趋化因子受体活性调节剂及其晶型和制法.pdf

本发明提供MCP-1受体活性的新颖拮抗剂或部分激动剂/拮抗剂：N-((1R，2S，5R)-5-(异丙基(甲基)氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前体药物，其具有所需药理学特性的令人意外的组合；还提供本发明化合物的结晶型式及；含有它们的医药组合物以及使用它们作为药剂以治疗炎性疾病、过敏性、自身免疫、代谢、癌症和/或心血管疾病。本公开内容还提供制备式(I)化合物的方法，该化合物包括N-((1R，2S，5R)-5-(异丙基(甲基)氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺：其中R1、R8、R9、R10和上式(a)均如本文中所述。本文还提供可用于所述方法的中间体的化合物。

1.  一种化合物，N-((1R，2S，5R)-5-(异丙基(甲基)氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺，或其药学上可接受的盐。

2.  权利要求1的化合物，其为N-((1R，2S，5R)-5-(异丙基(甲基)氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺或其药学上可接受盐的结晶型式。

3.  权利要求1-2的结晶型式，其包括N-2型式。

4.  权利要求1-3的结晶型式，其特征为基本上等于下列的单位晶胞参数：
晶胞尺寸：
a＝11.8427(3)
b＝18，1503(7)
c＝12.7923(4)
α＝90
β＝105.362(2)
γ＝90
空间群P2₁
分子/单位晶胞2
其中所述晶体是在约+22℃的温度下。

5.  权利要求1-4的结晶型式，其特征为包含三个或更多个2θ值的粉末x-射线衍射图，该2θ值选自7.2、8.7、9.7、12.5、12.8、13.3、16.0、16.6、18.2和18.8，在约22℃的温度下。

6.  权利要求1-5的结晶型式，其进一步特征为包含四个或更多个2θ值的粉末x-射线衍射图，该2θ值选自7.2、8.7、9.7、12.5、12.8、13.3、16.0、16.6、18.2和18.8，在约22℃的温度下。

7.  权利要求1-6的结晶型式，其特征为基本上如列示于表7中的部分原子坐标。

8.  权利要求1-7的结晶型式，其具有基本上根据图2的粉末x射线衍射图。

9.  一种药物组合物，其包含如权利要求1-8的化合物和药学上可接受的载体或稀释剂。

10.  在哺乳动物中治疗疾病的方法，该方法包括给该哺乳动物施用治疗有效量的权利要求1-9的化合物，其中该疾病选自糖尿病、肥胖、代谢综合症、中风、神经性疼痛、缺血性心肌病、牛皮癣、高血压、硬皮病、骨关节炎、动脉瘤、发热、心血管疾病、克罗恩氏病、充血性心力衰竭、自身免疫疾病、HIV感染、与HIV有关的痴呆症、牛皮癣、特发性肺纤维变性、移植物动脉硬化、物理或化学诱导的脑部创伤、炎性肠疾病、肺泡炎、结肠炎、系统性红斑狼疮、肾毒血清肾炎、肾小球性肾炎、哮喘、多发性硬化、动脉粥样硬化、血管炎、易受伤害性斑块、风湿性关节炎、再狭窄、静脉新血管内膜增生、渗析-移植物新血管内膜增生、动脉-静脉旁路血管内膜增生、器官移植、慢性同种异体移植肾病和癌症。

11.  权利要求10的方法，其中该疾病选自糖尿病、肥胖、克罗恩氏病、系统性红斑狼疮、肾小球性肾炎、多发性硬化、动脉粥样硬化、再狭窄和器官移植。

12.  权利要求10-11的方法，其中该疾病选自多发性硬化、动脉粥样硬化、克罗恩氏病和糖尿病。

13.  权利要求10-12的方法，其中该疾病为糖尿病。

14.  权利要求10-12的方法，其中该疾病为动脉粥样硬化。

15.  权利要求10-12的方法，其中该疾病为克罗恩氏病。

16.  权利要求10-12的方法，其中该疾病为多发性硬化。

17.  制备具有下式(VI)的化合物或其盐的方法：

该方法包括：
使式V化合物与式NH(R⁸)(R⁹)的胺进行还原性胺化，得到式VI化合物，所述还原性胺化包括以下步骤：
(a)将胺与脱水剂在温度约-20°至约+50℃下，添加至在非质子性溶剂中的式V化合物中，以形成式Va的亚胺/烯胺化合物；
和
(b)以氢气压力处理式Va的亚胺/烯胺化合物与铂催化剂5％Pt/S/C的溶液，得到式VI酯化合物；
其中：
R₁和R₂独立地为氢或选自以下的胺-保护基团：BOC、Cbz或苄基；
R₄为C_1-6烷基；并且
R₈和R₉独立地为氢或C_1-6烷基。

18.  权利要求17的方法，其中：
式V化合物是或其盐；
式Va化合物是或其盐，并且
式VI化合物是或其盐。

19.  一种化合物，其选自：

和
或者
(ii)该(i)的盐。

趋化因子受体活性调节剂及其晶型和制法
本申请要求分别于2006年7月28日和2007年3月21日提出的美国临时申请号60/834,235和60/896,026的优先权，此两案公开的内容均并入本文供参考。
发明领域
本发明提供N-((1R，2S，5R)-5-(异丙基(甲基)氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前体药物，其具有所要药理学特性的令人意外的组合。还提供本发明的结晶型。含有它们的医药组合物和使用它们作为药剂以治疗炎性疾病、过敏性、自身免疫、代谢、癌症和/或心血管疾病的方法也是本发明的目的。本公开内容还提供制备式(I)化合物的方法，该化合物包括N-((1R，2S，5R)-5-(异丙基(甲基)氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺：

其中R¹、R⁸、R⁹、R¹⁰和均如本文中所述。本文还提供可用于所述方法的中间体的化合物。
背景技术
趋化因子为分子量6-15kDa的趋化细胞因子，其通过许多种细胞释放，以在其它细胞类型中吸引和活化巨噬细胞、T和B淋巴细胞、嗜酸粒细胞、嗜碱粒细胞及中性粒细胞(综述于：Charo and Rasonhoff，NewEng.J.Med.2006，354，610-621；Luster，New Eng.J.Med.1998，338，436-445；以及Rollins，Blood 1997，90，909-928)。有两种主要趋化因子种类，CXC和CC，依在氨基酸顺序中的最初两个半胱胺酸是被单一氨基酸分隔(CXC)或者为相邻(CC)而定。CXC趋化因子，例如白细胞介素-8(IL-8)、中性粒细胞活化蛋白质-2(NAP-2)及黑色素瘤生长刺激活性蛋白质(MGSA)，主要是对中性粒细胞与T淋巴细胞具有趋化性，而在其它细胞类型中，CC趋化因子例如RANTES、MIP-1α、MIP-1β、单细胞趋化性蛋白质(MCP-1、MCP-2、MCP-3、MCP-4及MCP-5)和嗜酸细胞活化趋化因子(eotaxin)(-1和-2)是针对巨噬细胞、T淋巴细胞、嗜酸粒细胞、树突细胞和嗜碱粒细胞具有趋化性。还存在趋化因子淋巴细胞趋化因子-1、淋巴细胞趋化因子-2(两者均为C趋化因子)以及fractalkine(CX₃C趋化因子)存在，它们并未落在任一种主要趋化因子亚族群中。
这些趋化因子结合到属于G-蛋白质偶合的七跨膜域蛋白质族群的特异性细胞表面受体(综述于：Horuk，Trends Pharm.Sci.1994，15，159-165)，其被称为＂趋化因子受体＂。在结合其同源配位体时，趋化因子受体会经过所缔合的三聚G蛋白质转导细胞内信号，而在其它应答中，造成细胞内钙浓度的快速增加，细胞形状改变，增加细胞粘附分子的表达，去颗粒化作用和细胞迁移的促进作用。有至少十种人类趋化因子受体会对CC趋化因子结合或应答，其具有下列特征型式：(综述于Zlotnik and Oshie Immunity 2000，12，121)：CCR-1(或者＂CKR-1＂或＂CC-CKR-1＂)[MIP-1α、MCP-3、MCP-4、RANTES](Ben-Barruch，et al.，Cell 1993，72，415-425，以及Luster，New Eng.J.Med.1998，338，436-445)；CCR-2A和CCR-2B(或＂CKR-2A＂/＂CKR-2B＂或＂CC-CKR-2A＂/＂CC-CKR-2B＂)[MCP-1，MCP-2，MCP-3，MCP-4，MCP-5](Charo，et al.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 1994，91，2752-2756，以及Luster，New Eng.J.Med.1998，338，436-445)；CCR-3(或＂CKR-3＂或＂CC-CKR-3＂)[嗜酸细胞活化趋化因子-1，嗜酸细胞活化趋化因子-2，RANTES，MCP-3，MCP-4](Combadiere，et al.，J.Biol.Chem.1995，270，16491-16494，以及Luster，New Eng.J.Med.1998，338，436-445)；CCR-4(或者＂CKR-4＂或＂CC-CKR-4＂)[TARC，MDC](Power，et al.，J.Biol.Chem.1995，270，19495-19500，以及Luster，New Eng.J.Med.1998，338，436-445)；CCR-5(或者＂CKR-5＂或＂CC-CKR-5＂)[MIP-α，RANTES，MIP-1β](Sanson，et al.，Biochemistry 1996，35，3362-3367)；CCR-6(或者＂CKR-6＂或＂CC-CKR-6＂)[LARC](Baba，et al.，J.Biol.Chem.1997，272，14893-14898)；CCR-7(或者＂CKR-7＂或＂CC-CKR-7＂)[ELC](Yoshieet al.，J.Leukoc.Biol.1997，62，634-644)；CCR-8(或者＂CKR-8＂或＂CC-CKR-8＂)[I-309](Napolitano et al.，J.Immunol.，1996，157，2759-2763)；CCR-10(或者＂CKR-10＂或＂CC-CKR-10＂)[MCP-1，MCP-3](Bonini，et al.，DNA and Cell Biol.1997，16，1249-1256)；以及CCR-11[MCP-1，MCP-2及MCP-4](Schweickert，et al.，J.Biol.Chem.2000，275，90550)。
除了哺乳动物趋化因子受体以外，已证实哺乳动物巨细胞病毒、疱疹病毒及痘病毒会在受感染细胞中表达蛋白质而具有趋化因子受体的结合性质(综述于：Wells and Schwartz，Curr.Opin.Biotech.1997，8，741-748)。人类CC趋化因子，例如RANTES与MCP-3，可通过这些病毒编码受体造成钙的快速移动。受体表达可通过使正常免疫系统监督和对感染的应答遭到破坏而随意受影响。此外，人类趋化因子受体，例如CXCR4、CCR2、CCR3、CCR5和CCR8，可充当哺乳动物细胞被微生物(与例如人类免疫缺陷病毒(HIV)一样)感染的共受体。
趋化因子及其同源受体作为重要的介质与炎性、感染性及免疫调节病症和疾病有关，所述病症和疾病包括哮喘和过敏性疾病，以及自身免疫病理学疾病，例如风湿性关节炎和多发性硬化；以及代谢疾病，例如动脉粥样硬化和糖尿病(综述于：Charo and Rasonhoff，New Eng.J.Med.2006，354，610-621；Z.Gao and W.A.Metz，Chem.Rev.2003，103，3733；P.H.Carter，Current Opinion in Chemical Biology 2002，6，510；Trivedi，et al，Ann.Reports Med.Chem.2000，35，191；Saundersand Tarby，Drug Disc.Today 1999，4，80；Premack and Schall，NatureMedicine 1996，2，1174)。例如，趋化因子单核细胞化学引诱剂-1(MCP-1)及其受体CC趋化因子受体2(CCR-2)在吸引白细胞至发炎位置及在接着活化这些细胞中发挥关键作用。当趋化因子MCP-1结合至CCR-2时，其会引发胞内钙浓度的快速增加，增加细胞粘附分子的表达，以及促进白细胞迁移。MCP-1/CCR-2相互作用的重要性已通过使用基因变性小鼠的实验提供证明。MCP-1-/-小鼠在数种不同类型的免疫激发后，不能够使单核细胞补充至发炎位置(Bao Lu，et al.，J.Exp.Med.1998，187，601)。同样地，当用各种外源性药剂激发时，CCR-2-/-小鼠不能够补充单核细胞或产生干扰素-γ；再者，CCR-2裸鼠的白细胞不会在对MCP-1的应答中迁移(Landin Boring，et al.，J.Clin.Invest.1997，100，2552)，从而证实MCP-1/CCR-2相互作用的特异性。两个其它组已独立报道了使用不同品系的CCR-2-/-小鼠的相效结果(William A.Kuziel，et al.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 1997，94，12053，以及TakaoKurihara，et al.，J.Exp.Med.1997，186，1757)。MCP-1-/-和CCR-2-/-动物的存活力和一般正常健康状况是值得注意的，因为MCP-1/CCR-2相互作用的中断不会导致生理危象。总之，这些数据得到的结论是，阻断MCP-1/CCR2作用的分子将可用于治疗多种炎性和自身免疫病症(综述于：M.Feria and F.Diaz-González，Exp.Opin.Ther.Patents 2006，16，49；和J.DaWson，W.Miltz，and C.Wiessner，C.Exp.Opin.Ther.Targets 2003，7，35)。如下文所述，此项假说目前已在多种不同动物疾病模型中得到确认。
已知MCP-1在患有风湿性关节炎的患者中被上调节(Alisa Koch，etal.，J.Clin.Invest.1992，90，772-779)。此外，在治疗风湿性关节炎中，多项临床前研究已证实MCP-1/CCR2相互作用的拮抗作用的潜在治疗价值。编码MCP-1的DNA疫苗最近已证实会改善大鼠的慢性多佐剂所引发的关节炎(Sawsan Youssef，et al.，J.Clin.Invest.2000，106，361)。同样地，通过直接给大鼠施用针对MCP-1的抗体，可以控制胶原诱导的关节炎(Hiroomi Ogata，et al.，J.Pathol.1997，182，106)或链球菌细胞壁诱导的关节炎(Ralph C.Schimmer，et al.，J.Immunol.1998，160，1466)的大鼠的疾病症状。可能最显著的是，在关节炎的MRL-1pr小鼠模型中，经证实MCP-1的肽拮抗剂MCP-1(9-76)既会防止疾病发病又会降低疾病症状(取决于施用时间)(Jiang-Hong Gong，et al.，J.ExP.Med.1997，186，131)。此外，在关节炎的啮齿动物模型中，已证实施用小分子CCR2拮抗剂会降低临床评分(C.M.Brodmerkel，et al，J.Immunol.2005，175，5370；以及M.Xia，et al.，美国专利申请0069123，2006)。施用抗CCR2抗体对鼠科动物CIA具有不同作用，这取决于施用时间(H.Bruhl，et al.，J.Immunol.2004，172，890)。最近使用CCR2-/-小鼠的研究已显示CCR2的缺失可在特定实验情况中使啮齿动物关节炎模型更为恶化(M.P.Quinones，et al.，J.Clin.Invest.2004，113，856；M.PQuinones，et al.，J.Mol.Med.2006，84，503)。
已知MCP-1在动脉粥样硬化性病变中被上调节，并且已证实MCP-1的循环水平通过用治疗剂治疗而被降低(Abdolreza Rezaie-Majd，et al，Arterioscler.Thromb.Vasc.Biol.2002，22，1194-1199)。在治疗动脉粥样硬化中，数项关键研究已证实MCP-1/CCR2相互作用的拮抗作用的潜在治疗价值。例如，当MCP-1-/-小鼠与LDL受体-缺陷小鼠杂交时，发现主动脉脂质沉积降低83％(Long Gu，et al.，Mol.Cell 1998，2，275)。同样地，当从已过度表达人类载脂蛋白B的小鼠中基因切除MCP-1时，相对于MCP-1+/+apoB对照小鼠而言，使所得到的小鼠被保护而免于动脉粥样硬化性损伤形成(Jennifa Gosling，et al.，J.Clin.Invest.1999，103，773)。同样地，当CCR-2-/-小鼠与载脂蛋白E-/-小鼠杂交时，发现显著降低动脉粥样硬化性损伤的发生率(Landin Boring，et al，Nature1998，394，894；T.C.Dawson，et al.，Atherosclerosis 1999，143，205)。最后，当载脂蛋白E-/-小鼠被施用一种编码CCR2的肽拮抗剂的基因时，则损伤大小被降低，并且斑块稳定性被增加(W.Ni，et al.，Circulation2001，103，2096-2101)。得自CCR2-/-小鼠的骨髓移植至ApoE3-Leiden小鼠中，会抑制早期动脉粥样硬化形成(J.Guo，et al.，Arterioscler.Thromb.Vasc.Biol.2003，23，447)，但对已发展的损伤具有最小作用(J.Guo，et al.，Arterioscler.Thromb.Vasc.Biol.2005，25，1014)。
患有2型糖尿病的患者通常显示胰岛素抗药性，这是该疾病的标志特征之一。胰岛素抗药性还与称为＂代谢综合症＂或＂综合征X＂的异常族群有关联，该族群包括肥胖、动脉粥样硬化、高血压和脂血障碍(综述于：Eckel，et al.，Lancet 2005，365，1415)。充分明了的是，发炎在使2型糖尿病与＂综合征X＂病理学疾病中的疾病过程更为恶化中发挥作用(综述于：Chen，Pharmacological Research 2006，53，469；Neels andOlefsky，J.Clin.Invest.2006，116，33；Danadona and Aljada，Am JCardiol.2002 90，27G-33G；Pickup and Crook，Diabetologia 1998，41，1241)。MCP-1被认为在肥胖诱发的胰岛素抗药性中发挥作用。在培养物中，人类前脂肪细胞在构成上表达MCP-1(Gerhardt，Mol.Cell.Endocrinology 2001，175，81)。CCR2被表达于脂肪细胞上；在体外，添加MCP-1至经分化的脂肪细胞中，会降低经胰岛素刺激的葡萄糖吸收以及数种脂肪生成基因(LpL，adipsin，GLU-4)、aP2、β3-肾上腺素能受体和PPARγ的表达(P.Sartipy and D.Loskutoff，Proc.Natl.Acad.SciUSA 1999，96，6902)。患有2型糖尿病的患者具有比非糖尿病对照组更高水平的循环MCP-1(S.Nomura，et al.，Clin.Exp.Immunol.2000，121，437)，并且MCP-1从脂肪组织的释放可通过用抗糖尿病治疗剂例如二甲双胍或噻唑烷二酮的治疗而被降低(J.M.Bruun，et al.，J.Clin.Endocrinol.Metab.2005，90，2282)。同样地，MCP-1也在肥胖的鼠科动物实验模型中过表达，并且主要由脂肪组织产生(Sartipy andLoskutoff，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 2003，100，7265)。在肥胖小鼠中，MCP-1的表达既在胰岛素抗药性开始之前，又与其同时地发生(H.Xu，et al.，J.Clin.Invest.2003，112，1821)。另一项研究证实，在小鼠生殖腺周围脂肪组织中MCP-1的表达与体重呈正相关(Weisberg，et al.，J.Clin.Invest.2003，112，1796)。与这些数据一致，胰岛素抗药性在db/db小鼠中的发展是通过MCP-1的基因缺失或通过显性负肽基因诱导的表达而被改善(H.Kanda，et al.，J.Clin.Invest.2006，116，1494)。相反逻辑也可证实：MCP-1在脂肪组织中的过表达会促进胰岛素抗药性(N.Kamei，et al.，J.Biol.Chem.2006，281，26602)。证实MCP-1的基因缺失不会在db/db小鼠中影响胰岛素抗药性的一项矛盾结果也已出现(F.Y.Chow，et al.，Diabetologia 2007，50，471)。与关于MCP-1的数据一致，使用CCR2(MCP-1受体)的直接研究已证实其在肥胖的形成与肥胖诱导的胰岛素抗药性中发挥作用。高脂肪膳食的维持会在野生型小鼠(C.L.Tsou，et al.，J.Clin.Invest.2007，117，902)和ApoE^-/-小鼠(F.Tacke，et al.，J.Clin.Invest.2007，117，185)中增加循环CCR2⁺炎性单细胞的数目。CCR2的基因缺失会减少小鼠脂肪组织中活化的巨噬细胞的数目(C.N.Lumeng，et al.，Diabetes 2007，56，16)，但不会影响被认为会保持＂纤瘦＂状态的M2脂肪巨噬细胞的群体(C.N.Lumeng，et al.，J.Clin.Invest.2007，117，175)。在饮食诱导的肥胖模型中，CCR2的基因缺失会降低饮食诱导的肥胖并且改善胰岛素敏感性(S.P.Weisberg，et al.，J.Clin.Invest.2006，116，115；P Cornelius，RP Gladue，RS Sebastian，WO专利2006/013427 A2，2006)，这取决于实验条件(A.Chen，et al.，Obes.Res.2005，13，1311)。小分子CCR2拮抗剂的施用也会在此相同模型中改善胰岛素敏感性(S.P.Weisberg，et al.，J.Clin.Invest.2006，116，115)。
两项研究描述了CCR2在高血压诱导的血管发炎、重构(remodeling)和肥大中的重要作用(E Bush，et al.，Hypertension 2000，36，360；MIshibashi，et al.，Circ.Res.2004，94，1203)。
已知MCP-1在人类多发性硬化中被向上调节，并且已证实使用干扰素β-1b的有效疗法会降低末梢血液单核细胞中的MCP-1表达，这说明MCP-1在疾病进展中发挥作用(Carla Iarlori，et al.，J.Neuroimmunol.2002，123，170-179)。其它研究已证实，在治疗多发性硬化中，MCP-1/CCR-2相互作用的拮抗作用的潜在治疗价值；所有这些研究已在实验性自身免疫脑脊髓炎(EAE)中被证实，该实验性自身免疫脑脊髓炎为多发性硬化的常用动物模型。将对MCP-1的抗体施用于具有EAE的动物，显著地减少了疾病复发(K.J.Kennedy，et al.，J.Neuroimmunol.1998，92，98)。再者，两份报告已证实CCR-2-/-小鼠对于EAE具抵抗性(B.T.Fife，et al.，J.Exp.Med.2000，192，899；L.Izikson，et al.，J.Exp.Med.2000，192，1075)。后续报告是通过检验来自不同品系的小鼠中CCR2缺失的作用来延伸这些最初观察的(S.Gaupp，et al.，Am.J.Pathol.2003，162，139)。值得注意的是，小分子CCR2拮抗剂的施用也会在C57BL/6小鼠中使疾病进展变得迟钝(C.M.Brodmerkel，et al.，J.Immunol.2005，175，5370)。
已知MCP-1在肺脏移植后发展闭塞性细支气管炎综合征的患者中被向上调节(Martine Reynaud-Gaubert，et al.，J.of Heart and LungTransplant.，2002，21，721-730；John Belperio，et al.，J.Clin.Invest.2001，108，547-556)。在闭塞性细支气管炎综合征的鼠科动物模型中，施用对MCP-1的抗体会导致气道闭塞的减弱；同样地，CCR2-/-小鼠在此相同模型中对于气道闭塞具有抵抗性(John Belperio，et al.，J.Clin.Invest.2001，108，547-556)。这些数据指出，MCP-1/CCR2的拮抗作用可有益于治疗移植后的器官排斥。此外，研究已证实MCP-1/CCR2轴的中断能够延长胰岛移植物的存活(I Lee，et al.，J Immunol 2003，171，6929；R Abdi，et al.，J Immunol 2004，172，767)。在大鼠移植模型中，CCR2和MCP-1经证实在发展移植物血管病的移植物中被向上调节(KHoriguchi，et al.，J Heart Lung Transplant.2002，21，1090)。在另一项研究中，抗-MCP-1基因疗法会减弱移植物血管病(A Saiura，et al.，Artherioscler Thromb Vasc Biol 2004，24，1886)。一项研究描述了通过MCP-1的阻断对实验性静脉移植物新血管内膜形成的抑制作用(HTatewaki，et al.，J Vasc Surg.2007，45，1236)。
其它研究已证实了在治疗哮喘中MCP-1/CCR2相互作用的拮抗作用的潜在治疗价值。在卵清蛋白激发的小鼠中，MCP-1与中和抗体的多价螯合作用会造成支气管高响应性和发炎的显著降低(Jose-AngelGonzalo，et al.，J.Exp.Med.1998，188，157)。已证实可以通过施用对MCP-1的抗体，而在曼氏裂体吸虫(Schistosoma mansoni)卵激发的小鼠中降低过敏性气道发炎(Nicholas W.Lukacs，et al.，J.Immunol.1997，158，4398)。与此一致，MCP-1-/-小鼠显示降低对曼氏裂体吸虫卵激发的应答(Bao Lu，et al.，J.Exp.Med.1998，187，601)。
其它研究已证实，在治疗肾脏疾病中，MCP-1/CCR2相互作用的拮抗作用的潜在治疗价值。在肾小球性肾炎的鼠科动物模型中，施用MCP-1的抗体会造成显著降低肾小球新月体形成和I型胶原的沉积(Clare M.Lloyd，et al.，J.Exp.Med.1997，185，371)。此外，具有经诱导的肾中毒血清肾炎的MCP-1-/-小鼠与其MCP-1+/+相对物相比显示出显著更少的管状损伤(Gregory H.Tesch，et al.，J.Clin.Invest.1999，103，73)。
数项研究已证实，在治疗系统红斑狼疮中，MCP-1/CCR2相互作用的拮抗作用的潜在治疗价值。在系统性红斑狼疮的鼠科动物模型中，CCR2^-/-小鼠与其WT相对物相比显示出延长的存活期与降低的肾病(G.Perez de Lema，et al.，J.Am.Soc.Neph.2005，16，3592)。这些数据与最近研究中针对MCP-1基因缺失所发现的改善疾病的活性一致(S.Shimizu，et al.，Rheumatology(Oxford)2004，43，1121；Gregory H.Tesch，et al.，J.Exp.Med.1999，190，1813)，或者与在狼疮的啮齿动物模型中CCR2肽拮抗剂的施用(H.Hasegawa，et al.，关节炎与风湿病，2003，48，2555)一致。
相对于未患病的回肠，CCR2⁺固有层淋巴细胞的显著30倍增加被发现于克罗恩氏患者的小肠中(S.J.Connor，et al.，Gut 2004，53，1287)。还应注意的是，相对于对照组，在患有活性克罗恩氏病的患者中，在循环CCR2+/CD14+/CD56+单细胞的亚群中有扩大现象。数项啮齿动物研究已证实，在治疗克罗恩氏病/结肠炎中，MCP-1/CCR2相互作用的拮抗作用的潜在治疗价值。CCR-2-/-小鼠被保护而免受葡聚糖硫酸钠诱导的结肠炎的作用(Pietro G.Andres，et al.，J.Immunol.2000，164，6303)。CCR2、CCR5和CXCR3的小分子拮抗剂(小鼠结合亲和力分别＝24、236和369nM)的施用也会保护抵抗葡聚糖硫酸钠诱导的结肠炎(H.Tokuyama，et al.，Int.Immunol.2005，17，1023)。最后，MCP-1-/-小鼠在结肠炎的半抗原诱导的模型中显示基本上降低的结肠伤害(肉眼和组织学两者)(W.I.Khan，et al.，Am.J.Physiol.Gastrointest.LiverPhysiol.2006，291，G803)。
两份报告描述MCP-1在患有炎性肠疾病的患者的肠上皮细胞和肠粘膜中的过表达(H.C.Reinecker，et al.，Gastroenterology 1995，108，40，以及Michael C.Grimm，et al.，J.Leukoc.Biol.1996，59，804)。
一项研究描述MCP-1基因中的启动子多晶型现象与硬皮病(系统性硬化症)的相关性(S Karrer，et al.，J Invest Dermatol.2005，124，92)。在组织纤维变性的相关模型中，CCR2/MCP-1轴的抑制会降低在皮肤(TYamamoto与K Nishioka，J Invest Dermatol，2003，121，510；AM Ferreira，et al.，J Invest Dermatol.2006，126，1900)、肺脏(T Okuma，et al.，J Pathol.2004，204，594；M Gharaee-Kermani，et al.，Cytokine 2003，24，266)、肾脏(K Kitagawa，et al.，Am J Pathol.2004，165，237；T Wada，et al.，J Am Soc Nephrol 2004，15，940)、心脏(S Hayashidani，et al.，，Circulation2003，108，2134)以及肝脏(S Tsuruta，et al.，Int J Mol Med.2004，14，837)中的纤维变性。
一项研究已证实，在治疗肺泡炎中，MCP-1/CCR2相互作用的拮抗作用的潜在治疗价值。当IgA免疫复合肺脏伤害的大鼠以静脉内方式用抗大鼠MCP-1产生的抗体(JE)治疗时，肺泡炎的症状被部分减轻(Michael L.Jones，et al.，J.Immunol.1992，149，2147)。
数项研究已证实，在治疗癌症中，MCP-1/CCR2相互作用的拮抗作用的潜在治疗价值(综述于：M.J.Craig and R.D.Loberg，CancerMetastasis Rev.2006，25，611；I.Conti and B.Rollins，Seminars in CancerBiology 2004，14，149；R.Giles and R.D.Loberg，Curr.Cancer DrugTargets 2006，6，659)。当带有人类乳房癌细胞的免疫缺陷的小鼠用抗-MCP-1抗体治疗时，发现肺脏微转移的抑制以及存活期增加(RosalbaSalcedo，et al.，Blood 2000，96，34-40)。使用人类临床肿瘤样品，CCR2表达与前列腺癌症进展有关(Y.Lu，et al.，J.Cell.Biochem.2007，101，676)。在体外，MCP-1表达已被证实会介导前列腺癌细胞生长和侵入(Y.Lu，et al.，Prostate 2006，66，1311)；再者，通过前列腺癌细胞表达的MCP-1会诱导用于骨质再吸收的人类骨髓原始粒子(Y.Lu，et al.，Cancer Res.2007，67，3646)。
多项研究已描述，在治疗再狭窄中，MCP-1/CCR2相互作用的拮抗作用的潜在治疗价值。在人类中，MCP-1水平直接与再狭窄的危险产生有关(F.Cipollone，et al.，Arterioscler.Thromb.Vasc.Biol.2001，21，327)。缺乏CCR2或MCP-1的小鼠显示动脉损伤后的血管内膜面积与血管内膜/介质比例的降低(相对于野生型小动物伙伴)(Merce Roque，etal.，Arterioscler.Thromb.Vasc.Biol.2002，22，554；A.Schober，et al.，Circ.Res.2004，95，1125；W.J.Kim，et al.，Biochem Biophys ResCommun.2003，310，936)。在小鼠中，MCP-1的显性负抑制剂在骨骼肌中的转染(K.Egashira，et al.，Circ.Res.2002，90，1167)也会降低动脉损伤后的血管内膜增生。CCR2使用中和抗体的阻断会在将支架放置于灵长类动物之后降低新血管内膜增生(C.Horvath，et al.，Circ.Res.2002，90，488)。
两份报告描述具有诱发脑部创伤的MCP-1大鼠的过表达(J.S.King，et al.，J.Neuroimmunol.1994，56，127，以及Joan W.Berman，et al.，J.Immunol.1996，156，3017)。此外，研究已证实CCR2-/-(O.B.Dimitrijevic，et al.，Stroke 2007，38，1345)和MCP-1-/-小鼠(P.M.Hughes，et al.，J.Cereb.Blood Flow Metab.2002，22，308)两者均被部分保护而免受缺血/再灌注损伤。
已知单细胞/巨噬细胞在神经性疼痛的发展上发挥重要作用(Liu T，van Rooijen N，Tracey DJ，Pain 2000，86，25)。与此概念一致，最近已描述CCR2在治疗炎性与神经原性两种疼痛中的潜在作用。相对于其WT相对物而言，CCR2-/-小鼠显示出对炎性疼痛的应答改变，包括足底内(intraplantar)福尔马林注射后的疼痛行为降低以及足底内CFA注射后的机械感觉异常稍微降低(C.Abbadie，et al.，Proc.Natl.Acad.Sci.，USA 2003，100，7947)。此外，CCR2-/-小鼠并未在坐骨神经损伤后显示出显著的机械感觉异常。同样地，小分子CCR2拮抗剂会在口服施用后降低机械感觉异常达到损伤前程度的～80％(C.Abbadie，J.A.Lindia及H.Wang，WO PCT 110376，2004)。
一项研究描述MCP-1在缺血性心肌病中的关键作用(N.G.rangogiannis，et al.，Circulation2007，115，584)。另一项研究描述在MCP-1的抑制后，实验性心脏衰竭的减弱(S Hayashidani，et al.，Circulation2003，108，2134)。
其它研究已提供MCP-1在未于上文提及的各种疾病状态中被过度表达的证据。这些报告提供相关证据显示，MCP-1拮抗剂可能是此种疾病的有用治疗剂。另一项研究已证实MCP-1在啮齿动物心脏同种异体移植物中的过表达，表明MCP-1在移植物动脉硬化的发病原理中的作用(MaryE.Russell，et al.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 1993，90，6086)。MCP-1的过表达已被发现于患有特发性肺纤维变性患者的肺脏内皮细胞中(Harry N.Antoniades，et al.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 1992，89，5371)。同样地，MCP-1的过表达已被发现于患有牛皮癣患者的皮肤中(M.Deleuran，et al.，J.Dermatol.Sci.1996，13，228，以及R.Gillitzer，et al.，J.Invest.Dermatol.1993，101，127)；与CCR2+细胞优势有关的发现也已被报告(C.Vestergaard，et al.，Acta Derm.Venerol.2004，84，353)。最后，最近的报告已证实，MCP-1被过度表达于患有HIV-1相关痴呆症患者的脑部与脑脊髓液中(Alfredo Garzino-Demo，WO99/46991)。
此外，CCR2多晶型现象已被证实至少在患者的一个亚群中与肉状瘤病有关(P.Spagnolo，et al.，Am J Respir Crit Care Med.2003，168，1162)。
还应注意的是，CCR-2已涉及作为一些HIV菌种的共受体(B.J.Doranz，et al.，Cell 1996，85，1149)。还已测定出利用CCR-2作为HIV共受体可与疾病进展产生关联(Ruth I.Connor，et al.，J.Exp.Med.1997，185，621)。此项发现与最近发现一致，该最近发现是，CCR-2突变种CCR2-64I的存在与HIV在人类体群中的延迟发病呈正相关(Michael W.Smith，et al.，Science 1997，277，959)。虽然MCP-1未涉及这些过程，但可能的情况是，通过结合至CCR-2而起作用的MCP-1拮抗剂可具有在HIV感染的患者中延迟此疾病进展成AIDS的有益治疗作用。
应注意的是，CCR2也是人类趋化因子MCP-2、MCP-3和MCP-4的受体(Luster New Eng.J.Med.1998，338，436-445)。由于本文所述式(I)新化合物会通过结合至CCR-2受体而拮抗MCP-1，因此这些式(I)化合物也可以是由CCR-2介导的MCP-2、MCP-3和MCP-4的作用的有效拮抗剂。因此，当于本文中提及＂MCP-1的拮抗作用＂时，是假定它相当于＂CCR-2的趋化因子刺激的拮抗作用＂。
因此，调节趋化因子活性的化合物可证实在治疗炎性、过敏性、自身免疫、代谢、癌症和/或心血管疾病中的广泛用途。美国专利申请公开WO2005021500 A1(并入本文供参考，并且归属于本案申请人)公开了通过CCR2调节MCP-1、MCP-2、MCP-3和MCP-4活性的化合物。该文献还公开了制备这些化合物的各种方法，包括多步骤合成，其包括保护基团的引入和后续移除。
期待发现与已知趋化因子调节剂相比具有改良的药理学特性的新颖化合物。例如，期待发现具有改良的CCR-2抑制活性和对CCR-2相对于其它G蛋白质-偶合受体(意即5HT2A受体)的选择性的新颖化合物。还期待发现具有一种或多种下述种类和有利和改良特性的化合物：
(a)医药性质(意即溶解度、渗透性、对持续释放配方的可顺从性)；
(b)剂量需求(例如，较低剂量和/或每日一次服药)；
(c)降低血液浓度峰顶至峰谷特性的因素(意即清除率和/或分布容积)；
(d)增加活性药物在受体处的浓度的因素(意即蛋白质结合、分布容积)；
(e)降低临床药物-药物相互作用倾向的因素(细胞色素P450酶抑制作用或诱导作用，例如CYP 2D6抑制作用，参阅G.K.Dresser，J.D.Spence，D.G.Bailey，Clin.Pharmacokinet.2000，38，41-57，其在此并入本文供参考)；
(f)降低不良副作用可能性的因素(例如除了G蛋白质-偶合受体以外的药理学选择性、潜在化学或代谢反应性、受限的CNS穿透、离子通道选择性)。特别期待发现具有前述药理学特性的期望组合的化合物。
本领域还期待提供制备这些化合物的新颖和/或改良的方法。这些方法的特征可以(非限制性的)是a)容易改变成较大规模生产，例如试验工厂或制造规模；b)能够改善中间体和/或最后化合物的纯度(包括手性纯度)、稳定性和/或容易处理性的操作步骤和/或技术；和/或c)较少的操作步骤。
发明概述
本发明提供MCP-1受体活性的新颖拮抗剂或部分激动剂/拮抗剂：N-((1R，2S，5R)-5-(异丙基(甲基)氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前体药物，其具有所需药理学特性的令人意外的组合。还提供了本发明化合物的结晶型。含有它们的医药组合物以及使用它们作为药剂以治疗炎性疾病、过敏性、自身免疫、代谢、癌症和/或心血管疾病的方法也是本发明的目的。本公开内容还提供制备式(I)化合物的方法，该化合物包括N-((1R，2S，5R)-5-(异丙基(甲基)氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺：

