紫杉醇或多西紫杉醇的多肽偶合物 【技术领域】
本发明涉及一种抗癌药物的偶合物，特别是涉及紫杉醇或多西紫杉醇的一种多肽偶合物。
背景技术
紫杉醇(Paclitaxel，PTAX)是从红豆杉属(Taxus)植物的树皮中分离提取的二萜类天然产物，为近二十年来所研发上市的最有效的化学抗癌药物之一。通过特异性结合到细胞微管小管的β位，使微管聚合为团块或束状，紫杉醇可有效抑制微管网的正常重组，使细胞的分裂，繁殖及生长受到阻碍并停滞在G2期和M期。作为国际上广泛认可的高效化学抗癌药物，紫杉醇已被众多国家批准用于临床，以治疗包括乳腺癌，卵巢癌，结肠癌，食管癌，非小细胞肺癌，膀胱癌、前列腺癌，黑素瘤(Melanoma)，淋巴瘤，白血球过多症(Leukemias)及胃癌等多种癌症1-3。
紫杉醇的结构复杂，目前难以通过化学合成方法制备，因天然资源有限，使其价格极为昂贵。紫杉醇具有高效细胞毒性，但却缺乏细胞选择性。在体内除肿瘤组织外，也可分布于正常组织中，除导致生物利用度明显降低外，也使得紫杉醇在杀灭癌细胞的同时，对正常细胞及组织造成伤害。紫杉醇细胞选择性差也导致了临床应用中产生严重毒副作用，包括中性白细胞减少，骨髓抑制，血管性水肿，低血压，过敏性反应，全身性荨麻疹，感觉及中枢神经病变，触觉异常，感觉减退，位置感觉缺失等，常使需要长期用药的癌症患者难以承受。此外，紫杉醇水溶性极差(～0.4ug/ml)，在剂型及给药方式上受到诸多限制。临床制剂中将紫杉醇加入聚氧乙烯蓖麻油(Cremphor EL)∶无水乙醇(V∶V＝1∶1)中，再以生理盐水稀释后通过静脉输液给药，除给患者带来不便外，聚氧乙烯蓖麻油还可引起人体的过敏反应。对一些需要增加剂量才能获得较好疗效的病例，紫杉醇也因其水溶性极差而难以有效使用2，4-7。
多西紫杉醇(Docetaxel，DTAX)是以从紫杉树叶中提取的、含有紫杉醇基本母核结构的去乙酰浆果赤霉素III(10-Deacetyl baccatin III)为原料，通过在其3’位的氨基进行叔丁氧酰化后得到的半合成紫杉醇类似物8，9。通过与紫杉醇相同的作用机制，多西紫杉醇在临床上也用作有效的化学抗癌药物。但多西紫杉醇在应用中同样显示出细胞选择性差的弱点，在抑制肿瘤细胞的同时，对正常细胞及组织造成伤害，导致各种与紫杉醇类似的毒副作用10，11。
紫杉醇与多西紫杉醇具有如下结构：
当为紫杉醇时，R1为C6H5-，R2为CH3-CO-；当为多西紫杉醇时，R1为(CH3)3CO-，R2为H-。
近十年来引起高度关注的的分子靶向抗癌药物研发策略，为从根本上克服化学抗癌药物细胞选择性差的弱点提供了科学有效的解决方案。众多研究结果表明，某些肿瘤细胞能够高密度地表达正常细胞不具有的特殊受体，而某些抗体或内源性多肽可选择性结合于这类受体，使得肿瘤细胞的DNA复制受到抑制，肿瘤的生长，繁殖及转移受到干扰和阻止。针对肿瘤细胞的特殊受体及相应的抗体及靶向多肽开展研究，正成为新型高效低毒抗癌药物研发领域的热点12-17。
