一种治疗类风湿性关节炎的药物组合物及制备方法和用途 本申请是申请号 ： 200710187708.2 的 专 利 申 请 的 分 案 申 请。 原 申 请 申 请 号 ： 200710187708.2， 申请日 ： 2007 年 11 月 23 日， 发明名称 ： 一种治疗类风湿性关节炎的药物 组合物及制备方法和用途。
技术领域 本发明涉及一种治疗类风湿性关节炎的药物组合物， 具体地， 是药物的有效部位 为活性成分制备而成的药物组合物， 属中药领域。
背景技术 川乌与白芍配伍的方剂现代临床上已经广泛应用于痹证、 类风湿性关节炎、 腰椎 间盘突出症、 强直性脊柱炎、 坐骨神经痛、 三叉神经痛、 膝关节囊积液等疾病， 除传统的汤剂 外， 目前市场上有川乌和白芍的中成药也很多， 甚至还有保健品。 如治疗癌性疼痛的天蟾胶 囊， 治疗寒湿型颈椎及膝关节增生性关节炎的附桂骨痛片、 附桂骨痛胶囊、 附桂骨痛颗粒， 治疗骨关节增生性疾病的骨刺胶囊、 骨刺片， 治疗风寒湿痹的复方小活络丸、 寒湿痹颗粒、 寒湿痹片， 治疗卵巢癌的琥珀丸， 治疗筋骨软弱的追风丸， 治疗类风湿性关节炎的克痹通药 酒， 外用治疗跌打损伤的正骨膏， 外用治疗哮喘的阿恒喘安贴等， 槐木强身保健枕作为一种 保健枕已经申请了专利。由此可见， 川乌配伍白芍在现代临床应用中已经非常的广泛。
发明内容
本发明的技术方案是提供了一种治疗类风湿性关节炎的药物组合物， 本发明的另 一技术方案是提供了该药物组合物的制备方法。
本发明提供了一种治疗类风湿性关节炎的药物组合物， 它是由下述重量配比的原 料制备而成的药剂 ：
川乌 1-2 份、 白芍 1-3 份。
其中， 它是由川乌有效部位、 白芍有效部位为活性成分制备而成的药剂 ：
川乌有效部位 1-2 份、 白芍有效部位 1-3 份， 其中所述的川乌有效部位为川乌总 碱、 川乌多糖 ； 白芍有效部位为白芍总苷、 白芍多糖。
其中， 川乌总碱， 总生物碱含量以乌头碱计含量≥ 30％ w/w ； 川乌多糖， 总多糖含 量以葡萄糖计含量≥ 20 ％ w/w ； 白芍总苷， 总苷含量以芍药苷计含量≥ 30 ％ w/w ； 白芍多 糖， 总多糖含量以葡萄糖计含量≥ 35％ w/w。
川乌总碱、 川乌多糖、 白芍总苷、 白芍多糖的提取方法， 可以按教科书或文献公开 的方法提取制备， 如肖崇厚 . 中药化学 . 上海科学技术出版社 .1997 ； 刘芳， 杨广德 . 白 芍中芍药苷的提取方法研究 . 中成药， 2003， 25(10) ： 792 ～ 2795. ； 杨士友， 孙备， 黄世福， 等 . 白芍中白芍苷提取和纯化工艺的研究 . 安徽医药， 2004， 8(1) ： 221 ～ 222. ； 舒晓燕， 刘 慧， 梁静， 等 . 川附子粗多糖提取工艺的研究 . 中药材， 2006， 29(12) ： 1349 ～ 1352 ； 谢晓 梅， 廖自荣 . 芍药中芍药苷提取方法的比较研究 . 中国中医药科技， 2005(12) ： 298 ～ 299 ；孙玉军， 陈彦， 吴佳静， 等 . 草乌多糖的分离纯化和组成性质研究 . 中国药学杂志， 2000 ； 35(11) ： 731 ～ 733 ； 黄建明， 郭济贤， 陈万生， 等 . 大孔树脂对草乌生物碱的吸附性能及提 纯工艺 . 复旦学报， 2003， 30(3) ： 267. ； 裴晓红， 许闽， 李亚飞等 . 白芍多糖铁配合物的合成 及一般性质研究 . 河南中医学院学报， 2005.20(116) ： 28 ～ 29。
其中， 它是由下述重量配伍的原料制备而成的药剂 ：
川乌总碱 1-2 份、 白芍总苷 1-3 份。
其中， 它是由下述重量配伍的原料制备而成的药剂 ：
川乌总碱 1-2 份、 白芍多糖 1-3 份。
其中， 它是由下述重量配伍的原料制备而成的药剂 ：
川乌多糖 1-2 份、 白芍总苷 1-3 份。
所述的药剂是片剂、 颗粒剂、 胶囊剂、 丸剂或口服液。
本发明还提供了该药物组合物的制备方法， 包括如下步骤 ：
a、 称取重量配比的原料 ：
川乌 1-2 份、 白芍 1-3 份 ；
b、 提取原料中的有效部位， 其中， 川乌的有效部位为川乌总碱、 川乌多糖、 白芍有 效部位为白芍总苷、 白芍多糖 ； c、 混合， 加入药学上可接受的辅料或辅助性成分制备成药学上常用的制剂。
本发明还提供了该药物组合物在制备治疗类风湿性关节炎的药物中的用途。
本发明药物药效明确， 原料将白芍、 川乌有效成分配伍， 如将川乌有效部位为川乌 总碱、 川乌多糖 ； 白芍有效部位为白芍总苷、 白芍多糖配伍， 尤其是制川乌总碱、 白芍总苷 有一定的抗炎、 镇痛效果， 但川乌总碱、 芍药总苷配伍却有明显的作用。其中， 重量配比为 2 ∶ 3、 1 ∶ 1、 2 ∶ 1 时抗炎、 镇痛， 治疗类风湿性关节炎较好， 具有最佳药效配伍， 质量可控 性强， 为临床提供了一种新的选择。
具体实施方式
实施例 1 本发明药物的制备方法
取原料川乌 100g、 白芍 100g， 以 3 倍量水浸泡 30min， 加至 10 倍量水煎煮， 煮沸后 煎 6h 倾出上清液， 过滤， 然后浓缩至相当于每毫升含 1g 制川乌。
实施例 2 本发明药物的制备
取原料川乌 100g、 白芍 300g， 按实施例 1 的方法提取， 制粒， 装胶囊， 得胶囊剂。
实施例 3 本发明药物的制备
取原料川乌总碱 100g、 白芍总苷 100g， 按实施例 1 的方法提取， 制粒， 装胶囊， 得胶 囊剂。
实施例 4 本发明药物的制备
取市售川乌总碱 200g、 白芍总苷 300g， 加入淀粉、 糊精， 制粒， 装胶囊， 得胶囊剂。
实施例 5 本发明药物的制备
取市售川乌总碱 100g、 白芍多糖 100g， 加入淀粉、 糊精， 制粒， 压片， 得片剂。
实施例 6 本发明药物的制备
取市售川乌总碱 200g、 白芍多糖 300g， 加入淀粉、 糊精， 制粒， 装胶囊， 得胶囊剂。实施例 7 本发明药物的制备
