海胆棘壳色素的制备方法.pdf

海胆棘壳色素的制备方法，用去除性腺的海胆棘壳，洗净烘干后粉碎至粒度达到20～200目；用0.5～10％(w/w)柠檬酸或磷酸二氢钠和粉碎后的海胆棘壳粉研磨10～120分钟；再用酸性溶液浸提，经过滤后真空浓缩，得膏状母液；将无水乙醇和膏状母液混合后加入萃取釜，CO2经冷凝升压后进入，30～60℃，20～50MPa进行分离后经减压浓缩、冷冻干燥得粗品。进一步精制采用大孔树脂柱和反相柱进行吸附、分离，精品纯度大于95％。发明采用废弃的海胆棘壳为原料，产品无毒，可直接应用于医药、食品、保健品和化妆品等领域。提取过程操作简单，效率高，所用资源可再生利用，大大降低了生产成本和社会成本。

1.  海胆棘壳色素的制备方法，其特征在于操作步骤为：
(一)原料的预处：去除性腺的海胆棘壳，用清水冲洗，烘干后，粉碎至粒度达到20～200目备用；
(二)研磨：用0.5～10％(w/w)研磨助剂和上述粉碎后的海胆棘壳粉混匀后采用研磨机研磨10～120分钟；
所述研磨助剂为柠檬酸或磷酸二氢钠；
(三)海胆棘壳色素的提取与纯化：
(1)研磨后的海胆棘壳与研磨助剂混合物用5～30倍体积的酸性溶液浸提，浸提温度10～60℃，浸提时间为0.1～10h，浸提液经过滤除去不溶颗粒杂质后于10～60℃真空浓缩，得膏状母液；
所述酸性浸提液为含有酸、有机溶剂的水溶液，其体积百分比为：
酸              5～20
有机溶剂        25～30
水              50～65
所述酸为甲酸、乙酸或盐酸；所述有机溶剂为甲醇、乙醇或丙酮；
(2)将夹带剂无水乙醇和上述膏状母液按质量比1∶100～100∶1的比例均匀混合后加入萃取釜，CO₂经冷凝升压后进入萃取釜，控制萃取温度30～60℃，压力20～50MPa，萃取时间0.5～8小时，萃取后的溶剂进入分离釜，一级分离温度30～60℃，分离压力8～20MPa，二级分离温度30～40℃，分离压力2～7MPa，得到含有海胆棘壳色素的溶液，减压浓缩后经冷冻干燥得紫红色海胆棘壳色素粗品粉末。

2.  根据权利要求1所述的海胆棘壳色素的制备方法，其特征在于在操作步骤(三)海胆棘壳色素的提取与纯化中的(1)中所得到的膏状母液用大孔树脂进行提取海胆棘壳色素粗品，吸附洗脱条件及步骤为：
(1)大孔树脂装柱径高比为1∶5～1∶20，膏状色素母液用浓度为0.2％(w/v)的盐酸溶液稀释至吸光值为2后进行吸附，吸附温度为10～60℃，树脂吸附溶液的pH为1～5，吸附流速1～20VB/h；
所述大孔树脂为NKA-9、NKA-II、D101或D4020型号树脂；
(2)用1～3倍柱床体积的纯水或含有1～30％(v/v)甲醇、乙醇、丙酮或乙腈的水溶液洗脱，此洗脱液弃去，以除去无机盐、糖、蛋白杂质；
(3)用含有0～5％(w/v)盐酸、甲酸、乙酸或三氟乙酸的30％～100％(v/v)甲醇、乙醇、丙酮或乙腈的水溶液洗脱2～5个柱床体积，洗脱流速1～20VB/h，收集洗脱部分，10～60℃减压浓缩至无乙醇味后经冷冻干燥得紫红色海胆棘壳色素粗品粉末。

3.  根据权利要求1所述的海胆棘壳色素的制备方法，其特征在于在操作步骤(三)海胆棘壳色素的提取与纯化中的(2)中所得到的紫红色海胆棘壳色素粗品粉末用大孔树脂进行再次提纯，吸附洗脱条件及步骤为：
(1)大孔树脂装柱径高比为1∶5～1∶20，海胆棘壳色素粗品粉末用0.2％(w/v)的盐酸溶液稀释至吸光值为2后吸附，吸附温度为10～60℃，树脂吸附溶液的pH为1～5，吸附流速1～20VB/h；
