丙型肝炎病毒抑制剂 相关申请的交叉引用
本申请要求 2008 年 2 月 12 日提交的美国临时申请序列号 61/028,011 的权益。
总的来讲，本公开涉及抗病毒化合物，具体来讲，涉及可以抑制由丙型肝炎病 毒 (HCV) 编码的 NS5A 蛋白功能的化合物、包含这类化合物的组合物和用于抑制 NS5A 蛋白功能的方法。
HCV 是主要的人类病原体，估计感染全球 1.7 亿人 -- 大约为人免疫缺陷病毒 1 型感染人数的 5 倍。 这些 HCV 感染个体当中的大部分会发展成严重的进行性肝病，包括 肝硬化和肝细胞癌。
目前，最有效的 HCV 疗法采用 α 干扰素和利巴韦林的组合，在 40％患者中产生 持续功效。 最新临床结果表明，作为单一疗法时聚乙二醇化 α 干扰素优于未修饰的 α 干 扰素。 然而，即使是使用包括聚乙二醇化 α 干扰素和利巴韦林组合的实验性治疗方案， 大部分患者也无法持续降低病毒负荷。 因此显而易见并且期盼已久的是，存在用于治疗 HCV 感染的有效治疗药的需要。
HCV 是正链 RNA 病毒。 根据对推导出的氨基酸序列和 5’ 非翻译区广泛相似 性的比较，HCV 被归类到黄病毒科 (Flaviviridae family) 单独的一个属内。 黄病毒科的所 有成员都是含有正链 RNA 基因组的有包膜病毒粒子，该基因组通过单个不间断开放可读 框的翻译，编码所有已知的病毒特异性蛋白。
在整个 HCV 基因组的核苷酸和所编码的氨基酸序列内存在相当多的异质性。 已 经鉴定出至少 6 个主要的基因型，并且披露了 50 多个亚型。 HCV 的主要基因型在全球 的分布不同，虽然进行了大量基因型对发病机制和治疗的可能作用的研究，但仍不清楚 HCV 遗传异质性的临床重要性。
单链 HCV RNA 基因组长度约为 9500 个核苷酸，具有单个开放可读框 (ORF)， 编码单个约 3000 个氨基酸的大型多聚蛋白。 在感染细胞中，该多聚蛋白在多个位点上 被细胞蛋白酶和病毒蛋白酶切割，产生结构和非结构 (NS) 蛋白。 就 HCV 而言，成熟非 结构蛋白 (NS2、 NS3、 NS4A、 NS4B、 NS5A 和 NS5B) 的形成是通过两种病毒蛋白酶实 现的。 认为第一种是金属蛋白酶，在 NS2-NS3 接点进行切割 ；第二种是包含在 NS3( 本 文中亦称 NS3 蛋白酶 )N 端区域的丝氨酸蛋白酶，它介导 NS3 下游所有的后续切割，在 NS3-NS4A 切割位点为顺式，在其余 NS4A-NS4B、NS4B-NS5A、NS5A-NS5B 位点则为 反式。 NS4A 蛋白似乎有多种功能，起 NS3 蛋白酶辅因子的作用，并可能协助 NS3 和其 它病毒复制酶组分进行膜定位。 NS3 蛋白与 NS4A 复合物的形成似乎是加工事件、在所 有位点上提高蛋白水解效率所必需的。 NS3 蛋白还显示出核苷三磷酸酶和 RNA 解旋酶活 性。 NS5B( 本文中亦称 HCV 聚合酶 ) 是参与 HCV 复制的依赖于 RNA 的 RNA 聚合酶。
需要的是用于治疗 HCV 感染患者的化合物，该化合物选择性地抑制 HCV 病毒的 复制。 具体地说，需要的是有效抑制 NS5A 蛋白功能的化合物。 HCV NS5A 蛋白参见例 如 Tan， S.-L.， Katzel， M.G.Virology 2001，284，1-12 ；及 Park， K.-J. ；Choi， S.-H， J.BiologicalChemistry 2003。
本公开的第一方面提供下式 (I) 化合物或其药学上可接受的盐 ：其中
a、 b 和 d 各自选自 CH 和 N ；条件是 a、 b 和 d 中至少一个为 N ；
n 为 1、2、3、4 或 5 ；
u 为 0、1、2 或 3 ；
A 选自苯基和含 1、2 或 3 个氮原子的六元杂芳环 ；
B 为含 1、2 或 3 个杂原子的五元芳环，所述杂原子独立选自氮、氧和硫 ；
R1 选自氢、烷基和卤代烷基 ；
R2 选自氢、烷氧基、烷基、卤代烷氧基、卤代烷基、杂环基和 -NRcRd ；
各 R3 独立选自烷氧基、烷氧基烷基、烷氧基羰基、烷基、芳基烷氧基羰基、羧 基、甲酰基、卤素、卤代烷基、羟基、羟基烷基、 -NRaRb、 (NRaRb) 烷基和 (NRaRb) 羰 基；
R4 选自氢、烷氧基烷基、烷氧基羰基、烷氧基羰基烷基、烷基、芳基烷氧基羰 基、羧基、卤代烷基、杂环基烷基、羟基烷基、(NRaRb) 羰基和三烷基甲硅烷基烷氧基烷 基；
R5 选自
其中m 为 0、1 或 2 ；
o 为 1、2 或 3 ；
s 独立为 0、1、2、3 或 4 ；
X 独立选自 O、 S、 S(O)、 SO2、 CH2、 CHR6 和 C(R6)2 ；条件是当 n 为 0 时， X 选自 CH2、 CHR6 和 C(R6)2 ；
各 R6 独立选自烷氧基、烷基、芳基、卤素、卤代烷基、羟基和 -NRaRb，其中烷 基可与邻近的碳原子任选形成稠合的 3- 至 6- 元环，其中 3- 至 6- 元环任选被一个或两个 烷基取代 ；
各 R7 独立选自氢、 R11-C(O)- 和 R11-C(S)- ；
R8 选自氢和烷基 ；
R9 和 R10 各自独立选自氢、烯基、烷氧基烷基、烷基、卤代烷基和 (NRaRb) 烷基 ；或 R9 和 R10，与它们连接的碳原子一起，形成任选含一个或两个选自 NRz、 O 和 S 的杂原子的 5 或 6 元饱和环 ；其中 Rz 选自氢和烷基 ；和
各 R11 独立选自烷氧基、烷氧基烷基、烷氧基羰基、烷氧基羰基烷基、烷基、烷 基羰基烷基、芳基、芳基烯基、芳基烷氧基、芳基烷基、芳基氧基烷基、环烷基、( 环烷 基 ) 烯基、( 环烷基 ) 烷基、环烷基氧基烷基、卤代烷基、杂环基、杂环基烯基、杂环基 烷氧基、杂环基烷基、杂环基氧基烷基、羟基烷基、-NRcRd、(NRcRd) 烯基、(NRcRd) 烷 基和 (NRcRd) 羰基。
在第一方面的第一实施方案中，本公开提供了式 (I) 化合物或其药学上可接受的 盐，其中 R5 为
在第一方面的第二实施方案中，其中 m 为 1。
在第一方面的第三实施方案中，本公开提供了式 (I) 化合物或其药学上可接受的 盐，其中 R5 为
其中 X 为 CH2。
在第一方面的第四实施方案中，本公开提供了式 (I) 化合物或其药学上可接受的 盐，其中 R5 为
其中 s 为 0。
在第一方面的第五实施方案中，本公开提供了式 (I) 化合物或其药学上可接受的 盐，其中 R5 为
其中 R7 选自氢和 R11-C(O)-。 在第六个实施方案中， R11 独立选自芳基烷基、 ( 环烷基 ) 烷基和 (NRcRd) 烷基。在第一方面的第七实施方案中，本公开提供了式 (I) 化合物或其药学上可接受的 盐，其中 u 为 0。
在第一方面的第八实施方案中，本公开提供了式 (I) 化合物或其药学上可接受的 盐，其中 R4 为氢。
在第一方面的第九实施方案中，本公开提供了式 (I) 化合物或其药学上可接受的 盐，其中 R1 为氢。
在第一方面的第十实施方案中，本公开提供了式 (I) 化合物或其药学上可接受的 盐，其中 n 为 2 ；一个 R2 为氢而其他选自杂环基和 -NRcRd。
在第二方面，本公开提供了式 (II) 化合物或其药学上可接受的盐
其中
R7 选自氢和 R11-C(O)- ；和
R11 独立选自烷氧基、烷氧基烷基、烷氧基羰基、烷氧基羰基烷基、烷基、烷基 羰基烷基、芳基、芳基烯基、芳基烷氧基、芳基烷基、芳基氧基烷基、环烷基、 ( 环烷 基 ) 烯基、( 环烷基 ) 烷基、环烷基氧基烷基、卤代烷基、杂环基、杂环基烯基、杂环基 烷氧基、杂环基烷基、杂环基氧基烷基、羟基烷基、-NRcRd、(NRcRd) 烯基、(NRcRd) 烷 基和 (NRcRd) 羰基。
在第二方面的第一实施方案中， R11 选自烷氧基、烷基、芳基烷基和 (NRcRd) 烷 基。
在第三方面，本公开提供了选自以下的化合物或其药学上可接受的盐 ：
在第四方面中，本公开提供了含式 (I) 化合物或其药学上可接受的盐和药学上可 接受的载体的组合物。 在第四方面的第一实施方案中，该组合物还包含一种或两种具有 抗 HCV 活性的其它化合物。 在第四方面的第二实施方案中，至少一种其它化合物为干 扰素或利巴韦林。 在第四方面的第三实施方案中，所述干扰素选自干扰素 α2B、聚乙二醇化干扰素 α、复合 α 干扰素 (consensus interferon)、干扰素 α2A 和成淋巴细胞干扰素 τ。
在第四方面的第四个实施方案中，本公开提供了含式 (I) 化合物或其药学上可接 受的盐、药学上可接受的载体和一种或两种具有抗 HCV 活性的其它化合物的组合物，其 中至少一种其它化合物选自白介素 2、白介素 6、白介素 12、促进产生 1 型辅助性 T 细胞 应答的化合物、干扰 RNA、反义 RNA、咪喹莫德 (Imiqimod)、利巴韦林、肌苷 5′ - 单 磷酸脱氢酶抑制剂、金刚烷胺和金刚乙胺。
在第四方面的第五个实施方案中，本公开提供了含式 (I) 化合物或其药学上可接 受的盐、药学上可接受的载体和一种或两种具有抗 HCV 活性的其它化合物的组合物，其 中至少一种其它化合物有效抑制选自以下靶标的功能以治疗 HCV 感染 ：HCV 金属蛋白 酶、 HCV 丝氨酸蛋白酶、 HCV 聚合酶、 HCV 解旋酶、 HCV NS4B 蛋白、 HCV 进入、 HCV 装配、 HCV 释放、 HCV NS5A 蛋白和 IMPDH。
在第五方面中，该公开提供了治疗患者所患 HCV 感染的方法，所述方法包括在 给予患者治疗有效量的式 (I) 化合物或其药学上可接受的盐。 在第五方面的第一实施方案 中，所述方法还包括给予式 (I) 化合物或其药学上可接受的盐之前、之后或同时给予一种 或两种具有抗 HCV 活性的其它化合物。 在第五方面的第二个实施方案中，至少一种其它 化合物为干扰素或利巴韦林。 在第五方面的第三个实施方案中，所述干扰素选自干扰素 α2B、聚乙二醇化干扰素 α、复合 α 干扰素、干扰素 α2A 和成淋巴细胞干扰素 τ。 在第五方面的第四个实施方案中，本公开提供了一种治疗患者所患 HCV 感染的 方法，所述方法包括给予患者治疗有效量的式 (I) 化合物或其药学上可接受的盐和在给 予式 (I) 化合物或其药学上可接受的盐之前、之后或同时给予一种或两种具有抗 HCV 活 性的其它化合物，其中至少一种其它化合物选自白介素 2、白介素 6、白介素 12、促进产 生 1 型辅助性 T 细胞应答的化合物、干扰 RNA、反义 RNA、咪喹莫德、利巴韦林、肌苷 5′ - 单磷酸脱氢酶抑制剂、金刚烷胺和金刚乙胺。
在第五方面的第五个实施方案中，本公开提供了一种治疗患者所患 HCV 感染的 方法，所述方法包括给予患者治疗有效量的式 (I) 化合物或其药学上可接受的盐和在给 予式 (I) 化合物或其药学上可接受的盐之前、之后或同时给予一种或两种具有抗 HCV 活 性的其它化合物，其中至少一种其它化合物有效抑制选自以下靶标的功能以治疗 HCV 感 染 ：HCV 金属蛋白酶、HCV 丝氨酸蛋白酶、HCV 聚合酶、HCV 解旋酶、HCV NS4B 蛋 白、 HCV 进入、 HCV 装配、 HCV 释放、 HCVNS5A 蛋白和 IMPDH。
本公开的其它实施方案可包含本文公开的两个或更多个实施方案和 / 或方面的 适当组合。
根据下面提供的描述，本公开的又一些实施方案和方面将是显而易见的。
本公开的化合物还以互变异构体存在 ；因此，本公开还包括所有的互变异构形 式。
本公开的描述应当解释为与化学成键的定律和原则一致。 在某些情况下，为了 在任何给定位置容纳取代基，可能必需去掉氢原子。
应当了解的是，本公开所包括的化合物为用作药物时适当稳定的化合物。
还应当了解的是，在分子特定位置上的任何取代基或变量 ( 例如 R2、 R3 和 R6
等 ) 的定义应当独立于在该分子其它位置上的定义。 例如，当 s 为 2 时，两个 R6 基团的 每一个可以相同或者不同。
本说明书中所引用的所有专利、专利申请和参考文献都通过引用全部结合到本 文中。 在不一致的情况下，以本公开 ( 包括定义 ) 为准。
本说明书中所用下列术语具有规定的含义 ：
本文所用单数形式包括复数范围，除非文中另有明确说明。
除非另有说明，否则本公开的所有芳基、环烷基和杂环基如其各自相应定义中 所述一样可被取代。 例如，芳基烷基中的芳基部分可如术语 “芳基” 定义中所述一样被 取代。
本文所用术语 “烯基” 是指含有至少一个碳 - 碳双键的 2-6 个碳原子的直链或 支链基团。
本文所用术语 “烯氧基” 是指通过氧原子与母体分子部分连接的烯基。
本文所用术语 “烯氧基羰基” 是指通过羰基与母体分子部分连接的烯氧基。
本文所用术语 “烷氧基” 是指通过氧原子与母体分子部分连接的烷基。
本文所用术语 “烷氧基烷基” 是指被 1、2 或 3 个烷氧基取代的烷基。
本文所用术语 “烷氧基烷基羰基” 是指通过羰基与母体分子部分连接的烷氧基烷基。 本文所用术语 “烷氧基羰基” 是指通过羰基与母体分子部分连接的烷氧基。
本文所用术语 “烷氧基羰基烷基” 是指被 1、2 或 3 个烷氧基羰基取代的烷基。
本文所用术语 “烷基” 是指衍生自含有 1-6 个碳原子的直链或支链饱和烃的基 团。 在本公开的化合物中，当 m 为 1 或 2 时， X 为 CHR6， R6 为烷基，每个烷基可任选 与相邻碳原子形成稠合的 3-6 元环，得到下列结构之一 ：
其中 z 为 1、2、3 或 4， w 为 0、1 或 2，且 R50 为烷基。 如果 w 为 2，则两个 R50 烷基可相同或不同。
本文所用术语 “烷基羰基” 是指通过羰基与母体分子部分连接的烷基。
本文所用术语 “烷基羰基烷基” 是指被 1、2 或 3 个烷基羰基取代的烷基。
本文所用术语 “烷基羰基氧基” 是指通过氧原子与母体分子部分连接的烷基羰 基。
本文所用术语 “烷硫基” 是指通过硫原子与母体分子部分连接的烷基。
本文所用术语 “烷基磺酰基” 是指通过磺酰基与母体分子部分连接的烷基。
本文所用术语 “芳基” 是指苯基或双环稠合环系，其中环的一个或两个为苯 基。 双环稠合环系由与 4-6 元芳族或非芳族碳环稠合的苯基组成。 本公开的芳基可以
通过基团中任何可被取代的碳原子与母体分子部分连接。 芳基的代表性实例包括但不限 于茚满基、茚基、萘基、苯基和四氢萘基。 本公开的芳基任选被 1、2、3、4 或 5 个独 立选自以下的取代基取代 ：烷氧基、烷氧基烷基、烷氧基羰基、烷基、烷基羰基、第二 芳基、芳基烷氧基、芳基烷基、芳基羰基、氰基、卤素、卤代烷氧基、卤代烷基、杂环 基、杂环基烷基、杂环基羰基、羟基、羟基烷基、硝基、 -NRxRy、 (NRxRy) 烷基、氧代 和 -P(O)OR2，其中每个 R 独立选自氢和烷基 ；其中芳基烷基和杂环基烷基中的烷基部分 是未取代的，且其中第二芳基、芳基烷基中的芳基部分、芳基羰基中的芳基部分、杂环 基及杂环基烷基和杂环基羰基中的杂环基部分还任选被 1、2 或 3 个独立选自以下的取代 基取代 ：烷氧基、烷基、氰基、卤素、卤代烷氧基、卤代烷基和硝基。
本文所用术语 “芳基烯基” 是指被 1、2 或 3 个芳基取代的烯基。
本文所用术语 “芳基烷氧基” 是指通过烷氧基与母体分子部分连接的芳基。
本文所用术语 “芳基烷氧基烷基” 是指被 1、2 或 3 个芳基烷氧基取代的烷基。
本文所用术语 “芳基烷氧基烷基羰基” 是指通过羰基与母体分子部分连接的芳 基烷氧基烷基。
本文所用术语 “芳基烷氧基羰基” 是指通过羰基与母体分子部分连接的芳基烷 氧基。
本文所用术语 “芳基烷基” 是指被 1、2 或 3 个芳基取代的烷基。 芳基烷基中 的烷基部分还任选被一个或两个另外的独立选自以下的基团取代 ：烷氧基、烷基羰基氧 基、卤素、卤代烷氧基、卤代烷基、杂环基、羟基和 -NRcRd，其中杂环基还任选被一个 或两个独立选自以下的取代基取代 ：烷氧基、烷基、未取代的芳基、未取代的芳基烷氧 基、未取代的芳基烷氧基羰基、卤素、卤代烷氧基、卤代烷基、羟基和 -NRxRy。
本文所用术语 “芳基烷基羰基” 是指通过羰基与母体分子部分连接的芳基烷 基。
本文所用术语 “芳基羰基” 是指通过羰基与母体分子部分连接的芳基。
本文所用术语 “芳氧基” 是指通过氧原子与母体分子部分连接的芳基。
本文所用术语 “芳氧基烷基” 是指被 1、2 或 3 个芳氧基取代的烷基。
本文所用术语 “芳氧基羰基” 是指通过羰基与母体分子部分连接的芳氧基。
本文所用术语 “芳基磺酰基” 是指通过磺酰基与母体分子部分连接的芳基。
本文所用术语 “端基 (cap 或 Cap)”是指位于末端含氮环的氮原子上的基团，即 式 (I) 化合物的吡咯烷环。 应当了解的是， “端基 (cap 或 Cap)” 可以指用于将基团附 加在末端含氮环或最终产物片段上的试剂，即 “Cap-51” 或 “实施例 5 中发现的 Cap-51 片段”。
本文所用术语 “羰基” 是指 -C(O)-。
本文所用术语 “羧基” 是指 -CO2H。
本文所用术语 “氰基” 是指 -CN。
本文所用术语 “环烷基” 是指具有 3-7 个碳原子和零个杂原子的饱和单环烃环 系。 环烷基的代表性实例包括但不限于环丙基、环戊基和环己基。 本公开的环烷基任选 被 1、2、3、4 或 5 个独立选自以下的取代基取代 ：烷氧基、烷基、芳基、氰基、卤素、 卤代烷氧基、卤代烷基、杂环基、羟基、羟基烷基、硝基和 -NRxRy，其中芳基和杂环基还任选被 1、2 或 3 个独立选自以下的取代基取代 ：烷氧基、烷基、氰基、卤素、卤代烷 氧基、卤代烷基、羟基和硝基。
本文所用术语 “( 环烷基 ) 烯基” 是指被 1、2 或 3 个环烷基取代的烯基。
本文所用术语 “( 环烷基 ) 烷基”是指被 1、2 或 3 个环烷基取代的烷基。 ( 环烷 基 ) 烷基中的烷基部分还任选被一个或两个独立选自以下的基团取代 ：羟基和 -NRcRd。
本文所用术语 “环烷基氧基” 是指通过氧原子与母体分子部分连接的环烷基。
本文所用术语 “环烷基氧基烷基” 是指被 1、2 或 3 个环烷基氧基取代的烷基。
本文所用术语 “环烷基磺酰基” 是指通过磺酰基与母体分子部分连接的环烷 基。
本文所用术语 “甲酰基” 是指 -CHO。
本文所用术语 “卤代” 和 “卤素” 是指 F、 Cl、 Br 或 I。
本文所用术语 “卤代烷氧基” 是指通过氧原子与母体分子部分连接的卤代烷 基。
本文所用术语 “卤代烷氧基羰基” 是指通过羰基与母体分子部分连接的卤代烷 氧基。
本文所用术语 “卤代烷基” 是指被 1、2、3 或 4 个卤原子取代的烷基。
本文所用术语 “杂环基” 是指含有 1、2、3 或 4 个独立选自氮、氧和硫杂原 子的 4、5、6 或 7 元环。 4 元环无双键，5 元环有 0-2 个双键，6 和 7 元环有 0-3 个双 键。 术语 “杂环基” 还包括二环基团，其中杂环基环与另一单环杂环基或 4-6 元芳族 或非芳族碳环稠合 ；以及桥接二环基团，例如 7- 氮杂二环 [2.2.1] 庚 -7- 基、2- 氮杂二 环 [2.2.2] 辛 -2- 基和 2- 氮杂二环 [2.2.2] 辛 -3- 基。 本公开的杂环基可通过基团中的任 何碳原子或氮原子与母体分子部分连接。 杂环基的实例包括但不限于苯并噻吩基、呋喃 基、咪唑基、二氢吲哚基、吲哚基、异噻唑基、异 唑基、吗啉基、 唑基、哌嗪基、 哌啶基、吡唑基、吡啶基、吡咯烷基、吡咯并吡啶基、吡咯基、噻唑基、噻吩基、硫代 吗啉基、7- 氮杂二环 [2.2.1] 庚 -7- 基、2- 氮杂二环 [2.2.2] 辛 -2- 基和 2- 氮杂二环 [2.2.2] 辛 -3- 基。 本公开的杂环基任选被 1、2、3、4 或 5 个独立选自以下的取代基取代 ：烷氧 基、烷氧基烷基、烷氧基羰基、烷基、烷基羰基、芳基、芳基烷基、芳基羰基、氰基、 卤素、卤代烷氧基、卤代烷基、第二杂环基、杂环基烷基、杂环基羰基、羟基、羟基烷 基、硝基、 -NRxRy、 (NRxRy) 烷基和氧代，其中芳基烷基和杂环基烷基中的烷基部分是 未取代的，且其中芳基、芳基烷基中的芳基部分、芳基羰基中的芳基部分、第二杂环基 及杂环基烷基和杂环基羰基中的杂环基部分还任选被 1、2 或 3 个独立选自以下的取代基 取代 ：烷氧基、烷基、氰基、卤素、卤代烷氧基、卤代烷基和硝基。
本文所用术语 “杂环基烯基” 是指被 1、2 或 3 个杂环基取代的烯基。 本文所用术语 “杂环基烷氧基” 是指通过烷氧基与母体分子部分连接的杂环基。 本文所用术语 “杂环基烷氧基羰基” 是指通过羰基与母体分子部分连接的杂环 基烷氧基。
本文所用术语 “杂环基烷基” 是指被 1、2 或 3 个杂环基取代的烷基。 杂环基 烷基中的烷基部分还任选被一个或两个另外的独立选自以下的基团取代 ：烷氧基、烷基
羰基氧基、芳基、卤素、卤代烷氧基、卤代烷基、羟基和 -NRcRd，其中芳基还任选被一 个或两个独立选自以下的取代基取代 ：烷氧基、烷基、未取代的芳基、未取代的芳基烷 氧基、未取代的芳基烷氧基羰基、卤素、卤代烷氧基、卤代烷基、羟基和 -NRxRy。
本文所用术语 “杂环基烷基羰基” 是指通过羰基与母体分子部分连接的杂环基 烷基。
本文所用术语 “杂环基羰基” 是指通过羰基与母体分子部分连接的杂环基。
本文所用术语 “杂环基氧基” 是指通过氧原子与母体分子部分连接的杂环基。
本文所用术语 “杂环基氧基烷基” 是指被 1、2 或 3 个杂环基氧基取代的烷基。
本文所用术语 “杂环基氧基羰基” 是指通过羰基与母体分子部分连接的杂环基 氧基。
本文所用术语 “羟基” 是指 -OH。
本文所用术语 “羟基烷基” 是指被 1、2 或 3 个羟基取代的烷基。
本文所用术语 “羟基烷基羰基” 是指通过羰基与母体分子部分连接的羟基烷 基。
本文所用术语 “硝基” 是指 -NO2。 本文所用术语 “-NRaRb” 是指通过氮原子与母体分子部分连接的 Ra 和 Rb 两个 基团。 Ra 和 Rb 独立选自氢、烯基和烷基。
本文所用术语 “(NRaRb) 烷基” 是指被 1、2 或 3 个 -NRaRb 基团取代的烷基。
本文所用术语 “(NRaRb) 羰基” 是指通过羰基与母体分子部分连接的 -NRaRb 基 团。
本文所用术语 “-NRcRd” 是指通过氮原子与母体分子部分连接的 Rc 和 Rd 两 个基团。 Rc 和 Rd 独立选自氢、烯氧基羰基、烷氧基烷基羰基、烷氧基羰基、烷基、 烷基羰基、烷基磺酰基、芳基、芳基烷氧基羰基、芳基烷基、芳基烷基羰基、芳基羰 基、芳氧基羰基、芳基磺酰基、环烷基、环烷基磺酰基、甲酰基、卤代烷氧基羰基、杂 环基、杂环基烷氧基羰基、杂环基烷基、杂环基烷基羰基、杂环基羰基、杂环基氧基羰 基、羟基烷基羰基、 (NReRf) 烷基、 (NReRf) 烷基羰基、 (NReRf) 羰基、 (NReRf) 磺酰 基、-C(NCN)OR’和 -C(NCN)NRxRy，其中 R’选自烷基和未取代苯基，且其中芳基烷 基、芳基烷基羰基、杂环基烷基和杂环基烷基羰基中的烷基部分还任选被一个 -NReRf 基 团取代 ；且其中芳基，芳基烷氧基羰基、芳基烷基、芳基烷基羰基、芳基羰基、芳氧基 羰基和芳基磺酰基中的芳基部分，杂环基，和杂环基烷氧基羰基、杂环基烷基、杂环基 烷基羰基、杂环基羰基和杂环基氧基羰基中的杂环基部分还任选被 1、2 或 3 个独立选自 以下的取代基取代 ：烷氧基、烷基、氰基、卤素、卤代烷氧基、卤代烷基和硝基。
本文所用术语 “(NRcRd) 烯基” 是指被 1、2 或 3 个 -NRcRd 基团取代的烯基。
本文所用术语 “(NRcRd) 烷基” 是指被 1、2 或 3 个 -NRcRd 基团取代的烷基。 (NRcRd) 烷基中的烷基部分还任选被一个或两个另外选自以下的基团取代 ：烷氧基、烷 氧基烷基羰基、烷氧基羰基、烷基硫基、芳基烷氧基烷基羰基、羧基、杂环基、杂环基 羰基、羟基和 (NReRf) 羰基 ；其中杂环基还任选被 1、2、3、4 或 5 个独立选自以下的取 代基取代 ：烷氧基、烷基、氰基、卤素、卤代烷氧基、卤代烷基和硝基。
本文所用术语 “(NRcRd) 羰基” 是指通过羰基与母体分子部分连接的 -NRcRd 基
团。 本文所用术语 “-NReRf” 是指通过氮原子与母体分子部分连接的 Re 和 Rf 两个 基团。 Re 和 Rf 独立选自氢、烷基、未取代的芳基、未取代的芳基烷基、未取代的环烷 基、未取代的 ( 环烷基 ) 烷基、未取代的杂环基、未取代的杂环基烷基、(NRxRy) 烷基和 (NRxRy) 羰基。
本文所用术语 “(NReRf) 烷基” 是指被 1、2 或 3 个 -NReRf 基团取代的烷基。
本 文 所 用 术 语 “(NReRf) 烷 基 羰 基” 是 指 通 过 羰 基 与 母 体 分 子 部 分 连 接 的 (NReRf) 烷基。
本文所用术语 “(NReRf) 羰基” 是指通过羰基与母体分子部分连接的 -NReRf 基 团。
本 文 所 用 术 语 “(NReRf) 磺 酰 基” 是 指 通 过 磺 酰 基 与 母 体 分 子 部 分 连 接 的 -NReRf 基团。
本文所用术语 “-NRxRy” 是指通过氮原子与母体分子部分连接的 Rx 和 Ry 两个 基团。 Rx 和 Ry 独立选自氢、烷氧基羰基、烷基、烷基羰基、未取代的芳基、未取代的芳 基烷氧基羰基、未取代的芳基烷基、未取代的环烷基、未取代的杂环基和 (NRx’ Ry’ ) 羰基，其中 Rx’ 和 Ry’ 独立选自氢和烷基。
本文所用术语 “(NRxRy) 烷基” 是指被 1、2 或 3 个 -NRxRy 基团取代的烷基。 本文所用术语 “(NRxRy) 羰基” 是指通过羰基与母体分子部分连接的 -NRxRy 基团。 本文所用术语 “氧代” 是指＝ O。
本文所用术语 “磺酰基” 是指 -SO2-。
本文所用术语 “三烷基甲硅烷基” 是指 -SiR3，其中 R 为烷基。 各 R 基团可相 同或不同。
本文所用术语 “三烷基甲硅烷基烷基” 是指被 1、2 或 3 个三烷基甲硅烷基取代 的烷基。
本文所用术语 “三烷基甲硅烷基烷氧基” 是指通过氧原子与母体分子部分连接 的三烷基甲硅烷基烷基。
本文所用术语 “三烷基甲硅烷基烷氧基烷基” 是指被 1、2 或 3 个三烷基甲硅烷 基烷氧基取代的烷基。
在本公开的化合物中存在不对称中心。 这些中心用符号 “R”或 “S”标注，这 取决于手性碳原子周围取代基的构型。 应当了解的是，本公开包括具有抑制 NS5A 的能 力的所有立体化学异构体或其混合物。 化合物的各个立体异构体可通过以下方法制备 ： 由含有手性中心的市售原料合成 ；或者通过制备对映体产物的混合物后，通过例如转化 成非对映体的混合物的分离后，再通过分离或重结晶、色谱技术 ；或者从手性色谱柱上 直接分离出对映体。 特定立体化学结构的起始化合物是市售的，或者可以通过本领域已 知技术制备和拆分。
本公开的某些化合物还可以不同的稳定构象形式存在，这类构象形式是可分离 的。 由不对称单键周围阻碍旋转 ( 例如因位阻或环张力 ) 所致的扭转不对称性，可以使 不同的构象异构体分离开来。 本公开包括这些化合物及其混合物的每一种构象异构体。
术语 “本公开的化合物”和等同表述是指包括式 (I) 化合物和药学上可接受的对 映体、非对映体及其盐。 同样，提及中间体时是指包括本文允许的中间体的盐。
本公开的化合物可作为药学上可接受的盐存在。 本文所用术语 “药学上可接受 的盐” 表示本公开的化合物的盐或两性离子形式，它们是水溶性或油溶性的，或是可分 散的，在合理的医学判断范围内，适用于与患者组织接触而无过度毒性、刺激性、变态 反应或者与合理的利益 / 风险比相对称的其它问题或并发症，并有效用于其既定用途。 可在化合物最终的分离和纯化期间制备其盐，或者可单独使合适的氮原子与合适的酸反 应来制备化合物的盐。 代表性的酸加成盐包括乙酸盐、己二酸盐、海藻酸盐、柠檬酸 盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、硫酸氢盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐 ； 二葡糖酸盐、二氢溴酸盐、二盐酸盐、二氢碘酸盐、甘油磷酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、 己酸盐、甲酸盐、富马酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、2- 羟基乙磺酸盐、乳酸 盐、马来酸盐、1，3，5- 三甲苯磺酸盐、甲磺酸盐、亚萘基磺酸盐、烟酸盐、2- 萘磺酸 盐、草酸盐、棕榈酸盐 (palmoate)、果胶酸盐、过硫酸盐、3- 苯基丙酸盐、苦味酸盐、 新戊酸盐、丙酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、三氯乙酸盐、三氟乙酸盐、磷酸盐、谷氨酸 盐、碳酸氢盐、对甲苯磺酸盐和十一烷酸盐。 可用于形成药学上可接受的加成盐的酸的 实例包括无机酸及有机酸，无机酸例如盐酸、氢溴酸、硫酸和磷酸，有机酸例如草酸、 马来酸、琥珀酸和柠檬酸。