取市售川乌多糖 100g、 白芍总苷 100g， 加入淀粉、 糊精， 制粒， 装胶囊， 得胶囊剂。
实施例 8 本发明药物的制备
取市售川乌多糖 200g、 白芍总苷 300g， 加入淀粉、 糊精， 制粒， 压片， 得片剂。
以下通过具体药效学试验证明本发明的有益效果。
试验例 1 制川乌与白芍组分配伍的镇痛作用
1、 实验材料
1.1. 药物
(1) 制川乌总碱 ： 26ml， 含 1.5kg 生药 ； 实验时配制成含制川乌 6％的制川乌总碱 药液， 备用。
(2) 制川乌多糖 ： 420ml， 含 1.05kg 生药 ； 实验时配制成含制川乌 6％的制川乌多 糖药液， 备用。
(3) 白芍总苷 ： 155ml， 含 3.33kg 生药 ； 实验时配制成含白芍 6％的白芍总苷药液， 备用。
(4) 白芍多糖 ： 120.3g， 含 21kg 生药 ； 实验时配制成含白芍 6％的白芍多糖药液， 备用。
(5) 制川乌总碱白芍总苷 1 ∶ 1 混合液 ： 按照制川乌和白芍生药 1 ∶ 1 配伍成含 制川乌 6％的制川乌总碱白芍总苷混合液， 备用。
(6) 制川乌总碱白芍总苷 1 ∶ 2 混合液 ： 按照制川乌和白芍生药 1 ∶ 2 配伍成含 制川乌 6％的制川乌总碱白芍总苷混合液， 备用。
(7) 制川乌总碱白芍总苷 2 ∶ 1 混合液 ： 按照制川乌和白芍生药 2 ∶ 1 配伍成含 制川乌 6％的制川乌总碱白芍总苷混合液， 备用。
(8) 制川乌总碱白芍总苷 2 ∶ 3 混合液 ： 按照制川乌和白芍生药 2 ∶ 3 配伍成含 制川乌 6％的制川乌总碱白芍总苷混合液， 备用。
(9) 制川乌总碱白芍多糖 1 ∶ 1 混合液 ： 按照制川乌和白芍生药 1 ∶ 1 配伍成含 制川乌 6％的制川乌总碱白芍多糖混合液， 备用。
(10) 制川乌总碱白芍多糖 1 ∶ 2 混合液 ： 按照制川乌和白芍生药 1 ∶ 2 配伍成含 制川乌 6％的制川乌总碱白芍多糖混合液， 备用。
(11) 制川乌总碱白芍多糖 2 ∶ 1 混合液 ： 按照制川乌和白芍生药 2 ∶ 1 配伍成含 制川乌 6％的制川乌总碱白芍多糖混合液， 备用。
(12) 制川乌总碱白芍多糖 2 ∶ 3 混合液 ： 按照制川乌和白芍生药 2 ∶ 3 配伍成含 制川乌 6％的制川乌总碱白芍多糖混合液， 备用。
(13) 制川乌多糖白芍总苷 1 ∶ 1 混合液 ： 按照制川乌和白芍生药 1 ∶ 1 配伍成含 制川乌 6％的制川乌多糖白芍总苷混合液， 备用。
(14) 制川乌多糖白芍总苷 1 ∶ 2 混合液 ： 按照制川乌和白芍生药 1 ∶ 2 配伍成含 制川乌 6％的制川乌多糖白芍总苷混合液， 备用。
(15) 制川乌多糖白芍总苷 2 ∶ 1 混合液 ： 按照制川乌和白芍生药 2 ∶ 1 配伍成含 制川乌 6％的制川乌多糖白芍总苷混合液， 备用。
(16) 制川乌多糖白芍总苷 2 ∶ 3 混合液 ： 按照制川乌和白芍生药 2 ∶ 3 配伍成含制川乌 6％的制川乌多糖白芍总苷混合液， 备用。
(17) 制川乌多糖白芍多糖 1 ∶ 1 混合液 ： 按照制川乌和白芍生药 1 ∶ 1 配伍成含 制川乌 6％的制川乌多糖白芍多糖混合液， 备用。
(18) 制川乌多糖白芍多糖 1 ∶ 2 混合液 ： 按照制川乌和白芍生药 1 ∶ 2 配伍成含 制川乌 6％的制川乌多糖白芍多糖混合液， 备用。
(19) 制川乌多糖白芍多糖 2 ∶ 1 混合液 ： 按照制川乌和白芍生药 2 ∶ 1 配伍成含 制川乌 6％的制川乌多糖白芍多糖混合液， 备用。
(20) 制川乌多糖白芍多糖 2 ∶ 3 混合液 ： 按照制川乌和白芍生药 2 ∶ 3 配伍成含 制川乌 6％的制川乌多糖白芍多糖混合液， 备用。
以上药物为受试药物， 均按所述的文献方法提取制备。
(21) 吗啡片 ： 阳性药物， 由青海制药厂有限公司生产， 生产批号 ： 20030513。 规格 ： 5mg/ 片 ×10 片 ×2 板 ×20 袋 ×20 中盒。实验时用蒸馏水配制成 0.2％的药液， 备用。
1.2. 动物
KM 小鼠， 雌雄兼有， 体重 20±2g， 由成都中医药大学实验动物研究中心提供， 合格 证号 ： 川实动管质 04 第 11 号， 检疫后备用。 1.3. 仪器
RB-200 型智能热板镇痛仪， 由成都泰盟科技有限公司生产。
2、 实验方法
2.1. 扭体试验
取 220 只小鼠 ( 雌雄各半 ) 随机分为模型对照组 (N ＝ 10)、 阳性对照组 (N ＝ 10)、 制川乌总碱组 (N ＝ 10)、 制川乌多糖组 (N ＝ 10)、 白芍总苷组 (N ＝ 10)、 白芍多糖组 (N ＝ 10)、 制川乌总碱白芍总苷 1 ： 1 组 (N ＝ 10)、 制川乌总碱白芍总苷 1 ： 2 组 (N ＝ 10)、 制川乌 总碱白芍总苷 2 ： 1 组 (N ＝ 10)、 制川乌总碱白芍总苷 2 ： 3 组 (N ＝ 10)、 制川乌总碱白芍多 糖1： 1 组 (N ＝ 10)、 制川乌总碱白芍多糖 1 ： 2 组 (N ＝ 10)、 制川乌总碱白芍多糖 2 ： 1 组 (N ＝ 10)、 制川乌总碱白芍多糖 2 ： 3 组 (N ＝ 10)、 制川乌多糖白芍总苷 1 ： 1 组 (N ＝ 10)、 制川 乌多糖白芍总苷 1 ： 2 组 (N ＝ 10)、 制川乌多糖白芍总苷 2 ： 1 组 (N ＝ 10)、 制川乌多糖白芍 总苷 2 ： 3 组 (N ＝ 10)、 制川乌多糖白芍多糖 1 ： 1 组 (N ＝ 10)、 制川乌多糖白芍多糖 1 ： 2组 (N ＝ 10)、 制川乌多糖白芍多糖 2 ： 1 组 (N ＝ 10)、 制川乌多糖白芍多糖 2 ： 3 组 (N ＝ 10)。 