牛焦虫疫苗制造方法.pdf

牛焦虫疫苗是预防牛环形泰勒焦虫病的特效疫苗，宁夏农科院畜牧兽医研究所1983年10月1日提供的“牛环形泰勒焦虫裂殖体胶冻细胞苗（弱毒虫苗）制造及检验规程”，制定了制造该疫苗的十个步骤：1、种子细胞的采集（含焦虫裂殖体的牛的成淋巴细胞，以下简称细胞），2、焦虫裂殖体的传代培养和致弱，3、细胞的大量生产，4、细胞的冻存，5、无菌检验，6、安全检验，7、效力检验，8、配制疫苗，9、疫苗的无菌检验，10、出厂使用，根据规程可以生产出合格的疫苗。
    但是，生产大量细胞所采用的方法是低速转动培养法，细胞培养瓶每小时旋转6-8转。此法在传代扩大再生产时，细胞有一部份贴于瓶壁生长，不易脱落。需用人力摇动，有的还需用威尔逊液消化使细胞脱离瓶壁，费时费力费化学药品。细胞产率有待提高。本发明即为了解决上述问题，以提高疫苗产量，简化制造疫苗的操作手续。

    本发明的技术特点是建立了细胞高速转动培养生产法。其方法是;改变和调正转瓶机的转动速度，由低速改为高速，使细胞培养瓶由原来的每小时旋转6-8转，加速到每小时旋转50-60转。由于转速的增加，细胞的位置移动加快，无法固定于瓶壁，只能悬浮于培养液中生长繁殖，培养液与空气的接触面积，细胞与培养液的接触部位都比原来增加10倍，充分供应了细胞呼吸用的氧气，及维持培养液酸碱度平衡的二氧化炭，和细胞生长所需的养分。

    实施例：发明人于1985年1-3月份使用新方法进行了大批量疫苗生产，在每小时转速60转的速度下，每毫升培养液生产细胞92.26万个，比原来产量（90.05万个）细胞产率提高了2.4%，省去了细胞脱壁手续，减少了在无菌室内地操作时间，降低了劳动强度，节约了化学药品。细胞全部在悬浮状态下生长，为进行深层搅拌培养生产法和连续培养生产法提供了可能性。