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1、10申请公布号CN101933976A43申请公布日20110105CN101933976ACN101933976A21申请号201010275253122申请日20100908A61K36/634200601A61K9/107200601A61P31/04200601A61P31/1220060171申请人西北大学地址710069陕西省西安市太白北路229号72发明人郝保华李伟泽74专利代理机构西安西达专利代理有限责任公司61202代理人谢钢54发明名称连翘挥发油高效活性部位纳米乳的制备方法57摘要本发明涉及一种从连翘挥发油中分离出高效抗病原微生物活性部位并制备成纳米乳的方法，该方法涉及连翘。
2、挥发油高效活性部位的分离和纳米乳的制备，具体如下通过硅胶柱层析法或低压减压分馏法分离得到连翘挥发油不同活性部位，然后将不同活性部位通过抗菌或抗病毒试验筛选得到高效活性部位；称取1020的连翘挥发油高效活性部位、23甘油、1030吐温80混合均匀，然后缓缓加入到余量的注射用水中，搅拌均匀，14放置25天，用045M、022M的微孔滤膜依次过滤，即得连翘挥发油高效活性部位的纳米乳。本发明提高了挥发油的药理作用，还降低了连翘挥发油的刺激性并提高其活性，可以通过口服给药而取得较好的治疗效果。51INTCL19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书1页说明书3页CN101933976A1。
3、/1页21连翘挥发油高效活性部位纳米乳的制备方法，其特征在于包括以下步骤1连翘挥发油高效活性部位的分离通过硅胶柱层析法或低压减压分馏法分离得到连翘挥发油不同活性部位，然后将不同活性部位通过抗菌或抗病毒试验筛选得到高效活性部位；2纳米乳的制备称取1020的连翘挥发油高效活性部位、23甘油、1030吐温80混合均匀，然后缓缓加入到余量的注射用水中，搅拌均匀，14放置25天，用045M、022M的微孔滤膜依次过滤，即得连翘挥发油高效活性部位的纳米乳。2根据连翘挥发油高效活性部位纳米乳的制备方法，其特征在于将连翘挥发油于硅胶柱上样，用有机溶剂进行洗脱，分段收集不同的洗脱液，真空条件下去除有机溶剂，得到。
4、极性大小不同的活性部位。3根据连翘挥发油高效活性部位纳米乳的制备方法，其特征在于真空条件下，在不同温度下使不同沸点的成分在精馏塔中分离，冷凝，收集得到沸点不同的活性部位。权利要求书CN101933976A1/3页3连翘挥发油高效活性部位纳米乳的制备方法技术领域0001本发明涉及一种从连翘挥发油中分离出高效抗病原微生物活性部位并制备成纳米乳的方法，属于医药技术领域。背景技术0002随着经济的全球化、信息物流的全球化，加之生态环境的恶化，瘟疫即传染性疾病的全球化也随即产生。瘟疫的产生与传播主要是由于人体感染病原微生物包括细菌和病毒，因此，对于传染性疾病的治疗主要就是利用抗生素与抗病毒药物。目前，市。
5、场上的抗生素与抗病毒药物均为结构清楚、成分单一的化学合成或半合成药物，其问世之初确实对于传染性疾病的预防和治疗起到了显著的作用。但是，由于化学药物的成分单一，其易于被病原微生物识别而使病原微生物产生抗药性，由此导致目前用于传染性疾病的新药的研发明显滞后于病原微生物的抗药性；同时其在治疗过程中产生的对人体的毒副作用也日益突出和严重，例如四环素类、链霉素类与氨基糖甙类的毒副作用已经众所周知。因此，开发新型高效安全的抗传染性疾病的药物迫在眉睫。0003中药具有多成分、多靶点、多功效的综合作用特点，有着显著的广谱抗菌、抗病毒作用，且其对人体无毒或毒性与不良反应极低。由于其活性成分为复杂的多成分，所以细。
6、菌和病毒对于中药不易产生抗药性，人体也不易产生耐受性。0004连翘味苦，微寒，归肺、心、小肠经，具有清热解毒，消肿散结之功效，可用于外感风热、瘟病初起。而现代研究对于多种病毒具有显著抑制作用，其抗病毒的主要活性成分为挥发油。连翘挥发油具有广谱抗菌抑病毒作用，对流感病毒感染小鼠有保护作用；在鸡胚内能抑制流感病毒亚甲型、副流感仙台株的增殖。其中连翘挥发油对于甲型流感病毒京科681株和I型副流感病毒仙台株的最低抗病毒浓度为165536。0005挥发油是一大类中药活性成分。挥发油的成分复杂，且结构相似；具有广泛的药理作用如抗菌、抗病毒与抗炎作用，但具有一定的刺激性，特别是口服刺激性更大。长期以来，没有。