按组分别灌胃蒸馏水、 0.2％吗啡药液、 含制川乌 6％的制川乌总碱药液、 含制川乌 6％的制 川乌多糖药液、 含白芍 6％的白芍总苷药液、 含白芍 6％的白芍多糖药液、 含制川乌 6％的制 川乌总碱白芍总苷 1 ∶ 1 混合液、 含制川乌 6％的制川乌总碱白芍总苷 1 ∶ 2 混合液、 含制 川乌 6％的制川乌总碱白芍总苷 2 ∶ 1 混合液、 含制川乌 6％的制川乌总碱白芍总苷 2 ∶ 3 混合液、 含制川乌 6％的制川乌总碱白芍多糖 1 ∶ 1 混合液、 含制川乌 6％的制川乌总碱白 芍多糖 1 ∶ 2 混合液、 含制川乌 6％的制川乌总碱白芍多糖 2 ∶ 1 混合液、 含制川乌 6％的制 川乌总碱白芍多糖 2 ∶ 3 混合液、 含制川乌 6％的制川乌多糖白芍总苷 1 ∶ 1 混合液、 含制 川乌 6％的制川乌多糖白芍总苷 1 ∶ 2 混合液、 含制川乌 6％的制川乌多糖白芍总苷 2 ∶ 1 混合液、 含制川乌 6％的制川乌多糖白芍总苷 2 ∶ 3 混合液、 含制川乌 6％的制川乌多糖白 芍多糖 1 ∶ 1 混合液、 含制川乌 6％的制川乌多糖白芍多糖 1 ∶ 2 混合液、 含制川乌 6％的制 川乌多糖白芍多糖 2 ∶ 1 混合液、 含制川乌 6％的制川乌多糖白芍多糖 2 ∶ 3 混合液， 10ml/
kg。给药后 1h， 各鼠腹腔注射 0.6％冰乙酸 10ml/kg， 观察 15min 内各组小鼠出现扭体反应 的潜伏期及扭体次数。实验数据资料用 SPSS 统计软件包进行统计学处理。
2.2. 热板试验
用 RB-200 型智能热板镇痛仪筛选基础痛阈值 ( 以小鼠舔后足的时间作为痛阈 ) 在 5-30 秒的雌性小鼠 220 只， 按基础痛阈值的高低随机分为模型对照组 (N ＝ 10)、 阳性对 照组 (N ＝ 10)、 制川乌总碱组 (N ＝ 10)、 制川乌多糖组 (N ＝ 10)、 白芍总苷组 (N ＝ 10)、 白 芍多糖组 (N ＝ 10)、 制川乌总碱白芍总苷 1 ： 1 组 (N ＝ 10)、 制川乌总碱白芍总苷 1 ： 2 组 (N ＝ 10)、 制川乌总碱白芍总苷 2 ： 1 组 (N ＝ 10)、 制川乌总碱白芍总苷 2 ： 3 组 (N ＝ 10)、 制川 乌总碱白芍多糖 1 ： 1 组 (N ＝ 10)、 制川乌总碱白芍多糖 1 ： 2 组 (N ＝ 10)、 制川乌总碱白芍 多糖 2 ： 1 组 (N ＝ 10)、 制川乌总碱白芍多糖 2 ： 3 组 (N ＝ 10)、 制川乌多糖白芍总苷 1 ： 1组 (N ＝ 10)、 制川乌多糖白芍总苷 1 ： 2 组 (N ＝ 10)、 制川乌多糖白芍总苷 2 ： 1 组 (N ＝ 10)、 制 川乌多糖白芍总苷 2 ： 3 组 (N ＝ 10)、 制川乌多糖白芍多糖 1 ： 1 组 (N ＝ 10)、 制川乌多糖白 芍多糖 1 ： 2 组 (N ＝ 10)、 制川乌多糖白芍多糖 2 ： 1 组 (N ＝ 10)、 制川乌多糖白芍多糖 2 ： 3 组 (N ＝ 10)。按组分别灌胃蒸馏水、 0.2％吗啡药液、 含制川乌 6％的制川乌总碱药液、 含制 川乌 6％的制川乌多糖药液、 含白芍 6％的白芍总苷药液、 含白芍 6％的白芍多糖药液、 含制 川乌 6％的制川乌总碱白芍总苷 1 ∶ 1 混合液、 含制川乌 6％的制川乌总碱白芍总苷 1 ∶ 2 混合液、 含制川乌 6％的制川乌总碱白芍总苷 2 ∶ 1 混合液、 含制川乌 6％的制川乌总碱白 芍总苷 2 ∶ 3 混合液、 含制川乌 6％的制川乌总碱白芍多糖 1 ∶ 1 混合液、 含制川乌 6％的制 川乌总碱白芍多糖 1 ∶ 2 混合液、 含制川乌 6％的制川乌总碱白芍多糖 2 ∶ 1 混合液、 含制 川乌 6％的制川乌总碱白芍多糖 2 ∶ 3 混合液、 含制川乌 6％的制川乌多糖白芍总苷 1 ∶ 1 混合液、 含制川乌 6％的制川乌多糖白芍总苷 1 ∶ 2 混合液、 含制川乌 6％的制川乌多糖白 芍总苷 2 ∶ 1 混合液、 含制川乌 6％的制川乌多糖白芍总苷 2 ∶ 3 混合液、 含制川乌 6％的制 川乌多糖白芍多糖 1 ∶ 1 混合液、 含制川乌 6％的制川乌多糖白芍多糖 1 ∶ 2 混合液、 含制 川乌 6％的制川乌多糖白芍多糖 2 ∶ 1 混合液、 含制川乌 6％的制川乌多糖白芍多糖 2 ∶ 3 混合液， 10ml/kg。测定末次给药后 0.5h、 1h、 1.5h 和 2h 的痛阈值。实验数据资料用 SPSS 统计软件包进行统计学处理。
3、 实验结果
3.1. 制川乌与白芍组分配伍对冰乙酸致痛小鼠的影响
模型对照组小鼠注射 0.6％冰醋酸后疼痛明显， 表现为扭体次数频繁。 阳性对照组 给药后疼痛阈值较模型组均提高， 表现为潜伏期延长和扭体次数减少， 与模型对照组比较， 有非常显著性差异 ； 制川乌总碱白芍总苷 2 ∶ 3 配伍组， 制川乌总碱白芍多糖 1 ∶ 1、 2∶3 配伍组， 制川乌多糖白芍总苷 1 ∶ 1、 1 ∶ 2 配伍组给药后扭体次数显著减少， 与模型对照组 比较显著性差异。结果详见表 1。
表 1 制川乌与白芍组分配伍对冰乙酸致痛小鼠的影响 (X±SD)
* ** 注： 与模型组比较， P ≤ 0.05， P ≤ 0.01。
3.2. 制川乌与白芍组分配伍对热板致痛小鼠的影响
实验前各组小鼠基础痛阈值均无显著性差异。给药 30min 后， 阳性对照组、 制川乌 总碱白芍多糖 1 ∶ 2 配伍组痛阈值均显著升高， 与模型对照组比较有显著或非常显著性差 异。给药 60min 后， 阳性对照组痛阈值显著升高， 与模型对照组比较有非常显著性差异。给 药 90min 后， 阳性对照组、 制川乌总碱白芍总苷 2 ∶ 3 配伍组、 制川乌多糖白芍总苷 1 ∶ 1 配伍组痛阈值均显著升高， 与模型对照组比较有显著或非常显著性差异。给药 120min 后， 阳性对照组、 制川乌总碱白芍总苷 2 ∶ 3 配伍组、 制川乌总碱白芍多糖 1 ∶ 2 配伍组、 制川 乌多糖白芍总苷 1 ∶ 1 配伍组痛阈值均显著升高， 与模型对照组比较有显著或非常显著性 差异。结果详见表 2、 3。
表 2 制川乌与白芍组分配伍对热板致痛小鼠的影响 (X±SD)