可以在化合物最终分离和纯化期间通过使羧基与合适的碱 ( 例如金属阳离子的 氢氧化物、碳酸盐或碳酸氢盐 ) 反应或者与氨或有机伯胺、仲胺或叔胺反应来制备碱加 成盐。 药学上可接受的盐的阳离子 ( 包括锂、钠、钾、钙、镁和铝 ) 以及无毒的季铵 阳离子，例如铵、四甲基铵、四乙基铵、甲胺、二甲胺、三甲胺、三乙胺、二乙胺、乙 胺、三丁胺、吡啶、 N， N- 二甲基苯胺、 N- 甲基哌啶、 N- 甲基吗啉、二环己胺、普鲁 卡因、二苄胺、 N， N- 二苄基苯乙胺和 N， N’ - 二苄基乙二胺。 用于形成碱加成盐的 其它代表性的有机胺包括乙二胺、乙醇胺、二乙醇胺、哌啶和哌嗪。
当可用于治疗时，治疗有效量的式 (I) 化合物及其药学上可接受的盐可作为未加 工的化学药品给予，还可作为药物组合物的活性成分提供。 因此，本公开还提供药物组 合物，该药物组合物包括治疗有效量的式 (I) 化合物或其药学上可接受的盐和一种或多种 药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。 本文所用术语 “治疗有效量” 是指足以显示出 有意义的患者益处 ( 例如病毒负荷减少 ) 的各活性组分的总量。 当使用单独的活性成分单 独给药时，该术语仅指该成分。 当组合应用时，该术语则是指不论组合、依次或同时给 药时，都引起治疗效果的活性成分的组合量。 式 (I) 化合物及其药学上可接受的盐如上所 述。 从与制剂其它成分相容以及对其接受者无害的意义上来讲，载体、稀释剂或赋形剂 必需是可相容的。 根据本公开的另一方面，还提供用于制备药物制剂的方法，该方法包 括将式 (I) 化合物或其药学上可接受的盐与一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂或赋 形剂混匀。 本文所用术语 “药学上可接受的” 是指这样的化合物、原料、组合物和 / 或 剂型，它们在合理医学判断的范围内，适用于与患者组织接触而无过度毒性、刺激性、 变态反应或与合理的利益 / 风险比相对称的其它问题和并发症，并有效用于既定用途。
药物制剂可呈单位剂型，每个单位剂量含有预定量的活性成分。 本公开的化合 物的剂量水平介于约 0.01 毫克 / 千克 ( “mg/kg”) 体重 / 天和约 250 毫克 / 千克体重 /天之间，优选介于约 0.05mg/kg 体重 / 天和约 100mg/kg 体重 / 天之间，常常以单一疗法 用于预防或治疗 HCV 介导的疾病。 通常可按每天约 1 至约 5 次或者作为连续输注给予本 公开的药物组合物。 这类给药法可用作长期或短期疗法。 与载体材料混合以制备单一剂 型的活性成分的量将根据待治疗的疾病、疾病的严重程度、给药时间、给药途径、所用 化合物的排泄速率、治疗时间和患者年龄、性别、体重和情况而改变。 优选的单位剂型 是含有本文上述活性成分的日剂量或分剂量或其适宜分数的单位剂型。 可用显然低于化 合物最佳剂量的小剂量开始治疗。 此后，以较小的增量来加大剂量直到在这种情况下达 到最佳效果。 一般而言，最理想地给予化合物的浓度水平是通常可在抗病毒方面提供有 效结果而又不致于引起任何有害或有毒的副作用。
当本公开的组合物包含本公开的化合物和一种或多种其它治疗药或预防药的组 合时，化合物和另外的药物的剂量水平通常在单一疗法方案中，占正常给药剂量的约 10-150％，更优选占正常给药剂量的约 10％至 80％。
药物制剂适于通过任何合适的途径给药，例如通过口服 ( 包括口腔或舌下 )、直 肠、鼻、局部 ( 包括口腔、舌下或经皮 )、阴道或胃肠外 ( 包括皮下、皮内、肌内、关节 内、滑膜内、胸骨内、鞘内、病灶内、静脉内或者真皮下注射或输注 ) 途径。 可按药剂 学领域的任何已知方法制备这类制剂，例如通过将活性成分与载体或赋形剂混合。 优选 口服给药或注射给药。
适于口服给药的药物制剂按独立的单位提供，例如胶囊剂或片剂 ；散剂或颗粒 剂 ；水性或非水性液体中的溶液剂或混悬剂 ；可食用泡沫制剂或起泡制剂 (whip) ；或水 包油乳液剂或油包水乳液剂。
举例来说，对于以片剂或胶囊剂形式的口服给药，活性药物组分可与药学上可 接受的口服无毒惰性载体 ( 例如乙醇、甘油、水等 ) 相混合。 通过将化合物粉碎成合适 的微细尺寸，并与被同样粉碎的药用载体 ( 例如淀粉或甘露醇等可食用的糖类 ) 混匀来制 备散剂。 还可存在矫味剂、防腐剂、分散剂和着色剂。
通过制备如上所述的粉状混合物，并装填到成形的明胶壳内，来制备胶囊剂。 在装填操作之前，可将助流剂和润滑剂 ( 例如胶态二氧化硅、滑石粉、硬脂酸镁、硬脂 酸钙或固态聚乙二醇 ) 加到粉状混合物中。 还可加入当服下胶囊剂时加入改进药物可利 用性的崩解剂或增溶剂 ( 例如琼脂、碳酸钙或碳酸钠 )。
此外，需要或必需时，也可将合适的粘合剂、润滑剂、崩解剂和着色剂掺到混 合物中。 合适的粘合剂包括淀粉、明胶、天然糖 ( 例如葡萄糖或 β- 乳糖 )、玉米甜味 剂、天然和合成树胶 ( 例如阿拉伯树胶、西黄蓍胶或藻酸钠 )、羧甲基纤维素、聚乙二醇 等。 用于这些剂型的润滑剂包括油酸钠、氯化钠等。 崩解剂包括但不限于淀粉、甲基纤 维素、琼脂、皂土、黄原胶等。 例如，通过制成粉状混合物，制粒或预压片，加入润滑 剂和崩解剂，压制成片，从而制成片剂。 将适当粉碎的化合物与如上所述的稀释剂或基 料、任选与粘合剂 ( 例如羧甲基纤维素、藻酸盐、明胶或聚乙烯吡咯烷酮 )、溶解阻滞剂 ( 例如石蜡 )、吸收加速剂 ( 例如季盐 ) 和 / 或吸收剂 ( 例如皂土、高岭土或磷酸二钙 ) 混 合，来制备粉状混合物。 可用粘合剂 ( 例如糖浆、淀粉浆、阿拉伯胶浆 (acadiamucilage) 或者纤维素材料或聚合材料溶液 ) 润湿后加压过筛，将粉状混合物制粒。 制粒的一个替 代方法是，可将粉状混合物通过压片机，结果是将成形不佳的团块再击碎制成颗粒。 可通过加入硬脂酸、硬脂酸盐、滑石粉或矿物油使颗粒润滑以防止粘到压片机的冲模上。 然后将经润滑的混合物压制成片。 本公开的化合物还可与自由流动的惰性载体混合，无 需通过制粒或预压片步骤便可直接压制成片。 可提供透明或不透明的由虫胶密封衣、糖 衣或聚合材料衣和蜡质抛光衣 (polishcoating of wax) 组成的保护性包衣材料。 可将染料 加到这些包衣材料中以区分不同的单位剂量。
口服液体制剂例如溶液剂、糖浆剂和酏剂可以剂量单位形式制备，从而给定量 含有预定量的化合物。 糖浆剂可通过将化合物溶于适当调味的水溶液中来制备，而酏剂 可通过使用无毒溶媒来制备。 还可加入增溶剂和乳化剂 ( 例如乙氧基化异硬脂醇和聚氧 乙烯山梨醇醚 )、防腐剂、矫味添加剂 ( 例如薄荷油或天然甜味剂或糖精或其它人造甜味 剂 ) 等。
如果适当的话，可将用于口服给药的剂量单位制剂微胶囊化。 也可将制剂制成 延时或持续释放，例如通过包衣或包埋在聚合物、蜡等微粒材料中。
式 (I) 化合物及其药学上可接受的盐还可以脂质体递药系统给予，例如小单层脂 质体、大单层脂质体和多层脂质体。 脂质体可由多种磷脂 ( 例如胆固醇、十八烷基胺或 磷脂酰胆碱 ) 构成。
式 (I) 化合物及其药学上可接受的盐也可通过使用单克隆抗体作为单独的载体 ( 化合物分子与之偶联 ) 递药。 化合物也可与作为可靶向药物载体的可溶性聚合物偶联。 这类聚合物可包括聚乙烯吡咯烷酮、吡喃共聚物、聚羟丙基甲基丙烯酰胺苯酚、聚羟乙 基天冬酰胺苯酚或被棕榈酰残基取代的聚氧化乙烯聚赖氨酸。 此外，化合物可与一类 生物可降解的聚合物偶联，用于达到药物的控释，这类聚合物例如聚乳酸、聚 ε- 己内 酯、聚羟基丁酸、聚原酸酯、聚缩醛、聚二氢吡喃、聚氰基丙烯酸酯和水凝胶的交联共 聚物或两亲性嵌段共聚物。
适于经皮给药的药物制剂可作为离散的贴剂 (discrete patch) 以在长时间内保 持与接受者表皮密切接触。 例如，活性成分可由通过离子导入贴剂递药，通常可参见 Pharmaceutical Research 1986，3(6)，318。
适于局部给药的药物制剂可制成软膏剂、乳膏剂、混悬剂、洗剂、散剂、溶液 剂、糊剂、凝胶剂、喷雾剂、气雾剂或油制剂。
适于直肠给药的药物制剂可作为栓剂或作为灌肠剂提供。
适于经鼻给药的药物制剂 ( 其中载体为固体 ) 包括粒径为例如 20-500 微米范围 的粗粉剂，通过以鼻吸方式给药，即通过鼻通道从接近鼻子的粗粉剂容器中快速吸入。 其中载体为液体、适于作为鼻腔喷雾剂或滴鼻剂给药的合适制剂包括活性成分的水性溶 液剂或油性溶液剂。
适于通过吸入给药的药物制剂包括微细粒子粉剂 (dust) 或细雾剂 (mist)，可用 不同类型计量的剂量压缩气溶胶、雾化吸入器或吹入器制备。
适于阴道给药的药物制剂可以阴道栓、阴道塞、乳膏剂、凝胶剂、糊剂、泡沫 剂或喷雾剂提供。
适于胃肠外给药的药物制剂包括水性和非水性无菌注射溶液剂及水性和非水性 无菌混悬剂，可含有抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂和使制剂与待接受者血液等渗的溶质 ； 水性和非水性无菌混悬剂可包括悬浮剂和增稠剂。 制剂可以单位剂量或多剂量容器提供，例如密封的安瓿和小瓶，并可保存在冷冻干燥 ( 冻干 ) 条件下，只需在临用前加入无 菌液体载体，例如注射用水。 临用时配制的注射溶液剂和混悬剂可由无菌粉针剂、颗粒 剂和片剂制备。
应当了解的是，除了以上特别提到的成分以外，制剂还包括与所述制剂类型有 关的本领域常用的其它成分，例如适于口服给药的这类制剂可包括矫味剂。
术语 “患者” 包括人和其它哺乳动物。
术语 “治疗” 是指 ：(i) 在易患疾病、障碍和 / 或病症但尚未确诊患有疾病、障 碍和 / 或病症的患者中防止疾病、障碍或病症 ；(ii) 抑制疾病、障碍或病症，即阻止其发 展 ；和 (iii) 减轻疾病、障碍或病症，即使疾病、障碍和 / 或病症消退。
本公开的化合物还可与环孢菌素 ( 例如环孢菌素 A) 一起给药。 研究表明，环 孢菌素 A 在临床试验中具有抗 HCV 活性 (Hepatology 2003，38，1282 ；Biochem.Biophys. Res.Commun.2004，313，42 ；J.Gastroenterol.2003，38，567)。
下表 1 中例举了可与本公开的化合物一起给药的一些示例性化合物的实例。 在 联合疗法中，本公开的化合物可与其它抗 HCV 的活性化合物共同或分开给药，或者将化 合物掺到组合物中。
表1
本公开的化合物还可用作实验室试剂。 化合物可在为设计病毒复制实验、验证 动物实验系统和结构生物学研究提供研究工具方面发挥作用，以进一步加深对 HCV 疾病 机制的认识。 此外，本公开的化合物可用于通过例如竞争性抑制来建立或确定与其它抗 病毒化合物的结合位点。
本公开的化合物还可用来处理或防止病毒污染材料，从而降低接触这类材料的 实验室人员或医务人员或患者感染病毒的风险，所述材料例如血液、组织、手术器械和 衣物、实验室仪器和衣物及采血或输血设备和材料。
当通过合成方法制备，或者通过代谢过程 ( 包括发生在人或动物身体内 ( 体内 )) 或者体外发生过程产生时，本公开往往包括具有式 (I) 的化合物。
用于本申请的缩写，包括特别在下列示例性流程和实施例中的缩写为本领域 技术人员所熟知。 所使用的一些缩写如下 ：t- 丁基表示叔丁基 ；HATU 表示六氟磷酸
O-(7- 氮杂苯并三唑 -1- 基 )-N， N， N’， N’ - 四甲基脲Boc 或 BOC 表示叔丁氧羰基 ；NBS 表示 N- 溴丁二酰亚胺 ；DMSO 表示二甲亚砜 ；MeOH 表示甲醇 ；TFA 表示 三氟乙酸 ；THF 表示四氢呋喃 ；DMAP 表示 4- 二甲氨基吡啶 ；EDCI 表示 1-(3- 二甲氨 基丙基 )-3- 乙基碳二亚胺盐酸盐 ；RT 表示室温或保留时间 ( 文中将作出规定 ) ；tR 表示 保留时间 ；DEA 表示二乙胺 ；NH4OAc 表示乙酸铵 ；t-Bu3P 表示三 - 叔丁基膦 ；HMDS 表示六甲基二硅氮烷 ；DMF 表示 N， N- 二甲基甲酰胺 ；EtOAC、 EtOAc 或 EA 表示乙 酸乙酯 ；Et3N 或 TEA 表示三乙胺 ；MeI 表示甲基碘 ；DIBAL 表示二异丁基氢化铝 ；TBDMSCl 表示叔丁基二甲基甲硅烷基氯 ；iPrOH 或 i-PrOH 表示异丙醇 ；Bn 表示苄基 ； Hex 表示己烷 ；和 PPh3 表示三苯基膦。
结合下面通过举例说明本公开的化合物制备方法的合成流程，可更好地理解本 公开的化合物和方法。 原料可获自商业来源，或者通过本领域普通技术人员已知的大量 记载的文献方法制备。 对于本领域普通技术人员显而易见的是，可通过替换下文所示合 成法中合适的反应物和试剂，来制备上文中定义的化合物。 对于本领域技术人员显而易 见的是，可按不同顺序进行选择性的保护和脱保护步骤以及步骤本身的顺序，这取决于 成功完成下列合成的变量性质。 所述变量如上定义，除非下文中另有说明。
流程 1
在碱如 Hunig’s 碱存在下，加热氯化物 1 与 NHR1Rq 可得到溴化物 2，其可在标 准 Suzuki-Miayura 偶合条件下与硼酸酯 3 偶合。 应注意的是 3 的硼酸类似物可代替硼酸 酯使用。 在 Rf ＝叔丁基的情况中，4 的吡咯烷基团脱保护可通过用强酸如 HCl 或三氟乙 酸处理完成。 在标准酰化条件下可完成 5 的酰化。 在此可使用偶合剂如 HATU 和胺碱如 Hunig’ s 碱。 或者，5 可与异氰酸酯或氨基甲酰氯反应，得到式 6 化合物，其中 R11 为 胺。 吡咯烷 5 还可与氯甲酸酯反应，得到 R11 为醇的 6。
流程 2
通过用强酸如 HCl 或三氟乙酸处理，其中 R7 为 -CH(NHBoc)Rg 的化合物 6 可被 转化成 7。 在偶合条件如 HATU/Hunig’ s 碱下可使胺 7 酰化，得到酰胺 8a。 用合适的 氯甲酸酯、异氰酸酯、氨基甲酰氯或磺酰氯处理胺 7，分别得到化合物 8b、8c 或 8d。
流程 3
按照流程 1 和流程 2 通过使用适当的类似物 1 如氯化物 11-19、25( 流程 4) 和 28( 流程 4) 制备化合物 9 和 10。 反应物 11-16 可由商业来源获得，而反应物 17-19 可根 据文献方案制备 ( 对于 17 ：AustralianJournal of Chemistry 1984，37，1065 ；对于 18-19 ： Journal of HeterocyclicChemistry 1972，9，1151 以及文中引用的文献 )。
流程 4
可根据流程 4 制备反应物 25 和 28。 吡啶 20 与烷氧基亚甲基丙二酸酯如 2-( 甲 氧基亚甲基 ) 丙二酸二甲酯缩合，可得到吡啶 21。 通过在各种溶剂如二苯醚中加热， 吡啶 21 可被环化成 22。 在碱如 NaOH 存在下可通过在高温下加热可完成 22 的后续皂 化反应和脱羧反应。 通过用反应物如 POCl3 处理完成 24 向 25 的转化。 酯 26 用甲脒 (formimidamide) 处理，并同时加热，可得到 27，其可通过用反应物如 POCl3 处理而后转 化成 28。
应注意反应物 11-19、25 和 28 用 R1RqNH 处理，如流程 1 中对反应物 1 所述， 可能导致在 C* 处选择性氨解。 在氨解产生产物的立构异构体混合物的情况中，所需产物 可通过使用本领域一般技术人员已知的各种标准技术分离。流程 5
流程 5 描述了在流程 1 中使用的硼酸酯的制备。 重要中间体 30 由酮 - 酰胺 29 或 酮 - 酯 32 制备 ：在加热或微波条件下与乙酸铵加热。 通过在标准酰胺形成条件下与合适 的氨基酸缩合，酮 - 酰胺 29 可由 28 制备。 通过用亲核试剂如叠氮化物处理随后还原，或 通过用邻苯二甲酰亚胺或二甲酰氨基钠处理 (Synthesis 1990，122) 随后脱保护，溴化物 31 可产生 28。 在碱如 Hunig’ s 碱存在下通过与合适的 N- 保护的氨基酸反应也可将溴 化物 31 转化成 32。 33 用溴 离子源如溴或 NBS 溴化形成 31。 根据 Journal of Organic Chemistry 1995，60，7508 中所述方法或其变体在钯催化剂下通过用二硼酸二频哪醇酯处 理可将溴化物 30 转化成硼酸酯 3。
流程 6
取代的苯基甘氨酸衍生物可由以下举例说明的许多方法制备。 苯基甘氨酸叔丁 酯可在酸性介质中用合适的醛和还原剂如氰基硼氢化钠还原性烷化 ( 途径 A)。 叔丁基酯 的水解可用强酸如 HCl 或三氟乙酸完成。 或者，苯基甘氨酸可用烷基卤化物如乙基碘和 碱如碳酸氢钠或碳酸钾烷化 ( 途径 B)。 途径 C 表明苯基甘氨酸的还原烷基化 ( 如途径 A 中 )，随后在还原剂和酸存在下用备选的醛如甲醛第二次还原烷基化。途径 D 表明由相应 的杏仁酸类似物合成取代的苯基甘氨酸。 仲醇转化为适当离去基团可用对甲苯磺酰氯完 成。 用合适的胺置换甲苯磺酸根基团随后还原脱去苄基酯，可得到取代的苯基甘氨酸衍 生物。 在途径 E 中通过用对映体纯的手性助剂如但不限于 (+)-1- 苯基乙醇、 (-)-1- 苯
基乙醇、Evan’s唑烷酮或对映体纯的泛内酯酯化拆分消旋的取代苯基甘氨酸衍生物。经色谱 ( 硅胶、 HPLC、结晶化等 ) 随后通过除去手性助剂得到对映体纯的苯基甘氨酸衍 生物，完成非对映异构体的分离。 途径 H 表明合成顺序，其与途径 E 交叉，其中上述手 性助剂在胺加入前装入。 或者，芳基乙酸的酯可用溴 离子源如溴、N- 溴代琥珀酰亚胺 或 CBr4 溴化。 在叔胺碱如三乙胺或 Hunig’s 碱存在下得到的苄型溴化物可用各种单 - 或 二 - 取代的胺代替。 在低温下用氢氧化锂或高温下用 6N HCl 处理使甲基酯水解，得到取 代的苯基甘氨酸衍生物。 途径 G 中表明了其他方法。 在钯源 (0) 如双 ( 三丁基膦 ) 合钯和碱如磷酸钾存在下甘氨酸类似物可用各种芳基卤化物衍生。 得到的酯通过用碱或酸处 理来水解。 应理解的是本领域存在其他熟知的制备苯基甘氨酸衍生物的方法并可被修正 以得到该说明书中所需化合物。 还应理解的是最终苯基甘氨酸衍生物可经制备型 HPLC 使用例如手性柱被纯化成对映体纯度高于 98％ ee。 对于本领域普通技术人员显而易见的 是所述用于合成芳族甘氨酸衍生物的方法同样适用于 C-2 处含非芳族基团的甘氨酸衍生 物的合成。
流程 7
在本公开的另一实施方案中，酰化甘氨酸衍生物可如下所述制备。 在碱如三乙 胺存在下甘氨酸衍生物 ( 其中羧酸被保护成易脱除的酯 ) 可用酰氯酰化，得到相应的酰胺 ( 途径 A)。 途径 B 表明用合适的氯甲酸酯酰化原料甘氨酸衍生物而途径 C 表明与合适的 异氰酸酯或氨基甲酰氯反应。 途径 A-C 中所示的三个中间体各自可通过本领域技术人员 已知的方法脱保护 ( 即，用强碱如 HCl 或三氟乙酸处理叔丁基酯 )。
流程 8 氨基取代的苯基乙酸可通过用过量的胺处理氯甲基苯基乙酸来制备。化合物分析条件
在配有 Waters Micromass ZQ MS 系统的 Shimadzu LC 系统上进行纯度分析和低分 辨质谱分析。 还应注意保留时间可在各仪器间略有变化。 测定保留时间 (RT) 的 LC 条 件为 ：
条件 1
柱＝ Phenomenex-Luna 3.0X50mm S10
开始％ B ＝ 0
最终％ B ＝ 100
梯度时间＝ 2 分钟 停止时间＝ 3 分钟 流速＝ 4ml/ 分钟 波长＝ 220nm 溶剂 A ＝含 0.1％ TFA 的 10％甲醇 /90％ H2O 溶剂 B ＝含 0.1％ TFA 的 90％甲醇 /10％ H2O 条件 2 柱＝ Phenomenex-Luna 4.6X50mm S10 开始％ B ＝ 0 最终％ B ＝ 100 梯度时间＝ 2 分钟 停止时间＝ 3 分钟 流速＝ 5ml/ 分钟 波长＝ 220nm 溶剂 A ＝含 0.1％ TFA 的 10％甲醇 /90％ H2O 溶剂 B ＝含 0.1％ TFA 的 90％甲醇 /10％ H2O 溶液 条件 3 柱＝ HPLC XTERRA C183.0x50mm S7 开始％ B ＝ 0 最终％ B ＝ 100 梯度时间＝ 3 分钟 停止时间＝ 4 分钟 流速＝ 4ml/ 分钟 波长＝ 220nm 溶剂 A ＝含 0.1％ TFA 的 10％甲醇 /90％ H2O 溶液溶剂 B ＝含 0.1％ TFA 的 90％甲醇 /10％ H2O 溶液 条件 M1 柱 ：Luna 4.6X50mm S10 开始％ B ＝ 0 最终％ B ＝ 100 梯度时间＝ 3 分钟 停止时间＝ 4 分钟 流速＝ 4ml/ 分钟 溶剂 A ：＝ 95％ H2O ∶ 5％ CH3CN，10mm 乙酸铵 溶剂 B ：＝ 5％ H2O ∶ 95％ CH3CN ；10mm 乙酸铵 通用端基 (Cap) 的合成 Cap-1
将 10 ％ Pd/C(2.0g) 的 甲 醇 (10ml) 悬 浮 液 加 到 (R)-2- 苯 基 甘 氨 酸 (10g， 66.2mmol)、甲醛 (33ml 37％ ( 重量 ) 的水溶液 )、1N HCl(30ml) 和甲醇 (30ml) 的混合 过滤后，真空物中，并暴露在 H2(60psi) 中达 3 小时。 使反应混合物经硅藻土浓缩滤液。 所得粗产物用异丙醇重结晶，得到 Cap-1 的 HCl 盐 (4.0g，白色针状物 )。 旋光性 ：-117.1° [c ＝ 9.95mg/ml， H2O 中 ；λ ＝ 589nm]。 1H MR(DMSO-d6， δ ＝ 2.5ppm，500MHz) ：δ7.43-7.34(m，5H)，4.14(s，1H)，2.43(s，6H) ；LC( 条 件 I) ： RT ＝ 0.25 ；LC/MS ：对于 C10H14NO2 分析计算值 ：180.10 ；实测值 ：180.17[M+H]+ ； HRMS ：对于 C10H14NO2 分析计算值 ：180.1025 ；实测值 ：180.1017[M+H]+。
Cap-2
在几分钟内，将 NaBH3CN(6.22g，94mmol) 分批加到冷却 ( 冰 / 水 ) 的 (R)-2- 苯 基甘氨酸 (6.02g，39.8mmol) 和 MeOH(100ml) 的混合物中，并搅拌 5 分钟。 在 10 分 钟内滴加乙醛 (10ml)，在相同的冷却温度下继续搅拌 45 分钟后，在环境温度搅拌～ 6.5 小时。 反应混合物再用冰水浴冷却，用水 (3ml) 处理后，在～ 45 分钟内滴加浓 HCl 猝灭，直到混合物的 pH 为～ 1.5-2.0。 移开冷却浴后，在加入浓 HCl 以保持混合物 约 pH 1.5-2.0 的同时继续搅拌。 将反应混合物搅拌过夜，过滤除去白色悬浮物后，真 空浓缩滤液。 粗产物用乙醇重结晶，分两批得到 Cap-2 的 HCl 盐，为光亮的白色固体 ( 第 1 批 ：4.16g ； 第 2 批 ：2.19g)。 1HNMR(DMSO-d6， δ ＝ 2.5ppm，400MHz) ：
10.44(1.00， br s，1H)，7.66(m，2H)，7.51(m，3H)，5.30(s，1H)，3.15(br m，2H)， 2.98(br m，2H)，1.20( 表观 br s，6H)。 第 1 批 ：[α]25-102.21° (c ＝ 0.357，H2O) ；第 2 批 ：[α]25-99.7° (c ＝ 0.357， H2O)。 LC( 条件 I) ：RT ＝ 0.43 分钟 ；LC/MS ：对于 [M+H]+C12H18NO2 分析计算值 ：208.13 ；实测值 ：208.26。
Cap-3
将乙醛 (5.0ml，89.1mmol) 和 10％ Pd/C(720mg) 在甲醇 /H2O(4ml/1ml) 中的悬 浮液依次加到冷却 ( ～ 15℃ ) 的 (R)-2- 苯基甘氨酸 (3.096g，20.48mmol)、1N HCl(30ml) 和甲醇 (40ml) 的混合物中。 移开冷却浴后，将反应混合物在 H2 气囊下搅拌 17 小时。 再加入乙醛 (10ml，178.2mmol) 后，在 H2 气氛下继续搅拌 24 小时 [ 注意 ：在整个反应中
按需要补充 H2 供应 ]。 反应混合物经硅藻土过滤后，真空浓缩滤液。 所得粗产物用异丙醇重结晶，得到 (R)-2-( 乙氨基 )-2- 苯基乙酸的 HCl 盐 (2.846g，光亮的白 色固体 )。 1H NMR(DMSO-d6， δ ＝ 2.5ppm，400MHz) ：δ14.15(br s，1H)，9.55(br s，2H)，7.55-7.48(m，5H)，2.88(br m，1H)，2.73(br m，1H)，1.20( 表观 t，J ＝ 7.2， 3H)。 LC( 条 件 I) ：RT ＝ 0.39 分 钟 ；均 一 性 指 数 (homogeneity index) ＞ 95 ％ ；LC/ MS ：对于 [M+H]+C10H14NO2 分析计算值 ：180.10 ；实测值 ：180.18。
将 10％ Pd/C(536mg) 的甲醇 /H2O(3ml/1ml) 悬浮液加到 (R)-2-( 乙氨基 )-2- 苯 基乙酸 /HCl(1.492g，6.918mmol)、甲醛 (20ml，37 重量％的水溶液 )、1N HCl(20ml) 和甲醇 (23ml) 的混合物中。 将反应混合物在 H2 气囊下搅拌～ 72 小时，需要时补充 H2 供应。 反应混合物经硅藻土 过滤后，真空浓缩滤液。 所得粗产物用异丙醇 (50ml) 重结晶，得到 Cap-3 的 HCl 盐 (985mg，白色固体 )。 1H NMR(DMSO-d6，δ ＝ 2.5ppm，400MHz) ：δ10.48(br s，1H)，7.59-7.51(m，5H)，5.26(s，1H)，3.08( 表 观 br s，2H)，2.65(br s，3H)，1.24(br m，3H)。 LC( 条件 I) ：RT ＝ 0.39 分钟 ；均一性 指数＞ 95％ ；LC/MS ：对于 [M+H]+C11H16NO2 分析计算值 ：194.12 ；实测值 ：194.18 ； HRMS ：对于 [M+H]+C11H16NO2 分析计算值 ：194.1180 ；实测值 ：194.1181。
Cap-4
在 6 分钟内，将 ClCO2Me(3.2ml，41.4mmol) 滴加到冷却 ( 冰 / 水 ) 的 (R)-2- 氨 基 -2- 苯基乙酸叔丁酯 /HCl(9.877g，40.52mmol) 和二异丙基乙胺 (14.2ml，81.52mmol) 与 THF(410ml) 的半溶液 (semi-solution) 中，并在同样的温度下搅拌 5.5 小时。 真空
除去挥发性成分后，使残余物在水 (100ml) 和乙酸乙酯 (200ml) 之间分配。 有机层 用 1N HCl(25ml) 和 饱 和 NaHCO3 溶 液 (30ml) 洗 涤， 干 燥 (MgSO4)， 过 滤 后 真 空 浓 缩。 所得无色油状物用己烷研磨，过滤后用己烷 (100ml) 洗涤，得到 (R)-2-( 甲氧羰 基氨基 )-2- 苯基乙酸叔丁酯 (7.7g，白色固体 )。 1H NMR(DMSO-d6， δ ＝ 2.5ppm， 400MHz) ：7.98(d， J ＝ 8.0，1H)，7.37-7.29(m，5H)，5.09(d， J ＝ 8，1H)，3.56(s， 3H)，1.33(s，9H)。 LC( 条件 I) ：RT ＝ 1.53 分钟 ；均一性指数～ 90 ％ ；LC/MS ：对 于 [M+Na]+C14H19NNaO4 分析计算值 ：288.12 ；实测值 ：288.15。