生长抑素受体(Somatostatin receptors，STTRs)是一类含有7个跨膜区段的糖蛋白，属G蛋白偶联受体家族。自1992年SSTR1和SSTR2被克隆至今，已成功克隆并确定了5种不同的STTRs分子亚型(STTR1-STTR5)，它们与细胞的内摄作用及细胞生物信息传递密切相关。大多数神经内分泌肿瘤，如前列腺癌，乳腺癌，小细胞肺癌，非小细胞肺癌都表达了高密度的STTRs。而含14个氨基酸的内源性多肽生长抑素(Somatostatin)，与高密度表达STTRs的肿瘤细胞具有良好的亲和性及选择性15，18。
奥曲肽(Octreotide)是在对生长抑素进行结构修饰及序列调整的基础上，通过化学合成而研发的高效靶向多肽药物。奥曲肽仅含8个氨基酸但却具有更强的STTRs亲和能力和稳定性，体内代谢半衰期是生长抑素的50倍。其序列为：D-Phe-c[Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys]-Thr-ol。除临床上用于癌症手术后患者的康复及抑制癌细胞转移外，奥曲肽对于研发针对类癌瘤及小细胞肺癌的靶向抗癌制剂也具有重要作用16-18。将奥曲肽氨基酸序列中的3位苯丙氨酸(Phe3)用酪氨酸(Tyr)取代后得到奥曲肽-Tyr3(Tyr3-Octreotide)，除保持奥曲肽的生物活性及靶向性外，其序列中的Tyr3易于进行放射性131I标记，在肿瘤放射性治疗中具有重要用途19。
参考文献
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【发明内容】
本发明的目的是针对现有技术的不足，提供一种同时具备优异抗癌活性与癌细胞选择性，以及具有良好水溶性的紫杉醇或多西紫杉醇的多肽偶合物。
本发明的另一目的在于提供上述紫杉醇或多西紫杉醇的多肽偶合物的制备方法。
本发明的再一目的在于提供上述紫杉醇或多西紫杉醇的多肽偶合物在制备药物方面地应用。
为实现上述目的，本发明采用了以下技术方案：
本发明公开了一种紫杉醇或多西紫杉醇的多肽偶合物，所述紫杉醇或多西紫杉醇在2’位羟基通过连接序列与多肽的氨基相连。
所述连接序列为-CO-CH2-(X)n-CH2-CO-；
其中，X为O(CH2CH2OCH2CH2CH2NHCOCH2-)2，-CO-，-O-，-S-，-CH2-，-CHCH3-或-C(CH3)2-；n为0或1。
所述多肽为奥曲肽或者奥曲肽的3位苯丙氨酸(Phe3)用酪氨酸(Tyr)取代后得到奥曲肽-Tyr3。
所述紫杉醇或多西紫杉醇在2’位羟基通过连接序列与奥曲肽或奥曲肽-Tyr3的N-端氨基和/或5位赖氨酸(Lys5)侧链的ε-氨基相连接。
本发明还公开了上述紫杉醇或多西紫杉醇的多肽偶合物的制备方法，所述方法包括：
将紫杉醇或多西紫杉醇与连接剂反应得到2’位羟基上连接有连接序列-CO-CH2-(X)n-CH2-CO-OH的紫杉醇-Linker中间体或多西紫杉醇-Linker中间体，其中X为O(CH2CH2OCH2CH2CH2NHCOCH2-)2，-CO-，-O-，-S-，-CH2-，-CHCH3-或-C(CH3)2-，n为0或1；
将紫杉醇-Linker中间体或多西紫杉醇-Linker中间体通过固相或液相合成方法与多肽的氨基相连。
