溶液中搅拌1小时；停止加热，继续搅拌维持1-3小时；搅拌采用电动搅拌装置，转速为40-80转/分钟。停止搅拌将反应液静置2小时，至室温后用0.22μm的滤器进行过滤，加入适量药用炭，加入配制所需注射用水，加热煮沸30分钟，冷却后进行过滤，用PH调节剂将PH值调节至4.5-5.8。过滤至澄清后，灌装于10ml灭菌的西林瓶中，冷冻干燥，轧盖，即得，或灌封于10ml安瓿中，封口，灭菌，即得。
注射剂的安全性研究：在多种剂型中注射剂对安全性要求最高，因此我们用上述制备方法制得注射液进行了动物实验，按不同剂量，不同给药途径，以小鼠、大鼠为实验动物，最高剂量腹膜内和静脉给药达到了10.0g/kg，给药后观察动物的行为、饮食习惯、肾毒性等，均无不利影响，生命体征正常，说明本品制得的注射液安全性高。其实验结果如下表所示。
表4 动物实验结果

注射剂的稳定性研究：为了验证本发明所制得的注射剂的稳定性，我们选择同一批注射剂在60℃、18-26℃、0-4℃、4576lx光照条件下进行试验。结果如下表：表5 注射剂稳定性试验结果
     条件        时间(天)      澄明度    鉴别银杏黄酮的含量              (mg/ml)        银杏内酯的含量              (mg/ml)                60℃    0  30    90 180澄清澄清    澄清澄清阳性阳性    阳性阳性0.8470.847     0.8450.8420.2230.222     0.2200.218              18-26℃       0  30    90 180澄清澄清    澄清澄清阳性阳性    阳性阳性0.8480.847     0.8440.8420.2240.223     0.2210.220          0-4℃     0  30    90 180澄清澄清    澄清澄清阳性阳性    阳性阳性0.8500.848     0.8470.8450.2240.223     0.2220.221          4576lx     0  30    90 180澄清澄清    澄清澄清阳性阳性    阳性阳性0.8520.850     0.8460.8430.2270.225     0.2230.221
经反复实验证明：银杏叶提取物2-羟丙基-β-环糊精包合物，制成注射剂时大大改善了银杏叶提取物在水中溶解度很小的问题，并提高了银杏叶提取物在水中的稳定性。
具体实施方式
实施例1
制备银杏叶提取物2-羟丙基-β-环糊精包合物片剂
银杏叶提取物                              10g
95％的乙醇                                10ml
2-羟丙基-β-环糊精                         20g
淀粉                                      80g
羧甲基淀粉钠                              10g
10％淀粉糊                                200g
硬脂酸镁                                  5g
取2-羟丙基-β-环糊精20g加380g水并加热到50℃使其溶解，制成2-羟丙基-β-环糊精溶液，取银杏叶提取物10g溶于10ml95％乙醇中，然后将银杏叶提取物醇溶液缓慢滴入2-羟丙基-β-环糊精溶液中并持续搅拌1小时；停止加热，继续搅拌维持1-3小时，搅拌采用电动搅拌装置，转速为40-80转/分钟；停止搅拌将反应液静置，过滤，真空减压干燥，即得银杏叶提取物2-羟丙基-β-环糊精包合物。
取10g银杏叶提取物2-羟丙基-β-环糊精包合物，加入80g淀粉，10g羧甲基淀粉钠，用混料器将其混合均匀，并加入10％淀粉糊200g，制成软材，过16目筛制粒，65-75℃烘干，过18目筛整粒，加入5g硬脂酸镁压片，制成225片，得片剂。
实施例2
制备银杏叶提取物2-羟丙基-β-环糊精包合物颗粒剂
银杏叶提取物                  10g
95％的乙醇                    10ml
2-羟丙基-β-环糊精             40g
淀粉                          200g
糖粉                          200g
20％淀粉糊                    200g
取2-羟丙基-β-环糊精40g加360g水并加热到55℃使其溶解，制成2-羟丙基-β-环糊精溶液，取银杏叶提取物10g溶于10ml95％乙醇中，然后将银杏叶提取物乙醇溶液缓慢滴入2-羟丙基-β-环糊精溶液中搅拌1小时；停止加热，继续搅拌维持1-3小时，搅拌采用电动搅拌装置，转速为40-80转/分钟；停止搅拌将反应液静置，过滤，真空减压干燥，即得银杏叶提取物2-羟丙基-β-环糊精包合物。