* ** 注： 与模型组比较， P ≤ 0.05， P ≤ 0.01。 表 3 制川乌与白芍组分配伍对热板致痛小鼠的影响 (X±SD)* ** 注： 与模型组比较， P ≤ 0.05， P ≤ 0.01。
4、 结论
由以上实验结果可知， 制川乌总碱、 制川乌多糖、 白芍总苷、 白芍多糖单组分在含 生药 6％的剂量下均未表现出明显的镇痛作用， 但是， 其组分的相互配伍则部分表现出明显 的镇痛效果。 其中， 制川乌总碱白芍多糖配伍的效果最为明显， 制川乌多糖白芍总苷配伍和 制川乌总碱白芍总苷配伍依次减弱， 制川乌多糖和白芍多糖配伍无明显的镇痛作用。制川 乌总碱白芍多糖配伍镇痛效果比例依次为 1 ∶ 2、 1 ∶ 1、 2 ∶ 3， 制川乌多糖白芍总苷配伍镇 痛效果比例依次为 1 ∶ 1、 1 ∶ 2， 制川乌总碱白芍总苷配伍镇痛效果比例为 2 ∶ 3 最佳。
试验例 2 制川乌与白芍组分配伍的抗炎作用
1、 实验材料
1.1. 药物
(1) 制川乌总碱 ： 26ml， 含 1.5kg 生药 ； 实验时配制成含制川乌 6％的制川乌总碱 药液， 备用。
(2) 制川乌多糖 ： 420ml， 含 1.05kg 生药 ； 实验时配制成含制川乌 6％的制川乌多 糖药液， 备用。
(3) 白芍总苷 ： 155ml， 含 3.33kg 生药 ； 实验时配制成含白芍 6％的白芍总苷药液， 备用。
(4) 白芍多糖 ： 120.3g， 含 21kg 生药 ； 实验时配制成含白芍 6％的白芍多糖药液，备用。 (5) 制川乌总碱白芍总苷 1 ∶ 1 混合液 ： 按照制川乌和白芍生药 1 ∶ 1 配伍成含 制川乌 6％的制川乌总碱白芍总苷混合液， 备用。
(6) 制川乌总碱白芍总苷 1 ∶ 2 混合液 ： 按照制川乌和白芍生药 1 ∶ 2 配伍成含 制川乌 6％的制川乌总碱白芍总苷混合液， 备用。
(7) 制川乌总碱白芍总苷 2 ∶ 1 混合液 ： 按照制川乌和白芍生药 2 ∶ 1 配伍成含 制川乌 6％的制川乌总碱白芍总苷混合液， 备用。
(8) 制川乌总碱白芍总苷 2 ∶ 3 混合液 ： 按照制川乌和白芍生药 2 ∶ 3 配伍成含 制川乌 6％的制川乌总碱白芍总苷混合液， 备用。
(9) 制川乌总碱白芍多糖 1 ∶ 1 混合液 ： 按照制川乌和白芍生药 1 ∶ 1 配伍成含 制川乌 6％的制川乌总碱白芍多糖混合液， 备用。
(10) 制川乌总碱白芍多糖 1 ∶ 2 混合液 ： 按照制川乌和白芍生药 1 ∶ 2 配伍成含 制川乌 6％的制川乌总碱白芍多糖混合液， 备用。
(11) 制川乌总碱白芍多糖 2 ∶ 1 混合液 ： 按照制川乌和白芍生药 2 ∶ 1 配伍成含 制川乌 6％的制川乌总碱白芍多糖混合液， 备用。
(12) 制川乌总碱白芍多糖 2 ∶ 3 混合液 ： 按照制川乌和白芍生药 2 ∶ 3 配伍成含 制川乌 6％的制川乌总碱白芍多糖混合液， 备用。
(13) 制川乌多糖白芍总苷 1 ∶ 1 混合液 ： 按照制川乌和白芍生药 1 ∶ 1 配伍成含 制川乌 6％的制川乌多糖白芍总苷混合液， 备用。
(14) 制川乌多糖白芍总苷 1 ∶ 2 混合液 ： 按照制川乌和白芍生药 1 ∶ 2 配伍成含 制川乌 6％的制川乌多糖白芍总苷混合液， 备用。
(15) 制川乌多糖白芍总苷 2 ∶ 1 混合液 ： 按照制川乌和白芍生药 2 ∶ 1 配伍成含 制川乌 6％的制川乌多糖白芍总苷混合液， 备用。
(16) 制川乌多糖白芍总苷 2 ∶ 3 混合液 ： 按照制川乌和白芍生药 2 ∶ 3 配伍成含 制川乌 6％的制川乌多糖白芍总苷混合液， 备用。
(17) 制川乌多糖白芍多糖 1 ∶ 1 混合液 ： 按照制川乌和白芍生药 1 ∶ 1 配伍成含 制川乌 6％的制川乌多糖白芍多糖混合液， 备用。
(18) 制川乌多糖白芍多糖 1 ∶ 2 混合液 ： 按照制川乌和白芍生药 1 ∶ 2 配伍成含 制川乌 6％的制川乌多糖白芍多糖混合液， 备用。
(19) 制川乌多糖白芍多糖 2 ∶ 1 混合液 ： 按照制川乌和白芍生药 2 ∶ 1 配伍成含 制川乌 6％的制川乌多糖白芍多糖混合液， 备用。
(20) 制川乌多糖白芍多糖 2 ∶ 3 混合液 ： 按照制川乌和白芍生药 2 ∶ 3 配伍成含 制川乌 6％的制川乌多糖白芍多糖混合液， 备用。
以上药物为受试药物， 均由本校中药化学教研室协助提取制备。
(21) 醋酸地塞米松片， 由浙江仙琚制药股份有限公司生产。批准文号 ： 国药准字 H33020822。 生产批号 ： 040934。 规格 ： 0.75mg/ 片 ×100 片。 实验时用蒸馏水配制成 0.015％ 的药液， 备用。
1.2. 动物
(1)KM 小鼠 ： 雄性， 体重 27±2g， 由成都中医药大学实验动物研究中心提供， 合格 证号 ： 川实动管质 04 第 11 号， 检疫后备用。
(2)SD 大鼠， 雄性， 体重 180±20g， 由成都中医药大学实验动物研究中心提供， 合 格证号 ： 川实动管质 04 第 11 号， 检疫后备用。
1.3. 仪器
游标卡尺， 由成都量具刃具股份有限公司生产。
2、 实验方法
2.1. 二甲苯耳廓肿胀试验
取 220 只小鼠 ( 雄性 )， 随机分为模型对照组 (N ＝ 10)、 阳性对照组 (N ＝ 10)、 制川 乌总碱组 (N ＝ 10)、 制川乌多糖组 (N ＝ 10)、 白芍总苷组 (N ＝ 10)、 白芍多糖组 (N ＝ 10)、 制川乌总碱白芍总苷 1 ： 1 组 (N ＝ 10)、 制川乌总碱白芍总苷 1 ： 2 组 (N ＝ 10)、 制川乌总碱 白芍总苷 2 ： 1 组 (N ＝ 10)、 制川乌总碱白芍总苷 2 ： 3 组 (N ＝ 10)、 制川乌总碱白芍多糖 1 ： 1 组 (N ＝ 10)、 制川乌总碱白芍多糖 1 ： 2 组 (N ＝ 10)、 制川乌总碱白芍多糖 2 ： 1 组 (N ＝ 10)、 制川乌总碱白芍多糖 2 ： 3 组 (N ＝ 10)、 制川乌多糖白芍总苷 1 ： 1 组 (N ＝ 10)、 制川乌 多糖白芍总苷 1 ： 2 组 (N ＝ 10)、 制川乌多糖白芍总苷 2 ： 1 组 (N ＝ 10)、 制川乌多糖白芍总 苷2： 3 组 (N ＝ 10)、 制川乌多糖白芍多糖 1 ： 1 组 (N ＝ 10)、 制川乌多糖白芍多糖 1 ： 2 组 (N ＝ 10)、 制川乌多糖白芍多糖 2 ： 1 组 (N ＝ 10)、 制川乌多糖白芍多糖 2 ： 3 组 (N ＝ 10)。