本发明还公开了上述紫杉醇或多西紫杉醇的多肽偶合物在制备用于预防和/或治疗肿瘤的药物方面的应用。
由于采用了以上技术方案，使本发明具备的有益效果在于：
本发明所合成制备的紫杉醇、多西紫杉醇的多肽偶合物，特别是相应的奥曲肽/奥曲肽-Tyr3偶合物，由于其中具高效细胞毒性的紫杉醇及多西紫杉醇与可识别癌细胞表面受体的靶向多肽奥曲肽及奥曲肽-Tyr3相互连接后扬长避短，优势互补，显示了良好的细胞选择性及水溶性，具有优于母体药物紫杉醇及多西紫杉醇的抗癌活性。偶合物可显著增强对癌细胞的选择性，避免或减少在正常细胞及组织中的分布，在明显提高生物利用度的同时，通过克服紫杉醇及多西紫杉醇细胞选择性差的弱点，有效降低母体抗癌药在体内产生的毒副作用。此外，奥曲肽及奥曲肽-Tyr3特有的高亲水性，可使偶合物具有良好的水溶性，为剂型制备及给药方式的选择提供方便。而通过一分子靶向多肽与两分子紫杉醇或多西紫杉醇相连而制备的双紫杉醇-奥曲肽偶合物、双多西紫杉醇-奥曲肽偶合物、双紫杉醇-奥曲肽-Tyr3偶合物及双多西紫杉醇-奥曲肽-Tyr3偶合物，有利于增加肿瘤部位紫杉醇的浓度，更有效地提高抗癌效率。本发明的偶合物在新型高效低毒分子靶向抗癌药物研发领域具有重要应用前景。
【具体实施方式】
本发明公开了系列双紫杉醇-奥曲肽偶合物、双多西紫杉醇-奥曲肽偶合物、双紫杉醇-奥曲肽-Tyr3偶合物及双多西紫杉醇-奥曲肽-Tyr3偶合物的化学结构及它们的合成制备方法。所涉及的系列偶合物的化学结构如通式I所示。
通式I
通式I中，R1可以是C6H5-或(CH3)3CO-；
R2可以是CH3-CO-或H-；
R3可以是H-(Phe)或HO-(Tyr)；
X可以是O(CH2CH2OCH2CH2CH2NHCOCH2-)2，-CO-，-O-，-S-，-CH2-，-CHCH3-或-C(CH3)2-；n可以是0或1。
具体地，本发明的偶合物是紫杉醇的2`位羟基及多西紫杉醇的2`位羟基分别与不同类型的连接剂反应而形成的紫杉醇-Linker中间体及多西紫杉醇-Linker中间体(通式II)，紫杉醇-Linker中间体(通式II中R1＝C6H5-；R2＝CH3CO-)通过连接桥-CO-CH2-(X)n-CH2-CO-与奥曲肽的N-端氨基及其氨基酸序列中5位赖氨酸(Lys5)侧链的ε-氨基相连接而得到双紫杉醇-奥曲肽偶合物(通式I中R3＝H-)；与奥曲肽-Tyr3的N-端氨基及其氨基酸序列中5位赖氨酸(Lys5)侧链的ε-氨基相连接而得到双紫杉醇-奥曲肽-Tyr3偶合物(通式I中R3＝HO-)；多西紫杉醇-Linker中间体(通式II中R1＝(CH3)3CO-；R2＝H-)通过连接桥-CO-CH2-(X)n-CH2-CO-与奥曲肽的N-端氨基及其氨基酸序列中5位赖氨酸(Lys5)侧链的ε-氨基相连接而得到双多西紫杉醇-奥曲肽偶合物(通式I中R3＝H-)；与奥曲肽-Tyr3的N-端氨基及其氨基酸序列中5位赖氨酸(Lys5)侧链的ε-氨基相连接而得到双多西紫杉醇-奥曲肽-Tyr3偶合物(通式I中R3＝HO-)。
通式II