在 7 分钟内，将 TFA(16ml) 滴加到上述产物的冷却 ( 冰 / 水 ) 的 CH2Cl2(160ml) 溶液中，移开冷却浴后，搅拌反应混合物 20 小时。 由于脱保护反应仍未完成，因此再 加入 TFA(1.0ml)，并再继续搅拌 2 小时。 真空除去挥发性成分后，所得油性残余物用 乙醚 (15ml) 和己烷 (12ml) 处理，得到沉淀物。 沉淀物经过滤后，用乙醚 / 己烷 ( 比 率 ～ 1 ∶ 3 ；30ml) 洗 涤 后， 真 空 干 燥， 得 到 Cap-4(5.57g， 绒 毛 状 白 色 固 体 )。 旋 光 性 ：-176.9 ° [c ＝ 3.7mg/ml， H2O 中 ；λ ＝ 589nm]。 1H NMR(DMSO-d6， δ ＝ 2.5ppm，400MHz) ：δ12.84(br s，1H)，7.96(d， J ＝ 8.3，1H)，7.41-7.29(m，5H)， 5.14(d， J ＝ 8.3，1H)，3.55(s，3H)。 LC( 条 件 I) ：RT ＝ 1.01 分 钟 ；均 一 性 指 数 ＞ 95 ％ ；LC/MS ：对 于 [M+H]+C10H12NO4 分 析 计 算 值 ：210.08 ；实 测 值 ：210.17 ； HRMS ：对于 [M+H]+C10H12NO4 分析计算值 ：210.0766 ；实测值 ：210.0756。
Cap-5
将 (R)-2- 苯基甘氨酸 (1.0g，6.62mmol)、1，4- 二溴丁烷 (1.57g，7.27mmol) 和 Na2CO3(2.10g，19.8mmol) 在乙醇 (40ml) 中的混合物在 100℃下加热 21 小时。 使反应混 合物冷却至环境温度，过滤，并真空浓缩滤液。将残余物溶于乙醇，用 1N HCl 酸化至 pH 3-4 后，真空除去挥发性成分。 所得粗产物用反相 HPLC 纯化 ( 水 / 甲醇 /TFA)，得到 Cap-5 的 TFA 盐 (1.0g，半粘性白色泡沫状物 )。 1H NMR(DMSO-d6，δ ＝ 2.5，500MHz) δ10.68(br s，1H)，7.51(m，5H)，5.23(s，1H)，3.34( 表观 br s，2H)，3.05( 表观 br s， 2H)，1.95( 表观 br s，4H) ；RT ＝ 0.30 分钟 ( 条件 I) ；均一性指数＞ 98％ ；LC/MS ： 对于 [M+H]+C12H16NO2 分析计算值 ：206.12 ；实测值 ：206.25。
Cap-6
采用 Cap-5 的制备方法，由 (R)-2- 苯基甘氨酸和 1- 溴 -2-(2- 溴乙氧基 ) 乙烷合 成 Cap-6 的 TFA 盐。 1H NMR(DMSO-d6， δ ＝ 2.5，500MHz)δ12.20(br s，1H)， 7.50(m，5H)，4.92(s，1H)，3.78( 表观 br s，4H)，3.08( 表观 br s，2H)，2.81( 表观 br s，2H) ；RT ＝ 0.32 分钟 ( 条件 I) ；＞ 98％ ；LC/MS ：对于 [M+H]+C12H16NO3 分析计算 值 ：222.11 ；实测值 ：222.20 ；HRMS ：对于 [M+H]+C12H16NO3 分析计算值 ：222.1130 ； 实测值 ：222.1121。
Cap-7
Cap-7a ：对映体 -1
Cap-7b ：对映体 -2
将对甲苯磺酰氯 (8.65g，45.4mmol) 的 CH2Cl2(200ml) 溶液滴加到冷却 (-5 ℃ ) 的 (S)-2- 羟 基 -2- 苯 基 乙 酸 苄 酯 (10.0g，41.3mmol)、 三 乙 胺 (5.75ml，41.3mmol) 和 4- 二甲氨基吡啶 (0.504g，4.13mmol) 的 CH2Cl2(200ml) 溶液中，同时保持温度在 -5℃和
0℃之间。 将反应物在 0℃下搅拌 9 小时后，在冰箱 (-25℃ ) 内保存 14 小时。 将其融化 到环境温度后，用水 (200ml)、1N HCl(100ml) 和盐水 (100ml) 洗涤，干燥 (MgSO4)， 过滤后真空浓缩，得到 2- 苯基 -2-( 甲苯磺酰氧基 ) 乙酸苄酯 (16.5g，粘性油状物，静 置时固化 )。 未检查该产物的手性完整性 (chiralintegrity)，该产物无需进一步纯化便 被用于下一步骤。 1HNMR(DMSO-d6， δ ＝ 2.5，500MHz)δ7.78(d， J ＝ 8.6，2H)， 7.43-7.29(m，10H)，7.20(m，2H)，6.12(s，1H)，5.16(d， J ＝ 12.5，1H)，5.10(d， J ＝ 12.5，1H)，2.39(s，3H)。 RT ＝ 3.00( 条件 III) ；均一性指数＞ 90 ％ ；LC/MS ：对 于 [M+H]+C22H20NaO5S 分析计算值 ：419.09 ；实测值 ：419.04。
将 2- 苯 基 -2-( 甲 苯 磺 酰 氧 基 ) 乙 酸 苄 酯 (6.0g，15.1mmol)、1- 甲 基 哌 嗪 (3.36ml，30.3mmol) 和 N， N- 二 异 丙 基 乙 胺 (13.2ml，75.8mmol) 的 THF(75ml) 溶 液 在 65℃下加热 7 小时。 使反应物冷却至环境温度后，真空除去挥发性成分。 使残余物 在乙酸乙酯和水之间分配，有机层用水和盐水洗涤，干燥 (MgSO4)，过滤后真空浓缩。 所得粗产物用快速色谱法纯化 ( 硅胶，乙酸乙酯 )，得到 2-(4- 甲基哌嗪 -1- 基 )-2- 苯 基乙酸苄酯 (4.56g，粘性橙褐色油状物 )。 手性 HPLC 分析 (Chiralcel OD-H) 表明该样 品为对映体混合物，比率 38.2 ∶ 58.7。 对映体的分离如下进行 ：将产物溶于 120ml 乙 醇 / 庚烷 (1 ∶ 1)，并注入 (5ml/ 注射 ) 手性 HPLC 柱 (Chiracel OJ，5cm ID x 50cm L， 20μm)，在 220nm 下监测，用 85 ∶ 15 庚烷 / 乙醇以 75ml/ 分钟洗脱。 回收得到对映 体 -1(1.474g) 和 对 映 体 -2(2.2149g)， 为 粘 性 油 状 物。 1H NMR(CDCl3， δ ＝ 7.26， 500MHz)7.44-7.40(m，2H)，7.33-7.24(m，6H)，7.21-7.16(m，2H)，5.13(d， J ＝ 12.5，1H)，5.08(d，J ＝ 12.5，1H)，4.02(s，1H)，2.65-2.38( 表观 br s，8H)，2.25(s， 3H)。 RT ＝ 2.10( 条件 III) ；均一性指数＞ 98 ％ ；LC/MS ：对于 [M+H]+C20H25N2O2 分 析计算值 ：325.19 ；实测值 ：325.20。将 2-(4- 甲基哌嗪 -1- 基 )-2- 苯基乙酸苄酯 (1.0g，3.1mmol) 对映体任一种的 甲醇 (10ml) 溶液加到 10％ Pd/C(120mg) 的甲醇 (5.0ml) 悬浮液中。 在严密监视下，将 反应混合物暴露于氢气囊小于 50 分钟。 反应一经完成，便经硅藻土 过滤催化 剂后，真空浓缩滤液，得到被苯基乙酸污染的 Cap-7(867.6mg ；质量超出理论产率，黄 褐色泡沫状物 )。 产物无需纯化便被用于下一步骤。 1H NMR(DMSO-d6， δ ＝ 2.5， 500MHz)δ7.44-7.37(m，2H)，7.37-7.24(m，3H)，3.92(s，1H)，2.63-2.48( 表 观 bs， 2H)，2.48-2.32(m，6H)，2.19(s，3H) ；RT ＝ 0.31( 条 件 II) ；均 一 性 指 数 ＞ 90 ％ ； LC/MS ：对于 [M+H]+C13H19N2O2 分析计算值 ：235.14 ；实测值 ：235.15 ；HRMS ：对于 [M+H]+C13H19N2O2 分析计算值 ：235.1447 ；实测值 ：235.1440。
按照 Cap-7 合成法，采用 SN2 置换步骤的合适胺类 ( 即对于 Cap-8 为 4- 羟基哌 啶，对于 Cap-9 为 (S)-3- 氟吡咯烷 ) 和如下所述的用于分离相应立体异构体中间体的改 进条件，进行 Cap-8 和 Cap-9 的合成。
Cap-8
8a ：对映体 -1
8b ：对映体 -2
中间体 2-(4- 羟基哌啶 -1- 基 )-2- 苯基乙酸苄酯的对映体分离采用以下条件进 行 ：将化合物 (500mg) 溶于乙醇 / 庚烷 (5ml/45ml)。 将所得溶液注入 (5ml/ 注射 ) 手 性 HPLC 柱 (Chiracel OJ，2cm ID x 25cm L，10μm)，用 80 ∶ 20 庚烷 / 乙醇按 10ml/ 分钟洗脱，在 220nm 下监测，得到 186.3mg 对映体 -1 和 209.1mg 对映体 -2，为粘性 浅黄色油状物。 这些苄酯按照 Cap-7 制备法氢解，得到 Cap-8 ：1H NMR(DMSO-d6， δ ＝ 2.5，500MHz)7.40(d， J ＝ 7，2H)，7.28-7.20(m，3H)，3.78(s 1H)，3.46(m， 1H)，2.93(m，1H)，2.62(m，1H)，2.20(m，2H)，1.70(m，2H)，1.42(m，2H)。 RT ＝ 0.28( 条件 II) ；均一性指数＞ 98 ％ ；LC/MS ：对于 [M+H]+C13H18NO3 分析计算值 ： 236.13 ；实测值 ：236.07 ；HRMS ：对于 [M+H]+C13H18NO3 计算值 ：236.1287 ；实测值 ： 236.1283。
Cap-9
9a ：对映体 -19b ：对映体 -2
中 间 体 2-((S)-3- 氟 吡 咯 烷 -1- 基 )-2- 苯 基 乙 酸 苄 酯 的 非 对 映 体 分 离 采 用 以 下 条 件 进 行 ： 酯 (220mg) 用 手 性 HPLC 柱 (Chiracel OJ-H，0.46cmID x 25cm L， 5μm) 进行分离，在压力 10 巴、流速 70ml/ 分钟和 35 ℃温度下，用 95 ％ CO2/5 ％甲 醇 ( 含有 0.1 ％ TFA) 洗脱。 相应立体异构体的 HPLC 流出物经浓缩后，将残余物溶于 CH2Cl2(20ml)，用含水介质 (10ml 水 +1ml 饱和 NaHCO3 溶液 ) 洗涤。 有机相经干燥 (MgSO4)，过滤后真空浓缩，得到 92.5mg 流分 -1 和 59.6mg 流分 -2。 按照 Cap-7 制备 法，使这些苄酯氢解，得到 Cap-9a 和 Cap-9b。 Cap-9a( 非对映体 -1 ；样品是用反相 HPLC 纯化得到的 TFA 盐，用 H2O/ 甲醇 /TFA 溶剂 ) ：1H NMR(DMSO-d6， δ ＝ 2.5， 400MHz)7.55-7.48(m，5H)，5.38(d of m，J ＝ 53.7，1H)，5.09(br s，1H)，3.84-2.82(br m，4H)，2.31-2.09(m，2H)。 RT ＝ 0.42( 条件 I) ；均一性指数＞ 95 ％ ；LC/MS ：对 于 [M+H]+C12H15FNO2 分析计算值 ：224.11 ；实测值 ：224.14 ；Cap-9b( 非对映体 -2) ： 1 HNMR(DMSO-d6， δ ＝ 2.5，400MHz)7.43-7.21(m，5H)，5.19(m 的 d， J ＝ 55.9， 1H)，3.97(s，1H)，2.95-2.43(m，4H)，2.19-1.78(m，2H)。 RT ＝ 0.44( 条件 I) ；LC/ MS ：对于 [M+H]+C12H15FNO2 分析计算值 ：224.11 ；实测值 ：224.14。
Cap-10
向 D- 脯氨酸 (2.0g，17mmol) 和甲醛 (2.0ml 37 ％ ( 重量 ) 的 H2O 溶液 ) 的甲 醇 (15ml) 溶液中加入 10 ％ Pd/C(500mg) 的甲醇 (5ml) 悬浮液。 将混合物在氢气囊下 过滤后，真空浓缩，得到 Cap-10(2.15g，搅拌 23 小时。 反应混合物经硅藻土灰白色固体 )。 1H NMR(DMSO-d6， δ ＝ 2.5，500MHz)3.42(m，1H)，3.37(dd， J ＝ 9.4，6.1，1H)，2.85-2.78(m，1H)，2.66(s，3H)，2.21-2.13(m，1H)，1.93-1.84(m， 2H)，1.75-1.66(m，1H)。 RT ＝ 0.28( 条件 II) ；均一性指数＞ 98 ％ ；LC/MS ：对于 [M+H]+C6H12NO2 分析计算值 ：130.09 ；实测值 ：129.96。
Cap-11
将 (2S，4R)-4- 氟吡咯烷 -2- 甲酸 (0.50g，3.8mmol)、甲醛 (0.5ml37％ ( 重量 ) 的 H2O 溶液 )、12N HCl(0.25ml) 和 10％ Pd/C(50mg) 与甲醇 (20ml) 的混合物在氢气囊下 过滤后，真空浓缩滤液。 残余物用异丙醇搅拌 19 小时。 反应混合物经硅藻土重结晶，得到 Cap-11 的 HCl 盐 (337.7mg，白色固体 )。 1H NMR(DMSO-d6，δ ＝ 2.5， 500MHz)5.39(d m， J ＝ 53.7，1H)，4.30(m，1H)，3.90(ddd， J ＝ 31.5，13.5，4.5， 1H)，3.33(dd，J ＝ 25.6，13.4，1H)，2.85(s，3H)，2.60-2.51(m，1H)，2.39-2.26(m，1H)。 RT ＝ 0.28( 条件 II) ；均一性指数＞ 98％；LC/MS ：对于 [M+H]+C6H11FNO2 分析 计算值 ：148.08 ；实测值 ：148.06。
Cap-12( 与 cap52 相同 )
将 L- 丙氨酸 (2.0g，22.5mmol) 溶于 10％碳酸钠水溶液 (50ml)，再往其中加入 氯甲酸甲酯 (4.0ml) 的 THF(50ml) 溶液。 将反应混合物在环境条件下搅拌 4.5 小时后， 真空浓缩。 将所得白色固体溶于水后，用 1N HCl 酸化至 pH ～ 2-3。 所得溶液用乙酸乙 酯 (3x100ml) 萃取，将合并的有机相干燥 (Na2SO4)，过滤后真空浓缩，得到无色油状物 (2.58g)。 该产物 500mg 用反相 HPLC 纯化 (H2O/ 甲醇 /TFA)，得到 150mgCap-12，为 无色油状物。 1H NMR(DMSO-d6，δ ＝ 2.5，500MHz)7.44(d，J ＝ 7.3，0.8H)，7.10(br s，0.2H)，3.97(m，1H)，3.53(s，3H)，1.25(d， J ＝ 7.3，3H)。
Cap-13
将 L- 丙 氨 酸 (2.5g，28mmol)、 甲 醛 (8.4g，37 ％ ( 重 量 ))、1N HCl(30ml) 和 10 ％ Pd/C(500mg) 与甲醇 (30ml) 的混合物在氢气氛 (50psi) 下搅拌 5 小时。 反应
混合物经硅藻土过滤后，真空浓缩滤液，得到 Cap-13 的 HCl 盐 (4.4g ；质量超过理论收率，油状物，真空下静置时固化 )。 产物无需进一步纯化便可使用。 1H NMR(DMSO-d6， δ ＝ 2.5，500MHz)δ12.1(br s，1H)，4.06(q， J ＝ 7.4，1H)， 2.76(s，6H)，1.46(d， J ＝ 7.3，3H)。
Cap-14
步 骤 1 ：在 0 ℃ 下， 将 (R)-(-)-D- 苯 基 甘 氨 酸 叔 丁 酯 (3.00g，12.3mmol)、 NaBH3CN(0.773g，12.3mmol)、 KOH(0.690g，12.3mmol) 和 乙 酸 (0.352ml，6.15mmol) 的混合物在甲醇中搅拌。 在 5 分钟内，向该混合物中滴加戊二醛 (2.23ml，12.3mmol)。 在使反应混合物升温至环境温度的同时进行搅拌，在相同温度下继续搅拌 16 小时。 随 后除去溶剂，残余物用 10 ％ NaOH 水溶液和乙酸乙酯进行分配。 有机相经分离后， 干燥 (MgSO4)，过滤后浓缩至干，得到透明油状物。 该产物用反相制备型 HPLC 纯 化 (Primesphere C-18，30x100mm ；CH3CN-H2O-0.1 ％ TFA)， 得 到 中 间 体 酯 (2.70g，
56％ )，为透明油状物。 1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.53-7.44(m，3H)，7.40-7.37(m， 2H)，3.87(d，J ＝ 10.9Hz，1H)，3.59(d，J ＝ 10.9Hz，1H)，2.99(t，J ＝ 11.2Hz，1H)， 2.59(t， J ＝ 11.4Hz，1H)，2.07-2.02(m，2H)，1.82(d， J ＝ 1.82Hz，3H)，1.40(s， 9H)。 LC/MS ：对于 C17H25NO2 分析计算值 ：275 ；实测值 ：276(M+H)+。
步骤 2 ：向中间体酯 (1.12g，2.88mmol) 与二氯甲烷 (10ml) 的搅拌溶液中加 入 TFA(3ml)。 将反应混合物在环境温度下搅拌 4 小时后，浓缩至干，得到浅黄色油状 物。油状物用反相制备型 HPLC 纯化 (Primesphere C-18，30x100mm ；CH3CN-H2O-0.1％ TFA)。 合并合适的流分后，真空浓缩至干。 然后将残余物溶于最少量的甲醇中，并加到 MCX LP 萃取柱体 (2x6g) 上。 柱体用甲醇 (40ml) 冲洗后，所需化合物用 2M 氨的甲醇溶 液 (50ml) 洗脱。 合并含有产物的流分后，浓缩并将残余物溶于水。 使该溶液冻干后， 得到标题化合物 (0.492g，78％ )，为浅黄色固体。 1H NMR(DMSO-d6)δ7.50(s，5H)， 5.13(s，1H)，3.09(brs，2H)，2.92-2.89(m，2H)，1.74(m，4H)，1.48(br s，2H)。 LC/ MS ：对于 C13H17NO2 分析计算值 ：219 ；实测值 ：220(M+H)+。
Cap-15
步骤 1 ：2- 溴 -2- 苯基乙酸 ((S)-1- 苯基乙基 ) 酯 ：向 α- 溴苯基乙酸 (10.75g， 0.050mol)、 (S)-(-)-1- 苯 基 乙 醇 (7.94g，0.065mol) 和 DMAP(0.61g，5.0mmol) 与 无 水二氯甲烷 (100ml) 的混合物中一次性加入固体 EDCI(12.46g，0.065mol)。 将所得溶 液在氩气氛、室温下搅拌 18 小时后，用乙酸乙酯稀释，洗涤 (H2O x 2，盐水 )，干燥 (Na2SO4)，过滤后浓缩，得到浅黄色油状物。 该油状物进行快速色谱 (SiO2/ 己烷 - 乙 酸乙酯，4 ∶ 1)，得到标题化合物 (11.64g，73 ％ )，为白色固体。 1HNMR(400MHz， CDCl3)δ7.53-7.17(m，10H)，5.95(q， J ＝ 6.6Hz，0.5H)，5.94(q， J ＝ 6.6Hz，0.5H)， 5.41(s，0.5H)，5.39(s，0.5H)，1.58(d， J ＝ 6.6Hz，1.5H)，1.51(d， J ＝ 6.6Hz， 1.5H)。
步 骤 2 ：(R)-2-(4- 羟 基 -4- 甲 基 哌 啶 -1- 基 )-2- 苯 基 乙 酸 ((S)-1- 苯 基 乙 基 ) 酯 ：向 2- 溴 -2- 苯基乙酸 ((S)-1- 苯基乙基 ) 酯 (0.464g，1.45mmol) 的 THF(8ml) 溶液中依次加入三乙胺 (0.61ml，4.35mmol) 和四丁基碘化铵 (0.215g，0.58mmol)。 将 反应混合物在室温下搅拌 5 分钟后，加入 4- 甲基 -4- 羟基哌啶 (0.251g，2.18mmol) 的 THF(2ml) 溶液。 将混合物在室温下搅拌 1 小时后，加热至 55-60 ℃ ( 油浴温度 ) 达 4 小时。 然后经冷却的反应混合物用乙酸乙酯 (30ml) 稀释，洗涤 (H2O x 2，盐水 )，干 燥 (MgSO4)，过滤后浓缩。 残余物用硅胶色谱法纯化 (0-60％乙酸乙酯 - 己烷 )，先得 到标题化合物的 (S， R)- 异构体 (0.306g，60 ％ )，为白色固体，然后得到相应的 (S，
S)- 异 构 体 (0.120g，23 ％ )， 也 为 白 色 固 体。 (S， R)- 异 构 体 ：1H NMR(CD3OD) δ7.51-7.45(m，2H)，7.41-7.25(m，8H)，5.85(q， J ＝ 6.6Hz，1H)，4.05(s，1H)，2.56-2.45(m，2H)，2.41-2.29(m，2H)，1.71-1.49(m，4H)，1.38(d，J ＝ 6.6Hz，3H)， 1.18(s，3H)。 LCMS ：对于 C22H27NO3 分析计算值 ：353 ；实测值 ：354(M+H)+。 (S， S)- 异构体 ：1HNMR(CD3OD)δ7.41-7.30(m，5H)，7.20-7.14(m，3H)，7.06-7.00(m， 2H)，5.85(q， J ＝ 6.6Hz，1H)，4.06(s，1H)，2.70-2.60(m，1H)，2.51(dt， J ＝ 6.6， 3.3Hz，1H)，2.44-2.31(m，2H)，1.75-1.65(m，1H)，1.65-1.54(m，3H)，1.50(d， J ＝ 6.8Hz，3H)，1.20(s，3H)。 LCMS ：对 于 C22H27NO3 分 析 计 算 值 ：353 ；实 测 值 ： 354(M+H)+。
步骤 3 ：(R)-2-(4- 羟基 -4- 甲基哌啶 -1- 基 )-2- 苯基乙酸 ：向 (R)-2-(4- 羟 基 -4- 甲 基 哌 啶 -1- 基 )-2- 苯 基 乙 酸 ((S)-1- 苯 基 乙 基 ) 酯 (0.185g，0.52mmol) 的 二氯甲烷 (3ml) 溶液中加入三氟乙酸 (1ml)，将混合物在室温下搅拌 2 小时。 随后真 空除去挥发性物质，残余物用反相制备型 HPLC 纯化 (Primesphere C-18，20x100mm ； CH3CN-H2O-0.1％ TFA)，得到标题化合物 ( 为 TFA 盐 )(0.128g，98％ )，浅蓝色固体。 LCMS ：对于 C14H19NO3 分析计算值 ：249 ；实测值 ：250(M+H)+。
Cap-16
步 骤 1 ：2-(2- 氟 苯 基 ) 乙 酸 ((S)-1- 苯 基 乙 基 ) 酯 ： 将 2- 氟 苯 基 乙 酸 (5.45g，35.4mmol)、 (S)-1- 苯基乙醇 (5.62g，46.0mmol)、 EDCI(8.82g，46.0mmol) 和 DMAP(0.561g，4.60mmol) 与 CH2Cl2(100ml) 的混合物在室温下搅拌 12 小时。 将溶剂浓 缩后，残余物用 H2O- 乙酸乙酯进行分配。 分离各相，水层用乙酸乙酯反萃取 ( 两次 )。 合并的有机相经洗涤 (H2O，盐水 )，干燥 (Na2SO4)，过滤后真空浓缩。 残余物用硅胶色 谱法纯化 (Biotage/0-20％乙酸乙酯 - 己烷 )，得到标题化合物 (8.38g，92％，无色油状 物 )。 1H NMR(400MHz，CD3OD)δ7.32-7.23(m，7H)，7.10-7.04(m，2)，5.85(q，J ＝ 6.5Hz，1H)，3.71(s，2H)，1.48(d， J ＝ 6.5Hz，3H)。
步骤 2 ：(R)-2-(2- 氟苯基 )-2-( 哌啶 -1- 基 ) 乙酸 ((S)-1- 苯基乙基 ) 酯 ：在 0℃下，向 2-(2- 氟苯基 ) 乙酸 ((S)-1- 苯基乙基 ) 酯 (5.00g，19.4mmol) 的 THF(1200ml) 溶液中加入 DBU(6.19g，40.7mmol)，在使溶液升温至室温的同时搅拌 30 分钟。 然后 使溶液冷却至 -78 ℃后，加入 CBr4(13.5g，40.7mmol) 的 THF(100ml) 溶液，使混合物 升温至 -10℃，并在该温度下搅拌 2 小时。 反应混合物用饱和 NH4Cl 水溶液猝灭后，分 离各层。 水层用乙酸乙酯反萃取 ( 两次 )，合并的有机相经洗涤 (H2O，盐水 )，干燥 (Na2SO4)，过滤后真空浓缩。 向残余物中加入哌啶 (5.73ml，58.1mmol)，将溶液在室温 下搅拌 24 小时。 然后真空浓缩挥发性物质，残余物用硅胶色谱法纯化 (Biotage/0-30％ 乙醚 - 己烷 )，得到纯的非对映体混合物 ( 根据 1H NMR 判断，其比率为 2 ∶ 1)(2.07g， 31％，黄色油状物 ) 以及未反应的原料 (2.53g，51％ )。 非对映体混合物进一步经色谱
法纯化 (Biotage/0-10％乙醚 - 甲苯 )，得到标题化合物 (0.737g，11％，无色油状物 )。 1 H NMR(400MHz， CD3OD)δ7.52(ddd， J ＝ 9.4，7.6，1.8Hz，1H)，7.33-7.40(m， 1)，7.23-7.23(m，4H)，7.02-7.23(m，4H)，5.86(q， J ＝ 6.6Hz，1H)，4.45(s，1H)， 2.39-2.45(m，4H)，1.52-1.58(m，4H)，1.40-1.42(m，1H)，1.38(d，J ＝ 6.6Hz，3H)。 LCMS ：对于 C21H24FNO2 分析计算值 ：341 ；实测值 ：342(M+H)+。
步 骤 3 ：(R)-2-(2- 氟 苯 基 )-2-( 哌 啶 -1- 基 ) 乙 酸 ： 将 (R)-2-(2- 氟 苯 基 )-2-( 哌啶 -1- 基 ) 乙酸 ((S)-1- 苯基乙基 ) 酯 (0.737g，2.16mmol) 和 20％ Pd(OH)2/ C(0.070g) 与乙醇 (30ml) 的混合物在室温和大气压 (H2 气囊 ) 下氢化 2 小时。 溶液然后用 氩气吹洗，经硅藻土 过滤后，真空浓缩。 这可得到标题化合物 (0.503g，98％， 无 色 固 体 )。 1H NMR(400MHz， CD3OD)δ7.65(ddd， J ＝ 9.1，7.6，1.5Hz，1H)， 7.47-7.53(m，1H)，7.21-7.30(m，2H)，3.07-3.13(m，4H)，1.84(br s，4H)，1.62(br s，2H)。 LCMS ：对于 C13H16FNO2 分析计算值 ：237 ；实测值 ：238(M+H)+。
Cap-17
步骤 1 ：(R)-2-(4- 羟基 -4- 苯基哌啶 -1- 基 )-2- 苯基乙酸 ((S)-1- 苯基乙基 ) 酯 ：向 2- 溴 -2- 苯基乙酸 ((S)-1- 苯基乙基 ) 酯 (1.50g，4.70mmol) 的 THF(25ml) 溶液 中依次加入三乙胺 (1.31ml，9.42mmol) 和四丁基碘化铵 (0.347g，0.94mmol)。 将反应混 合物在室温下搅拌 5 分钟后，加入 4- 苯基 -4- 羟基哌啶 (1.00g，5.64mmol) 的 THF(5ml) 溶液。 将混合物搅拌 16 小时后，用乙酸乙酯 (100ml) 稀释，洗涤 (H2O x 2，盐水 )， 干燥 (MgSO4)，过滤后浓缩。 残余物用硅胶柱纯化 (0-60 ％乙酸乙酯 - 己烷 )，得到 约 2 ∶ 1 非对映体的混合物，用 1H NMR 判断。 这些异构体用超临界流体色谱法进行 分离 (Chiralcel OJ-H，30x250mm ；20％乙醇，在 CO2、35℃下 )，先得到标题化合物的 (R)- 异构体 (0.534g，27％，黄色油状物 )，再得到相应的 (S)- 异构体 (0.271g，14％， 同样为黄色油状物 )。 (S， R)- 异构体 ：1H NMR(400MHz， CD3OD)δ7.55-7.47(m， 4H)，7.44-7.25(m，10H)，7.25-7.17(m，1H)，5.88(q， J ＝ 6.6Hz，1H)，4.12(s， 1 H ) ， 2 . 82-2 . 72( m ， 1 H ) ， 2 . 64( dt ， J ＝ 11 . 1 ， 2 . 5 Hz ， 1 H ) ， 2 . 58-2 . 52( m ， 1 H ) ， 2.40(dt， J ＝ 11.1，2.5Hz，1H)，2.20(dt， J ＝ 12.1，4.6Hz，1H)，2.10(dt， J ＝ 12.1， 4.6Hz，1H)，1.72-1.57(m，2H)，1.53(d，J ＝ 6.5Hz，3H)。 LCMS ：对于 C27H29NO3 分 析计算值 ：415 ；实测值 ：416(M+H)+ ；(S， S)- 异构体 ：H1NMR(400MHz， CD3OD) δ7.55-7.48(m，2H)，7.45-7.39(m，2H)，7.38-7.30(m，5H)，7.25-7.13(m，4H)， 7.08-7. 00(m， 2 H )， 5. 88( q， J ＝ 6.6 Hz ， 1 H ) ， 4 . 12( s ， 1 H ) ， 2 . 95-2 . 85( m ， 1 H ) ， 2.68(dt， J ＝ 11.1，2.5Hz，1H)，2.57-2.52(m，1H)，2.42(dt， J ＝ 11.1，2.5Hz，1H)， 2.25(dt， J ＝ 12.1，4.6Hz，1H)，2.12(dt， J ＝ 12.1，4.6Hz，1H)，1.73(dd， J ＝ 13.6，