按 组分别灌胃蒸馏水、 0.015％醋酸地塞米松药液、 含制川乌 6％的制川乌总碱药液、 含制川乌 6％的制川乌多糖药液、 含白芍 6％的白芍总苷药液、 含白芍 6％的白芍多糖药液、 含制川乌 6％的制川乌总碱白芍总苷 1 ∶ 1 混合液、 含制川乌 6％的制川乌总碱白芍总苷 1 ∶ 2 混合 液、 含制川乌 6％的制川乌总碱白芍总苷 2 ∶ 1 混合液、 含制川乌 6％的制川乌总碱白芍总 苷 2 ∶ 3 混合液、 含制川乌 6％的制川乌总碱白芍多糖 1 ∶ 1 混合液、 含制川乌 6％的制川 乌总碱白芍多糖 1 ∶ 2 混合液、 含制川乌 6％的制川乌总碱白芍多糖 2 ∶ 1 混合液、 含制川 乌 6％的制川乌总碱白芍多糖 2 ∶ 3 混合液、 含制川乌 6％的制川乌多糖白芍总苷 1 ∶ 1 混 合液、 含制川乌 6％的制川乌多糖白芍总苷 1 ∶ 2 混合液、 含制川乌 6％的制川乌多糖白芍 总苷 2 ∶ 1 混合液、 含制川乌 6％的制川乌多糖白芍总苷 2 ∶ 3 混合液、 含制川乌 6％的制 川乌多糖白芍多糖 1 ∶ 1 混合液、 含制川乌 6％的制川乌多糖白芍多糖 1 ∶ 2 混合液、 含制 川乌 6％的制川乌多糖白芍多糖 2 ∶ 1 混合液、 含制川乌 6％的制川乌多糖白芍多糖 2 ∶ 3 混合液， 10ml/kg。 给药 0.5h 后， 每只小鼠右耳廓滴注 0.04ml 二甲苯， 造模后 1.5h 脱颈椎处 死， 用 6mm 打孔器分别在同一部位摘取小鼠双耳片， 称重， 求两耳片之差值， 即为耳肿胀度。 实验数据用 SPSS11.0 统计软件处理。
2.2. 蛋清足跖肿胀试验
取性大鼠 140 只， 随机分为模型对照组 (N ＝ 10)、 阳性对照组 (N ＝ 10)、 制川乌总 碱组 (N ＝ 10)、 制川乌多糖组 (N ＝ 10)、 白芍总苷组 (N ＝ 10)、 白芍多糖组 (N ＝ 10)、 制川 乌总碱白芍总苷 1 ： 1 组 (N ＝ 10)、 制川乌总碱白芍总苷 1 ： 2 组 (N ＝ 10)、 制川乌总碱白芍 总苷 2 ： 1 组 (N ＝ 10)、 制川乌总碱白芍总苷 2 ： 3 组 (N ＝ 10)、 制川乌总碱白芍多糖 1 ： 1组 (N ＝ 10)、 制川乌总碱白芍多糖 1 ： 2 组 (N ＝ 10)、 制川乌总碱白芍多糖 2 ： 1 组 (N ＝ 10)、 制 川乌总碱白芍多糖 2 ： 3 组 (N ＝ 10)。按组分别灌胃蒸馏水、 0.015％醋酸地塞米松药液、 含 制川乌 6％的制川乌总碱药液、 含制川乌 6％的制川乌多糖药液、 含白芍 6％的白芍总苷药液、 含白芍 6％的白芍多糖药液、 含制川乌 6％的制川乌总碱白芍总苷 1 ∶ 1 混合液、 含制川 乌 6％的制川乌总碱白芍总苷 1 ∶ 2 混合液、 含制川乌 6％的制川乌总碱白芍总苷 2 ∶ 1 混 合液、 含制川乌 6％的制川乌总碱白芍总苷 2 ∶ 3 混合液、 含制川乌 6％的制川乌总碱白芍 多糖 1 ∶ 1 混合液、 含制川乌 6％的制川乌总碱白芍多糖 1 ∶ 2 混合液、 含制川乌 6％的制 川乌总碱白芍多糖 2 ∶ 1 混合液、 含制川乌 6％的制川乌总碱白芍多糖 2 ∶ 3 混合液， 10mi/ kg。给药 1 小时后， 大鼠右后足跖皮下注射新鲜鸡蛋清液 0.05ml， 用游标卡尺测定造模后 0.5h、 1h、 2h、 3h、 4h 和 6h 各组大鼠右后足足跖肿胀。 实验数据资料用 SPSS 统计软件包进行 统计学处理。
3、 实验结果
3.1. 制川乌与白芍组分配伍对二甲苯耳廓肿胀小鼠的影响
模型对照组小鼠造模后 1.5h 耳廓肿胀明显。阳性对照组， 制川乌多糖组， 白芍多 糖组， 制川乌总碱白芍总苷 1 ∶ 1、 2 ∶ 3 配伍组， 制川乌多糖白芍多糖 1 ∶ 1、 1 ∶ 2、 2∶1 配伍组耳廓肿胀度均显著减轻， 与模型组比较有显著或非常显著性差异。结果详见表 4。
表 4 制川乌与白芍组分配伍对二甲苯耳廓肿胀小鼠的影响 (X±SD)
* ** 注： 与模型组比较， P ≤ 0.05， P ≤ 0.01。 3.2. 制川乌与白芍组分配伍对蛋清足跖肿胀大鼠的影响实验前各组大鼠右后足跖均无明显差异。 模型对照组大鼠右后足跖注射鸡蛋清后 很快肿胀， 注射后 0.5h 即肿胀明显， 并在 1h 肿胀达高峰， 注射后 6h 仍肿胀明显。造模 0.5h 后， 阳性对照组， 制川乌总碱组， 制川乌总碱白芍总苷 1 ∶ 1 配伍组， 制川乌总碱白芍多糖 1 ∶ 1、 1 ∶ 2 配伍组大鼠右后足跖肿胀均明显减轻， 与模型对照组比较有显著或非常显著 性差异。造模 1h 后， 阳性对照组， 制川乌总碱组， 白芍总苷组， 制川乌总碱白芍总苷 1 ∶ 1、 1 ∶ 2、 2 ∶ 3 配伍组， 制川乌总碱白芍多糖 1 ∶ 1、 1 ∶ 2、 2 ∶ 1 配伍组大鼠右后足跖肿胀均 明显减轻， 与模型对照组比较有显著或非常显著性差异。造模 2h 后， 阳性对照组， 制川乌总 碱组， 制川乌多糖组， 白芍总苷组， 白芍多糖组， 制川乌总碱白芍总苷 1 ∶ 1、 2 ∶ 3 配伍组， 制川乌总碱白芍多糖 1 ∶ 1、 1 ∶ 2、 2 ∶ 1、 2 ∶ 3 配伍组大鼠右后足跖肿胀均明显减轻， 与模 型对照组比较有显著或非常显著性差异。造模 3h 后， 阳性对照组， 制川乌总碱组， 制川乌多 糖组， 制川乌总碱白芍总苷 1 ∶ 1、 1 ∶ 2、 2 ∶ 1、 2 ∶ 3 配伍组、 制川乌总碱白芍多糖 1 ∶ 1、 1 ∶ 2、 2 ∶ 1 配伍组大鼠右后足跖肿胀均明显减轻， 与模型对照组比较有显著或非常显著 性差异。造模 4h 后， 阳性对照组， 制川乌总碱白芍总苷 1 ∶ 1 配伍组、 制川乌总碱白芍多糖 1 ∶ 1、 1 ∶ 2、 2 ∶ 1 配伍组大鼠右后足跖肿胀均明显减轻， 与模型对照组比较有显著或非常 显著性差异。造模 6h 后， 阳性对照组， 制川乌总碱组， 制川乌多糖组， 白芍总苷组、 制川乌总 碱白芍总苷 1 ∶ 1、 2 ∶ 3 配伍组、 制川乌总碱白芍多糖 1 ∶ 1、 1 ∶ 2、 2 ∶ 1、 2 ∶ 3 配伍组 大鼠右后足跖肿胀均明显减轻， 与模型对照组比较有显著或非常显著性差异。结果详见表 5、 6、 7。