本发明方法中，可以选用多种类型的连接剂。所选择的连接剂需满足的条件为：能与紫杉醇及多西紫杉醇的的2`位羟基反应生成通式II所表示的产物。可用于本发明的连接剂如：二羟乙酸酐、丁二酸酐、戊二酸酐、3-羰基戊二酸酐、3-甲基戊二酸酐、3，3’-二甲基戊二酸酐等。紫杉醇或多西紫杉醇与连接剂反应时，对于不同的连接剂，连接反应的条件基本相同，本领域技术人员能够根据连接剂的不同适当调整反应条件并得到所需产物。
以上通式I也可以表示为如下：
双紫杉醇-奥曲肽偶合物：
双紫杉醇-奥曲肽-Tyr3偶合物：
双多西紫杉醇-奥曲肽偶合物：
双多西紫杉醇-奥曲肽-Tyr3偶合物：
本发明创建了固相与液相化学合成技术相结合进行分步相连的方法，用不同类型的连接剂与紫杉醇或多西紫杉醇的2’位羟基相连而得到紫杉醇-Linker中间体及多西紫杉醇-Linker中间体后，再分别与连接于固相合成树脂、侧链保护但N-端氨基游离的奥曲肽或奥曲肽-Tyr3的N-端氨基通过固相合成方法相连，得到紫杉醇-奥曲肽偶合物、紫杉醇-奥曲肽-Tyr3偶合物、多西紫杉醇-奥曲肽偶合物或多西紫杉醇-奥曲肽-Tyr3偶合物；；再用液相合成方法将紫杉醇-Linker或多西紫杉醇-Linker与从固相合成树脂上切下的紫杉醇-奥曲肽偶合物、紫杉醇-奥曲肽-Tyr3偶合物、多西紫杉醇-奥曲肽偶合物或多西紫杉醇-奥曲肽-Tyr3偶合物的氨基酸序列中5位赖氨酸(Lys5)侧链的ε-氨基相连而合成制备系列双紫杉醇-奥曲肽偶合物、双紫杉醇-奥曲肽-Tyr3偶合物、双多西紫杉醇-奥曲肽偶合物及双多西紫杉醇-奥曲肽-Tyr3偶合物。具体步骤为：
(1)将通式II表示的紫杉醇-Linker中间体及多西紫杉醇-Linker中间体分别与与连接在固相合成树脂上的奥曲肽衍生物及奥曲肽-Tyr3衍生物的N-端氨基通过固相合成方法相连接，从而分别得到与树脂相连的紫杉醇-奥曲肽偶合物衍生物、多西紫杉醇-奥曲肽偶合物衍生物、紫杉醇-奥曲肽-Tyr3偶合物衍生物及多西紫杉醇-奥曲肽-Tyr3偶合物衍生物；
(2)将上述衍生物分别从树脂上切下，经纯化后得到通式III表示的紫杉醇-奥曲肽偶合物、多西紫杉醇-奥曲肽偶合物、紫杉醇-奥曲肽-Tyr3偶合物及多西紫杉醇-奥曲肽-Tyr3偶合物；
(3)将通式II表示的紫杉醇-Linker中间体、多西紫杉醇-Linker中间体在液相合成条件下分别与通式III表示的紫杉醇-奥曲肽偶合物、多西紫杉醇-奥曲肽偶合物、紫杉醇-奥曲肽-Tyr3偶合物及多西紫杉醇-奥曲肽-Tyr3偶合物中多肽氨基酸序列中5位赖氨酸(Lys5)侧链的ε-氨基相连接，从而得到通式I所表示的双紫杉醇-奥曲肽偶合物、双多西紫杉醇-奥曲肽偶合物、双紫杉醇-奥曲肽-Tyr3偶合物及双多西紫杉醇-奥曲肽-Tyr3偶合物。
通式III
通式II和通式III中，R1可以是C6H5-或(CH3)3C-O-；R2可以是CH3-CO-或H-；X可以是O(CH2CH2OCH2CH2CH2NHCOCH2-)2，-CO-，-O-，-S-，-CH2-，-CHCH3-或-C(CH3)2-；n可以是0或1。