3.0Hz，1H)，1.64(dd， J ＝ 13.6，3.0Hz，1H)，1.40(d， J ＝ 6.6Hz，3H)。 LCMS ：对 于 C27H29NO3 分析计算值 ：415 ；实测值 ：416(M+H)+。
下列酯采用类似的方式制备 ：
用于测定保留时间的手性 SFC 条件 条件 I 柱 ：Chiralpak AD-H 柱，4.62x50mm，5μm溶剂 ：90％ CO2-10％甲醇 ( 含有 0.1％ DEA)
温度 ：35℃
压力 ：150 巴
流速 ：2.0ml/ 分钟。
220nm 下 UV 监测
注入 ：1.0mg/3ml 甲醇
条件 II
柱 ：Chiralcel OD-H 柱，4.62x50mm，5μm
溶剂 ：90％ CO2-10％甲醇 ( 含 0.1％ DEA)
温度 ：35℃
压力 ：150 巴
流速 ：2.0ml/ 分钟。
220nm 下 UV 监测
注入 ：1.0mg/ml 甲醇
Cap-17， 步 骤 2 ：(R)-2-(4- 羟 基 -4- 苯 基 哌 啶 -1- 基 )-2- 苯 基 乙 酸 ：向 (R)-2-(4- 羟 基 -4- 苯 基 哌 啶 -1- 基 )-2- 苯 基 乙 酸 ((S)-1- 苯 基 乙 基 ) 酯 (0.350g， 0.84mmol) 的二氯甲烷 (5ml) 溶液中加入三氟乙酸 (1ml)，将混合物在室温下搅拌 2 小 时。 随后真空除去挥发性物质，残余物用反相制备型 HPLC 纯化 (Primesphere C-18， 20x100mm ；CH3CN-H2O-0.1％ TFA)，得到标题化合物 ( 为 TFA 盐 )(0.230g，88％，白 色固体 )。 LCMS ：对于 C19H21NO3 分析计算值 ：311.15 ；实测值 ：312(M+H)+。
按类似方式制备光学纯形式的下列羧酸 ：
用于测定保留时间的 LCMS 条件 条件 I 柱 ：Phenomenex-Luna 4.6x50mm S10 开始％ B ＝ 0 最终％ B ＝ 100 梯度时间＝ 4 分钟 流速＝ 4ml/ 分钟 波长＝ 220溶剂 A ＝ 10％甲醇 -90％ H2O-0.1％ TFA 溶剂 B ＝ 90％甲醇 -10％ H2O-0.1％ TFA 条件 II 柱 ：Waters-Sunfire 4.6x50mm S5 开始％ B ＝ 0 最终％ B ＝ 100 梯度时间＝ 2 分钟 流速＝ 4ml/ 分钟 波长＝ 220 溶剂 A ＝ 10％甲醇 -90％ H2O-0.1％ TFA 溶剂 B ＝ 90％甲醇 -10％ H2O-0.1％ TFA 条件 III 柱 ：Phenomenex 10μ3.0x50mm 开始％ B ＝ 0 最终％ B ＝ 100 梯度时间＝ 2 分钟 流速＝ 4ml/ 分钟 波长＝ 220 溶剂 A ＝ 10％甲醇 -90％ H2O-0.1％ TFA 溶剂 B ＝ 90％甲醇 -10％ H2O-0.1％ TFA Cap-18步 骤 1 ：(R， S)-2-(4- 吡 啶 基 )-2- 溴 乙 酸 乙 酯 ：在 氩 气 氛、0 ℃ 下， 向 4- 吡啶基乙酸乙酯 (1.00g，6.05mmol) 的无水 THF(150ml) 溶液中加入 DBU(0.99ml， 6.66mmol)。 使反应混合物在 30 分钟内升温至室温后，冷却至 -78℃。 向该混合物中加 入 CBr4(2.21g，6.66mmol)，在 -78℃下继续搅拌 2 小时。 然后反应混合物用 NH4Cl 饱和
水溶液猝灭，分离各相。 有机相经洗涤 ( 盐水 )，干燥 (Na2SO4)，过滤后真空浓缩。 所 得黄色油状物立即用快速色谱法纯化 (SiO2/ 己烷 - 乙酸乙酯，1 ∶ 1)，得到标题化合物 (1.40g，95％，略微不稳定的黄色油状物 )。 1H NMR(400MHz， CDCl3)δ8.62(dd， J ＝ 4.6，1.8Hz，2H)，7.45(dd， J ＝ 4.6，1.8Hz，2H)，5.24(s，1H)，4.21-4.29(m，2H)， 1.28(t， J ＝ 7.1Hz，3H)。 LCMS ：对于 C9H10BrNO2 分析计算值 ：242，244 ；实测值 ： 243，245(M+H)+。
步骤 2 ：(R， S)-2-(4- 吡啶基 )-2-(N， N- 二甲氨基 ) 乙酸乙酯 ：在室温下，向 (R，S)-2-(4- 吡啶基 )-2- 溴乙酸乙酯 (1.40g，8.48mmol) 的 DMF(10ml) 溶液中加入 二甲胺 (2M 的 THF 溶液，8.5ml，17.0mmol)。 反应完成后 ( 用 TLC 判断 )，真空除去挥 发性物质，残余物用快速色谱法纯化 (Biotage，40+M SiO2 柱 ；50％ -100％乙酸乙酯 - 己 烷 )，得到标题化合物 (0.539g，31 ％，浅黄色油状物 )。 1H NMR(400MHz， CDCl3) δ8.58(d， J ＝ 6.0Hz，2H)，7.36(d， J ＝ 6.0Hz，2H)，4.17(m，2H)，3.92(s，1H)， 2.27(s，6H)，1.22(t， J ＝ 7.0Hz)。 LCMS ：对于 C11H16N2O2 分析计算值 ：208 ；实测 值 ：209(M+H)+
步骤 3 ：(R， S)-2-(4- 吡啶基 )-2-(N， N- 二甲氨基 ) 乙酸 ：在室温下，向 (R，S)-2-(4- 吡啶基 )-2-(N，N- 二甲氨基 ) 乙酸乙酯 (0.200g，0.960mmol) 与 THF- 甲 醇 -H2O(1 ∶ 1 ∶ 1，6ml) 混合物的溶液中加入 LiOH 粉 (0.120g，4.99mmol)。 将溶液 搅拌 3 小时后，用 1N HCl 酸化至 pH 6。 水相用乙酸乙酯洗涤后，冻干得到标题化合物 的二盐酸盐，为黄色固体 ( 含有 LiCl)。 产物照原样用于后续步骤。 1H NMR(400MHz， DMSO-d6)δ8.49(d，J ＝ 5.7Hz，2H)，7.34(d，J ＝ 5.7Hz，2H)，3.56(s，1H)，2.21(s， 6H).
使用下述方法以类似方式制备以下实施例 ：
Cap-37步 骤 1 ：(R， S)-2-( 喹 啉 -3- 基 )-2-(N， N- 二 甲 氨 基 )- 乙 酸 乙 酯 ：用 氩 气泡流使 N， N- 二甲氨基乙酸乙酯 (0.462g，3.54mmol)、 K3PO4(1.90g，8.95mmol)、 Pd(t-Bu3P)2(0.090g，0.176mmol) 和甲苯 (10ml) 的混合物脱气 15 分钟。 然后将反应混合 物在 100℃下加热 12 小时，之后冷却至室温并倒入 H2O 中。 混合物用乙酸乙酯萃取 ( 两 次 )，合并的有机相经洗涤 (H2O，盐水 )，干燥 (Na2SO4)，过滤后真空浓缩。 残余物先 用反相制备型 HPLC 纯化 (Primesphere C-18，30x100mm ；CH3CN-H2O-5mMNH4OAc)， 再用快速色谱法纯化 (SiO2/ 己烷 - 乙酸乙酯，1 ∶ 1)，得到标题化合物 (0.128g，17％，
橙 色 油 状 物 )。 1H NMR(400MHz， CDCl3)δ8.90(d， J ＝ 2.0Hz，1H)，8.32(d， J ＝ 2.0Hz，1H)，8.03-8.01(m，2H)，7.77(ddd，J ＝ 8.3，6.8，1.5Hz，1H)，7.62(ddd，J ＝ 8.3，6.8，1.5Hz，1H)，4.35(s，1H)，4.13(m，2H)，2.22(s，6H)，1.15(t，J ＝ 7.0Hz， 3H)。 LCMS ：对于 C15H18N2O2 分析计算值 ：258 ；实测值 ：259(M+H)+。
步 骤 2 ；(R， S)-2-( 喹 啉 -3- 基 )-2-(N， N- 二 甲 氨 基 ) 乙 酸 ： 将 (R， S)-2-( 喹啉 -3- 基 )-2-(N，N- 二甲氨基 ) 乙酸乙酯 (0.122g，0.472mmol) 和 6MHCl(3ml) 的 混 合 物 在 100 ℃ 下 加 热 12 小 时。 真 空 除 去 溶 剂 后， 得 到 标 题 化 合 物 的 二 盐 酸 盐 (0.169g，＞ 100％，浅黄色泡沫状物 )。 该含杂质的产物无需进一步纯化便可用于后续步 骤。 LCMS ：对于 C13H14N2O2 分析计算值 ：230 ；实测值 ：231(M+H)+。Cap-38步 骤 1 ：(R)-2-( 二 甲 氨 基 )-2-(2- 氟 苯 基 ) 乙 酸 ((S)-1- 苯 乙 基 ) 酯 和 (S)-2-( 二 甲 氨 基 )-2-(2- 氟 苯 基 ) 乙 酸 ((S)-1- 苯 乙 基 ) 酯 ：向 (RS)-2-( 二 甲 氨 基 )-2-(2- 氟苯基 ) 乙酸 (2.60g，13.19mmol)、 DMAP(0.209g，1.71mmol) 和 (S)-1- 苯 基乙醇 (2.09g，17.15mmol) 与 CH2Cl2(40ml) 的混合物中加入 EDCI(3.29g，17.15mmol)， 将混合物在室温下搅拌 12 小时。然后真空除去溶剂，残余物用乙酸乙酯 -H2O 进行分配。 分离各层后，水层用乙酸乙酯反萃取 ( 两次 )，合并的有机相经洗涤 (H2O，盐水 )，干燥
(Na2SO4)，过滤后真空浓缩。残余物用硅胶色谱法纯化 (Biotage/0-50％乙醚 - 己烷 )。然 后，所得纯的非对映体混合物用反相制备型 HPLC 分离 (Primesphere C-18，30x100mm ； CH3CN-H2O-0.1 ％ TFA)， 先 得 到 (R)-2-( 二 甲 氨 基 )-2-(2- 氟 苯 基 ) 乙 酸 (S)-1- 苯 乙酯 (0.501g，13 ％ )，再得到 (S)-2-( 二甲氨基 )-2-(2- 氟苯基 )- 乙酸 (S)-1- 苯乙 酯 (0.727g，18 ％ )， 均 为 其 TFA 盐。 (S， R)- 异 构 体 ：1H NMR(400MHz， CD3OD) δ7.65-7.70(m，1H)，7.55-7.60(ddd， J ＝ 9.4，8.1，1.5Hz，1H)，7.36-7.41(m，2H)， 7.28-7.34(m，5H)，6.04(q， J ＝ 6.5Hz，1H)，5.60(s，1H)，2.84(s，6H)，1.43(d， J ＝ 6.5Hz，3H)。 LCMS ：对于 C18H20FNO2 分析计算值 ：301 ；实测值 ：302(M+H)+ ； (S， S)- 异 构 体 ：1H NMR(400MHz， CD3OD)δ7.58-7.63(m，1H)，7.18-7.31(m， 6H)，7.00(dd，J ＝ 8.5，1.5Hz，2H)，6.02(q，J ＝ 6.5Hz，1H)，5.60(s，1H)，2.88(s， 6H)，1.54(d，J ＝ 6.5Hz，3H)。 LCMS ：对于 C18H20FNO2 分析计算值 ：301 ；实测值 ： 302(M+H)+。
步骤 2 ：(R)-2-( 二甲氨基 )-2-(2- 氟苯基 ) 乙酸 ：在大气压 (H2 气囊 )、室温 下，使 (R)-2-( 二甲氨基 )-2-(2- 氟苯基 ) 乙酸 ((S)-1- 苯乙基 ) 酯的 TFA 盐 (1.25g， 3.01mmol) 和 20 ％ Pd(OH)2/C(0.125g) 与乙醇 (30ml) 的混合物氢化 4 小时。 溶液然 后用氩气吹洗，经硅藻土1过滤后，真空浓缩。 这便得到标题化合物 (0.503g，98 ％， 无 色 固 体 )。 H NMR(400MHz， CD3OD)δ7.53-7.63(m，2H)，7.33-7.38(m， 2H)，5.36(s，1H)，2.86(s，6H)。 LCMS ：对于 C10H12FNO2 分析计 算值 ：197 ；实测 值 ：198(M+H)+。
S- 异构体可按类似方式由 (S)-2-( 二甲氨基 )-2-(2- 氟苯基 ) 乙酸 ((S)-1- 苯 乙基 ) 酯的 TFA 盐获得。
Cap-39
在 大 气 压 (H2 气 囊 )、 室 温 下， 使 (R)-(2- 氯 苯 基 ) 甘 氨 酸 (0.300g， 1.62mmol)、甲醛 (35 ％水溶液，0.80ml，3.23mmol) 和 20 ％ Pd(OH)2/C(0.050g) 的混合 过滤后，真空浓缩。 残余物 用 反 相 制 备 型 HPLC 纯 化 (Primesphere C-18，30x100mm ；CH3CN-H2O-0.1 ％ TFA)，物氢化 4 小时。 溶液然后用氩气吹洗，经硅藻土得到标题化合物 (R)-2-( 二甲氨基 )-2-(2- 氯苯基 ) 乙酸的 TFA 盐 (0.290g，55 ％，无 色 油 状 物 )。 1H NMR(400MHz， CD3OD)δ7.59-7.65(m，2H)，7.45-7.53(m，2H)， 5.40(s，1H)，2.87(s，6H)。 LCMS ：对 于 C10H12ClNO2 分 析 计 算 值 ：213 ；实 测 值 ： 214(M+H)+。
Cap-40
向 冰 冷 的 (R)-(2- 氯 苯 基 ) 甘 氨 酸 (1.00g，5.38mmol) 和 NaOH(0.862g， 21.6mmol) 与 H2O(5.5ml) 的溶液中滴加氯甲酸甲酯 (1.00ml，13.5mmol)。 将混合物在 0℃下搅拌 1 小时后，加入浓 HCl(2.5ml) 将其酸化。 混合物用乙酸乙酯萃取 ( 两次 )， 合并的有机相经洗涤 (H2O，盐水 )，干燥 (Na2SO4)，过滤后真空浓缩，得到标题化合 物 (R)-2-( 甲 氧 羰 基 氨 基 )-2-(2- 氯 苯 基 ) 乙 酸 (1.31g，96 ％， 橙 黄 色 泡 沫 状 物 )。 1 H NMR(400MHz， CD3OD)δ7.39-7.43(m，2H)，7.29-7.31(m，2H)，5.69(s，1H)， 3.65(s，3H)。 LCMS ：对于 C10H10ClNO4 分析计算值 ：243 ；实测值 ：244(M+H)+。
Cap-41
向 2-(2-( 氯甲基 ) 苯基 ) 乙酸 (2.00g，10.8mmol) 的 THF(20ml) 悬浮液中加入 吗啉 (1.89g，21.7mmol)，将溶液在室温下搅拌 3 小时。 然后反应混合物用乙酸乙酯稀 释，用 H2O 萃取 ( 两次 )。 将水相冻干后，残余物用硅胶色谱法纯化 (Biotage/0-10 ％ 甲醇 -CH2Cl2)，得到标题化合物 2-(2-( 吗啉代甲基 ) 苯基 ) 乙酸 (2.22g，87％，无色固 体 )。 1H NMR(400MHz， CD3OD)δ7.37-7.44(m，3H)，7.29-7.33(m，1H)，4.24(s，
2H)，3.83(br s，4H)，3.68(s，2H)，3.14(br s，4H).LCMS ：对 于 C13H17NO3 分 析 计 算 值 ：235 ；实测值 ：236(M+H)+。
下列实施例同样用 Cap-41 中所述方法制备 ：
Cap-45a
将 HMDS(1.85ml，8.77mmol) 加 到 (R)-2- 氨 基 -2- 苯 基 乙 酸 对 甲 苯 磺 酸 盐 (2.83g，8.77mmol) 与 CH2Cl2(10ml) 的悬浮液中，将混合物在室温下搅拌 30 分钟。 一 次性加入异氰酸甲酯 (0.5g，8.77mmol)，继续搅拌 30 分钟。 反应物通过加入 H2O(5ml) 猝灭，将所得沉淀物过滤，用 H2O 和正己烷洗涤后，真空干燥。 回收得到 (R)-2-(3- 甲 基 脲 基 )-2- 苯 基 乙 酸 (1.5g ；82 ％ )， 为 白 色 固 体， 无 需 进 一 步 纯 化 便 可 使 用。 1H NMR(500MHz， DMSO-d6)δppm 2.54(d， J ＝ 4.88Hz，3H)5.17(d， J ＝ 7.93Hz， 1H)5.95(q， J ＝ 4.48Hz，1H)6.66(d， J ＝ 7.93Hz，1H)7.26-7.38(m，5H)12.67(s，1H)。 LCMS ：对于 C10H12N2O3 分析计算值 ：208.08 ；实测值 ：209.121(M+H)+ ；HPLC Phenomenex C-183.0×46mm，0-100 ％ B，2 分钟内，1 分钟停留时间， A ＝ 90 ％水， 10％甲醇，0.1％ TFA， B ＝ 10％水，90％甲醇，0.1％ TFA， RT ＝ 1.38 分钟，均一性指 数 90％。
Cap-46
所 需 的 产 物 按 照 Cap-45a 中 所 述 方 法 制 备。 1H NMR(500MHz， DMSO-d6) δppm 0.96(t， J ＝ 7.17Hz，3H)2.94-3.05(m，2H)5.17(d， J ＝ 7.93Hz，1H)6.05(t， J ＝ 5.19Hz，1H)6.60(d， J ＝ 7.63Hz，1H)7.26-7.38(m，5H)12.68(s，1H)。 LCMS ： 对 于 C11H14N2O3 分 析 计 算 值 ：222.10 ； 实 测 值 ：223.15(M+H)+。 HPLC XTERRA
C-183.0×506mm，0-100 ％ B，经 2 分钟，1 分钟停留时间， A ＝ 90 ％水，10 ％甲醇， 0.2％ H3PO4，B ＝ 10％水，90％甲醇，0.2％ H3POX，RT ＝ 0.87 分钟，均一性指数 90％。
Cap-47
步骤 1 ：(R)-2-(3，3- 二甲基脲基 )-2- 苯基乙酸叔丁酯 ：在 10 分钟内，向 (R)-2- 氨基 -2- 苯基乙酸叔丁酯 (1.0g，4.10mmol) 和 Hunig 碱 (1.79ml，10.25mmol) 与 DMF(40ml) 的搅拌溶液中滴加二甲氨基甲酰氯 (0.38ml，4.18mmol)。 在室温下搅拌 3 小 时后，减压浓缩反应物，将所得残余物溶于乙酸乙酯。 有机层用 H2O、1N HCl 水溶液和
盐水洗涤，干燥 (MgSO4)，过滤后减压浓缩。 得到 (R)-2-(3，3- 二甲基脲基 )-2- 苯基 乙酸叔丁酯 (0.86g ；75％，白色固体 )，无需进一步纯化便可使用。 1H NMR(500MHz， DMSO - d 6) δ ppm 1 . 33( s ， 9 H )2 . 82( s ， 6 H )5 . 17( d ， J ＝ 7 . 63 Hz ， 1 H )6 . 55( d ， J ＝ 7.32Hz，1H)7.24-7.41(m，5H)。 LCMS ：对于 C15H22N2O3 分析计算值 ：278.16 ；实测 值 ：279.23(M+H)+ ；HPLCPhenomenex LUNA C-184.6×50mm，0-100％ B，4 分钟内， 1 分钟停留时间， A ＝ 90％水，10％甲醇，0.1％ TFA， B ＝ 10％水，90％甲醇，0.1％ TFA， RT ＝ 2.26 分钟，均一性指数 97％。
步 骤 2 ：(R)-2-(3，3- 二 甲 基 脲 基 )-2- 苯 基 乙 酸 ：向 ((R)-2-(3，3- 二 甲 基 脲 基 )-2- 苯 基 乙 酸 叔 丁 酯 (0.86g，3.10mmol) 与 CH2Cl2(250ml) 的 搅 拌 溶 液 中 滴加 TFA(15ml)，将所得溶液在室温下搅拌 3 小时。 然后用 EtOAC ∶己烷 (5 ∶ 20) 的 混 合 物 从 溶 液 中 析 出 所 需 要 的 化 合 物， 滤 出 后 减 压 干 燥。 分 离 出 (R)-2-(3，3- 二 甲基脲基 )-2- 苯基乙酸 (0.59g，86 ％，白色固体 )，无需进一步纯化便可使用。 1H NMR (500 MHz ， DMSO - d 6) δ ppm 2 . 82( s ， 6 H )5 . 22( d ， J ＝ 7 . 32 Hz ， 1 H )6 . 58( d ， J ＝ 7.32Hz，1H)7.28(t， J ＝ 7.17Hz，1H)7.33(t， J ＝ 7.32Hz，2H)7.38-7.43(m， 2H)12.65(s，1H)。 LCMS ： 对 于 C11H14N2O3 分 析 计 算 值 ：222.24 ； 实 测 值 ： 223.21(M+H)+。 HPLC XTERRA C-183.0×50mm，0-100％ B，2 分钟内，1 分钟停留时 间，A ＝ 90％水，10％甲醇，0.2％ H3PO4，B ＝ 10％水，90％甲醇，0.2％ H3PO4，RT ＝ 0.75 分钟，均一性指数 93％。
Cap-48
步骤 1 ：(R)-2-(3- 环戊基脲基 )-2- 苯基乙酸叔丁酯 ：在 10 分钟内，向搅拌 的 (R)-2- 氨 基 -2- 苯 基 乙 酸 盐 酸 盐 (1.0g，4.10mmol) 和 Hunig 碱 (1.0ml，6.15mmol) 在 DMF(15ml) 中的溶液中滴加异氰酸环戊酯 (0.46ml，4.10mmol)，在室温下搅拌 3 小 时后，减压浓缩反应物，将所得残余物溶于乙酸乙酯。 有机层用 H2O 和盐水洗涤，干燥 (MgSO4)，过滤后减压浓缩，得到 (R)-2-(3- 环戊基脲基 )-2- 苯基乙酸叔丁酯 (1.32g ； 100 ％，不透明油状物 )，无需进一步纯化便可使用。 1H NMR(500MHz， CD3Cl-D) δppm 1.50-1.57(m，2H)1.58-1.66(m，2H)1.87-1.97(m，2H)3.89-3.98(m，1H)5.37(s， 1H)7.26-7.38(m，5H)。 LCMS ：对于 (M+H)+C18H26N2O3 分析计算值 318.19 ；实测值 ： 319.21 ；HPLCXTERRA C-183.0×50mm，0-100％ B，4 分钟内，1 分钟停留时间， A ＝ 90％水，10％甲醇，0.1％ TFA， B ＝ 10％水，90％甲醇，0.1％ TFA， RT ＝ 2.82 分钟， 均一性指数 96％。
步骤 2 ：(R)-2-(3- 环戊基脲基 )-2- 苯基乙酸 ：向搅拌的 (R)-2-(3- 环戊基脲 基 )-2- 苯基乙酸叔丁酯 (1.31g，4.10mmol) 在 CH2Cl2(25ml) 中的溶液中滴加 TFA(4ml) 和三乙基硅烷 (1.64ml ；10.3mmol)，将所得溶液在室温下搅拌 6 小时。 减压除去挥发 性成分后，粗产物在乙酸乙酯 / 戊烷中重结晶，得到 (R)-2-(3- 环戊基脲基 )-2- 苯基 乙酸 (0.69g，64 ％，白色固体 )。 1H NMR(500MHz， DMSO-d6)δppm 1.17-1.35(m， 2H)1.42-1.52(m，2H)1.53-1.64(m，2H)1.67-1.80(m，2H)3.75-3.89(m，1H)5.17(d， J ＝ 7.93Hz，1H)6.12(d， J ＝ 7.32Hz，1H)6.48(d， J ＝ 7.93Hz，1H)7.24-7.40(m， 5H)12.73(s，1H)。 LCMS ： 对 于 C 14H18N2O3 分 析 计 算 值 ：262.31 ； 实 测 值 ： 263.15(M+H)+。 HPLC XTERRA C-183.0×50mm，0-100％ B，2 分钟内，1 分钟停留时 间，A ＝ 90％水，10％甲醇，0.2％ H3PO4，B ＝ 10％水，90％甲醇，0.2％ H3PO4，RT ＝
1.24 分钟，均一性指数 100％。
Cap-49
向搅拌的 2-( 苄基氨基 ) 乙酸 (2.0g，12.1mmol) 在甲酸 (91ml) 中的溶液中加 入甲醛 (6.94ml，93.2mmol)。 在 70℃下经过 5 小时后，将反应混合物减压浓缩至 20ml 后，白色固体析出。 经过滤后，收集母液，再次减压浓缩，得到粗产物。 用反相制备 型 HPLC 纯化 (Xterra 30X100mm，在 220nm 下检测，流速 35ml/ 分钟，0-35％ B，8 分 钟内 ；A ＝ 90 ％水，10 ％甲醇，0.1 ％ TFA， B ＝ 10 ％水，90 ％甲醇，0.1 ％ TFA)，得 到标题化合物 2-( 苄基 ( 甲基 )- 氨基 ) 乙酸的 TFA 盐 (723mg，33 ％，无色蜡状物 )。 1 H NMR(300MHz， DMSO-d6)δppm 2.75(s，3H)4.04(s，2H)4.34(s，2H)7.29-7.68(m， 5H)。 LCMS ：对于 C10H13NO2 分析计算值 ：179.09 ；实测值 ：180.20(M+H)+。
Cap-50
向搅拌的 3- 甲基 -2-( 甲基氨基 ) 丁酸 (0.50g，3.81mmol) 在水 (30ml) 溶液中加 入 K2CO3(2.63g，19.1mmol) 和苄基氯 (1.32g，11.4mmol)。将反应混合物在环境温度下搅 拌 18 小时。 反应混合物用乙酸乙酯 (30mlx 2) 萃取，水层经减压浓缩后，得到粗产物， 将其用反相制备型 HPLC 纯化 (Xterra 30x100mm，在 220nm 下检测，流速 40ml/ 分钟， 20-80 ％ B，6 分钟内 ；A ＝ 90 ％水，10 ％甲醇，0.1 ％ TFA， B ＝ 10 ％水，90 ％甲醇， 0.1 ％ TFA)，得到 2-( 苄基 ( 甲基 ) 氨基 )-3- 甲基丁酸的 TFA 盐 (126mg，19 ％，无色 蜡状物 )。 1H NMR(500MHz， DMSO-d6)δppm0.98(d，3H)1.07(d，3H)2.33-2.48(m， 1H)2.54-2.78(m，3H)3.69(s，1H)4.24(s，2H)7.29-7.65(m，5H)。 LCMS ： 对 于 C13H19NO2 分析计算值 ：221.14 ；实测值 ：222.28(M+H)+。
Cap-51
将 Na2CO3(1.83g，17.2mmol) 加 到 L- 缬 氨 酸 (3.9g，33.29mmol) 的 NaOH(33ml1M/H2O，33mmol) 溶液中，所得溶液用冰水浴冷却。 在 15 分钟内滴加氯甲 酸甲酯 (2.8ml，36.1mmol)，移开冷却浴后，将反应混合物在环境温度下搅拌 3.25 小时。
反应混合物用乙醚 (50ml，3x) 洗涤，水相用冰水浴冷却，用浓 HCl 酸化至 pH 1-2 的范围 后，用 CH2Cl2(50ml，3x) 萃取。 有机相经干燥 (MgSO4)，真空蒸发，得到 Cap-51(6g， 白色固体 )。主要旋转异构体的 1H NMR(DMSO-d6，δ ＝ 2.5ppm，500MHz) ：12.54(s， 1H)，7.33(d， J ＝ 8.6，1H)，3.84(dd， J ＝ 8.4，6.0，1H)，3.54(s，3H)，2.03(m， 1H)，0.87(m，6H)。 HRMS ：对于 [M+H]+C7H14NO4 分析计算值 ：176.0923 ；实测值 ： 176.0922。
Cap-52( 与 Cap-12 相同 )