取10g银杏叶提取物2-羟丙基-β-环糊精包合物，加入200g淀粉，140g糖粉，用混料器将其混合均匀，并加20％淀粉糊200g，制成软材，过14目筛制粒。将60g糖粉制成30％糖浆，喷于颗粒表面，65-75℃烘干，过16目筛整粒，机包分装，制成225袋，得颗粒剂。
实施例3
制备银杏叶提取物2-羟丙基-β-环糊精包合物小容量注射剂
银杏叶提取物                             10g
95％的乙醇                               10ml
2-羟丙基-β-环糊精                        30g
硫脲                                     2.5g
药用炭                                   2.5g
注射用水                                 2400ml
首先将30g2-羟丙基-β-环糊精加350g水加热到60℃使全部溶解，制成2-羟丙基-β-环糊精溶液；其次将10g银杏叶提取物用95％乙醇10ml溶解，缓慢滴入2-羟丙基-β-环糊精溶液中搅拌1小时；停止加热，继续搅拌维持1-3小时；搅拌采用电动搅拌装置，转速为40-80转/分钟。停止搅拌将反应液静置2小时。至室温后取100ml银杏叶提取物2-羟丙基-β-环糊精包合物用0.22μm的滤器进行过滤，加入2.5g硫脲，2.5g药用炭，加入注射用水1000ml，加热煮沸30分钟，冷却后进行过滤，加入剩余注射用水至2500ml，用PH调节剂将PH值调节至4.5-5.8。过滤至澄清后，灌封于10ml安瓿中，制成250支，即得。
实施例4
制备银杏叶提取物2-羟丙基-β-环糊精包合物大容量注射剂
银杏叶提取物                                10g
95％的乙醇                                  10ml
2-羟丙基-β-环糊精                           20g
氯化钠                                      22.5g
硫脲                                        2.5g
药用炭                                      2.5g
注射用水                                    2400ml
首先将20g2-羟丙基-β-环糊精加180g水加热到50℃使全部溶解，制成2-羟丙基-β-环糊精溶液；其次将10g银杏叶提取物用95％乙醇10ml溶解，缓慢滴入2-羟丙基-β-环糊精溶液中搅拌1小时；停止加热，继续搅拌维持1-3小时；搅拌采用电动搅拌装置，转速为40-80转/分钟。停止搅拌将反应液静置2小时。至室温后取100ml银杏叶提取物2-羟丙基-β-环糊精包合物用0.22μm的滤器进行过滤，加入2.5g硫脲，2.5g药用炭，加入注射用水1000ml，加热煮沸30分钟，冷却后进行过滤，加入剩余注射用水至2500ml，用PH调节剂将PH值调节至4.5-5.8。过滤至澄清后，灌封于100ml输液瓶中，制成25瓶，即得。
实施例5
制备银杏叶提取物2-羟丙基-β-环糊精包合物冻干粉针注射剂
银杏叶提取物                        10g
95％的乙醇                          10ml
2-羟丙基-β-环糊精                   40g
药用炭                              2.5g
注射用水                            1580ml
首先将40g2-羟丙基-β-环糊精加360g水加热到60℃使全部溶解，制成2-羟丙基-β-环糊精溶液；其次将10g银杏叶提取物用95％乙醇10ml溶解，缓慢滴入2-羟丙基-β-环糊精溶液中搅拌1小时；停止加热，继续搅拌维持1-3小时；搅拌采用电动搅拌装置，转速为40-80转/分钟。停止搅拌将反应液静置2小时。至室温后取100ml银杏叶提取物2-羟丙基-β-环糊精包合物用0.22μm的滤器进行过滤，2.5g药用炭，加入注射用水1000ml，加热煮沸30分钟，冷却后进行过滤，加入剩余注射用水至1680ml，用PH调节剂将PH值调节至4.5-5.8。过滤至澄清后，无菌灌装于10ml灭菌的西林瓶中，每支3.7ml，制成450支，冷冻干燥30-48小时，压塞，轧盖，即得。