所述大孔树脂为NKA-9、NKA-II、D101或D4020型号树脂；
(2)用1～3倍柱床体积的纯水或含有1～30％(v/v)甲醇、乙醇、丙酮或乙腈的水溶液洗脱，以除去无机盐、糖、蛋白杂质；
(3)用含有0～5％(w/v)盐酸、甲酸、乙酸或三氟乙酸的30～100％(v/v)甲醇、乙醇、丙酮或乙腈的水溶液洗脱2～5个柱床体积，洗脱流速1～20VB/h，收集洗脱部分，10～60℃减压浓缩至无乙醇味后冷冻干燥得紫红色海胆棘壳色素纯品粉末。

4.  根据权利要求1、2或3所述的海胆棘壳色素的制备方法，其特征在于精制海胆棘壳色素，其操作步骤为：
将海胆棘壳色素粉末用甲醇溶解至饱和后上C18或C8反相柱分离纯化，用含有0～5％(w/v)盐酸、甲酸、乙酸或三氟乙酸的5～100％(v/v)甲醇、乙醇、丙酮或乙腈的水溶液洗脱，分别收集不同海胆棘壳色素所在洗脱峰的洗脱液，经浓缩结晶即得海胆棘壳色素纯品，其纯度＞95％。

海胆棘壳色素的制备方法
技术领域
本发明属于以天然海产废弃料为原料制备的色素的技术领域，同时涉及食品上色的色素。特别是以一种超临界萃取提取及纯化的方法来制取色素。
背景技术
随着人们生活水平提高，对食品色、香、味的要求越来越高。因此，人工合成色素遍广泛添加在食品中，以改变食品的颜色，提高人们的食欲感。然而，由于人工合成色素的食用安全性越来越受到人们的关注，不少人工合成色素也相继被禁止用于食品加工。因此，从动植物中提取天然色素逐渐引起了人们的兴趣，其开发和利用成为一大研究热点，主要原因是天然色素直接来源于动植物和微生物，不仅可作为食品、药品、化妆品等的着色剂，而且自身还含有多种生理活性成分，有的甚至对某些疾病有很好的治疗作用，对人体有保健功能。
海胆属棘皮动物门海胆纲，是一种重要的海洋经济动物。其主要供食部分为海胆的生殖腺，营养丰富味道鲜美，国内外沿海国家历来有生吃海胆生殖腺的习惯，不但鲜食，而且加工成各种制品，如海胆酱、海胆糜、酒精海胆等高档食品，由于人们生活水平的提高，生活品质的提升，海胆年消费量逐年增大，但是占海胆总重近60％的海胆棘壳在海胆的加工过程中往往当作废弃物丢弃，并没有进行进一步的加工，不仅造成了极度的浪费，同时也给周边环境造成了很大的压力。近年来，研究者发现海胆棘壳色素具有明显的抗肿瘤、抗氧化、抗菌及保护心血管等生理活性，俄罗斯甚至将海胆棘壳色素做为治疗心血管疾病的药物进入临床应用，这使得海胆棘壳色素越来越受到人们的关注。目前国内外对海胆棘壳色素的提取研究中，大都采用盐酸溶解棘壳，再用乙醚、氯仿、丙酮等有机溶剂直接萃取，此方法繁琐费时、效率低，并不适用于海胆棘壳色素的大规模生产提取。因此，开发出一种成熟的适用于大规模生产的海胆棘壳色素提取方法，无论是对推动海胆的综合加工利用，还是对整个海产品加工行业的发展，都是非常重要的。
发明内容
本发明的目的在于提供一种将废弃海胆棘壳制备海胆棘壳色素的方法，制得的产品最大程度的保留了海胆棘壳色素的生理活性，同时也使纯化效率和产品纯度大大提高。
本发明的技术方案是经研磨后的海胆棘壳粉以酸性溶剂浸提，得到的提取物经二氧化碳超临界提取而得到粉状的海胆棘壳色素粗品。再经柱层析分离而得海胆棘壳色素纯品。
本发明的具体操作方法如下：
(一)原料的预处：
去除性腺的海胆棘壳，用清水冲洗，单独取下棘刺部分或壳部分或整个棘壳部分真空冷冻干燥或常压烘干后，用超微粉碎机粉碎至粒度达到20～200目备用。
(二)研磨：
选取柠檬酸或磷酸二氢钠作为研磨助剂，助剂用量为0.5～10％(w/w)，将助剂与上述粉碎后的海胆棘壳混匀后采用研磨机研磨，研磨时间为10～120分钟。