发明中同时创建了采用液相化学合成进行同步相连的方法，将紫杉醇(多西紫杉醇)-Linker中间体在液相合成条件下，与奥曲肽和奥曲肽-Tyr3的N-端氨基及它们氨基酸序列中的5位赖氨酸侧链的ε-氨基同时连接，从而合成制备系列双紫杉醇(多西紫杉醇)-奥曲肽偶合物及双紫杉醇(多西紫杉醇)-奥曲肽-Tyr3偶合物。具体步骤为：
将通式II表示的紫杉醇-Linker或多西紫杉醇-Linker中间体分别与奥曲肽及奥曲肽-Tyr3在液相合成条件下反应，使紫杉醇/多西紫杉醇的2`-羟基通过连接桥-CO-CH2-(X)n-CH2-CO-与奥曲肽及奥曲肽-Tyr3的N-端氨基及它们的氨基酸序列中5位赖氨酸(Lys5)侧链的ε-氨基同时相连，产物经高效液相仪(HPLC)分离纯化后，得到通式I所表示的双紫杉醇-奥曲肽偶合物及双紫杉醇-奥曲肽-Tyr3偶合物或双多西紫杉醇-奥曲肽偶合物及双多西紫杉醇-奥曲肽-Tyr3偶合物。
本发明的系列偶合物将两分子紫杉醇或多西紫杉醇与奥曲肽及奥曲肽-Tyr3中的N-端氨基及它们氨基酸序列中5位赖氨酸(Lys5)侧链的ε-氨基相互连接而合成制备的系列双紫杉醇-奥曲肽偶合物、双多西紫杉醇-奥曲肽偶合物、双紫杉醇-奥曲肽-Tyr3偶合物及双多西紫杉醇-奥曲肽-Tyr3偶合物，可使具有高效细胞毒性的紫杉醇及多西紫杉醇与可识别癌细胞表面受体，具有良好水溶性奥曲肽及奥曲肽-Tyr3相互扬长避短，优势互补。在保持紫杉醇及多西紫杉醇抗癌活性的同时，借助奥曲肽及Tyr3-奥曲肽的靶向功能，偶合物可显著增强对癌细胞的选择性，避免或减少在正常细胞及组织中的分布，在明显提高生物利用度的同时，通过克服紫杉醇及多西紫杉醇细胞选择性差的弱点，有效降低母体抗癌药在体内产生的毒副作用。此外，奥曲肽及奥曲肽-Tyr3特有的高亲水性，可使偶合物具有良好的水溶性，为剂型制备及给药方式的选择提供方便。而通过一分子靶向多肽与两分子紫杉醇或多西紫杉醇相连而制备的双紫杉醇-奥曲肽偶合物、双多西紫杉醇-奥曲肽偶合物、双紫杉醇-奥曲肽-Tyr3偶合物及双多西紫杉醇-奥曲肽-Tyr3偶合物，有利于增加肿瘤部位紫杉醇或多西紫杉醇的浓度，更有效地提高抗癌效率。本发明涉及的系列偶合物在新型高效低毒抗分子靶向癌药物研发领域具有重要应用前景。
本发明通过以下实施例对各中间体及偶合物的合成制备方法进行描述。实施例不限制本发明，本发明的保护范围由权利要求限定。
实施例1：紫杉醇-2’-二羟乙酸酯的合成
紫杉醇(0.854g，1.00mmol)溶于无水四氢呋喃(10ml)，加入无水砒啶(0.5ml)，二羟乙酸酐(Diglycolic anhydride，0.139g，1.20mmol)，于0℃搅拌24小时后加入乙酸乙酯(100ml)，并用盐酸(1.0M)调至pH 3-4。乙酸乙酯液依次用水(30mlx3)，饱和食盐水(20mlx2)萃取，无水硫酸钠干燥，过滤后减压回收乙酸乙酯。所得残余物用丙酮-乙醚重结晶，得紫杉醇-2’-二羟乙酸酯纯品0.801g，收率82.6％。ESI-MS：971.3[M+H]+(分子量：969.99)。
实施例2：多西紫杉醇-2’-丁二酸酯的合成
