一种马尾藻食用菌调理剂的制备方法 技术领域 本发明涉及一种食用菌调理剂的制备方法， 尤其设计一种利用马尾藻属海藻制备 食用菌调理剂的方法。
背景技术 食用菌调理剂与肥料不同， 肥料是指维持正常生长所不可缺少的营养元素， 而调 理剂是在食用菌正常生长的基础上调节其生长规律、 增强其代谢功能、 改善其生理状态、 促 进其生长发育的一类生理活性物质， 可以有效提高菌物品质和增加菌物产量。
马尾藻属 (Sargassum C.Ag) 属褐藻门， 墨角藻目， 马尾藻科 (Sargassaceae)， 马 尾藻属海藻藻体中包含海藻多糖、 海藻寡糖、 氨基酸、 微量元素、 细胞分裂素、 生长素、 甜菜 碱、 赤霉素、 脱落酸、 乙烯、 多胺等， 营养价值很高， 同时马尾藻属海藻资源极其丰富， 易于人 工养殖， 加工成本低， 是一种具有巨大开发价值的海藻种属。近年来， 马尾藻在食品科技领 域的应用越来越广泛。 许多海藻可以食用， 其提取物也在被大量的开发和利用， 用于食物和 饲料， 但尚未发展应用到食用菌的栽培和养殖领域。
另一方面， 目前食用菌调理剂产品多为化学合成制得， 对食用菌的生长及环境的 安全卫生都有一定的副作用， 并且随着对食品安全的日益注重， 这些化学合成调理剂的使 用受到了越来越多的限制。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种马尾藻食用菌调理剂的制备方法， 能够以马 尾藻属海藻为原材料制备安全无污染、 对食用菌具有提质增量效果的食用菌调理剂。
为解决上述技术问题， 本发明所采取的技术方案是 ：
一种马尾藻食用菌调理剂的制备方法， 其步骤如下 ：
A、 粗提取 ： 取干燥马尾藻粉， 采用超声波破碎法、 高压浸提法、 热水浸提法、 酶解 法、 酸解法、 碱解法中的任一种对马尾藻粉进行粗提取， 离心取上清， 得马尾藻粗提取液 ；
B、 多糖降解 ： 采用纤维素酶解法或超声波降解法处理步骤 A 所得粗提取液， 促进 其中的多糖降解为寡糖 ；
C、 减压浓缩步骤 B 所得提取液至其原体积的 2/9-4/9 后， 添加 5ppm 的维生素 B2， 5ppm 的维生素 B12， 5ppm 的 0.1％ KH2PO4 和 5ppm 的 0.1％ MgSO4， 得马尾藻食用菌调理剂成 品。
采用步骤 1-A 所述的超声波破碎法对马尾藻粉进行粗提取的步骤为 ： 在超声波发 生仪内先后加入 100g 干燥马尾藻粉和 2000ml 水， 常温常压， 于 40KHz 频率、 100w 功率下提 取 4-6 分钟， 3000r/min 离心取上清， 得马尾藻粗提取液。
采用步骤 1-A 所述的高压浸提法对马尾藻粉进行粗提取的步骤为 ： 取 100g 干燥马 尾藻粉， 加 3000ml 浓度为 1％的 Na2CO3 溶液， 于 0.15MPa、 室温下提取 170-190min， 3000r/ min 离心取上清， 得马尾藻粗提取液。采用步骤 1-A 所述的热水浸提法对马尾藻粉进行粗提取的步骤为 ： 取 100g 干燥马 尾藻粉， 加 2000ml 水， 在 90-100℃温度下提取 110-130min， 3000r/min 离心取上清， 得马尾 藻粗提取液。
采用步骤 1-A 所述的酶解法对马尾藻粉进行粗提取的步骤为 ： 取 100g 干燥马尾藻 粉， 加 2000ml 水， 添加纤维素酶并调节其浓度达 0.5％， 控制 pH ＝ 5.5， 温度在 40-50℃之 间， 提取 110-130min， 3000r/min 离心取上清， 得马尾藻粗提取液。
采用步骤 1-A 所述的酸解法对马尾藻粉进行粗提取的步骤为 ： 取 100g 干燥马尾藻 粉， 加 3％柠檬酸溶液 2000ml， 于 90-100℃温度下提取 110-130min， 3000r/min 离心取上清， 得马尾藻粗提取液。