表 5 制川乌与白芍组分配伍对蛋清足肿胀大鼠的影响 (X±SD)
* ** 注： 与模型组比较， P ≤ 0.05， P ≤ 0.01。 表 6 制川乌与白芍组分配伍对蛋清足肿胀大鼠的影响 (X±SD)
* ** 注： 与模型组比较， P ≤ 0.05， P ≤ 0.01。 表 7 制川乌与白芍组分配伍对蛋清足肿胀大鼠的影响 (X±SD)* ** 注： 与模型组比较， P ≤ 0.05， P ≤ 0.01。
4、 结论
由以上实验结果可知， 制川乌总碱、 芍药总苷在含生药 6 ％的剂量下未表现出明 显抑制小鼠二甲苯耳廓肿胀的作用， 但是其川乌总碱、 芍药总苷配伍却有明显的作用， 以
2 ∶ 3 配伍比例作用最强， 1 ∶ 1 配伍比例其次 ； 制川乌多糖、 白芍多糖在含生药 6％的剂量 下均有明显抑制二甲苯耳廓肿胀的作用， 并且两者配伍具有更强的作用， 其中 2 ∶ 1 配伍比 例作用最强， 1 ∶ 2 和 1 ∶ 1 配伍比例其次。制川乌总碱、 制川乌多糖、 芍药总苷、 白芍多糖 单组分均有明显的抑制大鼠蛋清足肿胀的作用， 其中， 制川乌总碱作用最强， 其次为白芍总 苷。制川乌总碱白芍总苷各比例配伍后均有明显的抑制大鼠蛋清足肿胀的作用， 配伍比例 以 1 ∶ 1 作用最强， 2 ∶ 3 其次， 其中 1 ∶ 1 配伍比例的作用强于制川乌总碱和白芍总苷。 制川乌总碱白芍多糖各比例配伍后也均有明显的抑制大鼠蛋清足肿胀的作用， 作用由强到 弱的配伍比例依次为 1 ∶ 2、 1 ∶ 1、 2 ∶ 1、 2 ∶ 3， 其中 1 ∶ 2、 1 ∶ 1 配伍比例的作用强于制 川乌总碱和白芍总苷。
上述两个实验证明， 制川乌总碱白芍多糖各比例配伍后针对治疗类风湿性关节炎 抗炎、 镇痛作用， 作用由强到弱的配伍比例依次为 1 ∶ 2、 1 ∶ 1、 2 ∶ 1、 2 ∶ 3。川乌总碱、 芍 药总苷在 2 ∶ 3、 1 ∶ 1 时有明显的抗炎镇痛作用 ； 川乌多糖、 白芍总苷在 1 ∶ 2、 1 ∶ 1 时有 明显的抗炎镇痛作用 ； 川乌多糖、 白芍多糖在 1 ∶ 2、 1 ∶ 1 有明显的抗炎作用。
( 三 ) 制川乌与白芍配伍水煎液治疗痹证动物模型的作用机理
1、 实验材料 1.1. 药物
(1) 制 川 乌 单 煎 剂 ： 制 川 乌 为 毛 莨 科 多 年 生 的 草 本 植 物 乌 头 A-coNitumcarmichaeli Debx. 的块根。制川乌 400g 以 3 倍量水浸泡 30miN， 加至 10 倍量 水煎煮， 煮沸后煎 6h 倾出上清液， 过滤， 然后浓缩至相当于每毫升含 1g 制川乌的制川乌单 煎剂。实验时用蒸馏水配置成含 6％制川乌的药液。
(2) 白芍单煎剂 ： 白芍为毛茛科多年生草本植物白芍 PaeoNiaLactiflora pall. 的根。白芍 400g 以 3 倍量水浸泡 30miN， 加至 10 倍量水煎煮， 煮沸后煎 6h 倾出上清液， 过 滤， 然后浓缩至相当于每毫升含 1g 白芍的白芍单煎剂。实验时用蒸馏水配置成含 6％白芍 的药液。
(3) 制川乌白芍 1 ∶ 1 合煎剂 ： 制川乌 400g、 白芍 400g 以 3 倍量水浸泡 30miN， 加 至 10 倍量水煎煮， 煮沸后煎 6h 倾出上清液， 过滤， 然后浓缩至相当于每毫升含 1g 制川乌的 制川乌白芍 1 ∶ 1 合煎剂。实验时用蒸馏水配置成含 6％制川乌的药液。
(4) 制川乌白芍 1 ∶ 2 合煎剂 ： 制川乌 400g、 白芍 800g 以 3 倍量水浸泡 30miN， 加 至 10 倍量水煎煮， 煮沸后煎 6h 倾出上清液， 过滤， 然后浓缩至相当于每毫升含 1g 制川乌的 制川乌白芍 1 ∶ 2 合煎剂。实验时用蒸馏水配置成含 6％制川乌的药液。
(5) 制川乌白芍 2 ∶ 1 合煎剂 ： 制川乌 400g、 白芍 200g 以 3 倍量水浸泡 30miN， 加 至 10 倍量水煎煮， 煮沸后煎 6h 倾出上清液， 过滤， 然后浓缩至相当于每毫升含 1g 制川乌的 制川乌白芍 2 ∶ 1 合煎剂。实验时用蒸馏水配置成含 6％制川乌的药液。
(6) 制川乌白芍 2 ∶ 3 合煎剂 ： 制川乌 400g、 白芍 600g 以 3 倍量水浸泡 30miN， 加 至 10 倍量水煎煮， 煮沸后煎 6h 倾出上清液， 过滤， 然后浓缩至相当于每毫升含 1g 制川乌的 制川乌白芍 2 ∶ 3 合煎剂。实验时用蒸馏水配置成含 6％制川乌的药液。
以上药物为受试药物， 制川乌购于江油市恒源医药有限公司。白芍购于成都市五 块石中药饮片市场 ； 二药均由本校中药鉴定教研室鉴定。由本校中药化学教研室协助提取 制备。
(7) 吲哚美辛肠溶片 ： 阳性药物， 由重庆科瑞制药有限责任公司生产。批准文号 ： 国药准字 H50020263。生产批号 ： 041101。规格 ： 25mg/ 片 ×100 片。实验时用蒸馏水配制 成 0.125％的药液， 备用。
1.2. 动物
SD 大鼠 ： 雄性， 体重 180±20g， 由成都中医药大学实验动物研究中心提供， 合格证 号： 川实动管质 04 第 11 号， 检疫后备用。
1.3. 仪器
(1)XH-6010A γ 闪烁计数仪 ： 由西安二六二厂生产。
(2)721 分光光度计 ： 由上海分析仪器总厂生产。
1.4. 实验试剂