其中R¹、R⁸、R⁹、R¹⁰和均如本文中所述。本文还提供可用于所述方法的中间体的化合物。
本发明公开内容还提供N-((1R，2S，5R)-5-(异丙基(甲基)氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺或药学上可接受的盐、溶剂合物或前体药物在药剂制造中的用途，该药剂用于治疗炎性疾病、过敏性、自身免疫、代谢、癌症和/或心血管疾病。

附图简述
图1揭示N-((1R，2S，5R)-5-(异丙基(甲基)氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺，二-苯磺酸盐，型式N-1的实验和模拟粉末图。
图2揭示N-((1R，2S，5R)-5-(异丙基(甲基)氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺，游离碱，型式N-2的实验和模拟粉末图。
图3揭示N-((1R，2S，5R)-5-(异丙基(甲基)氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺，游离碱，型式E-1(单-乙醇化物)的实验和模拟粉末图。
图4揭示N-((1R，2S，5R)-5-(异丙基(甲基)氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺，HCl盐，型式H4-1(四水合物)的实验和模拟粉末图。
图5揭示N-((1R，2S，5R)-5-(异丙基(甲基)氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺，游离碱，型式A-1(单-丙酮溶剂合物)的实验和模拟粉末图。
图6揭示N-((1R，2S，5R)-5-(异丙基(甲基)氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺，游离碱，型式DC-1(单-二氯甲烷溶剂合物)的实验和模拟粉末图。
图7揭示N-((1R，2S，5R)-5-(异丙基(甲基)氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺，游离碱，型式AN-3(单-乙腈溶剂合物)的实验和模拟粉末图。
图8揭示N-((1R，2S，5R)-5-(异丙基(甲基)氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺，二-苯磺酸盐，型式N-1的差示扫描量热法分析。
图9揭示N-((1R，2S，5R)-5-(异丙基(甲基)氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺，二-苯磺酸盐，型式N-1的热重分析。
图10揭示N-((1R，2S，5R)-5-(异丙基(甲基)氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺，游离碱，型式N-2的差示扫描量热法分析。
图11揭示N-((1R，2S，5R)-5-(异丙基(甲基)氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺，游离碱，型式N-2的热重分析。
图12揭示N-((1R，2S，5R)-5-(异丙基(甲基)氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺，游离碱，型式N-2的水份吸着等温线。
图13揭示(1R，3R，4S)-3-乙酰胺基-4-((S)-3-(苄氧羰基胺基)-2-氧代吡咯烷-1-基)环己基胺基甲酸叔丁酯的X-射线晶体结构。
图14在hCCR2 KI小鼠中的48小时TG腹膜炎模型：单细胞/巨噬细胞浸润至腹膜腔中的实施例1抑制作用(分类细胞计数)。
图15在hCCR2 KI小鼠中的48小时TG腹膜炎模型：单细胞/巨噬细胞浸润至腹膜腔中的实施例1抑制作用(FACS分析)。
图16在hCCR2 KI小鼠中的EAE：实施例1治疗的临床评分。
详细说明
本发明提供MCP-1受体活性的新颖拮抗剂或部分激动剂/拮抗剂：N-((1R，2S，5R)-5-(异丙基(甲基)氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前体药物，其具有所需药理学特性的令人意外的组合。还提供本发明的结晶型。含有它们的医药组合物以及使用它们作为药剂以治疗炎性疾病、过敏性、自身免疫、代谢、癌症和/或心血管疾病的方法也是本发明的目的。本公开内容还提供制备式(I)化合物的方法，该化合物包括N-((1R，2S，5R)-5-(异丙基(甲基)氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺：