按照所述用于合成 Cap-51 的方法由 L- 丙氨酸合成 Cap-52。 出于表征目的， 部分粗产物用反相 HPLC 纯化 (H2O/MeOH/TFA)，得到粘性无色油状物的 Cap-52。 1 H NMR(DMSO-d6， δ ＝ 2.5ppm，500MHz) ：12.49(br s，1H)，7.43(d， J ＝ 7.3， 0.88H)，7.09( 表观 br s，0.12H)，3.97(m，1H)，3.53(s，3H)，1.25(d，J ＝ 7.3，3H)。
按照用于合成 Cap-51 的方法，由合适的原料制备 Cap-53 至 Cap-64，若有改变 就会注明。
Cap-65在 5 分 钟 内 将 氯 甲 酸 甲 酯 (0.65ml，8.39mmol) 滴 加 到 冷 却 ( 冰 水 ) 的 Na2CO3(0.449g，4.23mmol)、 NaOH(8.2ml 1M/H2O，8.2mmol) 和 (S)-2- 氨 基 -3- 羟 基 -3- 甲基丁酸 (1.04g，7.81mmol) 的混合物中。 搅拌反应混合物 45 分钟后，随后移 开冷却浴，再继续搅拌 3.75 小时。 反应混合物用 CH2Cl2 洗涤，水相用冰水浴冷却后， 用浓 HCl 酸化至 pH 1-2 的范围。 真空除去挥发性成分，将残余物溶于 2 ∶ 1MeOH/ CH2Cl2(15ml) 的混合物，过滤并使滤液旋转蒸发，得到 Cap-65(1.236g，半粘性白色泡 沫状物 )。 1H NMR(DMSO-d6，δ ＝ 2.5ppm，400MHz) ：δ6.94(d， J ＝ 8.5，0.9H)， 6.53(br s，0.1H)，3.89(d， J ＝ 8.8，1H)，2.94(s，3H)，1.15(s，3H)，1.13(s，3H)。
采用合成 Cap-65 的所述方法，由合适的市售原料制备 Cap-66 和 Cap-67。 Cap-66H NMR(DMSO-d6， δ ＝ 2.5ppm，400MHz) ：δ12.58(br s，1H)，7.07(d， J ＝ 8.3，0.13H)，6.81(d， J ＝ 8.8，0.67H)，4.10-4.02(m，1.15H)，3.91(dd， J ＝ 9.1， 3.5，0.85H)，3.56(s，3H)，1.09(d，J ＝ 6.2，3H)。 [ 注意 ：仅记录 NH 的主要信号 ]。
Cap-67
1H NMR(DMSO-d6， δ ＝ 2.5ppm，400MHz) ：12.51(br s，1H)，7.25(d， J ＝ 8.4，0.75H)，7.12(br d， J ＝ 0.4，0.05H)，6.86(br s，0.08H)，3.95-3.85(m，2H)， 3.54(s，3H)，1.08(d， J ＝ 6.3，3H)。 [ 注意 ：仅标明 NH 的主要信号 ]。
Cap-68
1将 氯 甲 酸 甲 酯 (0.38ml，4.9mmol) 滴 加 到 1N NaOH( 水 溶 液 )(9.0ml， 9.0mmol)、1M NaHCO3( 水 溶 液 )(9.0ml，9.0mol)、 L- 天 冬 氨 酸 β- 苄 酯 (1.0g， 烷 (9ml) 的混合物中。 将反应混合物在环境条件下搅拌 3 小时后，4.5mmol) 和二随 后 用 乙 酸 乙 酯 (50ml，3x) 洗 涤。 水 层 用 12N HCl 酸 化 至 pH ～ 1-2 后， 用 乙 酸 乙 酯 (3x50ml) 萃 取。 合 并 的 有 机 层 用 盐 水 洗 涤， 干 燥 (Na2SO4)， 过 滤 后 真 空 浓 缩，得到 Cap-68(1.37g ；浅黄色油状物，质量超过理论收率，产物无需纯化便可使 用 )。 1HNMR(DMSO-d6， δ ＝ 2.5ppm，500MHz) ：δ12.88(br s，1H)，7.55(d， J ＝ 8.5，1H)，7.40-7.32(m，5H)，5.13(d， J ＝ 12.8，1H)，5.10(d， J ＝ 12.9，1H)， 4.42-4.38(m，1H)，3.55(s，3H)，2.87(dd， J ＝ 16.2，5.5，1H)，2.71(dd， J ＝ 16.2， 8.3，1H)。 LC( 条件 2) ：RT ＝ 1.90 分钟 ；LC/MS ：对于 [M+H]+C13H16NO6 分析计算 值 ：282.10 ；实测值 ：282.12。
Cap-69a 和 -69b
将 NaCNBH3(2.416g，36.5mmol) 分批加入冰冷 ( ～ 15 ℃ ) 的丙氨酸 (1.338g， 15.0mmol) 的水 (17ml)/MeOH(10ml) 溶液中。 几分钟后，在 4 分钟内滴加乙醛 (4.0ml， 71.3mmol)，移开 冷却 浴，将反 应混 合物在环境 条件 下搅 拌 6 小时。 再 次 加入 乙 醛 (4.0ml) 后，搅拌反应物 2 小时。 将浓 HCl 慢慢加到反应混合物中，直到 pH 达到～ 1.5 后，将所得混合物在 40 ℃下加热 1 小时。 真空除去大部分挥发性成分，残余物用 50WX8-100 离子交换树脂纯化 ( 柱用水洗涤，化合物用由 18ml NH4OH 和 282ml 水混合而制得的稀 NH4OH 洗脱 )，得到 Cap-69(2.0g，灰白色吸湿性软固体 )。 1H NMR(DMSO-d6， δ ＝ 2.5ppm，400MHz) ：δ3.44(q， J ＝ 7.1，1H)，2.99-2.90(m， 2H)，2.89-2.80(m，2H)，1.23(d， J ＝ 7.1，3H)，1.13(t， J ＝ 7.3，6H).
按照所述用于合成 Cap-69 的方法，采用合适的原料制备 Cap-70 至 Cap-74x。
Cap-75
Cap-75，步骤 a将 N a B H 3C N ( 1 . 6 g ， 2 5 . 5 m m o l ) 加 到 冷 却 ( 冰 / 水 浴 ) 的 H-D-Ser-OBzlHCl(2.0g，8.6mmol) 的水 (25ml)/ 甲醇 (15ml) 溶液中。 在 5 分钟内滴加乙 醛 (1.5ml，12.5mmol) 后，移开冷却浴，将反应混合物在环境条件下搅拌 2 小时。 小心用 12N HCl 猝灭反应物后，真空浓缩。 将残余物溶于水，用反相 HPLC 纯化 (MeOH/H2O/ TFA)，得到 (R)-2-( 二乙氨基 )-3- 羟基丙酸苄酯的 TFA 盐 (1.9g，粘性无色油状物 )。 1 H NMR(DMSO-d6， δ ＝ 2.5ppm，500MHz) ：δ9.73(br s，1H)，7.52-7.36(m，5H)， 5.32(d， J ＝ 12.2，1H)，5.27(d， J ＝ 12.5，1H)，4.54-4.32(m，1H)，4.05-3.97(m， 2H)，3.43-3.21(m，4H)，1.23(t，J ＝ 7.2，6H).LC/MS( 条件 2) ：RT ＝ 1.38 分钟 ；LC/ MS ：对于 [M+H]+C14H22NO3 分析计算值 ：252.16 ；实测值 ：252.19。
Cap-75
将 NaH(0.0727g，1.82mmol，60％ ) 加到冷却 ( 冰水 ) 的上文制备的 (R)-2-( 二 乙氨基 )-3- 羟基丙酸苄酯的 TFA 盐 (0.3019g，0.8264mmol) 的 THF(3.0ml) 溶液中，将 混合物搅拌 15 分钟。 加入甲基碘 (56μl，0.90mmol)，在冰水浴中融化至环境条件的同 时，继续搅拌 18 小时。 反应物用水猝灭后，加到 MeOH 预处理的 MCX(6g) 柱体上，用 甲醇洗涤后，化合物用 2N NH3/ 甲醇洗脱。 真空除去挥发性成分，得到 Cap-75(100mg， 被 (R)-2-( 二乙氨基 )-3- 羟基丙酸污染，黄色半固体 )。 产物照原样使用无需进一步纯 化。
Cap-76
将 NaCNBH3(1.60g，24.2mmol) 分批加到冰冷 ( ～ 15℃ ) 的 (S)-4- 氨基 -2-( 叔 丁氧基羰基氨基 ) 丁酸 (2.17g，9.94mmol) 的水 /MeOH( 各为 12ml) 溶液中。 几分钟 后，在 2 分钟内滴加乙醛 (2.7ml，48.1mmol)，移开冷却浴，将反应混合物在环境条件下 搅拌 3.5 小时。 再次加入乙醛 (2.7ml，48.1mmol) 后，搅拌反应物 20.5 小时。 真空除去 大部分 MeOH 成分，残余混合物用浓 HCl 处理，直到达到 pH ～ 1.0 后，在 40℃下加热 2
小时。 真空除去挥发性成分，残余物用 4M HCl/ 二 搅拌 7.5 小时。 真空除去挥发性成分，残余物用烷 (20ml) 处理，并在环境条件下 50WX8-100 离子交换树脂纯化( 柱用水洗涤，化合物用由 18ml NH4OH 和 282ml 水制备的稀 NH4OH 洗脱 )，得到中间体 (S)-2- 氨基 -4-( 二乙氨基 ) 丁酸 (1.73g，灰白色固体 )。
在 11 分 钟 内， 将 氯 甲 酸 甲 酯 (0.36ml，4.65mmol) 滴 加 到 冷 却 ( 冰 水 ) 的 Na2CO3(0.243g，2.29mmol)、 NaOH(4.6ml 1M/H2O，4.6mmol) 和上述产物 (802.4mg) 的 混合物中。 搅拌反应混合物 55 分钟后，移开冷却浴，再继续搅拌 5.25 小时。 反应混合 物用等体积水稀释，用 CH2Cl2(30ml，2x) 洗涤，水相用冰水浴冷却，用浓 HCl 酸化至 pH 2 的范围。 然后真空除去挥发性成分，粗产物用 MCX 树脂游离碱化 (free-based)(6.0g ； 柱用水洗涤，样品用 2.0M NH3/MeOH 洗脱 )，得到含杂质的 Cap-76(704mg，灰白色固 体 )。 1H NMR(MeOH-d4，δ ＝ 3.29ppm，400MHz) ：δ3.99(dd，J ＝ 7.5，4.7，1H)， 3.62(s，3H)，3.25-3.06(m，6H)，2.18-2.09(m，1H)，2.04-1.96(m，1H)，1.28(t， J ＝ 7.3，6H)。 LC/MS ：对于 [M+H]+ C10H21N2O4 分析计算值 ：233.15 ；实测值 ：233.24。
Cap-77a 和 -77b
如 下 进 行 Cap-77 的 合 成 ：按 照 Cap-7 所 述 方 法， 采 用 7- 氮 杂 二 环 [2.2.1] 庚 烷 用 于 替 换 SN2 步 骤， 并 且 通 过 采 用 下 列 条 件， 对 中 间 体 2-(7- 氮 杂 二 环 [2.2.1] 庚 -7- 基 )-2- 苯基乙酸苄酯进行对映体分离 ：将中间体 (303.7mg) 溶于乙醇，将所得溶 液注入手性 HPLC 柱 (ChiracelAD-H 柱，30x250mm，5μm)，在 35 ℃温度下，用 90 ％ CO2-10 ％ EtOH 以 70ml/ 分 钟 洗 脱， 得 到 124.5mg 对 映 体 -1 和 133.8mg 对 映 体 -2。 这 些 苄 酯 类 按 照 Cap-7 的 制 备 法 进 行 氢 解， 得 到 Cap-77 ：1HNMR(DMSO-d6， δ ＝ 2.5ppm，400MHz) ：δ7.55(m，2H)，7.38-7.30(m，3H)，4.16(s，1H)，3.54( 表 观 br s，2H)，2.08-1.88(m，4H)，1.57-1.46(m，4H)。 LC( 条件 1) ：RT ＝ 0.67 分钟 ；LC/ MS ：对 于 [M+H]+C14H18NO2 分 析 计 算 值 ：232.13 ；实 测 值 ：232.18。 HRMS ：对 于 [M+H]+C14H18NO2 分析计算值 ：232.1338 ；实测值 ：232.1340。
Cap-78
将 NaCNBH3(0.5828g，9.27mmol) 加 到 (R)-2-( 乙 氨 基 )-2- 苯 基 乙 酸 HCl 盐 (Cap-3 合成中的中间体 ；0.9923mg，4.60mmol) 和 (1- 乙氧基环丙氧基 ) 三甲基硅 烷 (1.640g，9.40mmol) 在 MeOH(10ml) 中的混合物中，半不均匀混合物用油浴在 50 ℃ 下加热 20 小时。 再次加入 (1- 乙氧基环丙氧基 ) 三甲基硅烷 (150mg，0.86mmol) 和
NaCNBH3(52mg，0.827mmol)，并再加热反应混合物 3.5 小时。 然后将其冷却至环境温 度，用浓 HCl 酸化至约 pH 2 的范围后，将混合物过滤，使滤液旋转蒸发。 将所得粗产物 溶于 i-PrOH(6ml) 并加热进行溶解，滤出不溶解部分后，真空浓缩滤液。约 1/3 的所得粗 产物用反相 HPLC 纯化 (H2O/MeOH/TFA)，得到 Cap-78 的 TFA 盐 (353mg，粘性无色油 状物 )。 1H NMR(DMSO-d6，δ ＝ 2.5ppm，400MHz ；D2O 交换后 ) ：δ7.56-7.49(m， 5H)，5.35(S，1H)，3.35(m，1H)，3.06( 表 观 br s，1H)，2.66(m，1H)，1.26(t， J ＝ 7.3，3H)，0.92(m，1H)，0.83-0.44(m，3H)。 LC( 条 件 1) ：RT ＝ 0.64 分 钟 ；LC/ MS ：对 于 [M+H]+C13H18NO2 分 析 计 算 值 ：220.13 ；实 测 值 ：220.21。 HRMS ：对 于 [M+H]+C13H18NO2 分析计算值 ：220.1338 ；实测值 ：220.1343。
Cap-79
将臭氧通入冷却 (-78 ℃ ) 的 Cap-55(369mg，2.13mmol) 的 CH2Cl2(5.0ml) 溶液 中约 50 分钟，直到反应混合物出现浅蓝色。 加入 Me2S( 移液管 10 滴 )，搅拌反应混合 物 35 分钟。 -78℃浴用 -10℃浴代之，并再继续搅拌 30 分钟后，真空除去挥发性成分， 得到粘性无色油状物。
将 NaBH3CN(149mg，2.25mmol) 加到上述粗产物和吗啉 (500μl，5.72mmol) 的 MeOH(5.0ml) 溶液中，将混合物在环境条件下搅拌 4 小时。 冷却至冰水温度，用浓 HCl 处理至 pH ～ 2.0 后，搅拌 2.5 小时。真空除去挥发性成分，残余物用 MCX 树脂 (MeOH 洗 涤 ；2.0NNH3/MeOH 洗脱 ) 结合反相 HPLC(H2O/MeOH/TFA) 进行纯化，得到 Cap-79， 其中含有含量不明的吗啉。
为了消耗掉吗啉污染物，将上述产物溶于 CH2Cl2(1.5ml)，依次用 Et3N(0.27ml， 1.94mmol) 和乙酸酐 (0.10ml，1.06mmol) 处理，并在环境条件下搅拌 18 小时。 加入 THF(1.0ml) 和 H2O(0.5ml)，继续搅拌 1.5 小时。 真空除去挥发性成分后，使所得残余物 通过 MCX 树脂 (MeOH 洗涤 ；2.0N NH3/MeOH 洗脱 )，得到含杂质的 Cap-79，为粘性褐 色油状物，无需进一步纯化便可用于下一步骤。
Cap-80a 和 -80b
在 15 分钟内，将 SOCl2(6.60ml，90.5mmol) 滴加到冷却 ( 冰水 ) 的 (S)-3- 氨 基 -4-( 苄氧基 )-4- 氧代丁酸 (10.04g，44.98mmol) 和 MeOH(300ml) 的混合物中，移开冷却浴后，将反应混合物在环境条件下搅拌 29 小时。 真空除去大部分挥发性成分，小 心地使残余物在 EtOAc(150ml) 和饱和 NaHCO3 溶液之间分配。 水相用 EtOAc(150ml， 2x) 萃取，合并的有机相经干燥 (MgSO4)，过滤后真空浓缩，得到 (S)-2- 氨基琥珀酸 1- 苄酯 4- 甲酯 (9.706g，无色油状物 )。 1H NMR(DMSO-d6，δ ＝ 2.5ppm，400MHz) ： δ7.40-7.32(m，5H)，5.11(s，2H)，3.72( 表 观 t， J ＝ 6.6，1H)，3.55(s，3H)， 2.68(dd， J ＝ 15.9，6.3，1H)，2.58(dd， J ＝ 15.9，6.8，1H)，1.96(s，2H)。 LC( 条件 1) ：RT ＝ 0.90 分钟 ；LC/MS ：对于 [M+H]+C12H16NO4 分析计算值 ：238.11 ；实测值 ： 238.22。
在 1 分钟内，将 Pb(NO3)2(6.06g，18.3mmol) 加到 (S)-2- 氨基琥珀酸 1- 苄酯 4- 甲酯 (4.50g，19.0mmol)、9- 溴 -9- 苯基 -9H- 芴 (6.44g，20.0mmol) 和 Et3N(3.0ml， 21.5mmol) 的 CH2Cl2(80ml) 溶液中，将不均匀混合物在环境条件下搅拌 48 小时。 将混合 物过滤，滤液用 MgSO4 处理后再次过滤，浓缩最终的滤液。 将所得粗产物进行 Biotage 纯 化 (350g 硅 胶， CH2Cl2 洗 脱 )， 得 到 (S)-2-(9- 苯 基 -9H- 芴 -9- 基 氨 基 ) 琥 珀 酸 1- 苄酯 4- 甲酯 (7.93g，十分粘稠的无色油状物 )。 1H NMR(DMSO-d6，δ ＝ 2.5ppm， 400MHz) ：δ7.82(m，2H)，7.39-7.13(m，16H)，4.71(d，J ＝ 12.4，1H)，4.51(d，J ＝ 12.6，1H)，3.78(d，J ＝ 9.1，NH)，3.50(s，3H)，2.99(m，1H)，2.50-2.41(m，2H，与 溶剂有部分重叠 )。 LC( 条件 1) ：RT ＝ 2.16 分钟 ；LC/MS ：对于 [M+H]+C31H28NO4 分 析计算值 ：478.20 ；实测值 ：478.19。
在 10 分 钟 内， 将 LiMDS(9.2ml1.0M/THF，9.2mmol) 滴 加 到 冷 却 (-78 ℃ ) 的 (S)-2-(9- 苯 基 -9H- 芴 -9- 基 氨 基 ) 琥 珀 酸 1- 苄 酯 4- 甲 酯 (3.907g，8.18mmol) 的 THF(50ml) 溶液中，并搅拌～ 1 小时。 在 8 分钟内将 MeI(0.57ml，9.2mmol) 滴加到混 合物中后，在使冷却浴融化至室温的同时继续搅拌 16.5 小时。 用饱和 NH4Cl 溶液 (5ml) 猝灭后，真空除去大部分有机成分，使残余物在 CH2Cl2(100ml) 和水 (40ml) 之间分配。 有机层经干燥 (MgSO4)，过滤后真空浓缩，所得粗产物用 Biotage 纯化 (350g 硅胶 ；25％ EtOAc/ 己烷 )，得到 3.65g 3- 甲基 -2-(9- 苯基 -9H- 芴 -9- 基氨基 ) 琥珀酸 1- 苄酯 4- 甲 酯的 2S/3S 和 2S/3R 非对映体混合物，比率～ 1.0 ∶ 0.65(1H NMR)。此时未确定主要异构 体的立体化学结构，混合物无需分离便可进行下一步骤。部分 1H NMR 数据 (DMSO-d6， δ ＝ 2.5ppm，400MHz) ：主要非对映体， δ4.39(d， J ＝ 12.3， CH2 的 1H)，3.33(s， 3H，与 H2O 信号重叠 )，3.50(d， J ＝ 10.9， NH)，1.13(d， J ＝ 7.1，3H) ；次要非对映 体，δ4.27(d，J ＝ 12.3，CH2 的 1H)，3.76(d，J ＝ 10.9，NH)，3.64(s，3H)，0.77(d， J ＝ 7.0，3H)。 LC( 条件 1) ：RT ＝ 2.19 分钟 ；LC/MS ：对于 [M+H]+C32H30NO4 分析计 算值 ：492.22 ；实测值 ：492.15。
在 10 分钟内，将二异丁基氢化铝 (20.57ml 1.0M 的己烷溶液，20.57mmol) 滴 加到冷却 (-78℃ ) 的上述制备的 (2S)-3- 甲基 -2-(9- 苯基 -9H- 芴 -9- 基氨基 ) 琥珀酸 1- 苄酯 4- 甲酯 (3.37g，6.86mmol) 的 THF(120ml) 溶液中，在 -78 ℃下搅拌 20 小时。 反应混合物从冷却浴取出后，快速倒入搅拌下的～ 1M H3PO4/H2O(250ml) 中，混合物用 乙醚 (100ml，2x) 萃取。 合并的有机相用盐水洗涤，干燥 (MgSO4)，过滤后真空浓缩。 制备粗产物的硅胶筛目 (mesh)，并进行色谱法处理 (25％ EtOAc/ 己烷 ；重力洗脱 )，得 到 1.1g(2S，3S)-4- 羟基 -3- 甲基 -2-(9- 苯基 -9H- 芴 -9- 基氨基 ) 丁酸苄酯 ( 被苯甲醇污染，粘性无色油状物 )，以及 (2S，3R)-4- 羟基 -3- 甲基 -2-(9- 苯基 -9H- 芴 -9- 基 氨基 ) 丁酸苄酯，含有 (2S，3R) 立体异构体杂质。 后一样品用相同柱色谱法纯化条件 再进行纯化，得到 750mg 纯产物，为白色泡沫状物。 [ 注意 ：在上述条件下， (2S，3S) 异构体先于 (2S，3R) 异构体洗脱出来 ]。 (2S，3S) 异构体 ：1H NMR(DMSO-d6， δ ＝ 2.5ppm，400MHz) ：7.81(m，2H)，7.39-7.08(m，16H)，4.67(d， J ＝ 12.3，1H)， 4.43(d，J ＝ 12.4，1H)，4.21( 表观 t，J ＝ 5.2，OH)，3.22(d，J ＝ 10.1，NH)，3.17(m， 1H)，3.08(m，1H)， ～ 2.5(m，1H， 与 溶 剂 信 号 重 叠 )，1.58(m，1H)，0.88(d， J ＝ 6.8，3H)。 LC( 条件 1) ：RT ＝ 2.00 分钟 ；LC/MS ：对于 [M+H]+C31H30NO3 分析计算 值 ：464.45 ；实测值 ：464.22。 (2S，3R) 异构体 ：1H NMR(DMSO-d6，δ ＝ 2.5ppm， 400MHz) ：7.81(d， J ＝ 7.5，2H)，7.39-7.10(m，16H)，4.63(d， J ＝ 12.1，1H)， 4.50( 表 观 t， J ＝ 4.9，1H)，4.32(d， J ＝ 12.1，1H)，3.59-3.53(m，2H)，3.23(m， 1H)，2.44(dd， J ＝ 9.0，8.3，1H)，1.70(m，1H)，0.57(d， J ＝ 6.8，3H)。 LC( 条 件 1) ：RT ＝ 1.92 分钟 ；LC/MS ：对于 [M+H]+C31H30NO3 分析计算值 ：464.45 ；实测值 ： 464.52。
DIBAL 还原产物的相对立体化学排布是根据 NOE 研究做出的，该研究采用 以 下 方 案， 用 由 每 个 异 构 体 制 备 的 内 酯 衍 生 物 进 行 ：将 LiHMDS(50μl1.0M/THF， 0.05mmol) 加到冷却 ( 冰水 ) 的 (2S，3S)-4- 羟基 -3- 甲基 -2-(9- 苯基 -9H- 芴 -9- 基 氨基 ) 丁酸苄酯 (62.7mg，0.135mmol) 的 THF(2.0ml) 溶液中，将反应混合物在同样的 温度下大约搅拌 2 小时。 真空除去挥发性成分，使残余物在 CH2Cl2(30ml)、水 (20ml) 和饱和 NH4Cl 水溶液 (1ml) 之间分配。 有机层经干燥 (MgSO4)，过滤后真空浓缩，所 得 粗 产 物 进 行 Biotage 纯 化 (40g 硅 胶 ；10-15 ％ EtOAc/ 己 烷 )， 得 到 (3S，4S)-4- 甲 基 -3-(9- 苯基 -9H- 芴 -9- 基氨基 ) 二氢呋喃 -2(3H) 酮 (28.1mg，无色固体膜状物 )。 将 (2S，3R)-4- 羟基 -3- 甲基 -2-(9- 苯基 -9H- 芴 -9- 基氨基 ) 丁酸苄酯按同样方法 制成 (3S，4R)-4- 甲基 -3-(9- 苯基 -9H- 芴 -9- 基氨基 ) 二氢呋喃 -2(3H) 酮。 (3S， 4S)- 内 酯 异 构 体 ：1HNMR(DMSO-d6， δ ＝ 2.5ppm，400MHz)，7.83(d， J ＝ 7.5， 2H)，7.46-7.17(m，11H)，4.14( 表观 t，J ＝ 8.3，1H)，3.60(d，J ＝ 5.8，NH)，3.45( 表 观 t，J ＝ 9.2，1H)，～ 2.47(m，1H，与溶剂信号有部分重叠 )，2.16(m，1H)，0.27(d， J ＝ 6.6，3H)。 LC( 条件 1) ：RT ＝ 1.98 分钟 ；LC/MS ：对于 [M+Na]+C24H21NNaO2 分 析计算值 ：378.15 ；实测值 ：378.42。 (3S，4R)- 内酯异构体 ：1H NMR(DMSO-d6，δ ＝ 2.5ppm，400MHz)，7.89(d， J ＝ 7.6，1H)，7.85(d， J ＝ 7.3，1H)，7.46-7.20(m， 11H)，3.95(dd， J ＝ 9.1，4.8，1H)，3.76(d， J ＝ 8.8，1H)，2.96(d， J ＝ 3.0， NH)， 2.92(dd， J ＝ 6.8，3， NCH)，1.55(m，1H)，0.97(d， J ＝ 7.0，3H)。 LC( 条 件 1) ： RT ＝ 2.03 分钟 ；LC/MS ：对于 [M+Na]+C24H21NNaO2 分析计算值 ：378.15 ；实测值 ： 378.49。
依次将 TBDMS-Cl(48mg，0.312mmol) 和咪唑 (28.8mg，0.423mmol) 加到 (2S， 3S)-4- 羟基 -3- 甲基 -2-(9- 苯基 -9H- 芴 -9- 基氨基 ) 丁酸苄酯 (119.5mg，0.258mmol) 的 CH2Cl2(3ml) 溶液中，将混合物在环境条件下搅拌 14.25 小时。 然后反应混合物用 CH2Cl2(30ml) 稀释后，用水 (15ml) 洗涤，有机层经干燥 (MgSO4)，过滤后真空浓缩。 所得粗产物用 Biotage 纯化 (40g 硅胶 ；5％ EtOAc/ 己烷 )，得到 (2S，3S)-4-( 叔丁基二甲基甲硅烷基氧基 )-3- 甲基 -2-(9- 苯基 -9H- 芴 -9- 基氨基 ) 丁酸苄酯 (124.4mg，被 基于 TBDMS 的杂质污染，粘性无色油状物 )。 将 (2S，3R)-4- 羟基 -3- 甲基 -2-(9- 苯 基 -9H- 芴 -9- 基氨基 ) 丁酸苄酯按同样方法制成 (2S，3R)-4-( 叔丁基二甲基甲硅烷基 氧基 )-3- 甲基 -2-(9- 苯基 -9H- 芴 -9- 基氨基 ) 丁酸苄酯。 (2S，3S)- 甲硅烷基醚异 构体 ：1H NMR(DMSO-d6， δ ＝ 2.5ppm，400MHz)，7.82(d， J ＝ 4.1，1H)，7.80(d， J ＝ 4.0，1H)，7.38-7.07(m，16H)，4.70(d， J ＝ 12.4，1H)，4.42(d， J ＝ 12.3，1H)， 3.28-3.19(m，3H)，2.56(dd， J ＝ 10.1，5.5，1H)，1.61(m，1H)，0.90(d， J ＝ 6.8， 3H)，0.70(s，9H)， -0.13(s，3H)， -0.16(s，3H)。 LC( 条件 1，其中过柱时间延长至 4 分 钟 ) ：RT ＝ 3.26 分 钟 ；LC/MS ：对 于 [M+H]+C37H44NO3Si 分 析 计 算 值 ：578.31 ； 实测值 ：578.40。 (2S，3R)- 甲硅烷基醚异构体 ：1H NMR(DMSO-d6， δ ＝ 2.5ppm， 400MHz)，7.82(d， J ＝ 3.0，1H)，7.80(d， J ＝ 3.1，1H)，7.39-7.10(m，16H)， 4.66(d，J ＝ 12.4，1H)，4.39(d，J ＝ 12.4，1H)，3.61(dd，J ＝ 9.9，5.6，1H)，3.45(d， J ＝ 9.5，1H)，3.41(dd， J ＝ 10，6.2，1H)，2.55(dd， J ＝ 9.5，7.3，1H)，1.74(m， 1H)，0.77(s，9H)，0.61(d， J ＝ 7.1，3H)， -0.06(s，3H)， -0.08(s，3H)。