采用步骤 1-A 所述的碱解法对马尾藻粉进行粗提取的步骤为 ： 取 100g 干燥马尾藻 粉， 加 3％ Na2CO3 溶液 2000ml， 于 90-100℃温度下提取 25-35min， 3000r/min 离心取上清， 得马尾藻粗提取液。
采用步骤 1-B 纤维素酶解法处理步骤 A 所得粗提取液的步骤为 ： 在粗提取液中添 加纤维素酶并调节其浓度达 0.1％， 控制 pH ＝ 5.5， 温度在 45-55℃之间， 降解 220-260min。
采用步骤 1-B 超声波法处理步骤 A 所得粗提取液的步骤为 ： 将粗提取液加入超声 波发生仪， 常温常压， 于 40KHz 频率、 100w 功率下降解 4-6 分钟。 采用上述技术方案所产生的有益效果在于 ： 在不污染环境的前提下利用本发明的 技术方案可以便捷、 高效的以马尾藻属海藻为原料制备食用菌调理剂， 且所制备的调理剂 含有多种氨基酸、 海藻多糖、 藻朊酸、 高度不饱和脂肪酸和陆生植物稀有的锌、 镍、 溴、 碘等 微量元素， 还含有天然生长调节物质如细胞分裂素、 生长素、 甜菜碱、 赤霉素、 脱落酸、 乙烯、 多胺等， 对食用菌具有优秀的提质增量作用。
侧耳亚光 1 号、 茶树菇、 刺芹侧耳、 白灵侧耳的出菇实验表明， 喷施本发明制备的 马尾藻食用菌调理剂， 能起到明显的增产作用， 并能同时提高子实体多糖含量， 从而改善其 品质。
附图说明
下面结合附图和具体实施方式对本发明作进一步详细的说明。
图 1 显示马尾藻食用菌调理剂对侧耳营养生长促进作用实验的结果， 左侧为加入 马尾藻食用菌调理剂的试管， 右侧为对照试管。 具体实施方式
以下实施例详细说明了本发明的技术方案。 本发明所使用的马尾藻粉可以直接从 北海国发海洋生物产业股份有限公司购买， 也可通过如下工艺制备 ： 打捞马尾藻属海藻、 晾 干、 粉碎。
本发明所使用的超声波发生仪的型号为 ： KT-I1730TD/1730QTD。实施例 1、 一种马 尾藻食用菌调理剂的制备方法， 采用超声波破碎法粗提、 超声波降解法降解， 其步骤如下 ：
A、 粗提取 ： 在超声波发生仪内先后加入 100g 干燥马尾藻粉和 2000ml 水， 常温常 压， 于 40KHz 频率、 100w 功率下提取 5 分钟， 3000r/min 离心取上清， 得马尾藻粗提取液 ；
B、 多糖降解 ： 将步骤 A 制备的粗提取液再加入超声波发生仪， 常温常压， 于 40KHz频率、 100w 功率下降解 5 分钟， 促进其中的多糖降解为寡糖 ；
C、 减压浓缩步骤 B 所得提取液至其原体积的 1/3 后， 添加 5ppm 的维生素 B2， 5ppm 的维生素 B12， 5ppm 的 0.1％ KH2PO4 和 5ppm 的 0.1％ MgSO4， 得马尾藻食用菌调理剂成品。
本实施例的粗提取液中多糖得率为 19.274％， 可溶性固形物含量为 2.5％。
由本实施例制备的马尾藻食用菌调理剂的使用效果如下。
(1) 马尾藻食用菌调理剂对侧耳营养生长的促进作用， 将马尾藻食用菌调理剂加 入到 PDA 培养基中， 设空白对照， 接入等大的侧耳菌块， 恒温培养 7 天后， 观测长势， 参看附 图 1， 实验组菌丝长速可比对照提高 10％左右， 并且菌丝生长浓密、 整齐、 洁白。
(2) 不同浓度马尾藻食用菌调理剂对特抗 96 菌丝生长的影响， 由表 1 可见， 处理组 与对照相比， 2000 倍处理能显著促进特抗 96 菌丝生长 (P ＜ 0.01)， 长速达 7.1mm/d， 较对照 组快 0.6mm/d ； 500、 1000、 1500 倍处理菌丝长速快于对照， 2500、 100 倍处理略慢于对照， 但 经分析， 500、 1000、 1500 倍处理和 2500、 100 倍处理与对照均无显著差异 (P ＞ 0.05)， 不影 响菌丝生长。