其中R¹、R⁸、R⁹、R¹⁰和均如本文中所述。本文还提供可用于所述方法的中间体的化合物。
N-((1R，2S，5R)-5-(异丙基(甲基)氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺，其令人意外地证实所需药理学特性的组合，包括令人惊讶的高度口服生物利用率和高度地有效且具有优越安全性标准的适应症的组合。
证实足够程度的细胞膜渗透性(口服生物利用率的一项重要因素)的已知CCR2受体调节剂，例如在2005年3月10日公告的专利公报WO2005021500 A1(2007年1月16日授予，归属于本案申请人的美国专利7,163,937)中所揭示的，当通过其CCR2-结合能力(功效的测量法)测量时其不充分有效，和/或当通过hERG与Na+离子通道研究测量时其缺少如通过离子通道选择性所指示的适当安全性标准。
相比之下，如本文中通过下文标题为＂比较药理学特性＂的部分中所提出的数据所示，相对于更具极性的分子，证实N-((1R，2S，5R)-5-(异丙基(甲基)氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺的令人惊讶的高度细胞膜渗透性，并且仍保持有效CCR2结合能力，伴有优越的离子通道选择性。
因此，本发明提供具有经改良药理学特性的新颖趋化因子调节剂，预期其可用于治疗炎性、过敏性、自身免疫、代谢、癌症和/或心血管疾病。
实施方案
在一项实施方案中，公开内容涉及N-((1R，2S，5R)-5-(异丙基(甲基)氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺，及其药学上可接受的盐。
另一项实施方案为N-((1R，2S，5R)-5-(异丙基(甲基)氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺游离碱的结晶型。
另一项实施方案为N-((1R，2S，5R)-5-(异丙基(甲基)氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺游离碱的结晶型，此结晶型包括N-2型式。
另一项实施方案为N-2型式，其特征为(或具有)基本上等于下列的单位晶胞参数：
晶胞尺寸：
a＝11.8427(3)
b＝18.1503(7)
c＝12.7923(4)
α＝90
β＝105.362(2)
γ＝90
空间群P2₁
分子/单位晶胞2
其中该晶体是在约+22℃(RT)的温度下。
另一项实施方案为N-2型式，其特征为(或具有)包含三个或更多个2θ值的粉末x-射线衍射图，该2θ值选自7.2、8.7、9.7、12.5、12.8、13.3、16.0、16.6、18.2和18.8，在约22℃的温度下。
另一项实施方案为N-2型式，其特征为(或具有)进一步包含四个或更多个2θ值的粉末x-射线衍射图，该2θ值选自7.2、8.7、9.7、12.5、12.8、13.3、16.0、16.6、18.2和18.8，在约22℃的温度下。
另一项实施方案为N-2型式，其特征为(或具有)基本上如列示于表7中的部分原子坐标。
另一项实施方案为N-2型式，其特征为(或具有)基本上根据图2的粉末x射线衍射图。
另一项实施方案为N-((1R，2S，5R)-5-(异丙基(甲基)氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺二-苯磺酸盐的结晶型，包括型式N-1，其特征为于表1中所发现的单位晶胞参数；3或4或更多个选自表10的2θ值基本上如列示于表2中的部分原子坐标，和/或基本上根据图1的粉末x-射线衍射图。
另一项实施方案为N-((1R，2S，5R)-5-(异丙基(甲基)氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺游离碱的结晶型，包括型式E-1(单-乙醇化物)，其特征为于表1中所发现的单位晶胞参数；3或4或更多个选自表10的2θ值基本上如列示于表5中的部分原子坐标，和/或基本上根据图3的粉末x-射线衍射图。
另一项实施方案为N-((1R，2S，5R)-5-(异丙基(甲基)氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺HCl盐的结晶型，包括型式H4-1(四水合物)，其特征为于表1中所发现的单位晶胞参数；3或4或更多个选自表10的2θ值基本上如列示于表9中的部分原子坐标，和/或基本上根据图4的粉末x-射线衍射图。
另一项实施方案为N-((1R，2S，5R)-5-(异丙基(甲基)氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺游离碱的结晶型图，包括型式A-1(单-丙酮溶剂合物)，其特征为于表1中所发现的单位晶胞参数；3或4或更多个选自表10的2θ值基本上如列示于表6中的部分原子坐标，和/或基本上根据图5的粉末x-射线衍射图。
另一项实施方案为N-((1R，2S，5R)-5-(异丙基(甲基)氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺游离碱的结晶型，包括型式DC-1(单-二氯甲烷溶剂合物)，其特征为于表1中所发现的单位晶胞参数；3或4或更多个选自表10的2θ值基本上如列示于表3中的部分原子坐标，和/或基本上根据图6的粉末x-射线衍射图。
另一项实施方案为N-((1R，2S，5R)-5-(异丙基(甲基)氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺游离碱的结晶型，包括型式AN-3(单-乙腈溶剂合物)，其特征为于表1中所发现的单位晶胞参数；3或4或更多个选自表10的2θ值基本上如列示于表8中的部分原子坐标，和/或基本上根据图7的粉末x-射线衍射图。
另一项实施方案为N-((1R，2S，5R)-5-(异丙基(甲基)氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺游离碱的结晶型，包括型式THOO-1(单-四氢呋喃溶剂合物)，其特征为于表1中所发现的单位晶胞参数；3或4或更多个选自表10的2θ值和/或基本上如列示于表4中的部分原子坐标。
另一项实施方案为一种医药组合物，包含药学上可接受的载体和实施例的化合物。
另一项实施方案为一种调节趋化因子或趋化因子受体活性的方法，其包括对有需要的患者施用治疗有效量的实施例化合物。
另一项实施方案为一种调节CCR-2受体活性的方法，其包括对有需要的患者施用治疗有效量的实施例化合物。
另一项实施方案为一种调节通过CCR2受体所介导的MCP-1、MCP-2、MCP-3和MCP-4以及MCP-5活性的方法，其包括对有需要的患者施用治疗有效量的实施例化合物。
另一项实施方案为一种调节MCP-1活性的方法，其包括对有需要的患者施用治疗有效量的实施例化合物。
另一项实施方案为一种治疗病症的方法，其包括对有需要的患者施用治疗有效量的实施例化合物，该病症选自糖尿病、肥胖、代谢综合症、中风、神经性疼痛、缺血性心肌病、牛皮癣、高血压、硬皮病(scheroderma)、骨关节炎、动脉瘤、发热、心血管疾病、克罗恩氏病、充血性心力衰竭、自身免疫疾病、HIV感染、与HIV有关联的痴呆症、牛皮癣、特发性肺纤维变性、移植物动脉硬化、物理或化学诱导的脑部创伤、炎性肠疾病、肺泡炎、结肠炎、系统性红斑狼疮、肾毒血清肾炎、肾小球性肾炎、哮喘、多发性硬化、动脉粥样硬化、血管炎、易受伤害性斑块、风湿性关节炎、再狭窄、静脉新血管内膜增生(venousneointimal hyperplasia)、渗析-移植物新血管内膜增生、动脉-静脉旁路血管内膜增生、器官移植、慢性同种异体移植肾病和癌症。
另一项实施方案为一种治疗病症的方法，其包括对有需要的患者施用治疗有效量的实施例化合物，其中该病症选自糖尿病、肥胖、克罗恩氏病、牛皮癣、特发性肺纤维变性、移植物动脉硬化、物理或化学诱导的脑部创伤、炎性肠疾病、肺泡炎、结肠炎、系统性红斑狼疮、肾毒血清肾炎、肾小球性肾炎、哮喘、多发性硬化、动脉粥样硬化与风湿性关节炎、再狭窄、器官移植和癌症。
另一项实施方案为一种治疗病症的方法，其包括对有需要的患者施用治疗有效量的实施例化合物，其中该病症选自糖尿病、肥胖、克罗恩氏病、系统性红斑狼疮、肾小球性肾炎、多发性硬化、动脉粥样硬化、再狭窄和器官移植。
另一项实施方案为一种治疗病症的方法，其包括对有需要的患者施用治疗有效量的实施例化合物，其中该病症选自多发性硬化、动脉粥样硬化、克罗恩氏病和糖尿病。
另一项实施方案为一种治疗病症的方法，其包括对有需要的患者施用治疗有效量的实施例化合物，其中该病症选自再狭窄、器官移植和癌症。
另一项实施方案为一种治疗糖尿病的方法，其包括对有需要的患者施用治疗有效量的实施例化合物。
另一项实施方案为一种治疗克罗恩氏病的方法，其包括对有需要的患者施用治疗有效量的实施例化合物。
另一项实施方案为一种治疗多发性硬化的方法，其包括对有需要的患者施用治疗有效量的实施例化合物。
另一项实施方案为一种治疗动脉粥样硬化的方法，其包括对有需要的患者施用治疗有效量的实施例化合物。
另一项实施方案为一种治疗再狭窄的方法，其包括对有需要的患者施用治疗有效量的实施例化合物。
另一项实施方案为一种治疗器官移植的方法，其包括对有需要的患者施用治疗有效量的实施例1化合物。
另一项实施方案为一种治疗癌症的方法，其包括对有需要的患者施用治疗有效量的实施例1化合物。
另一项实施方案为一种治疗癌症的方法，其中癌症选自乳癌、肝癌、前列腺癌和黑色素瘤。
另一项实施方案为一种治疗炎性疾病、过敏性、自身免疫、代谢、癌症和/或心血管疾病的方法，其包括对有需要的患者施用治疗有效量的实施例1化合物。
另一项实施方案为一种治疗至少部分通过CCR-2所介导的疾病的方法，其包括对有需要的患者施用治疗有效量的实施例1化合物。
另一项实施方案为一种调节CCR2活性的方法，其包括对有需要的患者施用治疗有效量的实施例1化合物。
另一项实施方案为在医药的制剂中的实施例1的化合物，所述制剂用于治疗糖尿病、肥胖、代谢综合症、中风、神经性疼痛、缺血性心肌病、牛皮癣、高血压、硬皮病、骨关节炎、动脉瘤、发热、心血管疾病、克罗恩氏病、充血性心力衰竭、自身免疫疾病、HIV感染、与HIV有关联的痴呆症、牛皮癣、特发性肺纤维变性、移植物动脉硬化、物理或化学诱导的脑部创伤、炎性肠疾病、肺泡炎、结肠炎、系统性红斑狼疮、肾毒血清肾炎、肾小球性肾炎、哮喘、多发性硬化、动脉粥样硬化、血管炎、易受伤害性斑块、风湿性关节炎、再狭窄、静脉新血管内膜增生、渗析-移植物新血管内膜增生、动脉-静脉旁路血管内膜增生、器官移植、慢性同种异体移植肾病和癌症。
另一项实施方案为用于治疗的实施例的化合物。
本发明可在未偏离其精神或基本特质下，以其它特定形式具体体现。本发明还涵盖本文所指出本发明的替代方面和实施方案的所有组合。应明了的是，任何和所有实施方案，均可结合任何其它实施方案，以描述本发明的其它实施方案。再者，一项实施方案的任何要素意欲与来自任何实施方案的任何和所有其它要素合并，以描述其它实施方案。
方法实施方案
在第1项实施方案中，本公开内容提供一种制备式IV化合物或其盐的方法：

此方法包括以下步骤：
使式II的β-氨基酯或其盐与式III的经适当保护的手性α-氨基酸偶合，得到酰胺IV(参阅WO2005021500)；其中：
R_a和R_b独立地为C_1-6烷氧基；
或R_a和R_b和它们均连接的碳一起合并以形成羰基、硫代羰基、环状缩醛或环状硫代缩醛，其中环状缩醛或环状硫代缩醛选自-O-Z-O-与-S-Z-S-，Z为-(CT₁T₂)₂-、-(CT₁T₂)₃-或且T₁、T₂和T₃，在每一存在处，独立地选自氢、C_1-4烷基、C_2-4烯基、卤素、羟基、氰基、硝基、CF₃、OC_1-4烷基、OCF₃、C(＝O)C_1-4烷基和CO₂C_1-4烷基(T₁、T₂和T₃优选各自为氢)；
R₁、R₂和R₃独立地为氢，或胺-保护基团，选自苄氧羰基(Cbz)、叔丁氧羰基(BOC)、芴基甲基氧基羰基(FMOC)、苄基(Bn)和对-甲氧基苄基(PMB)(胺-保护基团优选为Cbz、Bn或BOC，尤其是Cbz或Bn)；
R₄为低级C_1-6烷基或苄基，其任选被C_1-4烷基、C_2-4烯基、卤素、羟基、氰基、硝基、CF₃、OC_1-4烷基、OCF₃和C(＝O)C_1-4烷基取代；
Y为卤素、SR₁₂或OSO₂R₁₃；
X为OH、卤素或OCOR₁₄；
R₁₂为C_1-6烷基、-(CH₂)C(O)OR₁₃或-(CH₂)C(O)R₁₃；
R₁₃在每一存在处为C_1-6烷基或苄基，其任选被C_1-4烷基、C_2-4烯基、卤素、羟基、氰基、硝基、CF₃、OC_1-4烷基、OCF₃和C(＝O)C_1-4烷基取代；并且
R₁₄在每一存在处为氢、C_1-6烷基或苄基，其任选被C_1-4烷基、C_2-4烯基、卤素、羟基、氰基、硝基、CF₃、OC_1-4烷基、OCF₃和C(＝O)C_1-4烷基取代。
当在本文中使用时，任选被取代的苄基是指经过其亚甲基(-CH₂-)连接的苄基，并且任选在连接至亚甲基的苯环上被取代。
在第2项实施方案中，本公开内容提供一种形成式IV产物或其盐的方法，其中：
R_a和R_b和它们均连接的碳原子一起合并以形成羰基或1，3-二氧戊环基团(优选的是，R_a和R_b和它们均连接的碳原子一起合并以形成1，3-二氧戊环基团)；
R₁为氢；
R₂为Cbz；
R₃为氢；
R₄为C_1-6氧烷基；
Y为S(Me)；以及
X为OH。
在第3项实施方案中，本公开内容提供一种方法，其中式II的β-氨基酯为甲苯磺酸盐或氢溴酸盐。优选的式II的β-氨基酯的盐为
的甲苯磺酸盐。
在第4项实施方案中，本公开内容提供一种形成式IV化合物或其盐的方法，其中偶合是在惰性气氛下，例如氮或氩(优选为氮)，在非质子性溶剂中进行，例如丙腈、乙酸异丙酯、乙酸正丁酯、乙酸叔丁酯或乙腈(尤其是乙腈和/或乙酸乙酯)。
在第5项实施方案中，本公开内容提供一种形成式IV化合物或其盐的方法，其中偶合是通过使式II的β-氨基酯与二酰亚胺偶合试剂，在活化剂、经保护的式II的β-氨基酯和叔胺碱存在下接触而完成。二酰亚胺偶合试剂包括例如EDAC的试剂。活化剂的实例包括1-羟基苯并三唑(HOBt；该术语包括其水合物)与N′，N′-4-二甲基氨基-吡啶。叔胺碱包括例如三烷基胺类，例如三乙胺、N，N-二异丙基-N-乙胺和三-正丙基胺。
在第6项实施方案中，本公开内容提供一种形成式IV化合物或其盐的方法，其中二酰亚胺偶合试剂为EDAC，活化剂为HOBt，而叔胺碱为三乙胺或N，N-二异丙基-N-乙胺。
在第7项实施方案中，本公开内容提供一种形成式IV化合物或其盐的方法，其中式II氨基酯比二酰亚胺偶合试剂比活化剂比三级胺的摩尔比分别为一比约0.90-1.50比约0.95-1.50比约2.00至3.00。该摩尔比优选分别为一比约0.95-1.05比约0.95-1.10和比约2.10至2.30。
在第8项实施方案中，本公开内容提供一种制备式V化合物或其盐的方法：

此方法包括以下步骤：
a)使式IV化合物用烷基化剂进行烷基化，以形成经活化的化合物；和
b)使经活化的化合物当场环化，得到式IVa化合物。
在第9项实施方案中，本公开内容提供一种制备式V化合物或其盐的方法，其中步骤a)的烷基化剂为硫烷基化剂，例如C_1-6烷基卤化物，且经活化的化合物为化合物IV的锍盐，其中Y为(C_1-6烷基)R₁₂。优选的是，烷基化剂为碘化甲烷，且Y为(CH₃)₂。
在第10项实施方案中，本公开内容提供一种形成式V化合物或其盐的方法，其中环化步骤包括将经活化的化合物或其盐与碱在溶剂存在下合并。该碱选自碳酸铯、重碳酸铯、碳酸钾、叔丁醇钠或六甲基二硅氮化钠(该碱优选为碳酸铯)。
在第11项实施方案中，本公开内容提供一种形成式V化合物或其盐的方法，其中环化步骤是在惰性气氛下，例如氮或氩，在溶剂中进行，溶剂选自DMSO、DMF、DMA、N-甲基吡咯烷酮和环丁砜。优选的是，惰性气氛为氮，并且溶剂选自DMSO和/或DMF。
在第12项实施方案中，其中式IVa化合物具有缩醛部分基团，意即其中R_a和R_b独立地为C_1-6烷氧基，或和它们所连接的原子一起合并以形成环状缩醛或环状硫代缩醛，本公开内容提供一种形成式V化合物或其盐的方法，其进一步包括使具有缩醛部分基团的式IVa化合物水解的步骤：

以形成式V化合物。
水解步骤可根据本领域技术人元已知使缩醛基团水解的程序进行。例如，水解步骤可包括将式IVa化合物在溶剂中用酸处理，该溶剂例如丙酮、丁酮、乙腈及异丙醇或其水溶液。水解步骤优选包括将式IVa化合物在丙酮水溶液中用盐酸处理。
在第13项实施方案中，本发明本公开内容提供一种制备具有酯部分基团的式VI化合物或其盐的方法：

此方法包括以下步骤：
以还原方式使式V化合物与具有式NH(R⁸)(R⁹)的胺进行胺化，得到式Va的亚胺/烯胺，其中R₈和R₉独立地选自氢和C_1-6烷基。R₈和R₉优选独立地选自C_1-6烷基。胺更优选为N-甲基-N-异丙胺。
在第14项实施方案中，本公开内容提供一种形成式VI产物的方法，其包括以下的还原胺化步骤：
(a)将式NH(R⁸)(R⁹)的胺与脱水剂在温度约-20°至约+50℃下，添加至在非质子性溶剂中的式V化合物内，以形成式Va的亚胺/烯胺；和
(b)以氢气压力处理式Va的亚胺/烯胺与铂催化剂5％ Pt/S/C的溶液，得到式VI化合物。
在第15项实施方案中，本公开内容提供一种形成式VI化合物或其盐的方法，其中步骤a)的脱水剂为路易斯酸/布朗司特酸()(优选为四异丙氧化钛)，并且非质子性溶剂选自二氯乙烷、二氯甲烷、乙腈、DMSO、DMF和N-甲基-吡咯烷酮(优选为二氯甲烷)。
在第16项实施方案中，本公开内容提供一种形成式VI化合物或其盐的方法，其中在步骤b)中，5％ Pt/S/C催化剂是以相对于化合物Va而言在大约0.5至50％(重量/重量)下存在。氢气优选为约15至约35psig的压力。
在第17项实施方案中，本发明提供一种制备式VII化合物或其盐的方法：

此方法包括以下步骤：
使式VI的酯化合物水解，得到式VII的酸化合物。温度范围为约40℃至约100℃(温度范围约50℃至约70℃是最优选的)。酸类选自硫酸、甲苯磺酸、硝酸、甲磺酸、氢溴酸和盐酸。最优选氢溴酸。优选的，水解步骤优选在盐酸水溶液中进行，以获得式VII化合物。
在第18项实施方案中，本公开内容提供一种制备式VII化合物的盐的方法，其进一步包括以下步骤，将碱与式VII酸化合物的溶液混合，任选当场进行。碱优选为碱金属氢氧化物，例如氢氧化钠。
在第19项实施方案中，本公开内容提供一种制备式VIII氨基甲酸酯化合物或其盐的方法：

此方法包括以下步骤：
a)使式VII酸化合物转化成式VIIa异氰酸酯化合物；和
b)使式VIIa异氰酸酯化合物与式R¹⁵OH的醇反应，得到式VIII氨基甲酸酯化合物；
其中R¹⁵为C_1-6烷基或苄基，其任选被C_1-4烷基、C_2-4烯基、卤素、羟基、氰基、硝基、CF₃、OC_1-4烷基、OCF₃和C(＝O)C_1-4烷基取代。R¹⁵优选为叔丁基或未被取代的苄基。
在第20项实施方案中，本公开内容提供一种通过Curtius重排以制备式VIII化合物或其盐的方法，其包括使式VII化合物的钠盐与叠氮化物试剂(优选为叠氮化二苯基磷酰)在含有甲苯的溶剂(优选为叔丁醇)中，在高于热重排触发点的温度下接触。温度优选大于50℃。
在第21项实施方案中，本公开内容提供一种制备式IX化合物或其盐的方法：

此方法包括以下步骤：
a)使式VIII氨基甲酸酯化合物转变成游离胺中间体；和
b)使游离胺中间体与试剂R¹⁰C(O)W当场酰化，得到式IX化合物；
其中：
R¹⁰独立地为C_1-6烷基或苄基，其任选被C_1-4烷基、C_2-4烯基、卤素、羟基、氰基、硝基、CF₃、OC_1-4烷基、OCF₃和C(＝O)C_1-4烷基取代；并且
W为卤素或R¹⁰C(O)-。
R¹⁰C(O)W优选为乙酸酐。
在第22项实施方案中，本公开内容提供一种制备式IX化合物或其盐的方法，其中转变步骤包括以下步骤：
a)以酸处理式VIII化合物的溶液；和
b)添加碱至溶液中，得到游离胺中间体。
优选的该酸选自硫酸、甲苯磺酸、硝酸、甲磺酸、氢溴酸和盐酸，更优选为甲磺酸。优选的是，碱为三烷基胺，优选为三乙胺。
在第23项实施方案中，本公开内容提供一种制备式IX化合物或其盐的替代方法：

此方法包括以下步骤，将式VIIa异氰酸酯化合物在其相应酸R¹⁰C(O)OH存在下任选当场添加至酰化剂(R¹⁰C(O))₂O中，其中R¹⁰独立地为C_1-6烷基或苄基，其任选被C_1-4烷基、C_2-4烯基、卤素、羟基、氰基、硝基、CF₃、OC_1-4烷基、OCF₃和C(＝O)C_1-4烷基取代。R¹⁰优选为C_1-6烷基，尤其是甲基。
在第24项实施方案中，本公开内容提供一种制备式X化合物或其盐的方法：

此方法包括以下步骤：
使经保护的式IX胺化合物去除保护，以提供式X化合物。优选的，当R²为Cbz时，去除保护是通过在钯催化剂存在下氢化完成的。钯催化剂优选为10％ Pd/C。
在第25项实施方案中，本公开内容提供一种制备式I化合物的方法：

此方法包括以下步骤：
使式X化合物与下式化合物偶合：得到式I化合物；
其中：
HET为任选被取代的3-14元杂环基或杂芳基环，其具有一至四个选自N、O或S的杂原子(优选为一至三个杂原子，尤其是一至两个氮原子)在至少一个环中(HET优选为6-取代的喹唑啉-4-基，更优选为6-三氟甲基-喹唑啉-4-基)；并且
LG为离去基团，选自卤素或OSO₂R₁₆(LG优选为卤素，更优选为氯)，其中R₁₆为C_1-6烷基，苯基，具有一或多个选自N、S或O的原子的5-至7-元杂芳基，或者3-至7-元环烷基，其全部均任选被取代(优选的，对于R₁₆的任选取代基为一至三个选自卤素、CF₃和C_1-6烷基的基团)。
在第26项实施方案中，本发明提供一种制备式VIII化合物或其盐的新颖方法：

此方法包括以下步骤：
以还原方式使式V化合物与式NH(R⁸)(R⁹)的胺进行胺化，得到式VI化合物，包括以下步骤：
(a)将胺与脱水剂在温度约-20°至约+50℃下，添加至在非质子性溶剂中的式V化合物中，以形成式Va的亚胺/烯胺化合物；和
(b)以氢气压力处理式Va的亚胺/烯胺化合物和铂催化剂5％ Pt/S/C的溶液，得到式VI酯化合物；
使式VI酯化合物水解，得到式VII酸化合物；
使式VII酸化合物转化成式VIIa异氰酸酯化合物；并且
使式VIIa异氰酸酯化合物与式R¹⁵OH的醇反应，得到式VIII氨基甲酸酯化合物；
其中：
R₁和R₂独立地为氢或胺-保护基团，选自苄氧羰基(Cbz)、叔丁氧羰基(BOC)、芴基甲基氧基羰基(FMOC)、苄基(Bn)和对-甲氧基苄基(PMB)(胺-保护基团优选为Cbz、Bn或BOC，尤其是Cbz或Bn)；
R₄为低级C_1-6烷基或苄基，其任选被C_1-4烷基、C_2-4烯基、卤素、羟基、氰基、硝基、CF₃、OC_1-4烷基、OCF₃和C(＝O)C_1-4烷基取代；
R₈和R₉独立地为氢或C_1-6烷基；
R¹⁵为C_1-6烷基或苄基，其任选被C_1-4烷基、C_2-4烯基、卤素、羟基、氰基、硝基、CF₃、OC_1-4烷基、OCF₃和C(＝O)C_1-4烷基取代(R¹⁵优选为叔丁基或未被取代的苄基，更优选为叔丁基)；
HET为任选被取代的3-14元杂环基或杂芳基环，其具有一至四个选自N、O或S的杂原子(优选为一至三个杂原子，尤其是一至两个氮原子)在至少一个环中(HET优选为6-取代的喹唑啉-4-基，更优选为6-三氟甲基-喹唑啉-4-基)；并且
LG为离去基团，选自卤素或OSO₂R₁₆(LG优选为卤素，更优选为氯)，其中R₁₆为C_1-6烷基，苯基，具有一或多个选自N、S或O的原子的5-至7-元杂芳基，或者3-至7-元环烷基，其全部均任选被取代(优选的，对于R₁₆的任选取代基为一至三个选自卤素、CF₃和C_1-6烷基的基团)。
在第27项实施方案中，本发明提供一种制备式I化合物或其盐的新颖方法：