(三)海胆棘壳色素的提取与纯化：
1.浸提：上述研磨后的海胆棘壳用5～30倍体积的酸性浸提溶液浸提，浸提温度10～60℃，浸提时间为0.1～10h，所述酸性浸提液为含有酸、有机溶剂的水溶液，其体积百分比为：
酸                  5～20
有机溶剂            25～30
水                  50～65
所述酸为甲酸、乙酸或盐酸；所述有机溶剂为甲醇、乙醇或丙酮；
浸提物经过滤除去不溶颗粒杂质后真空浓缩(温度10～60℃)，得膏状母液。
2.超临界萃取：将夹带剂无水乙醇和上述膏状母液按质量比1∶100～100∶1的比例均匀混合后加入萃取釜，CO₂经冷凝升压后进入萃取釜，控制萃取温度30～60℃，压力20～50MPa，萃取时间0.5～8小时，萃取后的溶剂进入分离釜，一级分离温度30～60℃，分离压力8～20MPa，二级分离温度30～40℃，分离压力2～7MPa，得到含有海胆棘壳色素的溶剂，减压浓缩后冷冻干燥得紫红色海胆棘壳色素粗品粉末。
3、大孔树脂吸附：将上述所得棘壳色素粉末用0.2％(w/v)的盐酸溶液稀释至吸光值为2后用大孔树脂进行吸附洗脱。本发明对大孔树脂的种类和型号进行了静态吸附实验筛选，对比不同型号树脂的吸附率和解析率，优选采用NKA-9、NKA-II、D101或D4020型号树脂进行吸附洗脱。
吸附洗脱条件及步骤为：
(1)装柱径高比为1∶5～1∶20，吸附温度为10～60℃，树脂吸附溶液的pH为1～5，吸附流速1～20VB/h，
(2)用1～3倍柱床体积的纯水或含有1～30％(v/v)甲醇、乙醇、丙酮或乙腈的水溶液洗脱，此洗脱液弃去，以除去无机盐、糖、蛋白等杂质，
(3)用含有0～5％(w/v)盐酸、甲酸、乙酸或三氟乙酸的30％～100％(v/v)甲醇、乙醇、丙酮或乙腈的水溶液洗脱2～5个柱床体积，洗脱流速1～20VB/h，收集洗脱部分，10～60℃减压浓缩至无乙醇味后冷冻干燥得紫红色海胆棘壳色素纯品粉末。
本发明还可以将在步骤(三)海胆棘壳色素的提取与纯化的1步中浸提所得到的膏状色素母液用0.2％(w/v)的盐酸溶液稀释至吸光值为2后用大孔树脂进行如上述(1)、(2)和(3)同样的方法，吸附和洗脱后制得紫红色海胆棘壳色素粗品粉末。
上述2(超临界萃取)、3(大孔树脂吸附)中所得海胆棘壳色素粉末既可作为产品直接应用医药、食品、保健品和化妆品领域，也可以用如下的反相柱吸附分离进一步纯化后得到海胆棘壳色素精品，其纯度＞95％。
(四)海胆棘壳色素的二次分离纯化：
本发明采用反相柱层析的方法，将以硅胶为基质的反相介质装柱，粗品或经提纯的海胆棘壳色素粉末用甲醇溶解至饱和后，上C18或C8反相柱吸附，用含有0～5％(w/v)盐酸、甲酸、乙酸或三氟乙酸的5％～100％(v/v)甲醇、乙醇、丙酮或乙腈的水溶液洗脱，分别收集不同海胆棘壳色素所在洗脱峰的洗脱液，经浓缩结晶即得海胆棘壳色素纯品。其纯度＞95％。其中以硅胶为基质的反相介质为市售的C8和C18反相介质。
本发明与现有技术相比，具有以下优点：
1.本发明采用废弃的海胆棘壳为原料，产品无毒，可直接应用于医药、食品、保健品和化妆品等领域。提取过程操作简单，效率高，所用资源可再生利用，大大降低了生产成本和社会成本。
2.本发明将微切助互作技术用于海胆棘壳色素的提取，高强度研磨在粉碎棘壳碳酸盐骨架的同时能促进其暴露出棘壳色素与助剂接触和反应，从而改变棘壳色素溶解性，有效提高提取得率。