表 1 不同浓度马尾藻食用菌调理剂对特抗 96 菌丝生长影响的对重比较
*P ＜ 0.05
(3) 不同浓度马尾藻食用菌调理剂对西德 99 菌丝生长的影响， 由表 2 可见， 处理组 与对照相比， 500、 1000、 1500、 2000 倍处理能极显著促进西德 99 菌丝生长 (P ＜ 0.01)， 最快 长速达 7.0mm/d， 较对照快 2.7mm/d ； 2500、 100 倍处理略慢于对照， 但经分析与对照无显著 差异 (P ＞ 0.05)， 不影响菌丝生长。
表 2 不同浓度马尾藻食用菌调理剂对西德 99 菌丝生长影响的多重比较
*P ＜ 0.05 **P ＜ 0.01 (4) 马尾藻食用菌调理剂对白灵菇营养生长促进作用， 首先将马尾藻食用菌生长调节剂稀释成一系列的浓度， 稀释 400 倍、 800 倍、 1200 倍、 1600 倍， 分别记为 b、 c、 d、 e添 加入 PDA 斜面培养基， 以蒸馏水为对照， 标记为 a ； 实验中观察到白灵菇的菌丝体呈浅白色， 气生菌丝较少， 参看表 3-1、 表 3-2， 在含有稀释 1200 倍、 1600 倍马尾藻食用菌调理剂的培 养基上， 白灵菇菌丝的营养生长较对照好， 马尾藻食用菌调理剂显著的促进了白灵菇菌丝 体的生长长速 ： 在稀释 1200 倍的培养基上菌丝的生长速度达 5.46mm/ 天， 比对照提高了 0.36mm/ 天。表 3-1 马尾藻食用菌调理剂对白灵菇菌丝生长的影响
表 3-2 马尾藻食用菌调理剂对白灵菇菌丝生长影响的多重比较
** P ＜ 0.05， P ＜ 0.01
(5) 马尾藻食用菌调理剂对茶树菇营养生长促进作用， 首先将马尾藻食用菌生长 调节剂稀释成一系列的浓度， 稀释 400 倍、 800 倍、 1200 倍、 1600 倍， 分别记为 b、 c、 d、 e添 加入 PDA 斜面培养基， 以蒸馏水为对照， 标记为 a ； 参看表 4-1 和 4-2， 稀释 800 倍、 1200 倍、 1600 倍的马尾藻食用菌调理剂显著的促进了茶树菇菌丝的营养生长 ； 在含有稀释 800 倍 马尾藻食用菌调理剂的培养基上茶树菇菌丝的生长速度达 3.69mm/ 天， 比对照的提高了 0.66mm/ 天。
表 4-1 马尾藻食用菌调理剂对茶树菇菌丝生长的影响
*
表 4-2 马尾藻食用菌调理剂对茶树菇菌丝生长影响的多重比较
** P ＜ 0.05， P ＜ 0.01
(6) 马尾藻食用菌调理剂对侧耳亚光 1 号产量的影响， 首先发菌好的菌袋经后熟， 移入菇房， 待显蕾菇盖直径长至 2cm 时喷施各种肥料， 设清水组为对照组 A， 以含 5ppm 的 VB2， 5ppm 的 VB12， 5ppm 的 0.1％ KH2PO4， 5ppm 的 0.1％ MgSO4 组为实验组 B， 以稀释 800 倍的马 尾藻食用菌调理剂为实验组 C， 补水的原则为轻喷勤喷， 每次转潮需养菌一周， 转潮补水使 用清水， 二潮菇出菇时喷施规则同头潮菇 ； 试验结果参看表 5， 生物转化率 ： C ＞ B ＞ A， 马尾 藻食用菌调理剂能够使亚光 1 号三潮菇的生物转化率达到 94.2％， 较清水对照提高 9.1％， 添加了马尾藻食用菌调理剂的复合制剂比使用无机元素的肥料也显著的提高了产量， 表明 马尾藻食用菌调理剂中的活性物质使亚光 1 号更好的利用了培养基质， 将其转化成自身生 物量。