7、对连翘挥发油深入的研究。本发明从连翘挥发油中分离筛选其高活性部位，然后制备成纳米乳，以降低其刺激性而提高活性。发明内容0006本发明的目的在于提供一种分离连翘挥发油的高效活性部位并制备纳米乳的方法，该方法不仅提高了连翘挥发油的活性，同时降低了其刺激性。0007本发明实现过程如下0008一种连翘挥发油高效活性部位纳米乳的制备方法，包括以下步骤00091连翘挥发油高效活性部位的分离0010通过硅胶柱层析法或低压减压分馏法分离得到连翘挥发油不同活性部位，然后将不同活性部位通过抗菌或抗病毒试验筛选得到高效活性部位；00112纳米乳的制备说明书CN101933976A2/3页40012称取1020的连翘。
8、挥发油高效活性部位、23甘油、1030吐温80混合均匀，然后缓缓加入到余量的注射用水中，搅拌均匀，14放置25天，用045M、022M的微孔滤膜依次过滤，即得连翘挥发油高效活性部位的纳米乳。0013上述连翘挥发油的活性部位分离方法可以有两种00141硅胶柱层析法按照极性大小不同将连翘挥发油分离为多个极性不同的部位，具体是将连翘挥发油于硅胶柱上样，用有机溶剂进行洗脱，分段收集不同的洗脱液，真空条件下去除有机溶剂，得到极性大小不同的活性部位。00152低压减压分馏法按沸点不同进行分离，分离沸点不同的部位。真空条件下，在不同温度下使不同沸点的成分在精馏塔中分离，冷凝，收集得到沸点不同的活性部位。00。
9、16上述连翘挥发油的高活性部位的筛选方法为将分离得到的不同部位进行抗菌或抗病毒试验，筛选出活性较好的不同部位；然后将不同部位进行优化组合，再进行筛选试验，从而得出活性最高的部位。0017上述连翘挥发油的高活性部位纳米乳的组成为连翘挥发油1020，甘油23，吐温801030，注射用水加至100。0018本发明从连翘挥发油中分离筛选其高活性部位，然后制备成纳米乳，不仅提高了挥发油的药理作用，还降低连翘挥发油的刺激性并提高其活性，可以通过口服给药而取得较好的治疗效果。具体实施方式0019实施例1硅胶柱层析法分离不同部位0020用湿法装柱，加200ML石油醚到70克硅胶中，除区气泡，装柱，上样1克连翘。
10、挥发油，分别加石油醚乙酸乙酯151；131；111；91；71；51；31；11；13；15洗脱，每个洗脱液200ML，分管回收每管10ML，点样，用硫酸乙醇显色。回收极性大致相同的部位，即可。0021实施例2低压减压分馏法分离不同部位002221用无水乙醇对塔进行洗涤，打开冷凝水，在常压全回流的状态下洗塔3小时，然后用真空泵将塔内乙醇蒸汽抽干。002322量取适量连翘挥发油，将其和沸石一并加入已洗净的塔釜中；密封精馏塔并保证其密闭性；打开真空泵控制塔顶压力为007MPA，开始加热至挥发油达到微沸状态150154。002423调整精馏塔保温仪使温度梯度升温即253058626472851161。
11、20130；分别收集各个温度下相应的精馏部位即B1、B2、B3、B4、B5、B6。附注精馏塔的设备参数为内径为塔高1000MM，内装2525MM玻璃丝网填料，填料装填高度约为900MM；塔身由内到外采用电保温带加热、玻璃保温层及石棉联合保温，电保温带加热功率由调压器控制，以补偿塔身的热损失。0025实施例3不同活性部位抑菌实验00261菌种的活化受试菌种标准菌株接种于固体琼脂培养基，37活化24H，金黄色葡萄球菌活化48H。00272菌悬液的制备将活化后的受试菌种用接种环挑取菌苔于生理盐水中，制成说明书CN101933976A3/3页5含菌数浊度约为05MCF的菌悬液备用。00283各活性部位。
12、溶液的配制将各被试各活性部位溶解于10的HAC溶液，连翘挥发油浓度设置为2、15、10、05、025。00294抑菌测试方法琼脂扩散纸片法0030纸片扩散法是将含有定量抗生素的滤纸片贴在已接种了测试菌的琼脂表面上，纸片中的药物在琼脂中扩散，随着扩散距离的增加抗生素的浓度呈对数减少，在药物浓度到达的范围内对此药敏感的细菌不能生长而形成透明的抑菌圈，不同细菌形成的抑菌圈各不相同，抑菌圈的大小反映了测试菌对该药的敏感程度。如果抑菌剂能杀死或抑制皿中供试菌的生长，则在滤纸片的周围会出现一个无菌生长的透明圈，即抑菌圈。以抑菌圈的直径作为评定指标，抑菌圈直径越大，说明该抑菌剂对此种供试菌的抑制效果越好，反之则抑制效果越差。0031实验发现石油醚乙酸乙酯为151111洗脱的活性部位的抑菌圈最大，达到26MM，说明该部位是活性成分最集中的部位。脱除有机溶剂后即得连翘挥发油高效活性部位。0032实施例4纳米乳的制备0033准确量取连翘挥发油高效活性部位15ML，甘油25ML，吐温8012ML混合均匀；然后缓缓加入到84ML注射用水中，搅拌均匀；4放置96小时，用045M、022M的微孔滤膜依次过滤，即得。说明书。