3.本发明利用超临界二氧化碳萃取和大孔树脂来对海胆棘壳中的棘壳色素进行提取和纯化，效果与有机溶剂萃取法相似，但耗时短，所用溶剂毒性小、用量少且产物得率高，二氧化碳、大孔树脂和反相层析介质均可再生后重复使用；所用有机溶剂均可蒸发回收，从而降低生产成本且方法的纯化效果好，所获海胆棘壳色素的纯度高。
4.本发明采用酸化乙醇溶液浸提海胆棘壳中的色素，既解决了单独采用乙醇浸提无法有效破坏棘壳的碳酸盐骨架，导致色素被包裹在碳酸盐骨架中不能释放的问题，又解决了单独采用盐酸浸提所导致的浸提液中的不溶性蛋白等杂质很难通过离心或过滤去除的问题。
5.对于海胆棘壳色素的进一步分离纯化，本工艺采用的是反相柱层析，可以用紫外在线检测，经超临界二氧化碳萃取或大孔树脂吸附的初分离产物经此一步层析可将绝大部分杂质除去，得到单一的棘壳色素组分结晶。
具体实施方式
实例一 海胆棘壳色素粉末的制备
称取去除性腺的大连紫海胆棘壳200g，用清水冲洗，50℃干燥后，超微粉碎机粉碎物料达到粒度50目，粉碎后的海胆棘壳中加入3％(w/w)的柠檬酸混匀，使用振动研磨机研磨30分钟，用5L酸性乙醇溶液(其体积比为甲酸∶乙醇∶水＝10∶30∶60)室温浸提30min。海胆棘壳色素的浸提液经减压过滤后，55℃旋转蒸发浓缩至无醇味，得膏状色素母液。
加入50ml无水乙醇和上述膏状色素母液均匀混合后放入萃取釜，CO₂经冷凝升压后进入萃取釜，控制萃取温度50℃，压力30MPa，萃取时间4小时，萃取后的溶剂进入分离釜，一级分离温度55℃，分离压力16MPa，二级分离温度30℃，分离压力5MPa，得到含有海胆棘壳色素的溶剂，减压浓缩后冷冻干燥得1.145g紫红色海胆棘壳色素粉末。
色素粉末溶于0.4moL/L盐酸后，在可见光区470～480nm处有最大吸收，色价＞10。
实例二 海胆棘壳色素粉末的制备
称取去除性腺的大连紫海胆棘壳200g，用清水冲洗，50℃干燥后，超微粉碎机粉碎物料达到粒度50目，粉碎后的海胆棘壳中加入3％(w/w)的柠檬酸混匀，使用振动研磨机研磨30分钟。用10L酸性乙醇溶液(甲酸∶乙醇∶水＝5∶30∶65)室温浸提30min。海胆棘壳色素的浸提液经减压过滤后，55℃旋转蒸发浓缩至无醇味，得膏状色素母液。
加入50ml无水乙醇和上述膏状色素均匀混合后放入萃取釜，CO₂经冷凝升压后进入萃取釜，控制萃取温度50℃，压力30MPa，萃取时间4小时，萃取后的溶剂进入分离釜，一级分离温度55℃，分离压力16MPa，二级分离温度35℃，分离压力5MPa，得到含有海胆棘壳色素的溶剂，减压浓缩后干燥得0.881紫红色海胆棘壳色素粉末。
色素粉末溶于0.4moL/L盐酸后，在可见光区470～480nm处有最大吸收峰，色价＞10。
实例三 海胆棘壳色素粉末的制备
称取去除性腺的大连紫海胆棘壳200g，用清水冲洗，50℃干燥后，超微粉碎机粉碎物料达到粒度50目，粉碎后的海胆棘壳中加入3％(w/w)的柠檬酸混匀，使用振动研磨机研磨30分钟，用4L酸性乙醇溶液(甲酸∶乙醇∶水＝15∶25∶60)室温浸提30min。海胆棘壳色素的浸提液经减压过滤后，55℃旋转蒸发浓缩至无醇味，得膏状色素母液。
加入50ml无水乙醇和膏状色素母液均匀混合后放入萃取釜，CO₂经冷凝升压后进入萃取釜，控制萃取温度50℃，压力30MPa，萃取时间4小时，萃取后的溶剂进入分离釜，一级分离温度55℃，分离压力16MPa，二级分离温度30℃，分离压力5MPa，得到含有海胆棘壳色素的溶剂，减压浓缩后冷冻干燥得1.145g紫红色海胆棘壳色素粉末。