此方法包括以下步骤：
以还原方式使式V化合物与式NH(R⁸)(R⁹)的胺进行胺化，得到式VI化合物，以还原方式胺化包括以下步骤：
(a)将胺与脱水剂在温度约-20°至约+50℃下，添加至在非质子性溶剂中的式V化合物中，以形成式Va的亚胺/烯胺化合物；和
(b)以氢气压力处理式Va的亚胺/烯胺化合物与铂催化剂5％ Pt/S/C的溶液，得到式VI酯化合物；
使式VI酯化合物水解，得到式VII酸化合物；
使式VII酸化合物转化成式VIIa异氰酸酯化合物；
使式VIIa异氰酸酯化合物与式R¹⁵OH的醇反应，得到式VIII氨基甲酸酯化合物；
使式VIII氨基甲酸酯化合物转变成游离胺中间体；并且
使游离胺中间体以试剂R¹⁰C(O)W当场酰化，
得到经保护的式IX胺化合物；
使经保护的式IX胺化合物去除保护，得到式X化合物；并且
使式X化合物与下式化合物偶合：得到式I化合物；
其中：
R₁和R₂独立地为氢或选自以下的胺-保护基团：苄氧羰基(Cbz)、叔丁氧羰基(BOC)、芴基甲基氧基羰基(FMOC)、苄基(Bn)和对-甲氧基苄基(PMB)(胺-保护基团优选为Cbz、Bn或BOC，尤其是Cbz或Bn)；
R₄为低级C_1-6烷基或苄基，其任选被C_1-4烷基、C_2-4烯基、卤素、羟基、氰基、硝基、CF₃、OC_1-4烷基、OCF₃和C(＝O)C_1-4烷基取代；
R₈和R₉独立地为氢或C_1-6烷基；
R¹⁰独立地为C_1-6烷基或苄基，其任选被C_1-4烷基、C_2-4烯基、卤素、羟基、氰基、硝基、CF₃、OC_1-4烷基、OCF₃和C(＝O)C_1-4烷基取代(优选为C_1-6烷基，更优选为甲基)；
W为卤素或R¹⁰C(O)-；
R¹⁵为C_1-6烷基或苄基，其任选被C_1-4烷基、C_2-4烯基、卤素、羟基、氰基、硝基、CF₃、OC_1-4烷基、OCF₃和C(＝O)C_1-4烷基取代(R¹⁵优选为叔丁基或未被取代的苄基，更优选为叔丁基)；
HET为任选被取代的3-14元杂环基或杂芳基环，其具有一至四个选自N、O或S的杂原子(优选为一至三个杂原子，尤其是一至两个氮原子)在至少一个环中(HET优选为6-取代的喹唑啉-4-基，更优选为6-三氟甲基-喹唑啉-4-基)；并且
LG为离去基团，选自卤素或OSO₂R₁₆(LG优选为卤素，更优选为氯)，其中R₁₆为C_1-6烷基，苯基，具有一或多个选自N、S或O的原子的5-至7-元杂芳基，或者3-至7-元环烷基，其全部均任选被取代(优选的，对于R₁₆的任选取代基为一至三个选自卤素、CF₃和C_1-6烷基的基团)。
在第28项实施方案中，本发明提供一种制备式I化合物或其盐的替代新颖方法：

此方法包括以下步骤：
以还原方式使式V化合物以式NH(R⁸)(R⁹)的胺进行胺化，得到式VI化合物，以还原方式胺化包括以下步骤：
(a)将胺与脱水剂在温度约-20°至约+50℃下，添加至在非质子性溶剂中的式V化合物中，以形成式Va的亚胺/烯胺化合物；和
(b)以氢气压力处理式Va的亚胺/烯胺化合物与铂催化剂5％ Pt/S/C的溶液，得到式VI酯化合物；
使式VI酯化合物水解，得到式VII酸化合物；
使式VII酸化合物转化成式VIIa异氰酸酯化合物；
将式VIIa异氰酸酯化合物，在其相应酸R^10aC(O)OH存在下，任选当场添加至酰化剂(R^10aC(O))₂O中，得到经保护的式IX胺化合物；
使经保护的式IX胺化合物去除保护，得到式X化合物；并且
使式X化合物与下式化合物偶合：得到式I化合物；
其中：
R₁和R₂独立地为氢，或选自苄氧羰基(Cbz)、叔丁氧羰基(BOC)、芴基甲基氧基羰基(FMOC)、苄基(Bn)及对甲氧基苄基(PMB)的胺-保护基团(胺-保护基团优选为Cbz、Bn或BOC，尤其是Cbz或Bn)；
R₄为低级C_1-6烷基或苄基，其任选被C_1-4烷基、C_2-4烯基、卤素、羟基、氰基、硝基、CF₃、OC_1-4烷基、OCF₃和C(＝O)C_1-4烷基取代；
R₈和R₉独立地为氢或C_1-6烷基；
其中R^10a独立地为C_1-6烷基或任选被取代的苄基(R^10a优选为甲基)；
HET为任选被取代的3-14元杂环基或杂芳基环，其具有一至四个选自N、O或S的杂原子(优选为一至三个杂原子，尤其是一至两个氮原子)在至少一个环中(HET优选为6-取代的喹唑啉-4-基，更优选为6-三氟甲基-喹唑啉-4-基)；并且
LG为离去基团，选自卤素或OSO₂R₁₆(LG优选为卤素，更优选为氯)，其中R₁₆为C_1-6烷基，苯基，具有一或多个选自N、S或O的原子的5-至7-元杂芳基，或者3-至7-元环烷基，其全部均任选被取代(优选的，对于R₁₆的任选取代基为一至三个选自卤素、CF₃和C_1-6烷基的基团)。
在第29项实施方案中，本公开内容提供根据任何前文实施方案的方法，其中：
式V化合物为或其盐；
式VI化合物为或其盐；
式VII化合物为或其盐(优选为钠盐)；
式VIII氨基甲酸酯化合物为或其盐；
经保护的式IX胺化合物为或其盐；
经去除保护的式X化合物为或其盐；并且式I化合物为N-((1R，2S，5R)-5-(异丙基(甲基)氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺，或其盐。
在第30项实施方案中，本公开内容提供式V化合物，或其盐：

其中：
R₁和R₂为氢，或者选自BOC、Cbz或苄基的胺-保护基团；并且
R₄为低级C_1-6烷基。
优选的式V化合物为或其盐。
在第31项实施方案中，本公开内容提供式VI化合物，或其盐：

其中：
R₁和R₂独立地为氢，或者选自BOC、Cbz或苄基的胺-保护基团；并且
R4为C_1-6烷基；而且
R⁸和R⁹独立地选自氢或C_1-6烷基。
优选的式VI化合物为或其盐。
在第32项实施方案中，本公开内容提供式VII化合物，或其盐：

其中：
R¹和R²独立地为氢，或者选自BOC、Cbz或苄基的胺-保护基团；并且
R⁸和R⁹独立地选自氢或C_1-6烷基。
优选的式VII化合物为或其盐。
其优选的盐包括碱金属盐，例如式VII化合物的钠盐。
在第33项实施方案中，本公开内容提供式VII化合物，或其盐：

其中：
R¹和R²独立地为氢，或者选自BOC、Cbz或苄基的胺-保护基团；
R⁸和R⁹独立地选自氢或C_1-6烷基；并且
R₁₀为C_1-6烷基或苄基。
优选的式VIII化合物为或其盐。
在第34项实施方案中，本公开内容提供式IX化合物，或其盐：

其中：
R¹和R²独立地为氢，或者选自BOC、Cbz或苄基的胺-保护基团；
R⁸和R⁹独立地选自氢或C_1-6烷基；并且
R₁₀为C_1-6烷基或任选被取代的苄基。
优选的式IX化合物为或其盐。
在第35项实施方案中，本公开内容提供式X化合物，或其盐：

其中：
R¹独立地为氢，或者选自BOC、Cbz或苄基的胺-保护基团；
R⁸和R⁹独立地选自氢或C_1-6烷基；并且
R₁₀为C_1-6烷基或任选被取代的苄基。
优选的式X化合物为或其盐。
在第36项实施方案中，本公开内容提供式II化合物，或其盐：