将 氢 气 囊 与 (2S，3S)-4-( 叔 丁 基 二 甲 基 甲 硅 烷 基 氧 基 )-3- 甲 基 -2-(9- 苯 基 -9H- 芴 -9- 基 氨 基 ) 丁 酸 苄 酯 (836mg，1.447mmol) 和 10 ％ Pd/C(213mg) 在 EtOAc(16ml) 中的混合物连通，将混合物在室温下搅拌～ 21 小时，需要时气囊再充 入 H2。 反应混合物用 CH2Cl2 稀释，通过硅藻土 (Celite) 垫过滤，硅藻土垫用 EtOAc(200ml)、 EtOAc/MeOH(1 ∶ 1 混合物，200ml) 和 MeOH(750ml) 洗涤。 将合并 的有机相浓缩后，由所得粗产物制备硅胶筛目，进行快速色谱法处理 (8 ∶ 2 ∶ 1EtOAc/ i-PrOH/H2O 的混合物 )，得到 (2S，3S)-2- 氨基 -4-( 叔丁基二甲基甲硅烷基氧基 )-3- 甲 基 丁 酸 (325mg， 白 色 绒 毛 状 固 体 )。 将 (2S，3R)-4-( 叔 丁 基 二 甲 基 甲 硅 烷 基 氧 基 )-3- 甲基 -2-(9- 苯基 -9H- 芴 -9- 基氨基 ) 丁酸苄酯按同样方法制成 (2S，3R)-2- 氨 基 -4-( 叔 丁 基 二 甲 基 甲 硅 烷 基 氧 基 )-3- 甲 基 丁 酸。 (2S，3S)- 氨 基 酸 异 构 体 ：1H NMR( 甲 醇 -d4， δ ＝ 3.29ppm，400MHz)，3.76(dd， J ＝ 10.5，5.2，1H)，3.73(d， J ＝ 3.0，1H)，3.67(dd， J ＝ 10.5，7.0，1H)，2.37(m，1H)，0.97(d， J ＝ 7.0，3H)， 0.92(s，9H)，0.10(s，6H).LC/MS ： 对 于 [M+H]+C11H26NO3Si 分 析 计 算 值 ：248.17 ； 实 测 值 ：248.44。 (2S，3R)- 氨 基 酸 异 构 体 ：1H NMR( 甲 醇 -d4， δ ＝ 3.29ppm， 400MHz)，3.76-3.75(m，2H)，3.60(d， J ＝ 4.1，1H)，2.16(m，1H)，1.06(d， J ＝ 7.3，3H)，0.91(s，9H)，0.09(s，6H)。 对于 [M+H]+C11H26NO3Si 分析计算值 ：248.17 ； 实测值 ：248.44。
将 水 (1ml) 和 NaOH(0.18ml 1.0M/H2O，0.18mmol) 加 到 (2S，3S)-2- 氨 基 -4-( 叔 丁 基 二 甲 基 甲 硅 烷 基 氧 基 )-3- 甲 基 丁 酸 (41.9mg，0.169mmol) 和 Na2CO3(11.9mg，0.112mmol) 的混合物中，超声处理约 1 分钟以使反应物溶解。 然后 混合物用冰水浴冷却，在 30 秒内加入氯甲酸甲酯 (0.02ml，0.259mmol)，在同样温度 下剧烈搅拌 40 分钟后，再在环境温度下搅拌 2.7 小时。 反应混合物用水 (5ml) 稀释， 用冰水浴冷却后，逐滴加入 1.0N HCl 水溶液 ( ～ 0.23ml) 进行处理。 混合物再用水 (10ml) 稀释，用 CH2Cl2(15ml，2x) 萃取。 合并的有机相经干燥 (MgSO4)，过滤后真 空浓缩，得到 Cap-80a，为灰白色固体。 将 (2S，3R)-2- 氨基 -4-( 叔丁基二甲基甲硅烷基氧基 )-3- 甲基丁酸按同样方法制成 Cap-80b。 Cap-80a ：1H NMR(DMSO-d6， δ ＝ 2.5ppm，400MHz)，12.57(br s，1H)，7.64(d， J ＝ 8.3，0.3H)，7.19(d， J ＝ 8.8， 0.7H)，4.44(dd， J ＝ 8.1，4.6，0.3H)，4.23(dd， J ＝ 8.7，4.4，0.7H)，3.56/3.53( 两个 单 峰，3H)，3.48-3.40(m，2H)，2.22-2.10(m，1H)，0.85(s，9H)， ～ 0.84(d，0.9H， 与 t-Bu 信号重叠 )，0.79(d，J ＝ 7，2.1H)，0.02/0.01/0.00( 三个重叠单峰，6H)。 LC/ MS ：对于 [M+Na]+C13H27NNaO5Si 分析计算值 ：328.16 ；实测值 ：328.46。 Cap-80b ： 1 HNMR(CDCl3， δ ＝ 7.24ppm，400MHz)，6.00(br d， J ＝ 6.8，1H)，4.36(dd， J ＝ 7.1，3.1，1H)，3.87(dd， J ＝ 10.5，3.0，1H)，3.67(s，3H)，3.58(dd， J ＝ 10.6，4.8， 1H)，2.35(m，1H)，1.03(d， J ＝ 7.1，3H)，0.90(s，9H)，0.08(s，6H)。 LC/MS ：对 于 [M+Na]+C13H27NNaO5Si 分析计算值 ：328.16 ；实测值 ：328.53。 粗产物无需进一步纯 化便可使用。
Cap-81
按 照 Falb 等 人 所 述 方 案 制 备 (Falb 等， Synthetic Communications1993，23，2839)。 Cap-82 至 Cap-85
按照 Cap-51 或 Cap-13 中所述方法，由合适的原料合成 Cap-82 至 Cap-85。 样 品的光谱特征与其对映体 ( 即分别为 Cap-4、 Cap-13、 Cap-51 和 Cap-52) 的光谱特征相 似。
Cap-86在 0 ℃ 下， 向 O- 甲 基 -L- 苏 氨 酸 (3.0g，22.55mmol)、 NaOH(0.902g， 22.55mmol) 在 H2O(15ml) 中的混合物中滴加 ClCO2Me(1.74ml，22.55mmol)。将混合物搅 拌 12 小时后，用 1N HCl 酸化至 pH 1。 水相用 EtOAc(2x250ml) 和 10％ MeOH 的 CH2Cl2 溶液 (250ml) 萃取，合并的有机相经真空浓缩后，得到无色油状物 (4.18g，97％ )，其纯 度足以用于后续步骤。 1HNMR(400MHz， CDCl3)δ4.19(s，1H)，3.92-3.97(m，1H)， 3.66(s，3H)，1.17(d，J ＝ 7.7Hz，3H)。 LCMS ：对于 C7H13NO5 分析计算值 ：191 ；实 测值 ：190(M-H)-。
Cap-87在 0 ℃ 下， 向 L- 高 丝 氨 酸 (2.0g，9.79mmol)、 Na2CO3(2.08g，19.59mmol) 在 H2O(15ml) 中的混合物中滴加 ClCO2Me(0.76ml，9.79mmol)。 将混合物搅拌 48 小时后， 用 1N HCl 酸化至 pH 1。 水相用 EtOAc(2x250ml) 萃取，合并的有机相经真空浓缩后， 得到无色固体 (0.719g，28％ )，其纯度足以用于后续步骤。 1HNMR(400MHz， CDCl3) δ4.23(dd， J ＝ 4.5，9.1Hz，1H)，3.66(s，3H)，3.43-3.49(m，2H)，2.08-2.14(m， 1H)，1.82-1.89(m，1H)。 LCMS ： 对 于 C7H13NO5 分 析 计 算 值 ：191 ； 实 测 值 ： 192(M+H)+。
Cap-88
将 L- 缬氨酸 (1.0g，8.54mmol)、3- 溴吡啶 (1.8ml，18.7mmol)、K2CO3(2.45g， 17.7mmol) 和 CuI(169mg，0.887mmol) 在 DMSO(10ml) 中的混合物在 100℃下加热 12 小 时。 使反应混合物冷却至室温后，倒入 H2O( 约 150ml) 中，用 EtOAc 洗涤 ( 两次 )。 有 机层用少量 H2O 萃取，合并的水相用 6N HCl 酸化至约 pH 2。 体积减至大约 1/3 时，加入 20g 阳离子交换树脂 (Strata)。 使浆状物静置 20 分钟后，加到阳离子交换树脂垫 (Strata) ( 约 25g) 上。 该 垫 依 次 用 H2O(200ml)、 MeOH(200ml) 和 NH3(3M 的 MeOH 溶 液， 2x200ml) 洗涤。 合适的流分经真空浓缩，将残余物 ( 约 1.1g) 溶于 H2O，冷冻并冻干。 得 到标题化合物 (1.02g，62％，泡沫状物 )。 1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.00(s，br， 1H)，7.68-7.71(m，1H)，7.01(s， br，1H)，6.88(d， J ＝ 7.5Hz，1H)，5.75(s， br， 1H)，3.54(s，1H)，2.04-2.06(m，1H)，0.95(d，J ＝ 6.0Hz，3H)，0.91(d，J ＝ 6.6Hz， 3H)。 LCMS ：对于 C10H14N2O2 分析计算值 ：194 ；实测值 ：195(M+H)+。
Cap-89
将 L- 缬氨酸 (1.0g，8.54mmol)、5- 溴嘧啶 (4.03g，17.0mmol)、K2CO3(2.40g， 17.4mmol) 和 CuI(179mg，0.94mmol) 在 DMSO(10ml) 中的混合物在 100 ℃下加热 12 小 时。 使反应混合物冷却至室温后，倒入 H2O( 约 150ml) 中，并用 EtOAc 洗涤 ( 两次 )。 有机层用少量 H2O 萃取，合并的水相用 6N HCl 酸化至约 pH 2。 体积减至大约 1/3 时， 加入 20g 阳离子交换树脂 (Strata)。 将浆状物静置 20 分钟后，加到阳离子交换树脂垫(Strata)( 约 25g) 上。 该垫依次用 H2O(200ml)、 MeOH(200ml) 和 NH3(3M 的 MeOH 溶 液，2x200ml) 洗涤。 合适的流分经真空浓缩后，将残余物 ( 约 1.1g) 溶于 H2O，冷冻并 冻干。 得到标题化合物 (1.02g，62％，泡沫状物 )。 1H NMR(400MHz， CD3OD) 显示 混合物含有缬氨酸，因而无法估计其纯度。 该产物照原样用于后续反应。 LCMS ：对于 C9H13N3O2 分析计算值 ：195 ；实测值 ：196(M+H)+。
Cap-90
按 照 Cap-1 制 备 中 所 述 方 法 制 备 Cap-90。 粗 产 物 照 原 样 用 于 后 续 步 骤。 LCMS ：对于 C11H15NO2 分析计算值 ：193 ；实测值 ：192(M-H)-。
除非另有说明，否则下列端基 (Cap) 按照用于 cap 51 的方法制备 ：
Cap-117 至 Cap-123
对于端基 Cap-117 至 Cap-123 的制备， Boc 氨基酸是市售的，用在 CH2Cl2 中 的 25％ TFA 处理便可脱保护。 通过 LCMS 判断反应完成后，真空除去溶剂，按照用于 Cap-51 的方法，氨基酸的相应 TFA 盐用氯甲酸甲酯进行氨基甲酰基化。
Cap-124按照用于 Cap-51 的方法，使 L- 苏氨酸叔丁酯的盐酸盐氨基甲酰基化。 粗制反 应混合物用 1N HCl 酸化至 pH ～ 1，混合物用 EtOAc(2x50ml) 萃取。 合并的有机相经真 空浓缩后，得到静置时固化的无色固体。 真空浓缩水层，所得产物和无机盐的混合物用
EtOAc-CH2Cl2-MeOH(1 ∶ 1 ∶ 0.1) 研 磨， 真 空 浓 缩 有 机 相 后， 得 到 无 色 油 状 物， 用 LCMS 显 示 为 所 需 要 的 产 物。 合 并 两 次 产 物， 得 到 0.52g 固 体。 1 HNMR(400MHz， CD3OD)δ4.60(m，1H)，4.04(d， J ＝ 5.0Hz，1H)，1.49(d， J ＝ 6.3Hz，3H)。 LCMS ：对于 C5H7NO4 分析计算值 ：145 ；实测值 ：146(M+H)+。
Cap-125
往 Pd(OH)2(20 ％，100mg)、 甲 醛 水 溶 液 (37 ％ 重 量，4ml)、 乙 酸 (0.5mL) 在 甲 醇 (15mL) 中 的 悬 浮 液 中 加 入 (S)-4- 氨 基 -2-( 叔 丁 氧 基 羰 基 氨 基 ) 丁 酸 (1g， 4.48mmol)。 该反应用氢气吹洗数次且在气囊提供的氢气气氛、室温下搅拌过夜。 反应
混合物经硅藻土过滤将挥发性组分真空除去。 将得到的粗品原样用于下一步骤。 LC/MS ：对于 C11H22N2O4 分析计算值 ：246 ；实测值 ：247(M+H)+。
Cap-126
本 方 法 是 用 于 制 备 Cap-51 的 改 进 方 法。 在 0 ℃ 下， 往 3- 甲 基 -L- 组 氨 酸 (0.80g，4.70mmol) 在 THF(10mL) 和 H2O(10mL) 中 的 悬 浮 液 中 加 入 NaHCO3(0.88g， 10.5mmol)。 所得混合物用 ClCO2Me(0.40ml，5.20mmol) 处理，将混合物在 0℃下搅拌。 搅拌约 2 小时后， LCMS 显示无残留原料。 用 6N HCl 使反应物酸化至 pH 2。
真空除去溶剂后，将残余物悬浮于 20ml 20％ MeOH 的 CH2Cl2 溶液中。 将混合 物过滤，浓缩，得到浅黄色泡沫状物 (1.21g)。 LCMS 和 1H NMR 显示该产物为 9 ∶ 1 甲 酯和所需产物的混合物。 将该产物溶于 THF(10ml) 和 H2O(10ml) 中，冷却至 0℃后，加 入 LiOH(249.1mg，10.4mmol)。 搅拌约 1 小时后，LCMS 显示无残留酯。 因此混合物用 6N HCl 酸化后，真空除去溶剂。 LCMS 和 1H NMR 证实不存在酯。 得到标题化合物， 为其 HCl 盐 (1.91g，＞ 100％，被无机盐污染 )。 该化合物无需进一步纯化便可照原样用 于后续步骤。 1HNMR(400MHz， CD3OD)δ8.84， (s，1H)，7.35(s，1H)，4.52(dd， J ＝ 5.0，9.1Hz，1H)，3.89(s，3H)，3.62(s，3H)，3.35(dd，J ＝ 4.5，15.6Hz，1H，被溶 剂部分掩蔽 )，3.12(dd，J ＝ 9.0，15.6Hz，1H)。 LCMS ：对于 C9H13N3O4 分析计算值 ： 227.09 ；实测值 ：228.09(M+H)+。
Cap-127按照上述用于 Cap-126 的方法，由 (S)-2- 氨基 -3-(1- 甲基 -1H- 咪唑 -4- 基 ) 丙酸 (1.11g，6.56mmol)、NaHCO3(1.21g，14.4mmol) 和 ClCO2Me(0.56ml，7.28mmol) 开 始制备 Cap-127。 得到标题化合物，为其 HCl 盐 (1.79g，＞ 100 ％，被无机盐污染 )。
LCMS 和 1H NMR 显示存在大约 5％的甲酯。 该粗制混合物无需进一步纯化便可照原样 使 用。 1HNMR(400MHz， CD3OD)δ8.90(s，1H)，7.35(s，1H)，4.48(dd， J ＝ 5.0， 8.6Hz，1H)，3.89(s，3H)，3.62(s，3H)，3.35(m，1H)，3.08(m，1H) ；LCMS ：对 于 C9H13N3O4 分析计算值 ：227.09 ；实测值 ：228(M+H)+。
Cap-128 的制备
步骤 1 ：(S)-2-( 叔丁氧基羰基氨基 ) 戊 -4- 炔酸苄酯 (cj-27b) 的制备。在 0 ℃ 下， 向 cj-27a(1.01g，4.74mmol)、 DMAP(58mg，0.475mmol) 和 iPr2NEt(1.7ml，9.8mmol) 在 CH2Cl2(100ml) 中 的 溶 液 中 加 入 Cbz-Cl(0.68ml， 4.83mmol)。 将溶液在 0℃下搅拌 4 小时，洗涤 (1NKHSO4，盐水 )，干燥 (Na2SO4)，过 滤后真空浓缩。 残余物经快速柱色谱法纯化 (TLC 6 ∶ 1 己烷∶ EtOAc)，得到标题化合物 (1.30g，91％，无色油状物 )。 1HNMR(400MHz， CDCl3)δ7.35(s，5H)，5.35(d， br， J ＝ 8.1Hz，1H)，5.23(d，J ＝ 12.2Hz，1H)，5.17(d，J ＝ 12.2Hz，1H)，4.48-4.53(m， 1H)，2.68-2.81(m，2H)，2.00(t， J ＝ 2.5Hz，1H)，1.44(s，9H)。 LCMS ： 对 于 C17H21NO4 分析计算值 ：303 ；实测值 ：304(M+H)+。
步骤 2 ：(S)-3-(1- 苄基 -1H-1，2，3- 三唑 -4- 基 )-2-( 叔丁氧基羰基氨基 ) 丙 酸苄酯 (cj-28) 的制备。
在 室 温 下， 往 (S)-2-( 叔 丁 氧 基 羰 基 氨 基 ) 戊 -4- 炔 酸 苄 酯 (0.50g，1.65mmol)、 抗 坏 血 酸 钠 (0.036g，0.18mmol)、 CuSO4-5H2O(0.022g，0.09mmol) 和 NaN3(0.13g，2.1mmol) 在 DMF-H2O(5ml，4 ∶ 1) 中 的 混 合 物 中 加 入 BnBr(0.24ml， 2.02mmol)，使混合物升温至 65 ℃。 5 小时后， LCMS 显示转化较慢。 再加入一份 NaN3(100mg)，继续加热 12 小时。 将反应物倒入 EtOAc 和 H2O 中后振荡。 分离各层，水 层用 EtOAc 萃取 3 次，合并的有机相经洗涤 (H2O x3，盐水 )，干燥 (Na2SO4)，过滤后浓 缩。残余物经快速纯化 (Biotage，40+M 0-5％ MeOH/CH2Cl2 ；TLC3％ MeOH/CH2Cl2)， 得到静置时固化的浅黄色油状物 (748.3mg，104％ )。 NMR 与所需产物一致，但表明存在 DMF。 产物无需进一步纯化便可照原样使用。 1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.84(s， 1H)，7.27-7.32(m，10H)，5.54(s，2H)，5.07(s，2H)，4.25(m，1H)，3.16(dd， J ＝ 1.0，5.3Hz，1H)，3.06(dd， J ＝ 5.3，14.7Hz)，2.96(dd， J ＝ 9.1，14.7Hz，1H)， 1.31(s，9H)。
LCMS ：对于 C24H28N4O4 分析计算值 ：436 ；实测值 ：437(M+H)+。
步骤 3 ：(S)-3-(1- 苄基 -1H-1，2，3- 三唑 -4- 基 )-2-( 甲氧羰基氨基 ) 丙酸 苄酯 (cj-29) 的制备。
往 (S)-3-(1- 苄基 -1H-1，2，3- 三唑 -4- 基 )-2-( 叔丁氧基羰基氨基 ) 丙酸苄 酯 (0.52g，1.15mmol) 在 CH2Cl2 中的溶液中加入 TFA(4ml)。 将混合物在室温下搅拌 2 小 时。 混合物经真空浓缩后，得到静置时固化的无色油状物。 将该产物溶于 THF-H2O 后冷 却至 0℃。 依次加入固体 NaHCO3(0.25g，3.00mmol) 和 ClCO2Me(0.25ml，3.25mmol)。 搅拌 1.5 小时后，混合物用 6N HCl 酸化至 pH ～ 2 并倒入 H2O-EtOAc 中。 分离各层，水 相用 EtOAc 萃取 2 次。 合并的有机层经洗涤 (H2O，盐水 )，干燥 (Na2SO4)，过滤后真 空浓缩，得到无色油状物 (505.8mg，111％，NMR 表明存在不确定杂质 )，在泵中静置时 固化。 产物无需进一步纯化便可照原样使用。 1HNMR(400MHz， DMSO-d6)δ7.87(s， 1 H) ， 7 . 70( d ， J ＝ 8. 1 Hz， 1 H)， 7.27-7. 32( m， 10 H) ， 5 . 54( s， 2 H) ， 5 . 10( d ， J ＝ 12.7Hz，1H)，5.06(d，J ＝ 12.7Hz，1H)，4.32-4.37(m，1H)，3.49(s，3H)，3.09(dd，J ＝ 5.6，14.7Hz，1H)，2.98(dd， J ＝ 9.6，14.7Hz，1H)。 LCMS ：对于 C21H22N4O4 分析
计算值 ：394 ；实测值 ：395(M+H)+。
步骤 4 ：(S)-2-( 甲氧羰基氨基 )-3-(1H-1，2，3- 三唑 -4- 基 ) 丙酸 (Cap-128) 的制备。
在 MeOH(5ml) 中的 Pd-C(82mg) 存在下，使 (S)-3-(1- 苄基 -1H-1，2，3- 三 唑 -4- 基 )-2-( 甲氧羰基氨基 ) 丙酸苄酯 (502mg，1.11mmol) 在大气压下氢化 12 小时。 混合物经硅藻土 过滤后，真空浓缩。 得到 (S)-2-( 甲氧羰基氨基 )-3-(1H-1， 2，3- 三唑 -4- 基 ) 丙酸 (266mg，111％，无色胶状物 )，被约 10％的甲酯污染。 产物 无需进一步纯化便可照原样使用。 1HNMR(400MHz， DMSO-d6)δ12.78(s， br，1H)，7.59(s，1H)，7.50(d， J ＝ 8.0Hz，1H)，4.19-4.24(m，1H)，3.49(s，3H)，3.12(dd， J ＝ 4.8Hz，14.9Hz，1H)，2.96(dd， J ＝ 9.9，15.0Hz，1H)。 LCMS ：对于 C7H10N4O4 分 析计算值 ：214 ；实测值 ：215(M+H)+。
Cap-129 的制备
步骤 1 ：(S)-2-( 苄氧基羰基氨基 )-3-(1H- 吡唑 -1- 基 ) 丙酸 (cj-31) 的制备将 (S)-2- 氧 代 氧 杂 环 丁 烷 -3- 基 氨 基 甲 酸 苄 酯 (0.67g，3.03mmol) 和 吡 唑 (0.22g，3.29mmol) 在 CH3CN(12ml) 中的悬浮液在 50℃下加热 24 小时。 将混合物冷却 至室温过夜后，将固体过滤，得到 (S)-2-( 苄氧基羰基氨基 )-3-(1H- 吡唑 -1- 基 ) 丙酸 (330.1mg)。 真空浓缩滤液后，用少量 CH3CN( 约 4ml) 研磨，得到第二产物 (43.5mg)。 总 产 量 370.4mg(44 ％ )。 熔 点 165.5-168 ℃。 文 献 熔 点 168.5-169.5 ℃ (Vederas 等， J.Am.Chem.Soc.1985，107，7105)。 1HNMR(400MHz， CD3OD)δ7.51(d， J ＝ 2.0， 1H)，7.48(s， J ＝ 1.5Hz，1H)，7.24-7.34(m，5H)，6.23m，1H)，5.05(d，12.7H， 1H)，5.03(d， J ＝ 12.7Hz，1H)，4.59-4.66(m，2H)，4.42-4.49(m，1H)。 LCMS ：对 于 C14H15N3O4 分析计算值 ：289 ；实测值 ：290(M+H)+。
步骤 2 ：(S)-2-( 甲氧羰基氨基 )-3-(1H- 吡唑 -1- 基 ) 丙酸 (Cap-129) 的制备。在 MeOH(5ml) 中 的 Pd-C(45mg) 存 在 下， 使 (S)-2-( 苄 氧 基 羰 基 氨 基 )-3-(1H- 吡 唑 -1- 基 ) 丙 酸 (0.20g，0.70mmol) 在 大 气 压 下 氢 化 2 小 时。 产 物 显 示不溶于 MeOH，因此将反应混合物用 5ml H2O 和几滴 6N HCl 稀释。 均匀溶液经硅
藻土过滤，真空除去 MeOH。 剩下的溶液经冷冻并冻干，得到黄色泡沫状物(188.9mg)。 将该产物悬浮于 THF-H2O(1 ∶ 1，10ml) 中后，冷却至 0 ℃。 小心地向 冷的混合物中加入 NaHCO3(146.0mg，1.74mmol)( 放出 CO2)。 停止放出气体后 ( 约 15 分钟 )，滴加 ClCO2Me(0.06ml，0.78mmol)。 搅拌混合物 2 小时后，用 6N HCl 酸化至 pH ～ 2 并倒入 EtOAc 中。 分离各层，水相用 EtOAC 萃取 (5 次 )。 合并的有机层经洗涤 ( 盐水 )，干燥 (Na2SO4)，过滤后浓缩，得到标题化合物 (117.8mg，79％，无色固体 )。 1 HNMR(400MHz， DMSO-d6)δ13.04(s，1H)，7.63(d， J ＝ 2.6Hz，1H)，7.48(d， J ＝ 8.1Hz，1H)，7.44(d， J ＝ 1.5Hz，1H)，6.19( 表观 t， J ＝ 2.0Hz，1H)，4.47(dd， J ＝ 3.0，12.9Hz，1H)，4.29-4.41(m，2H)，3.48(s，3H)。 LCMS ：对于 C8H11N3O4 分析计 算值 ：213 ；实测值 ：214(M+H)+。
Cap-130
按类似于文献给出的方法 (Calmes， M. ；Daunis， J. ；Jacquier， R. ；Verducci， J.Tetrahedron，1987，43(10)，2285)，使市售 (R)- 苯基甘氨酸酰基化来制备 Cap-130。
Cap-131
步骤 a ：往 (S)-2- 氨基 -3- 甲基丁酸苄酯盐酸盐 (2.44g ；10mmol) 和 Hunig’s 碱 (3.67mL，21mmol) 在 THF(50mL) 中的溶液中缓慢加入二甲基氨基甲酰氯 (0.92mL， 10mmol)。 将得到的白色悬浮物在室温下搅拌过夜 (16 小时 )，减压浓缩。 使残余物 在乙酸乙酯和水之间分配。 有机层用盐水洗涤，干燥 (MgSO4)，过滤，随后减压浓 缩。 得到的黄色油状物经快速色谱纯化，用乙酸乙酯∶己烷 (1 ∶ 1) 洗脱。 将收集的 流分真空浓缩，得到 2.35g 产物 (85％，澄清油状物 )。 1H NMR(300MHz， DMSO-d6) δppm 0.84(d， J ＝ 6.95Hz，3H)，0.89(d， J ＝ 6.59Hz，3H)，1.98-2.15(m，1H)， 2.80(s，6H)，5.01-5.09(m， J ＝ 12.44Hz，1H)，5.13(d， J ＝ 12.44Hz，1H)，6.22(d， J ＝ 8.05Hz，1H)，7.26-7.42(m，5H)。 LC( 条 件 1) ：RT ＝ 1.76 分 钟 ；MS ： 对 于 [M+H]+C16H22N2O3 分析计算值 ：279.17 ；实测值 ：279.03。
步骤 b ：往以上制备的中间体 (2.35g ；8.45mmol) 的 MeOH(50mL) 溶液中加入 Pd/C(10％；200mg)，得到的黑色悬浮物用 N2 冲洗 (3x) 并置于 H2(1atm) 下。在室温下将 混合物搅拌过夜，经微纤维滤器过滤来除去催化剂。 随后将得到的澄清溶液减压浓缩， 得到白色泡沫状的 1.43g(89％ )Cap-131，其无需进一步纯化使用。 1H NMR(500MHz， DMSO-d6)δppm 0.87(d， J ＝ 4.27Hz，3H)，0.88(d， J ＝ 3.97Hz，3H)，1.93-2.11(m， 1H)，2.80(s，6H)，3.90(dd， J ＝ 8.39，6.87Hz，1H)，5.93(d， J ＝ 8.54Hz，1H)，
12.36(s，1H)。 LC( 条件 1) ：RT ＝ 0.33 分钟 ；MS ：对于 [M+H]+C8H17N2O3 分析计算 值 ：189.12 ；实测值 ：189.04。
Cap-132
按照所述用于 Cap-131 的方法由 (S)-2- 氨基丙酸苄酯盐酸盐制备 Cap-132。 1H NMR(500MHz， DMSO-d6)δppm 1.27(d， J ＝ 7.32Hz，3H)，2.80(s，6H)，4.06(qt， 1H)，6.36(d，J ＝ 7.32Hz，1H)，12.27(s，1H)。 LC( 条件 1) ：RT ＝ 0.15 分钟 ；MS ： 对于 [M+H]+C6H13N2O3 分析计算值 ：161.09 ；实测值 ：161.00。
Cap-133
按照所述用于 Cap-47 的方法由 (S)-2- 氨基 -3- 甲基丁酸叔丁酯盐酸盐和氯甲 酸 2- 氟乙酯制备 Cap-133。 H NMR(500MHz， DMSO-d6)δppm 0.87(t， J ＝ 6.71Hz， 6H)，1.97-2.10(m，1H)，3.83(dd， J ＝ 8.39，5.95Hz，1H)，4.14-4.18(m，1H)， 4.20-4.25(m，1H)，4.50-4.54(m，1H)，4.59-4.65(m，1H)，7.51(d， J ＝ 8.54Hz， 1H)，12.54(s，1H).