多西紫杉醇(0.808g，1.00mmol)溶于无水四氢呋喃(8ml)，加入无水砒啶(0.5ml)，丁二酸酐(Succinic anhydride，0.121g，1.20mmol)，于0℃搅拌16小时后加入乙酸乙酯(80ml)，并用盐酸(1.0M)调至pH 3-4。乙酸乙酯液依次用水(30mlx3)，饱和食盐水(20mlx2)萃取，无水硫酸钠干燥，过滤后减压回收乙酸乙酯。所得残余物用丙酮-乙醚重结晶，得多西紫杉醇-2’-丁二酸酯纯品0.728g，收率80.1％。ESI-MS：909.2[M+H]+(分子量：907.96)。
实施例3：紫杉醇-2’-二羟乙酰-奥曲肽-Tyr3偶合物的合成
将与固相合成树脂相连，已形成分子内二硫键，侧链保护但N-端氨基游离的奥曲肽-Tyr3-树脂(含奥曲肽-Tyr3 0.10mmol)置于固相合成反应器中，用无水二氯甲烷浸洗后抽去溶剂并通人干燥氮气。将紫杉醇-2’-二羟乙酸酯(0.243g，0.25mmol)溶于无水二氯甲烷(10ml)，加入PyBop(0.156g，0.30mmol)，N，N-二异丙基乙胺(0.039g，0.30mmol)并搅拌10分钟后，滴入上述固相合成反应器中并用干燥氮气进行搅拌。1小时后将溶剂抽干，依次用二甲基甲酰胺(x6)，二氯甲烷(x5)及乙醚(x3)洗涤树脂并抽干。将干燥的树脂加入三氟乙酸/二氯甲烷(V∶V＝1∶5，20ml)溶液中，搅拌1小时后过滤，树脂用二氯甲烷(5mlx3)洗涤并过滤。滤液合并后减压抽干，残余物用乙醚洗涤(x3)，抽滤收集乙醚不溶的固体，干燥后得紫杉醇-2’-二羟乙酰-奥曲肽-Tyr3偶合物粗品0.192g，收率96.6％。ESI-MS：1988.6[M+H]+(分子量：1987.22)。
实施例4：多西紫杉醇-2’-丁二酰-奥曲肽偶合物的合成：
将与固相合成树脂相连，已形成分子内二硫键，侧链保护但N-端氨基游离的奥曲肽树脂(含奥曲肽0.10mmol)置于固相合成反应器中，用无水二氯甲烷浸洗后抽去溶剂并通人干燥氮气。将多西紫杉醇-2’-丁二酸酯(0.227g，0.25mmol)溶于无水二氯甲烷(10ml)，加入PyBop(0.156g，0.30mmol)，N，N-二异丙基乙胺(0.039g，0.30mmol)并搅拌10分钟后，滴入上述固相合成反应器中并用干燥氮气进行搅拌。1小时后将溶剂抽干，依次用二甲基甲酰胺(x6)，二氯甲烷(x5)及乙醚(x3)洗涤树脂并抽干。将干燥的树脂加入三氟乙酸/二氯甲烷(V∶V＝1∶5，20ml)溶液中，搅拌1小时后过滤，树脂用二氯甲烷(5mlx3)洗涤并过滤。滤液合并后减压抽干，残余物用乙醚洗涤(x3)，抽滤收集乙醚不溶的固体，干燥后得多西紫杉醇-2’-丁二酰-奥曲肽偶合物粗品0.182g，收率95.3％。ESI-MS：1910.6[M+H]+(分子量：1909.19)。
实施例5：双(紫杉醇-2’-二羟乙酰)-奥曲肽-Tyr3偶合物的合成
紫杉醇-2’-二羟乙酰-奥曲肽-Tyr3粗品0.159g(0.08mmol)加入无水二甲基甲酰胺(5ml)。将紫杉醇-2’-二羟乙酸酯(0.088g，0.09mmol)溶于无水二氯甲烷(6ml)，加入PyBop(0.052g，0.10mmol)，N，N-二异丙基乙胺(0.013g，0.10mmol)搅拌10分钟后滴入上述溶液。反应液搅拌1小时后减压抽去二氯甲烷，残余物滴入冰水(60ml)中，抽滤收集水中析出的固体并用蒸馏水洗涤(x3)。所得固体用甲醇-乙酸乙酯重结晶，得双(紫杉醇-2’-二羟乙酰)-奥曲肽-Tyr3偶合物纯品0.218g，收率92.6％。ESI-MS：2940.6[M+H]+(分子量：MW.2939.20)。