其中：
R_a和R_b和它们均连接的碳原子一起合并以形成羰基或1，3-二氧戊环基团(优选的是，R_a和R_b和它们均连接的碳原子一起合并以形成1，3-二氧戊环基团)；
R₁为氢；
R₂为Cbz；
R₃为氢；并且
R₄为C_1-6烷氧基。
优选的式II化合物为或其盐。
优选的盐为甲苯磺酸盐或氢溴酸盐，尤其是甲苯磺酸盐。
在第46项实施方案中，本公开内容提供一种方法，其中式I化合物为N-((1R，2S，5R)-5-(异丙基(甲基)氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺或其盐。
本发明可在未偏离其精神或基本特质下，以其它特定形式具体体现。因此，上述实施方案不应被认为是限制。本发明的任何和所有实施方案均可结合任何其它一或多项实施方案以描述其它实施方案。实施方案的各个别要素(例如优选的或特殊的方面)是其自身独立的实施方案。再者，一项实施方案的任何要素意欲与来自任何实施方案的任何和所有其它要素合并，以描述其它实施方案。此外，本发明涵盖本文所指出的本发明的不同实施方案、部分实施方案、定义、说明例和实施例的组合。
定义
下文为本专利说明书和所附权利要求书中所使用术语的定义。对本文中基团或术语所提供的最初定义，在整个本专利说明书和权利要求书中适用于该基团或术语，个别地或作为另一种基团的一部分，除非另有指出。
＂烷基＂一词是指直链或分支链烃基，其具有1至12个碳原子，优选为1至6个碳原子。当数目以下标出现在符号＂C＂之后时，该下标更明确地界定特定基团可含有的碳原子数。例如，＂C_1-6烷基＂是指具有一至六个碳原子的直链与分支链烷基，例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、正戊基等等。下标＂0＂是指一个键。因此，术语羟基(C_0-2)烷基或(C_0-2)羟烷基包括羟基、羟甲基和羟乙基。烷基可被一至三个选自以下的基团取代：(C_1-6)烷基、(C_2-6)烯基、羟基、卤素、氰基、硝基、CF₃、O(C_1-6烷基)、OCF₃、C(＝O)H、C(＝O)(C_1-6烷基)、CO₂H、CO₂(C_1-6烷基)、NHCO₂(C_1-6烷基)、-S(C_1-6烷基)、NH₂、NH(C_1-6烷基)、N(C_1-6烷基)₂、N(CH₃)₃⁺、SO₂(C_1-6烷基)、C(＝O)(C_1-4亚烷基)NH₂、C(＝O)(C_1-4亚烷基)NH(烷基)、C(＝O)(C_1-4亚烷基)N(C_1-4烷基)₂、C_3-7环烷基、苯基、苄基、苯基乙基、苯基氧基、苄氧基、萘基、四-至七-元杂环基和/或五-至六-元杂芳基。当被取代的烷基被芳基、杂环基、环烷基或杂芳基取代时，该环状系统均如下文定义，并且因此可具有零、一、二或三个也如下文定义的取代基。
当＂烷基＂一词与另一种基团一起使用时，例如在＂芳烷基＂中，此搭配更明确地定义被取代烷基将含有的取代基之一。例如，＂芳烷基＂是指如上文定义的取代的烷基，其中至少一个取代基为芳基，例如苄基。因此，芳基(C_0-4)烷基一词包括具有至少一个芳基取代基的取代的低级烷基，并且还包括直接结合至另一个基团的芳基，意即芳基(C₀)烷基。
＂烯基＂一词是指直链或分支链烃基，其具有2至12个碳原子以及至少一个双键。2至6个碳原子并且具有一个双键的烯基是最优选的。烯基可如上文关于烷基所述被取代。
＂炔基＂一词是指直链或分支链烃基，其具有2至12个碳原子以及至少一个叁键。2至6个碳原子并且具有一个叁键的炔基是最优选的。炔基可如上文关于烷基所述被取代。
＂亚烷基＂一词是指二价直链或分支链烃基，其具有1至12个碳原子，优选为1至8个碳原子，例如{-CH₂-}_n，其中n为1至12，优选为1-8。低级亚烷基，意即1至2个碳原子的亚烷基是最优选的。术语＂亚烯基＂和＂亚炔基＂分别指如上文定义的烯基和炔基的二价基团。亚烯基可如上文关于烷基所述被取代。
＂烷氧基＂一词是指被如本文所定义的烷基取代的氧原子。例如，＂烷氧基＂一词包括基团-O-C_1-6烷基。
当下标涉及与烷氧基、硫基烷基或氨基烷基使用时，该下标是指该基团除了杂原子以外可含有的碳原子数。
应明了的是，对于所有基团的选择，包括例如烷氧基、硫基烷基和氨基烷基，将由本领域技术人员执行以提供稳定化合物。
＂羰基＂一词是指二价羰基-C(＝O)-。
＂酰基＂一词是指连结至有机基团的羰基，更特别是基团C(＝O)Re，以及二价基团-C(＝O)Re-，其被连结至有机基团。基团Re可选自如本文定义的烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基，或当合适时，为其相应的二价基团，例如亚烷基。
＂环烷基＂一词是指3至9个，优选为3至7个碳原子的完全饱和和部分不饱和烃环(并且因此包括＂环烯基环＂)。＂环烷基＂一词包括具有零、一、二或三个取代基的环，所述取代基选自(C_1-4)烷基、(C_2-4)烯基、卤素、羟基、氰基、硝基、CF₃、O(C_1-4烷基)、OCF₃、C(＝O)H、C(＝O)(C_1-4烷基)、CO₂H、CO₂(C_1-4烷基)、NHCO₂(C_1-4烷基)、S(C_1-4烷基)、NH₂、NH(C_1-4烷基)、N(C_1-4烷基)₂、N(C_1-4烷基)₃⁺、SO₂(C_1-4烷基)、C(＝O)(C_1-4亚烷基)NH₂、C(＝O)(C_1-4亚烷基)NH(烷基)和/或C(＝O)(C_1-4亚烷基)N(C_1-4烷基)₂。＂环烷基＂一词还包括具有稠合到其上的第二环(例如，包括苯并、杂环基或杂芳基环)或者具有3至4个碳原子的碳-碳桥基的环。
＂卤＂或＂卤素＂术语是指氯、溴、氟及碘。
＂卤烷基＂一词表示具有一或多个卤素取代基的取代的烷基。例如，＂卤烷基＂包括单、双和三氟甲基。
＂卤烷氧基＂一词表示具有一或多个卤素取代基的烷氧基。例如，＂卤烷氧基＂包括OCF₃。
＂杂原子＂一词包括氧、硫和氮。
＂芳基＂一词是指苯基、联苯基、芴基、1-萘基和2-萘基。＂芳基＂一词包括具有零、一、二或三个取代基的环，所述取代基选自(C_1-4)烷基、(C_2-4)烯基、卤素、羟基、氰基、硝基、CF₃、O(C_1-4烷基)、OCF₃、C(＝O)H、C(＝O)(C_1-4烷基)、CO₂H、CO₂(C_1-4烷基)、NHCO₂(C_1-4烷基)、S(C_1-4烷基)、NH₂、NH(C_1-4烷基)、N(C_1-4烷基)₂、N(C_1-4烷基)₃⁺、SO₂(C_1-4烷基)、C(＝O)(C_1-4亚烷基)NH₂、C(＝O)(C_1-4亚烷基)NH(烷基)和/或C(＝O)(C_1-4亚烷基)N(C_1-4烷基)₂。
术语＂杂环基＂或＂杂环族＂是指被取代与未被取代的非芳族(其可为部分或完全饱和)3-至15-元环，其具有一至四个杂原子。这些环可为3-至7-元单环状基团、7-至11-元双环状基团和10-至15-元三环状基团。含有杂原子的杂环基的各环可含有一或两个氧或硫原子和/或一至四个氮原子，其条件是各环中杂原子的总数为四或更少，以及进一步的条件是该环含有至少一个碳原子。完成双环状与三环状基团的稠合环可仅含有碳原子，并且可为饱和、部分饱和或不饱和。氮和硫原子可任选被氧化，并且氮原子可任选被季铵化。杂环基可被连接在任何可使用的氮或碳原子上。杂环基环可含有零、一、二或三个选自以下的取代基：(C_1-4)烷基、(C_2-4)烯基、卤素、羟基、氰基、硝基、CF₃、O(C_1-4烷基)、OCF₃、C(＝O)H、C(＝O)(C_1-4烷基)、CO₂H、CO₂(C_1-4烷基)、NHCO₂(C_1-4烷基)、S(C_1-4烷基)、NH₂、NH(C_1-4烷基)、N(C_1-4烷基)₂、N(C_1-4烷基)₃⁺、SO₂(C_1-4烷基)、C(＝O)(C_1-4亚烷基)NH₂、C(＝O)(C_1-4亚烷基)NH(烷基)和/或C(＝O)(C_1-4亚烷基)N(C_1-4烷基)₂。举例的杂环族基团包括氮杂环丁烷基、吡咯烷基、环氧丙烷基、咪唑啉基、噁唑烷基、异噁唑啉基、噻唑烷基、异噻唑烷基、四氢呋喃基、哌啶基、哌嗪基、2-氧代哌嗪基、2-氧代哌啶基、2-氧代吡咯烷基、2-氧代氮杂环庚烯基、氮杂环庚烯基(azepinyl)、4-哌啶酮基、四氢吡喃基、吗啉基、硫吗啉基、硫吗啉基亚砜、硫吗啉基砜、1，3-二氧戊环、奎宁啶基和四氢-1，1-二氧代噻吩基等。
＂杂芳基＂一词是指被取代与未被取代的芳族3-至14-元环，其在至少一个环中具有一至四个选自O、S或N的杂原子。该环可为5-或6-元单环状基团、9-或10-元双环状基团和11-至14-元三环状基团。含有杂原子的杂芳基的各环可含有一或两个氧或硫原子和/或一至四个氮原子，其条件是各环中杂原子的总数为四或更少，并且各环具有至少一个碳原子。完成双环状与三环状基团的稠合环可仅含有碳原子，并且可为饱和、部分饱和或不饱和。氮和硫原子可任选被氧化，并且氮原子可任选被季铵化。双环状或三环状的杂芳基必须包含至少一个全芳族环，但一个或多个其它稠合环可为芳族或非芳族。杂芳基可被连接在任何环的任何可使用的氮或碳原子上。杂芳基环系统可含有零、一、二或三个选自以下的取代基：(C_1-4)烷基、(C_2-4)烯基、卤素、羟基、氰基、硝基、CF₃、O(C_1-4烷基)、OCF₃、C(＝O)H、C(＝O)(C_1-4烷基)、CO₂H、CO₂(C_1-4烷基)、NHCO₂(C_1-4烷基)、S(C_1-4烷基)、NH₂、NH(C_1-4烷基)、N(C_1-4烷基)₂、N(C_1-4烷基)₃⁺、SO₂(C_1-4烷基)、C(＝O)(C_1-4亚烷基)NH₂、C(＝O)(C_1-4亚烷基)NH(烷基)和/或C(＝O)(C_1-4亚烷基)N(C_1-4烷基)₂。
举例的杂芳基包括吡咯基、吡唑基、吡唑烷基、咪唑基、噁唑基、异噁唑基、噻唑基、噻二唑基、异噻唑基、呋喃基、噻吩基、噁二唑基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、哒嗪基、三嗪基、吲哚基、苯并噻唑基、苯并二氧戊环烯基、苯并噁唑基、苯并噻吩基、喹啉基、四氢异喹啉基、异喹啉基、苯并咪唑基、苯并吡喃基、吲嗪基、苯并呋喃基、色酮基、香豆素基、苯并吡喃基、噌啉基、喹喔啉基、吲唑基、吡咯并吡啶基、呋喃并吡啶基、二氢异吲哚基、四氢喹啉基等。特定杂芳基包括例如6-取代的喹唑啉-4-基和6-三氟甲基-喹唑啉-4-基。
在基团为任选被取代的情况中，其包括被取代与未被取代的基团。
本文所描述的化合物可具有不对称中心。含有不对称取代原子的本发明化合物可以分离成光学活性或外消旋形式。本领域公知如何制备光学活性形式，例如通过外消旋形式的拆分，或通过光学活性起始物质的合成得到。烯烃、C＝N双键等多种几何异构体也可以存在于本文所述的化合物中，并且所有这些稳定的异构体均意欲涵盖在本发明中。本发明化合物的顺式和反式几何异构体被描述为并且可以被分为异构体的混合物或为分离的异构体形式。一种结构的所有手性、非对映异构体、外消旋形式和所有几何异构形式均是希望的，除非明确指示特定立体化学或异构物形式。
本文中所揭示化合物的一种对映体与另一种比较可显示优越的活性。因此，所有立体化学物质均被认为是本发明的一部分。当需要时，外消旋物质的分离可通过HPLC使用手性柱而完成，或者通过使用拆分试剂例如氯化樟脑磺酰拆分而完成，如Steven D.Young et al.，Antimicrobial Agents and Chemotherapy，1995，2602-2605。
本文中使用的＂药学上可接受＂的措辞，是指在合理的医学判断的范围内，适用于与人类和动物的组织接触而不会有过度毒性、刺激性、过敏性应答或其它问题或并发症，并有合理的利益/风险比的化合物、物质、组合物和/或剂型。
本文中使用的＂药学上可接受的盐＂是指所揭示化合物的衍生物，其中该母体化合物通过制造其酸或碱盐而被修饰。药学上可接受盐的实例，包括但不限于碱性残基例如胺类的矿酸盐或有机酸盐；酸性残基例如羧酸类的碱或有机盐；等等。药学上可接受的盐，包括母体化合物的常用无毒性盐或季铵盐，例如来由无毒性无机酸或有机酸的盐。例如，这些常用的无毒性盐包括衍生自无机酸的盐，无机酸例如盐酸、苯磺酸、氢溴酸、硫酸、胺基磺酸、磷酸、硝酸等；以及由有机酸制得的盐，有机酸例如乙酸、丙酸、琥珀酸、乙醇酸、硬脂酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、抗坏血酸、双羟萘酸、顺丁烯二酸、羟基顺丁烯二酸、苯基乙酸、麸胺酸、苯甲酸、柳酸、磺胺酸、2-乙酰氧基苯甲酸、反丁烯二酸、甲苯磺酸、甲磺酸、乙烷二磺酸、草酸、羟乙磺酸等。
本发明药学上可接受的盐可以从含有碱性或酸性部分的母体化合物通过常规化学方法合成得到。一般而言，这些盐可以在水中或在有机溶剂中或在此两者的混合物中，通过使这些化合物的游离酸或碱形式与化学计量的适宜碱或酸反应而制成；一般而言，非水性介质例如醚、乙酸乙酯、乙醇、异丙醇或乙腈是优选的。适合的盐的列举可参阅Remington’s Pharmaceutical Sciences，17th ed.，Mack PublishingCompany，Easton，PA，1985，p.1418，其公开内容并入本文供参考。
由于已知前体药物会提高许多需要的医药质量(例如溶解度、生物利用率、制造等...)，故本发明化合物可以前体药物形式递送。因此，本发明系意欲涵盖目前所主张的化合物的前体药物，它们的递送方法和含有它们的组合物。＂前体药物＂意欲包括任何共价结合的载体，当此种前体药物被施用于哺乳动物患者时，其会在体内释放本发明的活性母体药物。本发明中的前体药物是通过改变存在于化合物中的官能基而制成的，其方式是在例行操作中或在体内使这些修饰分裂成母体化合物。前体药物包括本发明的化合物，其中羟基、氨基或巯基结合至任何基团，当本发明的前体药物被施用于哺乳动物患者时，其会分别分裂而形成游离羟基、游离胺基或游离巯基。前体药物的实例包括但不限于在本发明化合物中的醇与胺官能基的乙酸酯、甲酸酯和苯甲酸酯衍生物。
＂稳定化合物＂与＂稳定结构＂意欲表示一种化合物，其足够强健而从反应混合物中留存着，分离至有用的纯度，以及配制成有效治疗剂。本发明意欲具体体现稳定化合物。
＂治疗有效量＂意欲包括本发明化合物单独的量，或者所主张的化合物的组合的量，或者本发明化合物与其它有效抑制MCP-1或有效治疗或预防本文中所讨论的病症的活性成份的量。
本文中使用的＂治疗＂或＂治疗＂涵盖在哺乳动物特别是人类中的疾病状态的治疗，并且包括：(a)预防该疾病状态发生于哺乳动物中，特别是当此种哺乳动物易罹患该疾病状态，但尚未被诊断为具有该疾病时；(b)抑制该疾病状态，意即遏制其发展；和/或(c)减轻该疾病状态，意即造成该疾病状态的退化。
本文中使用以指称特定型式例如＂N-2＂的名称，不应被认为是限制有关具有类似或相同物理和化学特性的任何其它物质，而是应理解为这些指称仅仅是鉴别符号，其应根据本文中提出的表征信息加以解释。
本发明提供作为一种新颖物质的N-((1R，2S，5R)-5-(异丙基(甲基)氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺的游离碱的结晶型，特别是呈药学上可接受的型式。在某些优选实施方案中，游离碱的结晶型呈基本上纯净的型式。游离碱的优选实施方案公开于实施例中，例如N-2、DC-1、THOO-1、E-1、A-1和AN-3。
本发明还提供一种新颖物质的N-((1R，2S，5R)-5-(异丙基(甲基)氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺的盐的结晶型，特别是呈药学上可接受的型式。在某些优选实施方案中，盐的结晶型呈基本上纯净的型式。盐的优选实施方案公开于实施例中，例如二-苯磺酸盐的N-1型式，和HCl盐的H4-1型式。
本文中使用的＂多晶型物＂是指形成晶体的分子、原子和/或离子具有相同化学组成但不同空间排列的结晶型。
本文中使用的＂溶剂合物＂是指分子、原子和/或离子的结晶型，其进一步含有被并入晶体结构中的一种或多种溶剂的分子。在溶剂合物中的溶剂分子可以规则排列和/或非有序排列存在。溶剂合物可含有无论是化学计量或非化学计量的溶剂分子的量。例如，具有非化学计量的溶剂分子的量的溶剂合物可以从溶剂合物部分损失溶剂得到。
本文中使用的＂非晶型＂是指不是结晶性的分子、原子和/或离子的固体形式。非晶型固体不会显示明确的X-射线衍射图。
本文中使用的＂基本上纯净＂，当参考结晶型使用时，表示以化合物重量为基准，化合物具有纯度大于90重量％，包括大于90、91、92、93、94、95、96、97、98和99重量％，也包括等于约100重量％的化合物I。其余物质包括该化合物的其它型式，和/或由于其制备而产生的反应杂质和/或操作杂质。例如，N-((1R，2S，5R)-5-(异丙基(甲基)氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺(游离碱或盐)的结晶型，当通过目前已知并且本领域通常接受的方式测量时，可被视为基本上纯净，因其具有纯度大于90重量％，其中其余小于10重量％的物质包含N-((1R，2S，5R)-5-(异丙基(甲基)氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺(游离碱或盐)的其它型式，和/或反应杂质和/或操作杂质。
结晶型的样品可具有基本上纯净的相均一性，这显示有优势量的单晶型式和任选少量的一种或多种其它结晶型存在。超过一种结晶型存在于样品中，其可通过例如粉末X-射线衍射(PXRD)或固态核磁共振光谱学(SSNMR)的技术测定。例如，在以实验方式测量的PXRD图和模拟PXRD图的比较中，额外吸收峰的存在可表示超过一种结晶型在样品中。模拟PXRD可以从单晶X-射线数据算得。参阅Smith，D.K.，“AFORTRAN Program for Calculating X-Ray Powder Diffraction Patterns，”Lawrence Radiation Laboratory，Livermore，California，UCRL-7196(April1963)。
优选地，结晶型具有基本上纯净的相均一性，如通过在以实验方式测量的PXRD图中，由模拟PXRD图中不存在的额外吸收峰所产生的总吸收峰面积低于10％，优选低于5％，并且更优选低于2％所显示的。最优选的是一种这样的结晶型，其具有基本上纯净的相均一性，其在以实验方式测量的PXRD图中，由模拟PXRD图中不存在的额外吸收峰所产生的总吸收峰面积低于1％。
制备结晶型的操作是本领域已知的。结晶型可通过多种方法制备，包括例如从适宜溶剂中结晶或重结晶，升华作用，从熔融体生长，从另一相的固态转变，从超临界流体结晶，以及喷射喷雾。结晶型来自溶剂混合物的结晶或重结晶化的技术，包括例如溶剂的蒸发，降低溶剂混合物的温度，将晶体播种到分子和/或盐的过饱和溶剂混合物中，使溶剂混合物冻干，以及将反溶剂(反萃溶剂)添加至溶剂混合物中。
该型式可使用单晶X-射线衍射表征和区别，其是以一种型式的单晶在固定分析温度下的单位晶胞测量为基础。单位晶胞的详细说明提供于Stout & Jensen，X-Ray Structure Determination：A Practical Guide，Macmillan Co.，New York(1968)，Chapter 3，其并入本文供参考。或者，原子在晶格内空间关系上的独特排列，可根据所发现的部分原子坐标来表征。另一种表征晶体结构的方式是通过粉末X-射线衍射分析进行的，其中将实验或所发现的衍射分布形态与代表性的纯粉末物质的模拟分布形态作比较，两者均在相同分析温度下操作，并且主题型式的测量值以一系列2θ值表征。
可使用表征该型式的其它方式，例如固态核磁共振(SSNMR)、差示扫描量热法和热重分析。这些参数还可合并使用以表征主题型式。
本文中使用的＂可忽视的重量损失＂一词，当通过TGA表征时，显示存在纯(非溶剂化的)结晶型。
本文中使用的＂可忽视的％吸水率＂一词，当通过水份吸着等温线表征时，显示经测试的型式为非吸湿性。
在本发明的一项实施方案中，N-((1R，2S，5R)-5-(异丙基(甲基)氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺(游离碱或盐)的结晶型是以基本上纯净的形式提供的。此结晶型可被使用于医药组合物中，该医药组合物可任选包含一种或多种其它选择的成份，例如选自赋形剂、载体以及其它不同分子结构的活性医药成份或活性化学个体之一。
优选地，结晶型具有基本上纯净的相均一性，如通过在以实验方式测量的PXRD图中，由模拟PXRD图中不存在的额外吸收峰所产生的总吸收峰面积低于10％，优选低于5％，并且更优选低于2％所显示的。最优选的是一种这样的结晶型，其具有基本上纯净的相均一性，其在以实验方式测量的PXRD图中，由模拟PXRD图中不存在的额外吸收峰所产生的总吸收峰面积低于1％。
在另一项实施方案中，提供了一种组合物，其包含基本上结晶型的N-((1R，2S，5R)-5-(异丙基(甲基)氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺(游离碱或盐)。此项实施方案的组合物可包含至少90重量％该型式，以其在组合物中的重量为基准。
反应杂质和/或操作杂质的存在可通过本领域已知的分析技术测定，例如色谱法、核磁共振光谱法、质谱法或红外光谱法。
结晶型可通过多种方法制备，包括例如从适宜溶剂中结晶或重结晶，升华作用，从熔融体生长，从另一相的固态转变，从超临界流体结晶，以及喷射喷雾。结晶型来自溶剂混合物的结晶或重结晶化的技术，包括例如溶剂的蒸发，降低溶剂混合物的温度，将晶体播种到分子和/或盐的过饱和溶剂混合物中，使溶剂混合物冻干，以及将反溶剂(反萃溶剂)添加至溶剂混合物中。可使用高通过量结晶技术来制备结晶型(包括多晶型物)。
药物的晶体(包括多晶型物)、制备方法、以及药物晶体的表征，讨论于Solid-State Chemistry of Drugs，S.R.Byrn，R.R.Pfeiffer，and J.G.Stowell，2nd Edition，SSCI，West Lafayette，Indiana(1999)。
对于使用溶剂的结晶技术，一种或多种溶剂的选择通常取决于一种或多种因素，例如化合物的溶解度、结晶技术以及溶剂的蒸气压。可使用溶剂的组合；例如，可使化合物溶解至第一溶剂中得到溶液，接着添加反溶剂以降低化合物在溶液中的溶解度，再获得晶体的形成。＂反溶剂＂是化合物在其中具有低溶解度的溶剂。制备晶体的适宜溶剂包括极性溶剂和非极性溶剂。
在一种制备晶体的方法中，使N-((1R，2S，5R)-5-(异丙基(甲基)氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺(为游离碱或盐)悬浮和/或搅拌于适宜溶剂中，得到浆液，可将其加热以促进溶解。本文中使用的＂浆液＂一词表示饱和溶液，其还可含有另一数量的固体，得到在给定温度下的不均匀混合物。关于这方面的适宜溶剂包括，例如，极性非质子性溶剂和极性质子性溶剂，以及它们的两种或多种的混合物，如本文中所公开的。
可将种子晶体添加至任何结晶混合物中以促进结晶。正如本领域技术人员理解的，使用晶种播种作为一种控制特定结晶型生长的方式，或作为一种控制结晶性产物粒子大小分布的方式。因此，所需晶种量的计算取决于可使用晶种的大小和平均产物粒子的所需大小，例如在“Programmed cooling of batch crystallizers，”J.W.Mullin and J.Nyvlt，Chemical Engineering Science(1971)26：369-377中描述的。一般而言，需要小尺寸晶种以有效地控制晶体在批次中的生长。小尺寸晶种可通过较大晶体的筛滤、研磨或微粉化，或通过溶液的微结晶作用而产生。应当注意，晶体的研磨或微粉化不会造成所需结晶型在结晶度上的任何改变(意即改变成非晶型或另一种多晶型物)。
可以在真空下将冷却的混合物过滤，并且可将分离的固体用适宜溶剂(例如冷的重结晶溶剂)洗涤，再在氮气吹扫下干燥，得到所需的结晶型。分离的固体可通过适宜的光谱或分析技术分析，例如SSNMR、DSC、PXRD或其类似方式，以确保产物的优选结晶型形成。所形成的结晶型通常以大于约70重量％分离产率，但优选大于90重量％的量制成，以最初被使用于结晶操作中的N-((1R，2S，5R)-5-(异丙基(甲基)氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺(游离碱或盐)的重量为基准。如果必要，此产物可经共研磨或过筛，以去除产物团块。
结晶型可直接从制备N-((1R，2S，5R)-5-(异丙基(甲基)氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺(游离碱或盐)的最后处理步骤的反应介质中制备。这可例如通过在最后处理步骤中使用化合物可从其中结晶的溶剂或溶剂混合物来完成。或者，结晶型可通过蒸发或溶剂添加技术获得。为此目的使用的适宜溶剂，包括本文中所述的任何溶剂，包括质子性极性溶剂如醇类，以及非质子性极性溶剂如酮类。
以下述作为一般指导，可将反应混合物过滤以移除任何不期望的杂质、无机盐等，接着用反应或结晶溶剂洗涤。可使所形成的溶液浓缩，以移除过量溶剂或气态组份。若使用蒸馏，则所收集的馏出物的最后量可以改变，这取决于包括例如以下的操作因素：容器大小、搅拌能力等。以下述作为一般指导，在进行溶剂置换之前，可使反应溶液蒸馏至原先体积的约1/10。可根据标准操作技术，将反应物取样并检测，以测定反应的程度和重量％产物。如果需要，可添加或移除其它反应溶剂，以使反应浓度达到最佳。最终浓度优选被调整至约50重量％，此时通常形成浆液。
优选可直接添加溶剂至反应容器，而无需蒸馏反应混合物。为此目的使用的优选溶剂是可以在最后参入到晶格中的，如上文关于溶剂交换所讨论的。虽然最终浓度可依所需的纯度、回收等而改变，但游离碱在溶液中的最终浓度，优选为约4％至约7％。可将反应混合物在溶剂添加之后搅拌，并且同时温热。以下述作为说明，可将反应混合物搅拌约1小时，同时温热至约70℃。反应优选经热过滤，并用反应溶剂、添加的溶剂或其组合洗涤。可添加种子晶体至任何结晶溶液中，以引发结晶。
本文中所述的各种型式可通过利用本领域技术人员已知的各种分析技术来使它们相互区别。这些技术包括但不限于粉末X-射线衍射(PXRD)、差示扫描量热法(DSC)和/或热重分析(TGA)。或者，这些型式可使用单晶X-射线衍射来表征和区别，其是以一种给定型式的单晶在固定分析温度下的单位晶胞测量为基础。单位晶胞的详细说明提供于Stout & Jensen，X-Ray Structure Determination：A Practical Guide，Macmillan Co.，New York(1968)，Chapter 3，其并入本文供参考。具体地说，原子在晶格内在空间关系上的独特排列可根据所发现的部分原子坐标表征。另一种表征晶体结构的方式是通过粉末x-射线衍射分析，其中将所发现的衍射分布形态与单晶结构数据产生的模拟分布形态作比较。有关主题型式的粉末x-射线衍射测量值被表征为一系列2θ值(通常为四个或更多个)。
可使用表征此型式的其它方式，例如固态核磁共振(SSNMR)波谱法、差示扫描量热法(DSC)、热相图法(thermography)以及结晶性或非晶型型态学的总体检测。这些参数也可合并使用，以表征主题型式。
本领域普通技术人员将理解，可以获得具有测量误差的X-射线衍射图，其取决于所使用的测量条件。特别是，一般已知X-射线衍射图中的强度可能波动，这取决于所使用的测量条件以及晶体的形状或型态学。应进一步理解的是，相对强度还可根据实验条件而改变，因此确切的强度级数不应考虑在内。此外，有关常用X-射线衍射图衍射角度的测量误差，通常为约0.2°2θ值或更低，优选为约0.1°2θ值(如后文所讨论)，并且此种程度的测量误差应考虑在内，例如有关前文所提及的衍射角度。因此，应理解的是，本发明的结晶型并不限于提供X-射线衍射图完全相同于本文所公开的附图中所描绘的X-射线衍射图的结晶型。提供X-射线衍射图基本上相同于附图中所公开的任何结晶型均落在本发明的范围内。确定X-射线衍射图基本上相同的能力是在本领域技术人员的视界范围内。
合成
图式1：酰胺IV的制备

使用本领域已知的方法，将式II的β-氨基酯或其盐(包括甲苯磺酸盐或氢溴酸盐)与适当保护的式III手性α-氨基酸偶合，得到酰胺IV。参阅，例如WO2005021500中的制备。此偶合反应可以用二酰亚胺试剂，在活化剂和叔胺碱存在下，在惰性气氛例如氮或氩(优选为氮)气下，在非质子性溶剂例如丙腈、乙酸异丙酯、乙酸正丁酯、乙酸叔丁酯或乙腈(尤其是乙腈和/或乙酸乙酯)中进行。该二酰亚胺偶合试剂包括例如EDAC的试剂。活化剂的实例包括1-羟基苯并三唑(HOBt；该术语包括其水合物)和N′，N′-4-二甲基氨基-吡啶。叔胺碱包括例如三乙胺、N-N-二异丙基-N-乙胺和三-正丙基胺。式II氨基酯比二酰亚胺偶合试剂比活化剂比三级胺的摩尔比分别为1比约0.90-1.50比约0.95-1.50比约2.00至3.00。该摩尔比优选分别为1比约0.95-1.05比约0.95-1.10和比约2.10至2.30。
选择β-氨基酯，以便使R_a和R_b为烷氧基或烷基硫醇化物基团，或与它们所连接的碳原子一起形成羰基，或形成环状或非环状缩醛或硫代缩醛，优选为1，3-二氧戊环基团。R₄为C_1-6烷基，优选为乙基。
式III手性α-氨基酸并入可官能化的末端残基Y，其表示或可加工成烷基化基团，该烷基化基团适用于稍后Y所连接的侧链末端碳在酰胺氮上的环化，因此，Y可选自例如以下的基团：卤素、SMe或OSO₂R₁₂，其中R₁₂为C_1-6烷基、-(CH₂)C(O)OR₁₃或-(CH₂)C(O)R₁₃；并且R₁₃在每一存在处为C_1-6烷基。X为OH、卤素或OCOR₁₄，其中R₁₄为C_1-6烷基。对于式III手性α-氨基酸的适宜保护基团R₁和R₂独立地选自氢或胺-保护基团，其可在标准条件下通过水解或氢解而被移除。这些基团包括但不限于苄氧羰基(Cbz)、叔丁氧羰基(BOC)、芴基甲基氧基羰基(FMOC)、苄基(Bn)或对-甲氧基苄基(PMB)。优选基团为Cbz、BOC或Bn基团。Cbz为最优选。
图式2：式IV酰胺的制备

式V化合物是通过使烷基化部分基团Y与酰胺氮的环化以形成吡咯烷酮环而制成的，在该转变期间，Y充当离去基团。在一项优选实施方案中，烷基化部分基团表示锍盐( Y = S ⊕ ( Me ) R 13 , ]]>其中R₁₃为C_1-6烷基、苄基或被取代的苄基，最优选甲基)，该锍盐是通过使用本领域已知的硫-烷基化剂(例如C_1-6烷基或苄基卤化物，优选为碘化甲烷)活化甲硫胺酸衍生的酰胺IV(Y＝SMe)所产生的。参阅，例如Freidinger，et al.，J.Org.Chem.1982，47，10。
环化作用是在惰性气氛例如氮或氩(优选为氮)气下、在溶剂中通过使化合物IV或其盐与碱在非质子性溶剂存在下接触而进行。这些碱可以为例如但不限于碳酸铯、重碳酸铯、碳酸钾、叔丁醇钠或六甲基二硅氮化钠，尤其是碳酸铯。非质子性溶剂包括例如但不限于DMSO、DMF、DMA、N-甲基吡咯烷酮(NMP)和环丁砜，优选为DMSO和/或DMF。
在R_a和R_b独立地为C_1-6烷氧基或者与它们所连接的原子一起合并以形成环状或非环状缩醛或硫代缩醛的情况下，该缩醛基团是根据本领域已知的方法通过去除保护而被移除，以形成羰基。对于缩醛，去除保护可通过水解作用进行，优选在溶剂例如丙酮、丁酮、乙腈和异丙醇或其水溶液中进行，并且优选在丙酮水溶液中进行。其中该缩醛去除保护需要质子酸类，例如硫酸、甲苯磺酸、硝酸、甲磺酸、氢溴酸或盐酸，盐酸是最优选的。
图式3：化合物V的还原胺化作用

化合物VI是在两个步骤中通过还原方式使式V化合物胺化而制成，其方式是(a)将胺NH(R₈)(R₉)和脱水剂添加至式V在非质子性溶剂中的溶液中，并在-20°至+50℃的温度下混合，以形成式Va的亚胺/烯胺；和(b)在氢气压力下，以铂催化剂处理式Va亚胺/烯胺的溶液，该铂催化剂优选含有去活化剂，例如硫，优选为5％ Pt/C/S。胺取代基R₈和R₉独立地选自氢和C_1-6烷基。式NH(R₈)(R₉)胺优选为N-甲基-N-异丙胺。脱水剂为路易斯酸/酸脱水作用促进剂，其包括但不限于钛试剂，优选为四氯化钛或四异丙氧化钛或其混合物(尤其是四异丙氧化钛)。参阅，例如R.Mattson，et al.，J.Org.Chem.1990，55，2552-2554。非质子性溶剂可选自例如但不限于以下的溶剂：二氯乙烷、二氯甲烷、乙腈、DMSO、DMF和N-甲基-吡咯烷酮(优选为二氯甲烷)。优选地，在15-35psig的压力和5％Pt/S/C下，在相对于化合物V为大约0.5至50％(重量/重量)下，用氢气处理中间体亚胺/烯胺Va在二氯甲烷中的溶液。最优选范围为5-10％(重量/重量)。
图式4：式VII的γ-氨基酸或其盐的制备

使式VI化合物的酯水解以获得相应的式VII酸或其盐。水解作用可通过使用本领域公知的方法经碱水解而进行，或者，在高温下使用酸类水溶液以获得其相应的式VII的γ-氨基酸。酸水解作用是最优选的。温度范围为约40℃至约100℃(约50℃至约70℃的温度范围是最优选的)。酸类选自但不限于硫酸、甲苯磺酸、硝酸、甲磺酸、氢溴酸或盐酸。盐酸是最优选的。式VII化合物可任选被转化成其羧酸盐。VII优选被转化成其钠盐。
图式5：氨基甲酸酯VIII的制备