(1)5- 羟色胺 ： 分析纯， 美国 Sigma 公司生产。生产批号 ： 093k0739。
(2)5- 羟吲哚乙酸 ： 分析纯， 美国 Sigma 公司生产。生产批号 ： 052k1301。
(3) 去甲肾上腺素 ： 分析纯， 美国 Sigma 公司生产。生产批号 ： 130k0979。
(4) 盐酸多巴胺 ： 分析纯， 美国 Sigma 公司生产。生产批号 ： 033k1192。 3
(5)[ H] 标记前列腺素 E2(PGE2) 放免药盒 ： 由解放军总医院科技开发中心放免所 生产。
(6)NO 检测试剂盒 ： 由南京建成生物工程研究所生产。
(7) 免疫球蛋白 G(IgG) 放免药盒 ： 由北京原子高科核技术应用股份有限公司生 产。批准文号 ： 国药准字 S10940082。
(8) 白细胞介素 1β(IL-1β) 放免药盒 ： 由解放军总医院科技开发中心放免所生 产。
(9) 肿瘤坏死因子 (TNF) 放免药盒 ： 由解放军总医院科技开发中心放免所生产。
(10) 白细胞介素 -6(IL-6) 放免药盒 ： 由解放军总医院科技开发中心放免所生产。
2、 实验方法
取雄性 SD 大鼠 90 只， 将动物随机分为空白对照组 (N ＝ 10)、 模型对照组 (N ＝ 10)、 阳性对照组 (N ＝ 10)、 制川乌组 (N ＝ 10)、 制川乌白芍 1 ： 1 组 (N ＝ 10)、 制川乌白芍 1： 2 组 (N ＝ 10)、 制川乌白芍 2 ： 1 组 (N ＝ 10)、 制川乌白芍 2 ： 3 组 (N ＝ 10)、 白芍组 (N ＝ 10)。除空白组外实验第 1 天开始造模， 造模方法为 ： 将造模大鼠置于 5℃～ 7℃冷水中， 水 深 2cm， 站立其中 20miN， 同时伴以 4 级风力。每日一次， 连续 14d。在造模的第 1d， 每只大 鼠注射完全弗氏佐剂 0.1ml 于右后足跖皮内 1 次。第 19 天除空白组外分别灌胃蒸馏水、 0.125％吲哚美辛肠溶片药液、 6％的制川乌药液、 含制川乌 6％的制川乌白芍 1 ∶ 1 合煎剂、 含制川乌 6％的制川乌白芍 1 ∶ 2 合煎剂、 含制川乌 6％的制川乌白芍 2 ∶ 1 合煎剂、 含制 -1 川乌 6％的制川乌白芍 2 ∶ 3 合煎剂、 6％的白芍药液 10ml/kg.d ， 连续 7d。
2.1. 痹证关节病理试验
于实验第 26d 处死动物后取左、 右关节， 10％中性甲醛溶液固定， 24h 后用混合脱 钙液加温脱钙 48h， 常规进行石蜡包埋， 切片 (5μm)， HE 染色， 光镜下观察。 病理组织学观察 按照关节损坏程度分为以下几个等级， 实验数据资料用 SPSS 统计软件包进行统计学处理。
①正常踝关节 ： 关节滑膜、 关节软骨、 关节腔、 关节周围组织结构正常， 无充血、 水 肿、 炎细胞浸润， 无组织变性、 增生和坏死。②踝关节周围组织炎 ： 组织肿胀， 大量中性粒细胞、 淋巴细胞、 巨噬细胞浸润关节 周围组织。
③关节滑膜炎 ： 滑膜增生增厚、 水肿， 中性粒细胞、 淋巴细胞、 巨噬细胞浸入关节滑 膜腔， 或滑膜呈乳头状增生突向关节腔。
④关节软骨炎 ： 灶性软骨组织变性或软骨表面缺损。
2.2. 痹证免疫脏器试验
于实验第 26d 处死动物后取脾脏、 胸腺后称脏器湿重， 按脏器系数＝脏器湿重 / 动 物体重 ×1000‰来计算。实验数据资料用 SPSS 统计软件包进行统计学处理。
2.3. 痹证免疫脏器病理试验
于实验第 26 天处死动物后取胸腺和脾脏， 10％中性甲醛溶液固定， 常规进行石蜡 包埋， 切片 (5μm)， HE 染色， 光镜下观察。
2.4. 痹证外周炎性因子试验
于实验第 26d 处死动物后取血 ( 分抗凝血与非抗凝血两种 )， 抗凝血的抗凝剂采用 消炎痛 -EDTA， 离心后取血浆， 测 PGE2， 非抗凝血离心取血清， 测自由基 NO。PGE2 按试剂盒测 定方法进行测定， NO 检测方法采用硝酸还原酶法。实验数据资料用 SPSS 统计软件包进行 统计学处理。
2.5. 痹证类风湿因子 IgG 试验
于实验第 26d 处死动物后取血， 离心取血清， 测 IgG。IgG 按试剂盒测定方法进行 测定。实验数据资料用 SPSS 统计软件包进行统计学处理。
2.6. 痹证外周细胞因子试验
于实验第 26d 处死动物后取血， 离心取血清， 测 IL-1β、 TNF-α、 IL-6， IL-1β、 TNF-α 和 IL-6 按试剂盒测定方法进行测定。 实验数据资料用 SPSS 统计软件包进行统计学 处理。
2.7. 痹证中枢单胺类递质试验
于实验第 26d 处死动物后取出脑组织， 分离出下丘脑， 称重后用锡箔纸包裹， 立即 放入液氮中保存， 待检测时解冻， 采用荧光分光分析法测定。单胺类递质计算方法如下 ：
实验数据资料用 SPSS 统计软件包进行统计学处理。
3、 实验结果
3.1. 制川乌与白芍配伍水煎液对痹证大鼠关节病理改变的影响
模型组左、 右脚绝大部分出现踝关节周围组织炎症， 并且大部分出现关节滑膜炎 症， 并有的发展到关节软骨炎症， 与空白组比较差异显著， 有统计学意义 ； 各治疗组治疗后 均明显改善， 与模型组比较均差异显著， 有统计学意义。结果详见表 6、 7。
表 6 制川乌与白芍配伍水煎液对痹证大鼠左脚关节病理改变的影响
表 7 制川乌与白芍配伍水煎液对痹证大鼠右脚关节病理改变的影响3.2. 制川乌与白芍配伍水煎液对痹证大鼠免疫脏器的影响
模型组胸腺湿重与空白组比较有升高趋势， 各治疗组与模型组均有下降趋势， 其 中白芍组与模型组比较显著降低， 有显著性差异 ； 模型组胸腺脏器系数与空白组比较有升 高趋势， 各治疗组除草乌白芍 1 ： 2 外与模型组均有下降趋势， 其中白芍组与模型组比较显 著升高， 有显著性差异 ； 模型组脾脏湿重与空白组比较显著降低， 有显著性差异， 各治疗组 除制草乌白芍 1 ： 2 组、 草乌白芍 2 ： 3 组和白芍组外与模型组比较均有上升趋势 ； 模型组脾 脏脏器系数与空白组比较显著降低， 有显著性差异， 各治疗组除草乌白芍 2 ： 3 组外与模型 组均有升高趋势。结果详见表 8。