实施例6：双(多西紫杉醇-2’-丁二酰)-奥曲肽偶合物的合成
多西紫杉醇-2’-丁二酰-奥曲肽粗品0.153g(0.08mmol)加入无水二甲基甲酰胺(5ml)。将多西紫杉醇-2’-丁二酸酯(0.082g，0.09mmol)溶于无水二氯甲烷(6ml)，加入PyBop(0.052g，0.10mmol)，N，N-二异丙基乙胺(0.013g，0.10mmol)搅拌10分钟后滴入上述溶液。反应液搅拌1小时后减压抽去二氯甲烷，残余物滴入冰水(60ml)中，抽滤收集水中析出的固体并用蒸馏水洗涤(x3)。所得固体用甲醇-乙酸乙酯重结晶，得双(多西紫杉醇-2’-丁二酰)-奥曲肽偶合物纯品0.204g，收率91.1％。ESI-MS：2800.6[M+H]+(分子量：MW.2799.14)。
实施例7：液相法合成双(紫杉醇-2’-二羟乙酰)-奥曲肽-Tyr3偶合物
紫杉醇-2’-二羟乙酸酯(0.214g，0.22mmol)溶于无水二甲基甲酰胺或无水二氯甲烷(8ml)，加入PyBop(0.156g，0.30mmol)，N，N-二异丙基乙胺(0.039g，0.3mmol)，搅拌10分钟后将反应液加入冷至0℃的奥曲肽-Tyr3(0.104g，0.10mmol)的无水二甲基甲酰胺(10ml)溶液中。在0℃搅拌3小时后，将反应液滴入冰水(100ml)中，抽滤收集水中析出的固体并用蒸馏水洗涤(x3)。所得固体用高效液相仪(HPLC)分离纯化后得双(紫杉醇-2’-二羟乙酰)-奥曲肽-Tyr3偶合物纯品0.196g，收率66.6％。ESI-MS：2940.6[M+H]+(分子量：MW.2939.20)。
实施例8：液相法合成双(多西紫杉醇-2’-丁二酰)-奥曲肽偶合物
多西紫杉醇-2’-丁二酸酯(0.200g，0.22mmol)溶于无水二甲基甲酰胺无水二氯甲烷(8ml)，加入PyBop(0.156g，0.30mmol)，N，N-二异丙基乙胺(0.039g，0.3mmol)，搅拌10分钟后将反应液加入冷至0℃的奥曲肽(0.102g，0.10mmol)的无水二甲基甲酰胺(10ml)溶液中。在0℃搅拌3小时后，将反应液滴入冰水(100ml)中，抽滤收集水中析出的固体并用蒸馏水洗涤(x3)。所得固体用高效液相仪(HPLC)分离纯化后得双(多西紫杉醇-2’-丁二酰)-奥曲肽偶合物纯品0.186g，收率66.4％。ESI-MS：2800.6[M+H]+(分子量：MW.2799.14)。
以上内容是结合具体的优选实施方式对本发明所作的进一步详细说明，不能认定本发明的具体实施只局限于这些说明。对于本发明所属技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干简单推演或替换，都应当视为属于本发明的保护范围。