式VIII氨基甲酸酯类是通过使式VII的γ-氨基酸转化成具有式VIIa的异氰酸酯；以及使异氰酸酯与式R¹⁵OH的醇反应得到式VIII氨基甲酸酯而制成。选择变量R¹⁵以便使氨基甲酸酯形成胺-保护基团，其可在标准水解或氢解条件下移除。这些胺-保护基团优选为N-CO₂-叔丁基(得自R¹⁵＝叔丁基)或N-CO₂-苄基(得自R¹⁵＝苄基)或N-CO₂-取代的苄基(得自R¹⁵＝取代的苄基)。优选的醇为叔丁醇。
VII到异氰酸酯VIIa的转化可通过数种方法之一进行，意即Curtius-、Hofmann-或Schmidt-Lossen重排。Curtius重排优选是通过使γ-氨基酸VII(或其盐)与叠氮化二苯基磷酰在醇溶剂(优选为叔丁醇)中，优选但不限于含有甲苯或其它适当非质子性共溶剂，在高于热重排成异氰酸酯的触发点的温度(优选在50℃或高于50℃下)下接触而进行。
图式6：式IX化合物的制备

式IX化合物是以下述方式制成的：使式VIII化合物中的氨基甲酸酯部分基团去除保护，接着使游离胺以式R¹⁰C(O)W试剂酰化，其中W为卤素或R¹⁰C(O)，得到式IX化合物。氨基甲酸酯去除保护是通过本领域公知的方法进行的(例如对于R¹⁰＝叔丁基，酸去除保护可以硫酸、甲苯磺酸、硝酸、甲磺酸、氢溴酸或盐酸进行—甲磺酸是最优选的)。然后添加碱(优选为三乙胺)，并使游离胺与式R¹⁰C(O)W化合物接触，其中W为卤素或R¹⁰C(O)，得到结构IX化合物。
图式7：式IX化合物的替代制备

式IX化合物的替代制备包括直接酰化中间体异氰酸酯VIIa(参阅上文图式5)，其方式是在其相应酸(W＝氢)存在下任选当场添加至酰化剂R^10aC(O)W中，其中W为R^10aC(O)。优选的，酰化作用是通过将异氰酸酯引入乙酸和乙酸酐的混合物(其中R^10a为甲基，并且W为氢)中进行，得到式IX化合物。
图式7：式X化合物的制备

式IX化合物中的R²基团是通过去除保护移除，以得到式X化合物。优选的，如果R²为Cbz，则去除保护是通过氢化作用在钯催化剂(优选为10％ Pd/C)存在下完成的。
图式8：式I化合物的制备

式I化合物是通过使已去除保护的式X胺与式化合物偶合而制成，以获得式I化合物。此种偶合反应及其进行条件是本领域技术人员已知的。HET为任选被取代的3-14元杂环基或杂芳基环，其具有一个或多个选自N、O或S的杂原子(优选为一至三个杂原子，尤其是一至两个氮原子)。优选的杂芳基包括但不限于6-取代的喹唑啉-4-基，更优选为6-三氟甲基-喹唑啉-4-基。本文中使用的离去基团(LG)包括但不限于例如以下的基团：卤素、C_1-6烷氧基、甲磺酸盐、九氟烷磺酸盐(nonaflates)、磺酸盐、甲苯磺酸盐和三氟甲磺酸盐。LG优选为选自卤素或OSO₂R₁₆的离去基团，其中R₁₆为苯基，具有一或多个选自N、S或O的原子的5-至7-元杂芳基，C_1-6烷基或3-至7-元环烷基，其全部均任选被一至三个选自卤素、CF₃及C_1-6烷基的基团取代。优选离去基团为卤素，尤其是氯化物。
关于本发明的方法，起始物质是市售可得的或者可容易地由本领域技术人员制备。溶剂、温度、压力、具有所需基团的起始物质以及其它反应条件，可容易地由本领域技术人员按适宜方式选择。该方法可按比例增大，以制备较大量的式I化合物，例如以商业化生产设备制备。
实施例
下述实施例说明本发明化合物和起始物质的实施方案，而非意欲限制权利要求的范围。
按适宜方式，反应是在干燥氮(或氩)气氛下进行。对于无水反应，使用得自EM的Dri-Solv溶剂。对于其它反应，使用试剂级或HPLC级溶剂。除非另有描述，否则全部市售所得的试剂均以接收时的情况使用。
LC/MS测量值是使用Shimadzu HPLC/Waters ZQ单一四元质谱仪混合系统获得的。对于感兴趣峰的数据，它们根据正模式电喷雾离子化作用报告。NMR(核磁共振)光谱一般是在Bruker或JEOL 400MHz和500MHz仪器上，在所指示的溶剂中获得。所有化学位移是以距离具有溶剂共振而作为内标的四甲基硅烷的ppm报告的。¹H-NMR光谱数据一般报告如下：化学位移，多重性(s＝单重峰，brs＝宽单峰，d＝二重峰，dd＝二个二重峰，t＝三重峰，q＝四重峰，sep＝七重峰，m＝多重峰，app＝表观)，偶合常数(Hz)和积分。
本领域技术人员将理解本文中所使用的标准缩写。为了易于参考，缩写包括但不限于：sat.＝饱和的，HPLC＝高性能液相色谱法，AP＝面积百分比，KF＝Karl-Fischer，RT＝室温(除非另有指定，否则RT为约22℃的温度)，mmol＝毫摩尔，HRMS＝高分辨质量光谱，TBTU＝四氟硼酸O-苯并三唑-2-基-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓，MTBE＝TBME＝叔丁基甲基醚，EDAC＝N-(3-二甲基氨基丙基)-N′-乙基碳化二亚胺盐酸盐，EDC＝N-(3-二甲基氨基丙基)-N′-乙基碳化二亚胺，TEA＝三乙胺，DPPA＝叠氮化二苯基磷酰，IPA＝异丙醇，TFA＝三氟乙酸，DCM＝二氯甲烷，THF＝四氢呋喃，DMF＝N，N-二甲基甲酰胺，BOP＝六氟磷酸(苯并三唑-1-基氧基)三(二甲基氨基)鏻，EtOAc＝乙酸乙酯，DMSO＝二甲亚砜，℃＝摄氏度数，eq＝当量或数当量，g＝克或数克，mg＝毫克或数毫克，mL(或ml)＝毫升或数毫升，h＝小时或数小时，M＝摩尔浓度，N＝当量浓度，min＝分钟或数分钟，MHz＝百万赫兹，TLC＝薄层色谱法，v/v＝体积比体积的比。
＂α＂、＂β＂、＂R＂和＂S＂是本领域技术人员所熟悉的立体化学名称。
实施例1
N-((1R，2S，5R)-5-(异丙基(甲基)氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺

实施例1，步骤1：使(1R，2S，5R)-2-苄氧羰基胺基-7-氧代-6-氮杂-双环并[3.2.1]辛烷-6-羧酸叔丁酯(89.6克，0.24摩尔，参阅：P.H.Carter，et al.，PCT申请WO 2005/021500)溶于乙酸乙酯(1.5升)中，并将所形成的溶液以饱和NaHCO₃(2 x 0.45升)和饱和NaCl(1 x 0.45升)洗涤。使溶液干燥(Na₂SO₄)，然后直接过滤进入3颈3升圆底烧瓶中。将溶液以直接氮注入吹扫，然后，在氮大气下装填10％ Pd/C(13.65克)。将烧瓶抽气，再以氢逆充填；将其再重复两次。使氢鼓泡经过此溶液30分钟，接着，将反应物在1大气压H₂下搅拌18小时。将烧瓶抽气，以氮逆充填，再装填新催化剂(6克10％ Pd/C)。使氢鼓泡经过此溶液30分钟，然后，将反应物于1大气压H₂下搅拌18小时。将烧瓶抽气，再以氮逆充填。使混合物经过硅藻土过滤；接着，用乙酸乙酯洗涤过滤垫。用乙腈(0.3升)稀释滤液(～1.6升EtOAc体积)，再相继装填L-N-Cbz-甲硫胺酸(68克，0.24摩尔)、TBTU(77克，0.24摩尔)和N，N-二异丙基乙胺(42毫升，0.24摩尔)。将反应物在室温下搅拌4小时，在此时间内，其从悬浮液改变成透明溶液。通过添加饱和NH₄Cl(0.75升)和水(0.15升)使反应猝灭；将混合物以EtOAc(0.75升)再稀释。将液相混合，分离，再将有机相以饱和Na₂CO₃(2x 0.9升)和饱和NaCl(1 x 0.75升)洗涤。使溶液干燥(Na₂SO₄)，过滤，再在真空中浓缩，得到(1R，2S，5R)-2-((S)-2-(苄氧羰基胺基)-4-(甲硫基)丁酰胺基)-7-氧代-6-氮杂-双环并[3.2.1]辛烷-6-羧酸叔丁酯，为油状物，将其带至下一步骤而无需进一步纯化。主要吸收峰的LC/MS：[M-Boc+H]⁺＝406.3；[M+Na]⁺＝528.3。¹H-NMR(400MHz，d₄-MeOH)：δ7.36(m，5H)，5.11(s，2H)，4.32(m，1H)，4.2(m，1H)，4.0(m，1H)，2.5-2.7(m，3H)，2.25(m，1H)，2.11(s，3H)，2.05(m，4H)，1.9(m，1H)，1.7(m，2H)，1.54(s，9H)。还存在EtOAc[1.26(t)，2.03(s)，4.12(q)]和N，N，N，N-四甲基脲[2.83(s)]。
实施例1，步骤2：使(1R，2S，5R)-2-((S)-2-(苄氧羰基胺基)-4-(甲硫基)丁酰胺基)-7-氧代-6-氮杂-双环并[3.2.1]辛烷-6-羧酸叔丁酯的样品(假定为0.24摩尔；参阅先前操作)溶于碘甲烷(1,250克)中，并在室温下搅拌48小时。在真空中浓缩反应物。使残留物溶于二氯甲烷中，再在真空中浓缩。将其再重复两次。使所形成的泥状物溶于二氯甲烷(0.4升)中，并倒入正迅速搅拌的MTBE溶液(4.0升)中。将所形成的黄色固体通过抽气过滤收集，再在高真空下干燥，得到锍盐(179克)。将此物质带至下一步骤而无需进一步纯化。主要吸收峰的LC/MS：[M-Me2S+H]⁺＝458.4；[M]+＝520.4。¹H-NMR(400MHz，.d₄-MeOH)：δ7.35(m，5H)，5.09(s，2H)，4.33(m，1H)，4.28(m，1H)，3.98(m，1H)，3.3-3.45(m，2H)，2.97(s，3H)，2.94(s，3H)，2.78(m，1H)，2.0-2.3(m，4H)，1.7(m，2H)，1.52(s，9H)。还存在MTBE[1.18(s)，3.2(s)]和微量的N，N，N，N-四甲基脲[2.81(s)]。
实施例1，步骤3：使得自前一步骤的全部锍盐(假定为0.24摩尔)溶于DMSO(2.0升)中。将所形成的溶液在氮气和室温下搅拌，并分次装填碳酸铯(216克)。将此悬浮液在室温下搅拌3小时，然后过滤，以移除固体。将溶液分成数份～0.22升，并按下述处理：将反应混合物(～0.22升)以乙酸乙酯(1.5升)稀释，并以水(3 x 0.5升)和盐水(1 x 0.3升)连续洗涤。使有机相干燥(Na₂SO₄)，过滤，再在真空中浓缩。获得所需的(1R，2S，5R)-2-((S)-3-(苄氧羰基胺基)-2-氧代吡咯烷-1-基)-7-氧代-6-氮杂双环并[3.2.1]辛烷-6-羧酸叔丁酯(90.8克，83％)，为微晶性泡沫物，不含四甲基脲杂质。主要吸收峰的LC/MS：[M-Boc+H]⁺＝358.4；[M+Na]⁺＝480.4。¹H-NMR(400MHz，d₄-MeOH)：δ7.35(m，5H)，5.12(s，2H)，4.35(m，2H)，4.2(m，1H)，3.6(m，1H)，3.3(m，1H)，2.64(m，1H)，2.28-2.42(m，2H)，2.15(m，1H)，1.7-2.0(m，5H)，1.55(s，9H)。若需要，此物质可通过溶于MTBE(1体积)中，添加至庚烷(3.3体积)中，再收集所形成的沉淀物，而被分离成固体。
实施例1，步骤4：于(1R，2S，5R)-2-((S)-3-(苄氧羰基胺基)-2-氧代吡咯烷-1-基)-7-氧代-6-氮杂双环并[3.2.1]辛烷-6-羧酸叔丁酯(108克，0.236摩尔)在THF(1升)中的正在搅拌溶液内，装填氢氧化锂单水合物(21.74克，0.519摩尔)。慢慢添加水(0.3升)，以致使温度不超过20℃。将反应物在室温下搅拌过夜，并在真空中移除挥发性物质。通过添加1N HCl(450毫升)和NaH₂PO₄调整pH值至～4。将所形成的白色沉淀物通过过滤收集，并以水(2 x 1升)洗涤。使固体溶于二氯甲烷(1.5升)和水(～1升)中。使有机层干燥(Na₂SO₄)，过滤，再在真空中浓缩。使残留物溶于EtOAc(0.7升)中，并将所形成的溶液在回流下加热1小时。在冷却至室温后，分离固体，再通过过滤收集。使这些固体在异丙醇中通过再结晶纯化，得到所需的(1R，2S，5R)-2-((S)-3-(苄氧羰基胺基)-2-氧代吡咯烷-1-基)-5-(叔丁氧羰基胺基)环己烷羧酸，为白色固体(104.5克，93％产率)。主要吸收峰的LC/MS：[M-tBu+H]⁺＝420.2；[M-Boc+H]⁺＝376.2；[M+H]⁺＝476.2。¹H-NMR(400MHz，d₄-MeOH)：δ7.35(m，5H)，5.11(s，2H)，4.35(m，2H)，3.71(m，1H)，3.45-3.6(m，2H)，2.99(m，1H)，2.41(m，1H)，2.15(m，1H)，2.0(m，2H)，1.6-1.9(m，4H)，1.46(s，9H)。
实施例1，步骤5：在3升圆底烧瓶中，装填(1R，2S，5R)-2-((S)-3-(苄氧羰基胺基)-2-氧代吡咯烷-1-基)-5-(叔丁氧羰基胺基)环己烷羧酸(75.5克，0.158摩尔)、EDC^·HCl(33.5克，0.175摩尔)、1-羟基苯并三唑(23.6克，0.175摩尔)和二氯甲烷(1升)。将反应物在室温下搅拌2小时，在此段时间内，其从白色悬浮液改变成透明溶液。使氨(气体)鼓泡进入溶液中，直到pH值为强碱性(纸)为止，并将反应物搅拌10分钟；重复添加此氨，并将反应物再搅拌10分钟。添加水。将有机相以饱和NaHCO₃、NaH₂PO₄和盐水洗涤，然后在真空中浓缩。将残留物以乙腈(0.5升)配成浆液，然后浓缩，获得(1R，2S，5R)-2-((S)-3-(苄氧羰基胺基)-2-氧代吡咯烷-1-基)-5-(叔丁氧羰基胺基)环己烷羧酰胺，为白色固体(75.9克，～100％)，将其使用于下一步骤而无需进一步纯化。主要吸收峰的LC/MS：[M-Boc+H]⁺＝375.3；[M+H]⁺＝475.4；[M-tBu+H]⁺＝419.3。¹H-NMR(400MHz，d₄-MeOH)：δ7.35(m，5H)，5.11(s，2H)，4.25(m，2H)，3.70(m，1H)，3.6(m，1H)，3.45(m，1H)，2.91(m，1H)，2.38(m，1H)，2.12(m，1H)，1.9-2.05(m，2H)，1.65-1.9(m，4H)，1.46(s，9H)。
实施例1，步骤6：将反应以三等份进行，并合并供水溶液处理。在5升3颈圆底烧瓶中，添加(1R，2S，5R)-2-((S)-3-(苄氧羰基胺基)-2-氧代吡咯烷-1-基)-5-(叔丁氧羰基胺基)环己烷羧酰胺(25.3克，53毫摩尔)、乙腈(19升)和2.6升水/冰。将混合物搅拌，并冷却至0℃。添加碘苯二乙酸盐(25.77克，80毫摩尔)，并将反应物搅拌2小时；添加另外0.5当量的碘苯二乙酸盐。将反应物搅拌9小时(反应温度<10℃)。在混合物中，添加8当量N，N-二异丙基乙胺和2当量乙酸酐。在接下来的三十分钟内，每十分钟添加4当量N，N-二异丙基乙胺和2当量乙酸酐，直到反应已进行至完成(HPLC)为止。在真空中移除乙腈；自残留物分离出一些固体，再将其通过过滤收集。以二氯甲烷(3升，接着1升)萃取其余残留物。相继以水、饱和NaHCO₃和盐水洗涤有机相。将所收集的固体伴随着活性碳(15克)添加至有机相中。将混合物在40℃下搅拌30分钟，然后过滤，再在真空中浓缩。使残留物溶于EtOAc(1升)中，并将所形成的溶液在75℃下搅拌1小时，然后，使其冷却至室温。分离固体，再通过过滤收集。使此固体通过再结晶进一步纯化：首先，使其溶于0.5升CH₂Cl₂中，然后在真空中浓缩，接着自1升EtOAc再结晶；将其重复三次。将得自上述母液的固体使用相同方法再结晶三次。使合并的固体自乙腈(0.7升)再结晶两次，以提供66克(84％)(1R，3R，4S)-3-乙酰胺基-4-((S)-3-(苄氧羰基胺基)-2-氧代吡咯烷-1-基)环己基胺基甲酸叔丁酯(纯度>99.5％，通过HPLC)。主要吸收峰的LC/MS：[M+H]⁺＝489.4；[M-tBu+H]⁺＝433.3。¹H-NMR(400MHz，d₄-MeOH)：δ7.3-7.4(m，5H)，5.11(s，2H)，4.35(m，1H)，4.15(m，1H)，4.04(m，1H)，3.8(m，1H)，3.6(m，2H)，2.44(m，1H)，2.12(m，1H)，1.87-2.05(m，4H)，1.87(s，3H)，1.55-1.7(m，2H)，1.46(s，9H)。Hofmann重排的立体化学真实性是通过此化合物的X-射线晶体结构分析确认的，如图1中所示。
实施例1，步骤7：在(1R，3R，4S)-3-乙酰胺基-4-((S)-3-(苄氧羰基胺基)-2-氧代吡咯烷-1-基)环己基胺基甲酸叔丁酯(66克，0.135摩尔)在二氯甲烷(216毫升)中的正在搅拌溶液中，添加三氟乙酸(216毫升)。将反应物在室温下搅拌2小时，再在真空中浓缩。使残留物溶解在甲醇中，并在真空中浓缩所形成的溶液；将其重复一次。获得(S)-1-((1S，2R，4R)-2-乙酰胺基-4-胺基环己基)-2-氧代吡咯烷-3-基胺基甲酸苄酯，为油状物，再直接使用于下文步骤8中。LC/MS实测值[M+H]⁺＝389.4。¹H-NMR(400MHz，d₄-MeOH)：δ7.3-7.4(m，5H)，5.12(s，2H)，4.41(br.s，1H)，4.15(m，1H)，4.00(t，J＝9.3Hz，1H)，3.81(t，J＝9.1Hz，1H)，3.65(q，J＝8.4Hz，1H)，3.3-3.4(m，1H)，2.45(m，1H)，1.95-2.24(m，5H)，2.00(s，3H)，1.6-1.8(m，2H)。
实施例1，步骤8：在(S)-1-((1S，2R，4R)-2-乙酰胺基-4-胺基环己基)-2-氧代吡咯烷-3-基胺基甲酸苄酯(～0.135摩尔)在甲醇(675毫升)中的正在搅拌溶液中，相继装填丙酮(37.8克，4当量)、乙酸钠(33.2克，3当量)和氰基硼氢化钠(16.9克，2当量)。将混合物在室温下搅拌6小时，再过滤。使滤液溶于二氯甲烷(1升)中；以1N NaOH(1升)洗涤此溶液。在0℃下，使在过滤中所收集的固体溶于1N NaOH(1升)中，然后以二氯甲烷(1升)萃取。合并有机萃取液，再以HCl水溶液(200毫升1N HCl+800毫升水)萃取。以饱和NaHCO₃(500毫升)，接着以1N NaOH(100毫升)使水相碱化，直到pH11为止。以二氯甲烷(2升)萃取水相。合并有机萃取液，干燥(Na₂SO₄)，过滤，再在真空中浓缩，得到(S)-1-((1S，2R，4R)-2-乙酰胺基-4-(异丙基胺基)环己基)-2-氧代吡咯烷-3-基胺基甲酸苄酯，为油状物。LC/MS实测值[M+H]⁺＝431.45。¹H-NMR(400MHz，d₄-MeOH)：δ7.3-7.4(m，5H)，5.12(s，2H)，4.31(m，1H)，4.24(t，J＝9.4Hz，1H)，4.11(m，1H)，3.61(t，J＝9.1Hz，1H)，3.52(q，J＝8.6Hz，1H)，3.04(br.s，1H)，2.96(七重峰，J＝6.3Hz，1H)，2.40(m，1H)，2.15(m，1H)，1.92(s，3H)，1.7-1.9(m，5H)，1.65(m，1H)，1.12(app.dd，J＝6.3，1.1Hz，6H)。
实施例1，步骤9(参阅下文替代步骤9)：使(S)-1-((1S，2R，4R)-2-乙酰胺基-4-(异丙基胺基)环己基)-2-氧代吡咯烷-3-基胺基甲酸苄酯(～115毫摩尔)在二氯甲烷(600毫升)中的正在搅拌溶液冷却至0℃，并相继装填甲醛(18.6克，37重量％溶液)、三乙胺(23毫升)和三乙酰氧基硼氢化钠(28.7克)。将混合物在室温下搅拌30分钟，再以二氯甲烷(至高达1.2升)稀释。将此溶液以500毫升饱和NaHCO₃+NaOH(饱和NaHCO₃，pH至11w/1N NaOH)洗涤三次。以HCl水溶液(200毫升1N HCl+600毫升水)萃取有机层。以饱和NaHCO₃(500毫升)，接着以1N NaOH(100毫升)使水相碱化，直到pH11为止。以二氯甲烷(1.2升)萃取水相。合并有机萃取液，干燥(Na₂SO₄)，过滤，并在真空中浓缩，得到(S)-1-((1S，2R，4R)-2-乙酰胺基-4-(异丙基(甲基)胺基)环己基)-2-氧代吡咯烷-3-基胺基甲酸苄酯，为油状物，将其直接使用于下文步骤10中。LC/MS实测值[M+H]⁺＝445.4。¹H-NMR(400MHz，d₄-MeOH)：δ7.3-7.4(m，5H)，5.12(s，2H)，4.33(br s，1H)，4.25(t，J＝9.2Hz，1H)，4.11(br s，1H)，3.5-3.6(m，2H)，2.77(v br s，2H)，2.41(m，1H)，2.26(s，3H)，2.0-2.1(m，2H)，1.92(s，3H)，1.7-1.9(m，5H)，1.10(app.dd，J＝17，6.4Hz，6H)。
实施例1，步骤10：在(S)-1-((1S，2R，4R)-2-乙酰胺基-4-(异丙基(甲基)胺基)-环己基)-2-氧代吡咯烷-3-基胺基甲酸苄酯(～0.115摩尔)在甲醇(600毫升)中的溶液中，添加10％ Pd/C(6克50％潮湿催化剂)。将烧瓶抽气，并以氢逆充填。将混合物在1大气压H₂下搅拌2小时，并通过经过硅藻土过滤移除催化剂。使滤液在真空中浓缩，以提供N-((1R，2S，5R)-2-((S)-3-胺基-2-氧代吡咯烷-1-基)-5-(异丙基(甲基)胺基)环己基)乙酰胺，为油状物，将其带至下一步骤而无需进一步纯化。LC/MS实测值[M+H]⁺＝311.47。¹H-NMR(400MHz，d₄-MeOH)：δ4.39(brs，1H)，4.00(m，1H)，3.3-3.5(m，4H)，2.73(m，1H)，2.38(m，1H)，2.25(s，3H)，2.0-2.2(m，3H)，1.94(s，3H)，1.6-1.75(m，4H)，1.07(app.dd，J＝21，6.4Hz，6H)。
实施例1，步骤11：向N-((1R，2S，5R)-2-((S)-3-胺基-2-氧代吡咯烷-1-基)-5-(异丙基(甲基)胺基)环己基)乙酰胺(～35克，0.115摩尔)在异丙醇(600毫升)中的溶液中，添加4-氯基-6-(三氟甲基)喹唑啉(32克，0.138摩尔，1.2当量，参阅：P.H.Carter，et al.，PCT申请WO 2005/021500)。将混合物在室温下搅拌过夜，然后添加三乙胺(46克，0.46摩尔，4当量)。将混合物在60℃下搅拌10小时。在减压下移除溶剂，得到油状物。与异丙醇的共沸蒸馏进行两次。使残留物溶于二氯甲烷(600毫升)中，并以水(250毫升，含有4当量乙酸)萃取。将二氯甲烷(600毫升)添加至合并的含水洗液中，并使混合物冷却至0℃。添加NaOH水溶液(50重量％)，并搅拌，直到pH值达到11为止。以二氯甲烷(2 x 600毫升)萃取两次水层。使合并的有机萃取液干燥(Na₂SO₄)，过滤，并在真空中浓缩，得到标题化合物的非晶型游离碱(99％纯度，通过HPLC)。LC/MS实测值[M+H]⁺＝507.3。¹H-NMR(400MHz，d₄-MeOH)：δ8.82(s，1H)，8.59(s，1H)，8.05(dd，J＝8.8，1.8Hz，1H)，7.9(d，J＝8.7Hz，1H)，5.28(t，J＝8.6Hz，1H)，4.58(br s，1H)，4.06(m，1H)，3.52-3.68(m，2H)，3.43(m，1H)，2.76(br s，1H)，2.55(m，1H)，2.28(s，3H)，2.1-2.3(m，3H)，2.0(s，3H)，2.0(m，1H)，1.65-1.8(m，3H)，1.09(app.dd，J＝24，6.4Hz，6H)。
实施例1，替代步骤9