表 8 制川乌与白芍配伍水煎液对痹证大鼠免疫脏器的影响* ** △ 注： 与 空 白 组 组 比 较， P ≤ 0.05， P ≤ 0.01。 与 模 型 组 比 较， P ≤ 0.05， △△ P ≤ 0.01。
3.3. 制川乌与白芍配伍水煎液对痹证大鼠免疫脏器病理改变的影响
空白组胸腺皮髓质分界清楚， 皮髓质厚度正常， 不萎缩， 胸腺小体结构正常， 不增 多； 模型组胸腺 2 只皮质萎缩变薄， 4 只胸腺小体数目增加、 增大， 个别有钙盐沉积 ； 阳性组 胸腺 1 只皮质萎缩， 2 只胸腺小体增大纤维化 ； 川乌组胸腺 1 只皮质萎缩， 2 只胸腺小体增大 纤维化 ； 川乌白芍 1 ： 1 组、 川乌白芍 1 ： 2 组、 川乌白芍 2 ： 1 组、 川乌白芍 2 ： 3 组胸腺各有 1 只皮质萎缩， 1 只胸腺小体增大 ； 白芍组胸腺 1 只胸腺小体增大。空白组脾脏红白髓分界清 楚白髓不萎缩 ； 模型组脾脏 2 只白髓萎缩， 淋巴 ( 包括 T、 B 淋巴细胞 ) 数目减少 ； 阳性组脾 脏 1 只白髓萎缩， 淋巴细胞减少 ； 川乌组、 川乌白芍 1 ： 1 组、 川乌白芍 1 ： 2 组、 川乌白芍 2 ： 1 淋巴细胞减少 ； 川乌白芍 2 ： 3 组脾脏正常。 组和白芍组脾脏各有 1 只白髓萎缩，
3.4. 制川乌配伍白芍对痹证大鼠外周炎性因子的影响
模型组 PGE2 与空白组比较有下降趋势， 各治疗组治疗后与模型组比较均有升高趋 势， 但无统计学意义 ； 模型组 NO 与空白组比较显著下降， 各治疗组治疗后除制川乌白芍 1 ： 1 组外均与模型组比较有升高趋势， 其中制川乌组和白芍组与模型组比较显著升高， 有显著 性差异。结果详见表 9。
表 9 制川乌与白芍配伍水煎液对痹证大鼠外周血中炎性因子的影响* ** △ 注： 与 空 白 组 组 比 较， P ≤ 0.05， P ≤ 0.01。 与 模 型 组 比 较， P ≤ 0.05， △△ P ≤ 0.01。
3.5. 制川乌配伍白芍对痹证大鼠类风湿因子 IgG 的影响
模型组 IgG 与空白组比较显著升高， 有非常显著性差异， 各治疗组治疗后与模型 组比较均显著降低， 其中制川乌白芍 1 ： 2 组、 制川乌白芍 2 ： 3 组和白芍组与模型组比较均 有非常显著性差异， 阳性组、 制川乌组、 制川乌白芍 1 ： 1 组和制川乌白芍 2 ： 1 组与模型组比 较均有显著性差异。结果详见表 10。
表 10 制川乌与白芍配伍水煎液对痹证大鼠免疫球蛋白 G 的影响* ** △ 注： 与 空 白 组 组 比 较， P ≤ 0.05， P ≤ 0.01。 与 模 型 组 比 较， P ≤ 0.05， △△ P ≤ 0.01。
3.6. 制川乌配伍白芍对痹证大鼠外周细胞因子的影响
各治疗组治疗后 IL-1β 与模型组比较均有升高趋势， 其中制川乌白芍 2 ： 1 组与模 型组比较显著升高， 有非常显著性差异， 白芍组与模型组比较显著升高， 有显著性差异 ； 各 治疗组治疗后制川乌白芍 1 ： 2 组、 制川乌白芍 2 ： 1 组、 制川乌白芍 2 ： 3 组和白芍组外 TNF 与 模型组比较均有上升趋势， 但无统计学意义。各治疗组治疗后 IL-6 与模型组比较升高， 其 中制川乌白芍 1 ： 1 组、 制川乌白芍 2 ： 1 组和制川乌白芍 2 ： 3 组与模型组比较均显著升高， 有非常显著性差异。结果详见表 11。
表 11 制川乌与白芍配伍水煎液对痹证大鼠外周血中炎性因子的影响* ** △ 注： 与 空 白 组 组 比 较， P ≤ 0.05， P ≤ 0.01。 与 模 型 组 比 较， P ≤ 0.05， △△ P ≤ 0.01。
3.7. 制川乌配伍白芍对痹证大鼠中枢单胺类递质的影响
各治疗组治疗后除制川乌白芍 1 ： 2 组外 5-HT 与模型组比较均升高， 其中制川乌白 芍2： 3 组与模型组比较升高显著， 有非常显著性差异， 制川乌白芍 1 ： 1 组和白芍组与模型
组比较升高均显著， 有显著性差异 ； 各治疗组治疗后 5-HIAA 与模型组比较均有升高趋势， 其中制川乌白芍 1 ： 2 组与模型组比较升高显著， 有显著性差异 ； 各治疗组治疗后除白芍 1 ： 2 组外 NE 与模型组比较均升高， 其中制川乌白芍 2 ： 3 组和白芍组与模型组比较升高均显 著， 有非常显著性差异， 阳性组与模型组比较升高显著， 有显著性差异 ； 各治疗组治疗后 DA 与模型组比较均有上升趋势， 其中阳性组和制川乌白芍 2 ： 1 组与模型组比较升高均显著， 有非常显著性差异， 制川乌白芍 2 ： 3 组与模型组比较升高显著， 有显著性差异。 结果详见表 12。
表 12 制川乌与白芍配伍水煎液对痹证大鼠单胺类递质的影响
* ** △ 注： 与 空 白 组 组 比 较， P ≤ 0.05， P ≤ 0.01。 与 模 型 组 比 较， P ≤ 0.05， △△ P ≤ 0.01。
4. 结论 ： 通过痹证大鼠关节病理观察发现， 制川乌白芍各配伍组治疗后效果均优 于制川乌组， 尤其是制川乌白芍 2 ： 1 组效果最好 ； 通过痹证大鼠免疫脏器的观察， 发现制川 乌白芍 2 ： 3 组和制川乌白芍 2 ： 1 组效果最为明显。 通过对痹证大鼠免疫脏器病理改变的观 察可以看出， 各制川乌白芍配伍组均较制川乌组增强免疫作用效果好， 制川乌白芍 2 ： 3组 尤其明显。
制 川 乌 配 伍 白 芍 水 煎 液 能 升 高 痹 证 大 鼠 血 浆 PGE2、 血 清 NO、 血清细胞因子 (IL-1β、 TNF-α、 IL-6) 和痹证大鼠脑组织单胺类递质 (5-HT、 5-HIAA、 NE、 DA) 含量， 降低血 清类风湿因子 (IgG) 的含量。
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