Cap-134
按照所述用于 Cap-51 的方法由 (S)- 二乙基丙氨酸和氯甲酸甲酯制备 Cap-134。 H NMR (500 MHz ， DMSO - d 6 ) δ ppm 0 . 72-0 . 89( m ， 6 H ) ， 1 . 15-1 . 38( m ， 4 H ) ， 1.54-1.66(m，1H)，3.46-3.63(m，3H)，4.09(dd， J ＝ 8.85，5.19Hz，1H)，7.24(d， J ＝ 8.85Hz，1H)，12.55(s，1H)。 LC( 条 件 2) ：RT ＝ 0.66 分 钟 ；LC/MS ： 对 于 [M+H]+C9H18NO4 分析计算值 ：204.12 ；实测值 ：204.02。
Cap-135
1
在 25 ℃下，将 D-2- 氨基 -(4- 氟苯基 ) 乙酸 (338mg，2.00mmol)、在乙醚中的 1N HCl(2.0mL，2.0mmol) 和福尔马林 (37％，1mL) 在甲醇 (5mL) 中的溶液经气囊提 供的氢气氛用 10 ％钯 / 碳 (60mg) 氢化 16 小时。 随后该混合物经 Celite 硅藻土过滤， 得 到 Cap-135 的 盐 酸 盐 (316mg，80 ％， 白 色 泡 沫 )。 1H NMR(300MHz， MeOH-d4) δ7.59(dd， J ＝ 8.80，5.10Hz，2H)，7.29(t， J ＝ 8.6Hz，2H)，5.17(s，1H)，3.05(v br s，3H)，2.63(v br s，3H) ；Rt ＝ 0.19 分钟 ( 条件 -MS-W5) ；均一性指数 95％；LRMS ： 对于 [M+H]+C10H13FNO2 分析计算值 ：198.09 ；实测值 ：198.10。
Cap-136
在氮气下往冷却 (-50℃ ) 的 1- 苄基 -1H- 咪唑 (1.58g，10.0mmol) 在无水乙醚 (50mL) 中的悬浮液中滴加正丁基锂 (2.5M，在己烷中，4.0mL，10.0mmol)。 在 -50 ℃ 下搅拌 20 分钟后，往反应混合物中鼓泡通入干燥二氧化碳 ( 通过 Drierite)10 分钟，随后 让其升至 25℃。 往反应混合物中加入二氧化碳形成大量的沉淀，将其过滤，得到吸湿性 白色固体，将其溶解在水 (7mL) 中，酸化至 pH ＝ 3，冷却，用刮擦诱导结晶。 将该沉 淀过滤，得到白色固体，将其悬浮在甲醇中，用 1N HCl/ 乙醚 (4mL) 处理并真空浓缩。 将残余物冻干除去水 (5mL)，得到 Cap-136 的盐酸盐，其为白色固体 (817mg，40％ )。 1 H NMR(300MHz， DMSO-d6)δ7.94(d， J ＝ 1.5Hz，1H)，7.71(d， J ＝ 1.5Hz，1H)， 7.50-7.31(m，5H)，5.77(s，2H) ；Rt ＝ 0.51 分钟 ( 条件 -MS-W5) ；均一性指数 95％ ； LRMS ：对于 [M+H]+C11H12N2O2 分析计算值 ：203.08 ；实测值 ：203.11。
Cap-137
Cap-137，步骤 a在氮气下，将 1- 氯 -3- 氰基异喹啉 (188mg，1.00mmol ；按照 WO2003/099274 中的方法制备 )(188mg，1.00mmol)、氟化铯 (303.8mg，2.00mmol)、二氯化双 ( 三叔丁 基膦 ) 合钯 (10mg，0.02mmol) 和 2-( 三丁基甲锡烷基 ) 呋喃 (378μL，1.20mmol) 在无
水二烷 (10mL) 中的悬浮液于 80℃下加热 16 小时，随后将其冷却至 25℃并在剧烈搅拌下用饱和氟化钾水溶液处理 1 小时。 使混合物在乙酸乙酯和水之间分配，将有机相分 离，用盐水洗涤，经 Na2SO4 干燥，过滤并浓缩。 残余物经硅胶纯化 ( 用 0％至 30％乙酸乙酯 / 己烷洗脱 )，得到可原样使用的 Cap-137，步骤 a(230mg，105％，白色固体 )。 Rt ＝ 1.95 分钟 ( 条件 -MS-W2) ；均一性指数 90％；LRMS ：对于 [M+H]+C14H8N2O 分析计 算值 ：221.07 ；实测值 ：221.12。
Cap-137
往 Cap137， 步 骤 a(110mg，0.50mmol) 和 高 碘 酸 钠 (438mg，2.05mmol) 在 四 氯化碳 (1mL)、乙腈 (1mL) 和水 (1.5mL) 中的悬浮液中加入三氯化钌水合物 (2mg， 0.011mmol)。 在 25℃下将混合物搅拌 2 小时，随后使其在二氯甲烷和水之间分配。 将 水层分离，用二氯甲烷再萃取两次，合并的二氯甲烷萃取液经 Na2SO4 干燥，过滤并浓 缩。 残余物用己烷研磨，得到 Cap-137(55mg，55％，淡灰色固体 )。 Rt ＝ 1.10 分钟 ( 条 件 -MS-W2) ；均一性指数 90％ ；LCMS ：对于 [M+H]+C11H8N2O2 分析计算值 ：200.08 ； 实测值 ：200.08。
Caps 138-158
合成策略方法 A
Cap-138
Cap-138，步骤 a往 搅 拌 的 5- 羟 基 异 喹 啉 ( 按 照 WO2003/099274 中 的 方 法 制 备 )(2.0g， 13.8mmol) 和三苯基膦 (4.3g，16.5mmol) 在四氢呋喃 (20mL) 的悬浮液中分批加入无水甲 醇 (0.8mL) 和偶氮二甲酸二乙酯 (3.0mL，16.5mmol)。 在室温下将混合物搅拌 20 小时， 随后用乙酸乙酯稀释并用盐水洗涤，经 Na2SO4 干燥，过滤并浓缩。 将残余物预吸收在硅 胶上并纯化 ( 用 40％乙酸乙酯 / 己烷洗脱 )，得到 Cap-138，步骤 a(1.00g，45％，浅黄色 固体 )。 1H NMR(CDCl3，500MHz)δ9.19(s，1H)，8.51(d，J ＝ 6.0Hz，1H)，7.99(d， J ＝ 6.0Hz，1H)，7.52-7.50(m，2H)，7.00-6.99(m，1H)，4.01(s，3H) ；Rt ＝ 0.66 分钟
( 条件 D2) ；均一性指数 95％ ；LCMS ：对于 [M+H]+C10H10NO 分析计算值 ：160.08 ；实 测值 ：160.10。
Cap-138，步骤 b
在室温下往搅拌的 Cap 138，步骤 a(2.34g，14.7mmol) 在无水二氯甲烷 (50mL) 中的溶液中一次性加入对 - 氯过苯甲酸 (77％，3.42g，19.8mmol)。 在搅拌 20 小时后， 加入碳酸钾粉末 (2.0g)，在室温下将该混合物搅拌 1 小时，随后过滤并浓缩，得到浅黄色 固体状的 Cap-138，步骤 b，其纯度足以进行下一步 (2.15g，83.3％ )。 1H NMR(CDCl3， 400MHz)δ8.73(d， J ＝ 1.5Hz，1H)，8.11(dd， J ＝ 7.3，1.7Hz，1H)，8.04(d， J ＝ 7.1Hz，1H)，7.52(t， J ＝ 8.1Hz，1H)，7.28(d， J ＝ 8.3Hz，1H)，6.91(d， J ＝ 7.8Hz， 1H)，4.00(s，3H) ；Rt ＝ 0.92 分 钟， ( 条 件 -D1) ；均 一 性 指 数 90 ％ ；LCMS ：对 于 [M+H]+C10H10NO2 分析计算值 ：176.07 ；实测值 ：176.0。
Cap-138，步骤 c
在 室 温、 氮 气 下， 往 搅 拌 的 Cap 138， 步 骤 b(0.70g，4.00mmol) 和 三 乙 胺 (1.1mL，8.00mmol) 在 无 水 乙 酮 (20mL) 中 的 溶 液 中 加 入 三 甲 基 甲 硅 烷 基 氰 化 物 (1.60mL，12.00mmol)。 在 75 ℃下将混合物加热 20 小时，随后将其冷却至室温，用乙 酸乙酯稀释并用饱和碳酸氢钠溶液和盐水洗涤，随后经 Na2SO4 干燥并将溶剂浓缩。 残 余物经硅胶快速色谱纯化 ( 用 5 ％乙酸乙酯 / 己烷至 25 ％乙酸乙酯 / 己烷洗脱 )，得到 Cap-138，步骤 c(498.7mg，白色晶状固体 ) 和 223mg 由滤液回收的其他 Cap-138，步骤 c。 1H NMR(CDCl3，500MHz)δ8.63(d， J ＝ 5.5Hz，1H)，8.26(d， J ＝ 5.5Hz，1H)， 7.88(d，J ＝ 8.5Hz，1H)，7.69(t，J ＝ 8.0Hz，1H)，7.08(d，J ＝ 7.5Hz，1H)，4.04(s， 3H) ；Rt ＝ 1.75 分钟， ( 条件 -D1) ；均一性指数 90％ ；LCMS ：对于 [M+H]+C11H9N2O
分析计算值 ：185.07 ；实测值 ：185.10。
Cap-138
Cap-138，步骤 c(0.45g，2.44mmol) 用 5N 氢氧化钠溶液 (10mL) 处理并将得到 的悬浮液在 85℃下加热 4 小时，冷却至 25℃，用二氯甲烷稀释并用 1N 盐酸酸化。 将有 机相分离，用盐水洗涤，经 Na2SO4 干燥，浓缩至 1/4 体积并过滤，得到 Cap-138(0.44g，88.9 ％， 黄 色 固 体 )。 1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ13.6(br s，1H)，8.56(d， J ＝ 6.0Hz，1H)，8.16(d，J ＝ 6.0Hz，1H)，8.06(d，J ＝ 8.8Hz，1H)，7.71-7.67(m，1H)， 7.30(d，J ＝ 8.0Hz，1H)，4.02(s，3H) ；Rt ＝ 0.70 分钟 ( 条件 -D1) ；均一性指数 95％； LCMS ：对于 [M+H]+C11H10NO3 分析计算值 ：204.07 ；实测值 ：204.05。
合成策略方法 B( 衍生自 Tetrahedron Letters，2001，42，6707).
Cap-139
Cap-139，步骤 a往装有氩脱气的 1- 氯 -6- 甲氧基异喹啉 (1.2g，6.2mmol ；按照 WO2003/099274 中 的 方 法 制 备 )、 氰 化 钾 (0.40g，6.2mmol)、1，5- 双 ( 二 苯 基 膦 基 ) 戊 烷 (0.27g， 0.62mmol) 和乙酸钯 (II)(70mg，0.31mmol) 在无水甲苯 (6mL) 中的悬浮液的厚壁、螺旋 盖小瓶中加入 N，N，N’，N’- 四甲基乙二胺 (0.29mL，2.48mmol)。 将小瓶密封，在 150℃下加热 22 小时，随后让其冷却至 25℃。 反应混合物用乙酸乙酯稀释，用水和盐水 洗涤，经 Na2SO4 干燥，过滤并浓缩。 残余物经硅胶纯化，用 5％乙酸乙酯 / 己烷至 25％ 乙酸乙酯 / 己烷洗脱，得到 Cap-139，步骤 a(669.7mg，白色固体 )。 1H NMR(CDCl3， 500MHz)δ8.54(d， J ＝ 6.0Hz，1H)，8.22(d， J ＝ 9.0Hz，1H)，7.76(d， J ＝ 5.5Hz， 1H)，7.41-7.39(m，1H)，7.13(d， J ＝ 2.0Hz，1H)，3.98(s，3H) ；Rt ＝ 1.66 分钟 ( 条 件 -D1) ；均一性指数 90％ ；LCMS ：对于 [M+H]+C11H9N2O 分析计算值 ：185.07 ；实测 值 ：185.20。
Cap-139
按 照 针 对 Cap138 所 述 的 方 法 用 5NNaOH 使 Cap-139， 步 骤 a 碱 水 解 来 制 备 Cap-139。 1H NMR(400MHz， DMSO-d6)δ13.63(v br s，1H)，8.60(d， J ＝ 9.3Hz， 1H)，8.45(d， J ＝ 5.6Hz，1H)，7.95(d， J ＝ 5.9Hz，1H)，7.49(d， J ＝ 2.2Hz，1H)， 7.44(dd，J ＝ 9.3，2.5Hz，1H)，3.95(s，3H) ；Rt ＝ 0.64 分钟 ( 条件 -D1) ；均一性指数90％ ；LCMS ：对于 [M+H]+C11H10NO3 分析计算值 ：204.07 ；实测值 ：204.05。
Cap-140
Cap-140，步骤 a在 25 ℃、 氮 气 下， 往 剧 烈 搅 拌 的 1，3- 二 氯 -5- 乙 氧 基 异 喹 啉 (482mg， 2.00mmol ；按照 WO2005/051410 中方法制备 )、乙酸钯 (II)(9mg，0.04mmol)、碳酸钠 (223mg，2.10mmol) 和 1，5- 双 ( 二苯基膦基 ) 戊烷 (35mg，0.08mmol) 在无水二甲基乙 酰胺 (2mL) 中的混合物中加入 N， N， N’， N’ - 四甲基乙二胺 (60mL，0.40mmol)。 在 10 分钟后，将混合物加热至 150℃，随后在 18 小时内使用注射泵以每一次 1mL 加入 丙酮氰醇的储备液 ( 由在 4.34mL DMA 中的 457μL 丙酮氰醇制备 )。 使混合物在乙酸 乙酯和水之间分配，将有机层分离，用盐水洗涤，经 Na2SO4 干燥，过滤并浓缩。 残余 物经硅胶纯化，用 10％乙酸乙酯 / 己烷至 40％乙酸乙酯 / 己烷洗脱，得到 Cap-140，步 骤 a(160mg，34％，黄色固体 )。 Rt ＝ 2.46 分钟 ( 条件 -MS-W2) ；均一性指数 90％ ； LCMS ：对于 [M+H]+C12H9ClN2O 分析计算值 ：233.05 ；实测值 ：233.08。
Cap-140
如下述用于制备 Cap141 的方法通过用 12NHCl 使 Cap-140，步骤 a 酸水解来 制 备 Cap-140。 Rt ＝ 2.24 分 钟 ( 条 件 -MS-W2) ；均 一 性 指 数 90 ％ ；LCMS ：对 于 [M+H]+C12H11ClNO3 分析计算值 ：252.04 ；实测值 ：252.02。
Cap-141
Cap-141，步骤 a如用于制备 Cap-140，步骤 a 的方法中所述，由 1- 溴 -3- 氟异喹啉 ( 使用 J.Med. Chem.1970，13，613 中所列方法由 3- 氨基 -1- 溴异喹啉制备 ) 来制备 Cap-141，步骤 a( 参 见 上 文 )。 1H NMR(500MHz， CDCl3)δ8.35(d， J ＝ 8.5Hz，1H)，7.93(d， J ＝ 8.5Hz，1H)，7.83(t，J ＝ 7.63Hz，1H)，7.77-7.73(m，1H)，7.55(s，1H) ；Rt ＝ 1.60 分 钟 ( 条件 -D1) ；均一性指数 90％；LCMS ：对于 [M+H]+C10H6FN2 分析计算值 ：173.05 ； 实测值 ：172.99。
Cap-141
Cap-141，步骤 a(83mg，0.48mmol) 用 12N HCl(3mL) 处理，得到的浆状物于 80℃下加热 16 小时，随后将其冷却至室温并用水 (3mL) 稀释。将该混合物搅拌 10 分钟， 随后过滤，得到 Cap-141(44.1mg，47.8％，灰白色固体 )。 滤液用二氯甲烷稀释并用盐 水洗涤，经 Na2SO4 干燥，随后浓缩，得到额外的 Cap-141，其纯度足以直接进行下一步
骤 (29.30mg，31.8％ )。 1H NMR(DMSO-d6，500MHz)δ14.0(br s，1H)，8.59-8.57(m， 1H)，8.10(d，J ＝ 8.5Hz，1H)，7.88-7.85(m，2H)，7.74-7.71(m，1H) ；Rt ＝ 1.33 分钟 ( 条件 -D1) ；均一性指数 90％ ；LCMS ：对于 [M+H]+C10H7FNO2 分析计算值 ：192.05 ； 实测值 ：191.97。
Cap-142
Cap-142，步骤 a如用于制备 Cap-138，步骤 b 和 c 的两步骤方法中所述，由 4- 溴异喹啉 N- 氧化 物制备 Cap-142，步骤 a。 Rt ＝ 1.45 分钟 ( 条件 -MS-W1) ；均一性指数 90％；LCMS ： 对于 [M+H]+C10H6BrN2 分析计算值 ：232.97 ；实测值 ：233.00。
Cap-142，步骤 b
往 氩 脱 气 的 Cap-142， 步 骤 a(116mg，0.50mmol)、 磷 酸 三 钾 (170mg， 0.80mmol)、 乙 酸 钯 (II)(3.4mg，0.015mmol) 和 2-( 二 环 己 基 膦 基 ) 联 苯 (11mg， 0.03mmol) 在无水甲苯 (1mL) 中的悬浮液中加入吗啉 (61μL，0.70mmol)。 将混合物在
100℃下加热 16 小时，冷却至 25℃并经硅藻土过滤。 残余物经硅胶纯化，用10％至 70％乙酸乙酯 / 己烷洗脱，得到 Cap-142，步骤 b(38mg，32％，黄色固体 )，将 其直接用于下一步。 Rt ＝ 1.26 分钟 ( 条件 -MS-W1) ；均一性指数 90％ ；LCMS ：对于 [M+H]+C14H14N3O 分析计算值 ：240.11 ；实测值 ：240.13。
Cap-142
如 用 于 Cap 138 的 方 法 中 所 述， 由 Cap-142， 步 骤 b 用 5N 氢 氧 化 钠 制 备 Cap-142。 Rt ＝ 0.72 分 钟 ( 条 件 -MS-W1) ； 均 一 性 指 数 90 ％ ；LCMS ： 对 于 [M+H]+C14H15N2O3 分析计算值 ：259.11 ；实测值 ：259.08。
Cap-143
Cap-143，步骤 a往搅拌的 3- 氨基 -1- 溴异喹啉 (444mg，2.00mmol) 在无水二甲基甲酰胺 (10mL) 中的溶液中一次性加入氢化钠 (60％，未洗涤，96mg，2.4mmol)。 在 25℃下将混合物搅 拌 5 分钟，随后加入 2- 溴乙基醚 (90％，250μL，2.00mmol)。 在 25℃下将混合物继续 搅拌 5 小时，在 75℃下搅拌 72 小时，随后将其冷却至 25℃，用饱和氯化铵溶液猝灭并 用乙酸乙酯稀释。 将有机层分离，用水和盐水洗涤，经 Na2SO4 干燥，过滤并浓缩。 残 余物经硅胶纯化，用 0 ％至 70 ％乙酸乙酯 / 己烷洗脱，得到 Cap-143，步骤 a(180mg， 31％，黄色固体 )。 Rt ＝ 1.75 分钟 ( 条件 -MS-W1) ；均一性指数 90％ ；LCMS ：对于
[M+H]+C13H14BrN2O 分析计算值 ：293.03 ；实测值 ：293.04。
Cap-143
往冷的 (-60℃ )Cap-143，步骤 a(154mg，0.527mmol) 在无水四氢呋喃 (5mL) 中 的溶液中加入正丁基锂在己烷中的溶液 (2.5M，0.25mL，0.633mmol)。 在 10 分钟后，往 反应混合物中鼓泡通入干燥二氧化碳 10 分钟，随后用 1NHCl 猝灭并让其升至 25℃。 混合 物用二氯甲烷萃取 (3x30mL)，将合并的有机萃取液真空浓缩。 残余物经反相 HPLC 纯化 (MeOH/ 水 /TFA)，得到 Cap-143(16mg，12％ )。 Rt ＝ 1.10 分钟 ( 条件 -MS-W1) ；均 一性指数 90％；LCMS ：对于 [M+H]+C14H15N2O3 分析计算值 ：259.11 ；实测值 ：259.08。
Cap-144
Cap-144，步骤 a往冷的 (0 ℃ ) 发烟硝酸 (10mL) 和浓硫酸 (10mL) 的溶液中少量分批加入 1， 3- 二氯异喹啉 (2.75g，13.89mmol)。 在 0℃下将混合物搅拌 0.5 小时，随后逐渐升至 25℃ 并搅拌 16 小时。 随后将混合物倾入含碎冰和水的烧杯中，在 0℃下将得到的悬浮液搅拌 1 小时，随后过滤，得到 Cap-144，步骤 a(2.73g，81％，黄色固体 )，将其直接使用。 Rt ＝ 2.01 分钟。 ( 条件 -D1) ；均一性指数 95％；LCMS ：对于 [M+H]+C9H5Cl2N2O2 分析计 算值 ：242.97 ；实测值 ：242.92。
Cap-144，步骤 b
将 Cap-144， 步 骤 a(0.30g，1.23mmol) 溶 解 在 甲 醇 (60mL) 中 并 用 氧 化 铂 (30mg) 处理，在 H2(7psi) 下悬浮液再经 Parr 氢化 1.5 小时。 随后加入福尔马林 (5mL) 和额外的氧化铂 (30mg)，在 H2(45psi) 下悬浮液再经 Parr 氢化 13 小时。 随后通过硅藻土
抽滤并浓缩至 1/4 体积。 抽滤得到的沉淀，得到黄色固体状的标题化合物，其经硅胶快速色谱纯化，用 5％乙酸乙酯 / 己烷至 25％乙酸乙酯 / 己烷洗脱，得到浅黄色固 体状的 Cap-144，步骤 b(231mg，78％ )。 Rt ＝ 2.36 分钟 ( 条件 -D1) ；均一性指数 95％； 1 H NMR(400MHz， CDCl3)δ8.02(s，1H)，7.95(d， J ＝ 8.6Hz，1H)，7.57-7.53(m， 1H)，7.30(d， J ＝ 7.3Hz，1H)，2.88(s，6H) ；LCMS ： 对 于 [M+H]+C11H11Cl2N2 分 析 计 算 值 ：241.03 ；实 测 值 ：241.02。 HRMS ：对 于 [M+H]+C11H11Cl2N2 分 析 计 算 值 ： 241.0299 ；实测值 ：241.0296。
Cap-144，步骤 c
按照制备 Cap-139，步骤 a 中所述方法，由 Cap-144，步骤 b 制备 Cap-144，步 骤 c。 Rt ＝ 2.19 分钟 ( 条件 -D1) ；均一性指数 95 ％ ；LCMS ：对于 [M+H]+C12H11ClN3 分析计算值 ：232.06 ；实测值 ：232.03。 HRMS ：对于 [M+H]+C12H11ClN3 分析计算值 ： 232.0642 ；实测值 ：232.0631。
Cap-144按照 Cap-141 中所述方法制备 Cap-144。 Rt ＝ 2.36 分钟 ( 条件 -D1) ；90％ ； LCMS ：对于 [M+H]+C12H12ClN2O2 分析计算值 ：238.01 ；实测值 ：238.09。
Caps-145 至 162
除非另有说明，否则如下所列出按照制备 Cap-138( 方法 A) 或 Cap-139( 方法 B) 中所述方法由合适的 1- 氯异喹啉制备 Caps-145 至 162。
Cap-163往 2- 酮 基 丁 酸 (1.0g，9.8mmol) 在 乙 醚 (25ml) 中 的 溶 液 中 滴 加 苯 基 溴 化 镁 (22ml，1M，在 THF 中 )。 在～ 25℃、氮气下，将反应搅拌 17.5 小时。 反应用 1N HCl 酸化，产物用乙酸乙酯萃取 (3x100ml)。 合并的有机层依次用水、盐水洗涤，经 MgSO4 干燥。 在真空浓缩后，得到白色固体。 固体用己烷 / 乙酸乙酯重结晶，得到白色针状的 Cap-163(883.5mg)。 1H NMR(DMSO-d6， δ ＝ 2.5ppm，500MHz) ：12.71(br s，1H)， 7 . 54-7.52( m，2H )，7 .34-7 . 31( m， 2 H ) ， 7 .26-7. 23( m， 1 H )， 5 . 52-5 . 39(br s ， 1 H )， 2.11(m，1H)，1.88(m，1H)，0.79( 表观 t， J ＝ 7.4Hz，3H)。
Cap-164
在 Parr 瓶中将 2- 氨基 -2- 苯基丁酸 (1.5g，8.4mmol)、甲醛 (14mL，37％，在水 中 )、1N HCl(10mL) 和 10％ Pd/C(0.5mg) 在 MeOH(40mL) 中的混合物暴露在 H2(50psi) 中 42 小时。 反应经 Celite 硅藻土过滤，真空浓缩，将残余物溶解在 MeOH(36mL) 中，产 物经反相 HPLC 纯化 (MeOH/H2O/TFA)，得到白色固体状的 Cap-164 的 TFA 盐 (1.7g)。 1 HNMR(DMSO-d6，δ ＝ 2.5ppm，500MHz)7.54-7.47(m，5H)，2.63(m，1H)，2.55(s， 6H)，2.31(m，1H)，0.95( 表观 t， J ＝ 7.3Hz，3H)。
Cap-165往 2- 氨基 -2- 茚满甲酸 (258.6mg，1.46mmol) 和甲酸 (0.6ml，15.9mmol) 在 1， 2- 二氯乙烷 (7ml) 中的混合物中加入甲醛 (0.6ml，37 ％，在水中 )。 在～ 25 ℃下将混 合物搅拌 15 分钟，随后在 70℃下加热 8 小时。 将挥发性组分真空除去，将残余物溶解 在 DMF(14mL) 中并经反相 HPLC 纯化 (MeOH/H2O/TFA)，得到粘稠油状的 Cap-165 的
TFA 盐 (120.2mg)。 1H NMR(DMSO-d6，δ ＝ 2.5ppm，500MHz) ：7.29-7.21(m，4H)， 3.61(d， J ＝ 17.4Hz，2H)，3.50(d， J ＝ 17.4Hz，2H)，2.75(s，6H)。 LC/MS ：对 于 [M+H]+C12H16NO2 分析计算值 ：206.12 ；实测值 ：206.07。