实施例1，替代步骤9ai：向氢化器中，添加(7R，8S)-8-((S)-1-苯基-乙胺基)-1，4-二氧-螺[4.5]癸烷-7-羧酸乙酯4-甲苯磺酸盐1A(1417克，2.8摩尔，参阅：WO2004098516，类似于美国专利6,835,841制备)、乙醇(200标准纯度，11.4升)和10％Pd/C催化剂(50％潮湿，284克)。将混合物以氮惰性化，然后，以氢气(45psig)加压，再在约40℃下激烈搅拌，直到起始物质被消耗为止(HPLC)。使此悬浮液冷却，以氮气吹扫，并趁惰性化时，通过过滤移除催化剂。将用过的催化剂以乙醇(4.3升)洗涤。合并滤液和洗液，再在真空下浓缩至体积为2-3升，同时保持批料在40℃-60℃之间。添加乙酸异丙酯(5升)，并使混合物浓缩至体积为～2升，直到移除大部分乙醇(<0.5％)为止，并且残留水份含量为<1，000ppm。将批料体积通过添加乙酸异丙酯调整至～7.5升。将混合物加热至80℃，直到透明为止，接着冷却至65℃-70℃。添加1的种子晶体(5克)，再使批料冷却至50℃，历经2小时，然后再冷却至20℃，历经4小时，并保持～10小时。过滤所形成的浆液，并以乙酸异丙酯(2升)洗涤滤饼。使产物在真空及～35℃下干燥，直到使挥发性物质减至低于～1％(LOD)为止。获得(7R，8S)-8-胺基-1，4-二氧-螺[4.5]癸烷-7-羧酸乙酯4-甲苯磺酸盐1，为白色结晶性固体(936克，83％产率；HPLC纯度：99.8％)。¹H-NMR：(300MHz，CDCl3)8.14-7.89(brs，3H)，7.75(d，J9.0Hz，2H)，7.15(d，J8.0Hz，2H)，4.22-4.04(m，2H)，4.01-3.77(m，4H)，3.55-3.43(m，1H)，3.20-3.13(m，1H)，2.40-2.27(m，4H)，2.21-1.94(m，2H)，1.81-1.51(m，3H)，1.23(t，J7.0Hz，3H)；HPLC：Waters XterraMS C184.6毫米x150毫米内径，3.5微米粒子大小，0.05％ NH₄OH(5％ACN，95％ H₂O，溶剂A)，至0.05％ NH₄OH(95％ ACN，5％ H₂O，溶剂B)，5％ B至20％ B，在10分钟内，改变至95％ B，在25分钟内，然后改变至5％ B，在1分钟内；11.1分钟(氨基酯1)。

实施例1，替代步骤9aⁱⁱ：将氨基酯1(63克，0.16M，1当量；已知化合物的还原性去除保护的产物-(参阅例如R.J.Cherney，WO2004/098516和G.V.Delucca & S.S.Ko，WO 2004/110993)放置在圆底烧瓶中，并添加MeCN(500毫升)。然后添加EDAC(33.1克，0.17M，1.1当量)、HOBt·H₂O(21.2克，0.16M，1.0当量)和N-Cbz-L-甲硫胺酸(46.7克，0.17M，1.05当量)，接着为TEA(48.0毫升，0.35M，2.2当量)。发现放热至38℃。将反应物质在室温下留置搅拌。30分钟后，HPLC显示完全转化，将反应物质以EtOAc(2.5升)稀释，并以KHCO₃(4 x 500毫升，20重量％水溶液)和盐水(500毫升)洗涤。分离有机相，以MgSO₄干燥，浓缩。使残留物溶于TBME中，再浓缩，得到(7R，8S)-8-{(2S)-2-苄氧羰基胺基-4-甲硫基-丁酰胺基}-1，4-二氧-螺[4.5]癸烷-7-羧酸乙酯2，为粘性半固体(76.2克，98％产率，93AP纯度)。¹H-NMR：(300MHz，CDCl3)δ7.36-7.30(m，5H)，7.03(d，J9.0Hz，1H)，5.66(d，J8.0Hz，1H)，5.10(s，2H)，4.35-4.25(m，2H)，4.19-4.04(m，2H)，3.98-3.86(m，4H)，2.87-2.80(m，1H)，2.55-2.45(m，2H)，2.18(dd，J14.0Hz，7.0Hz，1H)，2.08(s，3H)，2.05-1.67(m，6H)，1.26(t，J7.0Hz，3H)。HPLC：YMC-Pack Pro C185微米4.6 x 150毫米，0.05％ TFA(20％ MeOH，80％H₂O)至0.05％ TFA(20％ MeOH，80％ MeCN)，0-100％ 10分钟梯度液.10.01分钟(化合物2，93.1AP).HRMS：m/z 495.2166[计算值：C₂₄H₃₅N₂O₇S 495.2165]。

实施例1，替代步骤9b：使甲硫胺酸酰胺2(75.0克，0.15M)溶于MeI(225毫升，3毫升/克)中-发现一部分出气但未放热。将反应物质留置于黑暗中搅拌16.5小时。在此段时间后，已形成浓稠淡黄色沉淀物。然后，将烧瓶抽空至200毫米Hg，并移除一部分MeI。将残留物质在TBME(500毫升)中配成浆液，在30分钟搅拌后，过滤浆液，以TBME(500毫升)洗涤滤饼。此物质的NMR分析显示少量MeI余留。将滤饼在TBME(500毫升)中再配成浆液，过滤，以TBME(500毫升)洗涤，并在真空下干燥，得到碘化[(3S)-3-苄氧羰基胺基-3-{(7R，8S)-7-乙氧羰基-1，4-二-氧-螺[4.5]癸-8-基胺甲酰基}-丙基]-二甲基锍3，为自由流动性灰白色固体(93.5克，97％，99面积％纯度)。¹H-NMR：(300MHz，CDCl3)δ7.75(d，J9.0Hz，1H)，7.38-7.27(m，5H)，6.40(d，J7.0Hz，1H)，5.10(s，2H)，4.76-4.65(m，1H)，4.48-4.39(m，1H)，4.14-3.85(m，6H)，3.84-7.73(m，1H)，3.68-3.55(m，1H)，3.21(s，3H)，3.12(s，3H)，2.90-2.83(s，1H)，2.52-1.55(m，8H)，1.24(t，J7.0Hz，3H)。HPLC：YMC-Pack ProC18 5微米4.6 x 150毫米，0.05％ TFA(20％ MeOH，80％ H₂O)至0.05％TFA(20％ MeOH，80％ MeCN)，0-100％ 10分钟梯度液.2.45分钟(I-)，8.14分钟(化合物3，43.6AP，I-54.6AP).HRMS：m/z 509.2341[计算值：C₂₅H₃₇N₂O₇S 509.2321]。

实施例1，替代步骤9c：将Cs₂CO₃(61.5克，0.19M，1.5当量)放置在圆底烧瓶中，并添加无水DMSO(2.4升)。然后分次添加锍盐3(80.0克，0.13M，1.0当量)。一旦添加完成后，立即将反应物质留置于黑暗中搅拌20小时。接着，将反应物质分离成两半，并将每一半分别处理：将反应物质以EtOAc(2.0升)稀释，并以盐水(2升)洗涤，以盐水(500毫升)洗涤有机相。然后，以EtOAc(500毫升)洗涤合并的水层。接着，将合并的有机相以盐水(3 x 750毫升)洗涤。将反应物质的第二个一半以相同方式处理，并使合并的有机物质以MgSO₄干燥，浓缩，得到(7R，8S)-8-{(3S)-3-苄氧羰基胺基-2-氧代-吡咯烷-1-基}-1，4-二氧-螺[4.5]癸烷-7-羧酸乙酯4，为浅色油(56.5克，0.13M，～100面积-％纯度)，通过NMR分析为纯的。¹H-NMR：(300MHz，CDCl3)δ7.38-7.30(m，5H)，5.37(br d，J4.0Hz，1H)，5.11(s，2H)，4.27-4.18(m，1H)，4.17-3.82(m，8H)，3.32(td，J10.0Hz，60.0Hz，1H)，3.23(q，J5.0Hz，1H)，2.63-2.57(m，1H)，2.42-2.25(m，2H)，1.94-1.68(m，5H)，1.25(t，J7.0Hz，3H)。HPLC：YMC-Pack Pro C18 5微米4.6 x 150毫米，0.05％ TFA(20％ MeOH，80％ H₂O)至0.05％ TFA(20％ MeOH，80％ MeCN)，0-100％10分钟梯度液。8.99分钟(化合物5，在柱上制成，4.2AP)，9.48(化合物4，74.3AP)。HRMS：m/z 447.2127[计算值：C₂₃H₃₁N₂O₇ 447.2131]。

实施例1，替代步骤9d：使吡咯烷酮4(50.0克，0.11M)溶于丙酮(500毫升)中，并添加1N HCl(500毫升)。然后，将反应物质加热至65℃。20分钟后，HPLC显示完成反应。使反应物质冷却至室温，并在回转式蒸发器上移除丙酮。在此蒸馏期间，产物自溶液沉淀，为白色固体。将其通过过滤分离，并以水洗涤滤饼。接着，使滤饼与甲苯(3 x 300毫升)以共沸方式干燥，得到(1R，2S)-2-((3S)-3-苄氧羰基胺基-2-氧代-吡咯烷-1-基)-5-氧代-环己烷羧酸乙酯5，为白色固体(39.8克，88％，97面积-％纯度)。¹H-NMR：(300MHz，CDCl3)δ7.37-7.32(m，5H)，6.65(br d，J4.0Hz，1H)，5.12(s，2H)，4.54-4.47(m，1H)，4.34-4.26(m，1H)，4.18(dq，J 11.0Hz，7.0Hz，1H)，4.09(dq，J11.0Hz，7.0Hz，1H)，3.36-3.20(m，3H)，2.70-2.35(m，6H)，2.05-1.96(m，1H)，1.81(五重峰，J11.0Hz，1H)，1.24(t，J7.0Hz，3H)。HPLC：YMC-Pack Pro C185微米4.6 x 150毫米，0.05％ TFA(20％ MeOH，80％ H₂O)至0.05％ TFA(20％ MeOH，80％ MeCN)，0-100％ 10分钟梯度液。8.95分钟(化合物5)。HRMS：m/z 403.1864[计算值：C₂₁H₂₇N₂O₆ 403.1869]。

实施例1，替代步骤9e：将环己酮5(22.5克，0.06M，1当量)、DMSO(30毫升)和Ti(O-iPr)4(33.7毫升，0.11M，2.04当量)放置在圆底烧瓶中。然后，以一份添加N-异丙基-N-甲胺(11.6毫升，0.11M，2.0当量)。将混合物在室温下留置搅拌30分钟，然后在冰/水中冷却至<3℃。然后，添加MeOH(30毫升)，接着分次添加NaBH4(4.33克，0.11M，2.04当量)-温度保持<8℃。在添加完成后30分钟，将反应物质以二氯甲烷(300毫升)，然后以NaOH(1N，40毫升)稀释。使所形成的浆液经过硅藻土过滤，并以二氯甲烷(100毫升)洗涤滤饼。在减压下浓缩所形成的液体，并使残留物溶于EtOAc(500毫升)中。将此溶液以1N HCl(2 x 400毫升)萃取，然后，使合并的水层以Na₂CO₃碱化。以EtOAc(4 x 250毫升)萃取，得到透明且无色的有机相，使其以Na₂SO₄干燥，浓缩，得到白色粉末(24.6克，96％，7:1 d.r.)。然后，将此物质在己烷(670毫升)中配成浆液过夜。通过过滤分离固体，并在减压下干燥，得到(1R，2S，5R)-2-((3S)-3-苄氧羰基胺基-2-氧代-吡咯烷-1-基)-5-(异丙基-甲基-胺基)-环己烷羧酸乙酯6，为白色固体(20.9克，81％，24:1 d.r.)。¹H-NMR：(300MHz，CDCl3)δ7.37-7.28(m，5H)，5.55(d，J4.5，1H)，5.10(s，2H)，4.42(q，J4.5，1H)，4.23-4.12(m，1H)，4.08(dq，J10.5，7.0，1H)，4.02(dq，J10.5，7.0，1H)，3.84(t，J9.0，1H)，3.46-3.36(m，1H)，3.04(七重峰，J6.5，1H)，2.86-2.80(m，1H)，2.63-2.48(m，2H)，2.17(s，3H，Me)，2.10-1.63(m，7H)，1.22(t，J7.0，3H)，1.00(d，J6.5，3H)，0.97(d，J6.5，3H)。HPLC：YMC-Pack Pro C18 5微米4.6 x150毫米，0.01M NH4OAc(MeOH：水20：80)至0.01M NH4OAc(MeOH:水:MeCN 20:5:75)10至100％ 15分钟梯度液。8.23(化合物6)，8.88(5-epi-化合物6)。HRMS：460.2798[计算值：C₂₅H₃₈N₃O₅ 460.2811]。

实施例1，替代步骤9f：使氨基酯6(9.76克，2.12毫摩尔)溶于2N HCl(80毫升)中，然后，在惰性气氛下加热至～55℃。将反应物搅拌20小时，接着冷却至室温。将反应溶液以甲苯(数份25毫升)洗涤两次，通过添加KOH丸粒中和至pH 6-7，然后，以二氯甲烷(数份100毫升)萃取八次。使合并的萃取液干燥(Na₂SO₄)，过滤，并在减压下浓缩至50毫升总体积。接着，在添液漏斗中，将浓溶液慢慢添加至甲基叔丁基醚(300毫升)中，历经15分钟，并激烈搅拌。将所形成的白色浆液在环境温度下搅拌1小时，然后冷却至0℃，并搅拌1小时。过滤产物，并以甲基叔丁基醚(数份25毫升)洗涤两次。通过与乙腈(300毫升)共沸蒸馏，移除得自湿滤饼的水。使产物在减压下干燥，以提供(1R，2S，5R)-2-((3S)-3-苄氧羰基胺基-2-氧代-吡咯烷-1-基)-5-(异丙基-甲基-胺基)-环己烷羧酸7(7.69克，84％产率)，为白色泡沫物。¹H-NMR：(400MHz，50℃，CDCl3)δ7.44-7.32(m，5H)，6.10(br.s，1H)，5.19(app.s，2H)，4.42(dd，J＝15.6，7.8Hz，1H)，4.29-4.23(m，1H)，3.68-3.60(m，2H)，3.33-3.27(m，2H)，3.20(br.s，1H)，2.99(br.s，1H)，2.51(s，3H)，2.49-2.45(m，3H)，2.33-2.31(m，1H)，2.00(ddd，J＝9.0，8.6，3.91H)，1.95-1.78(m，2H)，1.36-1.21(m，6H)。LCMS：m/z 432.20[计算值：C₂₃H₃₄N₃O₅ 432.25]。

实施例1，替代步骤9g：在N₂下，使氨基酸7(6.3克，14.7毫摩尔，1.0当量)溶于THF(80毫升)中，并分次添加NaH(584毫克，14.7毫摩尔，1.0当量，在矿油中的60重量％分散液)。当添加完成并且气体释放已停止时，使反应物质在减压下浓缩，并使所形成的固体与甲苯(50毫升)共沸，得到白色固体(KF 0.59重量％)。将此固体在N₂下，在甲苯(100毫升)中配成浆液，并加热至90℃。逐滴添加DPPA(3.32毫升，15.3毫摩尔，1.05当量)，历经～2分钟。～5分钟后，所有固体已溶解，10分钟后，发现白色固体的沉淀。30分钟后，HPLC分析显示完成反应。使反应物质冷却至室温，然后过滤，以甲苯洗涤滤饼。接着，将液体在90℃下慢慢添加至AcOH/Ac₂O(80/20，168毫升)溶液中。45分钟后，HPLC仍然显示一些异氰酸酯。在1.15小时时，使反应物质冷却至室温，并以甲苯(100毫升)和水(100毫升)稀释。移除有机层，再以1N HCl(100毫升)洗涤甲苯。然后，使合并的水相以K₂CO₃(s)碱化，并以NaOH(10N)达到pH12，保持温度低于20℃。接着，以二氯甲烷(4 x 150毫升)萃取水层，使合并的有机层以K₂CO₃干燥，浓缩，得到(S)-1-((1S，2R，4R)-2-乙酰胺基-4-(异丙基(甲基)胺基)环己基)-2-氧代吡咯烷-3-基胺基甲酸苄酯8，为白色泡沫物(4.5克，70％，94AP纯度)。¹H-NMR与得自上述途径的物质相同(实施例1，步骤9)。HPLC：YMC-Pack Pro C18 5微米4.6 x 150毫米，0.05％ TFA(20％ MeOH，80％ H₂O)至0.05％ TFA(20％ MeOH，80％ MeCN)，0-100％ 10分钟梯度液。7.20分钟(化合物8)，7.85分钟(尿素二聚体)。HRMS：445.2809[计算值：C₂₄H₃₇N₄O₄ 445.2815]。
实施例1的替代制备

实施例1，替代制备，步骤1：将(7R，8S)-8-胺基-1，4-二氧-螺[4.5]癸烷-7-羧酸乙酯4-甲苯磺酸盐1(450.1克)和1-乙基-3-(3-二甲基-胺基-丙基)碳化二亚胺盐酸盐(236.3克)、1-羟基苯并三唑水合物(171.9克)、N-苄氧羰基-L-甲硫胺酸(333.4克)和乙腈(3.1升)合并。在此搅拌的混合物中，在低于30℃下三乙胺(249.5克)添加。在反应完成(HPLC)时，将混合物以乙酸乙酯(8.2升)稀释，并以25％碳酸氢钾水溶液(2 x 4.5升)，接着以水(4.5升)洗涤。分离有机相，并在减压下浓缩，获得(7R，8S)-8-((S)-2-苄氧羰基胺基-4-甲硫基-丁酰基胺基)-1，4-二氧-螺[4.5]癸烷-7-羧酸乙酯2的溶液(14升)。添加碘化甲烷(2.39公斤)，使容器隔离光线，并使混合物在缓慢搅拌下保持约24小时。在浓稠黄色沉淀物中，添加甲基叔丁基醚(2.7升)，并使混合物保持约1小时。通过过滤分离产物，并将滤饼以甲基叔丁基醚(2 x 1.4升)洗涤，然后在真空下干燥，产生碘化[(S)-3-苄氧基-羰基胺基-3-((7R，8S)-7-乙氧羰基-1，4-二氧-螺[4.5]癸-8-基胺甲酰基)-丙基]-二甲基锍3(671.4克，～94％产率)，为灰白色固体(HPLC纯度99.9％)。

实施例1，替代制备，步骤2：将锍盐3(619.4克)和碳酸铯(416.8克)以及无水二甲亚砜(6.2升)在装有洗气器的反应器中合并，以中和挥发性硫化物。保持剧烈搅拌，直到获得完全转化(HPLC)为止。添加乙酸乙酯(12.4升)，接着添加20％盐水(3升)。分离有机相，以盐水(2 x 3升)洗涤两次，蒸发，获得(7R，8S)-8-((S)-3-苄氧羰基胺基-2-氧代-吡咯烷-1-基)-1，4-二氧-螺[4.5]癸烷-7-羧酸乙酯4在乙酸乙酯中的溶液(～0.8升)。添加丙酮(2.55升)，接着添加0.5M盐酸水溶液(2.3升)。伴随着良好混合，将溶液加热至50到60℃，直到完成4转化成(1R，2S)-2-((S)-3-苄氧羰基胺基-2-氧代-吡咯烷-1-基)-5-氧代-环己烷羧酸乙酯5为止(HPLC)。在低于40℃时，使混合物在减压下浓缩，冷却至～30℃，添加水(4.1升)。使所形成的浆液冷却至5到10℃，并搅拌～1小时。过滤产物，并以水(2 x 2.5升)洗涤滤饼。在脱液时，使滤饼在真空烘箱中，在低于40℃下干燥至恒重，获得环己酮5(272克，70％产率)(HPLC纯度98.7％)。