上述色素母液粉末用0.2％(w/v)的盐酸溶液稀释至吸光值为2后用型号为NKA-9的大孔树脂进行吸附，吸附温度20℃，吸附流速2VB/h，吸附饱和后用3倍柱床体积的去离子水洗脱，流速4VB/h，弃去洗脱液，再用4倍柱床体积含0.5％(w/v)甲酸的95％(v/v)乙醇溶液以4VB/h洗脱，收集洗脱液，55℃旋转蒸发浓缩至无醇味后冷冻干燥得0.834g紫红色海胆棘壳色素粉末。
色素粉末溶于0.4moL/L盐酸后，在可见光区470～480nm处有最大吸收峰，色价＞12。
实例四 海胆棘壳色素粉末的制备
称取去除性腺的大连紫海胆棘壳200g，用清水冲洗，50℃干燥后，超微粉碎机粉碎物料达到粒度80目，粉碎后的海胆棘壳中加入4％(w/w)的柠檬酸混匀，使用振动研磨机研磨20分钟，用3L酸性乙醇溶液(甲酸∶乙醇∶水＝20∶30∶50)室温浸提30min。上述海胆棘壳色素的浸提液经减压过滤后，55℃旋转蒸发浓缩至无醇味，得膏状色素母液。
加入50ml无水乙醇和膏状色素母液均匀混合后放入萃取釜，CO₂经冷凝升压后进入萃取釜，控制萃取温度50℃，压力30MPa，萃取时间4小时，萃取后的溶剂进入分离釜，一级分离温度55℃，分离压力16MPa，二级分离温度30℃，分离压力5MPa，得到含有海胆棘壳色素的溶剂，减压浓缩后冷冻干燥得1.145g紫红色海胆棘壳色素粉末。
上述色素母液粉末用0.2％(w/v)的盐酸溶液稀释至吸光值为2后用型号为NKA-II的大孔树脂进行吸附，吸附温度20℃，吸附流速2VB/h，吸附饱和后用3倍柱床体积的去离子水洗脱，流速4VB/h，弃去洗脱液，再用4倍柱床体积95％(v/v)乙醇溶液以4VB/h洗脱，收集洗脱液，55℃旋转蒸发浓缩至无醇味后冷冻干燥得0.918g紫红色海胆棘壳色素粉末。
色素粉末溶于0.4moL/L盐酸后，在可见光区470～480nm处有最大吸收峰，色价＞12。
实例五 海胆棘壳色素粉末的制备
称取去除性腺的大连紫海胆棘壳200g，用清水冲洗，50℃干燥后，超微粉碎机粉碎物料达到粒度80目，粉碎后的海胆棘壳中加入4％(w/w)的柠檬酸混匀，使用振动研磨机研磨20分钟，用5L酸性乙醇溶液(乙酸∶乙醇∶水＝10∶30∶60)室温浸提30min。浸提液经减压过滤后，55℃旋转蒸发浓缩至无醇味，得膏状色素母液。
色素母液用0.2％(w/v)的盐酸溶液稀释至吸光值为2后用型号为D101的大孔树脂进行吸附，吸附温度20℃，吸附流速1.5VB/h，吸附饱和后用3倍柱床体积的5％(v/v)乙醇溶液洗脱，流速3VB/h，弃去洗脱液，再用3倍柱床体积95％(v/v)乙醇溶液以3VB/h洗脱，收集洗脱液，55℃旋转蒸发浓缩至无醇味后冷冻干燥得0.878g紫红色海胆棘壳色素粉末。
此色素粉末溶于0.4moL/L盐酸后，在可见光区470～480nm处有最大吸收峰，色价＞12。
实例六 海胆棘壳色素粉末的制备
称取去除性腺的大连紫海胆棘壳200g，用清水冲洗，50℃干燥后，超微粉碎机粉碎物料达到粒度80目，粉碎后的海胆棘壳中加入4％(w/w)的柠檬酸混匀，使用振动研磨机研磨20分钟，用5L酸性乙醇溶液(盐酸∶乙醇∶水＝10∶30∶60)室温浸提30min。浸提液经减压过滤后，55℃旋转蒸发浓缩至无醇味，得膏状色素母液。
色素母液用0.2％(w/v)的盐酸溶液稀释至吸光值为2后用型号为D4020的大孔树脂进行吸附，吸附温度20℃，吸附流速2VB/h，吸附饱和后用3倍柱床体积的5％(v/v)甲醇溶液洗脱，流速3VB/h，弃去洗脱液，再用2倍柱床体积甲醇以4VB/h洗脱，收集洗脱液，55℃旋转蒸发浓缩至无醇味后冷冻干燥得0.928g紫红色海胆棘壳色素粉末。