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表 5 四种处理对侧耳亚光 1 号的产量的影响(7) 马尾藻食用菌调理剂对茶树菇上产量的影响， 首先发菌好的菌袋经后熟， 移入 菇房， 待显蕾菇盖直径长至 2cm 时喷施各种肥料， 设清水组为对照组 A， 以含 5ppm 的 VB2， 5ppm 的 VB12， 5ppm 的 0.1％ KH2PO4， 5ppm 的 0.1％ MgSO4 组为实验组 B， 以稀释 800 倍的马尾藻 食用菌调理剂为实验组 C， 补水的原则为轻喷勤喷， 每次转潮需养菌一周， 转潮补水使用清 水， 二潮菇出菇时喷施规则同头潮菇 ； 试验结果参看表 6， 生物转化率 ： C ＞ B ＞ A， 使用马尾 藻食用菌调理剂所喷施后的两潮菇的生物转化率为达 52.5％， 比清水对照要高出 6.6％， 显著的提高了产量 ； 与无机元素组比也得到提高， 表明马尾藻食用菌调理剂促进了茶树菇 的生长， 提高了其对培养基质的利用。
表 6 四种处理对茶树菇的产量的影响
(8) 马尾藻食用菌调理剂对刺芹侧耳产量的影响， 首先发菌好的菌袋经后熟， 移入 菇房， 待显蕾菇盖直径长 2cm 时喷施各种肥料， 设清水组为对照组 A， 以含 5ppm 的 VB2， 5ppm 的 VB12， 5ppm 的 0.1 ％ KH2PO4， 5ppm 的 0.1 ％ MgSO4 组为实验组 B， 以稀释 800 倍的马尾藻
食用菌调理剂为实验组 C， 补水的原则为轻喷勤喷， 每次转潮需养菌一周， 转潮补水使用清 水， 二潮菇出菇时喷施规则同头潮菇 ； 试验结果参看表 7， 生物转化率 ： C ＞ B ＞ A， 马尾藻食 用菌调理剂处理能显著的提高刺芹侧耳产量， 生物转化率达到 80.2％， 比清水对照的提高 9.9％， 已达到显著水平 ； 与无机元素组的比较， 显著的提高了生物转化率， 标明马尾藻食用 菌调理剂改善了刺芹侧耳的生理变化， 增强其代谢功能， 使刺芹侧耳能更好的利用培养基 质。
表 7 四种处理对刺芹侧耳的产量的影响
(9) 马尾藻食用菌调理剂对白灵侧耳产量的影响， 首先发菌好的菌袋经后熟， 移入 菇房， 待显蕾菇盖直径长至 2cm 时喷施各种肥料， 设清水组为对照组 A， 以含 5ppm 的 VB2， 5ppm 的 VB12， 5ppm 的 0.1％ KH2PO4， 5ppm 的 0.1％ MgSO4 组为实验组 B， 以稀释 800 倍的马尾 藻食用菌调理剂为实验组 C， 补水的原则为轻喷勤喷， 每次转潮需养菌一周， 转潮补水使用 清水， 二潮菇出菇时喷施规则同头潮菇 ； 试验结果参看表 8， 生物转化率 ： C ＞ B ＞ A， 马尾藻 食用菌调理剂处理能显著的提高白灵侧耳产量， 生物转化率达到 59.4％， 比清水 A 的提高 6.1％， 达到了显著的水平 ； 较无机元素组的生物转化率要高， 促进了白灵侧耳的发育和生 长。
表 8 四种处理对白灵侧耳的产量的影响
实施例 2
一种马尾藻食用菌调理剂的制备方法， 采用高压浸提法粗提、 超声波降解法降解， 其步骤如下 ：
A、 粗提取 ： 取 100g 干燥马尾藻粉， 加 3000ml 浓度为 1％的 Na2CO3 溶液， 于 0.15MPa、 室温下提取 170-190min， 3000r/min 离心取上清， 得马尾藻粗提取液 ；
B、 多糖降解 ： 将步骤 A 制备的粗提取液加入超声波发生仪， 常温常压， 于 40KHz 频 率、 100w 功率下降解 5 分钟， 促进其中的多糖降解为寡糖 ；
C、 减压浓缩步骤 B 所得提取液至其原体积的 1/3 后， 添加 5ppm 的维生素 B2， 5ppm 的维生素 B12， 5ppm 的 0.1％ KH2PO4 和 5ppm 的 0.1％ MgSO4， 得马尾藻食用菌调理剂成品。
本实施例的粗提取液中多糖得率为 22.868％， 可溶性固形物含量为 3.7％。
实施例 3
一种马尾藻食用菌调理剂的制备方法， 采用热水浸提法粗提、 超声波降解法降解， 其步骤如下 ：
A、 粗提取： 取 100g 干 燥 马 尾 藻 粉， 加 2000ml 水， 在 90-100 ℃ 温 度 下 提 取