实施例1，替代制备，步骤3：使环己酮5(206克)溶于二氯甲烷(1.1升)中，并装填至氢化器中。添加四异丙氧化钛(218.2克)和N-异丙基N-甲胺(63.64克)，并将混合物在环境温度(23至25℃)下搅拌至少5小时。添加铂催化剂(5％ Pt/S/C，15克，约7.5％，相对于5)，并在～30psig下进行氢化至少6小时，产生(1R，2S，5R)-2-((S)-3-苄氧羰基胺基-2-氧代-吡咯烷-1-基)-5-(异丙基-甲基-胺基)-环己烷羧酸乙酯6及其5-epi-异构物(～7％)的混合物。通过过滤移除催化剂，并使滤液在减压下浓缩至约～600毫升。添加潮湿乙酸乙酯(～3％水，2.0升)，剧烈搅拌，历经至少1.5小时期间。持续搅拌至少另外6小时。过滤浆液。将滤饼以乙酸乙酯(1.0升)洗涤，抛弃。使合并的滤液和洗液浓缩至～400毫升。添加甲苯(2.0升)，并以2M盐酸水溶液(2 x 400毫升)洗涤溶液。使水层温热至50°到60℃，历经约20小时，或6的水解作用被视为完成(HPLC)。添加氢氧化钠水溶液以调整至pH～10，并以甲苯(3 x 600毫升)萃取混合物。抛弃有机相，并通过添加盐酸水溶液将pH再调整至～6。使水相在减压下浓缩至～600毫升，并以二氯甲烷(至少3 x 2.0升)萃取。使合并的二氯甲烷层在减压下蒸发，并连续以THF置换，获得(1R，2S，5R)-2-((S)-3-苄氧羰基胺基-2-氧代-吡咯烷-1-基)-5-(异丙基-甲基-胺基)-环己烷羧酸7(～148克)在THF(～4升)中的溶液。在低于25℃下添加8的种子晶体，接着添加甲醇钠(81.24克)在甲醇中的25％溶液。搅拌下使浆液保持至少另外16小时。通过过滤分离产物，并以THF(4 x 200毫升)洗涤滤饼，再在真空中、在低于30℃下干燥至恒重。获得干燥的(1R，2S，5R)-2-((S)-3-苄氧羰基-胺基-2-氧代-吡咯烷-1-基)-5-(异丙基-甲基-胺基)-环己烷-羧酸钠盐8(139克，～60％产率，得自5)。

实施例1，替代制备，步骤4：将氨基酯钠盐8(100克)、磷酸二苯酯(3.86克)、叔-BuOH(1275毫升)和甲苯(225毫升)合并，并在减压下加热至回流。收集约500毫升馏出物，抛弃，同时连续以甲苯在叔-BuOH中的溶液置换。移除真空，并将馏出物转换经过装满分子筛的柱子渗滤，及使其返回容器。在干燥完成后，将DPPA(52.4毫升；已溶于60毫升甲苯中)在80℃下慢慢添加至浆液中。在完全转化(HPLC)时，通过真空蒸馏移除叔-BuOH，并连续以甲苯置换。使混合物冷却至室温，并以10％ K₂HPO₄水溶液(1 x 800毫升，1 x 400毫升)和水(400毫升)洗涤两次。将有机相加热，并在真空中浓缩至约270毫升。移除真空，并在约80℃下慢慢添加庚烷(1.1升)，接着添加9的种子晶体(～1克)。使浆液慢慢冷却至室温，并将{(S)-1-[(1S，2R，4R)-2-叔丁氧羰基胺基-4-(异丙基-甲基-胺基)-环-己基]-2-氧代-吡咯烷-3-基}-胺基甲酸苄酯9通过过滤分离，为白色固体(86.76克，78％产率)。

实施例1，替代制备，步骤5：使胺基甲酸叔丁酯9(50克)溶于甲苯(500毫升)和i-PrOH(150毫升)中。然后，将所形成的溶液加热至60℃。在低于65℃下添加甲磺酸(19.6毫升)。在反应完成(HPLC)时，使混合物冷却至室温，在低于25℃下慢慢添加三乙胺(69.4毫升)。接着，在低于25℃下添加乙酸酐。1小时后，在低于25℃下添加乙酸(250毫升)。抛弃甲苯相，并将2-甲基-THF(500毫升)添加至水相中。将混合物激烈搅拌，并以NaOH(25％水溶液)碱化至pH 12。抛弃水相，并将有机层以盐水(250毫升)洗涤。在减压下浓缩有机层，再连续以i-PrOH置换。使溶液冷却，过滤，以提供在i-PrOH溶液中的{(S)-1-[(1S，2R，4R)-2-乙酰胺基-4-(异丙基-甲基-胺基)-环己基]-2-氧代-吡咯烷-3-基}-胺基甲酸苄酯10，将其直接使用于氢化作用。
实施例1，替代制备，步骤6：向含有乙酰胺10(～61克)在i-PrOH(～625毫升)中的溶液中，添加10％ Pd/C潮湿催化剂(2.5克)，并使此悬浮液在30psig和约25℃下氢化至少2小时。在完成(HPLC)时，通过过滤移除催化剂，再使滤液浓缩至约550毫升。添加水(8.8毫升)，接着添加在i-PrOH溶液中的5.6N盐酸(69.5毫升)。使所形成的浆液在室温下保持过夜。通过过滤分离产物，并将滤饼以i-PrOH(2 x 100毫升)冲洗，再于～50℃下、在真空中干燥至恒重，得到N-[(1R，2S，5R)-2-((S)-3-胺基-2-氧代-吡咯烷-1-基)-5-(异丙基-甲基-胺基)-环己基]-乙酰胺11(55.6克，97％产率)，为其盐酸盐(73.6％游离碱检测，HPLC)。

实施例1，替代制备，步骤7：向在MeCN(400毫升)中的6-三氟甲基-喹唑啉-4-醇12(20.1克)中，添加甲醇钠在甲醇中的5.5M溶液(17.0毫升)。使所形成的悬浮液在减压下蒸馏，并连续以MeCN置换，以移除甲醇。在低于50℃下向浆液中添加DMF(1.4克)，接着添加氯化草酰(13.0毫升)。在反应完成(HPLC)时，在减压下移除过量试剂，得到～400毫升浆液。使混合物冷却至室温，并以10％ K₂HPO₄水溶液(1 x 1.0升，1x0.5升)洗涤，得到约450毫升潮湿MeCN溶液中的4-氯基-6-三氟甲基-喹唑啉13(～21.2克)，将其直接使用于后续偶合反应中(HPLC纯度99.8％)。
实施例1，替代制备，步骤8：向乙酰胺11(28.5克，HCl盐，73.6％游离碱检测)、乙腈(100毫升)、N，N-二-异丙基-N-乙胺(61毫升)的混合物中，在室温下添加13(～21.2克)在MeCN(～450毫升)中的溶液。使均匀混合物保持过夜。在反应完成(HPLC)时，使混合物在真空中浓缩至约125毫升。添加乙酸的9.5％水溶液(240毫升)，并以二氯甲烷萃取水相。分离水相，添加甲基叔丁基醚(450毫升)，接着添加2N氢氧化锂水溶液，以调整至pH>11.5。分离有机层，以水洗涤，过滤。将约一半的醚相以甲基叔丁基醚(～250毫升)稀释，再在真空中浓缩。在低于60℃下慢慢添加庚烷(45毫升)，接着添加实施例1的种子晶体(0.4克)。添加另外的庚烷(125毫升)，并使混合物慢慢冷却至室温，使所形成的浆液保持过夜。通过过滤分离产物，将滤饼以庚烷洗涤，再在真空中干燥至恒重，得到N-((1R，2S，5R)-5-(异丙基胺基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)-喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺14(15.0克，85％产率)。
关于实施例1的结晶操作
实施例1，双-BSA盐的制备和纯化：使得自实施例1步骤11的全部非晶型游离碱溶于甲醇(600毫升)中。将所形成的溶液在60℃下加热，并添加苯磺酸(2.5当量)。使混合物冷却至室温，并通过过滤收集所形成的白色固体，得到标题化合物的双-苯磺酸盐(95克，86％)。此物质为>99％纯，通过HPLC。使此物质从80/20 EtOH/H₂O中通过再结晶进一步纯化，其提供不含任何残留甲醇的盐。HPLC纯度＝99.8％。¹H NMR(500MHz，D₂O)δppm 8.75(1H，s)，8.66(1H，s)，8.25(1H，d，J＝8.80Hz)，7.90(1H，d，J＝8.80Hz)，7.75(4H，d，J＝8.25Hz)，7.43-7.57(6H，m)，5.42(1H，t)，4.33-4.44(1H，m)，4.09-4.19(1H，m)，3.83-3.91(1H，m)，3.74-3.83(2H，m)，3.61(1H，t，J＝11.55Hz)，2.75(3H，d，J＝6.60Hz)，2.61-2.70(1H，m)，2.31-2.44(1H，m)，2.20-2.27(1H，m)，2.17(2H，d，J＝12.10Hz)，1.94-2.04(1H，m，J＝12.65Hz)，1.90-1.95(3H，m)，1.72-1.91(2H，m)，1.37(3H，d，J＝6.05Hz)，1.29(3H，d，J＝6.60Hz)。差示扫描量热法使用了10℃/分钟的加热速率，并且显现出熔解/分解吸热峰，其中开始温度为297.6℃，而尖峰温度为299.1℃。
实施例1，游离碱的结晶：使N-((1R，2S，5R)-5-(异丙基(甲基)氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺的非晶型游离碱的样品(1克)溶于二氯甲烷(5毫升)中。在溶液中装入庚烷(30毫升)，然后温热以蒸馏二氯甲烷。使溶液冷却至40℃；沉淀出白色固体。将此悬浮液加热至90℃，并搅拌2小时。使此悬浮液冷却至室温，过滤，得到标题化合物的纯游离碱。通过¹H-NMR显现无残留溶剂。
实施例2
N-((1R，2S，5R)-5-(异丙基(甲基)氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺的结晶型
N-((1R，2S，5R)-5-(异丙基(甲基)氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺的各种结晶型，包括游离碱与盐型式及其溶剂合物，是按下述制备和表征的。
表征型式的操作
单晶数据
数据是在Bruker-Nonius(BRUKER AXS公司，5465 East CherylParkway Madison，WI 53711 USA)CAD4序列衍射仪上收集的。单位晶胞参数是经过25个高角度反射的实验衍射仪设定的最小平方分析获得的。强度是使用Cu Kα放射(λ＝1.5418)，在恒温下，以θ-2θ可变扫描技术测量的，并且仅对Lorentz-极化因子校正。背景计数是在扫描极端处，对一半扫描时间收集的。或者，单晶数据是在Bruker-Nonius KappaCCD 2000系统上，使用Cu Kα放射(λ＝1.5418)收集的。所测量强度数据的标引(indexing)和处理是以在收集程序套装中的HKL2000软件包装(Otwinowski，Z.& Minor，W.(1997)in Macromolecular Crystallography，eds.Carter，W.C.Jr & Sweet，R.M.(Academic，NY)，Vol.276，pp.307-326)进行(收集数据集与处理使用者界面：收集：数据集软件，R.Hooft，Nonius B.V.，1998)。或者，单晶数据是在Bruker-AXS APEX2CCD系统上，使用Cu Kα放射(λ＝1.5418)收集的。所测量强度数据的标引和处理是以APEX2软件包装/程序套装(APEX2数据收集与处理使用者界面：APEX2使用者手册，v1.27；BRUKER AXS公司，5465 EastCheryl Parkway Madison，WI 53711 USA)进行。
当需要时，晶体是在数据收集期间，在Oxford低温系统(OxfordCryosystems Cryostream冷却器：J.Cosier与A.M.Glazer，J.Appl.Cryst.，1986，19，105)的冷流体中冷却的。
结构是通过直接方法解析的，并以所发现的反射为基础，使用以下的任一种精化(refine)，SDP(SDP，结构测定包装，Enraf-Nonius，Bohemia NY 11716。散射因子，包括f′与f＂，在SDP软件中，取自＂国际结晶学表＂，Kynoch出版社，Birmingham，England，1974；第IV卷，表2.2A与2.3.1)包装软件，其伴有少许局部修正，或者结晶学包装MAXUS(maXus解决和精化软件套装：S.Mackay，C.J.Gilmore，C.Edwards，M.Tremayne，N.Stewart，K.Shankland.maXus：关于得自衍射数据或SHELXTL4的晶体结构解决与精化的计算机程序。所导出的原子参数(坐标和温度因子)是经过全矩阵最小平方精化的。在精化中被降至最少的函数为∑w(|Fo|-|Fc|)²。R定义为∑‖Fo|-|Fc‖/∑|Fo|，而Rw＝[∑w(|Fo|-|Fc|)₂/∑w|Fo|²]^1/2，其中w为以所发现强度的误差为基础的适当的加权函数。差异图是在所有精化阶段下检验的。氢是在理想化位置上以均向性温度因子引进的，但未改变氢参数。
X-射线粉末衍射数据(PXRD)
PXRD数据是使用Bruker C2 GADDS获得的。放射为Cu Kα(40KV，50mA)。样品-检测器距离为15厘米。将粉末样品放置在1毫米或更小直径的密封玻璃毛细管中；将毛细管在数据收集期间旋转。收集3≦2θ≦35°的数据，其中样品曝露时间为至少2000秒。将所形成的二维衍射弧积分，以产生传规的一维PXRD图，其在3至35度的2θ的范围内具有步阶大小为0.02度的2θ。将约200毫克装填至Philips粉末X-射线衍射(PXRD)样品支持器中。将样品转移至Philips MPD单元(45KV，40mA，Cu Kα)中。数据是在室温下，在2至32的2-θ范围内收集的(连续扫描模式，扫描速率0.03度/秒，自动发散和抗散射狭缝，接收狭缝：0.2毫米，样品转子：ON)
差示扫描量热法(DSC)
DSC实验是在TA Instruments^TM Q1000或2920型中进行的。将样品(约2-6毫克)在铝浅盘中称重，并精确地记录至百分之一毫克，再转移至DSC。仪器是用氮气以50毫升/分钟吹扫。在10℃/分钟加热速率下，在室温和300℃之间收集数据。图形是以吸热峰向下行制成的。
热重分析(TGA)
TGA实验是在TA Instruments^TM Q500或2950型中进行的。将样品(约10-30毫克)置于预先称量皮重的铂浅盘中。样品的重量是通过仪器精确地测量的，并记录至千分之一毫克。将炉子用氮气以100毫升/分钟吹扫。在10℃/分钟加热速率下，在室温和300℃之间收集数据。
型式的制备与分析
这些实施例的单位晶胞数据和其它性质呈现于表1中。单位晶胞参数得自单晶X-射线结晶学分析。单位晶胞的详细说明可参阅Stout &Jensen，X-Ray Structure Determination：a Practical Guide，(MacMillian，1968)的第3章。
实施例2a、b、c、d、e、f、g和h的部分原子坐标分别呈现于表2、3、4、5、6、7、8和9中。
此外，实施例2a、b、d、e、f、g的h的特性粉末X-射线衍射吸收峰位置(度2θ±0.1)@RT呈现于表10中。其全部均以高质量图为基础，以衍射仪(Cu Kα)收集，使用旋转毛细管，其中2θ是用NIST其它适当标准校准的。
最后，图1、2、3、4、5、6和7分别呈现了实施例2a、b、d、e、f、g和h的XRPD图。图8和9分别揭示实施例2a的DSC和TGA分析，而图10、11和12分别揭示实施例2f的DSC、TGA和水份吸着等温线波谱。
型式制备、XRD、DSC和TGA表征
实施例2a，N-1型式，二苯磺酸盐：
使N-((1R，2S，5R)-5-(异丙基(甲基)氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺二-苯磺酸盐从乙酸乙酯、乙醇、甲醇和丙酮中结晶。型式N-1二苯磺酸盐为N-((1R，2S，5R)-5-(异丙基(甲基)氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺二-苯磺酸盐的不含溶剂(无水或溶剂的分子)型式。型式N-1二苯磺酸盐的特征为XRD图，该XRD图符合由单晶结构数据所产生的模拟图。型式N-1二苯磺酸盐的特征为DSC热分析图，其具有熔解/分解吸热峰，该吸热峰通常在约296℃下开始。型式N-1二苯磺酸盐的特征为TGA热曲线，其在达到约280℃下具有可忽略的重量损失(与非溶剂化型式一致)。
实施例2b，DC-1型式：
使N-((1R，2S，5R)-5-(异丙基(甲基)氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺(约0.5克)的油状类凝胶(非晶型)游离碱的样品，在BSA盐的样品萃取后，溶解于二氯甲烷(约3毫升)中。在此溶液中，添加约5毫升庚烷，并将所形成的油状混合物在开口烧杯中、在20-25℃下通过磁搅拌棒激烈搅拌。蒸发溶剂后，获得白色固体。使固体再悬浮于约5毫升庚烷和0.2毫升二氯甲烷的混合物中，并在25℃下搅拌7天。过滤所形成的浆液，风干，以提供N-((1R，2S，5R)-5-(异丙基(甲基)氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺，游离碱，型式DC-1。型式DC-1的特征为每摩尔N-((1R，2S，5R)-5-(异丙基(甲基)氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺游离碱有一摩尔二氯甲烷。型式DC-1的特征为XRD图，其符合由单晶结构数据所产生的模拟图。
实施例2c，THOO-1型式：
使N-((1R，2S，5R)-5-(异丙基(甲基)氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺，游离碱，1毫克，溶解于80微升THF中。将溶剂通过Speed-vac(Speed Vac Plus，SC250DDA，Savant/热电子公司)在高真空和22℃下历经16小时移除。将总共100微升MIBK/庚烷(1/2体积比)添加至此孔中。在环境温度(20-25℃)下保持2周后，在此孔中发现结晶。型式THOO的特征为每一摩尔N-((1R，2S，5R)-5-(异丙基(甲基)氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺游离碱有一摩尔THF。
实施例2d，E-1型式：
使N-((1R，2S，5R)-5-(异丙基(甲基)氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺游离碱，由乙醇和庚烷的溶液结晶。型式E-1的特征为每一摩尔N-((1R，2S，5R)-5-(异丙基(甲基)氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺游离碱有一摩尔乙醇。型式E-1的特征为XRD图，其符合由单晶结构数据所产生的模拟图。
实施例2e，A-1型式：
使N-((1R，2S，5R)-5-(异丙基(甲基)氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺游离碱以超过150毫克/毫升的浓度悬浮丙酮中。使此悬浮液在室温下达到平衡，以提供稍微稀的悬浮液。过滤一部分此悬浮液，并将滤液与此悬浮液两者在5℃下冷冻，以提供单丙酮溶剂合物的结晶(A-1)。型式A-1的特征为每一摩尔N-((1R，2S，5R)-5-(异丙基(甲基)氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺游离碱有一摩尔丙酮。型式A-1游离碱的特征为XRD图，其符合由单晶结构数据所产生的模拟图。
实施例2f，N-2型式：
使从BSA盐样品中萃取的N-((1R，2S，5R)-5-(异丙基(甲基)氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺的油状似凝胶(非晶型)游离碱样品(约0.5克)悬浮于庚烷(约5毫升)中。将烧瓶以金属刮勺刮搔，并将此悬浮液于25℃下通过磁搅拌棒激烈搅拌。搅拌24小时后，获得结晶性粒子的白色浆液。过滤浆液，并使湿滤饼在真空中干燥(40℃)，以提供游离碱的纯N-2型式(通过PXRD确认)。型式N-2的特征为XRD图，其符合由单晶结构数据所产生的模拟图。型式N-2为N-((1R，2S，5R)-5-(异丙基(甲基)氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺游离碱的不含溶剂(无溶剂合物分子，或无水或溶剂的分子)型式。型式N-2的特征为DSC热分析图，其具有通常开始于约158℃至约162℃的熔解吸热峰。型式N-2的特征为TGA热曲线在达到约145℃下具有可忽略的重量损失，其与单晶结构数据一致。重量损失系符合外来溶剂。水份吸着等温线的特征为在约25％至约75％ RH的范围内、在25℃下重量增加0.15％，这表示N-2型式为轻微吸湿性(我陈述为极轻微或非吸湿性)。
实施例2g，型式AN-3：
将N-((1R，2S，5R)-5-(异丙基(甲基)氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺游离碱的悬浮液以～200毫克/毫升制备于乙腈中，并使其在室温下达到平衡，以提供稍微稀的悬浮液。过滤一部分此悬浮液，并使滤液与此悬浮液两者在5℃下冷冻，以提供乙腈溶剂合物的结晶(AN-3)。型式AN-3的特征为每一摩尔N-((1R，2S，5R)-5-(异丙基(甲基)氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺游离碱有一摩尔乙腈。型式AN-3的特征为XRD图，其符合由单晶结构数据所产生的模拟图。
实施例2h，型式H4-1，HCl：
使N-((1R，2S，5R)-5-(异丙基(甲基)氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺的游离碱的样品(约0.2克)溶于乙醇(约1毫升)中。向该游离碱溶液中添加约310微升在乙醇中的HCl溶液(约1.25M浓度)。将此溶液以少量HCl盐的结晶浆液接种。向所形成的混浊溶液中添加3毫升庚烷。在20-25℃下搅拌的同时，历经1-2小时逐渐形成白色浆液。将浆液在20℃下再搅拌12小时，过滤，并以庚烷洗涤。使湿滤饼在真空中干燥(40℃)，以提供HCl盐四水合物，型式H4-1，HCl。型式H4-1，HCl的特征为每摩尔N-((1R，2S，5R)-5-(异丙基(甲基)氨基)-2-((S)-2-氧代-3-(6-(三氟甲基)喹唑啉-4-基氨基)吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺盐酸盐具有4摩尔水。型式H4-1，HCl盐四水合物的特征为SRD图，其符合由单晶结构数据所产生的模拟图。
表1
单位晶胞参数

表1(续)
单位晶胞参数