色素粉末溶于0.4moL/L盐酸后，在可见光区470～480nm处有最大吸收峰，色价＞12。
实例七 海胆棘壳色素粉末的制备
称取去除性腺的大连紫海胆棘壳200g，用清水冲洗，50℃干燥后，超微粉碎机粉碎物料达到粒度80目，粉碎后的海胆棘壳中加入4％(w/w)的柠檬酸混匀，使用振动研磨机研磨20分钟，用5L酸性乙醇溶液(盐酸∶乙醇∶水＝10∶30∶60)室温浸提30min。浸提液经减压过滤后，55℃旋转蒸发浓缩至无醇味，得膏状色素母液。
色素母液用0.2％(w/v)的盐酸溶液稀释至吸光值为2后用型号为D4020的大孔树脂进行吸附，吸附温度20℃，吸附流速2VB/h，吸附饱和后用3倍柱床体积的去离子水洗脱，流速3VB/h，弃去洗脱液，再用2倍柱床体积甲醇以4VB/h洗脱，收集洗脱液，55℃旋转蒸发浓缩至无醇味后冷冻干燥得0.928g紫红色海胆棘壳色素粉末。
色素粉末溶于0.4moL/L盐酸后，在可见光区470～480nm处有最大吸收峰，色价＞12。
实例八 海胆棘壳色素粉末的制备
称取去除性腺的大连紫海胆棘壳200g，用清水冲洗，50℃干燥后，超微粉碎机粉碎物料达到粒度50目，粉碎后的海胆棘壳中加入3％(w/w)的柠檬酸混匀，使用振动研磨机研磨30分钟，用5L酸性乙醇溶液(甲酸∶乙醇∶水＝10∶30∶60)室温浸提30min。色素的浸提液经减压过滤后，55℃旋转蒸发浓缩至无醇味，得膏状色素母液。
加入50ml无水乙醇和膏状色素母液均匀混合后放入萃取釜，CO₂经冷凝升压后进入萃取釜，控制萃取温度50℃，压力30MPa，萃取时间4小时，萃取后的溶剂进入分离釜，一级分离温度55℃，分离压力16MPa，二级分离温度30℃，分离压力5MPa，得到含有海胆棘壳色素的溶剂，减压浓缩后冷冻干燥得1.145g紫红色海胆棘壳色素粉末。
色素母液粉末用0.2％(w/v)的盐酸溶液稀释至吸光值为2后用型号为NKA-9的大孔树脂进行吸附，吸附温度20℃，吸附流速2VB/h，吸附饱和后用3倍柱床体积的去离子水洗脱，流速4VB/h，弃去洗脱液，再用4倍柱床体积含0.5％(w/v)甲酸的95％(v/v)乙醇溶液以4VB/h洗脱，收集洗脱液，55℃旋转蒸发浓缩至无醇味后冷冻干燥得0.834g紫红色海胆棘壳色素粉末。
将上述色素粉末用甲醇溶解至饱和后上C18反相制备柱(20×150mm)分离纯化，流动相为10-100％(v/v)的甲醇线性洗脱，收集对应洗脱峰，经浓缩结晶即得海胆棘壳色素纯品，其纯度＞95％。
实例九海胆棘壳色素粉末的制备
称取去除性腺的大连紫海胆棘壳200g，用清水冲洗，50℃干燥后，超微粉碎机粉碎物料达到粒度80目，粉碎后的海胆棘壳中加入4％的柠檬酸混匀，使用振动研磨机研磨20分钟，用5L酸性乙醇溶液(盐酸∶乙醇∶水＝10∶30∶60)室温浸提30min。色素的浸提液经减压过滤后，55℃旋转蒸发浓缩至无醇味，得膏状色素母液。
色素母液用0.2％(w/v)的盐酸溶液稀释至吸光值为2后用型号为NKA-9的大孔树脂进行吸附，吸附温度20℃，吸附流速2VB/h，吸附饱和后用3倍柱床体积的去离子水洗脱，流速3VB/h，弃去洗脱液，再用2倍柱床体积甲醇溶液以4VB/h洗脱，收集洗脱液，55℃旋转蒸发浓缩至无醇味后冷冻干燥得0.915g紫红色海胆棘壳色素粉末。
将上述色素粉末用甲醇溶解至饱和后上C8反相制备柱(20×150mm)分离纯化，流动相为10-100％(v/v)的乙腈线性洗脱，收集对应洗脱峰，经浓缩结晶即得海胆棘壳色素纯品，其纯度＞95％。