110-130min， 3000r/min 离心取上清， 得马尾藻粗提取液 ；
B、 多糖降解 ： 将步骤 A 制备的粗提取液加入超声波发生仪， 常温常压， 于 40KHz 频 率、 100w 功率下降解 5 分钟， 促进其中的多糖降解为寡糖 ；
C、 减压浓缩步骤 B 所得提取液至其原体积的 1/3 后， 添加 5ppm 的维生素 B2， 5ppm 的维生素 B12， 5ppm 的 0.1％ KH2PO4 和 5ppm 的 0.1％ MgSO4， 得马尾藻食用菌调理剂成品。
本实施例的粗提取液中多糖得率为 9.278％， 可溶性固形物含量为 2.5％。
实施例 4
一种马尾藻食用菌调理剂的制备方法， 采用酶解法粗提、 超声波降解法降解， 其步 骤如下 ：
A、 粗提取 ： 取 100g 干燥马尾藻粉， 加 2000ml 水， 添加纤维素酶并调节其浓度达 0.5％， 控制 pH ＝ 5.5， 温度在 40-50℃之间， 提取 110-130min， 3000r/min 离心取上清， 得马 尾藻粗提取液 ；
B、 多糖降解 ： 将步骤 A 制备的粗提取液加入超声波发生仪， 常温常压， 于 40KHz 频 率、 100w 功率下降解 5 分钟， 促进其中的多糖降解为寡糖 ；
C、 减压浓缩步骤 B 所得提取液至其原体积的 1/3 后， 添加 5ppm 的维生素 B2， 5ppm 的维生素 B12， 5ppm 的 0.1％ KH2PO4 和 5ppm 的 0.1％ MgSO4， 得马尾藻食用菌调理剂成品。
本实施例的粗提取液中多糖得率为 9.842％， 可溶性固形物含量为 1.8％。
实施例 5
一种马尾藻食用菌调理剂的制备方法， 采用酸解法粗提、 纤维素酶解法降解， 其步 骤如下 ：
A、 粗提取 ： 采用步骤 1-A 所述的酸解法对马尾藻粉进行粗提取的步骤为 ： 取 100g 干燥马尾藻粉， 加 3％柠檬酸溶液 2000ml， 于 90-100℃温度下提取 110-130min， 3000r/min 离心取上清， 得马尾藻粗提取液 ；
B、 多糖降解 ： 在步骤 A 制备的粗提取液中添加纤维素酶并调节其浓度达 0.1％， 控 制 pH ＝ 5.5， 温度在 45-55℃之间， 降解 220-260min， 促进其中的多糖降解为寡糖 ；
C、 减压浓缩步骤 B 所得提取液至其原体积的 1/3 后， 添加 5ppm 的维生素 B2， 5ppm 的维生素 B12， 5ppm 的 0.1％ KH2PO4 和 5ppm 的 0.1％ MgSO4， 得马尾藻食用菌调理剂成品。
本实施例的粗提取液中多糖得率为 12.466％， 可溶性固形物含量为 4.9％。
实施例 6
一种马尾藻食用菌调理剂的制备方法， 采用碱解法粗提、 纤维素酶解法降解， 其步 骤如下 ：
A、 粗提取 ： 取 100g 干燥马尾藻粉， 加 3％ Na2CO3 溶液 2000ml， 于 90-100℃温度下 提取 25-35min， 3000r/min 离心取上清， 得马尾藻粗提取液 ；
B、 多糖降解 ： 在步骤 A 制备的粗提取液中添加纤维素酶并调节其浓度达 0.1％， 控 制 pH ＝ 5.5， 温度在 45-55℃之间， 降解 220-260min， 促进其中的多糖降解为寡糖 ；
C、 减压浓缩步骤 B 所得提取液至其原体积的 1/3 后， 添加 5ppm 的维生素 B2， 5ppm 的维生素 B12， 5ppm 的 0.1％ KH2PO4 和 5ppm 的 0.1％ MgSO4， 得马尾藻食用菌调理剂成品。
本实施例的粗提取液中多糖得率为 11.201％， 可溶性固形物含量为 4.9％。
上述描述仅作为本发明一种马尾藻食用菌调理剂的制备方法可实施的技术方案提出， 不作为对其技术方案本身的单一限制条件。