Cap-166a 和 -166b
Cap-166a ：非对映体 -1
Cap-166b ：非对映体 -2
按照所述用于合成 Cap-7a 和 Cap-7b 的方法，由 (1S，4S)-(+)-2- 甲基 -2， 5- 二氮杂二环 [2.2.1] 庚烷 (2HBr) 制备 Caps-166a 和 -166b，不同之处在于使用半制备型 Chrialcel OJ 柱 (20x250mm，10μm，用 85 ∶ 15 庚烷 / 乙醇混合物以 10mL/ 分钟的洗脱 速率洗脱 25 分钟 ) 分离苄基酯中间体。 Cap-166b ：1H NMR(DMSO-d6，δ ＝ 2.5ppm， 500MHz) ：7.45(d， J ＝ 7.3Hz，2H)，7.27-7.19(m，3H)，4.09(s，1H)，3.34( 表 观 br s，1H)，3.16( 表 观 br s，1H)，2.83(d， J ＝ 10.1Hz，1H)，2.71(m，2H)，2.46(m， 1H)，2.27(s，3H)，1.77(d， J ＝ 9.8Hz，1H)，1.63(d， J ＝ 9.8Hz，1H)。 LC/MS ：对 于 [M+H]+C14H19N2O2 分析计算值 ：247.14 ；实测值 ：247.11。
Cap-167
在～ 25℃下将消旋的 Boc-1，3- 二氢 -2H- 异吲哚甲酸 (1.0g，3.8mmol) 在 20％ TFA/CH2Cl2 中的溶液搅拌 4 小时。 真空除去所有挥发性组分。 在 Parr 瓶中得到的粗品、 甲醛 (15mL，37 ％，在水中 )、1N HCl(10mL) 和 10 ％ Pd/C(10mg) 在 MeOH 中的混合 物暴露于 H2(40PSI)23 小时。 反应混合物经 Celite 硅藻土过滤并真空浓缩，得到黄色泡 沫状的 Cap-167(873.5mg)。 1H NMR(DMSO-d6，δ ＝ 2.5ppm，500MHz)7.59-7.38(m， 4H)，5.59(s，1H)，4.84(d， J ＝ 14Hz，1H)，4.50(d， J ＝ 14.1Hz，1H)，3.07(s， 3H)。 LC/MS ：对于 [M+H]+C10H12NO2 分析计算值 ：178.09 ；实测值 ：178.65。
Cap-168
按照制备 Cap-167 中所述方法由消旋的 Boc- 氨基茚满 -1- 甲酸制备消旋的Cap-168。 粗品原样使用。
Cap-169
将 2- 氨 基 -2- 苯 基 丙 酸 盐 酸 盐 (5.0g，2.5mmol)、 甲 醛 (15ml，37 ％， 在 水 中 )、1N HCl(15ml) 和 10 ％ Pd/C(1.32g) 在 MeOH(60mL) 中的混合物置于 Parr 瓶中并 在氢 (55PSI) 下振摇 4 天。 反应混合物经 Celite 硅藻土过滤并真空浓缩。 将残余物溶 解在 MeOH 中并经反相制备型 -HPLC(MeOH/ 水 /TFA) 纯化，得到 Cap-169 的 TFA 盐 (2.1g，粘稠状的半固体 )。 1H NMR(CDCl3，δ ＝ 7.26ppm，500MHz) ：7.58-7.52(m， 2H)，7.39-7.33(m，3H)，2.86(br s，3H)，2.47(br s，3H)，1.93(s，3H)。 LC/MS ：对 于 [M+H]+C11H16NO2 分析计算值 ：194.12 ；实测值 ：194.12。
Cap-170
往在水 (15ml) 中的 (S)-2- 氨基 -2-( 四氢 -2H- 吡喃 -4- 基 ) 乙酸 (505mg ； 3.18mmol ；得自 Astatech) 中加入碳酸钠 (673mg ；6.35mmol)，将得到的混合物冷却至 0℃，随后在 5 分钟内滴加氯甲酸甲酯 (0.26ml ；3.33mmol)。 让反应搅拌 18 小时同时让 浴融化至室温。 随后使反应混合物在 1N HCl 和乙酸乙酯之间分配。 将有机层除去，水 层进一步用两部分乙酸乙酯再萃取。 合并的有机层用盐水洗涤，经硫酸镁干燥，过滤并 真空浓缩，得到无色残余物 Cap-170a。 1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δppm 12.65(1H， br s)，7.44(1H， d， J ＝ 8.24Hz)，3.77-3.95(3H， m)，3.54(3H， s)，3.11-3.26(2H， m)，1.82-1.95(1H， m)，1.41-1.55(2H， m)，1.21-1.39(2H， m) ；LC/MS ： 对 于 [M+H]+C9H16NO5 分析计算值 ：218.1 ；实测值 ：218.1。
Cap-171
鼓 泡 通 过 氮 气 使 2-( 苄 基 氧 基 羰 基 氨 基 )-2-( 氧 杂 环 丁 烷 -3- 叉 基 ) 乙 酸 甲 酯 (200mg，0.721mmol ；Il Farmaco(2001)，56，609-613) 在 乙 酸 乙 酯 (7ml) 和 CH2Cl2(4.00ml) 中的溶液脱气 10 分钟。 随后加入二碳酸二甲基酯 (0.116ml，1.082mmol) 和 Pd/C(20mg，0.019mmol)，将反应混合物装上氢气囊并在环境温度下搅拌过夜，直至 TLC(95 ∶ 5 的 CH2Cl2/MeOH ：由 1g Ce(NH4)2SO4、6g 钼酸铵、6ml 硫酸和 100ml 水制
备的显色剂显色 ) 表明完全转化。 反应经 celite 硅藻土过滤并浓缩。 残余物经 纯化 ( 用二氯甲烷负载在 25samplet 上 ；在 25S 柱上用 3 个柱体积的二氯甲烷洗脱，随后 0 至 5％ MeOH/ 二氯甲烷洗脱 250ml，随后保持在 5％ MeOH/ 二氯甲烷洗脱 250ml ；9ml 流分 )。收集含所需物质的流分并浓缩，得到 120mg(81％ ) 无色油状的 2-( 甲氧基羰基氨 基 )-2-( 氧杂环丁烷 -3- 基 ) 乙酸甲酯。 1H NMR(500MHz，氘氯仿 )δppm3.29-3.40(m， J ＝ 6 . 71 Hz ， 1 H )3 . 70( s ， 3 H )3 . 74( s ， 3 H )4 . 55( t ， J ＝ 6 . 41 Hz ， 1 H )4 . 58-4 . 68( m ， 2H)4.67-4.78(m，2H)5.31(br s，1H)。 LC/MS ：对于 [M+H]+ C8H14NO5 分析计算值 ： 204.2 ；实测值 ：204.0。
往 在 THF(2mL) 和 水 (0.5mL) 中 的 2-( 甲 氧 基 羰 基 氨 基 )-2-( 氧 杂 环 丁 烷 -3- 基 ) 乙 酸 甲 酯 (50mg，0.246mmol) 中 加 入 氢 氧 化 锂 一 水 合 物 (10.33mg， 0.246mmol)。 在环境温度下将得到的溶液搅拌过夜。 TLC(1 ∶ 1 的 EA/ 己烷 ；Hanessian 显色剂 [1g Ce(NH4)2SO4、6g 钼酸铵、6ml 硫酸和 100ml 水 ]) 表明剩余～ 10％原料。 另 加入 3mg LiOH 并让其搅拌过夜直至 TLC 表明无原料剩余。 真空浓缩并置于高度真空过 夜，得到 55mg 2-( 甲氧基羰基氨基 )-2-( 氧杂环丁烷 -3- 基 ) 乙酸锂，其为无色固体。 1 H NMR(500MHz， MeOD)δppm 3.39-3.47(m，1H)3.67(s，3H)4.28(d， J ＝ 7.93Hz， 1H)4.64(t， J ＝ 6.26Hz，1H)4.68(t， J ＝ 7.02Hz，1H)4.73(d， J ＝ 7.63Hz，2H)。 实施例 下面结合某些实施方案，对本公开将进行描述，所述实施方案并不限制本公开 的范围。 相反，本公开涵盖所有可包括在权利要求书范围内的替代、修改和等同内容。 因此，下列实施例，包括具体实施方案，将说明本公开的一种实施法，要了解的是，实 施例的目的是用于说明某些实施方案，并相信是以最有用和最易理解的方式对其方法和 构思进行描述。
溶液百分数表示重量与体积关系，溶液比表示体积与体积关系，除非另有说 明。 核磁共振 (NMR) 谱用 Bruker 300、400 或 500MHz 分光计记录 ；化学位移 (δ) 用 百万分之几报告。 按照 Still 快速色谱技术 (J.Org.Chem.1978，43，2923)，用硅胶 (SiO2) 进行快速色谱法。
将 Shimadzu LC 系统与 Waters Micromass ZQ MS 系统联用，进行纯度评价和低分 辨质谱分析。 应当注意的是，保留时间在不同仪器之间略有不同。 除非另有说明，否则 测定化合物保留时间 (RT) 所采用的 LC/MS 条件 ( 称为条件 I) 为 ：
柱＝ Phenomenex-Luna 4.6X50mm S10
开始％ B ＝ 0
最终％ B ＝ 100
梯度时间＝ 4 分钟
流速＝ 4ml/ 分钟
波长＝ 220nm
溶剂 A ＝ 10％ CH3OH-90％ H2O-0.1％ TFA
溶剂 B ＝ 90％ CH3OH-10％ H2O-0.1％ TFA
实施例 1
实施例 1，步骤 a往 6- 溴 -4- 氯 喹 唑 啉 (0.979g，4.02mmol) 和 4-(N- 吗 啉 代 ) 苯 胺 (0.783g， 4.39mmol) 在 CH3CN(15mL) 中 的 非 均 相 混 合 物 中 滴 加 二 异 丙 基 乙 基 胺 (0.8mL， 4.59mmol)， 回 流 25.4 小 时。 将 混 合 物 从 热 浴 中 移 出， 让 其 在 室 温 下 静 置 16.5 小 时。 将 沉 淀 滤 出， 用 CH3CN 洗 涤 并 真 空 干 燥， 得 到 溴 化 物 1a(1.336g， 浅 绿 色 粉
末 )。 1H NMR(DMSO-d6， δ ＝ 2.50，400MHz) ：9.76(s，1H)，8.83(d， J ＝ 2.3， 1H)，8.54(s，1H)，7.95(dd， J ＝ 8.9，2.1，1H)，7.69(d， J ＝ 8.8，1H)，7.65(d， J ＝ 9.1，2H)，6.99(d， J ＝ 9.1，2H)，3.75(m，4H)，3.10(m，4H)。 LC/MS ： 对 于 [M+H]+C18H18BrN4O 分析计算值 ：385.07 ；实测值 ：385.01。
实施例 1，步骤 b
在 15 分 钟 内 往 N-Boc-L- 脯 氨 酸 (7.139g，33.17mmol)、 HATU(13.324g， 35.04mmol)、2- 氨 基 -1-(4- 溴 苯 基 ) 乙 酮 的 盐 酸 盐 (8.127g，32.44mmol) 在 DMF(105mL) 中 的 非 均 相 混 合 物 中 滴 加 二 异 丙 基 乙 基 胺 (18mL，103.3mmol)， 在 环 境温度下搅拌 55 分钟。 将大部分挥发性组分真空除去，使得到的残余物在乙酸乙酯 (300mL) 和水 (200mL) 之间分配。 有机层用水 (200mL) 和盐水洗涤，干燥 (MgSO4)， 过滤，随后真空浓缩。 由残余物制备硅胶筛目，并进行快速色谱法处理 ( 硅胶 ；50-60％ 乙 酸 乙 酯 / 己 烷 )， 得 到 酮 酰 胺 1b(12.8g， 白 色 固 体 )。 1H NMR(DMSO-d6， δ ＝ 2.5ppm，400MHz) ：8.25-8.14(m，1H)，7.92(br d，J ＝ 8.0，2H)，7.75(br d，J ＝ 8.6， 2H)，4.61(dd， J ＝ 18.3，5.7，1H)，4.53(dd， J ＝ 18.1，5.6，1H)，4.22-4.12(m， 1 H ) ， 3 . 43-3 . 35( m ， 1 H ) ， 3 . 30-3 . 23( m ， 1 H ) ， 2 . 18-2 . 20( m ， 1 H ) ， 1 . 90-1 . 70( m ， 3H)，1.40/1.34( 两个表观 br s，9H)。 LC( 条件 I) ：RT ＝ 1.70 分钟 ；LC/MS ：对于 [M+Na] +C18H23BrN2NaO4 分析计算值 ：433.07 ；实测值 ：433.09。
实施例 1，步骤 c
在 140 ℃、 密 封 管 中， 将 酮 酰 胺 1b(12.8g，31.12mmol) 和 NH4OAc(12.0g， 155.7mmol) 在二甲苯 (155mL) 中的混合物加热 2 小时。 真空除去挥发性成分后，小心 地使残余物在乙酸乙酯和水之间分配，通过加入足够的饱和 NaHCO3 溶液，使得振荡两 相系统后水相 pH 呈微碱性。 分离层，水层再用乙酸乙酯萃取。 合并的有机相用盐水 洗涤，干燥 (MgSO4)，过滤，真空浓缩。 得到的产物用乙酸乙酯 / 己烷重结晶，得到 咪唑 1c 的两种产物，为浅黄色密实固体，重量 5.85g。 将母液真空浓缩，并进行快速色 谱法处理 ( 硅胶 ；30％乙酸乙酯 / 己烷 )，再得到 2.23g 咪唑 1c。 1H NMR(DMSO-d6， δ ＝ 2 . 5 ppm ， 400 MHz ) ：12 . 17/11 . 92/11 . 86( m ， 1 H ) ， 7 . 72-7 . 46/7 . 28( m ， 5 H ) ， 4 . 86-4 . 70( m ， 1 H ) ， 3 . 52( 表 观 br s ， 1 H ) ， 3 . 36( m ， 1 H ) ， 2 . 30-1 . 75( m ， 4 H ) ， 1.40/1.15( 表观 br s，9H)。 LC( 条件 I) ：RT ＝ 1.71 分钟 ；均一性指数＞ 98 ％ ；LC/ MS ：对于 [M+H]+C18H23BrN3O2 分析计算值 ：392.10 ；实测值 ：391.96 ；HRMS ：对于
[M+H]+C18H23BrN3O2 分析计算值 ：392.0974 ；实测值 ：392.0959。
用下述手性 HPLC 条件对于 1c 两个样品的光学纯度进行了评价 ：
柱 ：Chiralpak AD，10μm，4.6x50mm
溶剂 ：2％乙醇 / 庚烷 ( 等度洗脱 )
流速 ：1ml/ 分钟
波长 ：220nm 或 254nm
相对保留时间 ：2.83 分钟 (R)，5.34 分钟 (S)。
结果 ：合并产物的对映体过量＞ 99％ ；快速色谱法样品的对映体过量＝ 96.7％
实施例 1，步骤 d
将 Pd(Ph3P)4(469mg，0.406mmol) 加 到 装 有 溴 化 物 1c(4.008g， l0.22mmol)、 烷二硼酸二频哪醇酯 (5.422g，21.35mmol)、乙酸钾 (2.573g，26.2lmmol) 和 1，4- 二(80ml) 的混合物的耐压管中。 反应瓶用氮气吹洗，加塞，用油浴在 80℃下加热 16.5 小 时。反应混合物经过滤后，真空浓缩滤液。小心地使得到的粗产物在 CH2Cl2(150ml) 和含 水介质 (50ml 水 +10ml 饱和 NaHCO3 溶液 ) 之间分配。水层用 CH2Cl2 萃取，合并的有机相 经干燥 (MgSO4)，过滤后真空浓缩。 所得产物用快速色谱法纯化 ( 样品与洗脱溶剂一起 加样 ；20-35％乙酸乙酯 /CH2Cl2)，得到硼酸酯 1d，其被频哪醇污染，为灰白色密实固 体 ；1d 与频哪醇的相对摩尔比约为 10 ∶ 1(1H NMR)。 高真空暴露～ 2.5 天后，样品重量 为 3.925g。 1H NMR(DMSO-d6，δ ＝ 2.5ppm，400MHz) ：12.22/11.94/11.87(m，1H)， 7.79-7.50/7.34-7.27(m，5H)，4.86-4.70(m，1H)，3.52( 表 观 br s，1H)，3.36(m，1H)，2.27-1.77(m，4H)，1.45-1.10(m，21H)。 LC( 条 件 I) ：RT ＝ 1.64 分 钟 ；LC/ MS ：对于 [M+H]+ C24H35BN3O4 分析计算值 ：440.27 ；实测值 ：440.23。
实施例 1，步骤 e
将 Pd(Ph3P)4(39.4mg，0.034mmol) 加到溴化物 1a(387.2mg，1.005mmol)、硼酸 酯 1d(440.8mg，1.00mmol) 和 NaHCO3(273mg，3.25mmol) 在 1，2- 二甲氧基乙烷 (9ml) 和水 (3ml) 中的混合物中。 反应混合物鼓泡通入氮气 2 分钟，随后用油浴在 80℃下加热 直至由 LC/MS 分析确定反应完全。 将反应混合物冷却至室温，真空除去挥发性成分。 使残余物在 CH2Cl2 和水之间分配，将有机相干燥 (MgSO4)，过滤后真空浓缩。 得到的产 纯化 (100g 硅胶 ；0-8％ CH3OH/EtOAc)，得到黄色半泡沫状的固体 1e，物经含残余 EtOAc 并称重为 509mg。 1HNMR(DMSO-d6，δ ＝ 2.5ppm，400MHz) ：12.25(br s，0.17H)，11.96(br s，0.48H)，11.89(br s，0.35H)，9.84( 表观 br s，1H)，8.82(br m， 1H)，8.50(m，2H)，8.23-8.18(m，1H)，7.95-7.80(m，5H)，7.66(d， J ＝ 8.9，2H)， 7.61-7.58(br m，0.82H)，7.37(br m，0.18H)，7.01(d， J ＝ 9，2H)，4.88-4.78(m， 1H)，3.76(m，4H)，3.55(m，1H)，3.41-3.35(m，1H)，3.12(m，4H)，2.31-2.13(m， 1H)，2.08-1.81(m，3H)，1.41( 表 观 br s，3.75H)，1.17( 表 观 br s，5.25)。 LC( 条 件 I) ：RT ＝ 1.35 分钟 ；均一性指数＞ 95 ％。 LC/MS ：对于 [M+H]+C36H40N7O3 分析计算 值 ：618.32 ；实测值 ：618.24。
实施例 1，步骤 f
往氨基甲酸酯 1e(474mg，0.768mmol) 中加入 25 ％ TFA/CH2Cl2(8.0ml)，在环 境条件下将得到的溶液搅拌 8 小时。 真空除去挥发性成分后，残余物用 MCX 柱游离 碱化 (6g ；甲醇洗涤 ；2.0MNH3/ 甲醇洗脱 )，得到含残余溶剂的吡咯烷 1f(381mg，黄 色 固 体 )。 1HNMR(DMSO-d6， δ ＝ 2.5ppm，400MHz) ：11.93(br s，1H)，9.85(s， 1H)，8.82(s，1H)，8.49(s，1H)，8.19(d， J ＝ 8.6，1H)，7.89(m，4H)，7.81(d， J ＝ 8.8，1H)，7.66(d， J ＝ 8.8，2H)，7.56( 表 观 br s，1H)，7.00(d， J ＝ 8.8，2H)， 4.89(m，0.04H)，4.20(m，0.96H)，3.76(m，4H)，3.12(m，4H)，3.02-2.96(m，1H)， 2 . 91-2 . 85( m ， 1 H ) ， 2 . 12-2 . 04( m ， 1 H ) ， 1 . 95-1 . 87( m ， 1 H ) ， 1 . 84-1 . 70( m ， 2 H ) 。 LC( 条件 I) ：RT ＝ 1.12 分钟 ；均一性指数＞ 95％。
LC/MS ：对于 C31H32N7O 分析计算值 ：518.27 ；实测值 ：518.19[M+H]+。
实施例 1
往 吡 咯 烷 1f(39.9mg，0.077mmol)、 (S)-2-( 甲 氧 基 羰 基 氨 基 )-3- 甲 基 丁 酸 (17.1mg，0.098mmol) 和二异丙基乙基胺 (30μL，0.17mmol) 的 DMF(1.5mL) 溶液中一次 性加入 HATU(30.9mg，0.081mmol)，并在环境温度下将反应混合物搅拌 160 分钟。 将挥 发性组分真空除去，残余物首先流经 MCX 柱 (CH3OH 洗涤 ；2.0M NH3/CH3OH 洗脱 )， 浓缩，随后经反相 HPLC(CH3OH/H2O/TFA) 纯化，得到 TFA 盐形式的实施例 1 化合物 (49.3mg，橙红色泡沫 )。 1H NMR(DMSO-d6， δ ＝ 2.5ppm，400MHz) ：11.40(br s， 1H)，9.07(s，1H)，8.88(s，1H)，8.51(dd，J ＝ 8.9，1.8，1H)，8.17(s，1H)，8.09(d， J ＝ 8.6，2H)，7.99(d，J ＝ 8.3，2H)，7.94(d，J ＝ 8.5，1H)，7.59(d，J ＝ 9.0，2H)， 7.34(d， J ＝ 8.5，～ 1H)，7.08(d， J ＝ 9.1，2H)，5.59(m，0.07H)，5.16(m，0.93H)， 4.12(m， ～ 1H)，3.91-3.81(m， ～ 2H)，3.77(m，4H)，3.55(s，2.80H)，3.34(s， 0.20H)，3.18(m，4H)，2.44-2.37(m，1H)，2.20-2.00(m，4H)，0.91-0.79(m，6H).
LC( 条件 I) ：RT ＝ 1.26 分钟 ；均一性指数＞ 95％。
LC/MS ：对于 C38H43N8O4 分析计算值 ：675.34 ；实测值 ：675.24[M+H]+。
实施例 2-5
通过采用实施例 1 中所述方法和合适的酸制备实施例 2-5 化合物的 TFA 盐。 在 实施例 4-5 的情况中，用反相 HPLC 系统利用 CH3CN/H2O/TFA 进行再纯化。
实施例 6往 吡 咯 烷 1f(49mg，0.095mmol) 和 Et3N(30μL，0.22mmol) 在 CH2Cl2(1.5mL) 中的非均相混合物中加入醋酸酐 (40μL，0.42mmol)，在环境温度下搅拌 90 分钟。 将挥 发性组分真空除去，往残余物中加入 NH3/CH3OH(2.0M，3mL)，将该混合物搅拌 105 分 钟。 将得到的沉淀过滤并用 CH3OH(1.5mL) 洗涤，随后将其暴露于真空，得到实施例 6 化合物 (31.1mg，暗黄色固体 )，用～ 0.5mol 当量的 CH3OH 溶剂化。 LC( 条件 I) ：RT ＝ 1.26 分钟 ；均一性指数＞ 95％。 LC/MS ：对于 C33H34N7O2 分析计算值 ：560.28 ；实 测值 ：560.20[M+H]+。
生物学活性
本公开中应用了 HCV 复制子实验，并按共同所有的 PCT/US2006/022197 和 O’ Boyle 等，Antimicrob Agents Chemother.2005 年 4 月 ；49(4) ：1346-53 中所述方法准 备、进行和验证。
用 HCV-neo 复制子细胞来测试本文所述的化合物系列以及含 NS5A 中的突变对 化合物 A 抗性的细胞 ( 参见申请 PCT/US2006/022197)。 经测定，所测化合物对含突变 细胞的抑制活性比野生型细胞的低 10 倍以上，表明这两种化合物系列之间相关的作用机 制。 因此，本公开的化合物可有效抑制 HCV NS5A 蛋白的功能，而且我们认为本公开的 化合物与在先申请 PCT/US2006/022197 和共同所有的 WO/O4014852 中的所述化合物在 联合用药方面有效。 此外，本公开的化合物可有效地针对 HCV 1b 基因型。 应当了解 的是，本公开的化合物可以抑制 HCV 的多种基因型。 表 2 表示本公开代表性化合物针 对 HCV 1b 基因型的 EC50 值。 在一个实施方案中，本公开的化合物针对基因型 1a、1b、 2a、2b、3a、4a 和 5a 具有活性。 活性范围如下 ：501nM-1μM ；B ＝ 1-500nM ；C ＝ 100-999pM。
本公开的化合物可通过除抑制 NS5A 以外还采用其他机制或不同于抑制 NS5A 的 其他机制来抑制 HCV。 在一个实施方案中，本公开的化合物抑制 HCV 复制子，在另一 个实施方案中，本公开的化合物抑制 NS5A。
表2
实施例编号范围 / 值实施例 1 步骤 e B 实施例 1 步骤 f 1.51μM 实施例 1 实施例 2 实施例 3 实施例 4 实施例 5 实施例 6
B 270nM 46pM B C A对于本领域技术人员显而易见的是，本公开并不限于前述说明性实施例，而且 可以体现在其它具体形式中而又不偏离其实质特性。 因此，预期各实施例在所有方面都 被视作说明性的且非限制性的，应参照所附权利要求书，而不是前述实施例，因此，在 所附权利要求书等同内容的含义和范围内的所有变化都包括在本文中。
本公开的化合物可通过除抑制 NS5A 以外还采用其他机制或不同于抑制 NS5A 的 其他机制来抑制 HCV。在一个实施方案中，本公开的化合物抑制 HCV 复制子，在另一个 实施方案中，本公开的化合物抑制 NS5A。 本公开的化合物可抑制 HCV 的多种基因型。105